GPC 操作规程

排阻色谱SEQ分析
排阻色谱SEQ分为GPC（凝胶渗透色谱）和GFC（凝胶过滤色谱）
GPC主要用于聚合物领域，GFC主要用于生物科学领域。
以下介绍岛津GPC分析系统特点：
★以分子量大小分离：分子量大的先洗出，小的后洗出。按保留时间计算分子量分布。
★专用色谱柱分类：
●以分子量大小分类（表明分离线性范围）。
●以流动相分类
使用四氢呋喃作流动相。
使用DMF作流动相。（二甲基甲酰胺）
使用氯仿作流动相。
使用水性溶液作流动相。
根据色谱柱线性分布，色谱柱可以串连使用，先连接分子量大的，再接分子量小的。

岛津GPC Vol.1.02软件操作
首先，在CLASS-VP中对标准品进行色谱分析，优化积分后，得到理想的色谱图和数据，
即去掉杂质峰和负峰（Method∈ Integration Events中Min Area最小峰面积，Intergate off
禁止积分，WIDTH半峰宽 等等）。然后进入GPC分析软件：

1． 点击开始∈程序∈GPC∈GPC for CLASS-VP
出现下面对话框：
在Data filename下为从CLASS-VP中由色谱文件（***。dat）转换成的对应GPC文件起名
和排序号 ******.D** （如DLSICA。D01）。
然后点击OK 进入下面菜单：
在窗口中有以下七个处理功能图标：
GPC GPC Mol GPC Super Single File
configuration Method Weight Batch Impose Chrmatogram Manager

GPC配置 GPC方法 分子量 批处理 叠加 单色谱 文件管理
上述图标中选择 GPC GPC方法 即可以满足日常分析应用。
Method

2．下面再返回到CLASS-VP工作站中操作，先将其它界面最小化，如图：

如图：选择File∈Data∈Open打开标准品色谱数据
选择数据文件后，打开
选择File∈Method∈Open 打开分析该标准品的方法（已优化积分完毕）
选择Analysis∈Analyze 分析计算该标准品一次。
3．点击最下方图标栏中的GPC for CLASS-VP图标，如图：

进入下面界面：
双击GPC方法 图标，进入下面菜单：

该菜单分为三部分：
Calibration Curve Table为校准曲线表，编辑标准品保留时间Time，分子量Molecular等参
数
Calibration Curve（Linear）标定后，显示校准曲线。
Chromatograph 显示打开的标准品GPC格式图谱。
4．如图选择File∈Load LC Data file

选择（2）中分析标准品时转换的GPC数据文件，确定 后显示下面界面：
点击该界面中的 GET 键，得到下面界面：
提问是否Clear Calibration Table ？（清除现在的校准表？）选择 是 显示下面界面：
在Calibration Curve Table校准曲线表中的Molecular 项中，分别键入各个组分峰的分子量
然后点击该表左下角的 Draw 显示得到拟合曲线的界面：

在该界面（Calibration Curve（Linear）中，显示标定后的校准曲线。如果校准曲线拟合的
不理想，可以点击该曲线左下角的 Type 键，显示下面界面，选中合理的拟合类型：
点击 OK 得到下面重新拟合后的曲线：
●修正：
*如果样品与标准品一致（例如皆为聚苯乙烯）则不需修正。
在上面界面中选择Parameter∈GPC Parameter 如图：
出现下面界面：
Name Q factor V---α V---k
样品名 粘度系数 标准品α值 标准品k值
如无则粘度系数Q和α， k 皆输入1 ，点击 OK 校准曲线立即得到修正。
*如果样品与标准不一致（标准与样品不一致）则需修正。
在上面界面中选择Parameter∈MH Conversion如图：

出现下面界面：
V—α 粘度系数（据MH公式手册查出键入），V—k 粘度系数（据MH公式手册查出键入）
PolymerA 标准品的α，k 值。
PolymerB 样 品的α，k 值。
点击 OK 校准曲线立即得到修正。

如果查不到样品的粘度系数α， k 值，则不做该相修正。
粘度修正 Parameter∈MH Conversion在说明书后有介绍，请仔细阅读。
＊ 有时样品α，k值化学手册查不到，可以不修正，则最后样品的分析报告，为相对于标
样(如聚苯乙烯)的分子量分布。（Mn ，M/W等）

●保存校准曲线：点击File∈Save File As

出现下面界面：
在File name 中键入****
在Path name中确定保存路径＊:\ ＊:\ ＊:\
点击Save 键，该校准曲线已保存完毕，将来使用者再做相同样品，相同条件的GPC分析时
可以随时打开调用，不用每次分析都做标准品分析标定。

需要注意的是，如果分析条件发生变化（如流动相，流速等），出峰的保留时间产生偏移较
大时，应该重新分析标准品标定校准曲线，以保证分析结果的准确。
5．样品的GPC 分析：
现在可以返回到CLASS-VP中对样品进行色谱分析，分析结束后，执行分析计算一次即可。
也可以调入已做完的样品色谱数据，执行分析计算一次，都会得到相应转换的GPC 文件。
然后进入GPC 方法界面，点击如图Calculation∈ GPC Calculation：
出现下面界面：
在LC Calc。Data ：中点击图标■打开需要的样品GPC文件名
在GPG Method ：中确认所用的校准曲线文件名，如下图：

点击 确定
再点击上面界面中的Calculation 键，显示下面界面：

样品的GPC计算即告完成。
6．分析报告检查：点击View菜单中各项
点击View∈Slice 检查 切片数据
点击View∈Peak 检查个峰数据
点击View∈Average Molecular Weight检查分子量数据
点击Report∈Format 编辑报告输出格式

在下面界面各项中选择打印内容和打印位置：
点击Report∈Print 则直接在打印机打印报告。

7．GPC分析软件的退出：
先从最小化图标中逐项打开各项操作界面并关闭。在CLASS-VP中清洗系统。
然后停止CLASS-VP的系统运行。
最后退出CLASS-VP。

8．关闭所有单元电源开关。