陆道培医院《流式细胞术进行急性白血病系别判断》专题讲座
白血病微小残留检测及其质量控制(流式细胞术)
2. 流式细胞术是直接进行定量，更为精确；而PCR是根据 产物的量进行推算。
3. 流式细胞术检测时可以区别活细胞和经化疗将要死亡的 细胞以及死亡细胞的碎片（而这些死亡的细胞以及细胞 碎片在PCR检测中都可能形成阳性信号）。
上 海 市 临 床 检 验 中 心
Shanghai Centre for Clinical Laboratory
Fluorescent Standard
Obtain Results
Troubleshoot Maintenance
Color Compensation
Generate Report
FAIL
Process/ Method Control
PASS
Test Reimbursement
上 海 市 临 床 检 验 中 心
Shanghai Centre for Clinical Laboratory
Elaine Coustan-Smith, etal. Clinical importance of minimal residual disease in childhood acute lymphoblastic leukemia. Blood. 2000, 96(8):2691-2696
流式细胞术检测白血病MRD原理
利用抗原表达的差异，以直观的方式区分白血病 细胞和正常的骨髓细胞（正常生理状态下和骨髓重建期）
跨系表达的抗原 质的差异 时相混乱的抗原 与染色体异常相关的抗原 抗原表达量异常高 量的差异 抗原表达量异常低
上 海 市 临 床 检 验 中 心
Shanghai Centre for Clinical Laboratory
差异
慢性淋巴细胞白血病的诊断与鉴别(流式细胞术)
慢性淋巴细胞白血病的诊断与鉴别诊断南京医科大学第一附属医院江苏省人民医院淋巴肿瘤创新团队刘澎吴雨洁李建勇一、CLL的诊断慢性淋巴细胞白血病：定义•CLL requires the presence of at least 5×109 B lymphocytes [monoclonal lymphocytes with a CLL phenotype. WHO 2008]/L in the peripheral blood. The clonality of the circulating B lymphocytes needs to be confirmed by flow cytometry.The leukemia cells found in the blood smear are characteristically small, mature lymphocytes•SLL requires lymphadenopathy, no cytopenias due to BM infiltration by CLL/SLL and <5×109/L PB B-cells.<5×109/L是否可能是CLL？？Hallek M et al Blood2008111:5446CLL诊断标准(IWCLL)•B淋巴细胞≥5000/μl, ≥3月例外？(ALC 5000/μl,1988/1996)–<5000/μl为单克隆B淋巴细胞增多症(MBL)或小淋巴细胞淋巴瘤(SLL)•形态学：小的成熟淋巴细胞•免疫表型特征–共表达CD19、CD5、CD23–不或弱表达FMC-7、CD22、CD79β–克隆性(单纯κ或λ)表面免疫球蛋白(smIg)(IgM±IgD)，弱表达或不表达Hallek M, et al. Blood, 2008, 111: 5446CLL诊断•临床：肝、脾、淋巴结肿大•血象：全血细胞计数•形态学：外周血涂片、骨髓涂片；骨髓活检•流式细胞术免疫分型、免疫组织化学项目名称结果单位参考范围项目名称结果单位参考范围1 WBC 白细胞计数34.52 10^9/L 4.0-10.02 LY# 淋巴细胞29.65 10^9/L 0.08-4.003 MO# 单核细胞计数0.59 10^9/L 0.08-0.904 NE# 中性粒细胞计数 4.046 10^9/L 2.00-8.005 EO# 嗜酸性细胞计数0.21 10^9/L 0.00-0.506 BA# 嗜碱性细胞计数0.03 10^9/L 0.00-0.207 LY% 淋巴细胞85.90 % 20.00-40.008 MO% 单核细胞 1.70 % 3.00-8.009 NE% 中性粒细胞11.70 % 40.00-75.0010 EO% 嗜酸性细胞0.6 % 0.00-5.0011 BA% 嗜碱性细胞0.1 % 0.00-2.0012 RBC 红细胞计数 4.52 10^12/L 3.50-5.5013 HGB 血红蛋白140 g/L 110-16014 HGB 红细胞压积0.41 0.35-0.5815 MCV 平均红细胞体积88.40 fL 80.00-100.0016 MCH 平均血红蛋白含量30.10 Pg 27.00-35.0017 MCHC平均血红蛋白浓度341 g/L 320-36018 RDW 红细胞分布宽度11.70 10.00-15.7019 PLT 血小板计数165 10^9/L 100-30020 PCT血小板压积0.16 l/l 0.11-0.2721 MPV 平均血小板体积10.0 fL 6.0-14.022 PDW 血小板分布宽度10.9 10.0-17.023 Ret% 网织红细胞 1.49 0.5-2.0姓名：某某某性别：男年龄：75岁样本类型：血液就诊卡号：1234567 样本号：102 科室：综合病区病区：床号：申请日期：2010-09-21血常规慢性淋巴细胞白血病(CLL)细胞形态学B 淋巴细胞计数检测方法Hanson CA. Blood,2009,113,6495B 细胞：CD19流式细胞术免疫分型淋巴细胞增殖性疾病（克隆扩增）确定B细胞的克隆性正常单克隆单克隆CD5CD19FMC-7CD20CD22CD23kappaCD38lambdaZAP-70CD19CD19CD19美罗华FC FC R Hallek M,et al. Lancet,2010,376:1164CD19+淋巴细胞增多的鉴别诊断Dighiero G, Hamblin TJ. Lancet,2008,371,1017FISH:t(11;14)/CCND1B-CLPDRMH积分系统Matutes E, et al. Leukemia,1994,8(10):1640CLL免疫表型（400例）8/400（2%）CD2阳性65%-96%典型CLL免疫表型非典型CLL免疫表型B-chronic lymphoid leukemia积分B-NHL白血病期积分B细胞疾病‘CLL’标志积分与CLL细胞形态a31 CLL/PL 13 mixed cell typeCD79b改善CLL积分系统Non-CLL B-CLPD n=166Moreau EJ, et al. Am J Clin Pathol,1997,108(4):378不典型CLL或CLL/PL：5分30%（20/65）；MCL：3分10%（3/29）CD5CD19CD19FMC-7CD23CD19CD20CD10kappalambdasIg典型CLL 免疫表型MCL ：D-典型；E-不常见CD19CD148Miguet L,et al. J Proteomic Res,2009,8,3346套细胞淋巴瘤慢性淋巴细胞白血病正常对照CD148Palumbo GA,et al. Leuk Res,2009,33:1212CD200慢性淋巴细胞淋巴瘤套细胞淋巴瘤CD19CD5CD200CD200CD148CD200CD148P=0.0002P<0.0001P=0.0051P<0.0001P=0.0013P=0.0002P=0.0364P=0.5756P=0.3856P<0.0001P=0.2979P=0.0682CCND1-MCLCCND1阴性FISH:t(11;14)Sox11Baseggio L,et al. Haematologica,2010,95:604免疫表型特征•表面免疫球蛋白（sIg）–限制性sIg轻链：23/24moderate-strong；κ:λ=69%:31%–IgM+IgD：58%；IgM：34%；IgM+IgG：7%•CD23 dimly positive：33%•CD43 dimly positive：3/24(12%)；其中2例CD23+CD43+•CD22、CD20strongly positive•CD10：均阴性•HCL典型标志：CD11c 8%阳性；CD103/CD25阴性CD5+SMZL CD5-SMZL细胞遗传学异常17p13(p53基因)缺失11q22(ATM基因)缺失间期荧光原位杂交（I-FISH）箭头所示为p53基因第8外显子273位密码子CGT>CATCLL治疗策略1.无del(17p)/del(11q) CLL治疗策略2.del(17p) CLL治疗策略3.del(11q) CLL的治疗策略v.1. 2011NCCN治疗指征1.进行性骨髓衰竭的证据：表现为血红蛋白和/或血小板进行性减少。
异体CART在陆道培医院取得成功
异体CART在陆道培医院取得成功截止目前，陆道培医院已经成功完成560多例CART细胞治疗难治复发B急淋临床试验，经过我院多年的探索，CART 疗效显著，毒副作用可控，为许多难治/复发的白血病患者赢得了生机。
但是，有些患者肿瘤负荷过高，无法采集自体T细胞进行培养。
而异体CART治疗，存在疗效差，容易被排斥的问题，国际国内都经验不多。
日前，在普通血液及免疫治疗科12病区，一例采自患者姐姐的CART治疗再次在一位17岁少年身上发生了奇迹般的效果。
刘XX，一个花季少年，一个本应在学校里肆意洒脱，汲取知识的大男孩。
却在1年前因为病痛的折磨而经历艰苦的求医之路，然而幸运却始终没有降临这个甘肃籍精准扶贫的极度贫困家庭。
在外院经历了化疗7疗程后仍未完全缓解。
2019年3月，他的父母毅然决然地卖掉老家的房子，带上所有的积蓄决定北上求医，来到陆道培医院普通血液及免疫治疗科12病区住院。
但是经过我院的MICM等一系列检查，患者骨髓中有96%的恶性幼稚B淋巴细胞。
经过半个月的化疗，“白血病”的恶魔之手仍未放过这个羸弱的男孩。
4月22日，查外周血仍可见78%的恶性幼稚细胞。
看到了他父亲那绝望的身影，他母亲无声的哭泣。
我们决定放手一搏，给他上CART。
因为他肿瘤负荷太高无法采集自体淋巴细胞培养CART，万般无奈之下，虽然非常担心异体CART可能效果较差。
但还好患者有同胞全和的姐姐，经过与CART制备公司的反复协商最终确定了治疗方案。
5月6日输注其姐姐的CART细胞。
回输后，他持续高烧、低血压、肺部感染等，本以为历经万千磨难他可以得到病情缓解，但回输后第15天的评估，骨髓残留却有81.19%恶性幼稚细胞。
难道上天就不能给这个本就雪上加霜的家庭一丝曙光么？奇迹真的出现了！随后，患者出现持续40℃高热、外周血CART 比例上升到了45%，眼底出血、凝血功能紊乱等细胞因子反应出现，回输后第30天，再次骨髓检测显示，患者残留未见恶性幼稚细胞——我们成功了！这个男孩终于获得了异体CART治疗的成功。
急性白血病---精品医学课件
④化学染色：PAS阳性、ACP阳性、PPO阳性、MPO阴性。 ⑤免疫学检验：原始巨核细胞高度表达CD41，CD42b。 ⑥超微结构检验：原始巨核多为4-8倍体大小。 ⑦诊断：PB+BM+PPO+BM活检+CD
8、AML-M0：急性髓细胞白血病微分化型 ①临床：发病率低，多见于老年人，化疗不敏感，生 存期短。 ② PB：白细胞计数减低或增加； ③ BM：原始细胞﹥ 30%；红系、巨核系增生减低 ④化学染色：MPO阴性、PAS及CE阴性或弱阳性、ACP阳
⑥细胞遗传学及分子生物学检验：不特异，
常有数目异常。
⑦临床分期：红血病期 白血病期
红白血病期
7、AML-M7：急性巨核细胞白血病
①临床：发病率低，多见于成年男性，病情凶险， 化疗不敏感，预后差。
② PB：全血细胞减少，可见小巨核细胞，PLT有畸 形。
③ BM：原幼巨核细胞≥ 30%；出现小巨核，单圆巨核 等形态改变；且 BM易干抽。
三、诊断：略
PB-—ALL1
PB—ALL2
PB—ALL3
PB—ALL3
BM—ALL骨髓增生情况
ALL1—BM
BM—ALL2
Rieder变
BM—ALL3
ALL2—POX
ALL1—PAS
急性髓细胞白血病
一、概述
1、概念：又称急性非淋巴细胞白血病（ANLL）。
是涉及到粒、红、巨、单系中某一系或两系原始 及幼稚细胞在造血组织中恶性增殖并浸润全身各 组织器官的一种恶性血液病。
积分减低，Phi小体染色阳性。
⑤免疫学标志：CD34、HLA-DR、MPO、CD13、CD33、CD15、CD11b 阳性。
⑥细胞遗传学和分子生物学检验：在90%以上M2b可检出t（8；21） （q22；q22）及AML1/ETO融合基因。
流式细胞术检测免疫功能 1209 new
PDF pdfFactory Pro
NK细胞功能研究与疾 病
PDF pdfFactory Pro
PDF pdfFactory Pro
CD56-PE
NK细胞
CD16NK
NKT CD16+
T
CD3-FITC
分组
CD（举例）
T细胞 CD2、CD3、CD4、CD5、CD8、CD28、CD152(CTLA−4)、
CD154(CD40L)、CD272(BTLA)、CD278(ICOS)、CD294(CRTH2)
B细胞 CD19、CD20、CD21、 CD40、CD79a(Igα)、CD79b (Igβ)、
CD80 (B7-1)、CD86 (B7-2) 、CD267(TACI)、CD268(BAFFR)、
碳水化合物结构 CD15u、CD60a−CD60c、CD75、CDw327−CDw329(siglec6、7、9)
树突状细胞
CD85(ILT/LIR)、CD273(B7DC)、CD274−CD276(B7H1-B7H3) 、
CD302(DCL1)、CD303(BDCA2)、CD304(BDCA4)
干细胞/祖细胞 CD133、CD243
FCM：Flow Cytometry(-er):
流式细胞术(仪）
n 一种对快速液流中的细胞进行分析（分选 ）的高科技仪器，每秒钟可以处理成千上 万细胞
n 流式细胞术免疫分型：已经成为血液病诊 断与监测的常见技术，是MICM诊断中的重 要一项。
PDF pdfFactory Pro
ቤተ መጻሕፍቲ ባይዱ
PDF pdfFactory Pro
PDF pdfFactory Pro
《急性髓系白血病微小残留病检测与临床解读中国专家共识》PPT课件
技术挑战与改进方向
灵敏度与特异性
提高检测方法的灵敏度和特异性，减少假阳性和假阴 性结果。
多参数检测
开发能够同时检测多种标志物的技术，提高检测的全 面性和准确性。
标准化与质量控制
建立标准化的操作流程和质量控制体系，确保检测结 果的准确性和可重复性。
临床解读的困难与对策
其他检测技术
免疫学技术
利用免疫学原理，通过特异性抗体与 白血病细胞结合，实现对微小残留病 的检测。包括免疫荧光、免疫组化等 方法。
细胞遗传学技术
新兴技术
包括基于新一代测序技术的基因突变 检测、基于质谱技术的蛋白质组学分 析等，为微小残留病的检测提供了新 的手段。
利用染色体核型分析、FISH等技术对 白血病细胞的遗传学异常进行检测， 从而评估微小残留病的情况。
临床解读
深入探讨了微小残留病检测结果与预后的关系，以及如何根据检测结 果调整治疗方案。
专家建议
针对目前存在的问题和挑战，提出了具体的改进措施和建议，包括完 善检测标准、提高检测灵敏度、加强临床与实验室沟通等。
展望未来发展趋势
技术创新
随着科技的不断发展，新的检测技术将不断涌现，如单细 胞测序、液体活检等，有望提高微小残留病检测的准确性 和灵敏度。
缺点
对操作人员技术要求较高，且抗体选择和标记方法可能影响检测结果 。
分子生物学技术检测
原理
利用PCR、RT-PCR等分子生物学技术对白血病特异性基因 或融合基因进行扩增和检测，从而实现对微小残留病的分
子水平监测。
优点
具有高灵敏度、高特异性等优点，能够在分子水平上检测 白血病细胞的残留情况。
缺点
可能受到样本质量、引物设计等因素的影响，且部分方法 操作复杂、成本较高。
118例急性白血病五色流式细胞术免疫分型与FAB分型的结果分析
118例急性白血病五色流式细胞术免疫分型与FAB分型的结果分析陈建安;周静;朱学海;丁茜;何永明;李晓婷;梁燕【期刊名称】《海南医学》【年(卷),期】2015(000)001【摘要】目的：探讨急性白血病五色流式细胞术免疫分型与FAB分型的关系和表达规律。
方法通过CD45/SSC设门的五色流式细胞仪检测118例急性白血病患者骨髓细胞的表面抗原，并进行免疫表型分析。
结果在88例AML患者中髓系相关抗原的表达率依次为CD33(93.2%)>CD13(88.6%)>CD117(86.4%)，部分AML 患者伴表达淋系相关抗原，主要为CD56(25.2%)、CD7(11.3%)、CD19(2.2%)、CD20(2.2%)；M3中高表达CD117(83.7%)、CD13(83.7%)、CD33(83.7%)，但均不表达CD34、HLA-DR，且SSC较大；M4、M5中可见CD64、CD4、CD14明显表达高于AML其他亚型(P<0.01)。
19例B-ALL患者中CD19的表达率最高(100%)，其次为CD34(90.1%)、HLA-DR (90.1%)、CD10(90.1%)；9例T-ALL 患者中CD7的表达率最高(100%)，其次为CD4(77.8%)、CD5(77.8%)、CD2(66.7%)、CD3(66.7%)、CD34(55.6%)。
结论通过五色流式细胞术进行白血病免疫分型是形态学分型诊断重要的补充，能够提供更客观的诊断依据，对提高急性白血病的诊断正确率、预后判断和治疗方案的选择有重要的意义。
%Objective To study the relationship between the immunophenotype by five-color flow cytometry and FAB phenotype in Acute leukemia. Methods Immunophenotyping of 118 cases of bone marrow specimens from patients with acute leukemia were analyzed by five-color FCM withCD45/SSC double parameters and scatter spot picture. Results In 88 cases of acute myeloid leukemia (AML), the myeloid-associated antigens were CD33 (93.2%), CD13 (88.6%), and CD117 (11.3%), respectively, and the lymphoid-associated antigens were CD56 (25.2%), CD7 (11.3%), CD19 (2.2%) and CD20 (2.2%), respectively. The antigens mainly expressed in M3 were CD117 (83.7%), CD13 (83.7%), CD33 (83.7%), and bigger SSC, but not CD34 and HLA-DR. The antigens mainly expressed in M4 and M5 wereCD64, CD4 and CD14 (P<0.01). In 19 cases of patients with B-ALL, the expression rate of CD19 was the highest (100%), followed by CD34 (90.1%), HLA-DR (90.1%) and CD10 (90.1%). In 9 cases of patients with T-ALL, the ex-pression rate of CD7 was the highest (100%), followed by CD4 (77.8%), CD5 (77.8%), CD2 (66.7%), CD3 (66.7%) and CD34 (55.6%). Conclusion Based on a more objective diagnostic basis, five-color flow cytometry is extremely impor-tant in improving the diagnostic accuracy, therapy and prognosis in acute leukemia.【总页数】4页(P56-58,59)【作者】陈建安;周静;朱学海;丁茜;何永明;李晓婷;梁燕【作者单位】中山大学附属东华医院检验科，广东东莞 523110;中山大学附属东华医院检验科，广东东莞 523110;中山大学附属东华医院检验科，广东东莞523110;中山大学附属东华医院检验科，广东东莞 523110;中山大学附属东华医院检验科，广东东莞 523110;中山大学附属东华医院检验科，广东东莞 523110;中山大学附属东华医院检验科，广东东莞 523110【正文语种】中文【中图分类】R733.71【相关文献】1.FAB分型、免疫分型和基因分型联合检测急性白血病 [J], 李玲;王蕊;钟笛;温丙昭;王晓敏;许建华;曲建华;陈贩2.505例白血病应用流式细胞术免疫分型与FAB分型的结果分析 [J], 杨峥;莫武宁;李山;秦雪;兰会华;陈正立3.流式细胞术在急性白血病免疫分型中的应用探讨 [J], 陈敬潮;师江龙;张苏伟4.流式细胞术在急性白血病免疫分型中的临床应用 [J], 汪梅花;赵康5.流式细胞术对急性白血病免疫分型的临床意义 [J], 金莹因版权原因，仅展示原文概要，查看原文内容请购买。
流式细胞术分析阿霉素抑制白血病细胞的效应
流式细胞术分析阿霉素抑制白血病细胞的效应史立言;陈为;马畅;曹秀琪;刘岩;李妍【摘要】目的观察不同浓度阿霉素对小鼠T淋巴细胞白血病YAC-1细胞增殖及凋亡的影响,探讨给药后阿霉素在白血病细胞中相对含量变化.方法培养YAC-1细胞,加入分别加入不同浓度(0.3125、0.625、1.25、2.5 h和5μmol∕L)的阿霉素,继续培养24 h,显微镜下观察细胞形态,采用流式细胞术检测细胞周期、细胞凋亡和阿霉素红色荧光,红色荧光强度可指示细胞内药物含量.不同浓度阿霉素处理细胞72 h,台盼蓝染色法计数细胞并计算细胞增殖抑制率.结果高浓度阿霉素(2.5和5μmol∕L)导致细胞肿胀、胞浆内空泡增加;阿霉素以浓度依赖的方式抑制YAC-1细胞增殖;凋亡及坏死百分率以及细胞内阿霉素含量呈现剂量依赖性增加.结论 YAC-1细胞对阿霉素敏感,采用流式细胞术可实现对细胞内药物含量和抗肿瘤效应的定量分析.【期刊名称】《吉林医药学院学报》【年(卷),期】2017(038)002【总页数】3页(P84-86)【关键词】阿霉素;细胞周期;凋亡【作者】史立言;陈为;马畅;曹秀琪;刘岩;李妍【作者单位】延边大学医学部,吉林延吉 133002;延边大学医学部,吉林延吉133002;吉林医药学院检验学院,吉林吉林 132013;吉林医药学院检验学院,吉林吉林 132013;吉林医药学院检验学院,吉林吉林 132013;吉林医药学院检验学院,吉林吉林 132013【正文语种】中文【中图分类】R595.3阿霉素(Adriamycin，ADR)是一种广谱抗肿瘤药物，临床上用于白血病、淋巴瘤、乳腺癌和肝癌等肿瘤的治疗[1]。
但其对骨髓和胃肠道有毒副作用，长期应用阿霉素还导致剂量依赖的心脏毒性效应[2]。
阿霉素属蒽环类抗肿瘤药，是P糖蛋白(P glycoprotein，P-gp)的底物，P-gp将阿霉素外排从而产生耐药性[3]。
用药前选择敏感药物是控制白血病病情和提高治愈的关键。
- 1、下载文档前请自行甄别文档内容的完整性，平台不提供额外的编辑、内容补充、找答案等附加服务。
- 2、"仅部分预览"的文档,不可在线预览部分如存在完整性等问题,可反馈申请退款(可完整预览的文档不适用该条件!)。
- 3、如文档侵犯您的权益，请联系客服反馈,我们会尽快为您处理(人工客服工作时间：9:00-18:30)。
陆道培医院《流式细胞术进行急性白血病系别判断》专题讲座
3月17日上午，我中心检验科副主任、流式细胞室主任王卉做了《流式细胞术进行急性白血病系别判断》专题讲座。
流式细胞仪于上个世纪七十年代问世，八、九十年代开始在临床广泛应用，成为血液淋巴系统肿瘤综合诊断的一个重要组成部分。
流式细胞术属于一项免疫学技术，原理是采用抗体识别抗原的方法，结合激光激发荧光的技术，检测活细胞表达的免疫学标志，对细胞性质进行判断，从而达到准确诊断疾病的目的。
检验科副主任、流式细胞室主任王卉讲座现场
近年来随着仪器、免疫学抗体、荧光技术的发展，该技术在临床上应用越来越广泛。
在急性白血病的诊断，尤其是系别和阶段判断方面，流式细胞术起着举足轻重的作用。
王卉主任给大家介绍了流式细胞术的工作原理、基础知识，如何正确使用该技术判断细胞系别，准确诊断疾病，目前使用的国际诊断标准的优缺点，以及该技术目前应用存在的问题，一些误区的解读。
会议场现
世界著名血液学家、亚洲骨髓移植第一人、血液届的泰斗陆道培院士全程参加了这次讲座，并提出自己的看法和建议。
我中心移植科主任、著名血液学家吴彤教授、我中心化疗科和免疫治疗科主任、著名血液学家童春容教授，以及各位临床医生、检验科医生都参与了这次学术活动，大家就讲座涉及的问题，以及临床应用当中遇到的情况，进行了热烈的讨论，交换了看法，达成共识。
为了加强年轻医生的培养，我中心每周都会举行一次类似的讲座，在中心领导的关心和带领下，各个临床科室、检验科室的主任和主管们认真准备，大家积极参与，极大促进了各项学科的发展和临床与实验室之间的沟通，并多次碰撞出思想的火花，明确疑难病例的诊断和治疗，衍生出新的检测项目，从而达到更好为患者服务的目的。