热板法观察药物的镇痛作用
药理学6 药物的镇痛作用
药物的镇痛作用（热板法）【目的】1.熟悉镇痛药的筛选方法。
2.观察中枢性镇痛药哌替啶的镇痛作用。
【原理】1．致痛模型：热刺激、机械刺激和电刺激致痛模型均适用于筛选麻醉性镇痛药，而扭体法属于化学刺激致痛模型，适用于筛选解热镇痛抗炎药。
本次试验用热板法进行热刺激致痛试验，考察哌替啶的镇痛作用。
将小鼠置于55±0.5 ℃的金属热板上，其“舔后足”现象可作为疼痛反应的指标。
通过考察疼痛反应出现时间（痛阈），可反映镇痛药的疗效。
2. 哌替啶的镇痛机理：作用机制同吗啡，通过激动丘脑内侧、第三脑室、中脑导水管周围灰质、脊髓胶质区的阿片受体，增强体内的抗痛系统的抗痛作用。
【材料】1.器材：电热板、注射器、电子秤；2.药品：0.1%哌替啶溶液、生理盐水、苦味酸；3.动物：小鼠12只，20 g左右，雌性。
【试验步骤】1.小鼠标记，称重；2.筛选并测定给药前痛觉反应时间（T前）：将小鼠置于温度为55±0.5 ℃的金属板上，测定其痛觉反应（“舔后足”）现象出现的时间。
筛选出痛觉反应时间。
在10-30 s内的合格小鼠，此时间也为T前3.分组：随机分为两组，分别为哌替啶组和生理盐水组。
若筛选出的小鼠数量为奇数，则平均分；若为偶数，则哌替啶组多一只。
4.给药：两组动物分别腹腔注射哌替啶和生理盐水，给药体积为0.2 ml/10 g。
记录给药时间。
5.测定给药后痛觉反应时间（T后）：给药30 min后，用热板法测定其痛觉反应（“舔后足”）现象出现的时间。
6.计算痛阈提高率。
痛阈提高率（%）=（T后- T前）/ T前×100%。
7.数据统计分析，得到平均值，标准偏差，Student T-Test得到P值。
【结果】表1哌替啶对小鼠热板法致痛的影响表2 哌替啶对小鼠热板法致痛的影响（mean±SD，n=6）组别痛阈提高率（%）P值哌替啶生理盐水【注意】1．试验选用小鼠均为雌性，因为雄性小鼠阴囊下垂，阴囊皮肤可接触热板，并对疼痛较为敏感，可能影响试验结果；2. 腹腔注射注意正确的操作，防止将将药物注入皮下。
镇痛
用热板法观察度冷丁的镇痛实验
药理教研室
2006.9
一、实验目的和原理
目的：用热板法观察度冷丁的镇痛作用，用组间Ｔ
检验方法（பைடு நூலகம்量指标）计算判定实验结果。
原理：将小鼠置于一定温度（５５±１℃）的热板
上，热刺激小鼠足部产生疼痛反应（舔后 爪），通过测定小鼠痛域（从放入热板到出 现疼痛反应即舔后爪的时间），比较用药组 与对照组小鼠痛域的差异，判定药物（度冷 丁）有无镇痛作用。
二、实验动物:雌性？小鼠,20-30g. 三、实验器材和药品： 器材：热板（恒温水浴、 控温仪、温度计、大烧 杯），鼠笼、大烧杯两只、石棉网、秒表 注射器。 药品：0.2%度冷丁 0.9%氯化钠注射液（生理盐水）
苦味酸
四、实验步骤：
1、将水浴槽加满水，使水面接触热板，使热板 温度维持在55±1℃。 ２、实验动物筛选：将小鼠置于热板上，密切观 察其活动？当出现舔后爪时，立即记录时间并将 鼠取出，选出痛域在30秒之内的小鼠供实验用。 3、将已筛选出的小鼠称重后用苦味酸标记，并 记录体重，然后随机分为两组（实验组2只、对 照组2只）。
4、实验组和对照组分别给药： 实验组：腹腔注射0.2%度冷丁，0.1ml/20g． 对照组：腹腔注射生理盐水，0.1ml/20g．
｛
5、
药理学罗通定实验报告
一、实验目的1. 掌握罗通定镇痛作用的实验方法。
2. 观察罗通定对小鼠疼痛反应的影响。
3. 了解镇痛药物的基本作用机制。
二、实验原理罗通定（Rotundine）是一种非麻醉性镇痛药，主要通过对中枢神经系统的作用发挥镇痛效果。
本实验采用热板法观察罗通定对小鼠疼痛反应的影响，通过比较给药组与空白对照组小鼠舔足反应的时间差异，评估罗通定的镇痛作用。
三、实验材料1. 实验动物：健康成年雄性小鼠，体重20-25g。
2. 药品：罗通定片（规格：0.1g/片）。
3. 仪器：热板仪、电子秤、计时器。
4. 试剂：生理盐水。
四、实验方法1. 实验分组：将实验小鼠随机分为三组，分别为空白对照组、罗通定低剂量组（0.1mg/kg）、罗通定高剂量组（0.2mg/kg）。
2. 热板法镇痛实验：将小鼠置于热板仪上，待小鼠舔足反应时开始计时，记录舔足反应的时间。
3. 给药：罗通定低剂量组和高剂量组小鼠分别给予0.1mg/kg和0.2mg/kg罗通定，空白对照组小鼠给予等体积的生理盐水。
4. 观察与记录：给药后30分钟，再次进行热板法实验，记录小鼠舔足反应的时间。
5. 数据处理：采用统计学方法分析各组小鼠舔足反应时间的差异。
五、实验结果1. 空白对照组：小鼠舔足反应时间为（10.5±1.2）秒。
2. 罗通定低剂量组：小鼠舔足反应时间为（8.2±1.5）秒，与空白对照组相比，差异具有统计学意义（P<0.05）。
3. 罗通定高剂量组：小鼠舔足反应时间为（7.0±1.3）秒，与空白对照组相比，差异具有统计学意义（P<0.01）。
六、实验讨论本实验结果显示，罗通定对小鼠疼痛反应具有显著的镇痛作用。
罗通定低剂量组和高剂量组小鼠的舔足反应时间均明显缩短，说明罗通定可以有效地抑制小鼠的疼痛反应。
这与罗通定对中枢神经系统的作用机制相一致。
罗通定作为一种非麻醉性镇痛药，具有以下特点：1. 作用机制：罗通定通过抑制中枢神经系统内的疼痛信号传递，发挥镇痛作用。
热板法镇痛
热板法镇痛实验【摘要】目的：通过热板法观察麻醉性镇痛药度冷丁（dolantin）与非麻醉性镇痛药罗痛定（rotundine）的镇痛效应。
方法：使用超级恒温器，观察在注射药物前后雌性小鼠产生舐后足反应的时间。
结果：小鼠在注射生理盐水后的15/30/60min的痛阈值与注射前无显著性差异（P>0.05）；小鼠在注射罗痛定后的15/30/60min时的痛阈值相比注射前明显增大（P<0.05）；小鼠在注射度冷丁后的15/30min时的痛阈值相比注射前均明显增大（P<0.05）,但是在60min时小鼠痛阈值却与注射前无显著性差异(p>0.05)；在15/30min时，杜冷丁提高的痛阈值与罗通定无显著差异（P>0.05），在60min时杜冷丁与罗通定提高的痛阈值相比有显著性差异（P<0.05）结论：杜冷丁和罗通定均具有明显镇痛作用。
罗通定的镇痛作用持续时间长于杜冷丁。
关键词杜冷丁罗痛定痛阈热板法1. 材料和方法1.1实验动物 20-25g雌性小鼠1.2 药品0.25%dolantin，0.25%rotundine sulfate，生理盐水1.3 器材数控超级恒温槽，金属罐1.4 调节热板温度开启超级恒温器，调节温度恒定于55±0.1℃1.5 动物筛选取雌性小鼠置于金属罐中，筛选10-30秒内有舔后足反应的合格小鼠3只并各测定正常痛阈值一次，对逃避、跳跃者弃之。
1.6 实验动物处理测量合格小鼠体重并分组，甲鼠腹腔注射生理盐水0.1ml/10g，乙鼠腹腔注射罗通定0.1ml/10g，丙鼠腹腔注射度冷丁0.1ml/10g2. 观察指标1.1测痛阈值记录合格小鼠的正常痛阈值，并分别在注射药后15min、30min、60min各测痛阈值一次并记录痛阈值。
1.21.3计算痛阈提高百分率痛阈提高百分率=（用药后平均热痛阈值—用药前平均痛阈值）/用药前平均痛阈值×100% 1.4测痛阈值记录合格小鼠的正常痛阈值，并分别在注射药后15min、30min、60min各测痛阈值一次并记录痛阈值。
镇痛药物实验
1、热板法镇痛药物实验中，曲马多的阵痛效果好于赖氨匹林。
因为曲马多为中枢性镇痛药，
通过与阿片受体结合并激动阿片受体，从而阻断痛觉冲动的传导过程，产生强大的镇痛作用。
赖氨匹林为解热镇痛药，镇痛部位在外周，通过抑制前列腺素合成酶，使PG的合成减少而产生镇痛作用。
曲马多的镇痛效能远高于赖氨匹林。
2、中枢性镇痛药及外周镇痛药的镇痛机制：
中枢性镇痛药：主要作用于中枢神经系统，选择性地消除或缓解痛觉的药物，可激动阿片受体，模拟内源性阿片肽，阻断痛觉传导通路产生镇痛作用。
外周镇痛药：镇痛作用在外周，它主要通过抑制前列腺素合成酶，使致痛物质前列腺素（PG）合成减少而减轻疼痛。
3、热板法测定药物的镇痛作用试验中，小鼠的筛选：
①取体重18~22g的小鼠
②选择雌性小鼠
③置于热板仪上（温度为55±0.5℃），测定各小鼠正常的痛阈值（痛阈值在5s~30s之
间的为合格小鼠，大于30s——反应迟钝，小于5s——反应过于敏感）。
4、“热板法镇痛药物实验”中应注意的问题：
①测定痛反应时一旦小鼠出现典型痛反应，应立即移开，60s无痛反应也应立即移开热板，避免烫伤小鼠；②不能选用雄性小鼠；③室温应保持在15-20℃为宜；④只有添后足才作为疼痛的指标。
5、“扭体法镇痛药物实验”中应注意的问题：
①醋酸溶液需临时配制，如放置过久，作用明显减弱；②化学刺激法应在室温20℃左右为宜，温度过低时小白鼠扭体次数减少；③小鼠体重应在22~26g左右，体重过轻，牛蹄反应出现频率亦低；④动物的疼痛反应个体差异较大，因此实验用动物数越多结果越可靠。
镇痛药实验
四、化学刺激法
【实验目的】 观察药物的镇痛作用， 实验目的】 观察药物的镇痛作用， 掌握小鼠扭体法实验方法。 掌握小鼠扭体法实验方法。 实验原理】 【实验原理】 小鼠腹腔注射一定容积和 浓度的化学物质，由于刺激腹膜而致小 浓度的化学物质， 鼠出现腹部收缩内凹、躯干与后肢伸张、 鼠出现腹部收缩内凹、躯干与后肢伸张、 臂部高举等行为反应，称为扭体反应。 臂部高举等行为反应，称为扭体反应。 镇痛药可抑制这种反应。 镇痛药可抑制这种反应。
2011-6-1
5
YLS-6A智能热板仪使用方法 智能热板仪使用方法
3. 升温：温度设定好后，仪器自动进入 升温：温度设定好后， 升温阶段， 升温阶段，当温度达到设定值时即可 进行实验。 进行实验。 4. 时间显示和计时控制：时间显示范围 时间显示和计时控制： 为0.01～999.9秒，显示方式为自动归 ～ 秒 零起始式。 零起始式。
YLS-6A智能热板仪使用方法 智能热板仪使用方法
1. 开机：打开后面板上的电源开关，时间 开机：打开后面板上的电源开关， 显示“ 显示“0.00” 。 2. 温度设定：按住升温或降温键超过2秒钟， 温度设定：按住升温或降温键超过 秒钟， 秒钟 温度进入快速调整，松开键后自动停止。 温度进入快速调整，松开键后自动停止。 设定完成后显示窗内数字闪动5秒后自动 设定完成后显示窗内数字闪动 秒后自动 转换成当前温度。 转换成当前温度。
2011-6-1
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表3 药物对小鼠热板法痛阈时间的影响
（x ± s 组别 生理盐水组 罗通定组 痛阈时间（ ） 痛阈时间（s） 给药前 5min 15min 30min 60min n=6） ）表4 药物对小鼠扭体反应的影响
（x ± s 组别 生理盐水组 阿司匹林组 n=6） ） 10min内扭体反应数（次） 内扭体反应数（ 内扭体反应数
镇痛药实验
组别
扭体反应数
生理盐水 罗通定
阿司匹林
2021/4/9
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2021/4/9
20
• 取健康小白鼠3只(18～22g) ，称重，编号。
• 甲鼠腹腔注射生理盐水（0.1ml/10g）
乙鼠腹腔注射0.4% 罗通定（0.1ml/10g）
丙鼠灌胃6% 阿司匹林混悬液(0.1ml/10g)
• 给药后30min，各鼠腹腔注射1%冰醋酸溶
液 0.2ml/只，观察每只鼠10min内产生扭体
反应的次数。
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表2 药物对小鼠扭体反应数的影响小组实验结果
鼠号 甲鼠 乙鼠 丙鼠
药品 生理盐水
罗通定 阿司匹林
扭体反应数
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表3 药物对小鼠热板法痛阈时间的影响
（x ± s n=6）
组别
测定时间（min）
给药前 5
15
30
60
生理盐水
罗通定
阿司匹林
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表4 药物对小鼠扭体反应的影响
重、标记。按表分别给药，记录给药后不 同时间的小鼠的痛觉反应。
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药物对小鼠热板法痛阈时间的影响
鼠号
药品
测定时间（min） 给药前 5 15 30 60
甲鼠 生理盐水
乙鼠 罗通定
丙鼠 阿司匹林
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【注意事项】
1. 热板法小鼠个体差异较大, 应选择痛阈值 在10～30秒之间的实验动物。 2. 实验应选择雌性小鼠,因雄性小鼠在遇热时 睾丸下降,阴囊触及热板反应过敏,易致跳跃, 影响实验准确性。 3. 作用60s仍未出现舔后足的小鼠，痛阈值统 一记为60s。
药物的镇痛作用(实验2)
药物的镇痛作用目的与要求1. 学习常用的三种疼痛实验模型的制作。
2. 观察哌替啶的镇痛作用。
实验原理疼痛是临床的常见症状，疼痛除了由于伤害性刺激所引起的情绪反应外，往往还表现出自主神经反应、躯体防御反应和心理情感及行为反应等。
痛觉不仅具有较大的个体差异，而且同一个体在不同条件下的痛觉也不同。
痛觉的观察指标容易受主观因素的影响，目前常用一种衡量痛觉敏感性的指标即痛觉阈值（简称痛阈值）客观地对痛觉做出描述。
解热镇痛药、镇痛药及麻醉药等是目前临床上常用的具有镇痛作用的药物，可通过提高痛觉阈值达到镇痛的目的。
疼痛实验模型的制作，常用的方法有：热刺激、化学刺激、机械刺激及电刺激等一、 热板法实验材料一. 实验动物雌性小鼠（18～22 g ）6～7只。
二．器材与药品Woolfe 热板、天平、鼠笼、注射器（1ml ）2支、注射针头、秒表；0.4%盐酸哌替啶溶液、3%安乃近、生理盐水、0.5%苦味酸溶液。
实验方法1. 筛选实验动物 将热板温度调节至（55±0.5）℃，置小鼠与热板上，测定各小鼠的正常痛反应（舔后足或抬后足并回头）时间，共2次，每次间隔5min ，该时间即为小鼠的痛阈值，以平均值不超过30s 为合格，共选出6只小鼠供实验用。
2. 动物分组及给药 取选出的6只小鼠，随机分为3组，即实验组1、实验组2和对照组（每组2只），称重编号。
按上述方法分别测定小鼠给药前的痛阈值。
实验组1小鼠腹腔注射1%盐酸哌替啶40mg/10g （0.1ml/10g ），实验组2小鼠腹腔注视3%安乃近300mg/10g （0.1ml/10g ），对照组腹腔注射等容量生理盐水。
于注射后15min 、30min 、45min 分别再次测定实验组和对照组各小鼠痛阈值。
对60s 不舔后足、不抬后足并回头的小鼠，痛阈值按60s 计算。
3. 结果计算 收集整个实验室结果，按下列公式计算不同时间的痛阈改变百分率。
痛阈改变百分率=%100- 用药前平均痛阈值用药前平均痛阈值用药后平均痛阈值 4. 将小鼠给药前、后的痛阈值记入表13-4。
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阿托品化
阿托品中毒
神经系统 意识清醒或模糊
皮肤
颜面潮红、干燥
谵妄、幻觉、双手抓 空、昏迷
紫红、干燥
瞳孔
有小扩大不再小 极度扩大
体温
正常或轻度升高 高热
心率
增快≤120，脉搏快 心动过速、甚至室颤 而有力
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实验动物
30
实验材料
测瞳尺 注射器 ５％精制敌百虫溶液 ０.２％硫酸阿托品溶液 ２.５％解磷定溶液
热板法观察药物的镇痛作用
机能实验室
25.05.2020
实验目的
了解热板法筛选新药或比较各种 药物镇痛效价的方法。
2
阿片（opium）
3
含脑啡肽的神经元
作 用 机 制 示 冲动→ 意 图 痛觉感受神经元
谷氨酸、SP
镇痛药
接受神经元
受体
4
实验动物
小鼠，雌性，18～ 25g
5
实验材料
智能热板仪 0.2%盐酸吗啡 苦味酸溶液 生理盐水 注射器
20
注意事项
醋酸溶液必须现配。 结果可以班统计，当给药组比对照组的
扭体发生率减少50%以上时，才毒及其解救
25.05.2020
实验目的
观察有机磷农药中毒的症状及阿托 品和解磷定的作用。
23
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中毒机制
有机磷农药 — 胆碱酯酶 磷酰化胆碱酯酶
乙酰胆碱
乙酸 胆碱
6
实验方法
智能热板仪温度控制在(55±0.5℃)并要 保持热板仪表面干燥
筛选小鼠 小鼠放入热板仪→测定其痛觉反应时间 10只入选6只→并记录正常痛阈值
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实验方法
筛选原则： 痛阈值为从小鼠放入热板到出现舔后足
现象的时间，用秒表计时。 放入热板后，若小鼠跳跃者剔除。 痛阈时间应在10～30S之间，否则剔除。 应测两次痛阈时间，取均值，但需注意
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实验方法
取家兔一只，称重。观察记录：活动情 况、呼吸、瞳孔大小、唾液分泌、大小 便、肌张力及有无肌震颤。
耳缘静脉注射5%敌百虫 2.0ml/kg观察记 录各指标。
中毒明显后，耳缘静脉注射0.2%硫酸阿 托品溶液1.0ml/kg观察记录各指标。
耳缘静脉注射2.5 %解磷定溶液2.0ml/kg。
32
实验组和对照组痛阈提高百分率
10
不同时间所测得的痛阈平均值计算痛阈提高百分率。
痛阈提 高 用百 药分 用 后率 药 平 用 前 均药 平 痛前 均 阈平 痛 值 1均 0 阈 % 0痛
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注意事项
避免实验周转环境的改变，如室温、光 线、声音。
小鼠应选雌性。 对给药后60秒没有出现疼痛表现的应按
60秒计，以防小鼠烫伤。
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扭体法观察药物的镇痛作用
25.05.2020
实验目的
学习用腹腔注射刺激性物质引起扭体反应 来筛选镇痛药的方法。
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实验动物
小鼠（18～25g)
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实验材料
大烧杯 注射器 秒表 0.1%盐酸吗啡 4% 阿司匹林 0.6%醋酸 生理盐水 苦味酸溶液
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实验方法
取3只小鼠—编号—称重 甲鼠—皮下注射吗啡0.15ml/10g
毒蕈碱样、烟碱样和中枢神经系统症状。 磷酰化胆碱酶酯酶72小时老化，不易复能。
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急性中毒的治疗原则
清除毒物，避免继续吸收 脱离中毒现场，应用温水或肥皂水清洗
染毒皮肤；对经口中毒者，可用2%碳酸氢钠 或1%食盐水反复洗胃；再用硫酸镁导泻。 对症治疗减轻中毒症状
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急性中毒的解救原则
药物解救 M受体阻断药：阿托品
两次测定的时间间隔应超过5min。
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实验方法
实验组3只，腹腔注射吗啡0.1ml/10g 选取6只小鼠，编号
对照组3只，腹腔注射生理盐水0.1ml/10g 给药15，30，45，60分钟后分别测定小鼠痛阈值
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实验结果
组别 体重 药量
痛觉反应时间（s）
（g）
用药前
用药后
15 30 45 60
实验组 1 2 3 平均 对照组 1 2 3 平均
实验结果
观察阶段 给药前
活动情况 呼吸情况 瞳孔 唾液 大小便次 肌张力 大小 分泌 数及形状 及震颤
给敌百虫后
给阿托品后
给解磷定后
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注意事项
有机磷为剧毒药，切勿污染。 本实验为分析阿托品和解磷定的解救
机制而设计，临床上须将两药合用， 才有最好的效果。 有机磷农药静脉注射时中毒症状发生 快，抢救需及时。
乙鼠—灌胃4%阿司匹林0.15ml/10g 丙鼠—灌胃生理盐水0.15ml/10g 各小鼠30分钟后分别腹腔注射0.6%醋酸溶 液 0.1ml/10g 给药5-15分钟内各鼠有无扭体反应出现
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实验结果
鼠号 体重（g） 药量
扭体次数
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计算吗啡和阿司匹林的镇痛百分率
镇痛百 对 分照 率 对 组照 扭 给 组 体 药 扭 次 组 体 数 扭 1 次 0% 体 0 数
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