血清碱性磷酸酶活性测定 ppt课件
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血清碱性磷酸酶活性测定ppt课件
• 适用于自动生化分析仪 • 目前已取代固定时间法而成为临床实验室测
更快，更强，更安全
6
什么是ALP？
•碱性磷酸酶（ALP）是一组在碱性环境中水解磷酸酯的 酶类。 •来源：广泛分布于人体的骨、肾、肝、肠、血清、胆汁 等部位，但骨骼、牙齿、肾和肝脏中含量较多。正常人 血清中ALP主要来源于肝脏。 •是一种能够将对应底物去磷酸化的酶，即通过水解磷酸 单酯将底物分子上的磷酸基团除去，并生成磷酸根离子 和自由的羟基，这类底物包括核酸、蛋白、生物碱等。 而该脱去磷酸基团的过程称为去磷酸化或脱磷酸化。 •碱性磷酸酶在碱性环境中有最大活力。
底物减少量或生成物增加量 酶促反应速度=
单位时间
更快，更强，更安全
3
实验目的
掌握酶活力测定的一般方法 掌握血清中ALP活力测定方法 与临床意义
更快，更强，更安全
4
思考
•如何测定酶活力的大小？
酶活力：酶催化某一化学反应的能力，其衡量的标准是
酶促反应速度的大小。
酶促反应的速度：
常用单位时间内底物的减少量或产物的生 成量来表示。
7 更快，更强，更安全
•实验原理
碱性磷酸酶在碱性环境中作用于磷酸苯二钠，使之 水解生成酚和磷酸。酚在碱性溶液中与4-氨基安替 比林作用，经铁氰化钾氧化形成红色醌类化合物， 其颜色深浅与ALP活性成正比。
磷酸苯二钠+H2O
ALP
pH=10
苯酚+磷酸氢二钠 红色醌亚胺衍生物 8 更快，更强，更安全
苯酚+4-氨基安替比林
混匀，37℃水浴保护15min
铁氰化钾溶液
血清
3.00
——
3.00
———
3.00
——
更快，更强，更安全
6
什么是ALP？
•碱性磷酸酶（ALP）是一组在碱性环境中水解磷酸酯的 酶类。 •来源：广泛分布于人体的骨、肾、肝、肠、血清、胆汁 等部位，但骨骼、牙齿、肾和肝脏中含量较多。正常人 血清中ALP主要来源于肝脏。 •是一种能够将对应底物去磷酸化的酶，即通过水解磷酸 单酯将底物分子上的磷酸基团除去，并生成磷酸根离子 和自由的羟基，这类底物包括核酸、蛋白、生物碱等。 而该脱去磷酸基团的过程称为去磷酸化或脱磷酸化。 •碱性磷酸酶在碱性环境中有最大活力。
底物减少量或生成物增加量 酶促反应速度=
单位时间
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3
实验目的
掌握酶活力测定的一般方法 掌握血清中ALP活力测定方法 与临床意义
更快，更强，更安全
4
思考
•如何测定酶活力的大小？
酶活力：酶催化某一化学反应的能力，其衡量的标准是
酶促反应速度的大小。
酶促反应的速度：
常用单位时间内底物的减少量或产物的生 成量来表示。
7 更快，更强，更安全
•实验原理
碱性磷酸酶在碱性环境中作用于磷酸苯二钠，使之 水解生成酚和磷酸。酚在碱性溶液中与4-氨基安替 比林作用，经铁氰化钾氧化形成红色醌类化合物， 其颜色深浅与ALP活性成正比。
磷酸苯二钠+H2O
ALP
pH=10
苯酚+磷酸氢二钠 红色醌亚胺衍生物 8 更快，更强，更安全
苯酚+4-氨基安替比林
混匀，37℃水浴保护15min
铁氰化钾溶液
血清
3.00
——
3.00
———
3.00
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碱性磷酸酶的分离纯化鉴定PPT演示课件
蒸馏水
0.1
BCA试剂
1.5
/
标准管
/ 0.1 / 1.5
50 20
AB
0.1 0.1 // // 1.5 1.5
5
1
CD
0.1 0.1 // //
1.5 1.5
37保温 30分钟 562nm 比色
蛋白含量（mg/ml） =
A样 ×0.2 ×稀释倍数 A标
蛋白标准液浓度
19
计算
样品的酶活性单位 碱性磷酸酶比活性（U/mg） =
碱性磷酸酶的分离纯化
有机溶剂分步沉淀法
1
分离纯化的一般程序
选择材AKP溶于30%乙醇、33%丙酮（上清中）， AKP不溶于60%乙醇、50%丙酮（沉淀中），
3
操作
一、取材及匀浆
取兔肝2g，剪碎， 加入6ml 0.01mol/L醋酸镁和醋酸钠混合液，充分 匀浆。 记录体积 （取0.1ml至一新EP管留作A液，测定时稀释25倍）
红色醌式化合物
16
稀释倍数 (PH8.8tris醋酸镁溶液 ） /
/
25 10 5
1
单位（ml）
空白管 标准管 A B C D
各阶段稀释液
/
/
酚标准液（0.1mg/ml） / 0.1
Tris-醋酸镁
0.1 /
复合底物液
3
3
0.1 0.1 0.1 0.1 //// //// 3 333
37保温 15分钟 各管加入铁氰化钾液2ml，静置15min
紫外分光光度计（200－400nm） 可见光分光光度计（400－760nm） 红外分光光度计（760－1000nm）
9
2、 定量分析的理论基础 －－Lambert—Beer定律
碱性磷酸酶偏高原因PPT课件
-
4
• 2、碱性磷酸酶高可能是生理性引起，也可 能是病理性引起。首先，儿童在骨骼发育 期、孕妇、骨折愈合期，这些都是正常性 的升高，所以不用药物治疗。其次，当人 体患有原发性肝癌、继发性肝癌、阻塞性 黄疸、胆汁淤积性肝炎时，碱性磷酸酶就 会升高，还有佝偻病、软骨病、骨上肿瘤 及一些不常见的疾病，如肾病、白血病、 等这些也会导致碱性磷酸酶升高。
碱性磷酸酶偏高原因
-
1
• 肝功能检查项目有很多，而在肝功能酶类 指标里面我们听的比较多的是谷丙转氨酶 和谷草转氨酶，对碱性磷酸酶了解的却比 较少。那碱性磷酸酶高是怎么回事?
-
ቤተ መጻሕፍቲ ባይዱ
2
• 碱性磷酸酶英文缩写ALP或AKP，男性、女 性大于15岁，ALP的正常值都是40~150U/L。 碱性磷酸酶偏高原因如下：
-
3
• 1、碱性磷酸酶(ALP)广泛存在于人体的各 个脏器器官中，其中以肝脏为最多，其次 为肾脏、骨骼、肠和胎盘等组织，血清中 的碱性磷酸酶主要来源于肝脏和骨骼。由 于碱性磷酸酶大部分来源于肝脏，进过肝 脏由胆汁排出，乙肝患者的肝细胞受到损 害，导致肝功能异常，影响了排泄的过程， 就会导致碱性磷酸酶的偏高。
-
5
• 上面了解了碱性磷酸酶高的原因，那碱性 磷酸酶高怎么办呢?专家表示，由于碱性磷 酸酶高的原因有很多，因此，出现碱性磷 酸酶高时，要到医院做乙肝两对半(乙肝两 对半对照表)、HBV-DNA等检查，找准病因， 对症治疗。
-
6
-
7
血清碱性磷酸酶活
算求出酶的活性。
！！！两法比较： 两法比较：
• 终止测定法： 用此类方法测定酶活力，必须确保酶 促反应作用时间的精确，否则会产生较大误差！ • 动力学分析法： 该方法计算方便，不需要作标准曲线 或者标准管。随着科学技术的发展，自动化分析 仪的使用，该方法现已逐步取代终止测定法。
标准曲线法
• 制备如下： 取试管6支，分别加酚标准液 取试管6 (1ml=0．1mg)， 0.05、0.1、0.2、0.3、0.4ml，各 (1ml=0．1mg)，0、0.05、0.1、0.2、0.3、0.4ml，各 管依次加复合基质液3.1、3.05、3.0、2.9、2.8、 管依次加复合基质液3.1、3.05、3.0、2.9、2.8、 2.7ml。混匀后37℃水浴保温5 2.7ml。混匀后37℃水浴保温5分钟，各管加入 1.0ml碱性溶液，再加0.5％铁氰化钾2.0ml，立即混 1.0ml碱性溶液，再加0.5％铁氰化钾2.0ml，立即混 匀。静置10分钟，510nm波长下比色。将以上各管 匀。静置10分钟，510nm波长下比色。将以上各管 所得读数与其相应的碱性磷酸酶单位(依次为0.5、 所得读数与其相应的碱性磷酸酶单位(依次为0.5、 10、20、30、40单位)在坐标纸上作图，绘制成标 10、20、30、40单位) 准曲线。
血清碱性磷酸酶活性测定
磷酸苯二钠法
实验目的
• 熟悉酶活性测定方法的一般原理 • 掌握血清ALP测定原理与临床意义 掌握血清ALP测定原理与临床意义 • 熟悉终止法和动力学测定法
实验原理
• 在PH10 环境中，ALP催化磷酸苯二钠水解生 环境中，ALP催化磷酸苯二钠水解生 成苯酚和磷酸氢二钠，苯酚与4 成苯酚和磷酸氢二钠，苯酚与4-氨基安替比 林反应生成色素原，该色素原经铁氰化钾氧 化生成红色醌亚衍生物。测定红色物质的吸 光度就可以计算酶活性的大小。 • 反应式如下： 磷酸苯二钠+H ——苯酚+ 磷酸苯二钠+H2O——苯酚+磷酸氢二钠 苯酚+4-氨基安替比林——红色醌亚胺衍生物 苯酚+4-氨基安替比林——红色醌亚胺衍生物
！！！两法比较： 两法比较：
• 终止测定法： 用此类方法测定酶活力，必须确保酶 促反应作用时间的精确，否则会产生较大误差！ • 动力学分析法： 该方法计算方便，不需要作标准曲线 或者标准管。随着科学技术的发展，自动化分析 仪的使用，该方法现已逐步取代终止测定法。
标准曲线法
• 制备如下： 取试管6支，分别加酚标准液 取试管6 (1ml=0．1mg)， 0.05、0.1、0.2、0.3、0.4ml，各 (1ml=0．1mg)，0、0.05、0.1、0.2、0.3、0.4ml，各 管依次加复合基质液3.1、3.05、3.0、2.9、2.8、 管依次加复合基质液3.1、3.05、3.0、2.9、2.8、 2.7ml。混匀后37℃水浴保温5 2.7ml。混匀后37℃水浴保温5分钟，各管加入 1.0ml碱性溶液，再加0.5％铁氰化钾2.0ml，立即混 1.0ml碱性溶液，再加0.5％铁氰化钾2.0ml，立即混 匀。静置10分钟，510nm波长下比色。将以上各管 匀。静置10分钟，510nm波长下比色。将以上各管 所得读数与其相应的碱性磷酸酶单位(依次为0.5、 所得读数与其相应的碱性磷酸酶单位(依次为0.5、 10、20、30、40单位)在坐标纸上作图，绘制成标 10、20、30、40单位) 准曲线。
血清碱性磷酸酶活性测定
磷酸苯二钠法
实验目的
• 熟悉酶活性测定方法的一般原理 • 掌握血清ALP测定原理与临床意义 掌握血清ALP测定原理与临床意义 • 熟悉终止法和动力学测定法
实验原理
• 在PH10 环境中，ALP催化磷酸苯二钠水解生 环境中，ALP催化磷酸苯二钠水解生 成苯酚和磷酸氢二钠，苯酚与4 成苯酚和磷酸氢二钠，苯酚与4-氨基安替比 林反应生成色素原，该色素原经铁氰化钾氧 化生成红色醌亚衍生物。测定红色物质的吸 光度就可以计算酶活性的大小。 • 反应式如下： 磷酸苯二钠+H ——苯酚+ 磷酸苯二钠+H2O——苯酚+磷酸氢二钠 苯酚+4-氨基安替比林——红色醌亚胺衍生物 苯酚+4-氨基安替比林——红色醌亚胺衍生物
碱性磷酸酶的活力测定
• 二是测定底物解离磷酸根后的羟基化合物，这种 方法又可分为：
• 酚化合物在显色剂的作用下显色比色测定（如本次实 验方法）。
• 生成的酚化合物本身在一定的条件下就可显色，如对 硝基苯磷酸二钠（PNPP）法。
• 无色的对硝基苯磷酸二钠在ALP的作用下，生成在 405nm处有特异吸收的淡黄色对硝基苯酚。通过测 定在405nm处吸光度的变化速率来计算ALP的活性。
2、20mmol/L磷酸苯二钠溶液 先将500ml蒸馏水煮 沸，迅速加入磷酸苯二钠2.18g(磷酸苯二钠如含2 分子结晶水，则应称取2.54g) ，冷却后加氯仿2ml 防腐，在4℃冰箱保存。（用剩的溶液不应再倒回 瓶中）
4一氨基安替比林用量与吸光度成正相关，需准确加入。铁氰 化钾用量不足时，反应不完全，测量结果偏低，因此铁氰化钾 用量必须加足或稍稍过量
酶存在于组织细胞中，血浆中酶活性很低。细 胞内、外浓度差异悬殊。 • 当酶来源的组织细胞发生病变，细胞膜通 透性增加或细胞坏死时，细胞内酶大量进入血 浆，导致血浆酶活性显著增高。其下降的临床 意义很少。 • 这一类酶临床应用较多，如转氨酶、乳酸脱氢 酶、肌酸激酶等，它们在肝病、心脏疾病时都 可能出现变化。
• 对于固定时间法，需在酶作用一段时间后，加入合适的 终止剂终止酶促反应。
• 尽量去除各种抑制剂
• 问题5：
• 如何表示酶活性大小？
酶活性单位
• 定义：
• 在一定条件下，一定时间内将一定量的底物转化为产物 （或得到一定量的产物）所需要的酶量。
• 分类：
• 惯用单位：酶活性测定方法的建立者所规定的单位。 • 国际单位(International unit, IU)：指在规定条件
• 它们大多数在肝内合成，在血浆中的浓度甚 至超过器官细胞内浓度。有的可以作为肝功能试 验的一部分。
• 酚化合物在显色剂的作用下显色比色测定（如本次实 验方法）。
• 生成的酚化合物本身在一定的条件下就可显色，如对 硝基苯磷酸二钠（PNPP）法。
• 无色的对硝基苯磷酸二钠在ALP的作用下，生成在 405nm处有特异吸收的淡黄色对硝基苯酚。通过测 定在405nm处吸光度的变化速率来计算ALP的活性。
2、20mmol/L磷酸苯二钠溶液 先将500ml蒸馏水煮 沸，迅速加入磷酸苯二钠2.18g(磷酸苯二钠如含2 分子结晶水，则应称取2.54g) ，冷却后加氯仿2ml 防腐，在4℃冰箱保存。（用剩的溶液不应再倒回 瓶中）
4一氨基安替比林用量与吸光度成正相关，需准确加入。铁氰 化钾用量不足时，反应不完全，测量结果偏低，因此铁氰化钾 用量必须加足或稍稍过量
酶存在于组织细胞中，血浆中酶活性很低。细 胞内、外浓度差异悬殊。 • 当酶来源的组织细胞发生病变，细胞膜通 透性增加或细胞坏死时，细胞内酶大量进入血 浆，导致血浆酶活性显著增高。其下降的临床 意义很少。 • 这一类酶临床应用较多，如转氨酶、乳酸脱氢 酶、肌酸激酶等，它们在肝病、心脏疾病时都 可能出现变化。
• 对于固定时间法，需在酶作用一段时间后，加入合适的 终止剂终止酶促反应。
• 尽量去除各种抑制剂
• 问题5：
• 如何表示酶活性大小？
酶活性单位
• 定义：
• 在一定条件下，一定时间内将一定量的底物转化为产物 （或得到一定量的产物）所需要的酶量。
• 分类：
• 惯用单位：酶活性测定方法的建立者所规定的单位。 • 国际单位(International unit, IU)：指在规定条件
• 它们大多数在肝内合成，在血浆中的浓度甚 至超过器官细胞内浓度。有的可以作为肝功能试 验的一部分。
碱性磷酸酶的活力测定 ppt课件
（2）各种骨骼疾病。ALP主要由成骨细胞产生，故骨骼 病特别是有新生骨质生成时，血液内ALP活性增加，以 促进磷酸盐的沉积。如佝偻病、纤维性骨病、成骨不 全症、骨转移癌和骨折修复愈合期等均引起血清ALP活 力升高。
• 降低：主要见于呆小症，磷酸酶过少症等。
PPT课件
12
•问题2：
• 如何测定酶活性？
PPT课件
8
诊断常用血清酶
血清酶
符号
鸟氨酸氨基甲酰转移酶
OCT
卵磷脂胆固醇酰基转移酶 LCAT
谷氨酸脱氢酶
GLDH
山梨醇脱氢酶
SDH
丙氨酸氨基转移酶
ALT
异柠檬酸脱氢酶
ICD
-谷氨酰转肽酶
-GT
5ˊ-核苷酸酶
5ˊ-NT
单胺氧化酶
MAO
天门冬氨酸氨基转移酶 AST
肌酸激酶
CK
乳酸脱氢酶
LDH
碱性磷酸酶
ALP
酸性磷酸酶
ACP
淀粉酶
AMS
脂肪酶
LPS PPT课件
来源
肝 肝 肝 肝 肝、肾、心 肝、胎盘、心 肝、胆、肾、小肠 肝、胆道 肝、肾、脑 心、肝、骨骼肌 骨骼肌、心、脑 心、肾、骨骼肌、肝、肺 骨骼、牙齿、肝、肾 前列腺、红细胞、血小板 胰、唾液腺 胰
9
碱性磷酸酶(Alkaline phosphatase,ALP or AKP )
血清碱性磷酸酶活性测定 （磷酸苯二钠法）
PPT课件
1
• 问题1：
• 为何要测定血清中酶的活性？有什 么意义？
PPT课件
2
引言（1）
• 酶活性测定是目前临床酶学分析最为常用的方 法。酶测定约占目前临床生化总工作量的1/4到 1/2。
• 降低：主要见于呆小症，磷酸酶过少症等。
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12
•问题2：
• 如何测定酶活性？
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8
诊断常用血清酶
血清酶
符号
鸟氨酸氨基甲酰转移酶
OCT
卵磷脂胆固醇酰基转移酶 LCAT
谷氨酸脱氢酶
GLDH
山梨醇脱氢酶
SDH
丙氨酸氨基转移酶
ALT
异柠檬酸脱氢酶
ICD
-谷氨酰转肽酶
-GT
5ˊ-核苷酸酶
5ˊ-NT
单胺氧化酶
MAO
天门冬氨酸氨基转移酶 AST
肌酸激酶
CK
乳酸脱氢酶
LDH
碱性磷酸酶
ALP
酸性磷酸酶
ACP
淀粉酶
AMS
脂肪酶
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来源
肝 肝 肝 肝 肝、肾、心 肝、胎盘、心 肝、胆、肾、小肠 肝、胆道 肝、肾、脑 心、肝、骨骼肌 骨骼肌、心、脑 心、肾、骨骼肌、肝、肺 骨骼、牙齿、肝、肾 前列腺、红细胞、血小板 胰、唾液腺 胰
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碱性磷酸酶(Alkaline phosphatase,ALP or AKP )
血清碱性磷酸酶活性测定 （磷酸苯二钠法）
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1
• 问题1：
• 为何要测定血清中酶的活性？有什 么意义？
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2
引言（1）
• 酶活性测定是目前临床酶学分析最为常用的方 法。酶测定约占目前临床生化总工作量的1/4到 1/2。
碱性磷酸酶的活力测定(修改版)
整理版ppt
32
肆 · 实验操作
整理版ppt
33
实验过程两次水浴保温，一次5min，一次15min。前者 是达到最适温度，后者是反应时间
取试管4支，按下表操作
• 立即混匀。用510nm波长（红色醌物质的最大吸收波长）比色，以蒸馏水 调零点，读取各管吸光度。
•保持反应时温度是均衡的，37°C整理版ppt
• 连续监测法： （速率法）
• 连续监测法是指每隔一定时间（2～60s），连续多次测 定酶反应过程中某一反应产物或底物量随时间变化的数 据，求出酶反应初速度，间接计算酶活性浓度的方法。
• 适用于自动生化分析仪
• 能动态观测酶促反应进程，结果准确可靠，标本和试剂 用量少，可在较短时间内完成测定。
整理版ppt
28
磷酸苯二钠法
• 在pH10环境中，ALP催化磷酸苯二钠水解生成苯酚和磷酸氢二 钠。
• 苯酚在碱性溶液中与4-氨基安替比林作用，经铁氰化钾氧化 生成醌衍生物。
• 可根据红色深浅测定酶活性的大小。
磷酸苯二钠+H2O (ALP, PH=10) → 苯酚 + 磷酸氢二钠
4-氨基安替比林（铁氰化钾整）理版+p苯pt 酚 → 红色醌亚胺衍生物 29
• ALP几乎存在于机体各个组织，但以骨骼、牙齿、肝脏 和肾脏中含量较多，儿童期含量尤其多。
• ALP有六种同功酶。其中AKP1、AKP2、AKP6来自 肝脏， AKP3来自骨细胞，AKP4产生于胎盘及癌细胞 ，而AKP5来自小肠绒毛上皮与成纤维细胞。
• • 临床上测定ALP活性主要用于肝脏疾病和骨骼疾病的
叁 · 实验器材与试剂
整理版ppt
30
• （一）器材：
碱性磷酸酶的检测与临床应用(共31张PPT)
• 我国曾应用较广的为磷酸苯二钠比色法，但现 碱性磷酸酶高对人体的影响
(3)其他疾病如甲状旁腺机能亢进。
在应用较多的是连续检测法。原理为以磷酸对 各种类型的骨质疏松，良性成骨细胞瘤等ALP无明显变化。
碱性磷酸酶主要用于阻塞性黄疸、原发性肝癌、继发性肝癌、胆汁淤积性肝炎等的检查?它主要经淋巴道和肝窦进入血液，同时由于肝内胆道 胆汁排泄障碍，反流入血而引起血清碱性磷酸酶明显升高。
肝胆疾病引起的ALP升高
• 肝细胞参与合成ALP，肝胆疾病时增高的ALP来 自肝细胞。
淤胆性疾病时ALP的升高
• ALP存在于毛细胆管面的微绒毛上，在胆汁分 泌障碍时明显增高。因胆汁酸刺激而ALP mRNA转译增高，肝细胞合成ALP亦增高。ALP 经胆汁排出，肝内外胆管阻塞时，ALP有非常 明显的升高，ALP升高先于黄疸的出现，在黄 疸消退后还可持续异常。在原发性胆汁肝硬化 、药物性肝炎、肝移植排斥或淤胆型病毒性肝 炎引起的肝内淤胆，都会使ALP升高，甚至高 达正常值的4倍。
入血液，同时由于肝内胆道胆汁排泄障碍，反 而除来源于肠和胎盘外所有的ALP同工酶都能被左旋咪唑所抑制；
(1)骨骼疾病如佝偻病、软骨病、骨恶性肿瘤、恶性肿瘤骨转移等；
流入血而引起血清碱性磷酸酶明显升高。碱性 根据405nm处吸光度增高速率来计算ALP活性单位。
所以恶性肿瘤患者血清肝型和骨型都增高的比例较大，定量测定肝型与骨型ALP同工酶，对判断肿瘤的扩散和疗效均具有重要价值。 较高浓度的无机磷可竞争性地抑制碱性磷酸酶的活性；
• 单乙醇胺对碱性磷酸酶有温度依赖的抑制作用 ；
• 较高浓度的无机磷可竞争性地抑制碱性磷酸酶 的活性；
• EDTA通过络合碱性磷酸酶而导致该酶活性中心 微环境构象发生变化，从而不可逆地抑制碱性 磷酸酶的活性；
(3)其他疾病如甲状旁腺机能亢进。
在应用较多的是连续检测法。原理为以磷酸对 各种类型的骨质疏松，良性成骨细胞瘤等ALP无明显变化。
碱性磷酸酶主要用于阻塞性黄疸、原发性肝癌、继发性肝癌、胆汁淤积性肝炎等的检查?它主要经淋巴道和肝窦进入血液，同时由于肝内胆道 胆汁排泄障碍，反流入血而引起血清碱性磷酸酶明显升高。
肝胆疾病引起的ALP升高
• 肝细胞参与合成ALP，肝胆疾病时增高的ALP来 自肝细胞。
淤胆性疾病时ALP的升高
• ALP存在于毛细胆管面的微绒毛上，在胆汁分 泌障碍时明显增高。因胆汁酸刺激而ALP mRNA转译增高，肝细胞合成ALP亦增高。ALP 经胆汁排出，肝内外胆管阻塞时，ALP有非常 明显的升高，ALP升高先于黄疸的出现，在黄 疸消退后还可持续异常。在原发性胆汁肝硬化 、药物性肝炎、肝移植排斥或淤胆型病毒性肝 炎引起的肝内淤胆，都会使ALP升高，甚至高 达正常值的4倍。
入血液，同时由于肝内胆道胆汁排泄障碍，反 而除来源于肠和胎盘外所有的ALP同工酶都能被左旋咪唑所抑制；
(1)骨骼疾病如佝偻病、软骨病、骨恶性肿瘤、恶性肿瘤骨转移等；
流入血而引起血清碱性磷酸酶明显升高。碱性 根据405nm处吸光度增高速率来计算ALP活性单位。
所以恶性肿瘤患者血清肝型和骨型都增高的比例较大，定量测定肝型与骨型ALP同工酶，对判断肿瘤的扩散和疗效均具有重要价值。 较高浓度的无机磷可竞争性地抑制碱性磷酸酶的活性；
• 单乙醇胺对碱性磷酸酶有温度依赖的抑制作用 ；
• 较高浓度的无机磷可竞争性地抑制碱性磷酸酶 的活性；
• EDTA通过络合碱性磷酸酶而导致该酶活性中心 微环境构象发生变化，从而不可逆地抑制碱性 磷酸酶的活性；
内科学_各论_症状：血清碱性磷酸酶活性增高_课件模板
内科学症状部分：血清碱性磷酸酶活性增高>>>
诊断：
骨细胞癌、骨质疏松、肝脓肿、肝结核、 肝硬变、白血病、甲状腺机能亢进时，血 清碱性磷酸酶亦可升高，应加以鉴别。
ALP与转氨酶同时检测有助于黄疸的 鉴别。阻塞性黄疸，ALP显著升高，而转 氨酶仅轻度增加。肝内局限性胆管阻塞 (如肝癌)ALP明显升高，而胆红素不高。 肝细胞性黄疸，ALP正
内科学症状部分：血清碱性磷酸酶活性增高>>>
诊断：
碱性磷酸酶主要用于阻塞性黄疸、原 发性肝癌、继发性肝癌、胆汁淤积性肝炎 等的检查。患这些疾病时，肝细胞过度制 造ALP，经淋巴道和肝窦进入血液，同时 由于肝内胆道胆汁排泄障碍，反流入血而 引起血清碱性磷酸酶明显升高。但由于骨 组织中此酶亦很活跃。因此，孕妇、骨折 愈合期、骨软化症。佝偻病、
内科学症状部分：血清碱性磷酸酶活性增高>>>
简介： 有助于反映肝的病理状态、是肝功能检查 常用方法之一。
内科学症状部分：血清碱性磷酸酶活性增高>>>
病因：
碱性磷酸酶(ALP)是诊断胆道系统疾 病时常用的指标。碱性磷酸酶存在于机体 的各个组织，以骨骼、肝脏、肾脏含量较 多。正常血清中的碱性磷酸酶主要来自于 骨骼，由成骨细胞产生，经血液到肝脏， 从胆道系统排泄。胆汁淤积性肝炎肝炎和 肝外梗阻时此酶明显升高，ALP只能提示 胆道梗阻性病变，不能鉴别梗阻是良性还 是恶性。
内科学症状部分：血清碱性磷酸酶活性增高>显升高。溶血性黄疸 ALP正常。骨胳疾病：纤维性骨炎、成骨 不全症、佝偻病、骨软化、骨转移癌、骨 折修复期。ALP可作为佝偻病的疗效的指 标。
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【精选文档】碱性磷酸酶的检测与临床应用PPT资料
肝胆疾病引起的ALP升高
• 肝细胞参与合成ALP，肝胆疾病时增高的ALP来 自肝细胞。
淤胆性疾病时ALP的升高
• ALP存在于毛细胆管面的微绒毛上，在胆汁分 泌障碍时明显增高。因胆汁酸刺激而ALP mRNA转译增高，肝细胞合成ALP亦增高。ALP 经胆汁排出，肝内外胆管阻塞时，ALP有非常 明显的升高，ALP升高先于黄疸的出现，在黄 疸消退后还可持续异常。在原发性胆汁肝硬化 、药物性肝炎、肝移植排斥或淤胆型病毒性肝 炎引起的肝内淤胆，都会使ALP升高，甚至高 达正常值的4倍。
基，这类底物包括核酸、蛋白、生物碱等。
治大疗于21周5岁后，酶4活0-力1、5下0U降/甲L。。 状腺机能亢进时，血清碱性磷酸酶亦可升
1．生理性增高：儿童在生理性的骨骼发育期，碱性磷酸酶活力可比正常人高1～2倍。
高，所以对人体的危害是比较大的。 畸形性骨炎显著升高，为正常参考值上限的10倍至几十倍，但血清钙磷多正常。
• 1、生理性原因 儿童骨骼发育期、孕妇、骨折 愈合期，这些情况下骨组织中的碱性磷酸酶很 活跃，所以检测时值会偏高。
• 2、病理性原因 当人体患有阻塞性黄疸、原发 性肝癌、继发性肝癌、胆汁淤积性肝炎等时， 肝细胞过度制造ALP，经淋巴道和肝窦进入血 液，同时由于胆汁排泄障碍，反流入血，引起 血清中的碱性磷酸酶偏高。
• 血清中的ALP主要来自肝脏和骨骼。生长期儿 童血清内的大多数来自成骨细胞和生长中的骨 软骨细胞，少量来自肝。
生物化学特征
• 碱性磷酸酶是一种能够将对应底物去磷酸化的 酶，即通过水解磷酸单酯将底物分子上的磷酸 基团除去，并生成磷酸根离子和自由的羟基， 这类底物包括核酸、蛋白、生物碱等。
• 而该脱去磷酸基团的过程被称为去磷酸化或脱 磷酸化。碱性磷酸酶是磷酸酶的一种，磷酸酶 的作用与激酶的作用正相反，激酶是磷酸化酶 ，可以利用能量分子，如ATP，将磷酸基团加 到对应底物分子上。碱性磷酸酶在碱性环境有 最大活力，对来源于细菌中的ALP来说，其最 适pH是，而对来源于牛的ALP则是。
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血清碱性磷酸酶活性测定
————磷酸苯二钠法
血清碱性磷酸酶活性测定
主要内容：
⑴ 实验目的 ⑵ 实验原理
⑶ 实验器材与试剂 ⑷ 实验操作 ⑸ 计算 ⑹ 临床意义 ⑺ 注意事项
血清碱性磷酸酶活性测定
基本概念
酶活力：也称酶活性，是表示催化某一特定反应 的能 力。可以用在一定条件下所催化的某一特 定化学速度表示。
4．酚标准工作液（0.05mg/ml） 购买合格的二级 标准品。 血清碱性磷酸酶活性测定
实验操作
取4支试管，如下操作：
血清（ml） 酚标准液 蒸馏水
测定管 0.100 —— ——
pH10碳酸盐缓冲液 1.00
标准管 —— 0.100 —— 1.00
空白管 —— —— 0.100 1.00
对照管 —— —— —— 1.00
血清碱性磷酸酶活性测定
试剂与仪器
器材： 5ml移液管，1ml移液管，100或200ul微量可调式移液 器，721E分光光度计，1cm比色皿，37℃ 恒温水浴
试剂： 1．0.1mol/L碳酸盐缓冲液(pH10.0) 无水碳酸钠
6.36g，碳酸氢钠3.36g，4-氨基安替比林1.5g，溶于 800mL蒸馏水中，定容至1L。置棕色瓶中保存。
碱性磷酸酶在碱性环境中有最大活力。
血清碱性磷酸酶活性测定
实验原理
碱性磷酸酶在碱性环境中作用于磷酸苯二钠，使之 水解生成酚和磷酸。酚在碱性溶液中与4-氨基安替 比林作用，经铁氰化钾氧化形成红色醌类化合物， 其颜色深浅与ALP活性成正比。
磷酸苯二钠+H2O
ALP 苯酚+磷酸氢二钠
pH=10
苯酚+4-氨基安替比林 铁氰化红钾色醌亚胺衍生物
血清碱性磷酸酶活性测定
计算公式:
ALP 活力=
（A测定—A对照） （A标准—A空白）
X 0.05 X 100（kings单位）
参考值:
成人：3~13 Kings单位， 儿童：5~28Kings 单位。
血清碱性磷酸酶活性测定
临床意义
在临床上，血清ALP测定常作为肝胆疾病和骨骼疾病的临床 辅助诊断指标。
1. 血清ALP活性升高 肝胆疾病：
阻塞性黄疸、急性或慢性黄疸性肝炎、肝癌等；骨 骼疾病：由于骨的损伤或疾病使成骨细胞内所含高浓度的 ALP释放进入血液中，引起血清ALP活性增高，如纤维性骨 炎、成骨不全症、佝偻病、骨软化病、骨转移癌和骨折修复
愈合期等。 2. 血清ALP活性降低 :
比较少见，主要见于呆小症，重症慢性肾炎、乳 糜泻、 贫血、恶病质等。
2．20mmol/L磷酸苯二钠溶液 先将500ml蒸馏水 煮沸，迅速加入磷酸苯二钠2.18g(磷酸苯二钠如含2 分子结晶水，则应称取2.54g) ，冷却后加氯仿2ml防 腐，在4℃冰箱保存。（用剩的溶液不应再倒回瓶中）
3．显色液（铁氰化钾的硼酸溶液） 称取铁氰化 钾2.5g，硼酸17g，各自溶于蒸馏水400ml中，两液混 合后，加蒸馏水至1L，置棕色瓶中避光保存(如出现 蓝绿色即弃去)。
酶促反应的速度：
常用单位时间内底物的减少量或产物的生 成量来表示。
血清碱性磷酸酶活性测定
酶活力测定方法
终止测定法（或定时法）： *本次实验的方法
通常是酶作用一段时间后，加入强酸、强碱、蛋白沉淀剂等终止 酶促反应，测定这段时间内底物的减少量或产物的生成量，计算酶促反应 的平均速度。
连续监测法：
连续监测法是指每隔一定时间（2～60s），连续多次测定 酶反应过程中某一反应产物或底物量随时间变化的数据，求出酶反 应初速度，间接计算酶活性浓度的方法。
4.说明计算公式中各值的含义？
5.用标准曲线如何设计本实验操作过程？
血清碱性磷酸酶活性测定
谢谢
血清碱性磷酸酶活性测定
• 适用于自动生化分析仪 • 目前已取代固定时间法而成为临床实验室测
血清碱性磷酸酶活性测定
什么是ALP？
碱性磷酸酶（ALP）是一组在碱性环境中水解磷酸酯的 酶类。
来源：广泛分布于人体的骨、肾、肝、肠、血清、胆汁 等部位，但骨骼、牙齿、肾和肝脏中含量较多。正常人 血清中ALP主要来源于肝脏。
是一种能够将对应底物去磷酸化的酶，即通过水解磷酸 单酯将底物分子上的磷酸基团除去，并生成磷酸根离子 和自由的羟基，这类底物包括核酸、蛋白、生物碱等。 而该脱去磷酸基团的过程称为去磷酸化或脱磷酸化。
底物液
铁氰化钾溶液 血清
混匀，37℃水浴保温5min，同时将底物预热
1.00
1.00
1.00
混匀，37℃水浴保护15min
3.00
3.00
3.00
——
———
——
1.00
3.00 0.100
立即混匀。用510nm波长（红色醌物质的最大吸收波长）比色，以蒸馏水 调零点，读取各管吸光度。 *保持反应时温度是均衡的，37°C
血清碱性磷酸酶活性测定
注意事项
➢ 酚标准液开后不能久置。 ➢ 底物液不能含有酚，若含酚则显红色，说明
磷酸苯二钠已分解，不宜使用。 ➢ 加入铁氰化钾后必须迅速混匀(为了改变PH来
终止酶促反应），否则有影响，偏大。 ➢ 铁氰化钾溶液中加入硼酸有Байду номын сангаас定最后所显色
的作用。此液应避光保存，如出现蓝绿色即 作废。
血清碱性磷酸酶活性测定
思考题
1. 本次实验是用的什么方法？终止剂是什么？为什么加入铁氰化 钾硼酸液后必须迅速混匀？有何影响？
答：终止法；终止剂是 铁氰化钾硼酸液；硼酸改变了PH， 使2.其B管不与再C处管于在最实适验PH中。有何作用?不设两管有何影响？
3.实验过程两次水浴保温，一次5min，一次15min。意义相同吗？ 有何区别？
酶催化反应速度越快，酶活力升高，反之活力愈 低。
酶促反应速度=
血清碱性磷酸酶活性测定
底物减少量或生成物增加量 单位时间
实验目的
➢ 掌握酶活力测定的一般方法
➢ 掌握血清中ALP活力测定方 法与临床意义
血清碱性磷酸酶活性测定
思考
如何测定酶活力的大小？
酶活力：酶催化某一化学反应的能力，其衡量的标准是
酶促反应速度的大小。
————磷酸苯二钠法
血清碱性磷酸酶活性测定
主要内容：
⑴ 实验目的 ⑵ 实验原理
⑶ 实验器材与试剂 ⑷ 实验操作 ⑸ 计算 ⑹ 临床意义 ⑺ 注意事项
血清碱性磷酸酶活性测定
基本概念
酶活力：也称酶活性，是表示催化某一特定反应 的能 力。可以用在一定条件下所催化的某一特 定化学速度表示。
4．酚标准工作液（0.05mg/ml） 购买合格的二级 标准品。 血清碱性磷酸酶活性测定
实验操作
取4支试管，如下操作：
血清（ml） 酚标准液 蒸馏水
测定管 0.100 —— ——
pH10碳酸盐缓冲液 1.00
标准管 —— 0.100 —— 1.00
空白管 —— —— 0.100 1.00
对照管 —— —— —— 1.00
血清碱性磷酸酶活性测定
试剂与仪器
器材： 5ml移液管，1ml移液管，100或200ul微量可调式移液 器，721E分光光度计，1cm比色皿，37℃ 恒温水浴
试剂： 1．0.1mol/L碳酸盐缓冲液(pH10.0) 无水碳酸钠
6.36g，碳酸氢钠3.36g，4-氨基安替比林1.5g，溶于 800mL蒸馏水中，定容至1L。置棕色瓶中保存。
碱性磷酸酶在碱性环境中有最大活力。
血清碱性磷酸酶活性测定
实验原理
碱性磷酸酶在碱性环境中作用于磷酸苯二钠，使之 水解生成酚和磷酸。酚在碱性溶液中与4-氨基安替 比林作用，经铁氰化钾氧化形成红色醌类化合物， 其颜色深浅与ALP活性成正比。
磷酸苯二钠+H2O
ALP 苯酚+磷酸氢二钠
pH=10
苯酚+4-氨基安替比林 铁氰化红钾色醌亚胺衍生物
血清碱性磷酸酶活性测定
计算公式:
ALP 活力=
（A测定—A对照） （A标准—A空白）
X 0.05 X 100（kings单位）
参考值:
成人：3~13 Kings单位， 儿童：5~28Kings 单位。
血清碱性磷酸酶活性测定
临床意义
在临床上，血清ALP测定常作为肝胆疾病和骨骼疾病的临床 辅助诊断指标。
1. 血清ALP活性升高 肝胆疾病：
阻塞性黄疸、急性或慢性黄疸性肝炎、肝癌等；骨 骼疾病：由于骨的损伤或疾病使成骨细胞内所含高浓度的 ALP释放进入血液中，引起血清ALP活性增高，如纤维性骨 炎、成骨不全症、佝偻病、骨软化病、骨转移癌和骨折修复
愈合期等。 2. 血清ALP活性降低 :
比较少见，主要见于呆小症，重症慢性肾炎、乳 糜泻、 贫血、恶病质等。
2．20mmol/L磷酸苯二钠溶液 先将500ml蒸馏水 煮沸，迅速加入磷酸苯二钠2.18g(磷酸苯二钠如含2 分子结晶水，则应称取2.54g) ，冷却后加氯仿2ml防 腐，在4℃冰箱保存。（用剩的溶液不应再倒回瓶中）
3．显色液（铁氰化钾的硼酸溶液） 称取铁氰化 钾2.5g，硼酸17g，各自溶于蒸馏水400ml中，两液混 合后，加蒸馏水至1L，置棕色瓶中避光保存(如出现 蓝绿色即弃去)。
酶促反应的速度：
常用单位时间内底物的减少量或产物的生 成量来表示。
血清碱性磷酸酶活性测定
酶活力测定方法
终止测定法（或定时法）： *本次实验的方法
通常是酶作用一段时间后，加入强酸、强碱、蛋白沉淀剂等终止 酶促反应，测定这段时间内底物的减少量或产物的生成量，计算酶促反应 的平均速度。
连续监测法：
连续监测法是指每隔一定时间（2～60s），连续多次测定 酶反应过程中某一反应产物或底物量随时间变化的数据，求出酶反 应初速度，间接计算酶活性浓度的方法。
4.说明计算公式中各值的含义？
5.用标准曲线如何设计本实验操作过程？
血清碱性磷酸酶活性测定
谢谢
血清碱性磷酸酶活性测定
• 适用于自动生化分析仪 • 目前已取代固定时间法而成为临床实验室测
血清碱性磷酸酶活性测定
什么是ALP？
碱性磷酸酶（ALP）是一组在碱性环境中水解磷酸酯的 酶类。
来源：广泛分布于人体的骨、肾、肝、肠、血清、胆汁 等部位，但骨骼、牙齿、肾和肝脏中含量较多。正常人 血清中ALP主要来源于肝脏。
是一种能够将对应底物去磷酸化的酶，即通过水解磷酸 单酯将底物分子上的磷酸基团除去，并生成磷酸根离子 和自由的羟基，这类底物包括核酸、蛋白、生物碱等。 而该脱去磷酸基团的过程称为去磷酸化或脱磷酸化。
底物液
铁氰化钾溶液 血清
混匀，37℃水浴保温5min，同时将底物预热
1.00
1.00
1.00
混匀，37℃水浴保护15min
3.00
3.00
3.00
——
———
——
1.00
3.00 0.100
立即混匀。用510nm波长（红色醌物质的最大吸收波长）比色，以蒸馏水 调零点，读取各管吸光度。 *保持反应时温度是均衡的，37°C
血清碱性磷酸酶活性测定
注意事项
➢ 酚标准液开后不能久置。 ➢ 底物液不能含有酚，若含酚则显红色，说明
磷酸苯二钠已分解，不宜使用。 ➢ 加入铁氰化钾后必须迅速混匀(为了改变PH来
终止酶促反应），否则有影响，偏大。 ➢ 铁氰化钾溶液中加入硼酸有Байду номын сангаас定最后所显色
的作用。此液应避光保存，如出现蓝绿色即 作废。
血清碱性磷酸酶活性测定
思考题
1. 本次实验是用的什么方法？终止剂是什么？为什么加入铁氰化 钾硼酸液后必须迅速混匀？有何影响？
答：终止法；终止剂是 铁氰化钾硼酸液；硼酸改变了PH， 使2.其B管不与再C处管于在最实适验PH中。有何作用?不设两管有何影响？
3.实验过程两次水浴保温，一次5min，一次15min。意义相同吗？ 有何区别？
酶催化反应速度越快，酶活力升高，反之活力愈 低。
酶促反应速度=
血清碱性磷酸酶活性测定
底物减少量或生成物增加量 单位时间
实验目的
➢ 掌握酶活力测定的一般方法
➢ 掌握血清中ALP活力测定方 法与临床意义
血清碱性磷酸酶活性测定
思考
如何测定酶活力的大小？
酶活力：酶催化某一化学反应的能力，其衡量的标准是
酶促反应速度的大小。