电喷雾离子化多级质谱解析环孢菌素结构
环孢素的分离纯化
环孢素的分离纯化
环孢素（商品名赛斯平，新山地明等）是土壤中一种真菌的活性代谢物，由11个氨基酸组成的环状多肽，属于强效免疫抑制剂。
临床上主要用于肝、肾以及心脏移植的抗排异反应。
针对这种高效免疫抑制类药物，市场对其高纯度药物有挑剔的
要求。
经过研究，纳微科技开发的硅胶基质填料可用于环孢素的精提过程。
该填料能够承受pH2.0-9.0范围，相对耐碱程度较好。
经过一步硅胶基质填料，使用简单水溶液和有机相纯化环孢素粗品，将80.0%
（HPLC ）提高至99.5%
环孢素纯化用填料的性能如下所示：
硅胶基质填料对环孢素纯化后色谱图
m A u
Min
该款填料除了用于环孢素纯化外，还可用于其他天然提取物、抗生素、半合成药物等，具体可见下表：。
环孢素浓度报告
环孢素浓度报告1. 引言环孢素是一种重要的天然产物，具有广泛的生物活性和药理学价值。
为了确定环孢素的浓度，我们进行了一系列实验，并进行了数据分析。
本报告将详细介绍我们的实验流程、结果和讨论。
2. 实验方法2.1 材料准备•环孢素标准品•甲醇•乙酸乙酯•水样2.2 样品处理1.为了制备环孢素的标准曲线，我们首先准备了一系列浓度不同的环孢素标准品溶液。
我们准备了10个不同浓度的标准品溶液，浓度范围从0.1 mg/L到10 mg/L。
2.将每个标准品溶液用甲醇稀释至一定体积，以获得更低的浓度。
3.使用高效液相色谱（HPLC）分析方法，测量每个标准品溶液的峰面积。
2.3 HPLC 分析1.我们使用了 XYZ 型号的 HPLC 仪器进行分析。
仪器的参数设置如下：–流动相：甲醇/水（70/30）–柱温：25 °C–流速：1 mL/min–检测波长：254 nm2.我们将处理后的样品溶液分别注入 HPLC 仪器进行分析。
3.记录每个样品的峰面积。
3. 数据分析3.1 标准曲线绘制使用标准品的浓度和对应的峰面积数据，我们可以绘制标准曲线。
标准曲线可以用来确定未知样品中环孢素的浓度。
3.2 未知样品分析使用同样的HPLC 分析方法，我们对未知样品进行了分析，并记录了其峰面积。
3.3 浓度计算根据标准曲线的斜率和截距，我们可以将未知样品的峰面积转换为环孢素的浓度。
通过简单的计算，我们得到了未知样品中环孢素的浓度。
4. 结果与讨论经过计算，我们得到了未知样品中环孢素的浓度为 X mg/L。
通过对实验数据的分析，我们对测定方法的准确性和可靠性进行了评估。
5. 结论本实验使用 HPLC 方法测定了环孢素的浓度，并通过标准曲线将未知样品的峰面积转换为环孢素的浓度。
根据实验结果，我们发现未知样品中环孢素的浓度为 X mg/L。
这个方法可以用于环孢素浓度的快速分析和测定。
6. 参考文献[1] 张三, 李四. 环孢素浓度分析方法的研究. 分析化学, 20XX, XX(XX): 123-135.[2] 环孢素浓度测定标准方法规程. 国家标准化管理委员会, 20XX.注意：本文档仅用于讨论实验过程和结果，并没有涉及任何与AI人工智能相关的内容。
基质辅助激光解析电离质谱和电喷雾质谱共同快速确证达托霉素结构
DOI :10.11895/j.issn.0253⁃3820.140385基质辅助激光解析电离质谱和电喷雾质谱共同快速确证达托霉素结构黄亚娟1,2 张拓1,2 韩治国1,2 孟晓光1,2 宋纯艳1,2刘曙晨3 郑俊杰*1,2,3 魏开华*1,2,31(北京正旦国际科技有限责任公司,北京102206)2(北京蛋白质组研究中心,蛋白质组学国家重点实验室,国家蛋白质科学中心(北京),北京102206)3(军事医学科学院放射与辐射医学研究所,北京100850)摘 要 运用基质辅助激光解析电离⁃飞行时间串联质谱(MALDI⁃TOF /TOF MS)和电喷雾⁃四级杆⁃飞行时间质谱(ESI⁃Q⁃TOF MS)快速确证环脂肽达托霉素的结构㊂首先,ESI 检测达托霉素相对分子量为1619.7107,与理论值偏差0.0007㊂选择其双电荷峰m /z 809.848作为母离子进行ESI 串联质谱(MS /MS)测定,成功匹配了达托霉素环外氨基酸序列C 9H 19CO⁃Trp⁃Asn⁃Asp㊂其次,优化LiOH 裂解达托霉素的实验条件,以MALDI⁃TOF /TOF MS 监测开环效果,获得95%以上的开环样本后,分别运用MALDI 和ESI 进行MS /MS 测定,达托霉素开环产物的b +和y +全部被匹配,达托霉素全部氨基酸序列得到确证㊂最后,对开环产物的ESI⁃MS /MS 条件进一步优化,获得了丰富的低端碎片离子,解析了脂肪酸链结构,并绘制了脂肪酸链的裂解图㊂本方法快速㊁简便㊁准确,是确证环脂肽类化合物结构的可靠方法㊂关键词 达托霉素;环脂肽;串联质谱;电喷雾质谱 2014⁃04⁃30收稿;2014⁃09⁃22接受本文系国家高技术研究发展计划863项目(Nos.2012AA020205,2014AA020906)㊁国家科技部传染病重大专项(No.2013ZX10002009⁃001⁃001)㊁国家重大科学仪器设备开发专项(No.2012YQ18011710)资助*E⁃mail:wkh2006@;jjzheng@1 引 言达托霉素(Daptomycin)是从玫瑰孢链霉菌(Streptomyces roseosporus)发酵液中提取的一种新型环脂肽类抗生素,能迅速杀死绝大部分革兰氏阳性菌,并且在体外对已呈现甲氧西林㊁万古霉素和利奈唑烷等耐药性质的分离菌株具有强活性[1]㊂达托霉素分子式为C 72H 101N 17O 26,含1个亲水核及1个亲脂尾[2],它具有新颖的化学结构:4位苏氨酸(Threonine ,Thr)的羟基与末尾13位犬尿氨酸(Kynurenine,Kyn)的羧基生成酯键,形成含10个氨基酸的环肽;1位色氨酸(Tryptophan ,Trp)的N 末端与十碳脂肪酸形成酰胺键,封闭了肽段的N 端[3];分子中包括3个非蛋白源的特殊氨基酸:鸟氨酸(Ornithine,Orn),3⁃甲基谷氨酸(3⁃Glutamic acid,3⁃mGlu)和Kyn [4]㊂化学结构见图1㊂ 图1 达托霉素结构Fig.1 Structure of daptomycin 达托霉素的结构确证难点是需同时确证环肽的氨基酸序列和环上的脂肪酸链结构,尤其还包含多个非天然氨基酸㊂目前,国内对达托霉素的研究报道多集中在提取㊁分离㊁合成和抗菌活性上[5~7],未见对其结构鉴定㊂虽然,对其结构鉴定已有文献报道[8],但是多采用核磁共振法,而核磁共振法具有样品用量大㊁解谱复杂㊁分析时间长等缺点㊂近年来质谱技术得到了广泛的应用和发展,基于软电离技术的ESI 质谱和基质辅助激光解析电离质谱(MALDI⁃MS)是两种最常用的生物质谱,是蛋白质和多肽结构确证的重要手段[9,10]㊂本研究利用MALDI 和ESI 质谱成功地对达托霉素进行了一级结构确认,方法简便㊁快第43卷2015年1月 分析化学(FENXI HUAXUE) 研究报告Chinese Journal of Analytical Chemistry 第1期63~6846 分析化学第43卷速,可为环脂肽类抗生素药物结构分析提供参考㊂2 实验部分2.1 仪器与材料基质辅助激光解吸电离飞行时间质谱仪(MALDI⁃TOF/TOF),micrOTOF⁃Q TMⅡ质谱仪(Bruker公司);注射泵(Harvard公司);C18⁃ZipTip脱盐柱(Millipore公司)㊂α⁃氰基⁃4⁃羟基肉桂酸(α⁃CHCA,Fluka 公司);乙腈(ACN,Fisher公司);三氟乙酸(TFA)和甲酸(FA)(Sigma公司);LiOH(国药集团化学试剂有限公司);达托霉素(华北制药股份有限公司);Milli⁃Q超纯水㊂2.2 实验方法2.2.1 样品直接ESI⁃MS/MS测定 称取样品干粉适量配成0.01mol/L的样品溶液,取样品溶液15μL,经ZipTip柱脱盐后,用0.1%FA溶液稀释到0.01g/L,用100μL直喷进样㊂2.2.2 样品开环及MS/MS检测 取0.01mol/L样品溶液10μL,加入90μL0.025mol/L LiOH溶液,混匀,分别在20和25℃下反应0.5,1,1.5,2和3h㊂取各反应溶液0.5μL点靶,室温风干后覆盖α⁃CHCA基质(5g/L,含0.1%TFA的50%ACN溶液),MALDI⁃TOF/TOF检测㊂对最佳开环条件下的样品反应液经ZipTip柱脱盐后,用0.1%FA溶液稀释至0.01g/L,取100μL ESI直喷进样㊂2.2.3 仪器参数 (1)MALDI⁃TOF/TOF MS仪:加速电压18.2kV;离子源电压20kV;N2激光,波长337nm,能量3500,PII标准品校正至误差在0.1Da以内,串联质谱检测能量4000,PII标准品离子峰m/z1046.540校正至误差0.05Da以内㊂(2)ESI⁃MS/MS直喷进样仪:源温180℃,采集范围:m/z50~ 2500,扫描速度:0.5s/次,串联质谱碰撞能量:20~50eV㊂数据分析软件为Data Analysis4.1 (Bruker)㊂3 结果与讨论3.1 达托霉素环外氨基酸序列的确定ESI测定达托霉素的相对分子量为1619.7107,与其元素组成C72H101N17O26计算所得的理论单同位素相对分子量1619.7100的偏差为0.0007,样品实测分子量与理论分子量一致㊂选择达托霉素双电荷峰m/z809.848作为母离子进行ESI⁃MS/MS测序,质谱图见图2㊂达托霉素含3个非蛋白源的特殊氨基酸,根据图1确定特殊氨基酸残基的元素组成后,计算其单同位素相对分子量,计算得出Orn,3⁃mGlu和Kyn残基的单同位素相对分子量分别为114.0794, 143.0615和190.0742㊂另外,1位的Trp经脂肪酸链 C9H19CO”修饰,其残基相对分子量由C9H19CO和Trp残基两部分组成,值为341.2228㊂由于达托霉素含有环肽,软件无法解析碎片㊂人工解析的结果表明,达托霉素y10,y11,y12,b1,b2离子均被匹配,并且还匹配到a1离子㊁Trp残基㊁达托霉素㊁y12离子及达托霉素的失水峰,确定出达托霉素环外氨基酸序列为C9H19CO⁃Trp⁃Asn⁃Asp㊂3.2 开环达托霉素氨基酸序列的确定直接ESI⁃MS/MS未成功解析达托霉素环内氨基酸序列,因此对其开环裂解㊂达托霉素环肽上的酯键可通过LiOH溶液温和地水解,形成线性肽,相对分子量相应地增加18.0106㊂MALDI⁃TOF/TOF⁃MS 耐盐能力强㊁分析速度快㊁图谱简单㊁适合通量分析,利用其监测达托霉素开环程度十分有益㊂控制达托霉素的终浓度为0.001mol/L,LiOH的终浓度为0.02mol/L,在20和25℃下反应不同时间,以开环产物与未开环样品的峰高之比评价开环效果㊂结果表明,25℃反应1.5h开环最完全,开环产物峰高约为未开环样品峰高的10倍,超过95%的达托霉素已开环㊂此条件与文献[11]基本一致㊂选择达托霉素开环产物单电荷质谱峰m/z1638.700作为母离子,MALDI⁃TOF/TOF MS/MS测序结果(图3)显示,b离子从b1至b12连续匹配,y离子仅y3和y5未被匹配,并且还匹配到a1㊁a12离子㊂匹配碎片离子强度较高,最大质量偏差小于0.05Da,测得氨基酸序列与理论连接一致㊂选择开环产物的双电荷峰m/z819.854进行ESI⁃MS/MS测序,质谱峰去卷积化后运用Biotools Version3.2软件进行碎片离子归属,肽段序列结果如图4所示㊂由于Orn,3⁃mGlu,Kyn及N⁃端被脂肪图2 达托霉素ESI⁃MS /MS 去卷积质谱图Fig.2 Deconvoluted mass spectrum of daptomycin by ESI⁃MS /MS图3 达托霉素开环产物MALDI⁃TOF /TOF 串联质谱图Fig.3 MALDI⁃TOF /TOF tandem mass spectra of ring⁃opened daptomycinmE 为3⁃甲基谷氨酸(3⁃mGlu),(C 9H 19CO)为脂肪链(mE stands for 3⁃methyl glutamic acid(3⁃mGlu),(C 9H 19CO)means fat chain 酸封闭的Trp 在Biotools Version3.2中不存在,因此,将这4个氨基酸残基用软件中相似的常见氨基酸残基进行自定义修饰演变㊂Orn 演变为Lys 去掉CH 2,残基质量为128.0950⁃14.01564,在序列中标记为K *;3⁃mGlu 演变为Glu 加上CH 2,残基质量为129.0459+14.01564,标记为E *,Kyn 演变为Phe 加上CONH,其残基质量为147.0684+43.0058,标记为F *;N鄄端被脂肪酸封闭的Trp 演变为Trp 加上C 10H 19O,残基质量为186.07931+155.1435,标记为W *㊂测序结果表明,b㊁y 离子均连续匹配,所有匹配离子的误差均小于0.04Da(表1),所测环内外氨基酸序列结果与达托霉素理论序列一致㊂两种质谱检测结果相互验证,达托霉素氨基酸序列正确,开环后序列为W *⁃N⁃D⁃T⁃G⁃K *⁃D⁃A⁃D⁃G⁃S⁃E *⁃F *,即:(C 9H 19⁃CO)⁃Trp⁃Asn⁃Asp⁃Thr⁃Gly⁃Orn⁃Asp⁃Ala⁃Asp⁃Gly⁃Ser⁃mGlu⁃Kyn 56第1期黄亚娟等:基质辅助激光解析电离质谱和电喷雾质谱共同快速确证达托霉素结构 图4 ESI⁃MS /MS 测定达托霉素开环产物氨基酸序列结果Fig.4 Amino acid sequence result of ring⁃opened daptomycin by ESI⁃MS /MS 表1 ESI⁃MS /MS 测定达托霉素开环产物离子匹配误差(Da)表Table 1 Mass difference (Da)of matched ions of ring⁃opened daptomycin by ESI⁃MS /MS N⁃端序列N⁃Term Sequence 离子类型Ion type a a⁃17a⁃18b b⁃17b⁃18c y z C⁃端序列C⁃Term sequence 0W *-0.006-0.005-0.015-0.018F *121N -0.003-0.005E *112D -0.002-0.01-0.004S 103T -0.036-0.0030.001-0.08-0.003G 94G -0.085-0.006-0.005-0.002D 85K *-0.13-0.021-0.0290.003A 76D -0.127-0.099-0.022-0.006D 67A -0.013-0.011K *58D -0.015-0.012G 49G -0.012-0.018T 310S-0.018-0.007-0.011D 211E *-0.013-0.014-0.011-0.007N 112F *-0.015-0.023-0.012W *03.3 达托霉素脂肪酸链结构确定上述两种串联质谱均检测到b1离子,其由Trp 残基和脂肪酸链C 9H 19⁃CO 两部分组成㊂对于饱和十碳脂肪酸链C 9H 19⁃CO 的结构确认重点是看其是否含有支链并确定支链的类型及位置,这需从串联质谱的低质量端离子碎片数据解析㊂为获得丰富的低端(m /z 341以下)碎片信息,优化了干燥气体的流速㊁气体温度㊁离子源温度及碰撞能量等质谱参数㊂结果表明,对质谱信号影响最大的是碰撞能量,与文献[12]报道一致㊂在碰撞能量为40eV 的条件下,质谱信号较好,碎片较多,检测结果见图5A㊂检测到脂肪酸结构相关的碎片离子有m /z 326.20,284.15,270.14,256.12,230.11,170.15及155.14,其中离子强度最大的为230.11㊂将b1离子看作C 9H 19⁃CO⁃的酰胺类衍生物,文献[13,14]报道称脂肪酸的酰胺类衍生物质谱裂解规律同脂肪酸甲酯类有机物一致,而现有文献对脂肪酸甲酯类有机物的质谱裂解规律较多,可类推到本研究达托霉素b1离子㊂直链饱和脂肪酸甲酯通过γ氢迁移和Mclafferty 重排,生成的碎片离子[CH 3-O-C(OH)=CH 2]+(m /z 74)为其基峰离子[15,16]㊂将甲酯基 -O-CH 3”换成Trp 残基,碎片离子的理论m /z 为230.1,实测值中m /z 230.11是脂肪酸链结构相关的强度最大的碎片离子,可判断出达托霉素C 9H 19⁃CO 为直链型㊂文献[16]还报道,若饱和脂肪酸含有支链,则在支链处易发生断裂㊂若甲基为支链,则会产生两个较强的碎片离子,其相差[-CH(CH 3)-](m /z 28)㊂实测值m /z 284.15与256.12相差28.03,然而这两峰的峰强较低,尤其m /z 256.12峰强低于m /z 270.14和170.15,这说明m /z 284.15与256.12两碎片离子相差的是[-CH 2CH 2-],没有支链㊂根据以上结果,推断出达托霉素66 分析化学第43卷图5 达托霉素脂肪酸链结构解析结果Fig.5 Structure analysis results of fatty acid chain in daptomycin A.达托霉素脂肪酸链ESI⁃MS /MS 结果;B.达托霉素脂肪酸链断裂模式㊂A.ESI⁃MS /MS spectrum of fat chain structure in daptomycin;B.Cleavage pattern of daptomycin fat chain.b1离子的断裂模式(图5B),直观表达了托霉素脂肪酸链的质谱断裂规律㊂本研究采用两种生物质谱MADI⁃TOF /TOF 和ESI⁃Q⁃TOF,从分子量㊁氨基酸序列及脂肪酸链结构的角度对达托霉素进行了快速结构确证,实现了对含有非蛋白源的环肽氨基酸序列和脂肪酸链结构的同时解析,对于环脂肽类抗生素药物结构分析具有参考意义㊂References 1 Tally F P,DeBruin M F.J.Antimicrob.Chemother.,2000,46(4):523-5262 Tedesco K L,Rybak M J.Pharmacotherapy ,2004,24(1):41-573 Muangsiri W,Kirsch L E.J.Pharm.Sci.,2001,90(8):1066-10754 Baltz R H.J.Antibiot.,2010,63(8):506-5115 GU Jue⁃Fen,ZHANG Yu.Anti.Infect.Pharm.,2011,8(3):149-153顾觉奋,张瑜.抗感染药学,2011,8(3):149-1536 HAN Pei,CHEN Ji⁃Ye,WANG Yan,CHEN Shao⁃Xin.Chinese Journal of Pharmaceuticals ,2011,42(6):466-471韩培,陈继业,王岩,陈少欣.中国医药工业杂志,2011,42(6):466-4717 LIU Bo⁃Ning,CANG Ji⁃Yong,ZHANG Hua.China Biotechnology ,2010,30(3):119-124刘伯宁,仓基勇,张华.中国生物工程杂志,2010,30(3):119-1248 Scott W R,Baek S B,Jung D,Hancock R E,Straus S K.Biochim.Biophys.Acta.,2007,1768(12):3116-31269 CHEN Jun,YIN Jun,GAO Shuai,XU Li,XIAO Hong⁃Zhan.Chinese J.Anal.Chem.,2012,40(3):421-426陈君,殷俊,高帅,许莉,肖宏展.分析化学,2012,40(3):421-42610 LI Guo⁃Chen,WANG Yan⁃Hong,WU Ren⁃An,WANG Shi⁃Cheng.Chem.J.Chinese Universities ,2010,31(2):269-273李国琛,王颜红,吴仁安,王世成.高等学校化学学报,2010,31(2):269-27311 D′Costa V M,Mukhtar T A,Patel T,Koteva K,Waglechner N,Hughes D W,Wright G D,de Pascale G.Antimicrob.Agents.Chemother.,2012,56(2):757-76476第1期黄亚娟等:基质辅助激光解析电离质谱和电喷雾质谱共同快速确证达托霉素结构 86 分析化学第43卷12 Thurman E M,Ferrer I,Benotti M,Heine C E.Anal.Chem.,2004,76(5):1228-123513 XING Qi⁃Yi,PEI Wei⁃Wei,XU Rui⁃Qiu,PEI Jian.Basis of Organic Chemistry.Higher Education Press,2005:231-233邢其毅,裴伟伟,徐瑞秋,裴坚.基础有机化学.高等教育出版社,2005:231-23314 YU Zhi⁃Li,WANG Yan⁃Yun.Journal of Chinese Mass Spectrometry Society,1999,20(1):57-60余志立,王燕云.质谱学报,1999,20(1):57-6015 WU Hui⁃Qin,HUANG Xiao⁃Lan,LIN Xiao⁃Shan,HUANG Fang,ZHU Zhi⁃Xin,MA Ye⁃Fen.Chinese J.Anal.Chem., 2007,35(7):998-1003吴惠勤,黄晓兰,林晓珊,黄芳,朱志鑫,马叶芬.分析化学,2007,35(7):998-100316 LOU Qiao⁃Ming,YANG Wen⁃Ge,XU Da⁃Lun,ZHENG Xian⁃Meng,XUE Chang⁃Hu.Journal of Nuclear Agricultureal Sciences.,2013,27(3):334-339楼乔明,杨文鸽,徐大伦,郑贤孟,薛长湖.核农学报,2013,27(3):334-339Fast Structure Confirmation of Daptomycin by Matrix⁃assistedLaser Desorption Ionization Mass Spectrometry andElectrospray Ionization Mass SpectrometryHUANG Ya⁃Juan1,2,ZHANG Tuo1,2,HAN Zhi⁃Guo1,2,MENG Xiao⁃Guang1,2,SONG Chun⁃Yan1,2,LIU Shu⁃Chen3,ZHENG Jun⁃Jie*1,2,3,WEI Kai⁃Hua*1,2,31(Beijing C&N International Sci⁃tech Co.,Ltd,Beijing102206,China)2(Beijing Proteome Research Center,State of Key Laboratory of Proteomics,National Center for Protein Sciences(Beijing),Beijing102206,China)3(Beijing Institute of Radiation Medicine,Military Medical Science Academy ofChina People′s Liberation Army,Beijing100850,China)Abstract Matrix⁃assisted laser desorption ionization⁃time of flight tandem mass spectrometry(MALDI⁃TOF/ TOF MS)and electrospray ionization⁃quadrupole⁃time of flight mass spectrometry(ESI⁃Q⁃TOF MS)were used to confirm the structure of cyclic lipopeptide daptomycin fastly.First,the relative molecular weight1916.7107 of daptomycin was measured by ESI with error0.0007.The sample’s doubly charged peak m/z809.848was selected as precursor ion for ESI⁃MS/MS analysis,and the exocyclic amino acid sequence C9H19CO⁃Trp⁃Asn⁃Asp was successfully matched.Second,the experimental conditions of cleaving daptomycin by lithium hydroxide(LiOH)were optimized and the ring⁃opened process was monitored by MALDI⁃TOF/TOF MS.After obtaining ring⁃opened product with purity of above95%,the MS/MS measurements by MALDI and ESI were carried out.The b+and y+of ring⁃opened product were completely matched,which confirmed the amino acid sequence of daptomycin.Finally,ESI⁃MS/MS conditions of ring⁃opened product were further optimized to obtain more low mass fragment ions for analyzing the structure of fatty acid chain and the cleavage pattern of fat chain in mass spectrometry was proposed.The method was fast,convenient,accurate and reliable for identifying cyclic lipopeptide compounds.Keywords Daptomycin;Cyclic lipopeptide;Tandem mass spectrometry;Electrospray ionization mass spectrometry(Received30April2014;accepted22September2014) This work was supported by the National High Technology Research and Development Program863(Nos.2012AA020205,2014AA020906), the Ministry of Science and Infectious Diseases of Major Projects(No.2013ZX10002009⁃001⁃001),and the National Major Scientific Ruments and Equipments Special Project(No.2012YQ18011710)。
环孢菌素A
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环孢菌素A
化学物质
01 理化性质
03 研究发展
目录
02 化学数据 04 作用机制
05 生理性能
07 注意事项
目录
06 用量用法
环孢菌素A，是一种有机化合物，化学式为C62H111N11O12，是一种免疫抑制剂。
2017年10月27日，世界卫生组织国际癌症研究机构公布的致癌物清单初步整理参考，环孢菌素在1类致癌物 清单中。
当CsA和CyP结合后，CsA分子结构与游离CsA分子结构相比其构象发生了明显的变化，分子中原有的氢键均断 裂，形成新的氢键。分子中的酰氨键也由顺式转化为反式，这样形成的复合物才能与CaN作用；单独的CsA或CyP 都不能与CaN作用。研究发现，环孢菌素A只需要结合1%～10%的亲环孢素就能发挥其免疫抑制活性。但是在环孢 菌素中与CyP的结合能力的强弱并不能体现为免疫抑制的强弱，与CyP结合能力强的免疫抑制活性不一定就强，而 与CyP结合能力很弱的也不一定就没免疫抑制活性。
质谱的原理及结构
利用GC-MS和LC-MS技术对大气、水体和土壤中的污染物进行监测和分析，如多环芳烃、农药残留和重金属等。
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2023 WORK SUMMARY
THANKS
感谢观看
REPORTING
02
四极杆质量分析器
通过四根平行放置的金属杆施加射频电压，形成振荡电场，使带电离子
在电场中振荡并通过出口缝隙。具有扫描速度快、质量范围宽等优点。
03
飞行时间质量分析器
将带电离子加速到相同动能后，在无场空间内自由飞行。不同质荷比的
离子飞行时间不同，从而实现分离。具有分辨率高、质量范围宽等特点。
检测器
特点
分辨率高，适用于高精度质谱分析；但扫描速度慢，对磁场稳定性要求高。
四极杆质量分析器
原理
通过四根平行放置的电极杆施加射频电压，形成高频电场。不同质量的离子在电 场中振荡频率不同，从而实现质量分离。
特点
结构简单，扫描速度快；但分辨率相对较低，适用于快速、高通量的质谱分析。
飞行时间质量分析器
原理
离子在加速电场中获得相同动能后， 在无场漂移区飞行。不同质量的离子 飞行时间不同，从而实现质量分离。
超临界流体色谱-质谱联 用（SFC-MS）
利用超临界流体作为流动相，结合质谱进行 检测，适用于中等极性和非极性化合物的分 析。
毛细管电泳-质谱联用 （CE-MS）
毛细管电泳法将样品中的各组分分离，结合 质谱进行检测，适用于带电粒子的分析。
应用实例：药物分析、环境监测等
药物分析
利用LC-MS技术对药物进行定性和定量分析，包括药物代谢产物、杂质和药物制剂中的成分等。
检测器与数据处理
检测器类型及工作原理
液质联用法同时测定干血斑中环孢菌素A、西罗莫司、他克莫司和依维莫司药物浓度
菌素 A 浓 度 分 别 为 400、
800、
1600、
2000、
3200、
6400、
16000、
20000ng/mL,含 西 罗 莫 司、他 克 莫 司
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取回收率、精 密 度 与 准 确 度、残 留 效 应 和 稳 定 性 进
行考察,根据欧洲 EMA 发布的《生物分析方法验证
2021 年第 1 期
机设备有限 公 司;
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仪器制 造 有 限 公 司;Mi
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夏佛塔苷的电喷雾电离裂解规律解析
夏佛塔苷的电喷雾电离裂解规律解析目的研究夏佛塔苷的质谱多级裂解过程，探讨质谱技术在黄酮碳酐中的应用规律。
方法应用电喷雾电离（ESI）结合串联质谱（MSI）技术，对黄酮碳酐化合物夏佛塔苷在ESI-MS/MS质谱中的裂解规律进行研究。
结果夏佛塔苷在负离子模式下，其准分子离子m/z563多级质谱图中主要出现[M-H-120]、[M-H-90]、[M-H-120-90]、[M-H-120-60]和[M-H-120-90=C0]等离子碎片。
结论夏佛塔苷在ESI-MS/MS质谱中的裂解行为符合黄酮碳酐的裂解规律，有利于利用质谱技术对各种黄酮碳苷类化合物所含糖基种类进行分析和研究。
标签：夏佛塔苷；电喷雾电离质谱；黄酮碳苷；裂解；串联质谱黄酮碳苷类化合物今年来研究越来越深入，已经形成一个较大的体系，但是有关该类化合物特别是夏佛塔苷的波谱学规律方面较少见专门的研究报道。
夏佛塔苷是从豆科植物广金钱草[Desmodiumstyracifolium（Osh.）Merr.]的干燥地上部分分离所得。
夏佛塔苷是一种典型的黄酮碳苷类化合物，分子结构中同时含有一个戊糖和一个己糖，结构如图1所示。
为了掌握夏佛塔苷的ESI-MS碎片离子特征及基本裂解规律，本文采用ESI-MS对夏佛塔苷的质谱行为进行了研究，为植物等复杂机体中痕量夏佛塔苷的快速直接分析提供了前提和基础，对于快速发现和鉴定夏佛塔苷这类碳苷类化合物具有一定的指导意义。
1仪器与试药Thermo LCQ FLEET质谱仪购自美国Thremo公司。
配置有ESI源，四级杆离子阱质量分离器，Xcalibur工作软件。
TGL-16台式高速离心机购自湖南星科科学仪器有限公司；Milipak纯水过滤器购自美国Milipore公司；夏佛塔苷：自制[为豆科植物广金钱草Desmodiumstyracifolium（Osh.）Merr.的干燥地上部分]；色谱纯购自德国Sigma公司。
色谱纯甲醇，纯化水，其余试剂为分析纯。
质谱法分析技巧
质谱法分析技巧质谱法是一种常用的化学分析技术，通过对样品中的化合物进行分子质量和结构的研究，可以获得丰富的信息。
在实验室中，质谱法广泛应用于生物医药、环境监测、食品安全等领域。
本文将介绍一些质谱法分析的基本技巧，帮助读者更好地理解和应用这一分析方法。
一、质谱仪的基本原理质谱仪是质谱法分析的核心设备，它主要由离子源、质量分析器和检测器三部分组成。
首先，离子源将样品中的分子转化为离子，常用的离子化方法有电子轰击、化学电离和电喷雾等。
然后，质量分析器根据离子的质量-电荷比（m/z）对离子进行分离和筛选。
最后，检测器测量离子的数量，生成质谱图。
通过质谱图，我们可以确定样品中的化合物种类、含量和结构等信息。
二、样品制备技巧样品制备是质谱法分析的首要环节，它直接影响到分析结果的准确性和可靠性。
在样品制备过程中，需要注意以下几个方面。
首先，样品应尽可能纯净，避免杂质的干扰。
其次，样品要适当稀释，以避免离子过多导致信号过饱和。
此外，对于固体样品，可以选择适当的溶剂进行提取，增加分析的灵敏度和准确性。
三、质谱参数的优化质谱参数的优化对于获得高质量的质谱图至关重要。
在质谱仪的操作过程中，可以调整离子源温度、碰撞能量、离子化电压等参数，以达到最佳的分析效果。
例如，对于高分辨质谱分析，可以增加离子源温度和离子化电压，以提高质谱分辨率。
此外，对于复杂样品，可以采用多级质谱（MS/MS）技术，通过连续碰撞诱导解离（CID）的方式，获得更加详细的结构信息。
四、质谱数据的解析质谱数据的解析是质谱法分析的关键步骤，它需要结合化学知识和专业软件进行。
首先，需要对质谱图进行峰识别和质量校正，确定峰的位置和相对丰度。
然后，可以通过与数据库比对、质谱图解析软件等手段，确定化合物的分子质量和结构。
在数据解析过程中，需要注意对比实验和对照实验的差异，以排除杂质和误判的可能性。
五、质谱法的应用领域质谱法作为一种高灵敏度、高选择性的分析方法，广泛应用于生物医药、环境监测、食品安全等领域。
对乙酰氨基酚质谱
对乙酰氨基酚质谱
当谈到对乙酰氨基酚质谱时，不得不提及它的重要性和特点。
在解析电喷雾技术下，这种质谱方法展现出了高效、快速和无需预处理的优点。
它能够直接揭示药片中有效成分的分子结构信息，为药物质量控制和研究提供了有力支持。
在质谱图中，分子离子峰151是一个明显的特征峰，它代表着对乙酰氨基酚的完整分子结构。
此外，质核比为43的峰是由于酰胺的C-N键断裂后形成的乙酰基正离子，这个断裂过程揭示了酰胺键的存在。
与此同时，质核比为109的基峰代表分子结构中的另一部分，它的形成源于C-N键断裂后剩下的部分。
另外，质核比为108的峰则是从109上直接断裂掉一个氢原子而形成的。
这些特征峰的存在和强度，可以用于评估对乙酰氨基酚的纯度和含量。
通过对比标准品和样品的质谱图，可以精确地判断出样品中有效成分的含量和可能存在的杂质。
此外，不同浓度的对乙酰氨基酚样品产生的质谱图具有明显的差异，这使得该方法具有很好的定量能力。
综上所述，对乙酰氨基酚质谱不仅是一种高效、快速、无需预处理的检测方法，而且能够提供直接、准确的分子结构信息。
这些信息对于药物质量控制、药效研究以及新药开发都具有重要意义。
在未来的药物研究中，对乙酰氨基酚质谱有望成为一种重要的工具和方法。
LC_MS分析克拉霉素降解产物_彭建和
中 国 药 科 大 学 学 报Journa l of China Pharmaceutical University 1998,29(5):374～379LC/M S分析克拉霉素降解产物彭建和 涂家生1 盛龙生(中国药科大学分析计算中心;1药剂学教研室,南京210009)摘 要 采用高效液相色谱/电喷雾离子化质谱法分离并测定了克拉霉素在酸、碱、光照以及氧化条件下的降解产物。
结果表明:克拉霉素在酸性条件下主要分解途径为水解去一分子克拉啶糖;在碱性条件下分解产物有:克拉霉素的同分异构体、脱水产物以及内酯开环和分解产物;在氧化条件下形成过氧化物;在光照条件下则较为稳定。
分解产物结构分析未见文献报道。
关键词 液相色谱/质谱联用;电喷雾离子化;克拉霉素;稳定性;降解产物 克拉霉素系大环内酯类抗生素,由红霉素6位甲基化而得,具有与红霉素相似的抗菌谱。
体外抗菌作用略优于红霉素,体内抗菌作用显著优于其它大环内酯类抗生素,特别是它具有较好的耐酸性和优良的药动学性质,它对于β-内酰胺酶的敏感菌仍然有效,副作用低,耐受性好,被认为是新的大环内酯类抗生素中最安全的药物,已被美国药典23版收载。
由于克拉霉素的作用显著,开发其注射剂对于不能口服的患者和危重病人的抢救具有重要的意义。
开发的主要障碍来自两个方面:溶解度低和稳定性较差。
Mo rg an DK等[1]研究了克拉霉素不同剂型的反相液相色谱分析方法,并考察了该方法分析对降解产物的适应性。
Erah PO等[2]建立了离子对色谱分析方法,认为克拉霉素在酸性条件下,会水解一分子克拉啶糖。
Nakagaw a Y等[3]对比了克拉霉素和红霉素在酸性条件下的降解动力学。
Waddell ST等[4]研究了红霉素在碱性条件下内酯环的开环情况。
但是,未见对克拉霉素降解产物的结构分析报道。
电喷雾离子化方法(electro spray io nization, ESI)是迄今为止一种最软的离子化方法,主要形成准分子离子。
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陈振伟 温耀 明 季新 燕 郑 卫ｈ 。
பைடு நூலகம்（ 建 医科 大 学 药 学院 ， 福 州 ３ ００ ； １福 ５ ０ ４ ２福 建 省 微 生 物 研 究所 ， 福 州 ３０ ０ ） ５ ０ ７ 摘 要 ： 应用 电 喷雾 离 子 化 多 级 质 谱 法 分 析 四 种环 孢 菌 素 同 系 物 ， 对 它 们 的裂 解 规 律 进 行 分 析 归 纳 。在 电 喷雾 离 子 化 多 级 质 并
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中 国抗 生 素 杂 志 ２ ０ 年 ６ 第 ３ 第 ６期 ０７ 月 ２卷
文 章 编 号 ：０ １８ ８ （０ ７ ０． ３ ００ ｉ ０． ６９ ２ ０ ） ６０ ５． ５
电喷雾 离子 化 多级 质 谱解 析环 孢 菌 素结构
谱条件下 ， 环孢菌 素先形成 Ｎ端加质子 的［ Ｍ＋Ｈ］ 分子离子 ， 然后沿肽链的酰胺键发生断裂 ， 产生相应的碎片离子 ， 开环裂解主要
发 生 在 ２和 ３位 、 和 ｌ 位 以 及 ５ 和 ６ 氨 基 酸 残 基 之 间 。这 一 裂 解 规 律 可 应 用 于 环 孢 菌 素 类 化 合 物 的 快速 结构 鉴 定 。 １ １ 位 位 关 键 词 ： 电 喷雾 离 子 化 ； 多 级 质 谱 ； 环 孢 菌 素 ； 结 构 鉴 定
中图 分 类 号 ： ９ ９ ５ Ｒ ７ ． 文 献标 识 码 ： Ａ
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环孢 菌 素是 由真 菌产 生 的一 组 环状 十 一肽 物 质 ， 其 中环 孢菌 素 Ａ（ Ａ， ｉ． ） Ｃｓ Ｆ ｇ １ 已作 为重要 的免 疫抑 制