蔬菜中有机磷和氨基甲酸酯类农药残留量快速检测—酶抑制率法(分光光度法)资料
矿产
矿产资源开发利用方案编写内容要求及审查大纲
矿产资源开发利用方案编写内容要求及《矿产资源开发利用方案》审查大纲一、概述
㈠矿区位置、隶属关系和企业性质。
如为改扩建矿山, 应说明矿山现状、
特点及存在的主要问题。
㈡编制依据
(1简述项目前期工作进展情况及与有关方面对项目的意向性协议情况。
(2 列出开发利用方案编制所依据的主要基础性资料的名称。
如经储量管理部门认定的矿区地质勘探报告、选矿试验报告、加工利用试验报告、工程地质初评资料、矿区水文资料和供水资料等。
对改、扩建矿山应有生产实际资料, 如矿山总平面现状图、矿床开拓系统图、采场现状图和主要采选设备清单等。
二、矿产品需求现状和预测
㈠该矿产在国内需求情况和市场供应情况
1、矿产品现状及加工利用趋向。
2、国内近、远期的需求量及主要销向预测。
㈡产品价格分析
1、国内矿产品价格现状。
2、矿产品价格稳定性及变化趋势。
三、矿产资源概况
㈠矿区总体概况
1、矿区总体规划情况。
2、矿区矿产资源概况。
3、该设计与矿区总体开发的关系。
㈡该设计项目的资源概况
1、矿床地质及构造特征。
2、矿床开采技术条件及水文地质条件。
331蔬菜中有机磷和氨基甲酸酯类农药残留量的快速检测
水解性
因有机磷农药属酯 类，故在一定条件 下能水解,在碱性介 质、高温、水分含 量高等环境中，更 易水解。 如敌百虫在碱性溶 液中易水解为毒性 较大的敌敌畏。
四、性质
溶解性
氧化性
由于各种有机磷农 药的极性强弱不同 ，故对水及各种有 机溶剂的溶解性能 也不一样， 但多数有机磷农难 溶于水，可溶于脂 肪及各种有机溶剂 。
剂。摇匀后于35 ℃放置10 min以上。 于“检测”状态下选择“农药残留”项目，按“确认”键，选择样品
种类中的“蔬菜”项，按“确认”键。 将放置10min的样液倒入比色皿中，加入0.1 mL低物摇匀，吹吸混匀 马上放入仪器中，按“检测”键，进行空白检测，记录反应3 min，
过程中请勿打开盖子。 样品测试结束后仪器显示值为样品的农药残留抑制率。
速测卡法（ 纸片法） 原理
胆碱酯酶可催化靛酚乙 酸酯（ 红色）水解为乙酸 与靛酚（ 蓝色），有机磷 或氨基甲酸酯类农药对胆碱 酯酶有抑制作用， 使催化 、水解、变色的过程发生改 变， 由此可判断出样品中 是否有高剂量有机磷或氨基 甲酸酯类农药的存在。
酶抑制率法（ 分光光度法） 原理
在一定条件下， 有机磷和氨基甲酸酯 类农药对胆碱酯酶正常功能有抑制作用，
上海农林职业技术学院
实验：蔬菜农药残留快速检测技术-仪器法
1、样品处理
选取有代表性的蔬菜样品，擦去表面泥土，去掉不可食
部分后称取蔬菜试样，剪成1 cm左右碎片。取样品2g，放入
烧杯或提取瓶中，加入10mL缓冲液，超声波振荡3 min，静
置3~5 min，待用。
样品不可用水冲洗，取不同植株叶片的叶尖部样品。
有机磷农药中，硫 代磷酸酯农药在溴 作用下或在紫外线 照射下， 分子中S易被O取代 ，生成毒性较大的 磷酸酯。
蔬菜农药残留快速检测技术
蔬菜农药残留快速检测基础知识一、蔬菜农药残留酶抑制法检测原理农残速测仪检测原理是酶抑制法，在必然条件下，有机磷和氨基甲酸酯类农药能抑制乙酰胆碱酯酶的活性，其抑制率与农药的浓度呈正相关。
在正常情况下，酶催化代谢产物水解，其水解产物与显色剂反映，产生黄色物质，用分光光度计在410纳米处测定吸光度随时间的转变值，计算出抑制率，通过抑制率的大小可以判断样品中是不是有高剂量的有机磷或氨基甲酸酯类农药的存在。
二、农药残留速测法检测对象一、有机磷类农药包括：甲胺磷、水胺硫磷、乐果、敌百虫、敌敌畏、氧化乐果、马拉硫磷、甲基异柳磷、辛硫磷、甲基对硫磷、甲拌磷、乙酰甲胺磷、久效磷、杀螟硫磷、倍硫磷、毒死蜱等。
二、氨基甲酸酯类农药包括：叶蝉散、速灭威、西维因、涕灭威、克百威（呋喃丹）、异丙威、灭多威等。
三、农药残留速测法依据的标准中华人民共和国国家标准GB/—2003蔬菜中有机磷和氨基甲酸酯类农药残留量的快速检测2003-08-11发布2004-01-01实施中华人民共和国卫生部中国国家标准化管理委员会发布四、检测方式一、准备阶段试剂或条件发生转变及时间距离比较长时，应重做。
①开机预热15分钟。
②仪器调0。
③仪器调100。
④制作对照。
第①、②、③步在天天利用前必需做，在改换新一瓶试剂时也必需做。
二、对照①在干净的试管顶用移液管加入提取液。
②用移液器提取的酶，加入到试管中。
③用移液器提取的显色剂，加入到试管中。
④适度晃动试管，使液体混合均匀，25℃左右的温度放置15分钟。
⑤15分钟后，用移液器提取的底物，加入到试管中，晃动试管，使液体混合均匀，马上倒入比色皿中，放入仪器1通道，按启动键开始检测。
⑥时间到后显示对照结果，一般对照值应在30以上，按Y保留，对照结束。
3、样品检测液①用天平称取表面干净蔬菜或水果1g剪成1cm左右的方块，放入小烧杯中。
②用移液器提取5ml的提取液用振荡器震荡2分钟。
③将烧杯中的液体用移液器提取的上清液到试管中，为检测液。
酶抑制率法快速检测蔬菜中有机磷及氨基甲酸酯类农药的残留量
·50·试 验 研 究农业开发与装备 2013年第4期于人类健康。
因此，该“液肥”系列产品对环境、土壤和人类健康的影响，是无法用增产增收效果来衡量的。
3.3 操作简单、容易掌握该“液肥”系列产品应用操作简单，使用方便、针对性强，见效快，通过四年来的推广应用，深受广大农民群众欢迎，成为在发展绿色生态农业中起着不可忽视的作用。
3.4 增强植株抗性，达到健身栽培效果明显该“液肥”系列产品应用后，作物生长健壮，减轻了自然灾害，减少农药和化肥用量，保证农产品的无公害、绿色、安全生产，促进了干旱地区的农业生产向着高产、高效、优质、绿色农产品方向发展的转变，促进了社会健康和文明发展，实现了农业的可持续发展。
摘要：介绍了采用酶抑制率法快速测定有机磷及氨基甲酸酯类农药残留量的技术，酶抑制率法即分光光度法，是根据在一定条件下，有机磷及氨基甲酸酯类农药对乙酰胆碱酯酶的正常功能有抑制作用，其抑制率与农药的浓度呈正相关，进而通过抑制率来判断蔬菜中是否含有有机磷及氨基甲酸酯类农药的存在。
因其快速、简便、经济等特点，应用范围涵盖较广，保证有问题的蔬菜及时的排除。
关键词：酶抑制率法；快速检测；蔬菜；有机磷及氨基甲酸酯类；农药残留量；乙酰胆碱酯酶；分光光度法食品安全是民生工程，关系国计民生的头等大事。
农产品安全是食品安全工作中的重中之重，也是未来社会的发展趋势。
农产品质量安全是人民群众生存的基本要求，因此，农产品质量安全有保障，人民群众的身体健康和生命安全才有保障。
目前，各级政府和各级农业行政主管部门对蔬菜生产与流通环节中的监管措施和频次在不断强化。
这就需要我们开发出用时少、成本低，易操作的快速检测方法应用于蔬菜生产基地、蔬菜批发市场等地。
而传统的检测技术使用大型仪器设备，由于其检测时间长、成本高、对检测人员专业性要求高等不利因素而无法马上对有问题的农产品进行应急处理。
1 实验原理酶抑制率法是在一定条件下，有机磷和氨基甲酸酯类农药能抑制昆虫中枢和周围神经系统中乙酰胆碱酶的活性，造成神经传导介质乙酰胆碱的积累，影响正常传导，使昆虫中毒致死，根据这一昆虫毒理学原理，用在对农药残留的快速检测中。
蔬菜中有机磷和氨基甲酸酯类农药残留量快速检测—酶抑制率法(分光光度法)资料
➢ 样品溶液测试：先于试管中加入2.5mL样品提取液，其它操 作与对照溶液测试相同，记录反应3min的吸光度变化值ΔAt
透射光 It
原理
在一定条件下，有机磷和氨基甲酸酯类农药对胆碱 酯酶正常功能有抑制作用，其抑制率与农药的浓度 呈正比。正常情况下，酶催化神经传导代谢产物 （乙酰胆碱）水解，其水解产物与显色剂反应，产 生黄色物质，用分光光度计在412nm处测定吸光度 随时间的变化值，计算出抑制率，通过抑制率可以 判断出样品中是否有高剂量有机磷或氨基甲酸酯类 农药的存在。
酶抑制率法对部分农药的检出限
农药名称
敌敌畏 对硫磷 辛硫磷 甲胺磷 马拉硫磷
乐果
检出限 mg/kg
0.1 1
0.3
2
4 3
农药名称
氧化乐果 甲基异柳磷 灭多威 丁硫克百威 敌百虫 呋南丹
检出限 mg/kg
0.8 5
0.1Байду номын сангаас
0.05
0.2 0.05
说明
葱、蒜、萝卜、韭菜、芹菜、香菜、茭白、蘑菇及番茄汁液 中，含有对酶有影响的植物次生物质，容易产生假阳性。处 理这类样品时，可采取整株（体）蔬菜浸提。对一些含叶绿 素较高的蔬菜，也可采取整株（体）蔬菜浸提的方法，减少 色素的干扰。
当温度条件低于37° C，酶反应的速度随之放慢，加入酶液 和显色剂后放置反应的时间应相对延长，延长时间的确定， 应以胆碱酯酶空白对照测试3min的吸光度变化D A0值在0.3 以上，即可往下操作。注意样品放置时间应与空白对照溶液 放置时间一致才有可比性。胆碱酯酶空白对照溶液3min的吸 光度变化D A0值＜0.3 的原因：一是酶的活性不够，二是温 度太低。
现代农林技术与服务专业《3.3.4.1分光光度法检测蔬菜中有机磷、氨基甲酸酯类农药残留》
分光光度法检测蔬菜中有机磷、氨基甲酸酯类农药残留PP1:乡村振兴，农检相行,同学们好，今天我们来学习分光光度法检测蔬菜中有机磷、氨基甲酸酯类农药残留。
PP2:分光光度法可综合检测多种农副产品中的有机磷和氨基甲酸酯类农药残留，包括水果、蔬菜、茶叶、粮食等。
这堂课我们主要依据国标?蔬菜中有机磷和氨基甲酸酯类农药残留的快速检测?，具体学习蔬菜中农残的检测。
PP3:内容包括三个：一、检测方法；二、检测结果判定；三、操作要点。
PP4:在学习检测方法前，先了解一下需要的试剂和设备，试剂包括pH8.0缓冲溶液、显色剂、底物、乙酰胆碱酯酶，这些试剂可按标准制备，pH8.0缓冲溶液：分别取11.9g无水磷酸氢二钾与3.2g磷酸二氢钾，用1000mL蒸馏水溶解。
显色剂：分别取160mg 二硫代二硝基苯甲酸〔DTNB〕和15.6mg碳酸氢钠，用20mL缓冲溶液溶解，4℃冰箱中保存。
底物：取25.0mg硫代乙酰胆碱，加3.0mL蒸馏水溶解，摇匀后置4℃冰箱中保存备用，保存期不超过两周。
乙酰胆碱酯酶：根据酶的活性情况，用缓冲溶液溶解，3 min 的吸光度变化ΔA0值应控制在 0.3以上，摇匀后置4℃冰箱中保存备用，保存期不超四天。
当然，也可直接选用含有以上试剂的试剂盒，操作更简单。
PP5:实验要用到的仪器主要有三个：农药残留快速检测仪〔或食品平安检测仪〕、常量天平和恒温箱。
PP6:下面，给大家介绍一下具体操作步骤。
第一步：对照溶液测试，如下图，先取试剂瓶A中的缓冲溶液2.5ml参加到试管B中，再依次取试剂瓶C中的酶液0.lmL、试剂瓶D中显色剂0.1ml参加到试管B中，摇匀,放入37℃恒温箱，静置15分钟，再取试剂瓶E中底物0.lmL参加到试管B中，摇匀，此时检测溶液开始显色反响，立即放入农残快速检测仪的比色池中，记录反响 3 min 的吸光度变化值ΔA0。
PP7:第二步：样品溶液测试，如下图，先进行样品处理，选取有代表性的青菜样品，擦掉外表泥土，剪成1cm左右见方碎片，取样品1g，放入到试管B中，取试剂瓶A中缓冲溶液5mL参加到试管B中，振荡1~2min，倒出试管B中样品提取液，静置3~5min，再取试管B中倒出的提取液2.5mL参加到试管C中，再依次取试剂瓶D中的酶液0.lmL、试剂瓶E中显色剂0.1ml参加到试管C 中，摇匀,放入37℃恒温箱，静置15分钟，再取试剂瓶F中底物0.lmL参加到试管C中，摇匀，此时检测溶液开始显色反响，立即放入农残快速检测仪的比色池中，记录反响3 min的吸光度变化值ΔAt。
植物酶抑制技术用于检测蔬菜中有机磷及氨基甲酸酯类农药残留
植物酶抑制技术用于检测蔬菜中有机磷及氨基甲酸酯类农药残留随着现代农业的发展，农药在农作物的种植和保护中发挥着非常重要的作用。
农药残留问题也备受关注。
蔬菜作为人们日常饮食中不可或缺的一部分，其安全性更是备受关注。
有机磷及氨基甲酸酯类农药作为常用的农药之一，在蔬菜的生产过程中广泛使用，其残留量是否符合国家安全标准成为了备受关注的问题。
为了能够准确快速地进行蔬菜中有机磷及氨基甲酸酯类农药残留的检测，研究人员提出利用植物酶抑制技术进行检测的方法。
下面将详细介绍植物酶抑制技术在检测蔬菜中有机磷及氨基甲酸酯类农药残留中的应用。
一、植物酶抑制技术的基本原理植物酶抑制技术是一种利用植物酶特异性反应来进行检测的方法。
在植物细胞中存在着多种酶，这些酶对不同的底物具有特异的反应活性。
有机磷及氨基甲酸酯类农药可以抑制某些植物酶的活性，因此可以利用这些受到抑制的植物酶来进行农药残留的检测。
基于植物酶抑制技术的检测方法具有快速、简单、灵敏等优点，因此在农药残留的检测中得到了广泛的应用。
1. 样品的处理在进行有机磷及氨基甲酸酯类农药残留的检测之前，需要对蔬菜样品进行处理。
首先是提取样品中的目标化合物，通常采用的方法是将样品经过适当的分散和提取过程，将目标化合物从样品中提取出来，以保证后续的检测过程可以得到准确的结果。
2. 检测方法的建立植物酶抑制技术在检测蔬菜中有机磷及氨基甲酸酯类农药残留时，需要建立相应的检测方法。
这包括选择适当的植物酶作为检测底物、确定反应条件和标准曲线等。
通过不断的试验和优化，建立一套适合于蔬菜中农药残留的检测方法是非常重要的。
1. 快速性基于植物酶抑制技术的检测方法具有很高的快速性，可以在短时间内完成对蔬菜样品的检测。
这对于农产品质量监测中的紧急情况有很大的帮助。
2. 灵敏性植物酶抑制技术可以对目标化合物进行高灵敏度的检测。
这对于蔬菜中微量有机磷及氨基甲酸酯类农药残留的检测非常有帮助。
3. 简便性相比于传统的检测方法，基于植物酶抑制技术的检测方法更为简便，不需要复杂的仪器和操作步骤。
试验十蔬菜中有机磷和氨基甲酸酯类农药残留量的快速检测
实验十三、蔬菜中有机磷和氨基甲酸酯类农药残留量的快速检测(GB/T 5009.199-2003 蔬菜中有机磷和氨基甲酸酯类农药残留量的快速检测 )方法一快速卡法一、目的要求：学习快速卡法测定有机磷农残快速检验法及熟悉检验结果评定。
二、实验原理：胆碱脂酶可催化靛酚乙酸脂(红色)水解为乙酸与靛酚(蓝色) ，有机磷或氨基甲酸脂类农药对胆碱脂酶有抑制作用，使催化、水解、变色的过程发生改变，由此可判断出样品中是否有高剂量有机磷或氨基甲酸脂类农药的存在。
三、实验试剂：1、固化有胆碱脂酶和靛酚乙酸脂试纸卡片；2、pH 7.5磷酸盐缓冲液：分别称取15.0g磷酸氢二钠［Na2HPO4?12HO］与1.59g无水磷酸二氢钾［KH2PQ］，用500 mL蒸馏水溶解。
四、实验步骤：1 、整体测定法(1)选取具有代表性的蔬菜样品，擦去表面泥土，剪成1cm左右方形碎片，取5g防入带盖瓶中，加入10 mL 缓冲溶液，振摇50 次，静置2min 以上.(2)取一片快速卡，用白色药片沾取提取液，放置10min以上进行预反应，有条件时在37 C 恒温装置中放置10min。
预反应后的药片表面必须保持湿润。
(3)将快速卡对折，用手捏3min或用恒温装置恒温3min，使红色药片与白色药片叠合发生反应。
注意：每批测定应设一个缓冲液的空白对照。
2、表面测定法(粗筛法)( 1 )擦去蔬菜表面泥土，滴2~3 滴缓冲液在蔬菜表面，用另一片蔬菜在滴液处轻轻摩擦。
(2)取一速片测卡，将蔬菜上的液滴滴在白色药片上。
(3)放置10 min以上进行预反应，有条件时在37 C恒温装置中放置10 min。
预反应10 min , 预反应后的药片表面必须保持湿润。
(4)将快速卡对折，用手捏3min或用恒温装置恒温3min，使红色药片与白色药片叠合发生反应。
注意：每批测定应设一个缓冲液的空白对照。
五、检测结果判断：1结果判断结果以酶被有机磷或氨基甲酸脂类农药抑制（为阳性）、未抑制（阴性）表示。
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➢不同浓度的同一物质，它的最大吸收波长是不变的，但吸光 度随浓度增大而增大。
➢在最大吸收波长处测量吸光度，其灵敏度最高。
有色溶液对某一波长光吸收的强度与有色物质的浓度c及吸 光溶液的液层厚度b成正比，称为光吸收定律或朗伯－比尔 定律，其数学表达式为
A=ε厚度，单位为cm； 100 c为浓度，单位为mol.L-1；
➢ 对照溶液测试： 先于试管中加入2.5mL缓冲溶液，再加入 0.lmL酶液、0.1mL显色剂，摇匀后于37℃放置15min以上 （每批样品的控制时间应一致）。加入0.lmL底物摇匀，此 时检液开始显色反应，应立即放入仪器比色池中，记录反应 3 min的吸光度变化值ΔA0
➢ 样品溶液测试：先于试管中加入2.5mL样品提取液，其它操 作与对照溶液测试相同，记录反应3min的吸光度变化值ΔAt
原理
试剂 pH8.0缓冲溶液 分别取 11.9g无水磷酸氢二钾与３. ２g磷酸二氢钾，用1000mL 蒸馏水溶解。
显色剂 分别取160mg二 硫代二硝基苯甲酸（DTNB） 和15.6mg碳酸氢钠，用20mL 缓冲溶液溶解，4℃冰箱中 保存。
试剂
底物：取25.0mg硫代乙酰 胆碱，加3.0mL蒸馏水溶解， 摇匀后置4℃冰箱中保存备 用。
ε为摩尔吸光系数，单位为 L.mol-1.cm-1。
0.5
50
A T%
0
0
C
分光光电光比度色法法（紫外-可见分光光度法） Ultraviolet Visual
UV-VIS
Spectroscopy
光源 参比
样品
0.575
单色器 吸收池 检测器 显示
I0 A lg It lg T bC
I0
It 入射光 I0
透射光 It
原理
在一定条件下，有机磷和氨基甲酸酯类农药对胆碱 酯酶正常功能有抑制作用，其抑制率与农药的浓度 呈正比。正常情况下，酶催化神经传导代谢产物 （乙酰胆碱）水解，其水解产物与显色剂反应，产 生黄色物质，用分光光度计在412nm处测定吸光度 随时间的变化值，计算出抑制率，通过抑制率可以 判断出样品中是否有高剂量有机磷或氨基甲酸酯类 农药的存在。
有机磷和氨基甲酸酯类
农药残留量快速检测 —酶抑制率法(分光光度法)
分光光度法的原理简介 酶抑制率法(分光光度法)
➢吸光光度法: 基于物质对光的选择
性吸收而建立的分析方法, 包括目 测比色法和分光光度法。
➢不同物质由于结构不同,所吸收光 的波长及吸收程度不同,这就是物质 对光的选择性吸收
当一束强度为I0的平行单色光通过一均匀的吸收介质时， 由于吸光物质分子与光子的作用，一部分光子被吸收，
当温度条件低于37° C，酶反应的速度随之放慢，加入酶液 和显色剂后放置反应的时间应相对延长，延长时间的确定， 应以胆碱酯酶空白对照测试3min的吸光度变化D A0值在0.3 以上，即可往下操作。注意样品放置时间应与空白对照溶液 放置时间一致才有可比性。胆碱酯酶空白对照溶液3min的吸 光度变化D A0值＜0.3 的原因：一是酶的活性不够，二是温 度太低。
酶抑制率法对部分农药的检出限
农药名称
敌敌畏 对硫磷 辛硫磷 甲胺磷 马拉硫磷
乐果
检出限 mg/kg
0.1 1
0.3
2
4 3
农药名称
氧化乐果 甲基异柳磷 灭多威 丁硫克百威 敌百虫 呋南丹
检出限 mg/kg
0.8 5
0.1
0.05
0.2 0.05
说明
葱、蒜、萝卜、韭菜、芹菜、香菜、茭白、蘑菇及番茄汁液 中，含有对酶有影响的植物次生物质，容易产生假阳性。处 理这类样品时，可采取整株（体）蔬菜浸提。对一些含叶绿 素较高的蔬菜，也可采取整株（体）蔬菜浸提的方法，减少 色素的干扰。
结果计算
抑制率(%)=[(ΔA0-ΔAt)/ ΔA0]×100 式中：
ΔA0对照溶液反应3min吸光度的变化值； ΔAt样品溶液反应3min吸光度的变化值；
结果判定
结果以酶被抑制的程度（抑制率）表示。 当蔬菜样品提取液对酶的抑制率≥50%时,表
示蔬菜中有高剂量有机磷或氨基甲酸酯类农 药存在，样品为阳性结果。 阳性结果的样品需要重复检验2次以上。
一部分光子透过介质。设透过的光强度为It，则透光率T 定义为 T=It /I0，而－lgT称为吸光度A，即
Ａ＝－lgT=lgI0/It
入射光 I0
透射光 It
➢测量某物质对不同波长单色光的吸收程度，以波长（）为横 坐标，吸光度（A）为纵坐标，绘制吸光度随波长的变化可得 一曲线，此曲线即为吸收光谱。
乙酰胆碱酯酶 根据酶的 活性情况，用缓冲溶液溶 解，3min的吸光度变化ΔA0 值应控制在0.3以上。摇匀 后置4℃冰箱中保存备用。
分析步骤
➢ 样品处理：选取有代表性的蔬菜样品，冲洗掉表面泥土，剪 成1cm左右见方碎片，取样品1g，放入烧杯或提取瓶中，加 入5mL缓冲溶液，振荡1~2min，倒出提取液,静置3~5min,待 用。