小鼠前脂肪细胞使用说明

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小鼠3T3-L1前脂肪细胞培养与诱导分化方法的建立

小鼠3T3-L1前脂肪细胞培养与诱导分化方法的建立

小鼠 3 T 3 一 L 1 前脂肪 细胞培 养与诱导分化 方法 的建立
郭秀玲 徐民 岗 张秀丽 师 磊 陈显 久
【 摘
要】 目的 建立小 鼠 3 T 3 . L 1 前脂肪细胞 的培养及诱导分化为成熟脂肪 细胞 的方法 。 方法
使用含
1 0 %胎牛血清( F B S ) 的高糖 达氏修正伊 氏培养基 ( D M E M) F 1 2 液体培养基 在体 积分数 5 %二氧化碳 ( c o ) 、 3 7℃ 条件下 常规培养 3 T 3 L 1 细胞 , 2 - 3 d 换液 1次 ; 诱导分化 培养基 1培养 2 d , 诱 导分化培养基 Ⅱ培养 2 d ; 基础培 养基培养 4 ~ 6 d , 1 - 2 d 换液 1 次。 结果 小 鼠 3 T 3 . L 1 前脂肪 细胞状态 良好 , 成铺路石状生长 , 布满培养 瓶底 , 3 d 传代 1 次。 9 0 %以上细胞诱导分化成功 , 细胞呈 圆形 , 有大量酯滴 聚集 , 油红 O染色呈橘红色 。 结论
u n d e r a n a t mo s p h e r e w i t h 5 % C 0, a t 3 7℃. d u i r n g wh i c h t h e i n c u b a t i o n s o l u t i o n wa s r e p l e n i s h e d e v e r y 2 t o 3 d a y s .
3 T3 一 L 1 p r e a d i p o c y t e s g r e w i n a p a v i n g s t o n e f a s h i o n a n d a p p e a r e d i n g o o d c o n d i t i o n s . he T s e c e l l s c o v e r e d t h e b o t t o m o f

敲低Stau1后小鼠前脂肪细胞系3T3

敲低Stau1后小鼠前脂肪细胞系3T3

敲低Stau1后小鼠前脂肪细胞系3T3⁃L1中FOXP1的表达增加孟轩羽;刘迪晖;蒋硕;关亚群;梁小弟【期刊名称】《基础医学与临床》【年(卷),期】2023(43)1【摘要】目的在小鼠前脂肪细胞系3T3-L1分化过程中敲低双链RNA结合蛋白Staufen1(Stau1)后筛选差异表达的基因,分析其生物学功能,并用qPCR验证测序结果。

方法用RNA-seq分析Stau1敲低后基因的转录调控。

构建STAU1 shRNA 并转染3T3-L1细胞,鸡尾酒方法诱导其分化为成熟脂肪细胞,收取0、4 d的细胞设立对照组和STAU1敲低组(各3组生物重复样本)收取12组样品的细胞基因芯片信息,以变化倍数log2(Fold change)>1且校正后的P<0.05作为条件筛选Stau1敲低的细胞与对照组样本间的差异表达基因,进行基因本体论(GO)及代谢通路分析(KEGG通路数据库),qPCR验证差异表达的基因。

荧光素酶报告基因实验验证SATU1与叉头盒蛋白P1 FOXP1 mRNA 3′UTR上Staufen1结合位点(SBS)存在结合。

结果较对照组STAU1敲低细胞组中共筛选出差异表达基因588个,其中上调406个、下调182个。

差异表达基因主要参与的生物学过程中脂代谢、炎性反应因子,主要富集的信号通路有糖代谢和能量代谢相关通路。

敲低Stau1后FOXP1表达升高5.3倍,软件预测FOXP1 mRNA 3′UTR含有STAU1结合位点,荧光素酶报告基因验证了FOXP1 mRNA 3′UTR含有STAU1结合位点。

结论推测STAU1能够与FOXP1 mRNA上的STAU1结合位点结合并促进其降解。

【总页数】7页(P130-136)【作者】孟轩羽;刘迪晖;蒋硕;关亚群;梁小弟【作者单位】新疆医科大学基础医学院机能中心;新疆医科大学基础医学院生物化学与分子生物学教研室【正文语种】中文【中图分类】R34【相关文献】1.稳定敲低NLRP3基因的小鼠巨噬细胞系的建立与鉴定2.gAd对3T3 L1脂肪细胞肉碱酯酰转移酶1表达的影响3.敲低S100A4表达对胶质瘤细胞系SNB19侵袭和迁移的影响4.精氨酸甲基转移酶CARM1 shRNA慢病毒表达质粒的构建及稳定敲低CARM1的小鼠畸胎瘤P19细胞系的建立5.肥胖患者脂肪组织STAU1表达变化及其在脂肪间充质干细胞成脂分化中的作用因版权原因,仅展示原文概要,查看原文内容请购买。

3T3-L1 细胞说明书

3T3-L1 细胞说明书

小鼠胚胎成纤维细胞3T3-L1说明书目录号:SCSP-5038细胞名称:3T3-L1细胞描述:这株细胞是3T3(Swiss albino)通过克隆分离而得到的能连续传代的亚株,表达insulin受体。

当细胞从快速分裂到汇合和接触抑制状态的过程中,细胞会经历脂肪前向脂肪的转化。

培养基中的高血清含量会增加脂肪的积累。

检测表明鼠痘病毒(ectromelia virus,ECTV)阴性。

小鼠品系:Swiss albino细胞来源:2018年引进生物安全等级:BSL-1完全培养液配方:见下方备注批次/冻存日期:详见冻存管/培养瓶标识参考传代周期:3天左右参考传代比例:1:2-1:4参考换液频率:每周2次冻存液:完全培养液95%,DMSO5%细胞状态:成纤维细胞,贴壁生长。

支原体检测结果:阴性STR鉴定结果:①该株细胞DNA进行小鼠细胞STR分型结果显示,扩增后图谱清晰,分型结果良好:1-1:10,15;1-2:13;2-1:9;3-2:14;4-2:19.3;5-5:13,15;6-4:15.3;6-7:12, 15;7-1:25.2,29;8-1:15,16;11-2:15;12-1:19;13-1:15.1;15-3:20.3;17-2:12,15;18-3:17,21;19-2:12;X-1:26。

②该株细胞确为小鼠细胞,没有人源细胞污染。

小鼠胚胎成纤维细胞3T3-L1细胞照片参考文献:备注:1.小鼠胚胎成纤维细胞3T3-L1完全培养液配方(100ml):DMEM(Invitrogen11960044)87mlNewborn calf serum(Ausbian)10mlGlutamax(invitrogen35050061)1mlNon-essential Amino Acids,100⨯(Invitrogen11140050)1mlSodium pyruvate100mM Solution(invitrogen11360070)1ml不可使用胎牛血清(FBS)2.该细胞起始接种密度应在3⨯103/cm2,并且在细胞达到80%融合或者密度介于5⨯104-6⨯104/cm2时传代,避免细胞完全融合。

脂肪酸对小鼠前体脂肪细胞增殖分化及OLR1基因转录表达的作用

脂肪酸对小鼠前体脂肪细胞增殖分化及OLR1基因转录表达的作用

脂肪酸对小鼠前体脂肪细胞增殖分化及OLR1基因转录表达的作用孙超;刘春伟【摘要】[目的]研究短链和长链饱和脂肪酸,对小鼠前体脂肪细胞增殖分化及脂代谢新因子氧化型低密度脂蛋白受体1(OLR1)转录表达的影响.[方法]分离培养小鼠前体脂肪细胞,用适宜浓度乙酸钠、硬脂酸钠和p38MAPK通路抑制剂处理,通过细胞计数检测处理24和48 h时相关基因mRNA的表达量.[结果]乙酸钠处理组小鼠脂肪细胞数量随处理时间延长显著下降(P<0.05),硬脂酸钠处理组对小鼠细胞数量无显著影响(P>0.05);乙酸钠和硬脂酸钠均显著上调PPARγ2、C/EBPα和OLR1 mRNA的表达(P<0.05);p38MAPK抑制剂能显著抑制PPARγ2和OLR1 mRNA 的表达(P<0.05),但对C/EBPα tuRNA表达无显著影响.[结论]乙酸钠可抑制前体脂肪细胞的增殖,但乙酸钠和硬脂酸钠均能促进前体脂肪细胞的分化;OLR1基因在前体脂肪细胞分化过程中通过p38MAPK通路发挥作用,且脂肪酸对前体脂肪细胞分化及OLR1转录表达的影响与p38MAPK通路密切相关.【期刊名称】《西北农林科技大学学报(自然科学版)》【年(卷),期】2009(037)003【总页数】6页(P1-6)【关键词】脂肪酸;前体脂肪细胞;OLR1;p38MAPK【作者】孙超;刘春伟【作者单位】西北农林科技大学,动物科技学院,陕西,杨凌,712100;西北农林科技大学,动物科技学院,陕西,杨凌,712100【正文语种】中文【中图分类】Q291;Q786肥胖主要由机体脂肪代谢失衡造成,是Ⅱ型糖尿病的主要诱因[1]。

有研究表明,肥胖与心血管病的发生关系密切[2]。

动物体脂肪过度沉积不仅降低畜产品质量,而且威胁人类健康,已成为动物生产领域亟待解决的问题。

近年来,人们试图从分子水平阐明动物脂肪沉积调控的机制,并希望将其应用于肥胖症的防治。

TL诱导分化成熟脂肪细胞方案

TL诱导分化成熟脂肪细胞方案

TL诱导分化成熟脂肪细胞方案为了诱导分化成熟脂肪细胞,需要采取一系列措施来模拟体内脂肪细胞的发育过程。

下面是一个基于胎儿稳定细胞株人类成熟脂肪细胞系(ST-13)的方案,在富含小鼠成年体内碎屑坏死和抗生素的DMEM培养基中进行诱导分化。

1.培养脂肪前体细胞:将ST-13细胞接种于DMEM培养基中,并在37℃、5%CO2的条件下培养。

培养基需添加10%胎牛血清(FBS)和生长因子(如胰岛素、肾上腺皮质激素等),以促进细胞增殖和生长。

2. 诱导分化:当细胞生长到80%的密度时,将培养基更换为富含诱导因子的培养基,如胰岛素、胰高血糖素苷(IBMX)和去氧皮质酮(Dex)等。

让细胞在这样的培养基中继续培养48小时。

3.培养终分化脂肪细胞:将细胞培养基更换为富含10%FBS和高浓度胰岛素的DMEM培养基。

这样的培养条件可以帮助细胞继续分化成完全成熟的脂肪细胞。

4. 油红O染色:使用油红O染色方法来检测分化程度。

将细胞固定在4% paraformaldehyde中,然后用60%异丙醇洗涤。

将油红O溶液添加到细胞上,染色20分钟后洗涤。

观察细胞内的红色油滴,这是脂肪细胞特有的特征。

5.RT-qPCR:利用实时定量聚合酶链反应(RT-qPCR)来测量脂肪细胞特异基因表达水平。

收集分化脂肪细胞,提取总RNA,并合成cDNA。

使用特异性引物检测目标基因的表达水平,如脂肪细胞标记基因PPARγ和C/EBPα等。

6.蛋白质免疫印迹:用免疫印迹方法检测特定蛋白质的表达水平。

收集分化脂肪细胞,提取蛋白质,并进行电泳分离。

将蛋白质转移到聚丙烯酰胺凝胶上,然后用特异性抗体检测目标蛋白质的表达水平。

7. 脂肪细胞代谢测定:应用适当的测定方法来评估脂肪细胞代谢特性。

例如,使用改良的AdipoRed(泛素酯类)试剂,它可以选择性地结合脂肪细胞中的甘油三酯,以测定细胞的脂肪含量。

8. 细胞迁移和侵袭实验:测量分化脂肪细胞的迁移和侵袭能力,以评估其功能。

3T3-L1前体脂肪细胞诱导分化方法优化的初步探讨

3T3-L1前体脂肪细胞诱导分化方法优化的初步探讨

3T3-L1前体脂肪细胞诱导分化方法优化的初步探讨赵蕾;郑美丽;杨梅;钟久昌;杨新春【摘要】目的观察不同诱导剂对3T3-L1前体脂肪细胞诱导分化的作用.方法在经典鸡尾酒诱导剂成分基础上,根据不同诱导剂成分,将3T3-L1前体脂肪细胞分为4组:(1)对照组;(2)罗格列酮干预组;(3)吲哚美辛干预组;(4)罗格列酮和吲哚美辛联合干预组.在诱导前体脂肪细胞分化过程中,通过显微镜观察细胞形态学变化、油红O染色以及检测胞内和胞外三酰甘油含量,评价各组成脂效率.结果罗格列酮和吲哚美辛单独干预组及联合干预组前体脂肪细胞诱导过程中更早出现脂滴,且形成的脂滴也较对照组多,而油红O染色进一步证实以上结果.采用Image Pro Plus 6.0软件统计经油红O染色后的脂滴,单个脂滴的平均直径、平均面积以及最大直径,罗格列酮干预组和联合干预组均大于对照组,而吲哚美辛干预组与对照组比较,差异无统计学意义(P>0.05).三酰甘油含量检测,胞外三酰甘油含量4组比较,差异无统计学意义,但胞内三酰甘油含量联合干预组高于对照组[(0.77±0.07) mmol/g vs (0.19±0.02) mmol/g,P<0.05].结论优化经典鸡尾酒诱导方法,在原成分基础上加用过氧化物酶体增生因子活化γ型受体(peroxisome proliferator-activated receptor,PPAR-γ)激动剂罗格列酮,可显著提高3T3-L1前体脂肪细胞的诱导效率.【期刊名称】《首都医科大学学报》【年(卷),期】2019(040)002【总页数】6页(P226-231)【关键词】前体脂肪细胞;3T3-L1;分化【作者】赵蕾;郑美丽;杨梅;钟久昌;杨新春【作者单位】首都医科大学附属北京朝阳医院心脏中心北京市高血压重点实验室,北京100020;首都医科大学附属北京朝阳医院心脏中心北京市高血压重点实验室,北京100020;首都医科大学附属北京朝阳医院心脏中心北京市高血压重点实验室,北京100020;首都医科大学附属北京朝阳医院心脏中心北京市高血压重点实验室,北京100020;首都医科大学附属北京朝阳医院心脏中心北京市高血压重点实验室,北京100020【正文语种】中文肥胖是一项世界性健康难题,往往导致内分泌系统和心血管系统疾病的发生。

3T3-L1脂肪前体细胞

3T3-L1脂肪前体细胞

细胞名称3T3-L1小鼠胚胎成纤维细胞,也称3T3-L1脂肪前体细胞
细胞描述3T3-L1是从Swiss-3T3小鼠胚胎中分离克隆的细胞株,该细胞有接触性抑制生长特征且能向脂肪样细胞分化,高血清培养液可促
进细胞脂肪积累等
动物种别小鼠
组织来源胚胎
细胞形态成纤维细胞(长梭形)
培养条件高糖DMEM培养液,含10%胎牛血清和1%青链霉素
High glucose DMEM medium with 10% fetal bovine serum, 100
IU/ml penicillin and 100 g/ml streptomycin in the humidified
atmosphere with 5% CO2 and 95% O2 at 37℃
细胞传代以50 ml细胞培养瓶为例说明:
1.无菌PBS轻轻洗涤细胞1或2次(每次约4 ml PBS);
2.倒掉PBS后再加入4ml PBS,将细胞培养瓶翻转;
3.加入0.25%胰酶和0.02%EDTA的溶液约1ml,拧紧细胞培养瓶盖,轻轻混匀;
4.在镜下观察细胞形态,当细胞稍稍变圆,轻轻并立即翻转培养瓶,终止消化(消化时间与细胞状态有关);
5.倒掉胰酶加入适当培养液,轻轻吹打瓶壁,使细胞脱落分散;
6.细胞悬液一分为二,继续传代培养(避免密度过高导致细胞分化)。

小鼠皮下脂肪细胞使用说明

小鼠皮下脂肪细胞使用说明

小鼠皮下脂肪细胞小鼠皮下脂肪细胞产品说明:为使能尽快开展实验,派瑞金发货的原代细胞均处于对数生长期,且每次发货为汇合率达到70%的细胞,收到细胞后即可开展实验。

派瑞金提供的小鼠皮下脂肪细胞取自新鲜的组织,按照标准操作流程分离培养。

研发的小鼠皮下脂肪细胞完全培养基能提供细胞最佳的生长条件,降低杂细胞污染,保证不同批次间细胞质量的稳定。

同时,派瑞金还建立了严格的细胞鉴定流程,所提供的原代细胞均需经过细胞类型特异性标记物、细胞形态学等检测,保证细胞纯度在90%以上;同时也需经过微生物检测,保证不含有HIV、HBV、HCV、支原体、真菌及其他类型的细菌。

小鼠皮下脂肪细胞注意事项:1. 收到细胞后首先观察细胞瓶是否完好,培养液是否有漏液、浑浊等现象,若有上述现象发生请及时和我们联系。

2. 仔细阅读细胞说明书,了解细胞相关信息,如细胞形态、所用培养基、血清比例、所需细胞因子等。

3. 请用相同条件的培养基用于细胞培养。

培养瓶内多余的培养基可收集备用,细胞传代时可以一定比例和自备的培养基混合,使细胞逐渐适应培养条件;建议使用派瑞金的完全培养基。

4. 建议收到细胞后前3天各拍几张细胞照片,记录细胞状态。

5. 该细胞只能用于科研,不得用于临床应用。

小鼠皮下脂肪细胞产品简介:1、产品名称:小鼠皮下脂肪细胞2、组织来源:小鼠脂肪组织3、产品规格:5×105cells / 25cm2培养瓶小鼠皮下脂肪细胞简介:小鼠皮下脂肪细胞来源于小鼠脂肪组织,皮下脂肪细胞主要功能:(1)脂肪细胞能储存能量并参与身体代谢。

(2)脂肪细胞分化是一个发展的过程,它对代谢稳态和营养信号很重要。

(3)前脂肪细胞存在于小鼠脂肪组织中,能根据能量的平衡增殖和分化成熟的脂肪细胞。

前体细胞的增殖和分化能够增加脂肪组织的体积。

(4)前脂肪细胞与脂肪分化以及许多生理病理过程密切相关,如脂肪代谢、能量平衡、肥胖、糖尿病、高血脂和乳癌,所以小鼠皮下脂肪细胞对这些疾病的研究提供素材。

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小鼠前脂肪细胞
小鼠前脂肪细胞产品说明:
为使能尽快开展实验,派瑞金发货的原代细胞均处于对数生长期,且每次发货为汇合率达到70%的细胞,收到细胞后即可开展实验。

派瑞金提供的小鼠前脂肪细胞取自新鲜的组织,按照标准操作流程分离培养。

研发的小鼠前脂肪细胞完全培养基能提供细胞最佳的生长条件,降低杂细胞污染,保证不同批次间细胞质量的稳定。

同时,派瑞金还建立了严格的细胞鉴定流程,所提供的原代细胞均需经过细胞类型特异性标记物、细胞形态学等检测,保证细胞纯度在90%以上;同时也需经过微生物检测,保证不含有HIV、HBV、HCV、支原体、真菌及其他类型的细菌。

小鼠前脂肪细胞注意事项:
1. 收到细胞后首先观察细胞瓶是否完好,培养液是否有漏液、浑浊等现象,若有上述现象发生请及时和我们联系。

2. 仔细阅读细胞说明书,了解细胞相关信息,如细胞形态、所用培养基、血清比例、所需细胞因子等。

3. 请用相同条件的培养基用于细胞培养。

培养瓶内多余的培养基可收集备用,细胞传代时可以一定比例和自备的培养基混合,使细胞逐渐适应培养条件;建议使用派瑞金的完全培养基。

4. 建议收到细胞后前3天各拍几张细胞照片,记录细胞状态。

5. 该细胞只能用于科研,不得用于临床应用。

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