mdx小鼠与C57小鼠骨髓基质细胞体外分化能力的比较
干细胞鉴定
Von Kossa染色
确定细胞外基质矿化的方 法，只有成骨细胞在体外 培养时能形成矿化的细胞 外基质，一般培养至 6~8 周即可出现。原理是将矿 化基质中的磷酸盐(钙)、 碳酸盐(钙)转变为磷酸银、 碳酸银，然后用日光、紫 外线或强还原剂使其还原 为黑色的金属银。
I型胶原检测
成骨细胞可合成I型胶原， 是成熟成骨细胞的标识物 之一，免疫荧光法检测其 表达在骨细胞核周围。
体外分化
ES
EB
贴壁诱导
约5~7天后出现自主性搏动
Nestin (ectoderm )
Tubulin (ectoderm )
Troponin (mesoderm )
AFP (endoderm)
定向分化
脂肪细胞
神经元细胞
肝细胞
神经干细胞
• 广泛存在于成年或胚胎哺乳动物大脑内 • 可分化为神经元、星形胶质细胞、少突 胶质细胞。
人ES：相对松散、 扁平状集落,集 落内细胞界限隐 约可见
特异性表达
抗原
人ES 鼠ES
Oct-4
+ +
Nanog
+ +
SSEA-1
— +
SSEA-3
+ —
SSEA-4
+ —
抗原 SSEA1 SSEA3 SSEA4
人 ES/EC — +
人EG + +
猕猴 ES — —
鼠 ES/EC/ EG + —
马ES + —
鉴定方法
• 形态学：梭型、纤维样贴壁细胞 • 表面抗原：MSCs属混杂细胞群，其表面抗原也具有非专一性, 它表达了 间质细胞、内皮细胞和表皮细胞的表面标志。主要包括: ①黏附分子, 如 CD166、CD54、CD102、CD44、CD106 等。②生长因子和细胞因子受体, 如 白介素21 受体( IL-1R )、IL-3R、IL-4R、IL-6R、IL-7R、C干扰素受体 ( IFN-CR)、肿瘤坏死因子(TNF) -A等。③整合素家族成员, 包括CD49a、 CD49b、CD49c、CD29、CD104 等。④其他如CD90、CD105 等。不表达造血 细胞的表面标志, 如CD34、CD45、CD14、CD3、CD4、CD8 等, 也不表达与 人白细胞抗原(HLA ) 识别有关的共刺激分子及主要组织相容性复合物类 分子如HLA-DR 抗原等。 • 多向分化能力：如可分化为成骨细胞、软骨细胞、脂肪细胞、肌腱细胞、 平滑肌细胞、骨髓基质细胞、成纤维细胞及多种血管内皮细胞，甚至神经 系统的神经元和神经胶质细胞
体外培养单个造血干细胞实验方法的建立
体外培养单个造血干细胞实验方法的建立李乔;高瀛岱;纪庆;王金宏;许静;田晨;程辉;刘延风;张娜;程涛【摘要】Aim To explore the effect of nomegestrol acetate ( NOMAc ) on the apoptosis of endometriosis ( Ems ) in rat models and its mechanism. Methods The rat models of NOMAc were established by surgical operation method; histopathologic changes of ectopic endometrium were tested by HE staining; the level of antiendometrium antibody ( EMAb ) was tested by Elisa; the expression levels of apoptosis factors were tested by Western blot. Results NOMAc ( 0. 5,1. 5, 15 mg ·kg-1 ) shriveled ectopic endometrium; the number of endometrial gland was fewer; glandular cavity was smaller in NOMAc groups than those of modelgroups. NOMAc reduced dose-dependently the endometrial thickness and the level of EMAb. NOMAc( 0. 5, 1.5,15 mg · kg-1 ) increased Caspase-9, Caspase-3 and Bax protein expression and reduced Bcl-2 protein expression. Conclusion The inhibitory effect of NOMAc on ectopic endometrium of rat models may be related to reducing the level of EMAb, increasing Bax, reducing Bcl-2 protein expression, and activating Caspase-9 and Caspase-3 protein expression in endogenous apoptosis pathway.%目的通过建立一种体外稳定培养单个造血干细胞(hematopoietic stem cell,HSC)的实验方法,在未来筛选可以促进HSC体外扩增的化合物.方法通过配制HSCs体外培养液并结合流式分选技术,我们建立了一种在体外不需要基质细胞支持的,稳定的,高通量培养单个HSC形成一个血细胞集落的实验方法.结果只需培养10~14 d即可观察到化合物对HSC的作用,并结合流式细胞分析技术替代人工计数血细胞分化情况,进一步节省人力,具有客观、重复性强的特点,满足了高通量筛选药物的要求,为后续的研究和化合物筛选工作打下基础.为了验证此方法的可靠性,使用BIO(一种通过抑制糖原合成酶激酶-3,进而可以促进HSC自我更新的化合物)时,实验结果与文献报道的研究结果一致.结论该实验方法在有关造血干细胞体外扩增的药物筛选方面具有很好的应用价值.【期刊名称】《中国药理学通报》【年(卷),期】2012(028)003【总页数】4页(P435-438)【关键词】单个HSC培养;流式细胞分选与分析;血细胞涂片;p18;小分子;干细胞扩增【作者】李乔;高瀛岱;纪庆;王金宏;许静;田晨;程辉;刘延风;张娜;程涛【作者单位】中国医学科学院血液病医院(血液学研究所)实验血液学国家重点实验室,天津,300020;中国医学科学院血液病医院(血液学研究所)实验血液学国家重点实验室,天津,300020;中国医学科学院血液病医院(血液学研究所)实验血液学国家重点实验室,天津,300020;中国医学科学院血液病医院(血液学研究所)实验血液学国家重点实验室,天津,300020;中国医学科学院血液病医院(血液学研究所)实验血液学国家重点实验室,天津,300020;中国医学科学院血液病医院(血液学研究所)实验血液学国家重点实验室,天津,300020;中国医学科学院血液病医院(血液学研究所)实验血液学国家重点实验室,天津,300020;中国医学科学院血液病医院(血液学研究所)实验血液学国家重点实验室,天津,300020;中国医学科学院血液病医院(血液学研究所)实验血液学国家重点实验室,天津,300020;中国医学科学院血液病医院(血液学研究所)实验血液学国家重点实验室,天津,300020【正文语种】中文【中图分类】R329.24;R329.28;R341;R965.1造血干细胞一直是成体干细胞研究中的热点。
人骨髓间充质干细胞体外成骨分化过程中成骨相关基因的动态表达
人骨髓间充质干细胞体外成骨分化过程中成骨相关基因的动态表达目的：系统研究人骨髓间充质干细胞（hBMSCs）体外成骨诱导分化过程中成骨相关基因的表达变化。
方法：应用密度梯度离心法分离hBMSCs，取第2代细胞通过流式检测及多向诱导分化方法进行干细胞鉴定；应用RT-PCR法对hBMSCs在体外成骨诱导不同时间点的成骨相关基因表达进行检测。
结果：第2代hBMSCs表达间充质干细胞表面标志CD44、CD90，具有成脂和成骨分化潜能。
成骨相关基因在诱导早期部分表达，中期均有表达，基因表达大部分在14天达高峰，与矿化相关的基因表达在21天达高峰。
结论：hBMSCs体外成骨诱导过程中成骨相关基因呈动态表达，其表达时序与成骨细胞生理发育基本相似。
Abstracts:ObjectiveTo investigate the osteogenic related genes expression during in vitro osteogenic differentiation of human bone mesenchymal stem cells (hBMSCs).MethodshBMSCs were isolated by density gradient centrifugation. Surface markers and cell cycle were analyzed by flow cytometry. The multiple differentiation potential of hBMSCs were identified using in vitro osteogenic and adipogenic induction. The osteogenic related genes expression of hBMSCs at different induction time point were evaluated by semiquantitative RT-PCR analysis.ResultsThe hBMSCs were derived from bone marrow and expressed CD44 and CD90, markers of mesenchymal stem cell. The second passage of hBMSCs showed adipogenic and osteogenic differentiation potential. During the osteogenic induction process,hBMSCs expressed part of osteogenic related genes in early stage, and all of them in middle stage.The peak expression of most of genes were on the 14th day, and the mineralization associated genes on the 21st day. ConclusionsThe osteogenic related gene expression of hBMSCs shows a dynamic progress during in vitro osteogenic induction, which is consistent with in vivo development of osteoblast.Key words:hBMSCs;in vitro differentiation;osteogenic genes;expression pattern骨缺损的修补和重建是修复重建外科临床面临的常见问题。
干细胞的基础知识
干细胞的基础知识干细胞的基础知识干细胞的概念干细胞是一类具有自我更新和分化潜能的细胞。
它包括胚胎干细胞和成体干细胞。
干细胞的发育受多种内在机制和微环境因素的影响。
目前人类胚胎干细胞已可成功地在体外培养。
最新研究发现，成体干细胞可以横向分化为其他类型的细胞和组织，为干细胞的广泛应用提供了基础。
在胚胎的发生发育中，单个受精卵可以分裂发育为多细胞的组织或器官。
在成年动物中，正常的生理代谢或病理损伤也会引起组织或器官的修复再生。
胚胎的分化形成和成年组织的再生是干细胞进一步分化的结果。
胚胎干细胞是全能的，具有分化为几乎全部组织和器官的能力。
而成年组织或器官内的干细胞一般认为具有组织特异性，只能分化成特定的细胞或组织。
然而，这个观点目前受到了挑战。
最新的研究表明，组织特异性干细胞同样具有分化成其他细胞或组织的潜能，这为干细胞的应用开创了更广泛的空间。
干细胞具有自我更新能力（Self-renewing），能够产生高度分化的功能细胞。
干细胞按照生存阶段分为胚胎干细胞和成体干细胞。
1.1 胚胎干细胞胚胎干细胞（Embryonic Stem cell, ES细胞）当受精卵分裂发育成囊胚时，内层细胞团（Inner Cell Mass）的细胞即为胚胎干细胞。
胚胎干细胞具有全能性，可以自我更新并具有分化为体内所有组织的能力。
早在1970年Martin Evans已从小鼠中分离出胚胎干细胞并在体外进行培养。
而人的胚胎干细胞的体外培养直到最近才获得成功。
进一步说，胚胎干细胞（ES细胞）是一种高度未分化细胞。
它具有发育的全能性，能分化出成体动物的所有组织和器官，包括生殖细胞。
研究和利用ES细胞是当前生物工程领域的核心问题之一。
ES细胞的研究可追溯到上世纪五十年代，由于畸胎瘤干细胞（EC细胞）的发现开始了ES细胞的生物学研究历程。
目前许多研究工作都是以小鼠ES细胞为研究对象展开的，如：德美医学小组在去年成功的向试验鼠体内移植了由ES细胞培养出的神经胶质细胞。
小鼠品系的介绍
小鼠品系的介绍小鼠品系是指经过长期繁殖和选择的小鼠株系，具有特定的遗传特征和生理特性。
小鼠作为实验动物，在生物医学研究中发挥着重要的作用。
下面将介绍几种常见的小鼠品系。
1. C57BL/6小鼠C57BL/6小鼠是最常见和最广泛应用的小鼠品系之一。
它具有黑色的毛发和较长的尾巴。
C57BL/6小鼠具有较低的背景突变率和较高的育种稳定性，因此常被用于疾病模型的建立和药物研发。
C57BL/6小鼠在免疫学、遗传学、神经学等领域都有广泛的应用。
2. BALB/c小鼠BALB/c小鼠是另一种常见的小鼠品系，毛色为白色。
它具有较高的免疫反应性和抗体产生能力，常被用于免疫学和感染性疾病的研究。
BALB/c小鼠还广泛应用于肿瘤学领域，特别是肿瘤移植模型的建立和抗肿瘤药物的评价。
3. SCID小鼠SCID小鼠是一种免疫缺陷小鼠品系，全称为严重联合免疫缺陷小鼠（Severe Combined Immunodeficiency）。
它由于缺乏有效的自然杀伤细胞和T细胞免疫应答，可以用于移植异种细胞或人类免疫系统的建立。
SCID小鼠在人类疾病的研究和人类免疫细胞的移植研究中具有重要的应用价值。
4. Nude小鼠Nude小鼠是一种缺乏胸腺的小鼠品系，全称为无胸腺小鼠。
它缺乏T细胞免疫应答，体内无法产生正常的抗体反应。
因此，Nude 小鼠被广泛应用于肿瘤学研究，特别是肿瘤异种移植模型的建立和抗肿瘤药物的评价。
Nude小鼠也常被用于移植物排异反应的研究。
5. FVB小鼠FVB小鼠是一种白色毛发的小鼠品系。
它具有较高的繁殖能力和较高的卵胞产量，常被用于胚胎学和基因工程研究。
FVB小鼠在转基因技术和胚胎干细胞研究中被广泛应用，是一种重要的实验动物模型。
以上介绍了几种常见的小鼠品系，它们在不同领域的研究中具有各自的优势和特点。
选择适合的小鼠品系对于研究的设计和结果的可靠性至关重要。
同时，对小鼠的喂养和管理也需要严格控制，以确保实验结果的准确性和可重复性。
骨髓基质细胞分离培养、体外向神经细胞诱导分化及其在中枢神经系统疾病中的研究进展
流式细胞仪分离法
此法是以荧光抗体与细
胞表面标志物结合，然后用流式细胞仪进行分选。 该方法的优点是分离迅速、纯度高，但仪器昂贵，费 用较高，且含量太低的痕量细胞难以分离，要获得无 菌的细胞制剂较麻烦，分选步骤复杂，流程较长，对 细胞损伤大，而且不能处理大量样品，故主要用于细 胞鉴定ｕＪ。 １．４磁珠分选法 此法是将抗体或抗原结合在磁 珠上，磁珠上抗体或抗原与特异性抗原或抗体结合 后，形成抗原一抗体磁珠免疫复合物，这种复合物在 磁力作用下发生力学移动，从而达到分离特异性抗 原或抗体的目的。例如，兰玲等＂３依次向ＢＭＳＣｓ 悬液中加入ＦＩＴＣ标记的小鼠抗大鼠８２ｍ单克隆抗 体、ＦＩＴＣ分选试剂和微粒磁珠，然后将其置于磁性 分离器内１０ ｍｉｎ，回收上清获得８２ｍ一细胞。该方法 可以处理大最的细胞样品，因此在临床和基础研究 中有较好的应用前景，但价格昂贵、操作复杂，且易 造成污染。 目前贴壁筛选法因其操作简单、步骤少、污染机 会小，而被认为是分离培养ＢＭＳＣｓ的基本方法。
。【项目基金】深圳市科技局 【收稿日期】２００９ １０ ２８ 。【通讯作者】 易黎。Ｔｅｌ：８６—７５５—８３９２３３３３—５７２５。Ｅ—ｍａｉｌ：ｙｉｌｉｔｊ
＠ｈｏｔｍａｉｌ．ＣＯｒｎ。
ＢＭＳＣｓ的鉴定 为了使来自不同实验室的相关研究结果具有一
定的可比性，国际细胞治疗学会问充质及组织干细 胞委员会提出了鉴定人来源ＭＳＣｓ的３条最低标 准¨Ｊ：①在标准培养条件下，ＭＳＣｓ必须具备对塑料 底物的贴附性；②通过流式细胞术检测，ＭＳＣｓ群体 表达ＣＤｌ０５、ＣＤ７３及ＣＤ９０阳性率≥９５％，而 ＣＤ４５、ＣＤ３４、ＣＤｌ４或ＣＤｌｌｂ、ＣＤ７９ａ或ＣＤｌ９、
血管密度增大，神经功能也相应得到改善。以上试
综合以上研究推测ＢＭＳＣｓ能分化为神经样细 胞，而这种分化会随着诱导方案的变化『ｆｉｉ产生不同 的分化结果。化学诱导剂的可靠性与安全性有待进 一步研究，而细胞因子、中药、无血清培养液及与神 经细胞共培养这几种诱导方法均能成功地将ＢＭ— ＳＣｓ诱导成神经样细胞。Ｙａｎｇ等［１ｕ甚至用ｂ—ＦＧＦ 将ＢＭＳＣｓ诱导成具备特征性电生理特性的神经元 样细胞，而在与神经细胞共培养过程中很町能存在 细胞融合现象。这些诱导而来的神经元样细胞是否 具备神经元功能及是否具有释放神经递质的能力还 不清楚。基因调控是细胞分化的核心问题，而ＢＭ— ＳＣｓ体外诱导成神经细胞的具体基因调控机制仍需 进一步研究。
注射催产素对小鼠骨密度和成骨细胞分化影响的实验研究
注射催产素对小鼠骨密度和成骨细胞分化影响的实验研究刘璇; 鲁荐; 刘一鸣【期刊名称】《《中国骨质疏松杂志》》【年(卷),期】2019(025)008【总页数】8页(P1092-1099)【关键词】催产素; 骨代谢; 骨密度; 成骨细胞; 骨质疏松【作者】刘璇; 鲁荐; 刘一鸣【作者单位】东南大学医学院江苏南京210009; 南京市第一医院江苏南京210006【正文语种】中文【中图分类】Q57随着人口老龄化进程加快，由骨质疏松症诱发的骨折将是社会面临的一大公共健康问题，并在绝经后妇女人群中显得尤为严重。
绝经后骨质疏松症是原发性骨质疏松症中最常见的类型，多在绝经后5～10年发病，是困扰女性健康的严重疾病之一。
催产素(oxytocin，OT)是一种垂体后叶激素，其主要生理功能包括促进分娩期子宫收缩[1]、哺乳期排乳[2]和影响社会行为[3]。
近年来，研究发现成骨细胞和破骨细胞均表达催产素受体，催产素对骨代谢具有直接调节作用，它能促进成骨细胞分化和骨形成功能、促进破骨细胞分化但抑制骨吸收功能，生理状态下它的整体作用是促进骨形成和骨量累积，并且催产素参与调节妊娠期母体的骨重建，从而揭示了催产素新的生理功能[4-5]。
最近，有研究者报道绝经后妇女骨质疏松的发生与其体内低催产素水平有关，而在低血清雌激素水平的妇女体内高骨密度与高催产素水平有关[6]，该机制可以通过催产素对骨代谢的影响来解释。
然而，以往的一些研究多是基于体外细胞培养实验，本研究采用2月龄雌性C57/B6小鼠，行双侧卵巢切除术建立小鼠骨质疏松模型，并给予催产素腹腔注射，分别从骨密度、细胞分化、分子水平鉴定小鼠骨代谢水平，进一步深入探究催产素对骨代谢的调控作用。
1 材料和方法1.1 实验分组所有实验小鼠均由东南大学医学院动物实验中心购置并饲养(SPF 级)，实验方案已通过实验动物伦理委员会批准，在实验的执行过程中一切按照伦理准则进行。
选取同批次健康的2月龄雌性C57/B6小鼠15只[平均体重(25±1)g]，随机分成3组(每组5只)：①对照组(C)，②造模组(OVX)，③造模+催产素注射组(OVX+OT)。
MSC介导CD30L等4种炎症相关因子在治疗DMD中发挥作用
MSC介导CD30L等4种炎症相关因子在治疗DMD中发挥作用朱慧;董睿清;刘浩;郭晓娜;张静;马丽;潘兴华;庞荣清【摘要】目的研究mUCMSC移植治疗DMD标准模型mdx小鼠后炎症相关因子变化,探讨MSC治疗DMD相关机制.方法 PCR鉴定出mdx小鼠随机分为两组:生理盐水组和治疗组;另取正常C57小鼠作为正常对照组.治疗组腹腔注射mUCMSC的生理盐水细胞悬液,生理盐水组和对照组输入等体积生理盐水,检测血清CK值;对各组小鼠的腓肠肌进行HE染色,显微镜下观察病理变化并计数CNF;采集mdx小鼠腓肠肌组织用QAM-INF-1蛋白芯片测定小鼠肌组织炎症因子含量.结果治疗组与生理盐水组相比具有差异明显:(1)Mdx小鼠血清CK值生理盐水组为(1374.60±127.13) U/L,治疗组为(434.60±19.39) U/L,显著低于生理盐水组(P＜0.05);(2)治疗组mdx小鼠腓肠肌切片显示细胞间炎性细胞浸润减轻,细胞大小趋于统一,核中心移位现象减少;(3)生理盐水组mdx小鼠腓肠肌细胞CNF可达(94.37±11.65)％,治疗组CNF为(80.37±7.65)％,显著减少(P＜0.05);(4) mdx小鼠后肢腓肠肌组织中CD30L、IL-21、MIP-1a、PF4含量明显较低(P＜0.05).结论mUCMSC治疗后,腓肠肌组织中CD30L IL-21、MIP-1a、PF4含量较低,血清CK 值降低,细胞损伤减少.肌组织炎症表现减轻,在mUCMSC治疗DMD中发挥作用.【期刊名称】《延安大学学报（医学科学版）》【年(卷),期】2018(016)003【总页数】6页(P7-12)【关键词】Duchenne型肌营养不良;蛋白芯片;脐带间充质干细胞;Mdx小鼠【作者】朱慧;董睿清;刘浩;郭晓娜;张静;马丽;潘兴华;庞荣清【作者单位】延安大学医学院,陕西延安716000;延安大学医学院,陕西延安716000;延安大学医学院,陕西延安716000;延安大学医学院,陕西延安716000;延安大学医学院,陕西延安716000;延安大学医学院,陕西延安716000;成都军区昆明总医院细胞生物治疗中心,云南昆明650200;成都军区昆明总医院细胞生物治疗中心,云南昆明650200【正文语种】中文【中图分类】R748;R764.2杜氏型肌营养不良症(Duchenne muscular dystrophy, DMD)本质是一种X染色体连锁的隐性遗传肌病。