气相色谱分析
气相色谱分析的常规步骤
气相色谱分析的常规步骤气相色谱（Gas chromatography, GC）是一种高效分离和定量分析的技术，广泛应用于石油化工、食品、环境、医药等领域。
本文将介绍气相色谱分析的常规步骤。
样品准备在分析前，样品应进行简单处理，通常包括溶解、提取、稀释等操作。
对于复杂样品，需要进一步净化和分离，以获得单一组分或特定分子。
样品处理的目的是使样品成为适合气相色谱分析的溶液或气体。
样品进样样品进样是气相色谱分析中重要的步骤，样品必须均匀地进入柱管进行分离。
进样技术包括液相进样和气相进样两种类型。
在液相进样中，样品通过注射器进入柱管；在气相进样中，样品气化后，通过进样口进入柱管。
进样技术不仅关系到分离效果，还影响灵敏度和分析时间。
色谱柱选择色谱柱是气相色谱分析的关键部件，它们的大小、形状、填充质量、填充物类型和材料都会影响柱的分离能力。
对于分析的物质，应选择具有合适填充物的柱，不同的填充物选择要根据物质的性质而定。
色谱条件设定在进行进样前，需要对柱管设定一定的操作参数，包括柱温、流量、载气种类和流速等。
这些参数也称为色谱条件。
不同的分析目的需要不同的色谱条件，需要根据样品性质及分析要求予以调整。
柱准备与平衡色谱柱进入进样前，需要进行一定的准备和平衡过程。
柱通常需要预热，以达到操作温度。
此外，还需要让柱管在色谱条件下进行平衡，以获得稳定的基线和分离效果。
检测器气相色谱分析中常用的检测器有火焰离子检测器、热导检测器、电子捕获检测器、质谱检测器等。
检测器选择要根据样品性质、分离效果和灵敏度要求进行选择。
数据处理分析获得的数据应进行分析和处理。
常用的处理方法包括峰面积计算、谱图分析、校正等。
对于比较复杂的分析，可采用色谱-质谱联用法，以获得更准确的分析结果。
总结气相色谱分析作为一种定量、定性分析手段，常用于检测环境、食品、药品等领域中的各种化合物。
本文介绍了气相色谱分析的常规步骤，包括样品准备、样品进样、色谱柱选择、色谱条件设定、柱准备与平衡、检测器和数据处理。
气相色谱分析法范文
气相色谱分析法范文气相色谱分析法（GC）是一种常用的物质分离和定性定量分析方法，其基本原理是将待测样品通过气相色谱柱进行分离，然后利用检测器对物质进行检测和分析。
气相色谱分析法广泛应用于环境监测、食品安全、药物分析、环境毒理学等领域。
气相色谱分析法的另一个优点是分离效果好、精度高。
通过选择不同类型和柱内填料，可以实现对不同物质的高效分离。
柱内填料的选择根据样品的性质和分析目的进行，可以是非极性填料、极性填料或特定功能填料。
使用气相色谱分析法，可以实现对复合样品中多种组分的分离和定量。
气相色谱分析法还具有高灵敏度和高选择性。
通过选用合适的检测器，可以实现对微量物质的检测和分析。
常用的气相色谱检测器有火焰离子化检测器（FID）、电子捕获检测器（ECD）、氮磷检测器（NPD）等。
这些检测器具有不同的灵敏度和选择性，适用于不同类型的物质。
气相色谱分析法的一个重要应用领域是环境监测。
通过气相色谱分析法，可以对大气中的有机物、挥发性有机物（VOCs）、气体污染物等进行快速准确的分析和监测。
气相色谱分析法在环境监测中的应用还可以通过对食品和水样品中的有机污染物进行分析，确保环境的安全和卫生。
在药物分析领域，气相色谱分析法也具有广泛应用。
通过气相色谱分析法，可以进行对药物的纯度、成分分析和质量控制。
同时，气相色谱分析法还可以对药物代谢产物进行分析，对药物的代谢途径和体内过程进行研究。
气相色谱分析法还有许多其他的应用领域，如食品安全、环境毒理学、化学品分析等。
在食品安全领域，气相色谱分析法可以对食品中的农药残留、添加剂和污染物进行检测和分析，以确保食品质量和安全性。
在环境毒理学领域，气相色谱分析法可以对毒理物质的分布和迁移进行研究，对环境污染物的毒害机制进行分析。
在化学品分析中，气相色谱分析法可以对有机化合物、无机气体等进行分析，以满足工业品质量监控和工艺控制的需求。
总的来说，气相色谱分析法是一种重要的化学分析方法，具有制备简单、分离效果好、灵敏度高和应用广泛等优点。
气相色谱实验报告
气相色谱实验报告实验目的本次实验的主要目的是学习气相色谱的基本原理和操作方法，了解在色谱柱中常用的固定相和移动相，并通过实验验证不同条件对于色谱分离的影响。
实验原理气相色谱是一种在大气压力下使用气相载气流动的液态或固态样品进行分离的技术。
它通过多次进样和分离依据的分子小于分离栏的微孔的分子筛分法来分离化合物。
在此过程中，化合物会与固定相发生相互作用，而移动相则可以移动固定相，从而分离各种化合物。
固定相通常分为极性相和非极极相，而移动相通常为高纯惰性气体，例如氢气、氮气等。
实验步骤1. 准备样品：本次实验中使用了两种溶液样品，分别为苯酚与正己烷的混合物。
取2.5毫升的样品，加入5毫升的甲醇溶液中，并振荡均匀，以备后续进样使用。
2. 色谱柱的装配：在装配色谱柱时，先需将固定相的稳定性测试一次。
对于此次实验中使用的非极性柱，其流动性较好，未发现任何不良反应。
接下来，在柱底注入适量惰性气体，固定柱后，将高纯惰性气体通入。
3. 进样：开启进样器，等待数秒后，将样品进入色谱柱中。
一般情况下，进样量应尽可能的小。
4. 色谱分离：开启柱上的加热气源，调节增加温度，并适当调整色谱流量，以获得最佳分离效果。
5. 结果分析：收集分离产物，并使用质谱仪进行质谱分析，确定分离出来的化合物的质量。
6. 数据记录：记录分离产物的相关数据，例如每个时刻的记录温度、样品进样量、分离出来的化合物质量等等。
实验结果通过本次实验，成功的分离出来了苯酚和正己烷的混合物，并得到了其质量及对应的相对保留率等相关数据。
在实验中，采用不同流量和温度来控制色谱柱的分离效果，最终获得了最佳的分离效果。
此外，实验中还发现，使用极性相的分离效果优于使用非极性相，提示了固定相类型对于色谱分离效果的影响。
结论本次实验通过实验证明了气相色谱作为一种常规的分离技术在有机分析中的重要性。
在实验中，通过控制温度和流量，成功的分离出了苯酚和正己烷的混合物，并验证了固定相类型和柱温等因素对于色谱分离效果的影响。
仪器分析笔记《气相色谱分析》
填充柱（Packing column）：常用不锈钢制成，内径2～4 mm，柱长1～3m。填充吸附剂或覆盖
在载体上均匀固定液膜。
毛细管柱（Capillary column）：常用石英制成，内径0.1～0.5mm，柱长可达数十米。固定液直
接涂在毛细管内壁表面。
B、气相色谱固定相可分为：
1.2.2色谱分离的基本理论
柱效率可用理论塔板数（n）或理论塔板高度（H）表示。柱效率的高低能反映组分在柱内两相间的分配情况和组分通过色谱柱后峰加宽的程度，它与组分在气相中的扩散及在液相中的传质阻力有关。
1、塔板理论
塔板理论是将色谱柱比作蒸馏塔，柱内有若干“想象”的塔板。每两块塔板之间的距离称为板高，各组分就在这些塔板间隔的气液两相间进行分配，经过多次分配平衡后，分配系数小的组分先离开色谱柱，分配系数大的组分，后离开色谱柱。
C、按分离的原理分类
①吸附色谱：利用组分在固定相上的吸附能力强弱不同分离。
②分配色谱：利用组分在固定液中溶解度不同分离。
③凝胶（排阻）色谱：利用大小不同的分子在多孔固定相中的选择渗透分离
④离子交换色谱法：利用组分在离子交换剂上的亲和力大小不同分离
3、气相色谱仪组成
Ⅰ载气系统：气源、气体净化器、供气控制阀门和仪表；
（1）分配系数
在一定温度和压力下，组分在固定相和流动相间达到分配平衡时的浓度比，称为分配系数。
式中—— ：组分在固定相中的浓度； ：组分在流动相中的浓度。
该组分与固定液分子间作用力 ；
空气在固定液中不溶解，其 ，故空气在柱子内的滞留时间最短，最先从色谱柱中馏出，因此，将空气的保留时间称之为死时间；
被测组分的 相差越大，越容易分离；
气相色谱分析
保留时间（retention time）tR 被测样品从进样开始到柱后出现浓度最大值时所需的时间
调整保留时间（adjusted retention time）tR’ tR’=tR-tm
某组分由于溶解或吸附于固定相，比不溶解或不被吸
附的组分在色谱柱中多滞留的时间。
三、气相色谱分析的理论基础
1、基本原理
在一定温度下，组分在两相之间分配达到平衡时 的浓度（g·mL-1）比称为分配系数，以K表示。
待测组分在固定相和流动相之间发生的吸附，脱附 或溶解，挥发的过程叫做分配过程。
组分在固定相中的浓度 K 组分在流动相中的浓度 K Cs
Cm
（分配系数是色谱分析的依据）
气相色谱分析
2-1 气相色谱概述 2-2 气相色谱法的基本原理 2-3 色谱分离条件选择 2-4 固定相及其选择 2-5 气相色谱检测器 2-6 气相色谱定性分析 2-7 气相色谱定量方法 2-8 毛细管柱气相色谱法
§2-1 气相色谱法概述
色谱法是一种分离技术。 固定相：使混合物中各组分在两相间进行分配，其中
对于高沸点，不能气化和热不稳定的物质不能 用气相色谱法分离和测定。
§2-2 气相色谱法的基本原理
一、气相色谱流程：
1、高压钢瓶 2、减压阀 3、载气净化干燥管 4、针形阀 5、流量计 6、压力表 7、进样器 8、色谱柱 9、检测器 10、记录仪
图2.1 气相色谱流程图
二、气相色谱仪的组成及各部分的作用：
死体积（dead volume）Vm 指色谱柱在填完后柱管内固定相颗粒间所剩
余的空间，色谱仪中管路和连接头间的空间以及 检测器的空间的总和。当后两项很小，忽略不计 时，
气相色谱的定性分析方法
fm'
Ms Mi
(3)、相对响应值
相对响应值是物质 i 与标准物质 S 的响应值(灵敏度)
之比，单位相同时，与校正因子互为倒数，即
Si
1 fi
和只与试样、标准物质以及检测器类型有关，而与操
作条件和柱温、载气流速、固定液性质等无关，不受
操作条件的影响，因而具有一定的通用性，是一个能
二、气相色谱的定量分析方法
定量分析就是要确定样品中组分的准确含量。气相 色谱的定量分析与大多数的仪器分析方法一样，是一 种相对定量方法，而不是绝对定量方法。
气相色谱定量分析的依据是：在一定的条件下，被
测谱本组峰公分的式峰为i 通面：过积检A测i 成器正的比数。量因(或此浓气度相)色w谱i定与量该分组析分的色基 W i = fi Ai 析再必用式须适中测当的量的f 其 定i称峰量为面计组积算分方A的法i校和，正确将因定色子组谱。分峰由的面式校积可正换知因算，子为定f试量i ，样分
的组分的量 mi ，另一方面要准确测量出峰面积或峰高，
并要求严格控制色谱操作条件，这在实际工作中有一 定困难。因此，实际测量中通常不采用绝对校正因子， 而采用相对校正因子。
(2)、相对校正因子
相对校正因子是指组分 i 与另一标准物 S 的绝
对校正因子之比，用表示：
fi'
fi fs
mi / Ai ms / As
中组分的含量。
1、峰面积的测量
在使用积分仪和色谱工作站测量蜂高和峰面积时，仪器可根据 人为设定积分参数(半峰宽、峰高和最小峰面积等)和基线来计算 每个色谱峰的峰高和峰面积。然后直接打印出峰高和峰面积的结 果，以供定量计算使用。
当使用一般的记录仪记录色谱峰时，则需要用手工测量的方法 对色谱峰和峰面积进行测量。虽然目前已很少采用手工测量法去 测量色谱峰的峰高和峰面积。但是了解手工测量色谱峰峰高和峰 面积的方法对理解积分仪和色谱工作站的工作原理及各种积分参 数的设定是大有裨益的。所以，以下简单介绍两种常用的手工测 量法。
怎样分析气相色谱图
怎样分析气相色谱图 The manuscript was revised on the evening of 2021在实际工作中，当我们拿到一个样品，我们该怎样定性和定量，建立一套完整的分析方法是关键，下面介绍一些常规的步骤：1、样品的来源和预处理方法GC能直接分析的样品通常是气体或液体，固体样品在分析前应当溶解在适当的溶剂中，而且还要保证样品中不含GC不能分析的组分（如无机盐），可能会损坏色谱柱的组分。
这样，我们在接到一个未知样品时，就必须了解的来源，从而估计样品可能含有的组分，以及样品的沸点范围。
如果样品体系简单，试样组分可汽化则可直接分析。
如果样品中有不能用GC直接分析的组分，或样品浓度太低，就必须进行必要的预处理，如采用吸附、解析、萃取、浓缩、稀释、提纯、衍生化等方法处理样品。
2、确定仪器配置所谓仪器配置就是用于分析样品的方法采用什么进样装置、什么载气、什么色谱柱以及什么检测器。
一般应首先确定检测器类型。
碳氢化合物常选择FID检测器，含电负性基团（F、Cl等）较多且碳氢含量较少的物质易选择ECD检测器；对检测灵敏度要求不高，或含有非碳氢化合物组分时，可选择TCD检测器；对于含硫、磷的样品可选择FPD检测器。
对于液体样品可选择隔膜垫进样方式，气体样品可采用六通阀或吸附热解析进样方法，一般色谱仅配置隔膜垫进样方式，所以气体样品可采用吸附-溶剂解析-隔膜垫进样的方式进行分析。
根据待测组分性质选择适合的色谱柱，一般遵循相似相容规律。
分离非极性物质时选择非极性色谱柱，分离极性物质时选择极性色谱柱。
色谱柱确定后，根据样本中待测组分的分配系数的差值情况，确定色谱柱工作温度，简单体系采用等温方式，分配系数相差较大的复杂体系采用程序升温方式进行分析。
常用的载气有氢气、氮气、氦气等。
氢气、氦气的分子量较小常作为填充柱色谱的载气；氮气的分子量较大，常作为毛细管气相色谱的载气；气相色谱质谱用氦气作为载气。
3、确定初始操作条件当样品准备好，且仪器配置确定之后，就可开始进行尝试性分离。
气相色谱分析的常规步骤
气相色谱分析的常规步骤气相色谱（Gas Chromatography，GC）是一种分离和定性分析挥发性有机物的常用技术。
下面是气相色谱分析的常规步骤：1.样品的准备：首先，需要选择适宜的样品进行分析。
样品可以是固体、液体或气体。
必要时，需要进行样品前处理，如样品的溶解、提取、浓缩等步骤。
2.样品的注入：将样品注入气相色谱仪中。
常用的样品注入方式包括进样器注射、固相微萃取等。
在进样器注射过程中，要保证样品量准确、进样均匀。
3.柱的选择：根据需要分离的物质性质选择合适的色谱柱。
气相色谱常用的柱材有硅胶、聚酯、聚醚、聚酰胺等。
柱的内径和长度也需要根据实验要求选择。
4.柱的条件设置：设置适宜的柱温、载气流速和柱头压力等条件。
柱温主要影响样品的分离效果和分析时间，载气流速和柱头压力则会影响分离效果和峰形。
5.柱温程序：通过设置温度程序来控制样品在柱中的保留时间。
常见的温度程序包括等温、线性升温、程序升温等。
6.检测器的选择与设置：根据分析要求选择适宜的检测器。
常见的气相色谱检测器有火焰离子化检测器（FID）、热导检测器（TCD）、质谱检测器（MS）等。
根据检测器的不同，需要进行相应的参数设置。
7. 数据采集和处理：通过连接计算机或数据采集仪器，记录样品的峰面积或峰高等数据。
常见的数据处理软件有Chromeleon、ChemStation 等，可以进行峰面积计算、色谱图解析、峰识别和峰定性等操作。
8.结果的分析和报告：根据实验目的，对分析结果进行解释和分析。
可以使用标准品比对或质谱库查询来进行物质的鉴定。
根据需要，可以撰写实验报告或生成分析结果的报告。
9.仪器的维护与清洁：使用完毕后，及时清洁色谱柱和进样器，保持仪器的干净和良好的性能。
同时，定期进行仪器的校验和维护，确保仪器的准确性和精度。
总结：气相色谱分析常规步骤包括样品准备、样品注入、柱的选择和条件设置、柱温程序设置、检测器选择与设置、数据采集和处理、结果分析和报告、仪器维护与清洁等方面。
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第五章 分子发光分析法 基态分子吸收了一定能量后，跃迁至激发态，当激发态分子以辐射跃迁形式将其能量释放返回基态时，便产生分子发光(Molecular Luminescence)。依据激发的模式不同，分子发光分为光致发光、热致发光、场致发光和化学发光等。光致发光按激发态的类型又可分为荧光和磷光两种。本章讨论分子荧光(Molecular Fluorescence)、分子磷光(Molecular Phosphorescence)和化学发光(Chemiluminescence)分析法 。 第一节 荧光分析法 一、概述 分子荧光分析法是根据物质的分子荧光光谱进行定性，以荧光强度进行定量的一种分析方法。 早在16世纪，人们观察到当紫外和可见光照射到某些物质时。这些物质就会发出各种颜色和不同强度的光，而当照射停止时，物质的发光也随之很快消失。到1852年才由斯托克斯(Stokes)给予了解释，即它是物质在吸收了光能后发射出的分子荧光。斯托克斯在对荧光强度与浓度之间的关系进行研究的基础上，于1864年提出可将荧光作为一种分析手段。1867年Goppelsroder应用铝—桑色素络合物的荧光对铝进行了测定。进入20世纪，随着荧光分析仪器的问世，荧光分析的方法和技术得到了极大发展，如今已成为一种重要且有效的光谱分析手段。 荧光分析法的最大优点是灵敏度高，它的检出限通常比分光光度法低2~4个数量级，选择性也较分光光度法好。虽然能产生强荧光的化合物相对较少，荧光分析法的应用不如分光光度法广泛，但由于它的高灵敏度以及许多重要的生物物质都具有荧光性质。使得该方法在药物、临床、环境、食品的微量、痕量分析以及生命科学研究各个领域具有重要意义。 二、基本原理
(一)分子荧光的产生 大多数分子含有偶数电子。根据保里不相容原理，基态分子的每一个轨道中两个电子的自旋方向总是相反的，因而大多数基态分子处于单重态(2S+1=1)，基态单重态以S0表示。当物质受光照射时，基态分子吸收光能就会产生电子能级跃迁而处于第一、第二电子激发单重态，以S1、S2表示。处于电子激发态的分子是不稳定的，它会很快地通过无辐射跃迁和辐射跃迁释放能量而返回基态。辐射跃迁发生光子的发射，产生分子荧光和分子磷光；无辐射跃迁则以热的形式释放能量，包括振动弛豫(VR)、内转化(ic)和体系间窜跃(isc)等。图5-1为分子内所发生的各种光物理过程的示意图。 图5-01 分子内的光物理过程.doc图5-01 分子内的光物理过程.JPG 图5-1 分子内的光物理过程A1,A2-吸收 F-荧光 P-磷光 ic-内转化isc-体系间窜跃 VR-振动弛豫 振动弛豫是在同一电子能级中，分子由较高振动能级向该
电子态的最低振动能级的非辐射跃迁。振动弛豫过程的速率极大，在10-14～10-12s内即可完成。 内转化是相同多重态的两个电子态之间(如S2→S1,S1→S0)的非辐射跃迁。内转化过程的速率在很大程度上决定于相关能级之间的能量差。相邻单重激发态之间能级较近，其振动能级常发生重叠，内转化很快。因此，通常不论分子被激发到哪一个电子激发态，在10-13～10-11s内经内转化和振动弛豫都会跃迁到最低电子激发态的最低振动能级上。基态(S0)和第一电子激发单重态(S1)之间的能量差较大，因而S1→S0内转化的速率相对要小得多，使得第一电子激发态有相对较长的寿命。 处于第一电子激发单重态最低振动能级的分子，以辐射跃迁的形式返回基态各振动能级时，就产生了分子荧光。由于激发态中存在有振动弛豫和内转化现象。使得荧光的光子能量比其分子受激发所吸收的光子能量低。因此，荧光波长λ3总比激发波长λ1或λ2要长。而且，不论电子开始被激发至哪个能级，都将只发射波长为λ3的荧光。荧光的产生在10-9～10-6s内完成。 体系间窜跃是指不同多重态的两个电子态间的非辐射跃迁。当分子的第一、二电子处于激发三重态(2S+1=3)时，以Tl、T2表示。单重激发态Sl的最低振动能级同三重态T1的较高振动能级重叠。因而S1→T1的体系间窜跃就有了较大的可能性。第一电子激发单重态的分子经体系间窜跃到达三重态后，快速振动弛豫至最低振动能级v=0上。此时有两种途径返回基态，一是辐射跃迁发出磷光，二是体系间窜跃。由于改变电子自旋的跃迁属禁阻跃迁，因而跃迁速率小得多，使得三重态有较长的寿命，约为10-3～10 s
(二)荧光效率及其影响因素 1．荧光效率 物质在吸收了紫外和可见光后，激发态分子是以辐射跃迁还是以非辐射跃迁回到基态，决定了物质是否能发荧光。通常以荧光效率(或荧光量子产率)来描述辐射跃迁概率的大小。荧光效率定义为发荧光的分子数目与激发态分子总数的比值，即 激发态分子总数发荧光的分子数
荧光效率f
(5—1)
荧光效率越高，辐射跃迁概率就越大，物质发射的荧光也就越强，若以各种跃迁的速率常数来表示，则
iKKKfff
(5—2)
式中：Kf为荧光发射过程的速率常数，∑Ki为非辐射跃迁的速率常数之和。一般来说，Kf主要取决于物质的化学结构。而∑Ki则主要取决于化学环境，同时也与化学结构有关。具有分析应用价值的荧光化合物，其荧光效率在0.1～1之间。 2．荧光与分子结构的关系 首先，物质只有能够吸收紫外—可见光。才有可能发荧光。因此，发荧光的物质分子中必须含有共轭双键这样的强吸收基团，且共轭体系越大，π电子的离域性越强，越易被激发而产生荧光。大部分能发荧光的物质都含有一个以上的芳环，随共轭芳环增大，荧光效率提高，荧光峰向长波长方向移动。如萘的荧光效率为0.29，荧光波长为310 nm，而蒽的荧光效率为0.46，荧光波长为400 nm。 其次，分子的刚性平面结构有利于荧光的产生。以荧光黄和酚酞为例，二者结构十分相似，但荧光黄在0.1mol·L-1NaOH溶液中的荧光效率高达0.92。而酚酞由于没有氧桥，分子不易保持刚性平面，不易产生荧光。刚性平面结构可以减少分子的振动相碰撞去活的可能性。 一些有机配位剂与金属离子形成螯合物后荧光大大增强，这也可用刚性结构的影响来解释。例如，8—羟基喹啉本身荧光较弱，与Mg2+形成螯合物后则是强荧光化合物。再如，滂铬BBR本身不发荧光，与Al3+在pH＝4.5时形成的螯合物发红色荧光。 Al3+-滂铬BBR螯合物.JPG 取代基对荧光物质的荧光特征和强度也有很大影响。给电
子取代基如―OH、―NH2、―NR2和―OR等可使共轭体系增大，导致荧光增强；吸电子取代基如―COOH、―NO和―NO2
等使荧光减弱，例如，苯胺和苯酚的荧光较苯强，而硝基苯为
非荧光物质。 随着卤素取代基中卤素原子序数的增加，物质的荧光减弱，而磷光增强。这种所谓的“重原子效应”是由于重原子中能级交叉现象严重，容易发生自旋轨道偶合作用，使S1→T1的体系间窜跃显著增加所致。 3．环境因素对荧光的影响 同一荧光物质在不同的溶剂中可能表现出不同的荧光性质。一般来说，电子激发态比基态具有更大的极性。溶剂的极性增强，对激发态会产生更大的稳定作用，结果使物质的荧光波长红移，荧光强度增大。例如，奎宁在苯、乙醇和水中荧光效率的相对大小为1、30和1000。 温度对于溶液荧光强度的影响非常显著。通常认为，辐射跃迁的速率基本不随温度而变，而非辐射跃迁的速率随温度升高而显著地增大。因此，对于大多数荧光物质，升高温度会使非辐射跃迁概率增大，荧光效率降低。由于三重态的寿命比单重激发态寿命更长，温度对于磷光影响比荧光更大。 大多数含有酸性或碱性取代基团的芳香族化合物的荧光性质受溶液pH的影响很大。共轭酸碱两种型体具有不同的电子氛围，往往表现为具有不同荧光性质的两种型体，各具有自己特殊的荧光效率和荧光波长，例如： 不同共轭体系的荧光.JPG不同共轭体系的荧光.doc 溶液中表面活性剂的存在，可以使荧光物质处于更有序的
胶束微环境中，对处于激发单重态的荧光物质分子起保护作用，减小非辐射跃迁的概率，提高荧光效率。 由于氧分子的顺磁性质，溶液中溶解氧的存在，使激发单重态分子向三重态的体系间窜跃速率加大，因而会使荧光效率降低。其它顺磁性物质也有这种作用。 (三)荧光强度与溶液浓度的关系 根据荧光效率的定义，荧光强度If应为所吸收的辐射强度Ia与荧光效率φf的乘积： If = φf Ia =φf (I0-I)
由于 IIA0lg I=I0·10-A 可得 If=φfI0(1-10-A)
!33.2!22.3--3.2320ffAA
AII (5―3)
如果溶液很稀，吸光度A<0.05，方括号中其它各项与第一项相比均可忽略不计，则上式可简化为 If=2.3φfI0A=2.3φfI0kbc (5—4) 可见，当A<0.05时，荧光强度与物质的荧光效率、激发光强度、物质的摩尔吸收系数和溶液的浓度成正比。对于一给定物质，当激发光波长和强度一定时，荧光强度只与溶液浓度有关： If=Kc (5―5) 上式为荧光定量分析的基本依据。以荧光强度对荧光物质的浓度作图，在低浓度时，呈现良好的线性关系。当荧光物质