大鼠食管肌条对电刺激的反应及机制研究重点

— ７０２ —
中华消化内镜杂志 ２０１６ 年 １０ 月第 ３３ 卷第 １０ 期 Ｃｈｉｎ Ｊ Ｄｉｇ Ｅｎｄｏｓｃ，Ｏｃｔｏｂｅｒ ２０１６，Ｖｏｌ． ３３，Ｎｏ．１０
· 基础研究 ·
大鼠食管肌条对电刺激的反应及机制研究
周国建 赵威 张莉莉 晋弘 王邦茂
【 摘要】 目的 探讨大鼠食管体部离体肌条收缩张力值与电刺激参数的相关关系，及其收缩机 ５������ ０、８������ ０ Ｖ） ，频率（５、１０、２０ Ｈｚ） ，脉宽 ２５ ｍｓ，刺激时间为 ３ ｓ 的单相方波进行电刺激，观察分析电刺激 参数与肌条张力的相关关系；选取雄性健康 ＷＩＳＴＡＲ 大鼠 ５０ 只， 随机分为对照组、 阿托品组、 酚妥拉 明组、ＮＯ 合酶阻滞剂组（ Ｌ⁃ＮＮＡ） 、河豚毒素组各 １０ 例，各组取离体食管肌条，首先给予能引起肌条有 效收缩的电刺激（ 单相方波，５������ ０ Ｖ，２０ Ｈｚ，脉宽 ２５ ｍｓ） 并记录肌条张力，然后各组分别给予阿托品、酚 妥拉明、Ｌ⁃ＮＮＡ、河豚毒素干预 １０ ｍｉｎ 后再次进行相同参数电刺激并记录肌条张力，与对照组比较，以 明确神经递质是否能影响电刺激对食管肌条的作用。 结果 在频率 ２０ Ｈｚ， 脉宽 ２５ ｍｓ 的单相方波 ３ 组任意两组间差异均有统计学意义 （ Ｐ ＜ ０������ ０５） ， 电压与峰值之间呈显著正相关 （ Ｒ ＞ ０������ １， Ｐ ＜ ０������ ０５） 。 在电压 ５������ ０ Ｖ，脉宽 ２５ ｍｓ 的单相方波下，１０ Ｈｚ 组收缩峰值大于 ５ Ｈｚ 组、小于 ２０ Ｈｚ 组，３ 组间及任意 两组间差异均有统计学意义（ Ｐ ＜０������ ０５） ，频率与峰值之间呈显著正相关（ Ｒ ＞０������ １，Ｐ ＜０������ ０５） ；阿托品组干 预前后电刺激食管肌条收缩峰值有统计学差异（ Ｐ ＜０������ ０５） ，酚妥拉明、Ｌ⁃ＮＮＡ、河豚毒素处理组及对照 组干预前后差异无统计学意义（ Ｐ ＞０������ ０５） 。 结论 电刺激大鼠食管离体肌条可引起有效收缩且在一 定范围内收缩强度与电压、频率成正相关。 电刺激收缩机制不依赖于胆碱能神经、肾上腺素能等神经 的调节，不受神经递质的影响。 【 关键词】 失弛缓症； 机制； 神经递质； 电刺激； 食管肌条 基金项目：国家自然科学基金（８１３７０４９２） 下，１������ ５ Ｖ组肌条张力收缩峰值为 ０ ｇ。 ５������ ０ Ｖ 组收缩峰值大于 ３������ ０ Ｖ 组、 小于 ８������ ０ Ｖ 组，４ 组间及后
制。 方法 选取雄性健康 ＷＩＳＴＡＲ 大鼠 ２０ 只并取离体食管肌条， 以刺激模式分别为电压 （ １������ ５、３������ ０、
Ｔｈｅ ｅｆｆｅｃｔｓ ａｎｄ ｍｅｃｈａｎｉｓｍ ｏｆ ｅｌｅｃｔｒｉｃａｌ ｓｔｉｍｕｌａｔｉｏｎ ｏｎ ｅｓｏｐｈａｇｅａｌ ｍｕｓｃｌｅ ｉｎ ｒａｔ： ａｎ ｅｘｐｅｒｉｍｅｎｔａｌ Ｇｅｎｅｒａｌ Ｈｏｓｐｉｔａｌ ｏｆ Ｔｉａｎｊｉｎ Ｍｅｄｉｃａｌ Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ， Ｔｉａｎｊｉｎ ３０００５２， Ｃｈｉｎａ Ｃｏｒｒｅｓｐｏｎｄｉｎｇ ａｕｔｈｏｒ： Ｗａｎｇ Ｂａｎｇｍａｏ， Ｅｍａｉｌ： ｇｉ．ｔｍｕｈ＠ ｓｏｈｕ．ｃｏｍ
ｓｔｕｄｙ Ｚｈｏｕ Ｇｕｏｊｉａｎ， Ｚｈａｏ Ｗｅｉ， Ｚｈａｎｇ Ｌｉｌｉ， Ｊｉｎ Ｈｏｎｇ， Ｗａｎｇ Ｂａｎｇｍａｏ． Ｄｅｐａｒｔｍｅｎｔ ｏｆ Ｇａｓｔｒｏｅｎｔｅｒｏｌｏｇｙ，
【 Ａｂｓｔｒａｃｔ】 Ｏｂｊｅｃｔｉｖｅ Ｔｏ ｅｘｐｌｏｒｅ ｔｈｅ ｃｏｒｒｅｌａｔｉｏｎ ｂｅｔｗｅｅｎ ｓｍｏｏｔｈ ｍｕｓｃｌｅ ｃｏｎｔｒａｃｔｉｏｎ ａｎｄ ｓｔｉｍｕｌａｔｉｏｎ ｐａｒａｍｅｔｅｒｓ， ａｎｄ ｍｅｃｈａｎｉｓｍ ｏｆ ｅｌｅｃｔｒｉｃａｌ ｓｔｉｍｕｌａｔｉｏｎ ｏｎ ｔｈｅ ｅｓｏｐｈａｇｅａｌ ｂｏｄｙ ｍｕｓｃｌｅ ｓｔｒｉｐｓ ｉｎ ｎｏｒｍａｌ ｒａｔｓ． Ｍｅｔｈｏｄｓ Ａ ｓｅｇｍｅｎｔ ｏｆ ｌｏｗｅｒ ｐａｒｔ ｅｓｏｐｈａｇｕｓ ｏｆ ２０ ｈｅａｌｔｈｙ ｍａｌｅ ＷＩＳＴＡＲ ｒａｔｓ ｗａｓ ｏｂｔａｉｎｅｄ． Ｓｉｎｇｌｅ ｐｈａｓｅ ｓｑｕａｒｅ ｗａｖｅ（ ｗｉｄｔｈ ２５ ｍｓ） ｗａｓ ｕｓｅｄ ａｎｄ ｔｈｅ ｅｌｅｃｔｒｉｃａｌ ｓｔｉｍｕｌａｔｉｏｎ ｌａｓｔｅｄ ｆｏｒ ３ ｓ ｗｉｔｈ ｖａｒｉｅｄ ｅｌｅｃｔｒｉｃａｌ ｐａｒａｍｅ⁃ ａｎｄ ｓｔｉｍｕｌａｔｉｏｎ ｐａｒａｍｅｔｅｒｓ ｗａｓ ｓｔｕｄｉｅｄ．Ｆｉｆｔｙ ｈｅａｌｔｈｙ ｍａｌｅ ｒａｔｓ ｗｅｒｅ ｄｉｖｉｄｅｄ ｒａｎｄｏｍｌｙ ｉｎｔｏ ｃｏｎｔｒｏｌ ｇｒｏｕｐ（ ｎ ＝ ｔｅｒ（ ｃｕｒｒｅｎｔ：１������ ５ Ｖ， ３������ ０ Ｖ，５������ ０ Ｖ， ８������ ０ Ｖ； ｆｒｅｑｕｅｎｃｙ：５ Ｈｚ，１０ Ｈｚ， ２０ Ｈｚ） ． Ｔｈｅ ｃｏｒｒｅｌａｔｉｏｎ ｂｅｔｗｅｅｎ ｔｅｎｓｉｏｎ １０） ， ＡＴＲ ｇｒｏｕｐ（ ｎ ＝ １０） ， ＰＨＴ ｇｒｏｕｐ（ ｎ ＝ １０） ， Ｌ⁃ＮＮＡ ｇｒｏｕｐ（ ｎ ＝ １０） ， ＴＴＸ ｇｒｏｕｐ（ ｎ ＝ １０） ． Ｒｅｓｐｅｃｔｉｖｅ
万方数据
中华消化内镜杂志 ２０１６ 年 １０ 月第 ３３ 卷第 １０ 期 Ｃｈｉｎ Ｊ Ｄｉｇ Ｅｎｄｏｓｃ，Ｏｃｔｏｂｅｒ ２０１６，Ｖｏｌ． ３３，Ｎｏ．１０
— ７０３ —
１０ Ｈｚ ｇｒｏｕｐ ｗａｓ ｍｏｒｅ ｔｈａｎ ５ Ｈｚ ｇｒｏｕｐ ａｎｄ ｌｅｓｓ ｔｈａｎ ２０ Ｈｚ ｇｒｏｕｐ （ Ｐ ＜ ０������ ０５ ） ． Ｔｈｅｒｅ ｗａｓ ｓｉｇｎｉｆｉｃａｎｔ ｄｉｆｆｅｒｅｎｃｅ ａｍｏｎｇ ｔｈｅ ３ ｇｒｏｕｐｓ ａｎｄ ａｎｙ ２ ｇｒｏｕｐｓ． Ｔｈｅｒｅ ｗａｓ ａ ｐｏｓｉｔｉｖｅ ｃｏｒｒｅｌａｔｉｏｎ ｂｅｔｗｅｅｎ ｔｈｅ ｐｅａｋ ｖａｌｕｅ ｏｆ ｓｔｉｍｕｌａｔｉｏｎ １０ ｍｉｎ ｂｅｆｏｒｅ（ Ｐ ＞０������ ０５） ． Ｃｏｎｃｌｕｓｉｏｎ Ｔｈｅ ｅｌｅｃｔｒｉｃａｌ ｓｔｉｍｕｌａｔｉｏｎ ｏｆ ｅｓｏｐｈａｇｅａｌ ｍｕｓｃｌｅ ｉｎ ｎｏｒｍａｌ ｖｏｌｇａｇｅ ａｎｄ ｆｒｅｑｕｅｎｃｙ ｏｆ ｅｌｅｃｔｒｉｃａｌ ｓｔｉｍｕｌａｔｉｏｎ． Ｔｈｅ ｅｆｆｅｃｔ ｏｆ ｅｌｅｃｔｒｉｃａｌ ｓｔｉｍｕｌａｔｉｏｎ ｏｎ ｅｓｏｐｈａｇｅａｌ ｍｕｓｃｌｅ ｉｓ ｎｏｔ ｉｎｆｌｕｅｎｃｅｄ ｂｙ ｎｕｒｏｎｔｒａｎｓｍｅｔｅｒｓ． ｍｕｓｃｌｅ 【 Ｋｅｙ ｗｏｒｄｓ 】 Ａｃｈａｌａｓｉａ； Ｍｅｃｈａｎｉｓｍ； Ｎｅｕｒｏｔｒａｎｓｍｉｔｔｅｒ； Ｅｌｅｃｔｒｉｃａｌ ｓｔｉｍｕｌｕｓ； Ｅｓｏｐｈａｇｅａｌ Ｆｕｎｄ ｐｒｏｇｒａｍ：Ｎａｔｉｏｎａｌ Ｎａｔｕｒａｌ Ｓｃｉｅｎｃｅ Ｆｏｕｎｄａｔｉｏｎ ｏｆ Ｃｈｉｎａ（８１３７０４９２） ｃｏｎｔｒａｃｔｉｏｎ ａｎｄ ｓｔｉｍｕｌａｔｉｏｎ ｆｒｅｑｕｅｎｃｙ（ Ｒ ＞０������ １， Ｐ ＜０������ ０５） ．Ｔｈｅ ｐｅａｋ ｖａｌｕｅ ｏｆ ｃｏｎｔｒａｃｔｉｏｎ ｗａｓ ｎｏｔ ｄｉｆｆｅｒｅｎｔ ａｆｔｅｒ ｉｎｔｅｒｖｅｎｔｉｏｎ ｗｉｔｈ ｐｈｅｎｔｏｌａｍｉｎｅ， Ｌ⁃ＮＮＡ， ＴＴＸ， ｗｈｉｌｅ ｔｈａｔ ｏｆ ａｔｒｏｐｉｎｅ ｇｒｏｕｐ（ Ｐ ＜０������ ０５） ｗａｓ， ｃｏｍｐａｒｅｄ ｗｉｔｈ ｒａｔｓ ｃｏｕｌｄ ｃａｕｓｅ ｅｆｆｅｃｔｉｖｅ ｃｏｎｔｒａｃｔｉｏｎ ｉｍｍｅｄｉａｔｅｌｙ． Ｔｈｅ ｐｅａｋ ｖａｌｕｅ ｏｆ ｃｏｎｔｒａｃｔｉｏｎ ｉｓ ｃｏｒｒｅｌａｔｅｄ ｐｏｓｉｔｉｖｅｌｙ ｗｉｔｈ
ＤＯＩ：１０．３７６０ ／ ｃｍａ．ｊ．ｉｓｓｎ．１００７⁃５２３２．２０１６．１０．０１２ 通信作者：王邦茂，Ｅｍａｉｌ：ｇｉ．ｔｍｕｈ＠ ｓｏｈｕ．ｃｏｍ 作者单位：３０００５２ 天津，天津医科大学总医院消化内科
（ ５������ ０ Ｖ；２０ Ｈｚ；ｗｉｄｔｈ ２５ ｍｓ） ， ｔｈｅ ｔｅｎｓｉｏｎ ｗａｓ ｒｅｃｏｒｄｅｄ ａｎｄ ｃｏｍｐａｒｅｄ ａｍｏｎｇ ｇｒｏｕｐｓ． Ｒｅｓｕｌｔｓ Ａｔ ｆｒｅｑｕｅｎｃｙ
［பைடு நூலகம்］
ＣＷ⁃３Ｇ 型恒温平滑肌槽（ 北京众实迪创科技发展有 限责任公司 ） 、 手术器械及电极等。 试剂有 １０％ 水 合氯醛， 台 氏 液 （ 北 京 中 杉 金 桥 生 物 技 术 有 限 公 司） ， 神经受体阻滞剂阿托品、 酚妥拉明、 一氧化氮 合酶抑制剂 （ Ｌ⁃ＮＮＡ） 、 河豚毒素 （ 北京中杉金桥生 物技术有限公司） 。 三、实验方法 １． 离体食管体部肌条制备： 选取清洁级雄性健
为主要特征的食管动力源性疾病， 病因迄今不明，
要目的 Ｈｅｌｌｅｒ 手术不能恢复食管蠕动， 治疗有效率 为 ６０％，而 基 于 同 样 目 的 的 经 口 内 镜 下 肌 切 开 术 （ＰＯＥＭ） 也不能增加食管蠕动
［２⁃３］
。 但研究表明有多年历史的以降低 ＬＥＳＰ 为主
随时间延长呈递减趋势， 在术后 ６ ～ １０ 年有效率降 增强贲门失弛缓症患者食管体部蠕动的疗法。 同 样，食管运动功能障碍在胃食管反流病 （ ＧＥＲＤ） 的 发病中也起着重要的作用， 现有针对 ＧＥＲＤ 的治疗 也不能有效改善食管清除功能， 改善 ＧＥＲＤ 患者的 食管体部运动功能也有重要意义
ｄｒｕｇｓ ｗｅｒｅ ｇｉｖｅｎ １０ ｍｉｎｕｔｅｓ ｂｅｆｏｒｅ ｌｏｗｅｒ ｐａｒｔ ｏｆ ｅｓｏｐｈａｇｕｓ ｗａｓ ｓｔｉｍｕｌａｔｅｄ ｗｉｔｈ ｓｉｎｇｌｅ ｐｈａｓｅ ｓｑｕａｒｅ ｗａｖｅ ２０ Ｈｚ ａｎｄ ｗｉｄｔｈ ２５ ｍｓ， ｔｈｅ ｐｅａｋ ｖａｌｕｅ ｏｆ ｃｏｎｔｒａｃｔｉｏｎ ｉｎ １������ ５ Ｖ ｇｒｏｕｐ ｗａｓ ０ ｇ． Ｔｈｅ ｐｅａｋ ｖａｌｕｅ ｏｆ ｃｏｎｔｒａｃｔｉｏｎ ｉｎ ５������ ０ Ｖ ｇｒｏｕｐ ｗａｓ ｍｏｒｅ ｔｈａｎ ３������ ０ Ｖ ｇｒｏｕｐ ａｎｄ ｌｅｓｓ ｔｈａｎ ８������ ０ Ｖ ｇｒｏｕｐ （ Ｐ ＜ ０������ ０５） ． Ｔｈｅｒｅ ｗａｓ ｓｉｇｎｉｆｉｃａｎｔ ｄｉｆｆｅｒｅｎｃｅ ａｍｏｎｇ ｔｈｅ ４ ｇｒｏｕｐｓ ａｎｄ ａｎｙ ２ ｇｒｏｕｐｓ ｏｆ ｔｈｅ ｌａｔｔｅｒ ３ ｇｒｏｕｐｓ． Ｔｈｅｒｅ ｗａｓ ｐｏｓｉｔｉｖｅ ｃｏｒｒｅｌａｔｉｏｎ ｂｅｔｗｅｅｎ ｖｏｌｔａｇｅ ａｎｄ ｐｅａｋ ｖａｌｕｅ（ Ｒ ＞０������ １，Ｐ ＜０������ ０５） ．Ａｔ ｃｕｒｒｅｎｔ ５������ ０ Ｖ ａｎｄ ｗｉｄｔｈ ２５ ｍｓ，ｔｈｅ ｐｅａｋ ｖａｌｕｅ ｏｆ ｃｏｎｔｒａｃｔｉｏｎ ｉｎ