T淋巴细胞的发生及演变
T淋巴细胞亚群水平在肿瘤演变中的变化特点
T淋巴细胞亚群水平在肿瘤演变中的变化特点胡海涛【期刊名称】《中国实验诊断学》【年(卷),期】2017(021)010【总页数】2页(P1768-1769)【作者】胡海涛【作者单位】沧州中西医结合医院实验诊断科,河北沧州061001【正文语种】中文恶性肿瘤的发生、发展及其转归与机体免疫功能状态有着密切关系，尤其是T淋巴细胞主导的细胞免疫，与机体细胞免疫的监视和杀伤功能有关。
所以研究T淋巴细胞亚群在肿瘤早期时的表达水平，了解肿瘤侵袭机体时免疫功能的变化特点，为肿瘤预防、诊断、治疗提供更多的参考依据。
1.1 一般资料选择2012年9月到2014年12月我院肿瘤科收治的恶性肿瘤患者301例，其中男189例，女112例，平均年龄51.2±8.0岁，设为恶性肿瘤组；良性肿瘤121例，其中男70例，女51例，平均年龄48.5±11.2岁，设为良性肿瘤组；选择门诊健康体检者207例，其中男107例，女100例，平均年龄51.0±10.1岁，设为健康对照组。
其中恶性肿瘤包括：肺癌67例、乳腺癌56例、直肠癌42例、肝癌41例、胃癌32例、甲状腺癌29例、卵巢癌21例、前列腺癌13例。
所有肿瘤患者资料均为初诊，且均由病理确诊。
1.2 检测方法所有患者采集静脉血2 ml，EDTA-K2抗凝，采用单克隆抗体直接免疫荧光染色法，应用PROFILEI型自动流式细胞仪，FITC标记的单克隆抗体CD3、CD4、CD8。
试剂均为厂家配套试剂。
操作严格按照操作规程进行。
1.3 统计方法使用SPSS 17.0统计软件对实验数据进行统计分析，计量资料以均数±标准差表示，两组之间比较采用T检验，多组间比较采用F检验，检验水准为0.05。
2.1 T淋巴细胞亚群水平在良、恶性肿瘤患者中的变化301例恶性肿瘤患者CD3+、CD4+、CD4+/CD8+比值等指标均较健康人明显下降，CD8+水平明显增高，两组比较，差异具有统计学意义(P<0.05)；121例良性肿瘤患者T细胞亚群水平与健康对照组比较，亦存在差异，并差异具有统计学意义(P<0.05)；但良、恶性肿瘤患者之间无明显差异(P>0.05)。
甲型H1N1流感早期T淋巴细胞亚群变化及临床意义
甲型H1N1流感早期T淋巴细胞亚群变化及临床意义李爱新;张宏伟;郭彩萍【期刊名称】《临床荟萃》【年(卷),期】2012(027)010【总页数】2页(P876-877)【关键词】流感病毒A型,H1N1亚型;T淋巴细胞亚群;流感,人【作者】李爱新;张宏伟;郭彩萍【作者单位】首都医科大学附属北京佑安医院感染科,北京100069;首都医科大学附属北京佑安医院感染科,北京100069;首都医科大学附属北京佑安医院感染科,北京100069【正文语种】中文【中图分类】R511.7甲型H1N1流感是一种具有高度传染性的急性呼吸道疾病。
研究表明,甲型H1N1流感具有传播速度快、重症和危重患者病死率高的特点。
T淋巴细胞是体内重要的免疫细胞,CD3+T细胞代表成熟淋巴细胞,是细胞免疫中主要的活性细胞;CD4+T淋巴细胞主要参与调节体液免疫和细胞免疫,属于辅助性T细胞;而CD8+T淋巴细胞主要由细胞毒性T淋巴细胞组成,是细胞毒效应细胞。
有资料显示,在抗流感病毒感染的过程中,这些T淋巴细胞发挥着重要作用[1-2]。
本研究重点观察了在普通型、重症和危重病例3组甲型H1N1流感患者中,CD3+, CD4+和CD8+T淋巴细胞数量的变化,探讨免疫损伤在甲型H1N1流感进展中的作用。
1.1 病例选择 2009年10月31日至2010年1月19日北京佑安医院住院患者39例,诊断符合中华人民共和国卫生部办公厅关于印发《甲型H1N1流感诊疗方案(2009年第三版)》标准,并且根据方案[3]分为普通型即轻度患者7例,男3例,女4例,年龄22～45岁,平均(32.0±8.0)岁,其中2例女性为孕妇;重度患者12例,男9例,女3例,年龄27～71岁,平均(53.0±11.0)岁,其中2例患有呼吸系统疾病(分别是慢性支气管炎和重度支气管扩张),1例患有膜性肾病;危重患者20例,男13例,女7例,年龄5～74 岁,平均(37.0±17.0)岁,其中4例患有高血压或心脏病,2例患有2型糖尿病(其中1例合并慢性肾功能衰竭)。
第十二章 T淋巴细胞免疫(2014)
(二) T细胞的活化的第二信号 T细胞与APC表面协同刺激分子的结合: CD28/CTLA-4 -----B7 ICOS -----B7-H2 CD40L -----CD40 PD-1 -----PD-L1，PD-L2 致T细胞完全活化，表达细胞因子及细胞因子受 体。（活化后4 小时明显升高）
TCR 识别pMHC，受体交联(CD4 , CD8, CD3胞浆部相聚)
激活p56lck, p59fyn
使CD3 ITAM酪氨酸磷酸化 与ZAP-70的SH2功能区结合，被56lck, p59fyn磷酸化 激活PLC-γ途径和MAP激酶途径。
主要途径： （一）PLC-γ活化途径 （phospholipase C- γ, 磷脂酶C- γ ） （二）MAP激酶活化途径 （motigen activated protein kinase,丝裂原激 活蛋白激酶）
Th0
Th0 Th0
IL-12, IFN-γ
Th1 (细胞免疫)
Th2 (体液免疫) Th17 (自身免疫病, 感染疾病)
IL-4
IL-1β, IL-6
Th0
Th0 Th0
TGF-β， IL-12,
Treg (Th3, Tr1)
Tfh(辅助B细胞产生抗体） Tm
IL-21，IL-6
IFN-γ
二. Th2细胞的生物学活性 1. 辅助体液免疫应答: IL-4,IL-5,IL-10,IL-13促进B细胞增殖 分化成浆细胞,产生抗体. 2. 参与抗寄生虫感染及超敏反应性炎症: IL-4促进B细胞产生IgE,引起肥大细胞, 嗜碱性粒细胞脱颗粒.参与I型过敏反应, IL-5促进嗜酸性粒细胞生成.
3. CD8与MHC-I, CD4与MHC-II 的结合: 辅助性,增强TCR与pMHC的亲和力， 协助T细胞活化信号的传递(p56lck ),
成人早期前体T急性淋巴细胞白血病(ETP-ALL)与非ETP-ALL的临床特点对比
ＬｉｎＮａ，ＬｉｕＺｈｅｎｇｈｕａ，ＸｉａＸｕｅｊｉａｏ，ＦｕＷｅｉ，ＷａｎｇＰｉｎｇｐｉｎｇ，ＹａｎＸｉａｏｊｉｎｇ，ＬｉＹａｎ
ＨｅｍａｔｏｌｏｇｉｃａｌＤｅｐａｒｔｍｅｎｔ，ＴｈｅＦｉｒｓｔＡｆｆｉｌｉａｔｅｄＨｏｓｐｉｔａｌｏｆＣｈｉｎａＭｅｄｉｃａｌＵｎｉｖｅｒｓｉｔｙ，ＬｉａｏｎｉｎｇＳｈｅｎｙａｎｇ１１０００１，Ｃｈｉｎａ． 【Ａｂｓｔｒａｃｔ】 Ｏｂｊｅｃｔｉｖｅ：ＴｏｉｎｖｅｓｔｉｇａｔｅｔｈｅｃｌｉｎｉｃａｌｃｈａｒａｃｔｅｒｉｓｔｉｃｓｏｆａｄｕｌｔｅａｒｌｙＴ－ｃｅｌｌｐｒｅｃｕｒｓｏｒ（ＥＴＰ）ａｎｄｎｏｎ－ ｅａｒｌｙＴ－ｃｅｌｌｐｒｅｃｕｒｓｏｒ（ｎｏｎ－ＥＴＰ）ａｃｕｔｅｌｙｍｐｈｏｂｌａｓｔｉｃｌｅｕｋｅｍｉａ（ＡＬＬ）．Ｍｅｔｈｏｄｓ：Ｃｌｉｎｉｃａｌｄａｔａｓｉｎｃｌｕｄｉｎｇｂａｓｉｃ ｃｌｉｎｉｃａｌｓｔａｔｕｓ，ｂｌｏｏｄａｎｄｂｏｎｅｍａｒｒｏｗｅｘａｍｉｎａｔｉｏｎｒｅｓｕｌｔｓ，ｉｍｍｕｎｏｐｈｅｎｏｔｙｐｉｎｇｒｅｓｕｌｔｓａｎｄｒｅｍｉｓｓｉｏｎｓｔａｔｕｓａｆｔｅｒｉｎ ｄｕｃｔｉｏｎｔｈｅｒａｐｙｗｅｒｅｃｏｍｐａｒｅｄｂｅｔｗｅｅｎ６ｐａｔｉｅｎｔｓｗｉｔｈＥＴＰ－ＡＬＬａｎｄ１３ｃａｓｅｓｗｉｔｈｎｏｎ－ＥＴＰ－ＡＬＬｗｈｏｗｅｒｅｄｉ ａｇｎｏｓｅｄａｎｄｔｒｅａｔｅｄｓｙｓｔｅｍａｔｉｃａｌｌｙｉｎｏｕｒｄｅｐａｒｔｍｅｎｔ．Ｒｅｓｕｌｔｓ：ＬｅｕｋｏｃｙｔｅｃｏｕｎｔｉｎＥＴＰ－ＡＬＬｇｒｏｕｐｗａｓｓｉｇｎｉｆｉｃａｎｔｌｙ ｌｏｗｅｒｔｈａｎｔｈａｔｉｎｎｏｎ－ＥＴＰ－ＡＬＬｇｒｏｕｐａｎｄｐｌａｔｅｌｅｔｃｏｕｎｔｗａｓｓｉｇｎｉｆｉｃａｎｔｌｙｈｉｇｈｅｒｔｈａｎｔｈａｔｉｎｎｏｎ－ＥＴＰ－ＡＬＬ ｇｒｏｕｐ．ＭｏｓｔＥＴＰ－ＡＬＬｐａｔｉｅｎｔｓｂｅｌｏｎｇｔｏｐｒｏ－Ｔ－ＡＬＬｂｙＥＧＩＬｃｌａｓｓｉｆｉｃａｔｉｏｎｓｔａｎｄａｒｄｓ．ＣＲ／ＣＲｉｒａｔｅａｆｔｅｒｆｉｒｓｔ ｃｏｕｒｓｅｏｆｉｎｄｕｃｔｉｏｎｔｈｅｒａｐｙｗａｓｓｉｇｎｉｆｉｃａｎｔｌｙｌｏｗｅｒｉｎＥＴＰ－ＡＬＬｐａｔｉｅｎｔｓ．Ｃｏｎｃｌｕｓｉｏｎ：ＥＴＰ－Ｔ－ＡＬＬｐａｔｉｅｎｔｓｈａｖｅ ｕｎｉｑｕｅｃｌｉｎｉｃａｌｃｈａｒａｃｔｅｒｉｓｔｉｃｓａｎｄｐｏｏｒｒｅｓｐｏｎｓｅｔｏｃｏｎｖｅｎｔｉｏｎａｌｉｎｄｕｃｔｉｏｎｔｈｅｒａｐｙ，ｓｏｉｔｉｓｎｅｃｅｓｓａｒｙｔｏｅｘｐｌｏｒｅｎｅｗ ｔｒｅａｔｍｅｎｔｍｅｔｈｏｄｓ． 【Ｋｅｙｗｏｒｄｓ】ａｃｕｔｅｌｙｍｐｈｏｂｌａｓｔｉｃｌｅｕｋｅｍｉａ，ｅａｒｌｙＴ－ｃｅｌｌｐｒｅｃｕｒｓｏｒａｃｕｔｅｌｙｍｐｈｏｂｌａｓｔｉｃｌｅｕｋｅｍｉａ，ｉｎｄｕｃｔｉｏｎｔｈｅｒａｐｙ ＭｏｄｅｒｎＯｎｃｏｌｏｇｙ２０１９，２７（２１）：３８７５－３８７７
雏鸡T淋巴细胞及其亚群的变化规律
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克 粪 便 卵 个 囊 数
中 图分 类号 ： ８ ２ ３ ￥ ５ ．
文献 标识 码 ： Ｂ
文章 编 号 ： ５ ９ ６ ０ （ ０ ２ １ －０ ３ ０ ０ ２ — ０ ５ ２ ０ ） ００ １ — ２
１ ６ ６ ９．３
１３ ５ ９．９
４ 讨 论 与 结 论 ４ １ 从 抗 球 虫 指 数 （ Ｉ 看 出 ， 、 、 剂 量 癸 氧 ． ＡＣ ） 高 中 低
喹 酯 组 以 及 马 杜 拉 霉 素 组 的 ＡＣＩ均 大 于 １ ０， 于 ８ 属
的 效 果 是 一 致 的 ， 好 于 红 对 照 组 （ ０ ０ ） 但 均 均 Ｐ＜ ． ５ ，
高效 药 物 。 ４ ２ 从 体 重 的 统 计 结 果 来 看 ， 日龄 分 组 时 的 各 组 ． １ 体 重 没 有 显 著 差 异 ， 明 随 机 分 组 是 正 确 的 ；４ 日 说 １ 龄 （ 染 前 ） 各 组 体 重 也 没 有 显 著 差 异 ， 明 各 组 感 的 说 鸡 只 饲 养 条 件 是 一 致 的 。从 ２ 日龄 （ 染 后 第 ７ １ 感 天 ） 平 均 体 重 和 增 重 看 ， 、 、 剂 量 癸 氧 喹 酯 组 的 高 中 低 与 马 杜 拉 霉 素 组 没 有 差 异 ， 明 这 四 个 组 控 制 球 虫 说
医学免疫学第九,十章 B、T 淋巴细胞
浙中医大 微免教研室 刘文洪
9
重组酶包括：①重组激活酶基因（RAC）②末端脱 氧核苷酸转移酶③DNA外切酶，DNA合成酶等。
重组酶作用：可以从众多的V(D)J基因片段中个选择 1个V片段，1个D片段和一个J片段重排在一起，形 成V(D)J连接，最终表达为有功能的BCR
4.体细胞高频突变：在已完成Ig基因重排的基础上 ，成熟B细胞在外周淋巴器官生发中心接受抗原刺 激后发生。不仅能增加抗体的多样性，而且可导致 抗体的亲和力成熟。
浙中医大 微免教研室 刘文洪
14
（三）B细胞在中枢免疫器官中的分化发育
造血干细胞→淋巴样干细胞→祖B细胞→前B细胞 →未成熟B细胞→成熟B细胞
CD32 有a和b两种亚型，其中b亚
型即FcγRIIB ，负向调控B细胞 的活化及抗体的分泌。
浙中医大 微免教研室 刘文洪
38
Fc受体 (1) 组成：主要为FcγRⅡ-B1分子，含一个ITIM
（immuno-receptor tyrosine-based inhibitory motifs）免疫受体酪氨酸抑制基序基序。
52
第一节 T细胞的分化发育
HSC在骨髓中分化成淋巴样祖细胞。可经血液循 环进入胸腺，在胸腺中完成T细胞的发育，成为成 熟T细胞，再经血液循环进入外周淋巴器官，主要 定居于外周淋巴器官的胸腺依赖区，接受抗原刺 激发生免疫应答。
高 糖类 多反应性 IgM>IgG
低/无 低/无
B-2 -
出生后 由骨髓产生
低 蛋白质 单特异性,尤其在免疫后 IgG>IgM
高 有
浙中医大 微免教研室 刘文洪
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第四节 B细胞的功能
银屑病的发生与T淋巴细胞的关系
银屑病的发生与T淋巴细胞的关系银屑病是一种与遗传、环境等多种因素相关的慢性复发性炎症性皮肤病，以表皮过度增殖和真皮慢性炎症反应为特征。
随着研究的进展，人们逐渐认识到T 细胞在银屑病发病中的重要作用，银屑病发病机制在于T淋巴细胞的异常活化。
标签：T淋巴细胞；银屑病；目前研究表明，银屑病是一种慢性炎症性皮肤病，特征表现为表皮异常增殖。
该病是多基因遗传背景下T细胞异常的免疫性疾病，皮肤相关T细胞是维持银屑病疾病活动的中心环节，与皮损的发生、发展和持续存在密切相关。
[1]1 T淋巴细胞参与银屑病发生的证据免疫抑制剂环孢素A（CyA）的问世及治疗银屑病的确切疗效，把人们的注意力转移到T淋巴细胞。
目前认为，银屑病发病的原因在于T淋巴细胞的异常，动物模型可以是一个直接的证据。
应用重度联合免疫缺陷（severe combined immunodeficiency，SCID）鼠进行实验，Wrone-Smith等[2]采用IL-2和超抗原SEB刺激银屑病患者外周血淋巴细胞，然后将其注射到移植在SCID鼠的自身非皮损处皮肤的真皮内，成功地诱导出典型的银屑病病理改变。
Valdimarsson提出，银屑病皮损中T淋巴细胞的浸润及活化是造成角朊细胞过度增殖的原因，表皮角朊细胞的增生只是免疫学上的继发现象之一。
2 银屑病患者T淋巴细胞活化的因素Jeffes等[3]对银屑病患者外周血中增殖的单个核细胞的量和表型进行了分析，结果表明外周血中增殖的单个核细胞数目明显增高，与PASI积分显著相关；且T、B细胞都明显增高，与PASI积分显著相关；且T、B细胞都明显增高，并在甲氨蝶呤（MTX），UVB等系统治疗后2～3周有明显减少；提示淋巴细胞在进入皮损前已被激活。
上呼吸道感染是银屑病发生的公认因素之一。
感染条件下导致T淋巴细胞的激活可以成为银屑病的启动因素。
2.1 A族溶血性链球菌所致咽炎可诱发急性点滴型银屑病的发作以及慢性银屑病的加重。
肿瘤抗原致敏DC诱导T淋巴细胞增殖及杀伤效率
肿瘤抗原致敏DC诱导T淋巴细胞增殖及杀伤效率【摘要】目的：探讨胃癌细胞抗原致敏的树突状细胞（DC）诱导T淋巴细胞 (T lymphocyte) 增殖和杀伤胃癌细胞的效率. 方法：应用淋巴细胞分离液分离人外周血单个核细胞，经重组人粒细胞巨噬细胞集落刺激因子（rhGM CSF）、重组人白细胞介素4（rhIL4）和肿瘤坏死因子α（TNFα），体外诱导培养获取成熟DC，流式细胞术检测DC表面CD83，CD80，CD86及HLA DR表型；同时经重组人白细胞介素2（rhIL2）诱导扩增T淋巴细胞，检测CD3，CD4，CD8及CD56表型. 以人胃癌OCUM2MD3细胞株冻融抗原致敏DC，然后刺激T淋巴细胞，得到肿瘤抗原特异的细胞毒性T淋巴细胞（CTL）. MTT法检测致敏DC对T淋巴细胞增殖的影响和致敏DC活化的特异性CTL对胃癌细胞的体外杀伤效率. 结果：体外诱导人外周血单个核细胞，可获得大量形态典型、具备强烈刺激增殖能力、且高表达CD80，CD86的DC及高表达CD3的T淋巴细胞；MTT法检测结果发现胃癌细胞抗原致敏DC组刺激T淋巴细胞增殖指数显著高于未致敏DC组和对照组(P<0.01)；流式细胞术检测结果发现胃癌细胞抗原致敏DC主要刺激T淋巴细胞增殖为CD8+的CTL （60.58±8.43）%，经胃癌细胞抗原致敏DC刺激后，对胃癌细胞的杀伤效应显著增加，致敏DC组对胃癌细胞杀伤活性（71.57±4.83）%，较未致敏DC组（12.53±1.62）%和单纯T淋巴细胞组（10.45±1.40）%作用更为显著（P<0.01）,而且随着效靶比增加，其杀伤效应亦显著增加. 结论：胃癌细胞抗原致敏DC可显著刺激T淋巴细胞增殖为CD8+ CTL，进而发挥其高效杀伤胃癌细胞的作用.【关键词】树突细胞；T淋巴细胞；胃肿瘤；T淋巴细胞，细胞毒性0引言树突状细胞（dendritic cells, DC）是专职的抗原提呈细胞，与机体抗肿瘤免疫关系密切［1］. DC加工处理提呈抗原信息后，通过激活T淋巴细胞而发挥抗肿瘤细胞的免疫效应. 研究［2］表明，各种人DC前体细胞如脐血、骨髓及外周血CD34+细胞或CD14+细胞等在联合应用GM CSF，IL4，TNFα等因子体外培养下，均可诱导成为成熟DC. 在多种肿瘤的临床试验中，发现DC免疫治疗具有一定的效果［3］. 我们以人外周血为DC来源，利用胃癌细胞冻融抗原致敏DC，观察其诱导的细胞毒性T淋巴细胞（cytotoxic T lymphotytes，CTL）对胃癌细胞的杀伤效率，为DC治疗胃癌提供实验依据.1材料和方法1.1材料人胃癌高侵袭OCUM2MD3细胞株，由日本大分医科大学外一科八代正和教授惠赠. 外周血取自健康志愿者. 重组人粒细胞巨噬细胞集落刺激因子（rhGM CSF），重组人白细胞介素4（rhIL4），白细胞介素2（rhIL2）和重组人肿瘤坏死因子α（rhTNFα）（美国Cytolab 公司）；抗人CD3PE，CD4PE，CD8PE和CD56PE（美国Becton Dickinson公司）；四甲基偶氮唑蓝（美国Sigma 公司）；抗人CD83PC5，CD86PE，CD80FITC和HLA DR FITC（美国BECKMAN COUNTER公司）.1.2方法1.2.1DC分离培养及鉴定应用淋巴细胞分离液分离人外周血单核细胞,以rhGM CSF和rhIL4诱导培养5 d后，加入TNFα，于第7日收集DC，光镜及电镜下观察其形态. 同时分别加入荧光标记的CD83PC5，CD80FITC，CD86 PE和HLA DR FITC，间接免疫荧光染色，采用文献［4］的方法，流式细胞仪检测DC表面CD83，CD80，CD86及HLA DR表达.1.2.2胃癌细胞冻融法制备抗原致敏DC胰蛋白酶消化、吹打收集对数生长期的人胃癌OCUM2MD3细胞，调整细胞数为2×107/mL. 将人胃癌OCUM2MD3细胞以液氮反复冻融法［5］制备肿瘤抗原. DC培养至第5日加入胃癌细胞抗原，第7日加入TNFα，第8日收获胃癌OCUM2MD3细胞抗原致敏的DC.1.2.3MTT法检测致敏DC诱导T淋巴细胞增殖将胃癌细胞抗原致敏DC,未致敏DC和T淋巴细胞，经60Co照射灭活，分别取1×103，3×103， 1×105接种于96孔培养板，分为致敏DC组、未致敏DC组和T细胞组. 每孔加入1×105 T 淋巴细胞，终体积为200 μL. 混合培养96 h后，加入MTT 溶液20 μL，继续静置培养4 h后，吸弃培养基，加入DMSO 150 μL，均匀震荡混匀10 min，自动酶标仪于波长492 nm 处测定吸光度A值，空白培养基孔作为对照，按下面公式计算刺激增殖指数(SI). SI=各刺激组孔A492 nm /空白孔A492 nm.1.2.4MTT法检测CTL对胃癌细胞的体外杀伤效应将负载胃癌抗原DC,未负载胃癌抗原DC分别取2×104个细胞与T 淋巴细胞混合后及单纯T淋巴细胞置于48孔培养板上，分为致敏DC组、未致敏DC组、T细胞组，以人胃癌OCUM2MD3细胞为靶细胞，另设单独效应细胞组和单独靶细胞组. 按效靶比10∶1，20∶1，40∶1加入人胃癌OCUM2MD3细胞的培养液，静置培养24 h. 每孔加入MTT溶液200 μL，孵育4 h后全自动酶标仪于492 nm波长处测定A值. 杀伤活性按下式计算：杀伤活性(%)=｛1［（实验组A值-单独效应细胞组A值）/单独靶细胞A值］｝×100%.1.2.5流式细胞术检测T淋巴细胞表型收集T淋巴细胞（T细胞组）和经胃癌细胞抗原致敏DC刺激扩增的T淋巴细胞（致敏DC组），制备单细胞悬液，调整细胞数为5×106/mL，加入藻红蛋白标记的CD3，CD4，CD8及CD56荧光抗体孵育30 min后，流式细胞仪检测CD3，CD4，CD8及CD56的表达量.统计学处理：数据结果以x±s表示，选用SPSS 11.5统计软件，采用t检验和方差分析进行统计分析，P<0.05为差异具有统计学意义.2结果2.1体外培养的DC形态人外周血单个核细胞经rhGM GSF, rhIL4联合诱导7 d后,光镜下观察细胞表面有毛刺状突起；扫描电镜(SEM) 观察DC表面粗糙，胞体向四周伸出大量树枝状或裙褶状不规则突起，有的突起末梢呈球状膨大，众多突起甚至遮盖了胞体，充分展示出DC的典型形态特征；透射电镜(TEM)下成熟DC的胞体较大，可见明显的突起, 胞浆细胞器较发达（图1）.2.2DC细胞表型分析培养7 d时，收获的细胞以成熟DC 为主. 流式细胞术检测DC表面CD83，CD80，CD86及HLA DR表型，结果发现CD80，CD86的阳性细胞比率分别为（43.81±6.19）%和（51.07±4.32）%，CD83阳性细胞比率可达（61.94±5.87）%，HLA DR达（72.26±7.65）% （图2）.2.3T 淋巴细胞经胃癌细胞抗原致敏DC刺激前后改变获得T淋巴细胞于镜下观察可见细胞体积较小呈圆形，符合典型淋巴细胞的形态. 经胃癌细胞抗原致敏DC刺激后，T淋巴细胞形态无明显变化，数量明显增多，流式细胞术检测其CD3的表达率为（99.45±0.35）%（图3）.A：光镜下见DC表面有毛刺状突起×400； B：扫描电镜下见DC表面有大量皱褶和树状突起×3500； C：透射电镜下见DC表面有明显突起，胞浆细胞器较发达×3500.图1培养7 d DC形态（略）图2DC表面分子表型（略）A： DC刺激前T淋巴细胞； B： DC刺激后T淋巴细胞.图3T淋巴细胞变化×200（略）2.4胃癌细胞抗原致敏DC对人外周血T淋巴细胞增殖的影响MTT检测结果显示，致敏DC组SI值为(57.3±11.5)%，显著高于未致敏DC组（18.3±7.4）%,T细胞组（18.5±2.6）%和对照组（17.6±5.3）%，差异具有统计学意义（P<0.01）. 未致敏DC组、T细胞组和对照组之间差异无统计学意义（P>0.05）.2.5胃癌细胞抗原致敏DC对T淋巴细胞表型的影响流式细胞术检测结果显示，T细胞组及致敏DC组的T淋巴细胞均高表达CD3，其阳性率分别为（99.45±0.35）%和（98.5±0.71）%；而致敏DC组的CD8阳性率（60.58±8.43）%显著高于T细胞组（32.52±4.09）%，差异有统计学意义 (P<0.01). CD4及CD56的阳性率差异无统计学意义（P>0.05，图4）.图4胃癌细胞抗原致敏DC对T淋巴细胞表型的影响（略）2.6胃癌细胞抗原致敏DC诱导特异性CTL对胃癌细胞的体外杀伤效应经胃癌细胞抗原致敏DC诱导特异性CTL对胃癌细胞的杀伤效应显著增加，与未致敏DC组和对照组相比，差异具有统计学意义(P<0.01)，并且随效靶比增加，杀伤效应亦显著增加，未致敏DC组和对照组之间差异无统计学意义（P>0.05, 图5）.图 5不同效应细胞诱导特异性CTL对胃癌细胞的体外杀伤效应（略）3讨论DC作为机体内专职的抗原提呈细胞，在摄取、提呈抗原及激发后续特异性抗肿瘤免疫反应中发挥着不可替代的作用. 而在DC处理提呈抗原过程中，其表面分子CD80，CD86，HLA DR的表达水平又起到重要的制约作用，直接关系到DC免疫激发的功能状态. 其中CD80，CD86作为DC激活T淋巴细胞过程中的重要共刺激分子作用尤为重要，其表达水平标志着DC免疫激活能力的高低［5-6］. 因此测定胃癌患者体内DC细胞表面分子的表达水平对正确判断患者预后及确定相应生物治疗方案有一定的参考价值. 我们以外周血单个核细胞作为DC来源，应用rhGM CSF+rhIL4+rhTNF α细胞因子组合，经7~8 d 培养，通过光镜和扫描电镜观察，细胞表面有大量皱襞和树状突起，证明获取到具有典型形态学特征的成熟DC，流式细胞仪分析显示其高表达CD80及CD86共刺激分子，表明DC具有高效激活T淋巴细胞的能力.宿主攻击肿瘤依赖于特异性的抗肿瘤免疫，尤其是T细胞免疫. DC作为一专职抗原递呈细胞，能够诱导出高效而特异的抗肿瘤免疫. 其抗肿瘤机制据认为是DC诱导的CTL对肿瘤细胞的细胞毒作用，其中CD8+ CTL可直接杀伤肿瘤细胞，是肿瘤免疫反应的主要环节. 研究表明T细胞功能与胃癌的发生发展密切相关，尤其CD4+，CD8+比数量关系更能反应宿主的细胞免疫状态和抗肿瘤能力［7］. 张坤等［8］采用细胞融合技术研究发现： SGC7901胃癌细胞DC融合疫苗激活T淋巴细胞可使其增殖能力明显增强. 我们用携带肿瘤抗原的DC刺激T淋巴细胞增殖，发现其增殖能力也明显增强，检测其细胞表型发现T淋巴细胞主要增殖为CD8+ CTL，CD4及CD56无明显变化，说明肿瘤抗原DC主要通过刺激T 淋巴细胞增殖为CD8+ CTL发挥抗瘤免疫功能.研究发现，给予动物肿瘤相关多肽或蛋白致敏的DC不仅能诱导淋巴细胞特异性增殖，并且能产生针对肿瘤侵袭的防御保护能力［9-11］. 我们用携带胃癌抗原的DC刺激T 淋巴细胞增殖产生的特异性CTL对肿瘤细胞有极强的杀伤活性，其杀伤率可高达(71.57±4.83)%，表现出明显的杀伤胃癌细胞的作用. 本实验结果充分表明胃癌抗原致敏DC可通过激活肿瘤特异性CTL而具有明显的抗肿瘤活性，为临床应用DC治疗胃癌提供了一定实验依据.【参考文献】［1］Banchereau J, Briere F, Caux C, et al. Immunology of dendritic cells［J］. Annu Rev Immunol, 2000,18:767-811.［2］Zheng Z, Takahashi M, Narita M, et al. Generation of dendritic cells from adherent cells of cord blood by culture with granulocyte macrophage colony stimulating factor,interleukin4, and tumor necrosis factor alpha［J］. J Hematother Stem Cell Res, 2000,9(4):453-464.［3］ Nestle FO, Farkas A, Conrad C, et al. 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T淋巴细胞的发生及演变发表时间：2011-08-05T08:58:35.873Z 来源：《中国健康月刊（学术版）》2011年第6期供稿 作者： 盛高建[导读] T细胞从发生到成熟是一个极其复杂的过程，不仅形态结构在发生变化，还伴随有许多表面标志的表达或消失。
盛高建【摘要】T细胞从发生到成熟是一个极其复杂的过程，不仅形态结构在发生变化，还伴随有许多表面标志的表达或消失。T细胞在胸腺内的分化无疑是整个发育过程中至关重要的阶段，而胸腺细胞的成熟过程实质上是一个选择过程,不符合要求的细胞如自身反应性细胞随时被淘汰，而正常分化的细胞则被保留下来。最终发育成熟的T细胞除具有MHC限制性和对自身抗原的耐受性外，还具有识别多种非己抗原的能力，而TCR、分化抗原等膜表面分子则是其识别抗原并产生免疫应答的物质基础。 【关键词】T细胞；胸腺细胞；分化；选择 【中图分类号】R744【文献标识码】B【文章编号】1005-0515(2011)06-0286-01 T淋巴细胞(T lymphocyte)简称T细胞，是数量最多、功能最复杂的淋巴细胞群，也是适应性细胞免疫应答的执行者，并在TD-Ag诱导的体液免疫应答中发挥重要的辅助作用。T细胞及其亚群历来是组织胚胎学、医学免疫学等生物科学领域的研究重点，成果显著，理论也较为丰富，但不能否认的是，各学科在相关内容的描述上往往不够统一，或者缺乏足够的知识关联，难免会给读者带来一些理解上的困难。本文就T细胞的分化发育过程及其形态与表面标志变化进行归纳。 1T细胞的来源 T细胞和B细胞一样，都是由多能造血干细胞(MHSC)发育分化而来。MHSC首先分化为髓样祖细胞和淋巴样祖细胞，胚胎第7周时，淋巴样祖细胞定向发育成原T(pro-T)细胞(表型为CD410、CD3-、CD8+、CD25-、C-kit+、Lin-、TCRαβ-)，在胸腺血管形成之前，胸腺原基分泌的趋化因子即吸引循环血液中的原T细胞进入其内。原T细胞先后来自卵黄囊、胎肝和骨髓，但进入胸腺的具体途径和机制还不完全清楚。有人认为是经皮-髓质交界处的毛细血管后微静脉进入胸腺实质，有人则认为是随组织液从胸腺被膜进入实质的，从发生上来说，两种观点都具有阶段性意义。原T细胞进入胸腺被膜下而未到达胸腺皮质之前，称前T(pre-T)细胞，当其进入胸腺皮质后即称为胸腺细胞。在相关文献资料中，多数对于淋巴干细胞的定位较为模糊，名词使用也比较混乱，因此有必要进行讨论，统一认识。笔者认为，淋巴干细胞是淋巴系造血祖细胞的统称，可分为两级，淋巴样祖细胞属于一级(多向)淋巴干细胞，由其分化而来的pro-T细胞、pro-B细胞和pro-NK细胞(后者尚未证实)则属于二级(定向)淋巴干细胞；从这个意义上来讲，髓系造血祖细胞也可分为二级或三级以上，髓样祖细胞为一级，可向单系(如红系)或二系(如粒单系)发展；就T细胞的发育而言，pro-T细胞以前为干细胞阶段，pre-T细胞以后为胸腺细胞阶段。
2 胸腺微环境
胸腺微环境是胸腺细胞赖以生存的场所，由诱导其增殖、分化与选择性发育的各种因素构成。淋巴干细胞早期即在胸腺内开始分化，应用小鼠胸腺细胞实验模型研究表明，在胚胎11～12天pro-T细胞已进入胸腺，在胸腺微环境的影响下胸腺细胞迅速发生增殖和分化。
目前已知诱导T细胞在胸腺内分化、成熟的主要因素包括：①胸腺基质细胞(TSC)通过细胞表面的粘附分子直接与胸腺细胞相互作用，其中胸腺内的哺育细胞(nurse cell)对于T细胞的成熟和分化起着重要的调节作用；②胸腺基质细胞分泌多种细胞因子(SCF、IL-1、IL-6、IL-
7、GM-CSF等)和胸腺激素(胸腺素、胸腺α肽、胸腺生成素等)诱导胸腺细胞分化；③胸腺细胞自身分泌多种细胞因子(IL-2、IL-4、IFNy、IFNα等)对胸腺细胞本身的分化和成熟起重要的调节作用；④胸腺上皮细胞(TEC)、巨噬细胞(M )和树突状细胞(DC)对于胸腺细胞分化过程中的自身耐受、MHC限制以及功能性T细胞亚群的形成起着决定性作用；⑤细胞外基质也是胸腺微环境的重要组成部分，包括多种胶原蛋白、网状纤维蛋白、葡萄糖胺聚糖等，它们可促进上皮细胞与胸腺细胞接触，并促进胸腺细胞在胸腺内移行和成熟。 3胸腺细胞的分化阶段
胸腺细胞从皮质浅层到皮质深层，进而经过皮、髓质交界处进入髓质，在胸腺微环境的作用下逐渐分化成熟，它们的分化程序受到严格的调控。根据对人胸腺不同部位胸腺细胞的表型分析，胸腺细胞的分化可分为4个阶段。
3.1前T细胞:主要位于胸腺被膜下，细胞体积较大，胞质内细胞器少。pre-T细胞的表型为CD3-、CD4-、CD8-、CD25-、C-kit10、TCRαβ-，即尚未出现T细胞标志，但表达末端脱氧核苷转移酶(Tdt)，部分细胞表达CD7。 3.2早期胸腺细胞:主要分布于被膜下、小叶间隔附近及胸腺皮质浅层。早期胸腺细胞体积大，核圆形，电子密度较低，染色质呈细粒状，核仁不明显；胞质少，呈环带状，细胞器少，仅见少量游离核糖体和球形线粒体。在胚胎10～14周时，这种细胞是构成胸腺的主要细胞成分。15～20周时，该类细胞数量相对减少，30周至足月则更少。早期胸腺细胞的表型为CD2+、CD3+、CD5+、CD4-、CD8-、CD25-、TCRαβ-，由于缺乏CD4和CD8分子，因此又称双阴性(DN)细胞。DN细胞向皮质深层迁移的同时，发生TCRβ基因重排及转录，可使自身免于凋亡(apoptosis)，更重要的是，其TCRβ-βCD3可逐渐表达于细胞表面，与基质细胞配基结合后，经p56lek传导信号，诱导
CD4/CD8分子表达及TCRβ基因发生等位排斥。 3.3普通胸腺细胞:由早期胸腺细胞经数次分裂后移向皮质深层发育而成，是胚胎20周以后胸腺皮质的主要成分。细胞中等大小，核圆形或椭圆形，染色质呈斑块状，功能活跃者多见核仁，趋向退化者核深染。普通胸腺细胞表达CD3、CD1和T细胞抗原受体(TCR)，随即出现CD4和CD8分子。这种具有完整TCR 及CD4+CD8+T细胞又称双阳性(DP)细胞，约占此类细胞总数的80﹪～85﹪。只有极少数普通胸腺细胞继续分化为成熟胸腺细胞，而绝大部分将在阳性和阴性选择中凋亡而被清除(后述)。 3.4成熟胸腺细胞:主要位于皮质深层或髓质。细胞体积相对较小，与外周血小淋巴细胞形态无异，光镜和电镜下也难与普通胸腺细胞区分。成熟胸腺细胞除高表达TCR外，主要表达CD4+或CD8+，所以又称单阳性(SP)细胞。
4胸腺选择过程 T细胞发育成熟的关键步骤是双阳性(DP)细胞向单阳性(SP)细胞分化阶段所发生的胸腺选择，包括阳性选择与阴性选择，主要组织相容性复合体(MHC)抗原(分子)在这两种选择中起决定性作用。
4.1阳性选择过程:主要发生在DP细胞与胸腺上皮细胞之间的相互作用。在TCRαβ的介导下，若DP细胞能与胸腺皮质上皮细胞表面MHC-Ⅰ类或MHC-Ⅱ类分子以适当亲和力结合，则可能被选择而继续发育，分化为SP细胞；若DP细胞不能与MHC分子有效结合或发生高亲和力结合，则在胸腺皮质中发生程序性细胞死亡(PCD)即凋亡。在此过程中，MHC-Ⅰ类分子选择CD8共受体，而使同一个DP细胞表面CD4共受体减少；MHC-Ⅱ类分子则选择CD4共受体，使CD8共受体减少。这种选择过程赋予成熟CD8+CD4-T细胞具有识别外来抗原与自身MHC-Ⅰ类分子复合物的能力，CD4+CD8-T细胞具有识别外来抗原与自身MHC-Ⅱ类分子复合物的能力，此即T细胞获得MHC限制性的基础。阳性选择可消除所有非己MHC限制性T细胞克隆，而保存自身MHC限制性T细胞克隆，包括潜在而有害的自身反应性T细胞克隆。 4.2阴性选择过程:主要发生于DP细胞与胸腺内巨噬细胞(M )、树突状细胞(DC)或髓质上皮细胞间的相互作用。位于皮质与髓质交界处的DC和M 均表达高水平的MHC-Ⅰ类抗原和MHC-Ⅱ类抗原，后者与自身抗原结合成复合物，对已经历过阳性选择的胸腺细胞进行阴性选择。能识别自身抗原-MHC分子复合物的胸腺细胞即被激活而发生程序性细胞死亡，而不能识别该复合物的胸腺细胞则继续发育。经阴性选择后，排除了自身反应性T细胞克隆，并获得对自身抗原的耐受性。
经历上述与MHC有关的选择过程，约有95%以上的胸腺细胞被灭活或淘汰，只有少量胸腺细胞分化成熟为具有MHC限制性、可识别非己抗原的CD4+CD8-或CD4-CD8+单阳性细胞，即具有免疫功能的成熟T细胞。
5成熟T细胞库
成熟的胸腺细胞大部分通过皮质与髓质交界处的高内皮微静脉(HEV)进入血液，少数经淋巴管入血。成熟胸腺细胞为处女型T细胞，或称初始T细胞(Tn细胞)，它们都是未经抗原刺激的CD45RA+T细胞群，这和记忆T细胞(Tm细胞)表达CD45RO+有所不同。Tn细胞迁出胸腺后，依靠其表面的归巢受体(HR，即CD44分子)定居于周围淋巴器官并参加淋巴细胞再循环。遍布全身各处的T细胞共同构成T细胞库(T cellrepertoire)。成熟T细胞库具有两个基本特性：①TCR识别抗原受MHC限制，即不仅特异性识别经抗原提呈细胞(APC)加工处理的抗原肽，而且须同时识别与抗原肽结合成复合物的MHC分子；②对自身抗原具有耐受性，一般不对自身MHC分子或与之结合的自身抗原分子产生应答，即所谓自身耐受现象。参考文献[1]陈晔光,张传茂,陈佺.分子细胞生物学[M].北京:清华大学出版社,2006.427-438 [2]高英茂,宋天宝.组织学与胚胎学[M].北京:人民卫生出版社,2005.172-175,472-474 [3]Bommhardt U,Cole MS,Tso JY,et a].Signals through CD8 or CD4 can induce commitment to the CD4 lineage in the thymus[J].Eur JImmunol,1997,27:1152-1163 [4]Hogquist KA,Tomlinson AJ,Kieper WC,et al.Identification of a naturally occurring ligand for thymic positiveselection[J].Immunity,1997,6:389-399 [5]Ignatowicz L,Kappler J,Marrack P.The repertoire of T cells shaped by a single MHC/peptide ligand[J].Cell,1996,84:521-529 [6]Kishimoto H,Sprent J.Negative selection in the thymus includes semimature T cells[J].J Exp Med,1997,185:263-271 [7]Nehls M,Kyewski B,Messerle M,et al.Two genetically separable steps in the differentiation of thymicepithelium[J].Science,1996,272:886-889 [8]Shortman K,Wu L.Early T lymphocyte progenitors[J].Annu Rev Immunol,1996,14:29-47 [9]Zerrahn J,Held W,Raulet DH.The MHC reactivity of the T cell repertoire prior to positive and negative selection[J].Cell,1997,88:627-636作者单位：675005楚雄医药高等专科学校解剖学教研室