金线莲组织培养几种培养基的筛选
金线莲组培快繁条件的优化
金线莲组培快繁条件的优化肖小君;王曼丁;曾桢迦;唐正义【摘要】为优化金线莲快繁技术体系以批量生产金线莲,以其无菌苗为外植体,MS 为基本培养基,附加不同浓度的植物激素(6-BA,NAA,IBA)、蔗糖及活性炭等研究金线莲不定芽增殖、生根的影响,并进行移栽试验.结果表明:金线莲不定芽增殖培养以MS+ 6-BA 3.0 mg/L+NAA 0.5 mg/L+蔗糖40 g/L的效果较佳,生根培养以1/2MS+IBA 0.5 mg/L+NAA 0.3 mg/L+活性炭0.2 g/L的效果较好,较适移栽基质为珍珠岩∶泥炭土∶松树皮=1∶1∶1,成活率达98％.【期刊名称】《贵州农业科学》【年(卷),期】2016(044)002【总页数】4页(P12-14,19)【关键词】金线莲;组织培养;快速繁殖【作者】肖小君;王曼丁;曾桢迦;唐正义【作者单位】内江师范学院生命科学学院,四川内江641100;成都市树德中学(光华校区),四川成都610031;内江师范学院生命科学学院,四川内江641100;内江师范学院生命科学学院,四川内江641100【正文语种】中文【中图分类】S688.2金线莲（Anoectochilus roxburghii）为兰科开唇兰属多年生草本植物，多生长在海拔500～1 600m的阴湿森林或竹林内［1］。
其株型小，叶形优美，叶脉金黄色呈网状，除具有很高的观赏价值外，还有药王、金草、神药、乌人参等美称，可全草入药，是名贵珍稀的中草药［2］，具有广阔的开发利用前景。
金线莲的种子发育不全，由于其对生态环境要求严格，在野生自然条件下萌发率和繁殖率都极低［3］，加之近年来，野生资源不断遭到破坏性采挖，以致处于濒临灭绝之地［4］。
随着药效学和临床应用对金线莲研究的深入，对金线莲药用价值的认识进一步提高，导致金线莲的市场需求压力增大。
目前，虽然金线莲的组培快繁技术在各个环节的研究已有报道［5－8］，但不同基因型植物其繁殖体系还不稳定，工厂化、规模化的生产技术还有待进一步研究。
不同培养基组分对金线莲组培苗生长及生根的影响
金线莲(Anoectochilus roxburghii )为兰科(Orchidaceae )开唇兰属多年生草本植物,别名金蚕、金线兰、金线虎头蕉等,在福建、广东、广西、云南等多地均有分布[1]。
金线莲具有重要的药用价值,有“药用植物之王”的盛誉,在民间素有“金草”“神药”“乌人参”等美称[2-3]。
目前,关于金线莲组织培养方面的文献研究报道较多,如王雅英等[4]开展了金线莲不同外植体诱导愈伤组织的研究,结果表明以不定芽作为外植体诱导愈伤组织效果最佳;在金线莲的种苗工厂化生产中,则以顶芽或茎段为最适合的外植体,利于诱导丛生芽和遗传性状稳定[5-6]。
在金线莲的增殖生根阶段,郝丽丽等[7]比较了6-BA 、ZT 对金线莲增殖的影响,结果表明以ZT 效果要好一些;孟志霞等[8]比较了不同分裂素金线莲增殖的影响,结果表明6-BA 的增殖作用较KT 和ZT 作用要强;冉彩虹等[9]对台湾金线莲的生根试验中发现,采用IAB 与NAA 进行组合,诱导金线莲生根,其生根率可达92.53%。
在移栽驯化阶段,对于金线莲组培苗移栽前的瓶内炼苗,则室外要明显优于室内[10];而在移栽时,尽量选择苗高、粗壮且根系多的组培苗[11]等;移栽的基质可以菜园土与粗砂、木屑的混合基质[12],或苔藓、泥炭、腐殖土等基质[13]。
本试验在前期建立的金线莲快繁体系基础上,对培养基组分进行了调整试验,为优化金线莲快繁体系,提高金线莲组培苗的质量提供参考。
1材料与方法1.1试验材料以福建金线莲的茎段为外植体材料,建立金线莲组培快繁体系。
1.2试验方法1.2.1不同培养基成分对金线莲增殖苗生长的影响。
以MS 培养基为基础,依次分别对大量元素、微量元素、铁盐、有机成分进行加倍,共4个处理,分别为A 1、A 2、A 3、A 4。
在金线莲组培苗的增殖阶段,选择相同继代数且长势相近的增殖苗,将继代苗接种到相应的培养基上,每个处理接15瓶,每瓶接种6丛,重复3次,培养温度为(25±2)℃,光照时间为12h/d ,光照强度为2000~3000lx ,60d 后对金线莲的生长情况进行调查和统计。
花叶金线莲试管花卉培养基配方筛选
花叶金线莲试管花卉培养基配方筛选林兵;陈艺荃;樊荣辉;吴建设;叶秀仙【摘要】以花叶金线莲单芽为试验材料,研究不同基本培养基(MS、B5、改良MS)、蔗糖含量及杀菌剂益培隆浓度等关键因素对其株型控制和污染控制的影响,探讨适合于试管花卉的培养基配方,以期建立花叶金线莲试管花卉培养技术.结果表明:以改良MS为基本培养基,添加蔗糖20 g· L-1的培养基有利于花叶金线莲试管花卉的株型控制;培养基中添加1.5 mg· L-1益培隆有利于培养基污染控制;筛选出适宜花叶金线莲试管花卉培养的培养基配方为改良MS+蔗糖20 g·L-1+益培隆1.5 mg·L-1+琼脂粉6.0 g·L-1+食用色素0.02g·L-1,培养6个月,株型控制良好,观赏效果较佳.研究结果为花叶金线莲试管花卉开发应用提供了技术基础.【期刊名称】《福建农业学报》【年(卷),期】2018(033)012【总页数】5页(P1275-1279)【关键词】花叶金线莲;试管花卉;组织培养【作者】林兵;陈艺荃;樊荣辉;吴建设;叶秀仙【作者单位】福建省农业科学院作物研究所/福建省农业科学院花卉研究中心,福建福州350013;福建省农业科学院农业工程技术研究所,福建福州 350003;福建省农业科学院作物研究所/福建省农业科学院花卉研究中心,福建福州350013;福建省农业科学院作物研究所/福建省农业科学院花卉研究中心,福建福州350013;福建省农业科学院作物研究所/福建省农业科学院花卉研究中心,福建福州350013【正文语种】中文【中图分类】S68试管花卉是通过植物组织培养技术，在人工控制的无菌环境下，在玻璃或透明塑料容器等相对密封空间内培养迷你微型植物。
试管花卉植株小，长在精致的小试管或玻璃瓶内，便于管理与携带；与传统种植方式相比，是一种新颖、独特的花卉观赏、培植方式，满足了现代人的猎奇心理，具有广阔的发展前景[1-2]。
金线莲组织培养方法
金线莲组织培养方法金线莲组织培养方法一种药用金线莲组织培养快速繁殖方法，其特征在于包括如下步骤：１）培养基准备该步骤包括配制，分装，灭菌三步，其中配制：以１／２ＭＳ为基本培养基，每升添加６－苄氨基嘌呤２ｍｇ、α－萘乙酸１．０～１．５ｍｇ、芸苔素内酯０．０５ｍｇ、香蕉１００ｇ、琼脂６．５ｇ和蔗糖２５ｇ，混合后的培养基的ｐＨ值调节至５．６；分装：将配制后的培养基加热至琼脂完全溶解，趁热均匀地分装于干净的培养瓶中，稍凉后加盖；灭菌：将加入培养基的培养瓶及时放入高压灭菌锅内灭菌，灭菌条件为：１２１℃、１０５ｋＰａ下灭菌１５分钟，灭菌后及时取出培养瓶，冷却备用；２）外植体处理和接种该步骤分为两种情形，当采用自然生长的植株作为外植体时包括清洗，消毒，接种三步，其中清洗：选择自然生长、无病虫害的健壮植株，用加入少许肥皂粉的水清洗植株，后用流水冲洗２小时；消毒：在无菌条件下，去除叶片，将植株茎段在７５％的酒精中浸润１０秒后，放入１０％的次氯酸钠消毒１５分钟，用无菌水清洗６遍，沥干水分，放入无菌的培养皿中备用；接种：将消毒后备用的茎在无菌条件下切成长约１ｃｍ、含一个茎节的若干茎段，接种于准备好的培养基上，每瓶接１个茎段；当采用组培无菌苗时直接进行无菌接种，即在无菌条件下将组培无菌苗去叶，将茎切成长约１ｃｍ、含一个茎节的若干茎段，接种于准备好的培养基上，每瓶接１个茎段；３）培养该步骤将接好种的培养瓶移入培养室进行幼苗的诱导与培养，培养条件为：温度２５±２℃，光照时间每天１２小时，光照强度１５００～２０００ｌｘ，培养时间四个月左右，培养期间要勤检查，发现污染的要及时去除；４）移栽选苗高约６～８ｃｍ、具叶３张以上、茎基直径约２ｍｍ、发根２～３条的试管苗，炼苗４天后，洗净附着在植株上的培养基，并晾干洗涤水后移栽至１份菜园土＋２份粗砂＋１份木屑，或１份菜园土＋１份粗砂＋２份木屑的基质中。
2一种菌根真菌在金线莲栽培中的应用技术，采用小菇属4种真菌：石斛小菇(Mycena dendrobii)、紫萁小菇(Mycenaosmundicola)、兰小菇(Mycena orchidicola)、开唇兰小菇(Mycena anoectochila)中的任选一种或由其中任意两种或两种以上组成，其主要步骤及条件如下(所述比例均为重量百分比)：(1)菌根真菌的培养将上述的菌根真菌自低温保藏的斜面试管菌种活化后，分别转接于PDA平皿中，于25℃恒温培养12-20d，分别在菌落边缘打孔成菌片，并以小碎块接入液体培养基进行培养和发酵或接入固体培养基进行培养；(2)金线莲苗的培养芽增殖培养基：MS(Murashige and Skoog 1968)培养基，附加6-BA(6-苄基嘌呤1.2mg/L、NAA(萘乙酸)0.6mg/L；丛芽增殖培养基：MS为基本培养基，附加6-苄基嘌呤(BA)1.5mg/L，吲哚丁酸(IBA)0.6mg/L，玉米素(ZT)0.15mg/L；苗继代培养基：1/2MS，200g/L马铃薯提取液，25g/L蔗糖，琼脂9g/L，pH5.8；(3)菌根真菌与金线莲苗共生栽培(a)金线莲栽培基质蛭石∶砂子＝4∶1或森林腐殖土∶砂子＝6∶1或泥炭土∶砂子＝5∶1或泥炭土∶砂子∶蛭石＝4∶1∶2；(b)金线莲菌根共生栽培在硬质材料的托盘或盆中立体栽培，其容器的基部平铺一层金线莲栽培基质，其上按株行距栽培一株或一丛的金线莲苗，在苗根的基部放置少量粉碎的湿栎树(山毛榉科Fagaceae)树叶，其上再放以上备好的液体菌根真菌2ml或固体菌根真菌1-2g，使金线莲的根与菌接触，用栽培基质将苗覆盖2-3厘米厚，浇放置至室温的水；(c)栽培条件采用塑料薄膜温室、玻璃温室、露天栽培遮阳网遮阴，环境温度为18-25℃，光照量为正常日光量的1/3，照度2000Lx；(d)金线莲的收获收获时可剪取地上部分，也可一次性连根取出洗净栽培基质；阴干或60℃以下烘干；其中所述的菌根真菌的液体培养为：培养基的配制：葡萄糖2.5％；KH2PO4 0.15％；K2HPO4 0.1％；MgSO4 0.15％；天然物：麦麸3％(煮汁)，高压灭菌后分别接入上述真菌；培养条件：培养基pH5.6；三角瓶摇床培养瓶装量50％；转速120转/分钟；23℃培养30天；发酵罐培养接种量10％，其余参数同上；发酵培养结束时将发酵物用匀浆机打碎菌体及发酵物备用；其中所述的菌根真菌的固体培养为：培养基的配制：阔叶树锯末∶麦麸∶玉米粒＝1∶1∶0.5，加水量为原料的150-250％，高压灭菌后分别接入上述真菌，待菌丝从培养基顶部长入底部时取出备用。
多倍体金线莲一次性成苗及移栽
多倍体金线莲一次性成苗及移栽何碧珠;吴沙沙;邹双全;兰思仁【摘要】筛选多倍体金线莲一次性成苗的最佳培养基配方并探讨不同基质对移栽苗生长的影响.结果表明:MS+1.0 mg·L-16-BA+1.5 mg·L-1 NAA+150 g·L-1土豆+3%蔗糖+0.65%琼脂+0.15%活性炭为最佳一次性成苗培养基配方;经120 d培养即可获得生长、生根同步完成的组培瓶苗,具有长势一致(株高5~7 cm),茎节多且粗(茎粗1.19 cm),根系发达(每株2~3条根)等优势;最佳移栽基质为:泥炭土:碎松树皮=1:1(体积比),移栽苗成活率(92%)最高,长势最好,植株增高(1.53 cm)、增重(0.43 g)均达到最大,折干率(13.31%)相对较高.%Polyploid Anoectochilus roxburghii has bigger vegetative organs than its diploid plant, such as roots, stems, leaves, be-sides which it also has higher growth rate and organics synthesis rate, stronger resistance, and higher medicinal ingredients. In this study, one-step seedling formation culture medium and transplanting of polyploid A.roxburghii were studied. The results showed:MS+1.0 mg·L-16-B A+1.5 mg·L-1 NAA+150 g·L-1 potato. mud+3% sucrose+0.65% agar+0.15% activated carbon is the optimum culture medium for one-step seedling formation. Fully growing plants formed from one stem, 5-7 cm in height, 1.19 cm in stem di-ameter, and 2-3 healthy roots can be gained after 120 d′s cultivation. The optimum transplanting medium is matrix peat : bark=1 :1 (v : v) with 92% transplanting survival rate, 1.53 cm increase in height, 0.43 g increase in weight, and 13.31% dry discount rate. To solve transplanting problem of polyploid Anoectochilus roxburghii because of its larger vegetative organsand high growth rate, one-step seedling formation culture medium and transplanting of polyploid A. roxburghii were studied. The results showed that MS with 1.0 mg·L-16-BA, 1.5 mg·L-1 NAA,150 g·L-1 potato mud, 3% sucrose, 0.65% agar and 0.15% activated carbon was the optimal culture medium for one-step seedling formation. After 120 d cultivation, plants fully developed to 5~7 cm in height, 1.19 cm in stem diameter, and 2~3 healthy roots. The optimum transplanting medium was matrix peat:bark = 1 : 1 ( v : v) with 92%transplanting survival rate. Moreover, it resulted in 1.53 cm increase in height, 0.43 g increase in weight, and high dry discount rate at 13.31%.【期刊名称】《福建农林大学学报（自然科学版）》【年(卷),期】2016(045)005【总页数】7页(P522-528)【关键词】金线莲;多倍体;一次性成苗;移栽【作者】何碧珠;吴沙沙;邹双全;兰思仁【作者单位】福建农林大学园艺学院;福建农林大学海峡兰花保育中心;福建农林大学海峡兰花保育中心;福建农林大学园林学院,福建福州350002;福建农林大学海峡兰花保育中心;福建农林大学海峡兰花保育中心;福建农林大学园林学院,福建福州350002【正文语种】中文【中图分类】S567.23+9金线莲(Anoectochilus roxburghii)为兰科(Orchidaceae)开唇兰属(Anoectochilus)地生兰[1-2]，在民间素有“药王”、“神药”和“金草”等美称，主要用于治疗高血压、糖尿病、心脏病、肺炎、急慢性肝炎和肾炎等症，具有广泛的药用价值和保健作用[3]，市场需求量大，但在自然条件下结实率低、自身繁殖能力差、生长缓慢、抗性弱[4].多倍体植株具有根、茎、叶等营养器官较二倍体大,植株生长速率和有机物合成速率快，抗逆性增强及有效药用成分增加的优势[5].多倍体金线莲产业化生产对于满足市场需求具有重要意义.目前生产上所用的金线莲种苗均来源于组培繁育苗，需经增殖、壮苗和生根等多个阶段[6-7]，生长周期长，且瓶苗存在生长弱小、茎节徒长、炼苗时间长、栽培适应性差、缓苗速度慢和成活率低等问题，成为金线莲产量、有效成分积累以及产品品质提升的限制因子，增加了企业生产成本和种植难度，影响产业发展.一次性成苗方法在朱顶兰(Amryllis vittata)[8]和枣树(Ziziphus jujuba)[9]等植物组织培养中有报道过，具有成苗时间短和成本低等优点，但有关多倍体金线莲一次性成苗快速繁殖技术及在产业化生产中的应用尚未见报道.本试验以经鉴定的多倍体金线莲继代植株茎段作为外植体，进行一次性成苗培养基和移栽基质的筛选，研究结果对于缩短培养时间、降低培育成本、减少工作量、提高产品品质、增加有效活性成分和产量具有重要的实践意义.1.1 材料以福建永泰藤山自然保护区的野生金线莲(图1A)为试材建立无菌体系，在培养基中添加一定量的秋水仙素诱变多倍体植株.对变异植株的株高，茎节粗细程度、数量，叶片数量、大小、厚度等形态学特征进行初步筛选，经细胞学鉴定确定后，将四倍体无菌植株(图1B)用于一次性成苗繁育和移栽研究.1.2 多倍体植株一次性成苗的诱导在超净工作台上将高6～8 cm，具3～4个节间、3～4片叶的粗壮植株从丛生芽中选出，切成带一个茎节，长1～2 cm的茎段接种到经高压灭菌的一次性成苗培养基上，接种茎段有序平放在培养基上，以增加培养材料与培养基的接触面积及有效苗的形成.以MS为基本培养基，加入0.65%琼脂和0.15%活性炭，设计6-BA(0、1.0、2.0 mg·L-1)、NAA(0.5、1.0、1.5 mg·L-1)和有机添加物(3 mg·L-1花宝1号、150 g·L-1土豆泥、3 mg·L-1蛋白胨)三因素三水平的正交设计，共设1～9号处理，每处理接种7瓶，每瓶4个芽，重复4次.培养室温度(23±2) ℃，接种后第1周置于黑暗培养10 d，后光照培养11 h·d-1，光照度1 500～2 000 lx.培养120 d后对各组苗的生长情况进行记录，测定其增殖芽数、株高(用游标卡尺测定茎基部至最高芽顶端的长度)、茎粗(用游标卡尺测定茎中部直径)和生根数(每个处理所有植株根系总条数/植株总数).株高5～7 cm、根数>1.5条的植株为有效苗，有效苗/%=有效苗数/接种数×100.1.3 炼苗与移栽将一次性成苗培养基培养4个月的瓶苗(苗高6～8 cm，单株苗重1.05 g，具有2～3条根系，根长1.0～2.0 cm)移到自然光条件下炼苗(夏季用黑色遮荫网搭建炼苗棚)5～7 d后从瓶内取出，用自来水清洗根部附着的残留培养基，将清洗干净的小苗放入竹框中置阴凉处阴干至不滴水为止，根部用1%多菌灵浸泡消毒5～10 min后用于移栽.移栽基质选用泥炭、碎松树皮、蛭石、珍珠岩、椰糠、稻壳、细沙和水苔，按不同体积比混合(表1).移栽基质经过消毒后装入50孔穴盘(规格：5 cm×10 cm)中，挑选生长一致的瓶苗进行移栽，每种基质种植50株，移栽后浇足定根水.将移栽好的穴盘置于塑料大棚中，大棚光照度控制在3 000 lx左右，温度控制在25～28 ℃，日常管理中根据土壤干湿程度进行浇水.种植3个月后统计移栽成活率，把苗挖出、洗净、擦干，测量每株株高和鲜重，然后在80 ℃的恒温干燥箱中烘干至恒重，测量其干重，计算净增高、净增重和折干率.折干率%=(鲜种-干重)/鲜种×100.1.4 数据处理试验数据采用Excel和SPSS 19.0软件进行分析.2.1 不同培养基对金线莲一次性成苗培养的影响将带一个茎节，长1～2 cm的茎段接种到一次性成苗培养基中，接种40 d后茎节处萌发出1～3个芽，随后芽体生长，新叶伴随长出；培养3个月，植株长成具有3～4个节的小苗，在基部第1和2节处分布许多白色绒毛并长出根系；随着茎节不断生长，根系也逐渐变长，根颜色由白色转为深绿色，部分根系扎入培养基中；培养120 d可获得生长与生根同时完成且植株生长一致可直接进行移栽的健壮瓶苗.不同培养基一次性成苗的培养情况如图2所示.从表2可知：不定芽增殖倍数最大的是9号处理，培养120 d不定芽增殖2.91个(图2I)，其他依次为6、5、7、8、4、1、2和3号处理，长出有效芽较少，生长不一致(图2A～H)；株高和茎粗最大的是6号处理，其株高和茎粗分别为7.08、1.19 cm，其他依次为2、7、3、8、4、9、5和1号处理，有效芽较少，生长不一致导致株高和茎粗存在较大差异；生根数最多的是3号处理，培养4个月后生根2.21条，其他依次为6、2、5、4、1、8、9和7号处理.对表2中不定芽增殖数进行极差分析，从极差R的大小(表3)可以看出，3个因素对不定芽增殖数影响程度大小为：6-BA>有机添加物>NAA.由K的大小和不定芽增殖数可知，培养基的最优组合为2.0 mg·L-1 6-BA+1.5 mg·L-1 NAA+2.0 mg·L-1花宝1号.类似地，3个因素对株高影响程度大小为：有机添加物>NAA>6-BA.比较K的大小和株高可知，培养基较佳组合为1.0 mg·L-1 6-BA+1.5 mg·L-1 NAA+150 g·L-1土豆.3个因素对茎粗影响程度大小为：有机添加物>6-BA>NAA.比较K的大小和茎粗可知，培养基较佳组合也是1.0 mg·L-1 6-BA+1.5 mg·L-1 NAA+150 g·L-1土豆.3个因素对生根数影响程度大小为：6-BA>NAA>有机添加物.比较K的大小和株高可知，培养基较佳组合为0.0 mg·L-1 6-BA+1.5 mg·L-1 NAA+2.0 mg·L-1蛋白胨.2.2 3个因素对金线莲4个测量指标的效应检验和多重比较为进一步了解不同处理因素对一次性成苗不同考查指标的影响，以便找出更佳的一次性成苗培养基，对表2、3作进一步分析，进行各因素主体间的效应检验和多重比较，结果如表4、5所示.从表4可知：因素A对不定芽增殖数的影响达到极显著水平，因素B、C对不定芽增殖数的影响达到显著水平.从F的大小看出，3个因素对不定芽增殖数影响程度大小为：6-BA>有机添加物>NAA，其结果与极差R的比较结果一致.对影响不定芽增殖数的3个因素3个水平进行SSR检验，结果(表5)显示：在0.05水平上，因素6-BA的第1水平与第2、3水平存在显著差异，第2水平与第3水平的差异不显著；因素NAA和因素有机添加物的第3水平与第1、2水平存在显著差异，第1水平与第2水平的差异不显著.从表4可知：因素B、C对株高的影响达到极显著水平，因素A对株高的影响达到显著水平.从F的大小看出，3个因素对株高影响程度大小为：有机添加物>NAA>6-BA，其结果与极差R的比较结果一致.对影响株高的3个因素3个水平进行SSR检验，结果(表5)显示：在0.05水平上，因素6-BA的第2水平与第1、3水平存在显著差异，第1水平与第3水平的差异不显著；因素NAA和因素有机添加物3个水平间的差异极显著.从表4可知：因素C对茎粗的影响达到极显著水平，因素A、B对茎粗的影响达到显著水平.从F的大小看出，3个因素对茎粗影响程度大小为：有机添加物>6-BA>NAA，其结果与极差R的比较结果一致.对影响茎粗的3个因素3个水平进行SSR检验，结果(表5)显示：在0.05水平上，因素6-BA的第2水平与第1、3水平存在显著差异，第1水平与第3水平的差异不显著；因素NAA的第1水平与第2、3水平存在显著差异，第2水平与第3水平的差异不显著；因素有机添加物3个水平间的差异极显著.从表4可知：因素A、B对生根数的影响达到极显著水平，因素C对生根数的影响不显著.从F的大小看出，3个因素对生根数影响程度大小为：6-BA>NAA>有机添加物，其结果与极差R的比较结果一致.对影响生根数的3个因素3个水平进行SSR检验，结果(表5)显示：在0.05水平上，因素6-BA的第3水平与1、2水平存在显著差异，第1水平与第2水平的差异不显著；因素NAA的第3水平与第1、2水平存在显著差异，第1水平与第2水平的差异不显著；因素有机添加物的第1水平与第2、3水平存在显著差异，第2水平与第3水平的差异不显著.综合评价6-BA、NAA、有机添加物对不定芽增殖数、株高、茎粗和生根数的影响，对茎段培养4个月后诱导出的不定芽增殖数、株高、茎粗和生根数进行极差分析、4个测量指标的效应检验和SSR检验.结果表明：对不定芽增殖数影响程度大小为:6-BA>有机添加物>NAA，最优组合为2.0 mg·L-1 6-BA+1.5 mg·L-1NAA+2.0 mg·L-1花宝1号；对株高影响程度大小为:有机添加物>NAA>6-BA，最优组合为1.0 mg·L-1 6-BA+1.5 mg·L-1 NAA+150 g·L-1土豆；对茎粗影响程度大小为:有机添加物>6-BA>NAA，最优组合为1.0 mg·L-1 6-BA+1.5 mg·L-1 NAA+150 g·L-1土豆；对生根数影响程度大小为:6-BA>NAA>有机添加物，最优组合为0 mg·L-1 6-BA+1.5 mg·L-1 NAA+2.0 mg·L-1蛋白胨.一次性成苗的培养目标是有效芽数量多，茎节纤维多且粗壮，长势一致，根系粗壮且多，综合考虑这些指标，一次性成苗培养的最优培养基为MS+1.0 mg·L-1 6-BA+1.5 mg·L-1 NAA+150 g·L-1土豆+ 3%蔗糖+0.65%琼脂+0.15%活性炭.2.3 不同基质对金线莲移栽苗生长的影响从表6和图3可以看出，6(泥炭+碎松树皮)、1(水苔)和5号(泥炭+珍珠岩+蛭石)基质移栽苗的成活率均高于90%，且长势相对较好.6号基质移栽苗长势最好，叶片大、饱满，顶芽长出新叶，茎粗壮、较硬(图3F)，植株增高(1.53 cm)和增重(0.43 g)均达到最大，折干率(13.31%)相对较高；1号基质移栽苗虽长势较好，叶片大，有新叶长出，但基部叶片枯萎(图3A)，折干率(9.53%)低；5号基质移栽苗长势优良，叶片饱满，部分叶片发黄脱落，顶芽长出新叶，茎杆挺直.7号基质(泥炭+珍珠岩+稻壳)移栽苗与5号基质移栽苗的长势相当，7号基质加入稻壳对茎的生长有利，茎段纤维含量高，折干率最高，同时成活率高于85%.4(泥炭+珍珠岩+细沙)、3(泥炭+椰糠+蛭石)和2号基质(泥炭+椰糠+细沙)移栽苗的成活率均低于80%.其中，4和3号基质移栽苗的长势较差，基部叶片发黄掉落，茎杆细弱；2号基质移栽苗的长势最弱，生长现象不明显，大部分叶片脱落，叶片柔软，茎细小，净增高、净增重和折干率均最低.3.1 金线莲一次性成苗与分段成苗的差异金线莲分段成苗一般需经增殖培养和生根培养两个诱导过程才能完成，增殖培养需要120 d左右，生根培养需要30 d，为了增加增殖系数，激素用量比较大，从而使有效苗所占比例减少[10-15].分段成苗的植株生长弱小(单株重0.875 g)、茎节徒长、炼苗时间长(需30 d)、环境适应力差、缓苗速度慢、成活率低(60%～70%)、抵御病虫害能力差、连续生长时间短(大量存活仅60～90 d)，直接影响产量、品质和内含物的变化，增加生长成本和种植难度.一次性成苗从茎段开始培养到成苗、生根再到可移栽的时间只需120 d，一次性完成生长过程，在培养期间无需更换培养基，获得培养时间短(培养4个月后直接移栽)、扩繁系数高、植株生长一致、炼苗时间短(7～10 d)、适应性强、缓苗速度快(7～10 d)、病虫害少、茎粗(直径4 mm)、根系发达(3根以上)、叶片颜色深且绒毛状明显、叶脉金线明晰、连续生长时间长(2 a以上)的植株,培育时间缩短1/5，节约能耗30%，节约劳动力50%.金线莲分段成苗的繁殖系数一般为2.5～5.2[16-18]，而一次性成苗的增殖率虽然仅为2.55，但一次性成苗的有效成苗率、移栽成活率比前者高.从育苗成本上看，由于分段培养添加了大量激素，植株表现为茎细小、水分含量高、自身营养积累欠缺、苗体弱、根系发育不良，因此在规模化生产上要想提高成活率的有效方法是延长炼苗时间，分段成苗的炼苗时间需30～40 d[19]，而一次性成苗的炼苗时间仅为7～10 d.在生产实践中增加炼苗时间并不是提高移栽苗成活率的主要因素，更直接的因素是不定芽诱导培养基的合理构成及有机添加物的合理配比，才能使苗生长得更加健壮.3.2 金线莲一次性成苗培养基的选择兰科植物组织培养中常用的有机添加物都是一些成分较复杂的天然复合物，如土豆含有脂肪、蛋白质及少量的Ca、Mg、K等多种营养成分；蛋白胨含有机氮化合物、维生素和糖类物质；花宝一号含有N、P、K等丰富的矿质元素.这些有机添加物的使用有利于生根和壮苗.鉴于有机添加物在兰科植物生长发育中的作用，本试验在金线莲一次性成苗的培养基中分别添加了土豆泥、蛋白胨和花宝一号，随着有机添加物比例的增加促进了株高、茎粗、生根数和有效成苗率的提高.有机添加物在瓶苗培养过程中的效果依次为土豆泥、花宝一号、蛋白胨.金线莲一次性成苗培养综合考虑的是在同一空间同一时间内生长有效芽数多、生长健壮、长势一致、根系发达等指标，选择出最优的培养基为MS+1.0 mg·L-1 6-B+1.5 mg·L-1 NAA+150 g·L-1土豆泥+3%蔗糖+0.65%琼脂+0.15%活性炭，一次性成苗每个茎段成苗数2.55株，每株根数2.14条.此结果与江建铭[10]的“金线莲一步成苗中每个外植体增殖4.8株、每株根数2.5条”结果差异较大，可能由培养基成分构成及外植体接种方式不同引起.金线莲一次性成苗培养采用平放接种茎段的方式诱导有效芽.3.3 金线莲移栽苗和移栽基质的选择瓶苗的质量对移栽成活率的影响很大，移栽时要选择株高适中(6～7 cm)、茎粗壮、具2条以上根系的瓶苗进行移栽.若苗过小，根系发育不好，移栽后缓苗时间长，适应力差，抵抗病虫害能力差，容易死亡；苗过大，移栽后地上部分蒸腾作用大，遇高温天气时容易萎蔫.此结果与黄慧莲等[12]的研究结果相近.移栽时应选择株高5 cm以上、茎径0.18 cm以上、具2～4条根系、生长状况良好的苗，才能保证有高的成活率.金线莲属浅根性植物，根系不发达，生长在土壤表层，要求土质疏松、透气、有机质含量高等，且金线莲瓶苗生长在无菌、营养丰富的环境下，适宜外界环境的能力较差，移栽时基质的选择很关键.胥学峰[13]认为，单一基质(蛭石或木屑)较适宜金线莲移栽苗的生长，移栽成活率高达95%；吴坤林[14]认为，细沙、珍珠岩和泥炭按一定比例混合用于金线莲种植，成活率可达90%.不同移栽基质对金线莲成活率及生长的影响不同，这与基质构成、种植品种的不同有关.本试验结果表明，泥炭与碎松树皮按1∶1的体积比混合最适宜金线莲生长，成活率达92%，生长良好.泥炭保水能力好，但透气性差，易板结；而碎松树皮呈细块状，吸水性差，孔隙度大，二者结合互相取长补短，防止基质板结，保水透气性好.【相关文献】[1] 陈裕,林坤瑞.金线莲生长发育与光照强度关系[J].福建热作科技,1996,2(4):22-23.[2] 蔡文燕,肖华山,范秀珍.金线莲研究进展[J].亚热带植物科学,2003,32(3):68-72.[3] 江苏新医学院.中药大辞典[M].上海:上海科学技术出版社,1985:2008.[4] 马志杰, 胡宏友. 民间药材金线莲研究动态(综述)[J]. 亚热带植物科学, 2002, 31(S): 27-31.[5] 陶抵辉.植物多倍体的研究与应用[J].生物技术通报,2010(7):22-27.[6] 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不同培养基组分对金线莲组培苗壮苗生根的影响
一14一熟带农址科技2014，37(1)T】I opi c4l A j t i c“f tⅨ14￡$ci t．ce&T t ch．ot o，y@不同培养基组分对金线莲组培苗壮苗生根的影响邵果园1，邬玉芬2(1．浙江农林大学农业与食品科学学院，浙江临安311300；2．宁海县林特技术推广总站，浙江宁海315600)摘要：以金线莲组培苗为试验材料，筛选壮苗生根最适培养基，试验结果表明：合适的壮苗培养基为1／2M S+N A A l．0m g／L+B A0．2m g／L+G A。
0．5r ag／L；合适的生根培养基为1／2M S+1g／L+N A A l．0m g／L+ B A0．2m g／L+G A30．5r ag／L+活性碳1．0g／L。
关键词：金线莲；组织培养；壮苗生根中图分类号：S682．31文献标识码：A文章编号：1672—450X(2014)01—0014-02111e Eff ect of D i f f er ent C om ponent s0n St r engt heni ng and R oot i ng of A noect ocl n'l us r oxbt w s l n'i i n V i t ro SH A0G uo．yua nl．W U Y u．f e n921．School of A gr i cuhur e a nd Fo od Sci ence．Zhej i ang A gr i cul t ur e＆For es t r y U ni ver s i t y,Li n’an311300,C hi n a；2．N i nghai For est r y a nd Speci al t y T e chnol ogy-S pr ea d H ead off i ce，N i nghai315600，C hi naA bs t r act：Exper i m ent of A no ect o chi l us r oxbur ghi i i n vi t ro i ndi cat ed t ha t t he opt i m um m edi um f or s eed l i ng s t r engt heni ng i s I／2M S+N A A l．O m g／L+B A0．2m g／L+G A30．5m g／L w hi l e m edi um of1／2M S+l g／L+N A A l．0m g／L+B A O．2m g／L+ G A30．5m g／L+1．09／L of act i vat ed car b on f or r oo t i ng．K e y w or ds：A noect ochi l us r o xburghf f；t i s s u e cul t ur e；s eedl i ng s t r engt heni ng金线莲(A noect ochi l us r oxburghf i)，别名金线兰、金丝草等，兰科开唇兰属多年生草本植物n1。
不同培养基组分对金线莲组培苗生长及生根的影响
通讯，２０１４（５）：１２４—１２５．
［３］任家永，王克春．南京市六合区阳台农业产业发展分析［Ｊ】．中国园艺 文摘，２０１３，２９（７）：５７—５８． 【４】吴树静．城市家庭绿色小菜园【Ｊ】现代园艺，２０１５（１６）：５４． 【５］李德翠，高文端，徐刚．以木薯渣为主的番茄育苗基质配方研究［Ｊ】．西
响研究。结果表明：增殖阶段，采用大量元素加倍，最有利于金线莲增殖苗的生长，增殖苗生长快，芽粗，而且比较整齐，叶片舒展、叶色深 绿；在生根时，最佳的香蕉粉用量为１００９，Ｌ，高生长快，根较粗，叶色深。 关键词金线莲；组织培养；生长；生根 中图分类号￥５６７．２３＇９ 文献标识码Ａ 文章编号１００７—５７３９（２０１５）２４—００８９—０２
２００９（２）：１７—１９．
得出安定区辣椒最佳施氮量为（Ｎ）３８９．１３ ｋｇ／ｌｌｍｚ，施磷 量（Ｐ２０５）７０２．３３ ｋｇ／ｈｍ２，施钾量（Ｋ２０）１４７．２５ ｋｇ／ｈｍ２，此时辣 椒产量预报值为５５ 比例为１：１．８：０．３８。 ４参考文献
４７９．５７
【５］朱占录，李继明．安定区玉米配方施肥试验研究叫．甘肃农业科技，
现代农业科技２０１５年第２４期 壮苗时，可以通过培养基成分调整与外源添加物使用，较好 地实现组培苗的增壮。 ４参考文献
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金线莲组培
金线莲组培摘要目的建立金线莲快繁体系。
方法以茎段为外植体，开展了茎段不同部位、培养基、激素、有机物和活性炭对不定芽增殖、幼苗生长的影响研究，并进行了移栽试验。
结果外植体以不含顶芽和长根的中间段茎节为好；不定芽增殖最佳培养基配方为MS（或B5）+BA3.0 mg/L +NAA0.5～1.0 mg/L，两个月增殖倍数达5.0以上；壮苗最适培养基为1/2MS＋NAA3.0 mg/L＋6-BA 0.5 mg/L＋香蕉提取物20%（或椰子汁20%）；试管苗移栽适宜的基质为菜园土1份＋2～3 mm粗砂2份（或1份）＋木屑1份（或2份），3个月成活率均达100%，且生长良好。
结论采用上述方法，能实现金线莲幼苗的快速繁殖。
【关键词】金线莲；快速繁殖；增殖；生长；移栽金线莲Anoectochilus roxburghii（wall.）lindl为兰科开唇兰属多年生草本，别名金蚕、金线兰、金线虎头蕉等，是我国传统珍贵药材，素有“金草”“神药”“乌人参”等美称，在民间应用范围较广，广泛应用于风湿性关节炎、高血压病、糖尿病、肾病等疑难杂症的治疗和强身健体、病后体虚恢复等方面，在浙江、福建、台湾等省和东南亚地区被视为珍稀名贵药材，特别在台湾省更是备受青睐，被称为“药中之王”［1，2］。
金线莲种子微小，由未成熟的胚及数层种皮细胞构成，自然萌发率和繁殖率低，目前市场上货源主要来自于野生采挖，产品一直处于供不应求的状况。
近年来，随着对其药效学和临床应用研究的深入，对金线莲药用价值的认识进一步提高，其市场货源紧缺的状况更为严峻，野生资源也不断遭到破坏性采挖，以致于处于濒临灭绝之地。
本研究旨在采用组织培养技术，解决金线莲种苗来源，加快人工栽培，以保护金线莲野生资源、稳定市场供应。
现将有关实验结果如下。
1 材料与方法1.1 材料无菌繁殖体系的建立为浙江金线莲野生种源，其它实验为继代培养的不定芽及无根幼苗茎段。
1.2 无菌繁殖体系的建立取生长健壮、无病虫害的植株，去叶后放入低浓度的洗衣粉水中漂洗3～5 min，然后用流水冲洗30 min。
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矿产资源开发利用方案编写内容要求及审查大纲
矿产资源开发利用方案编写内容要求及《矿产资源开发利用方案》审查大纲一、概述
㈠矿区位置、隶属关系和企业性质。
如为改扩建矿山, 应说明矿山现状、
特点及存在的主要问题。
㈡编制依据
(1简述项目前期工作进展情况及与有关方面对项目的意向性协议情况。
(2 列出开发利用方案编制所依据的主要基础性资料的名称。
如经储量管理部门认定的矿区地质勘探报告、选矿试验报告、加工利用试验报告、工程地质初评资料、矿区水文资料和供水资料等。
对改、扩建矿山应有生产实际资料, 如矿山总平面现状图、矿床开拓系统图、采场现状图和主要采选设备清单等。
二、矿产品需求现状和预测
㈠该矿产在国内需求情况和市场供应情况
1、矿产品现状及加工利用趋向。
2、国内近、远期的需求量及主要销向预测。
㈡产品价格分析
1、国内矿产品价格现状。
2、矿产品价格稳定性及变化趋势。
三、矿产资源概况
㈠矿区总体概况
1、矿区总体规划情况。
2、矿区矿产资源概况。
3、该设计与矿区总体开发的关系。
㈡该设计项目的资源概况
1、矿床地质及构造特征。
2、矿床开采技术条件及水文地质条件。