药用植物罗勒同源多倍体诱变的初步研究
中药罗勒的研究进展

中药罗勒的研究进展杨志杰;李秀丽【摘要】The chemical constituents of Ocimum basilicum L is complicated and various , including large amounts of volatile oils , fla-vonoids and glycosides, and small amounts of coumarin, phenylpropanoids, and fatty acids.Research showed basil extract has anti-thrombosis, anti-lipids, anti-glucose and anti-hypertension, and anti-inflammatory and bactericidal effects .It can also reduce oxidant activity, protect endothelial cells and inhibit tumor metastasis .Therefore, the effective constituents of basil have development and appli-cation prospects.%罗勒的化学成分复杂,类型多样,以挥发油、黄酮及其苷类、香豆素类为主,此外,还含有苯丙素类、脂肪酸类等。
研究发现,罗勒提取物具有抗血栓形成,降血脂,降血糖,降血压,抗炎杀菌作用,抗氧化活性,保护内皮细胞以及抗肿瘤转移等作用,因此,研究罗勒的有效成分,对罗勒的开发和应用具有很好的现实意义。
【期刊名称】《世界中医药》【年(卷),期】2013(000)008【总页数】3页(P976-978)【关键词】罗勒;化学成分;药理作用【作者】杨志杰;李秀丽【作者单位】山东力明科技职业学院,济南,250036;山东中医药大学,济南,250355【正文语种】中文罗勒(Ocimum basilicum L)为唇形科一年生植物,又称毛罗勒、九层塔、丁香、香草等,在东半球热带地区,印度、澳大利亚较温暖的区域分布较广,我国的云南、四川、广东、广西、福建、新疆等省区也有分布。
芳香植物——罗勒

芳香植物——罗勒
张吉通
【期刊名称】《农友致富月刊》
【年(卷),期】2003(000)010
【总页数】2页(P11-12)
【作者】张吉通
【作者单位】陕西省眉县城关段家庄庄南花圃722300
【正文语种】中文
【中图分类】S573.9
【相关文献】
1.芳香植物罗勒生物学特性及栽培技术 [J], 鞠玉栋;吴维坚;杨敏;李珊珊
2.茶园间作芳香植物罗勒和紫苏对茶园生态系统影响的研究 [J], 张正群;田月月;高树文;许永玉;黄晓琴;张丽霞
3.芳香植物罗勒的研究进展 [J], 官玲亮;吴丽芬;庞玉新;胡雄飞;于福来;张影波;陈振夏;谢小丽
4.芳香植物罗勒栽培技术 [J], 于克垚;翟玉莹;祁雨威;李东博
5.散养产蛋母鸡偏好芳香植物罗勒 [J], 吕玲(编译)
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试验七植物多倍体的诱变

应用
多倍体在植物中应用较为广泛,自然界中也有 多倍体植物存在,如107个禾木科种中,72%为 多倍体,在茄种中也常见。普通小麦为六倍体, 双倍体棉种,四倍体鸭梨,三倍体西瓜等。所 以,植物多倍体的诱变在农业生产中有非常广 泛的应用价值。
非整倍体及结构畸变在农业育种、医学、环境 保护及基础理论研究方面也有重要价值。如人 类的许多染色体遗传病基本为非整倍体和结构 异常。
这些可以诱发染色体畸变的因素称为诱变剂当然也有生物因素如病毒质粒转因子引起dna结构变异从而使染色体结构发生改变
目的与要求
1、了解染色体畸变的机制及染色体在细 胞周期中的行为。
2、掌握植物多倍体的诱变方法及压片技 术。
3、观察并计算细胞的染色体的数目。
实验原理
染色体崎变包括数目异常和结构异常。数目异常有整 倍性与非整倍性之分。生物细胞内遗传物质-DNA与RNA 和细蛋白、非常蛋白组成显微水平可观察到的核内染 色质(细胞分裂间期)或细胞分裂期的染色体。染色 体会因一般理化因素发生畸变。物理因素如射线的辐 射,机械作用等,化学因素如烷化剂等致癌物质,它 们能与碱基结合的化学物质。此外一些能与组成纺锤 丝的微管蛋白结合的物质如一些生物碱。这些可以诱 发染色体畸变的因素称为诱变剂(当然也有生物因素, 如病毒、质粒、转因子引起DNA结构变异,从而使染色 体结构发生1. 材料培养与多倍体诱变: 水培大蒜 ,长出不定根(25度,约3-5日) 转入0.1%秋水仙素水溶液中,继续培养约2天 切下不定根(约0.5-0.8cm)放入卡诺氏固定液中
(3:1甲醇:冰醋酸)固定一天 转入70%乙醇中长期保存。
实验步骤
染色体制备:
切下不定根
洗涤
解离约2-3分钟
不同植物同源多倍体的诱发与鉴定实验设计

不同植物同源多倍体的诱发与鉴定实验设计引言:植物的多倍化是指由于染色体加倍而产生的具有多个完整染色体组的个体。
不同植物的同源多倍体(autopolyploid)可以通过各种实验诱发和鉴定,本文将就多种诱发和鉴定方法进行阐述。
一、诱发同源多倍体的方法1. 化学诱导:可以通过化学物质诱导多倍化,如染色体稳定化剂Colchicine、Oryzalin等。
将适宜的浓度的诱导剂溶液喷洒到植株的叶片上,使其通过气孔进入植物体内,引发多倍化。
2. 温度诱导:某些植物的花粉直接暴露在高温中,能够诱发染色体变异,进而产生同源多倍体。
诱导温度通常为35-36℃,持续时间为数小时。
3. 辐射诱导:辐射可以直接或间接地引发染色体变异,造成多倍化。
常用的辐射源包括 X 射线、γ 射线、紫外线等。
4. 细胞学处理:通过细胞培养技术,可以利用化学物质、温度或辐射等对植物细胞进行处理,再通过诱导分化和植株再生获得多倍化植株。
二、鉴定同源多倍体的方法1. 核型分析:利用生物学核型技术,可以观察染色体数目和结构是否有变化。
常用的核型分析方法有染色体计数法和比较基因组杂交法。
2. 组织学观察:通过石蜡切片技术,观察植物组织的细胞形态和染色体数目。
不同倍化水平的同源多倍体在细胞外观和染色体数目上会有明显差异。
3. 分子标记分析:利用分子标记技术,如RAPD、SSR等,可以对同源多倍体的基因组进行分析,寻找遗传多样性和差异。
4. 表型观察:观察同源多倍体在形态、生理和生殖方面的变化,通过与野生型或同源单倍体进行比较,寻找差异。
结论:通过化学诱导、温度诱导、辐射诱导和细胞学处理等方法可以实现同源多倍体的诱发,而通过核型分析、组织学观察、分子标记分析和表型观察等方法可以对诱发的同源多倍体进行鉴定。
这些方法的综合应用可以帮助我们更好地理解同源多倍体的形成机制和遗传特征,为植物进化和育种工作提供理论和实践上的指导。
参考文献:1. 黄凤林, 柯华军, 林一明. 植物同源多倍体的诱导及鉴定[J].热带农业科学, 2007, 27(3): 202-207.2. 吴访苏, 韦佳伟, 郭少婵, 等. 植物染色体工程方法优化及染色体在植物生产中的应用[J]. 生物技术通讯, 2020, 31(6): 716-721.3. Li H, Li W, Hu G, et al. Advances on Induction and Identification of Autotetraploid Plants[J]. Molecular Plant Breeding, 2021, 19(4): 1929-1937.4. Jiang J, Gill B S. Different Species-Specific Chromosome Translocations in Triticum timopheevii and Triticum turgidumSupport the D-RNA Model for Nonhomologous Chromosome Synapsis[J]. Genetics, 1994, 15(1): 215-227.。
罗勒大型变种——千层塔植株再生体系的建立

罗勒大型变种——千层塔植株再生体系的建立陈娜;周庆;陶兴魁【摘要】探索罗勒组培快速繁殖技术,筛选植株再生体系的最佳培养条件,建立罗勒的高效植株再生体系.方法以罗勒种子为研究对象,采用不同的培养基开展丛生芽的诱导、继代增殖和生根培养.结果采用酒精和升汞对罗勒种子进行消毒,可获得无菌的试管苗.种子萌发的适宜培养基为MS培养基,试管苗增殖的适宜培养基为MS+6-BA(0.5 mg/L)+NAA(0.05 mg/L).在此过程中,试管苗极易玻璃化,应严格控制激素浓度,增大培养基的硬度.生根的最佳培养基为1/2MS+6-BA(0.5mg/L)+NAA(0.05 mg/L)+IBA(0.05mg/L).结论建立了罗勒的植株再生体系,筛选出罗勒种子消毒、萌发、试管苗增殖和生根的最佳培养基.【期刊名称】《铜仁学院学报》【年(卷),期】2017(019)006【总页数】4页(P15-18)【关键词】罗勒;组织培养;培养基;萌发;增殖;再生体系【作者】陈娜;周庆;陶兴魁【作者单位】亳州职业技术学院,安徽亳州 236800;安徽中医药大学,安徽合肥236800;宿州学院,安徽宿州 234000【正文语种】中文【中图分类】S511罗勒(Ocimum basilicum L.)为唇形科罗勒属一年生草本植物,全株具有独特的香味[1]。
罗勒味辛、性温,以其全草和种子入药。
《中药大辞典》谓其有疏风解表、化湿和中、强心安神、行气活血、解毒消肿、散瘀止痛等功效,主治感冒头痛、咳嗽发热、中暑、食积不化、月经不调、跌打损伤等。
近年来,用于治疗血栓、肿瘤、白内障及不孕症方面,效果显著[2]。
目前,国内外学者开展了关于罗勒精油提取方法和药理学[3-4]、临床应用等方面的研究。
本课题组成员刘超祥[5]的研究表明:罗勒的干燥叶片中含有的大量酚类和黄酮类化合物,具有良好的抗氧化作用。
在食品加工领域中,中国只有潮州和汕头地区当作香料使用,而在欧美国家中的应用较多,如制成罗勒酱,软饮料,米酒等[6]。
烟草与罗勒科间远缘杂交育种的研究

烟草与罗勒科间远缘杂交育种的研究杨进文;魏治中【摘要】利用烟草与药用植物罗勒进行科间远缘杂交,以期培育出含医药成分的新型烟草,以缓解吸烟与健康的矛盾.采用无性与有性杂交相结合的方法,克服其杂交不孕问题.经酶谱测定,杂种稳定品系含有亲本药用植物的遗传物质;镜检(F1~F18)细胞染色体呈杂合状态;经医药成分鉴定均含有药用植物亲本中相应的医药成分,并产生了新的医药成分;烟叶评吸具有药物香气.化学成分测定结果表明,罗勒烟具有低糖,中、高烟碱含量的特点.经卷烟企业验证其可用性,具有较高的应用价值.【期刊名称】《山西农业大学学报(自然科学版)》【年(卷),期】2014(034)001【总页数】7页(P10-16)【关键词】新型烟草;科间杂交;医药成分【作者】杨进文;魏治中【作者单位】山西农业大学农学院,山西太谷030801;山西农业大学农学院,山西太谷030801【正文语种】中文【中图分类】S572科间远缘杂交是引进外源基因、创造变异、拓宽烟草品质及抗性育种遗传基础的有效手段之一,也是形成新物种的重要途径。
因此,利用药用植物与烟草进行科间远缘杂交,培育含医药成分的新型烟草,以期达到通过吸烟对某些疾病起到一定的缓解作用,育种实践证明培育这样的新型烟草是可行的。
我国远在殷商时期已利用“燃、熏、吸”中草药的方法治疗某些疾病,并沿用至今,效果良好。
这说明我国很多中草药具有安全无毒,可以随烟气吸入人体起到某些治疗作用。
我国药物型卷烟研讨会(1986年8月24日)纪要中指出:“经临床试验,观察,药物型卷烟对某些疾病具有一定的缓解作用,因而受到患有某些疾病,但又难以戒除吸烟习惯的消费者的欢迎”。
可以肯定,培育含多种医药成分的新型烟草,与目前药物型卷烟相比,可以节省大量中草药,降低卷烟成本费用,其发展前景是广阔的。
新型烟草问世,不仅为烟草育种开辟了新途径,对生物遗传理论的研究也具有重要意义。
1 材料与方法1.1 试验材料罗勒(唇形科,N=24,Comun bailicuml)含植物醇、柠檬烯、罗勒烯、β-丁香烯等医药成分,具有止咳、平喘、抑癌、解毒、消炎、止痛等功效;普通烟草(茄科N=24,Nicotiana tobacum L);红花烟:烤、晒兼用品种,抗逆力强,早熟,产质较好;78-05:早熟品种,有一定香气,落黄快,抗逆力强。
芳香植物罗勒的研究进展
罗勒 ( ( ) c mu m b a s i l i c M m L . ) 为 唇形 科 罗勒 属一 年 生 草 本植 物 ,又 名 毛 罗 勒 、九 层 塔 、香 兰 、紫
官玲 亮② 吴 丽 芬 庞 玉 新 胡 雄 飞 于 福 来 张 影 波 陈振 夏 谢小 丽
( 中 国热 带农 业科 学 院热 带作物 品种 资 源研 究所/
农 业部 热 带作物 种质 资 源利 用重 点开放 实验 室 海 南儋 州 5 7 1 7 3 7 )
摘 要 罗 勒 是 一 种 药 食 同 源 的 植 物 ,具 有 疏 风 解 表 、 化湿和 中、 强心安 神 、 行气活 血 、 解 毒 消肿 、 散 瘀 止 痛 等
GUAN L i n g l i a n g WU L i f e n P ANG Y u x i n HU Xi o n g f e i YU F u l a i ZHANG Y i n g b o CHE N Z h e n x i a XI E X i a o l i
b i o— a c c u mu l a t i o n o f v o l a t i l e o i l ,p h a r ma c o l o g i c a l a c t i o n a n d me c h a ni s m ,c l i n i c a l a p p l i c a t i o n ,c y t o t o x i c i t y , S O a s t o p r o v i d e t h e r e f e r e n c e b a s i s or f t h e ur f th e r d e v e l o p me n t a n d u t i l i z a t i o n o f Oc i mu m b a s i l i c u m L.
药用植物多倍体的诱导及生物学意义
药用植物多倍体的诱导及生物学意义
何韩军,杨跃生,吴鸿(华南农业大学药用植物研究中心,广东广州510642)
药用植物多倍体由于染色体加倍,细胞核内核酸物质的增加导致细胞核变大,随之而来的是细胞变大和组织器官的增大,直观表现为茎、叶等器官的巨大性。
器官的增大不仅能提高以相应部位入药的药材的产量,而且植株的巨型性能降低采收和加工上的难度,较好地满足了药材生产的要求。
生物活性成分变化:药用植物在诱导加倍后,往往能提高体内所含药用活性成分的量,一些药用植物甚至会在加倍后产生新的更具药用价值的活性成分。
基因重复:众所周知,染色体加倍会导致整个植物核基因翻倍,从而使基因重复。
这一情况有可能导致多倍体基因翻译时的阅读框阅读的密码子与对应二倍体不一致,从而造成表达蛋白的量不一致,甚至表达出新的蛋白,进一步造成了多倍体和二倍体在代谢层面上的差异。
物理学方式诱导多倍体:发生的方式包括温度激变、机械创伤、电离辐射、非电离辐射、高速离心力、高压等。
不过,通过物理方式诱导多倍体发生的效率一直很低,目前这种方式已经基本上不采用。
药用植物人工诱导多倍体育种的研究进展
Z OU hm- ta (ol eo i cec,H nn Nr a n esy Xni g H nn430 ) H C t ee l C lg f f Si e ea om l i ri , i a , e 507 e Le n Uv t xn a
Ab ta t P lpodbe dn Je e t ebedn p rah. dcn l oy li lnsh v mp r n c n mi dme iia ausb cu eo li sr c oy li re igi a1 f ci re i a poc Me iia lpodpa t a ei ot te oo cma d cn lvle e a s ffer s v g p a l gg ni og sa d hg il Th rn il dmehd fat ca n u e n hpod i  ̄ e t e r r e iwe . n a ee rh p gesso ia t rm ̄ n ih yed. epicpe a to so ri ilid cme tmu ili nlc n a swee rve d A d fersac r rse f c n i f e y l o
m dc a p 1 li p n ya t ca id c m n d svrl e rbe sta s o l e p i at t n t w r u ai d e ii l o q o l t b r f i u e e t e y po l t h ud b a t ni e smm r e . n ) d as p i l n i n a e a k m h d e o o e z
倍后可带来 营养器官 的变化。杨敬东 等研 究表 明 , 四倍 体苦 荞麦 与二倍 体苦荞麦 植株在形态上 有 明显 差异 , 表现 为四倍
罗勒的研究与开发应用
食用, 在烹调意大利式菜中使用较多, 也可做凉拌
菜 、 炸或 做汤。 罗 勒芳 香 油 中的 主 要 成分 之 一 油 对 烯丙 基苯 甲醚 对 消化 系 统 有 着极 大 的益 处 , 可
罗勒的研究与开发应用
以刺激胆汁的流动, 促进食欲, 减轻由于消化功能 不 好带 来 的肠 胃痉 挛 引起 的病痛 。
开茎顶 , 花朵分 层 轮 生形 成 6 0层 的轮伞 花 序, 层 ~1 每 有苞 片 2枚 , 6朵 。 花萼 筒 状 , 存 , 冠 唇 形 , 花 宿 花 白 色、 淡紫 色或 紫色 , 蕊 4 , 头一 枚, 雄 枚 柱 每花 形成 小坚 果 4 , 坚 果 黑 褐 色 , 圆形 。 种 子 千 粒 重 1 2 枚 小 椭 .5g ( ) 克 左右 , 当年落 地 即可萌 发, 有 种一 年多 年生 长不 断 的现 象 , 芽性 可保 持 8年。 发 12 传统 医学 中的应用 . 罗 勒辛温 , 汗解表 、 风 除湿 , 淤止 痛… , 发 怯 散 1 常用 于 治疗 风寒 感 冒、 头痛 、 胃腹胀 满 、 化不 良、 消 胃痛 肠炎 腹泻等 症。 鲜 叶和根 捣碎 外敷 可 作毒蛇 咬伤和 蝎蛰 的 解毒剂。罗勒茎叶芳香, 神农本草经) 据< 及其 它医书 干燥 茎叶 做成 荷包 , 强身 健 体, 可 预防感 冒。 罗勒 种皮 富含有 粘 性多 糖 , 民间用 罗勒 种子 泡 水得 到 的胶 状物 一 川
1 育 苗
1 1 浸种 催芽 . 先用 5 O℃ ~6 O℃ 温水 浸 泡 1 i( 钟 )搅 拌 至水 温 0mn 分 , 3 O℃ 时, 再浸 泡 4 ( 时) 将水渗 出用布包 好, 小 h , 放在 2 5℃ ~ 3 的适 温条 件下 进行 催 芽, O℃ 一般 2 ( 时) 出整齐 即可 4h 小 芽
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Hans Journal of Agricultural Sciences 农业科学, 2014, 4, 11-14/10.12677/hjas.2014.41003Published Online February 2014 (/journal/hjas.html) Preliminary Study on Autotetraploid Mutagenesis ofMedicinal Plant Ocimum basilicumXiaoying Guo1, Na Yang2, Yuxiang Wu2*, Xiaoming Zhao21Department of Hydraulic Engineering, Tianjin Agricultural University, Tianjin2College of Agriculture, Shanxi Agricultural University, TaiguEmail: *wuyuxiang89@Received: Nov. 28th, 2013; revised: Dec. 17th, 2013; accepted: Jan. 2nd, 2014Copyright © 2013 Xiaoying Guo et al. This is an open access article distributed under the Creative Commons Attribution License, which permits unrestricted use, distribution, and reproduction in any medium, provided the original work is properly cited. In accordance of the Creative Commons Attribution License all Copyrights © 2014 are reserved for Hans and the owner of the intellectual property Xiaoying Guo et al. All Copyright © 2014 are guarded by law and by Hans as a guardian.Abstract:The seedling apical bud of Ocimum basilicum was painted with colchicine semi-solid in this research. We focused on the best duration time of colchicine and agar on autotetraploid mutagenesis of this medical plant. The result showed that 0.2% colchicine conducted on O. basilicum for 72 h with the highest mutation rate at 32%. Compared to the controls, the mutants had much shorter internodes, more stocky plants, bigger and thicker cotyledons which stayed longer than controls, inhibited growth, delayed euphylla, asym- metrical crimpled and darker green leaves, different leaf division and curled, spoon-like leaves. According to the statistical analysis, there are highly significant differences between the control and the induced plant in the following aspects: lower height, shorter first internode distance, thicker stem, smaller leaf index, higher chlorophyll content, thicker leaf, less stomata number of epidermis under the first true leaf per unit area, more chloroplasts per stoma and smaller length-width ratio of stoma. It was tested that the mutation was successful for this medical plant. It needs further research for cytogenetic identification and character stability.Keywords: Ocimum Basilicum; Polyploid Breeding; Colchicine药用植物罗勒同源多倍体诱变的初步研究郭小英1,杨娜2,吴玉香2*,赵晓明21天津农学院水利工程系,天津2山西农业大学农学院,太谷Email: *wuyuxiang89@收稿日期:2013年11月28日;修回日期:2013年12月17日;录用日期:2014年1月2日摘要:采用秋水仙碱琼脂凝胶涂抹法,处理罗勒(Ocimum basilicum)幼苗茎尖生长点,研究罗勒同源四倍体种质创新的最佳诱变时间。
实验证明,0.2%的秋水仙碱诱变72 h,诱变率最高,为32%。
和对照株形态比较得知,诱变株矮壮,节间缩短;子叶大且肥厚,脱落时间延迟;生长发育受抑制;真叶出现晚,叶形不对称,叶面凹凸不平,出现卷曲叶、勺状叶等变异;叶色浓绿。
统计学分析表明,诱变株较对照株,株高显著降低,第一节间距显著缩短,茎杆显著增粗,叶形指数显著减小,叶绿素含量显著升高,叶片厚度显著增加,第一真叶下表皮单位面积气孔数显著减少,每气孔叶绿体数显著增多,气孔长宽比显著减小。
从诱变株与对照株的初步形态变异表明,罗勒的多倍体诱变是成功的, 诱变株的细胞学鉴定和性状稳定还有待于进一步的研究。
*通讯作者。
关键词:罗勒;同源多倍体育种;秋水仙碱1. 引言罗勒(Herb of Sweet Basil)[1],又名兰香,翳子草,千层塔,家佩兰,苏薄荷,野金砂,省头草。
一年生直立草本,全体芳香,分布广泛。
是我国传统中药之一。
罗勒子:甘辛,凉平。
归肺、脾、胃、大肠经。
疏风解表,化湿和中,行气活血,解毒消肿。
药用植物是我国中医药事业的原材料,其质量的优劣直接影响中药系列产品的质量和疗效。
药用植物大多以根、茎和叶等器官为收获对象,其染色体加倍后,根、茎、叶巨型化,较好地满足了药材生产的要求;且倍性变化往往能导致次生代谢产物的含量变化,有可能获得有效成分含量高的药用植物新品种。
怀牛膝同源四倍体中蜕皮激素较原植物高出达10倍之多[2];白术同源四倍体过氧化物酶含量高于二倍体植株[3]。
但染色体倍性的增加与化学成分含量的变化并不成正比关系,且有的可能会较原植物产生新的性状和新的化学成分[4]。
在漫长的进化过程中,多倍体由于基因的剂量效应,也即细胞核内染色体组的增加,使多倍体植物对不良环境的抵抗能力也比二倍体强[5]。
多倍体植株一般较矮、茎杆粗壮,故能较好地抗倒伏,有的还具有抗旱、抗病等其他特性。
这对扩大种植区域,提高产量及野生品种驯化极为有利。
多倍体药用植物的巨型性,抗逆性强,药用成分含量高等特性,正是药材优质、高产育种所期望达到的目标。
目前生态环境遭到严重破坏,药用植物栽培品种品质退化,野生药用植物资源逐渐减少,以致枯竭,加强药用植物多倍体培育,可以缓解这些矛盾,甚至从根本上解决问题。
因此,多倍体诱导技术应用于药用植物具有深远的意义。
2. 材料和方法2.1. 试验材料罗勒(Ocimum basilicum)属于唇形科(Labiatae)罗勒属(Ocimum Linn.)[6]。
种子来源:山西天然药用植物研究所。
2.2. 试验方法1) 制作阳畦;配制营养土:腐熟的厩肥与无菌壤土(1:2);装营养钵;配制试剂:0.08%的营养液(去离子水20 ml,尿素6 mg,磷酸10 mg);制备凝胶:0.2%秋水仙碱+ 1%琼脂凝胶;播种:凉水浸种24 h,每营养钵播种2粒种子,覆土1 cm。
2) 诱变处理:营养钵中的罗勒出土后,待其子叶展开顶端分生组织刚刚开始萌动时,挑取一滴加热溶解的秋水仙碱琼脂凝胶(约35℃)滴于顶芽上,充分包裹顶芽和子叶柄基部,并用罩杯罩住处理后的幼苗。
分别处理24 h、48 h、72 h,即滴一次、二次、三次,并设置对照。
处理结束后取掉罩杯,待秋水仙碱琼脂凝胶充分干燥后,用尖镊子轻轻撕掉顶芽和子叶柄基部的秋水仙碱琼脂凝胶残余物,以此来精确控制诱变时间。
在幼苗恢复生长1至2周后,喷洒营养液和清水,促进生长,然后移栽到大田。
3) 观察苗期处理植株和对照植株的生长状况,依据生长受阻、叶色浓绿、叶片皱缩、植株畸形等指标对得到的诱变株进行筛选和鉴定。
分别取7株不同处理时间下明显变化的罗勒植株与对照株,记录其株高、第一真叶叶型指数、第一节间距、茎杆粗。
4) 叶片厚度测量:摘取诱变组与对照组第一真叶各5片,装进保鲜袋带回实验室。
用刀片各切下一段叶片,将其立在载玻片上,用Olympus BX51显微镜观察记录其叶片厚度。
5) 气孔及叶绿体观察:用镊子轻轻撕下叶片下表皮,在干净的载玻片上展平,滴加一滴1%I-KI染液,盖上盖玻片,静置5 min;待充分染色后,将其置于显微镜下观测单位面积气孔数、气孔长与宽以及保卫细胞中叶绿体数。
观测结果各取5组数据,并以此为基础利用Excel软件进行显著性测验[7]。
3. 结果与分析植物多倍体的鉴定方法很多,以植株外形观察为基础,气孔形态观察、叶绿体计数为辅助可以初步进行鉴别。
与二倍体比较,诱变株矮壮,节间缩短;子叶大且肥厚,脱落时间延迟;生长发育受抑制;真叶出现晚,叶形不对称,叶面凹凸不平,出现卷曲叶、勺状叶等变异;叶色浓绿。
对0.2%秋水仙碱琼脂糖凝胶不同处理时间下罗勒的诱变效果进行分析(见表1),得出最佳处理时间为Table 1. Inducing effect of colchicine on O. basilicum in different treatment time表1.不同时间下秋水仙碱处理罗勒的诱变率比较诱变时间处理株数存活株数诱变成功数存活率诱变率72 h 50 32 16 64.00% 32.00%48 h 46 28 7 60.87% 15.22%24 h 26 13 7 50.00% 26.92% 0 h(对照) 11 11 - 100.00% -72 h,其诱变率可达32.00%;处理时间24 h效果次之,诱变率达26.92%;处理48h诱变率最低,为15.22%。