人教版2020年高中生物专题2微生物的培养与应用课题1微生物的实验室培养优化练习新人教版选修1
2020_2021学年高中生物专题2微生物的培养与应用课题1微生物的实验室培养课件3新人教版选修1
2无菌技术包括以下几个方面叙述，其中错误的是( C) A．为避免周围环境中微生物的污染，实验操作应在
酒精灯火焰附近进行 B．对培养器皿、接种用具和培养基等进行灭菌 C．对培养操作的空间、操作者的衣着和手进行灭菌 D．实验操作时应避免已经灭菌处理的材料用具与周围
物品相接触
3.下列关于微生物的实验室培养技术的表达，正确的
1.无菌技术的概念
无菌操作泛指在培养微生物的操作中， 所有防止杂菌污染的方法。无论是随后将要 学到的倒平板、平板划线操作，还是稀释涂 布平板法，其操作中的每一步都需要做到 “无菌”，即防止杂菌污染。只有熟练、规 范地进行无菌操作，才可能成功地培养微生 物。
2.消毒与灭菌的概念及两者的区别
（１）消毒定义： 指使用较为温和的物理或化学方法仅
杀死物体表面或内部一部分对人体有害的 微生物。（不包括芽孢和孢子）
（2）灭菌的定义： 使用强烈的理化因素杀死物体内外所有的微 生物，包括芽孢和孢子，而达到完全无菌之过 程。
灭菌消毒技术是微生物有关工作中最普通 也是最重要的技术。
3.常用的消毒与灭菌的方法
1.无菌技术除了用来防止实验室的培养物被其他 外来微生物污染外，还有什么目的？
答：无菌技术还能有效避免操作者自身被微生物感染。
2.请你判断以下材料或用具是否需要消毒或灭菌。 如果需要，请选择合适的方法。
（1） 培养细菌用的培养基与培养皿 （2） 玻棒、试管、烧瓶和吸管 （3） 实验操作者的双手
答：（1）、（2）需要灭菌；（3）需要消毒。
思考：
从杀灭微生物的角度来讲，消毒和灭 菌谁的效果好？为什么？
瓶盖，这些操作的目的是为了防止杂菌污染。
（）
3溶化时依次放入：牛肉膏连同称量纸、蛋白胨、
高中生物 专题2 微生物的培养与应用 微生物的实验室培养(二)同步训练 新人教版选修1(1)
微生物的实验室培养(二)基础过关知识点一制备牛肉膏蛋白胨培养基1．以下关于制备牛肉膏蛋白胨固体培养基的操作顺序正确的是( ) A．计算→称量→倒平板→溶化→灭菌B．计算→称量→溶化→倒平板→灭菌C．计算→称量→溶化→灭菌→倒平板D．计算→称量→灭菌→溶化→倒平板2．制备牛肉膏蛋白胨固体培养基的过程中，关于倒平板的具体描述正确的是( )①等培养基冷却至40 ℃左右时，在酒精灯火焰附近倒平板②将灭过菌的培养皿放在桌面上，左手拔出棉塞③右手拿锥形瓶，使瓶口迅速通过火焰④用左手的拇指和食指打开皿盖⑤右手将锥形瓶中培养基倒入培养皿，左手立即盖上皿盖⑥等待平板冷却 5～10 s，将平板倒过来放置，使皿盖在下，皿底在上A．①②③④B．④⑤⑥C．③⑤D．①②④⑥3．下列有关倒平板操作错误的是( ) A．将灭过菌的培养皿放在火焰旁的桌面上B．使打开的锥形瓶瓶口迅速通过火焰C．将培养皿打开，培养皿盖倒放在桌面上D．等待平板冷却凝固后需要倒过来放置知识点二纯化大肠杆菌4．用稀释涂布平板法来统计样品中的活菌数时，通过统计平板上的菌落数就能推测出样品中的活菌数。
原因是( ) A．平板上的一个菌落就是一个细菌B．菌落中的细菌数是固定的C．此时的一个菌落一般来源于样品稀释液中的一个活菌D．此方法统计的菌落数一定与活菌的实际数相同5．能够测定样品活菌数的方法是( ) A．稀释涂布平板法B．重量法C．直接计数法D．比浊法6．在接种操作的过程中，不正确的是( ) A．要将接种环灼烧灭菌B．取下棉塞后要将试管口灼烧灭菌C．将接种环伸入试管内，先接触长菌多的部位D．接种后还要将管口灭菌加塞7．有关稀释涂布平板法的说法中，错误的是( ) A．用移液管把菌液从一支试管转移到下一支试管后，要用手指轻压移液管的橡皮头，吹吸三次，目的是使菌液与水充分混匀B．移液管需经过灭菌C．试管口与移液管应在离火焰1～2 cm处D．涂布时可转动涂布器，使菌液涂布均匀8．为了保持菌种的纯净，需要进行菌种的保藏，下列有关叙述不正确的是( ) A．对于频繁使用的菌种，可以采用临时保藏的方法B．临时保藏的菌种一般是接种到试管的斜面培养基上C．临时保藏的菌种容易被污染或产生变异D．对于需要长期保存的菌种，可以采用低温－4 ℃保藏的方法能力提升9．在平板划线操作中，错误的是( ) A．将接种环放在火焰上灼烧，直到接种环烧红B．将烧红的接种环在火焰旁边冷却C．接种环在平板上的划线位置是随机的D．在挑取菌种前和接种完毕后均要将试管口通过火焰10．微生物培养过程中，肉眼鉴别金黄色葡萄球菌和枯草杆菌的重要依据是( ) A．细菌的大小、形状、颜色B．菌落的大小、形状、颜色C．有无鞭毛D．培养基的不同11．在培养基的配制过程中，具有如下步骤，其正确顺序为( )①溶化②调pH ③加棉塞④包扎⑤分装⑥称量A．①②⑥⑤③④B．⑥①②⑤③④C．⑥①②⑤④③D．①②⑤④⑥③12．微生物培养是微生物工程中的基础技术。
【2020】最新高中生物专题测试卷(二)微生物的培养与应用新人教版选修1
12．金黄色葡萄球菌有很强的致病力，常引起骨髓炎等，还可能引起食物中毒，实验中下列做法错误的是()
A．对接种环进行灼烧处理
B．带菌培养基必须经高压蒸汽灭菌锅灭菌后才能倒掉
C．带菌培养基必须经加热后才能倒掉
D．接种后双手必须经肥皂洗净，再用体积分数为70%的酒精棉球擦拭
解析：带菌培养基必须经高压蒸汽灭菌后才能倒掉，简单的加热达不到灭菌效果，B正确，C错误。
答案：D
二、非选择题(共5小题，共45分)
16．(8分)在调查和分离湖水中耐盐细菌的实验中，先将10 L湖水水样浓缩至10 mL，然后各取浓缩水样1 mL，涂布到多个培养皿中培养。请回答：
(1) 可以通过提高培养基中________的浓度，筛选被调查细菌，这种培养基被称为________培养基。
(2) 要提高实验结果的可靠性，排除培养基未彻底灭菌的可能性，应该设置的对照组是________。为检验(1)中筛选方法的效果，可以设置的对照组是____________________________________。
答案：A
7．有关平板划线操作不正确的是( )
A．将接种环放在火焰上灼烧，直到接种环烧红
B．接种环在平板上划线位置是随机的
C．在挑取菌种前和接种完毕后均要将试管口通过火焰
D．最后将平板倒置，放入恒温箱中培养
解析：将微生物的接种工具，如接种环、接种针或其他的金属用具，直接在酒精灯火焰的充分燃烧层灼烧，可以迅速彻底地灭菌；在平板划线时，要划3～5条平行线，而不是随机的；在挑取菌种前和接种完毕后均要将试管口通过火焰；将平板倒置放在恒温箱。
解析：(1)要分离耐盐细菌，需要在培养基中加盐来选择，因此可以通过提高培养基中的盐浓度，筛选耐盐细菌，该培养基有选择作用，属于选择培养基。(2)要提高实验结果的可靠性，排除培养基未彻底灭菌的可能性，可设置对照组不接种该耐盐菌，要证明选择培养基是否有选择作用，对照组不加高浓度的盐。(3)培养基灭菌常用的方法是高压蒸汽灭菌。为防止冷凝水滴入培养基中，需将培养皿倒置放置。单个菌落是由该细菌繁殖形成的，属于一个种群。(4)当两个或多个细胞连在一起时，在平板上观察到的是一个菌落，所以统计的菌落数往往比活菌的实际数目偏少。
2020高中生物专题2微生物的培养与应用课题1微生物的实验室培养课件新人教版选修1
氮源
生长 因子
凡能提供所需 氮元素的物质
生长必不可少 的微量有机物
作用
构成生物体细胞的物 质和一些代谢产物， 有些是异养生物的能 源物质
合成蛋白质、核酸以 及含氮的代谢产物
主要来源
无机化合物：CO2、 NaHCO3；有机化合物：糖 类、脂肪酸、花生粉饼、石 油等
无机化合物：N2、NH3、铵 盐、硝酸盐；有机化合物： 尿素、牛肉膏、蛋白胨等
知识点3 制备牛肉膏蛋白胨固体培养基及微生物纯化
1．制备牛肉膏蛋白胨固体培养基步骤如下： 计算：依据牛肉膏蛋白胨培养基配方比例计算配制100mL的培养基时，各 种成分的用量 ↓ 称量：牛肉膏比较黏稠，可用称量纸称取，牛肉膏和蛋白胨都易吸潮，称 取时动作要迅速，称后要及时盖上瓶盖 ↓
〔变式训练2〕 下列关于消毒和灭菌的叙述中，正确的是( A ) A．选择消毒或灭菌要根据无菌操作的对象及目的而定 B．通过消毒或灭菌，可以将所有的杂菌、孢子和芽孢等都杀灭 C．培养基在倒平板前可以通过高压蒸汽灭菌或干热灭菌 D．对需要保持生物活性的材料可以采取消毒或瞬时灭菌 [解析] 选择消毒或灭菌要根据无菌操作的对象及目的而定，如培养的对 象只能进行消毒，而培养基和培养的容器可以进行灭菌处理，A正确；消毒只 能杀死物体体表或内部的一部分微生物，不能将所有的杂菌、孢子和芽孢等都 杀灭，B错误；培养基在倒平板前可以通过高压蒸汽灭菌，但是不能通过干热 灭菌，C错误；对需要保持生物活性的材料可以采取消毒，但是不能灭菌，D错 误。
接种室
项目 灭菌
概念
常用方法
应用的范围
灼烧灭菌：用酒精灯火焰的 使用强烈的理化 燃烧层充分灼烧
接种工具的灭菌
因素杀死物体内 外所有的微生物 (包括芽孢和孢
2020-2021学年高中生物人教版选修1配套作业：专题2 课题1 微生物的实验室培养 Word版
姓名，年级：时间：专题二课题1请同学们认真完成练案［4]一、选择题1．菌种鉴定的重要依据是( B ）A．细菌的大小、形状和颜色B．菌落的大小、形状、颜色C．有无鞭毛D．培养基的不同［解析］不同种类的细菌所形成的菌落在大小、形状、光泽度、颜色、硬度、透明度等方面具有一定特征，所以，每种细菌在一定条件下所形成的菌落，可以作为菌种鉴定的重要依据。
单个的细菌用肉眼是看不见的，故细菌的个体特征不能作菌种鉴定的依据.2．用平板划线法或稀释涂布平板法都可以纯化大肠杆菌,二者的共同点有几项（ B )①可以用相同的培养基②都要使用接种环进行接种③都需要在火焰旁边进行接种④都可以用来计数活菌A．一项B．二项C．三项D．四项［解析］平板划线法或稀释涂布平板法都使用固体培养基，①正确；平板划线法采用接种针进行操作，而稀释涂布平板法采用涂布器进行操作，②错误；纯化时，要进行无菌操作,需要在火焰旁接种,避免空气中的微生物混入培养基，③正确;平板划线法一般用于分离而不能用于计数，④错误。
故选B。
3．下列关于制备牛肉膏蛋白胨培养基的叙述,错误的是（ D ）A．培养基应先调pH再进行灭菌B．培养基应先灭菌再分装到培养皿C．熔化琼脂时要不断用玻璃棒搅拌D．使用高压蒸汽灭菌锅时直接将灭菌锅密封加热［解析］把灭菌锅内的水加热煮沸，将其中原有的冷空气彻底排出后,将锅密闭，继续加热使锅内气压逐步上升。
4．下图是微生物平板划线示意图。
划线的顺序为1，2，3,4,5.下列操作方法正确的是（ D )A．操作前要将接种环放在火焰边灼烧灭菌B．划线操作必须在火焰上进行C．最可能得到所需菌落的区域是1D．在1,2，3，4,5区域中划线前后都要对接种环灭菌［解析］操作前要将接种环放在火焰上灼烧灭菌；划线操作必须在火焰旁进行,而不是火焰上；最可能得到所需菌落的区域是5。
5．制备各种牛肉膏蛋白胨固体培养基，关于倒平板的具体描述正确的是（ C )①待培养基冷却至40 ℃左右时，在酒精灯火焰附近倒平板②将灭过菌的培养皿放在桌面上，左手拔出棉塞③右手拿锥形瓶，使瓶口迅速通过火焰④用左手的拇指和食指完全打开皿盖⑤右手将锥形瓶中培养基倒入培养皿，左手立即盖上培养皿的皿盖⑥等待平板冷却5～10 s，将平板倒过来放置，使皿盖在下，皿底在上A．①③④⑤B．④⑤⑥C．③⑤D．①②④⑥［解析] 琼脂是一种多糖，在98 ℃以上可溶解于水，在45 ℃以下凝固，倒平板时高于50 ℃则会烫手,低于50 ℃时若不能及时操作，琼脂会凝固.无菌操作应贯穿于操作的全过程，皿盖全打开则空气中的微生物会进入培养基。
2020_2021学年高中生物专题2微生物的培养与应用课题1微生物的实验室培养教案新人教版选修1
微生物的实验室培养“微生物的实验室培养”是研究和应用微生物的前提，其中包含的基本操作技术有培养基的制备、无菌技术操作以及纯化培养微生物，是生物科学、医学等领域最基本的实验技术，也是高中生必须掌握的实验操作技术。
因此，“微生物的实验室培养”是高中选修教材中一个非常重要的内容，本文从实验原理、实验操作和实验结果评价等方面提出相应的教学建议。
一、教材分析1.教材中的地位“微生物的实验室培养”是高中生物选修Ⅰ专题2“微生物的培养与应用”中的第1个课题，旨在为学生实践其他的关于微生物技术的实验做好铺垫，又由于本节内容位于传统的发酵技术之后，所以它是在传统的微生物实践技术的基础上发展起来的，同时又为微生物的应用奠定了基础，因此，可用“承前启后”这个词语来概括本课题的地位。
2.教学目标依据课程标准及教学要求确立本课题教学目标如下：（1）知识目标：列举培养基的种类，说明培养基配方及作用；概述无菌技术。
（2）能力目标：尝试培养基的制备、高压蒸汽灭菌和平板划线法等基本操作技术。
熟练规X 地进行无菌操作，成功地培养微生物。
（3）情感态度价值观方面：体验制作牛肉膏蛋白胨培养基，培养纯化大肠杆菌的方法；参与实验过程，体验实验操作领悟实验原理，交流实验体会；形成勇于实践、严谨某某的科学态度和科学精神。
3.教学重难点：无菌技术的操作由于微生物在自然界分布广泛，在实验室培养微生物除了要为微生物提供合适的营养和环境条件外，还需要确保其他微生物无法混入。
因此，实验时针对培养基、操作者、用于培养的器皿、接种工具等使用不同的方法进行消毒灭菌处理。
在“无菌”的条件下接种和培养，获得纯净培养物，才能成功培养微生物。
可见无菌技术是微生物培养过程的关键。
教学中可联系医疗和生活实际深入理解无菌技术。
二、学情分析授课对象为高二理科普通班的学生，在学习完必修内容之后，已对生物知识有足够的理解和掌握，并对于微生物的认知已达到相关要求。
在学习完选修Ⅰ专题1“传统发酵技术的应用”之后，对于微生物的许多生物学特征等掌握更加透彻，也具有相应的逻辑思维以及解决问题的能力，对于本节课内容绝大部分学生可以掌握很透彻。
高中生物 专题2 微生物的培养与应用 课题1 微生物的实验室培养课件 新人教版选修11
一 二 三 知识架构
知识精要 典题例解 迁移应用
培养基的类型及应用
标准 培养基类型
配制特点
物
固体培养基
加入琼脂较多
理 性
半固体培养基 加入琼脂较少
质
液体培养基
不加入琼脂
主要应用
菌种分离, 鉴定,计数
菌种保藏
工业生产, 连续培养
一 二 三 知识架构
知识精要 典题例解 迁移应用
标准
化 学 成 分
目 的 用 途
d知识架构迁秱应用培养基的类型及应用标准培养基类型配制特点主要应用固体培养基加入琼脂较多菌种分离鉴定计数半固体培养基加入琼脂较少菌种保藏液体培养基不加入琼脂工业生产连续培养知识架构迁秱应用标准培养基类型配制特点主要应用天然培养基含化学成分不明确的天然物质工业生产合成培养基培养基成分明确分类鉴定鉴别培养基添加某种指示剂或化学药剂菌种的鉴别选择培养基添加或缺少某种化学成分菌种的分离知识架构迁秱应用注
作用
细胞内的组成成 分,生理调节物质; 某些化能自养菌 的能源,酶的激活 剂
主要来源 无机化合物
2.配制原那么 (1)目的要明确(根据微生物的种类、培养目的等),生产用培养基 内可参加化学成分不明确的天然物质,而分类鉴定用培养基内必须 参加化学成分的物质。 (2)营养要协调。注意各种营养物质的浓度和比例。 (3)pH要适宜。各种微生物适宜生长的pH范围不同,如细菌、 放线菌和真菌的最适pH范围分别为、和。
目标导航 预习导引 一 二 三 四
2.消毒与灭菌 (1)消毒 ①概念:使用较为温和的物理或化学方法杀死物体外表或内部的 局部微生物(不包括芽孢和孢子)。 ②常用方法:煮沸消毒法、巴氏消毒法、化学药剂消毒法、紫外 线消毒法。 (2)灭菌 ①概念:使用强烈的理化因素杀死物体内外所有微生物,包括芽 孢和孢子。 ②常用方法:灼烧灭菌、干热灭菌、高压蒸汽灭菌。
精选2019-2020年高中选修1《生物技术实践》生物专题2 微生物的培养与应用课题1 微生物的实验室培养人教版课
精选2019-2020年高中选修1《生物技术实践》生物专题2 微生物的培养与应用课题1 微生物的实验室培养人教版课后练习十三第1题【单选题】在微生物培养过程中，需要对培养基等进行灭菌，其标准是( )A、杀死所有微生物的细胞、芽孢和孢子B、杀死所有的微生物C、杀死所有的病原微生物D、使病原菌不生长【答案】：【解析】：第2题【单选题】利用稀释涂布平板法纯化的大肠杆菌，经培养后发现培养基上出现了多种菌落，不可能的原因是( )A、培养基制备过程中被杂菌污染B、接种过程中，无菌操作不符合要求C、系列稀释时，无菌操作不符合要求D、由大肠杆菌的种类不同造成的【答案】：【解析】：第3题【单选题】微生物接种方法很多，平板划线法是最常用的一种。
下图是平板划线示意图，划线的顺序为①②③④。
下列操作方法错误的是( )A、划线操作时，将沾有菌种的接种环插入培养基B、平板划线后培养微生物时要倒置培养C、不能将第④区域的划线与第①区域的划线相连D、在②～④区域中划线前后都要对接种环进行灭菌【答案】：【解析】：第4题【单选题】如图所示，自来水经滤膜过滤后，转移到牛肉膏蛋白胨培养基上．适宜条件下培养48小时，染色后统计变色菌落数目为165个．下列说法正确的是( )A、若培养基含伊红﹣美蓝，大肠杆菌菌落呈蓝绿色B、自来水中大肠杆菌浓度是33个/L，比真实值偏大C、为了提高准确度，需设重复实验，但不用空白对照D、若培养基菌落数目大于300，可适当减少自来水量【答案】：【解析】：第5题【单选题】有关平板划线操作不正确的是( )A、将接种环放在火焰上灼烧，直到接种环烧红B、接种环在平板上划线位置是随机的C、在挑取菌种前和接种完毕后均要将试管口通过火焰D、最后将平板倒置，放入恒温箱中培养【答案】：【解析】：第6题【单选题】下列关于平菇培养的操作程序，正确的是( )A、配制牛肉膏蛋白胨培养基，接种，高压蒸气灭菌，培养B、配制牛肉膏蛋白胨培养基，高压蒸气灭苗，接种，培养C、配制棉予壳培养基，按种，高压蒸气灭菌，培养D、配制棉子壳培养基，高压蒸气灭菌，接种，培养【答案】：【解析】：第7题【单选题】关于接种时应注意的事项全部正确的为( )①接种室要消毒②无菌操作③接种时可以谈话④外植体如茎段、茎尖可随机放人培养基⑤接种时要防止交叉污染? ⑥接种完立刻盖好瓶口．A、①②③④B、①②③④⑤⑥C、③④⑤⑥D、①②⑤⑥【答案】：【解析】：第8题【单选题】下面有关倒平板的操作，正确的是( )A、将灭过菌的培养皿放在火焰旁的桌面上B、使打开的锥形瓶瓶口迅速通过火焰C、将培养皿打开，培养皿盖倒放在桌子上D、等待平板冷却凝固后，将平板倒过来放置【答案】：【解析】：第9题【单选题】下列有关平板划线操作的叙述，正确的是( )A、使用已灭菌的接种环、培养皿，操作过程中不需要再灭菌B、打开含菌种的试管后需要将试管口通过火焰，取出菌种后需要马上塞上棉塞C、最后一区划线结束后，不需要灼烧接种环D、最后将平板倒置，放入恒温箱中培养【答案】：【解析】：第10题【单选题】微生物分离和培养正确方法步骤是( )A、灭菌、培养基的配制、搁置斜面、接种、培养B、培养基的配制、灭菌、搁置斜面、接种、培养C、接种、灭菌、培养基的配制、搁置斜面、培养D、培养基的配制、接种、灭菌、搁置斜面、培养【答案】：【解析】：第11题【多选题】下列操作中，能防止杂菌污染的有( )A、早期胚胎的培养液中添加维生素B、分离酵母菌的培养基中添加青霉素C、腐乳装瓶腌制时在近瓶口处加大用盐量D、微生物培养时在酒精灯火焰旁倒平板【答案】：【解析】：第12题【综合题】科学家从羊等食草动物胃中筛选纤维素分解菌，并对其降解纤维素能力进行了研究。
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1 课题1 微生物的实验室培养 一、选择题 1．下列关于培养基的说法，正确的是( ) A．任何培养基都必须含有碳源、氮源、矿质元素、水及生长因子 B．培养基只有两类：液体培养基和固体培养基 C．固体培养基中加入少量水即可制成液体培养基 D．配制培养基时要注意各种养分的浓度和比例 解析：不同微生物对营养物质的需求不同，如自养微生物的培养基不需要加碳源，自生固氮菌的培养基不需要加氮源。按不同的分类标准，培养基可有不同的种类和作用，其中固体培养基是在液体培养基里加入琼脂等凝固剂配制而成的。配制培养基时要注意各种养分的浓度和比例。 答案：D 2．下列操作与消毒灭菌无关的是( ) A．接种前用酒精灯火焰灼烧接种环 B．接种前用酒精擦拭双手 C．将平板倒置，放入培养箱中培养 D．接种在酒精灯的火焰旁完成 解析：接种用具、器皿、空气中都存在大量微生物，必须严格地消毒灭菌。A、B、D三项都是实验操作过程中消毒或灭菌的措施。将平板倒置，放入培养箱中培养与灭菌无关。 答案：C 3．培养基、培养皿、接种环、实验操作者的双手、空气、牛奶所采用的灭菌或消毒方法依次是( ) ①化学消毒 ②灼烧灭菌 ③干热灭菌 ④紫外线消毒 ⑤高压蒸汽灭菌 ⑥巴氏消毒 A．⑤③②①④⑥ B．①②③④⑤⑥ C．⑥②③④①⑤ D．③④②①⑥⑤ 解析：培养基用高压蒸汽灭菌；培养皿耐高温，需用干热灭菌；接种环可用灼烧灭菌达到迅速彻底地灭菌的效果；实验操作者的双手可用化学药剂进行消毒，如用酒精擦拭双手；空气可用紫外线消毒；为不破坏牛奶中的营养成分，可采用巴氏消毒。 答案：A 4．采用干热灭菌、灼烧灭菌、高压蒸汽灭菌、紫外线照射等几种方法，可分别杀死哪些部位的杂菌( ) A．接种环、吸管、培养基、接种室 B．吸管、接种环、培养基、接种箱 C．培养基、吸管、接种环、接种箱 D．培养皿、吸管、培养基、双手 解析：干热灭菌是将灭菌物品放入干热灭菌箱内，在160～170 ℃下加热1～2 h，适用于耐高温且需要保持干燥的物品，如玻璃器皿(吸管、培养皿)和金属用具等；灼烧灭菌是利用酒 2
精灯火焰的充分燃烧层灭菌，如接种针、接种环等；高压蒸汽灭菌用高压蒸汽灭菌锅，一般在压力为100 kPa，温度为121 ℃的条件下，维持15～30 min，主要用于培养基灭菌；紫外线照射适用于物体表面灭菌和空气灭菌，如接种室、接种箱、超净工作台等，使用前用紫外线照射约30 min。 答案：B 5．做“微生物的分离与培养”实验时，下列叙述正确的是( ) A．高压灭菌加热结束时，打开放气阀使压力表指针回到零后，开启锅盖 B．倒平板时，应将打开的皿盖放到一边，以免培养基溅到皿盖上 C．为了防止污染，接种环经火焰灭菌后应趁热快速挑取菌落 D．用记号笔标记培养皿中菌落时，应标记在皿底上 解析：在高压灭菌的操作过程中，加热结束后应让灭菌锅内温度自然下降，待压力表的压力降到零时，打开放气阀，旋松螺栓，打开盖子。倒平板时，用左手将培养皿打开一条稍大于瓶口的缝隙，而不是完全取下放到一边。接种环经火焰灼烧灭菌后应在火焰旁冷却后，再用其挑取菌落。在微生物的培养中，一般在皿底上用记号笔做标记。 答案：D 6．下列有关平板划线法操作的叙述，不正确的是( ) A．第一步灼烧接种环是为了避免接种环上可能存在的微生物污染培养物 B．每次划线前，灼烧接种环是为了杀死上次划线结束后，接种环上残留的菌种 C．在每一区域内划线时，接种环上的菌种直接来源于菌液 D．划线结束后，灼烧接种环能及时杀死接种环上的菌种，避免细胞污染环境和感染操作者 解析：在用平板划线法分离大肠杆菌的实验中，接种环取菌种前灼烧的目的是为了避免接种环上可能存在的微生物污染培养物；以后每次划线前灼烧接种环是为了杀死上次划线后残留的菌种；划线结束后仍需灼烧接种环，是为了避免细菌污染环境和感染操作者。从第二次划线开始，每次划线时接种环上的菌种直接来源于上次划线的末端。 答案：C 7．为了保持菌种的纯净需要进行菌种的保藏，下列有关叙述不正确的是( ) A．对于频繁使用的菌种，可以采用临时保藏的方法 B．临时保藏的菌种一般是接种到试管的斜面培养基上 C．临时保藏菌种容易被污染或产生变异 D．对于需要长期保存的菌种，可以采用低温－4 ℃保藏的方法 解析：对于需要长期保存的菌种，可采用甘油管藏法，即在3 mL甘油瓶中加入1 mL甘油后灭菌，将1 mL培养的菌液转移到甘油瓶中，与甘油充分混匀后，放在－20 ℃的冷冻箱中保存。 答案：D 8．将接种后的培养基和一个未接种的培养基都放入37 ℃恒温箱的目的是( ) A．对比观察培养基有没有被微生物利用 B．对比分析培养基是否被杂菌污染 C．没必要放入未接种的培养基 D．为了下次接种时再使用 3
解析：对未接种的培养基进行培养，起到对照作用，可确定培养基是否被杂菌污染。 答案：B 9．用平板划线法或稀释涂布平板法纯化大肠杆菌时( ) ①可以用相同的培养基 ②都需要使用接种针进行接种 ③都需要在酒精灯火焰旁进行接种 ④都可以用来计数活菌 A．①② B．③④ C．①③ D．②④ 解析：平板划线法或稀释涂布平板法都使用固体培养基；平板划线法采用接种针或接种环进行操作，而稀释涂布平板法采用涂布器进行操作；进行接种操作时，要进行无菌操作，需要在酒精灯火焰旁接种，避免空气中的微生物污染培养基；平板划线法一般用于分离菌体而不能计数活菌。 答案：C 10．下面是微生物平板划线示意图，划线的顺序为1、2、3、4、5。下列叙述正确的是( )
A．在五个区域中划线前后都要对接种环和培养基进行灭菌 B．划线操作时完全打开皿盖，划完立即盖上 C．接种时不能划破培养基，否则难以达到分离单菌落的目的 D．第1区和第5区的划线最终要连接起来，以便比较前后的菌落数 解析：在每次划线前后都要对接种环进行灭菌；进行划线操作时，左手将培养皿的皿盖打开一条缝隙，右手将沾有菌种的接种环迅速伸入平板内，划三至五条平行线，盖上皿盖；注意接种时不能划破培养基，否则难以达到分离单菌落的目的；第1区和第5区的划线不能相连。 答案：C 11．下列关于倒平板及对菌种纯化的说法正确的是( ) A．倒平板时左手将灭过菌的培养皿盖完全打开，右手将锥形瓶中培养基倒入培养皿(约10～20 mL)，左手立即盖上培养皿盖 B．使用已灭菌的接种环，培养基不需要再灭菌 C．平板冷凝后要将平板倒置，以防皿盖上的冷却水倒流入培养基 D．涂布器用火焰灼烧灭菌 解析：倒平板时用左手的拇指和食指将培养皿打开一条稍大于瓶口的缝隙而不是直接将盖完全打开；使用灭过菌的接种环，培养基仍需进行灭菌处理，以免污染环境或感染操作者；涂布器灭菌时需沾少量酒精引燃。 答案：C 12．某研究小组从有机废水中分离微生物用于废水处理，下列叙述正确的是( ) A．培养基分装到培养皿后进行灭菌 B．转换划线角度后需灼烧接种环再进行划线 C．接种后的培养皿须放在光照培养箱中培养 D．培养过程中每隔一周观察一次 4
解析：在配制培养基的过程中要先灭菌后倒平板；转换划线角度后要对接种环进行灼烧灭菌，杀灭接种环上残留的菌种，再进行划线；接种后的培养皿应放置在恒温培养箱中培养；微生物生长、繁殖较快，在培养过程中一般要隔天观察一次。 答案：B 二、非选择题 13．请回答下列有关微生物培养与分离的问题： (1)微生物的培养都需要培养基，在配制固体培养基时加入的凝固剂一般是________________________________________________________________________。 (2)制备牛肉膏蛋白胨固体培养基的一般流程包括：
计算―→称量―→溶化―→A―→B 上述流程中A代表______________，实验室中这个步骤常用的方法有________________________________________________________________________； 流程中B代表________，该步骤进行的适宜温度是________ ℃左右。 (3)某微生物纯化培养的结果如下图甲，在________(填图中编号)区域出现了单个菌落，产生每个菌落的最初细菌数目是________个，据图分析，在培养基上划线接种时，划线的顺序依次是________(用编号表示)。某研究者接种培养后得到的平板如图乙所示，推测接种时可能的操作失误是________________________________________________________________________。
(4)将分离纯化的菌种进行临时保存时，可在低温下使用试管斜面保存，但该方法除保存时间短外，菌种还易________________；若需较长时间保存菌种，可用的方法是________。 解析：(1)琼脂是制备固体培养基最常用的凝固剂。(2)制备牛肉膏蛋白胨固体培养基的流程包括：计算―→称量―→溶化―→灭菌―→倒平板；灼烧灭菌、干热灭菌和高压蒸汽灭菌是实验室中常用的灭菌方法。(3)从图甲可知，②号区域出现了单个菌落；1个菌落由1个细菌繁殖形成；根据线条数量可判断，划线的顺序依次是①―→③―→②。由图乙可知，菌落分布不均匀，推测接种时可能的操作失误是涂布不均匀。(4)试管斜面保存菌种，菌种易被污染或产生变异，若需较长时间保存菌种，可采用甘油管藏法。 答案：(1)琼脂 (2)灭菌 灼烧灭菌、干热灭菌和高压蒸汽灭菌 倒平板 50 (3)② 1 ①―→③―→② 涂布不均匀 (4)被污染或产生变异 甘油管藏法 14．在培养基上将细菌稀释或分散成单个细胞，使其长成单个的菌落，这个菌落就是一个纯化的细菌菌落。实验基本步骤如下：
配制培养基―→灭菌、倒平板―→培养―→观察 请回答下列有关问题： (1)配制培养基时，各成分含量确定的原则是________________。不论何种培养基，在各种