地塞米松对骨髓基质细胞生物学特性的影响
中药骨碎补提取液对兔骨髓基质细胞体外成骨分化的影响
将动物分为 " 组， 空白对照组 （标准培 养 液 培 养） ， 诱导对照组 （含 ! ・I J $ ） ， 地 塞 米 松 $# J + 90: ・I J $ ， 维生 - 甘油磷酸钠 $#990: 素 ;"#" ・I 的条件培养液培养） ， 中药 > 组 （含 骨 碎 补 !#9E・ E J$ ， 中药 # 组 （含 骨 碎 补 !9E・9: J $ 的 培 养 液 9: 的培养液培养）
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培养） ， 中药 $ 组 （含骨碎补 # ) !9E ・9: J $ 的培养 液 培 养） 。每组 取生长良好的对数期第 ! 代 细 胞， 以 每 毫 升 $ K $#" 个 细 . 只， 胞的密度接种于预置 盖 玻 片 并 标 记 分 组 的 一 次 性 培 养 板 内。 用标准培养液在 ’GL 、 " H ;M! 饱 和 湿 度 培 养 箱 内 培 养 !? 小 时， 相差显微 镜 观 察 完 全 贴 壁 后， 分别更换相应标记的培养 液， 置 于 ’G L 、 每隔 ’ 天换 " H ;M! 饱 和 湿 度 培 养 箱 内 培 养， 液， 相差显微镜下逐日观察。 山东省潍坊市中医院 骨科硕士研究生
地塞米松在家兔脂肪基质干细胞定向诱导为成骨细胞的作用
地塞米松在家兔脂肪基质干细胞定向诱导为成骨细胞的作用黎洪棉;高建华;鲁峰;李华【期刊名称】《中国组织工程研究》【年(卷),期】2007(011)020【摘要】目的:观察不同浓度地塞米松对家兔脂肪基质干细胞生长、增殖及向成骨细胞分化的影响.方法:实验于2006-11/2007-01在南方医科大学组织工程研究中心完成.实验材料:成年新西兰大白兔购于南方医科大学实验动物中心(机构许可证号SYXK(粤)2005-0058).实验方法:①脂肪基质干细胞获取:取成年新西兰大白兔腹股沟皮下脂肪组织一二毫升,分离培养脂肪基质干细胞,井按1:3进行传代培养.选取生长良好P3代细胞进行免疫组织化学染色测定CD44抗原表达.并于第3,7,14天观察细胞增殖情况.②脂肪基质半细胞成骨诱导:成骨诱导液由不同浓度地塞米松、50 mg/L的维生素C、10 mmol/L的β-磷酸甘油和DMEM完全培养基组成.实验分6组:0 mol/L地塞米松组、10-8 mol/L地塞米松组、10-7 mol/L地塞米松组、10-6mol/L地塞米松组、10-5mol/L地塞米松组、对照组.选择生长良好P3代兔脂肪基质干细胞,用0.25%胰酶消化3～5 min,制成单细胞悬液,调整细胞密度为1×104,接种于25 cm2的培养瓶中,在体积分数为0.05的C02饱和湿度、37℃恒温培养箱培养.24 h后所有诱导组更换为成骨诱导培养液,进行成骨细胞诱导分化处理,记为诱导第0天,对照组换DMEM完全培养液.诱导期间,每隔二三天换1次成骨诱导液,对照组换1次常规DMEM完全培养液.③第7,14,21天茜素红染色鉴定成骨细胞特性,观察不同浓度地塞米松对兔脂肪基质干细胞的生长、增殖及向成骨细胞分化的影响.结果:①地塞米松对脂肪基质干细胞增殖的影响:与对照组相比较,10-6,100-5 mol/L组细胞数目明显减少(t=2.862 3,3.424 5.3.520 3,3.959 4,2.2641,2.701 2.P＜0.05).②地塞米松对脂肪基质干细胞成骨分化的影响:光镜下观察整个诱导分化期,对照组未观察到钙化结节形成,0 mol/L地塞米松组只观察到个别钙化结节形成.在诱导第14天,10-5,10-6,10-7,10-8 mol/L地塞米松组均可观察到少数钙化结节形成,10-5,10-6,10-7 mol/L组间钙化结节数差异无显著性意义(t=0.557 1, 0.592 9.1.114 2.P＞0.05),但钙化结节数目明显多于10-8 mol/L组(t=5.496 0,6.281 1,6.364 0,P＜0.05).在诱导第21天;10-5,10-6,10-7 mol/L组均可观察到大量钙化结节形成,均明显多于10-8 mol/L组(t=6.270 3,6.406 5;5.634 9,P＜0.05).结论:＞10-7 mol/L高浓度地塞米松对脂肪基质干细胞的生长、增殖有明显抑制作用;在其他镌导条件一致的情况下,10-7 mol/L地塞米松最有年于脂肪基质干细胞向成骨细胞分化.【总页数】4页(P3896-3899)【作者】黎洪棉;高建华;鲁峰;李华【作者单位】南方医科大学南方医院整形外科,广东省广州市,510515;南方医科大学南方医院整形外科,广东省广州市,510515;南方医科大学南方医院整形外科,广东省广州市,510515;南方医科大学南方医院整形外科,广东省广州市,510515【正文语种】中文【中图分类】R394.2【相关文献】1.不同浓度地塞米松在体外定向诱导分化兔骨髓间充质干细胞为成骨细胞的实验研究 [J], 张建萍2.大鼠脂肪干细胞体外定向诱导分化为脂肪细胞和成骨细胞的研究 [J], 程文丹;赵宇;何金生;汪春兰;王帮河;谢灿;张梅;陆艳艳3.大鼠脂肪干细胞定向分化为成骨细胞及体外增殖过程中地塞米松的抑制性干预[J], 黎洪棉;高建华;余元龙;南华;付冰川4.大鼠骨髓基质干细胞定向分化为成骨细胞及体外增殖过程中地塞米松的抑制性干预 [J], 马剑平;赵锦;黎洪棉;南开辉5.骨髓间充质干细胞定向诱导条件下向脂肪细胞和成骨细胞诱导分化的关系 [J], 黄定强;杨大鉴;黎万荣;胥方元;欧小毅因版权原因，仅展示原文概要，查看原文内容请购买。
不同浓度地塞米松对成骨样细胞OS-732细胞凋亡和细胞周期的影响
不同浓度地塞米松对成骨样细胞OS-732细胞凋亡和细胞周期的影响夏雄智;樊粤光;刘武;郑晓辉【期刊名称】《广州中医药大学学报》【年(卷),期】2008(25)4【摘要】[目的]通过不同浓度地塞米松(DMX)体外培养成骨样细胞OS-732,观察糖皮质激素对其凋亡和细胞周期的影响.[方法]选择细胞密度为1×105/mL且贴壁生长良好的OS-732细胞,设不同浓度给药组(即DMX1、DMX2、DMX3组,分别加入浓度为10-7、10-8、10-9 mmoL/L的DMX与RPMI-1640培养)和空白对照组(仅加入RPMI-1640培养),于24 h和48 h两个时间点检测细胞各项DNA含量及细胞周期.[结果]在24 h时间点,DMX1组G2/M期DNA含量显著增加(P＜0.01);DMX2组各期与空白对照组比较,差异无显著性意义(P＞0.05);DM)(3组G0/G1期DNA含量显著减少(JP＜0.05).空白对照组和各给药组均出现了凋亡峰,DMX1组细胞凋亡率显著下降(P＜0.05),DMX3组细胞凋亡率显著上升(P＜0.01).在48 h时间点,DMX1组G2/M期DNA含量显著增加(P＜0.05),细胞凋亡率显著下降(P＜0.05);DMX2组和DMX3组细胞凋亡率显著上升(P＜0.01),S期DNA含量显著减少(P＜0.01).[结论]糖皮质激素使用的时间和量对成骨样细胞的作用不同,小剂量糖皮质激素(生理需要量)对成骨样细胞的增殖具有促进作用,高剂量糖皮质激素(超过生理需要量)对成骨样细胞的增殖和分化具有抑制作用.【总页数】4页(P355-358)【作者】夏雄智;樊粤光;刘武;郑晓辉【作者单位】广东省第二中医院,广东广州,510095;广州中医药大学第一附属医院,广东广州,510405;广西中医学院第一附属医院,广西南宁,530023;广州中医药大学第一附属医院,广东广州,510405【正文语种】中文【中图分类】R684【相关文献】1.化疗药物对体外培养OS-732人成骨肉瘤细胞凋亡及细胞周期的影响 [J], 张文武;袁玮;刘一2.不同浓度的吗啡与5-氟尿嘧啶联合应用对MCF-7乳腺癌细胞凋亡与细胞周期的影响 [J], 王志学;孙立新;李汝泓;雷燕;于铁莉;邱利飞;闫彩云3.17β-雌二醇对人成骨样细胞OS-732增殖和分化的影响 [J], 高秀辉4.不同浓度伊马替尼对大鼠C6胶质瘤细胞凋亡和细胞周期的影响 [J], 杨凌;许重远;陈晓华;王克万;李国锋;陈志良5.不同浓度米非司酮对体外培养子宫肌瘤细胞周期的影响及其诱导的细胞凋亡 [J], 杨彦;陈小芳;陈亚梅;吴秀玲;胡作为;肖群因版权原因，仅展示原文概要，查看原文内容请购买。
地塞米松对脊髓损伤后TNF-α和IL-6表达的影响
Ｔ － ￣ａ ｄ Ｉ ６ ｉ ｐ ｎ ｌ ｏｄ ＮＦ ｃ ｎ Ｌ一 ｎ ｓ ｉａ ｒ ．Ｒｅ ｕｔ ： ＮＦ ｃ ｎ Ｌ ６ １ ｅ ｉ ｃ ｓ ｌ Ｔ ｓ － ￣ａ ｄ Ｉ － － ｉ ｍｍｕ ｏ ｒｄ ｃ ｓｈ ｒ ｌ ｂ ｅｖ ｄ ｉ ｏｍａ ｋ ｎ ｐ ｏ ｕ ｔｗａ ａｄｙ ｏ ｓｒｅ ｎ ｎ ｒ ｌ
邓 莉， 王特 为 ， 李 明
（ 州医学院神经生物研究室 ， 川泸州 泸 四 ６ ６ ０ ；昆 明 医 学 院 解 剖教 研 室 ） ４ ００
摘
要 目的 ： 讨 实 验 性 大 鼠 脊 髓 挫 伤 后 ， 性 期 炎 症 因 子 ： 瘤 坏 死 因子 一 ｔＴ － ｔ和 白介 素 一 （Ｌ ６ 在 脊 髓 内 的 表 探 急 肿 ｏ ＮＦ ｃ） （ ６ Ｉ一 ）
ｇｏ ｐｔｅ ｏ ｎｒａｅ ｔｌ ｐ ｏ ｒｐ ｓ ｏ ｅａｉｎ； ｅ ｒｅ ｏｎ ｒ ａ ａ ４ ｈ ｏ Ｔ Ｆ ｒａｈ ｄｔｅｐ ａ ｔ ｒｕ ； ｙｂ ｔ ｉｃｅｓｄａ ｏｆ ｕ ｏｔ ｐ ｒｔ ）ｒｔ ｎ ｄｔ ｏｍ ｌ ｔ ８ ｐ ． Ｎ 一 ｅｃ ｅ ｅｋａ ｈ ｈ ｈ ｈ ｏ ｕ ｈ
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地塞米松对成牙骨质细胞增殖和矿化功能的调节作用
地塞米松对成牙骨质细胞增殖和矿化功能的调节作用作者：陈瑾兰泽栋陈良娇童晓洁来源：《中国美容医学》2014年第13期[摘要]目的：研究不同浓度地塞米松对成牙骨质细胞增殖、矿化能力的影响。
方法：本研究设3个实验组和1个对照组，对体外培养的成牙骨质样细胞OCCM-30分别加入1×10-5mol/L、1×10-6mol/L、1×10-7mol/L的地塞米松作为实验组，对照组不加药。
72h后提取细胞总RNA，用实时荧光定量PCR（Q-PCR）方法检测成牙骨质细胞矿化相关基因mRNA表达的变化。
CCK-8法检测地塞米松对成牙骨质细胞增殖的影响，采用碱性磷酸酶活性检测、茜素红染色对地塞米松作用后成牙骨质细胞生物学特性作初步观察。
结果：地塞米松在高浓度时有抑制成牙骨质细胞增殖的作用。
和对照组相比，实验组ALP活性增高，矿化结节形成明显增多，Q-PCR结果显示与细胞矿化相关基因 ALP、BSP、OCN、Runx-2 mRNA表达与对照组相比明显增高。
结论：地塞米松可以增加成牙骨质细胞矿化功能，并可能由此影响牙根吸收和修复过程。
[关键词]成牙骨质细胞；地塞米松；牙根吸收与修复[中图分类号]R783 [文献标识码]A [文章编号]1008-6455（2014）13-1071-05牙周组织再生包括牙周膜、牙槽骨和牙骨质的再生。
成牙骨质细胞是牙周组织中牙骨质形成重要的功能细胞，在牙根形成、牙周病牙骨质修复及牙根吸收与修复过程中起着关键性作用，其主要功能是形成牙骨质基质[1]。
地塞米松是一种有效的类固醇骨刺激因素，它能够促进成骨细胞分化，促进骨生成[2-3]。
成牙骨质细胞和成骨细胞同样作为矿化组织的分泌功能细胞，并且也有可能来源于同一前体细胞[4]，地塞米松是否在成牙骨质细胞分化中有着相似的功能和作用呢？本研究旨在探讨地塞米松对成牙骨质细胞粘附及矿化功能的影响，为临床牙骨质再生提供新的思路和方法。
体外条件下地塞米松和骨髓细胞对肺组织细胞的影响
体外条件下地塞米松和骨髓细胞对肺组织细胞的影响高岩;徐凯智;陈楠;文翠;刘庆阳【摘要】①目的研究在体外条件下地塞米松及骨髓细胞对肺组织细胞的影响.②方法取小鼠肺组织细胞体外培养,通过脂多糖(LPS,10μg/mL)刺激建立肺组织损伤模型,给予骨髓细胞(5×106)及经过不同浓度地塞米松(2ng/mL,4ng/mL,10ng/mL,1μg/mL)处理的骨髓细胞(5×106)进行处理,5天后检测各组细胞的形态及凋亡情况.再通过LPS滴鼻制作急性肺损伤小鼠模型(50μg/只),再分别给予回输生理盐水、地塞米松、荧光骨髓细胞、地塞米松和荧光骨髓细胞,比较各组死亡率.③结果与单纯肺组织细胞组相比,其他各实验组细胞的形态均较好,凋亡率均较低,其中同时给予地塞米松2ng/mL处理的骨髓细胞实验组的细胞数量最多,形态最好,凋亡率最低(P<0.05);给予地塞米松和荧光骨髓细胞处理的实验组小鼠死亡率最低(P=0.034). ④结论在体外培养条件下,地塞米松2ng/mL可以加强骨髓细胞对损伤肺组织的保护作用,维持肺组织细胞的形态,降低肺组织细胞的凋亡.【期刊名称】《河北联合大学学报（医学版）》【年(卷),期】2017(019)004【总页数】5页(P263-267)【关键词】体外条件;地塞米松;荧光骨髓细胞;肺组织细胞;凋亡【作者】高岩;徐凯智;陈楠;文翠;刘庆阳【作者单位】华北理工大学河北唐山 063000;唐山工人医院麻醉科;华北理工大学河北唐山 063000;华北理工大学河北唐山 063000;煤炭总医院【正文语种】中文【中图分类】R614.1目前研究认为，脓毒症是由感染引起的全身炎症反应综合征(SIRS)，多由细菌、病毒、真菌、支原体、寄生虫感染引起。
其中细菌感染占绝大多数，以凝固酶阴性的葡萄球菌、大肠埃希菌、金黄色葡萄球菌、肠球菌、肺炎克雷伯杆菌多见[1]。
脓毒症病情十分凶险，死亡率非常高。
地塞米松的副作用
地塞米松的副作用地塞米松是一种糖皮质激素类药物，常用于治疗多种炎症性疾病和免疫性疾病。
虽然它对许多患者的病情有显著的改善作用，但同时也存在一些副作用。
以下是地塞米松的主要副作用：1. 免疫抑制：地塞米松对免疫系统具有抑制作用，可能导致免疫系统功能下降，降低患者的抵抗力，容易感染。
2. 消化系统问题：地塞米松可能导致胃肠道问题，如胃炎、胃溃疡和消化道出血。
长期使用地塞米松还可能导致胃肠穿孔和胃肠梗阻。
3. 骨骼问题：地塞米松可能引起骨质疏松和骨折的风险增加，特别是在长期使用和高剂量使用的情况下。
这是因为地塞米松会干扰钙的代谢和骨骼的生长。
4. 水肿：地塞米松可能导致水钠潴留，使患者出现水肿和高血压。
长期使用高剂量的地塞米松还可能出现肾功能损害。
5. 代谢影响：地塞米松会干扰碳水化合物代谢，可能导致血糖升高和糖尿病的发生。
此外，它还可能引起体重增加和脂肪分布异常。
6. 眼部问题：长期使用地塞米松可能导致眼部问题，如白内障和青光眼。
因此，对于长期使用地塞米松的患者，需要定期进行眼部检查。
7. 心血管问题：使用地塞米松的患者可能出现高血压、心律失常和心衰等心血管问题。
8. 精神和神经系统问题：地塞米松可能导致精神和神经系统问题，如焦虑、抑郁、失眠、兴奋和躁狂等。
9. 皮肤问题：地塞米松可能导致皮肤脆弱，易出现皮肤瘀斑、红蓝色斑等。
需要注意的是，地塞米松的副作用发生率和严重程度与使用剂量和使用时长有关。
因此，患者在使用地塞米松时应严格按照医生的指导进行，不可随意停药或改变剂量。
同时，与医生密切沟通，定期进行相关检查，以监测和减轻副作用的发生。
地塞米松诱导PC12细胞氧化应激损伤及对NOX2表达的影响_司秀莲
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安徽医科大学学报 Acta Universitatis Medicinalis Anhui 2012 Dec； 47（ 12）
养板 中 的 液 体，每 孔 加 入 150 μl DMSO，振 荡 10 min，使结晶物充分溶解后用酶标仪测定 490 nm 处 吸光度（ A） 值。细胞存活率按公式计算： 细胞存活 率（ % ） = A 实验组 / A 正常对照组 × 100% 。 1． 2． 3 ROS 水平检测 采用对 ROS 敏感的荧光探 针 DHE，检测 PC12 细胞内的 ROS 含量。将 PC12 细胞 接 种 于 24 孔 板 内，实 验 分 组 及 药 物 处 理 同 1. 2. 2。弃去原培养液，24 孔板内加入 PBS 洗 3 次， 分别加入 500 μl PBS 和 15 μmol / L DHE，37 ℃ 孵育 30 min，PBS 洗涤 3 次。将载玻片置于倒置荧光显 微镜下观察、拍照，用 Image Pro Plus 6. 0 多功能图 像分析软件分析各组细胞的平均荧光强度。 1． 2． 4 RT-PCR 检测 PC12 细胞内 NOX2、Rac1 mRNA 的表达 将 PC12 细胞接种于 6 孔板内，取正常 对照组、H2 O2 （ 100 μmol / L） 组、DEX（ 5、10 μmol / L） 组的细胞，TRIzol 法 提 取 PC12 细 胞 总 RNA。取 2 μg RNA 按逆转录试剂盒说明书操作（ 反应体积 20 μl） 。取 2 μl 逆转录合成的 cDNA 用于 PCR 扩增 （ 反应 体 积 25 μl ） 。PCR 反 应 条 件： 94℃ 3 min、 94℃ 30 s、55℃ 1 min、72℃ 1 min 循环 33 次，72℃ 10 min。引物序列及 片 段 长 度： β-actin 上 游 引 物： 5'-GAGACCTF CAACACCCCAGCG-3'，下游引物： 5'TCGGGGCATCGGAACGCCTCA-3'，606 bp； NOX2 上 游引 物： 5'-ACTGGGCTGTGAATGAAGG-3'，下 游 引 物： 5'-CCTCCGAATGGTTTTGGTAG-3'，589 bp； Rac1 上游引物： 5'-CCACCGTCTTTGACAACTATTC-3'，下 游引物： 5'-ACTCCAGGTATTTGACAGCA-3'，369 bp。 PCR 产物在溴化乙锭染色的 1. 5% 琼脂糖凝胶上电 泳后拍照，进 行 吸 光 度 扫 描，结 果 以 各 目 的 条 带 与 β-actin 的比值表示。 1． 2． 5 Western blot 检 测 PC12 细 胞 内 NOX2、 p47phox 蛋 白 的 表 达 取 正 常 对 照 组、H2 O2 （ 100 μmol / L） 组、DEX（ 5、10 μmol / L） 组的细胞，收集细 胞后，加入 150 μl 蛋白裂解液，冰上反复吹打，4℃ 12 000 r / min，离心 15 min，取上清液加入上样缓冲 液，100℃ 煮沸 5 min 使蛋白充分变性，电泳并湿转 PVDF 膜。5% 脱脂奶粉封闭 2 h 后，TBST 洗 10 min × 3 次，分别使用 NOX2、p47phox 以及 β-actin 抗体， 摇床上 4℃ 孵育过夜，TBST 洗 10 min × 3 次，用辣 根过氧化物酶标记的二抗室温下孵育 2 h，TBST 洗 10 min × 3 次，最后使用 ECL 化学发光法进行显影。 采用 Image J 软件对实验结果进行分析，结果以目标 条带与 β-actin 条带的比值表示。 1． 3 统计学处理 采用 SPSS 13． 0 软件进行分析，
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地塞米松对骨髓基质细胞生物学特性的影响魏宽海 裴国献 郑 磊 王 前 金 丹 胡罢生 【摘 要】 目的 探讨地塞米松对体外培养的骨髓基质细胞增殖和分化等生物学特性的影响。
方法 取4～6周龄新西兰兔双侧股骨骨髓3m l,体外分离,培养至第3代骨髓基质细胞,分别用地塞松浓度为0、10-10、10-9、10-8、10-7和10-6mo l L的培养基,作用2、4及6天后,测定骨髓基质细胞的分裂增殖能力和碱性磷酸酶活性。
结果 地塞米松对骨髓基质细胞的增殖起抑制作用,并随地塞米松浓度的升高而增强,其浓度大于10-8mo l L后抑制作用越显著。
地塞米松在抑制增殖的同时,可显著增强骨髓基质细胞的碱性磷酸酶活性,浓度越高作用也越显著,但超过10-8mo l L后各浓度的作用效果无显著差别;这种作用随时间的延长而增强,至6天时与对照组相比可增强2～4倍。
结论 地塞米松抑制骨髓基质细胞的增殖,但可促进其分化为成骨细胞,浓度为10-8mo l L较合适。
【关键词】 组织工程 骨髓基质细胞 地塞米松 增殖 分化THE EFFECTS OF D EXA M ETHAS ONE ON B I OLOGI CAL CHARACTER ISTI CS OF B ONE M ARR OW STR OM AL CELL S W E I K uan2ha i,P E I Guo2x ian,ZH EN G L ei,et a l.D ep a rt m en t of O rthop ed ics and T raum a tology,N anf ang H osp ita l,the F irst M ilita ry M ed ica l U n iversity.Guang z hou Guang d ong,P.R.Ch ina 510515【Abstract】 Objective To investigate the effects of dexam ethasone on the p ro liferati on and differen tiati on of bone m arrow strom al cells(M SC).M ethods M SC w ere iso lated and cu ltu red in v itro.A fter treatm en t w ith differen t concen trati on s of dexam ethasone(0,10210,1029,1028,1027and1026mo l L),the p ro liferati on and alkaline pho sphatase(AL P)activity of M SC w ere m easu red to evaluate the effect of dexam ethasone on the b i o logical characteristics of M SC.Results D exam ethasone inh ib ited cell p ro liferati on.W ith the increase of concen trati on of dexam ethasone,the effect w as enhanced,w h ich w as mo re sign ifican t w hen the concen trati on of dexam ethasone w as over1028mo l L.A t the sam e ti m e,dexam ethasone p romo ted the activity of AL P.T h is effect w as enhanced w ith the increase of concen trati on of dexam ethasone,bu t the alterati on w as s m all w hen the concen trati on of dexam ethasone w as over1028mo l L.T he effects increased w ith the ti m e.T he activity of AL P w as enhanced2to4 ti m es w ith the dexam ethasone fo r6days.Conclusion D exam ethasone inhab it the p ro liferati on of M SC,w h ile induce them to differen tiate in to o steob lasts.T he app rop riate concen trati on of dexam ethasone w as10-8mo l L.【Key words】 T issue Engineering Bone m arrow strom al cells D exam ethasone P ro liferati on D ifferen tiati onFounda tion ite m s:N ati onal Basic Science R esearch and D evelopm en t Gran ts(973)(G1999054308);N ati onal N atu ral Science Foundati on of Ch ina(39970743) 用骨组织工程的方法修复骨缺损克服了以往方法的一些不足[1]。
骨组织工程中种子细胞的选择与培养是最基本的环节,其来源有骨、骨外膜、骨髓和骨外组织。
综合相比之下,以骨髓为最优[2]。
但骨髓基质细胞(bone m arrow strom al cells,M SC)具有多向分化潜能,为了提高其成骨效率,有必要选择合适的培养条件,以促进M SC分裂增殖并定向分化为成骨细胞。
为此设计进行实验,观察地塞米松对M SC增殖与分化特性的影响,以期建立一种理想的M SC体外培养体系。
1 材料与方法111 主要仪器与试剂基金项目:国家重点基础研究发展规划(973):组织工程的基本科学问题(G1999054308);国家自然科学基金资助项目(39970743)作者单位:第一军医大学南方医院创伤骨科(广州,510515) 倒置相差显微镜(O lym p u s),752紫外分光光度计(上海),B i o2rad450型酶联免疫检测仪(U SA),R PM I1640、96孔培养板(Gibco),胎牛血清(四季青生物制品公司),胰蛋白酶、T riton2100、M T T、二甲亚砜、牛血清白蛋白、考马斯亮蓝G2250 (天象人生物制品公司),地塞米松、维生素C (Sigm a),碱性磷酸酶试剂盒(南京建成生物工程研究所)。
112 方法11211 M SC的培养 取4～6周健康新西兰大白兔,双侧股部剪毛,碘酒、酒精消毒后,用16号骨穿针自股骨大转子部穿入骨髓腔,注射器抽吸双侧股骨骨髓共3m l,混入无血清的1640培养基反复抽吸吹打。
离心、过滤网,经4号针头反复抽吸,制成单细胞悬液。
加入315m l含15%FB S的培养基,以・232・Ch inese J R eparative and R econstructive Surgery,2001,V o l15(4)3×106单个核细胞 m l 的细胞数接种入培养瓶中,在37℃、5%CO 2及饱和湿度条件下培养,5天后半量换液,以后2～3天半量换液一次。
待细胞汇合成单层后,用0125%胰蛋白酶消化,进行传代培养,常规2～3天半量换液。
11212 细胞增殖测定 将传至第3代的细胞以5×103 孔密度接种于96孔培养板,每孔加入15%血清培养基200Λl ,在37℃、5%CO 2及饱和湿度条件下培养。
24小时细胞完全贴壁吸去培养基,分别加入不同浓度的无血清诱导培养基200Λl ;地塞米松浓度分别为0(对照组)、10-10、10-9、10-8、10-7和10-6m o l L (实验组),每组5孔,于第2、4及6天用M T T 法分析M SC 的存活和增殖能力。
11213 细胞分化测定 细胞接种及处理同上,分别于第2、4及6天用考马斯亮蓝法测细胞总蛋白质,检测细胞碱性磷酸酶(alkaline p ho sp hatase ,AL P )活性,计算平均每毫克蛋白质的AL P 活性。
113 统计学处理方法使用SPSS 统计软件对数据进行方差分析。
组间t 检验,P 值<0105为有显著性差异。
2 结果211 地塞米松对骨髓基质细胞增殖的影响M T T 法测定不同浓度地塞米松作用后对M SC增殖的影响结果见图1、2。
从图1可见,地塞米松抑制M SC 的增殖,随浓度的升高而作用愈显著。
与对照组相比较,10-9m o l L 、10-8m o l L 有显著性差异(P <0105),10-7m o l L 、10-6m o l L 有非常显著性差异(P <0101)。
从图2可见,地塞米松抑制M SC 的增殖,但同一浓度的不同时间点相比,M SC 数随时间延长仍呈上升趋势(P <0101)。
212 地塞米松对骨髓基质细胞分化的影响地塞米松对M SC 分化的影响结果见图3、4。
从图3可见,地塞米松可显著增强M SC 的AL P 活性,浓度越高作用越显著,至第6天时与对照组相比可增强2～4倍。
与对照组比较,10-9m o l L 有显著性差异(P <0105),10-8、10-7和10-6m o l L 均有非常显著性差异(P <0101)。
但浓度超过10-8m o l L 后各组之间无显著差异(P >0105)。
从图4可见,同一浓度的不同时间点相比,随时间延长M SC 的AL P 活性显著增强(P <0101)。
图1 不同浓度地塞米松作用6天后对M SC 增殖的影响 图2 地塞米松10-8mol L 不同作用时间对M SC 增殖的影响 图3 不同浓度地塞米松作用6天后M SC -AL P 活性影响 图4 地塞米松10-8mol L 不同作用时间的M SC -AL P 活性影响F ig .1 The effect on proliferation of M SC af ter treat men t with differen t concen tration s of dexamethasone for 6days F ig .2 The effect on proliferation of M SC af ter treat men t with 10-8mol L dexamethasone for 2,4and 6days F ig .3 The activ ity of AL P of M SC af ter treat men t with differen t concen tration s of dexamethasone for 6days F ig .4 The activ ity of AL P of M SC af ter treat men t with 10-8mol Ldexamethasone for 2,4and 6days・332・中国修复重建外科杂志2001年第15卷第4期3 讨论将组织工程方法应用于临床修复骨缺损已成为趋势。