小鼠胚胎干细胞分化扩增期连续低密度传代对原_省略_Oct_4阳性细胞比例及神经分
高考生物二轮专题课件：专题三 细胞的生命历程
3.(多选)(2020·江苏卷，22)有研究者采用荧光染色法制片，在显微镜下观察拟南 芥(2n＝10)花药减数分裂细胞中染色体形态、位置和数目，以下为镜检时拍
摄的4幅图片。下列叙述正确的是(CD )
A.图甲、丙中细胞处于减数第一次分裂时期 B.图甲细胞中同源染色体已彼此分离 C.图乙细胞中5个四分体排列在赤道板附近 D.图中细胞按照减数分裂时期排列的先后顺序为甲→乙→丙→丁
2.(2021·江苏卷，7)A和a，B和b为一对同源染色体上的两对等位基因。有关有
丝分裂和减数分裂叙述正确的是C( )
A.多细胞生物体内都同时进行这两种形式的细胞分裂 B.减数分裂的两次细胞分裂前都要进行染色质DNA的复制 C.有丝分裂的2个子细胞中都含有Aa，减数分裂Ⅰ的2个子细胞中也可能都含 有Aa D.有丝分裂都形成AaBb型2个子细胞，减数分裂都形成AB、Ab、aB、ab型4 个子细胞
解析 根据题干中的信息已经知道题图是处于减数分裂不同时期的细胞图像， 由于四幅图中甲和乙图均有5个荧光点，且荧光比较明显，甲图5个荧光点分布 较为散乱，乙图5个荧光点相对集中地分布在图的中央，所以可以快速判断甲图 细胞处于减数第一次分裂前期(四分体时期)，乙图细胞处于减数第一次分裂中 期；丙图一共有10个荧光点，且荧光点较小，均分为两个区域并相对集中于一 条线上，可以判断丙图细胞处于减数第二次分裂中期；丁图一共有20个荧光点， 均分为四个区域，可以判断丁图细胞处于减数第二次分裂后期或末期。故A、B 错误，C、D正确。
减数分裂Ⅰ或减数分裂Ⅱ时未分离 。
1.(2022·江苏卷，2)下列关于细胞生命历程的叙述正确的是( C )
A.胚胎干细胞为未分化细胞，不进行基因选择性表达 B.成人脑神经细胞衰老前后，代谢速率和增殖速率都由快变慢 C.刚出生不久的婴儿体内也会有许多细胞发生凋亡 D.只有癌细胞中能同时发现突变的原癌基因和抑癌基因 解析 胚胎干细胞可分化为各种细胞，这一过程中可进行基因选择性表达，A 错误；细胞衰老后不再增殖，B错误；细胞凋亡是机体程序性死亡，发生在个 体发育的整个过程中，C正确；细胞癌变是多个原癌基因和抑癌基因突变积累 的结果，因此正常细胞中也可发现突变的原癌基因和抑癌基因，D错误。
干货：干细胞疗法工艺开发的关键点
⼲货：⼲细胞疗法⼯艺开发的关键点⼈⽣⼩哲理不贬不褒如实陈述⽅为科普之道正⽂从基础研究到临床应⽤还有很长的路要⾛，但这也是每个新技术都必须经历的过程。
撰⽂：⼩编来源：⽣物抗体圈●●●在过去的⼗年中，细胞疗法，⽣物制造和合成⽣物学的进步推动了全球⼲细胞疗法⾏业的发展。
⼲细胞治疗为⼀些疑难杂症提供了⼀种新的选择。
⼲细胞治疗的⽬的就是替代或者再⽣体内功能失调或受伤的细胞、组织或器官。
⼲细胞可以在向患者给药之前，在体外改变它们的⽣物学特性，从⽽达到更加精准和⾼效的治疗。
现今，⼲细胞的治疗从传统的输⾎到⾃体⼲细胞移植，到最新的同种异体⼯程细胞治疗。
⼲细胞分化（图源：Wikipedia）然⽽制造这些“活的药物”的复杂性不容⼩视。
每种产品在其开发、制造、分装和上市的每个阶段，都⾯临着特定的挑战和其不同的复杂性。
在⼲细胞治疗领域，细胞原材料就显得尤为重要，细胞的来源、稳定的供应、细胞运输、制造、产品开发、治疗⽅案和治疗过程这些都决定了治疗⽅法的成败。
1 间充质⼲细胞的应⽤1991年，美国⽣物学家Caplan⾸次从⾻髓基质的⽀持性组织中分离出⼀些成体⼲细胞，这些细胞具有分化成软⾻、⾻和脂肪组织的能⼒，并可为造⾎⼲细胞发育成各型⾎细胞提供所需信号因⼦，被命名为间充质⼲细胞( mesenchymal stem cell，MSCs) 。
富含MSC的⼈体组织在此之后，有⼤量研究报道了MSCs 具有分化多能性，在体外诱导条件天，可分化为外胚层( 如神经细胞) 和内胚层( 如肝细胞) 的多种细胞。
⽬前，虽然各国均开展了⼤量的临床研究，但成功转化为商业化产品的数量很少。
虽然我国尚未批准任何MSCs商业化产品上市，但随着临床个体化⼲细胞治疗经验的不断积累，国产MSCs的申报数量预期会逐渐增加。
2 ⼲细胞疗法的质量法规要求中国的⼲细胞临床试验，是从以医院为主体的医疗技术探索开始的。
⽬前在我国，⼲细胞按药品、技术管理的“类双轨制”监管。
慢病毒介导的绿色荧光蛋白报告基因对人多能干细胞的生物风险评估研究
工 作 液 、Blebbistatin购 自 安 徽 中 盛 溯 源 生 物 科 技 有 限 公 司 ； 2 m M 谷氨酸盐,0.18 pM p- 巯 基 乙 醇 和 10 mM Y-27632)培养
Matrige丨 购 自 美 国 Coming 公 司 ；Ubi-MCS-EGFP] RES- 8 天 ，形成拟胚体( embryonic body,E B ),将 这 些 E B 铺 到 0.1%
A 通 讯 作 者 ：聂 魏 ，主 要 研 究 方 向 ：干 细 胞 与 组 织 重 建 ，E - m a i l :dr.xinnie@
( 收稿丨J 期 ：2020-丨2 - 2 3 接 受 日 期 :202丨-01-1 8 )
现 物 医 学 Progress in Modern Biomedicine VoL21 NO.12 JUN^021
GFP)报 告 基 因 在 研 究 中 的 应 用 十 分 普 遍 ，且具有其独特的优 势161其 中 慢 病 毒 载 体 由 于 其 整 合 基 因 组 的 特 性 ，其在感染时可 以 有 效 地 将 其 遗 传 物 质 引 入 靶 细 胞 ，可 在 细 胞 或 组 织 中 长 期 稳 定 表 达 目 标 蛋 丨 广 泛 应 用 于 基 W转染m 。但对于慢病毒的安全 性一直存在疑虑，是 否 对 0 标细胞的生物学特性产生不良影响 也较少报道。本 研 究 的 目 的 是 通 过 慢 病 毒 构 建 稳 定 表 达GFP 的 hiPSC,并 验 证 G F P 是否影响细胞的多能性和分化能力。
Green Fluorescence Protein Reporter Gene Labeled Human Induced Pluripotent Stem Cells Using Lentivirus*
用非整合重编程技术构建人外周血单个核细胞来源的诱导多能干细胞
用非整合重编程技术构建人外周血单个核细胞来源的诱导多能干细胞梁栋;胡焕然;李雅红;刘安;林颖;马定远;张菁菁;王艳;胡平【摘要】目的用非整合重编程技术构建人外周血单个核细胞(PBMC)来源诱导多能干细胞(iPSC).方法收集健康人外周血标本,分离PBMC,用含4个重编程转录因子(OCT3/4、SOX2、KLF4和c-MYC)的仙台病毒感染PBMC,并用无饲养层细胞的培养体系培育获得iPSC.通过细胞形态学、碱性磷酸酶(AP)染色、免疫荧光染色、拟胚体形成和分化实验对iPSC细胞进行多能性验证;用核型分析和仙台病毒基因组RNA检测对其进行安全性验证.结果在仙台病毒感染后16 d后,PBMC出现iPSC样克隆.iPSC可进行传代培养,且经多能性验证实验证明其具有多能性;安全性验证结果表明,iPSC核型正常,外源性病毒基因组RNA可被完全清除.结论建立了对PBMC进行非整合重编程的诱导体系,并获得了具有多能性、核型正常且不合外源基因的iPSC.【期刊名称】《临床检验杂志》【年(卷),期】2015(033)010【总页数】4页(P740-743)【关键词】人外周血单个核细胞;重编程;诱导多能干细胞;非整合;仙台病毒【作者】梁栋;胡焕然;李雅红;刘安;林颖;马定远;张菁菁;王艳;胡平【作者单位】南京医科大学附属南京妇幼保健院产前诊断中心,南京210004;南京医科大学附属南京妇幼保健院产前诊断中心,南京210004;南京医科大学附属南京妇幼保健院产前诊断中心,南京210004;南京医科大学附属南京妇幼保健院产前诊断中心,南京210004;南京医科大学附属南京妇幼保健院产前诊断中心,南京210004;南京医科大学附属南京妇幼保健院产前诊断中心,南京210004;南京医科大学附属南京妇幼保健院产前诊断中心,南京210004;南京医科大学附属南京妇幼保健院产前诊断中心,南京210004;南京医科大学附属南京妇幼保健院产前诊断中心,南京210004【正文语种】中文【中图分类】R394.22006年，日本科学家Shinya Yamanaka首次通过4个重要的转录因子OCT3/4、SOX2、KLF4和c-MYC实现对已分化体细胞的重编程，从而得到与胚胎干细胞类似的诱导多能干细胞 (iPSC)[1]。
胎盘来源间充质干细胞的生物学特性及临床应用重点
混合淋巴反应中抑制同种异体反应性Ｔ细胞［１７－１８］。对其免 疫抑制机制存在很多争论，如诱导ＣＤ８＋Ｔ细胞凋亡学说、 Ｆａｓ受体学说和剂量依赖学说等¨”０｜。研究表明ＰＭＳＣ有 免疫调节作用，可以控制小鼠的急性移植物抗宿主病心“。！Ｑ旦筮丝鲞筮！！塑坠ｉ！』ｇ！旦ｉ！！：Ｑ！！！！里！！！！：∑！！：坐№：！！ 和ＳＳＥＡ－４。ＲＴ—ＰＣＲ检测显示，细胞表达ＧＡＴＡ－４、肌钙蛋白 Ｔ和缝隙连接蛋白４３ ＲＮＡ，约半数细胞表达ＯＣＴ－４【３“。 ３．基蜕膜来源间充质干细胞：基蜕膜来源间充质干细 胞形态上与骨髓间充质干细胞大致相同，呈成纤维细胞样。 它能够表达ＣＤ４４、ＣＤ７３、ＣＤ９０和ＣＤｌ０５，并且不表达 ＣＤｌｌｂ、ＣＤ３４和ＣＤ４５。与此同时，基蜕膜来源问充质干细 胞能够抑制外周血单个核细胞分泌干扰素＾ｙ。正是由于这 些特性，使得基蜕膜来源间充质干细胞能够作为一种重要的 自体细胞移植供体，应用于免疫系统疾病的治疗∞…。 ４．与其他类型间充质干细胞的比较：由于ＰＭＳＣ免疫原 性低，相比于ＢＭ－ＭＳＣ，它能够影响单核细胞以及树突细胞 的抗原递呈过程，从而导致Ｔ细胞增殖减弱，较少引起炎症 反应，因此具有更好的治疗效果¨…。除此之外，ＰＭＳＣ与其 他来源的问充质干细胞在生物学特征上也有所差异。例如， 脐带来源间充质干细胞与ＰＭＳＣ都被证实可以应用于脑和 脊髓损伤的修复，但由于细胞生物学特性不同，脐带来源问 充质干细胞较多地表现出纤维样细胞的特点，细胞增殖速度 快，凋亡少；而ＰＭＳＣ则表现出扁平细胞的特点，能够表达更 多的生长因子。脐带来源间充质干细胞较ＰＭＳＣ细胞分化 率低。ＰＭＳＣ虽然在细胞迁移能力上稍逊于脐带来源间充 质干细胞，但其黏附性能好一“，有利于细胞生长的稳定，因 此在神经系统损伤领域具有广阔的应用前景。间充质干细 胞虽然有多能干细胞的特性，但它却很难向肝细胞分化，尤 其是ＢＭ—ＭＳＣ或脂肪来源间充质干细胞。然而有趣的是， ＰＭＳＣ却能够表达肝细胞生长因子＂“，帮助自身向肝细胞分 化，与其他问充质干细胞比较有更强的增殖和分化能力。因 此，ＰＭＳＣ治疗肝脏疾病具有显著的优势。另外，ＰＭＳＣ还有 向骨骼肌细胞分化的能力。３“，其他类型的间充质干细胞的 分化潜能与之比较小得多。 综上所述，目前的研究提示ＰＭＳＣ的干细胞特性既不同 于胚胎来源间充质干细胞，又不同于ＢＭ．ＭＳＣ，其干细胞特 征及相应的扩增潜力还有待进一步探讨。 二、ＰＭＳＣ的临床应用 近年来，间充质干细胞移植疗法作为很有希望的治疗手 段被广泛研究，并逐渐开始应用于临床中。然而，由于成体 干细胞起步较早，因此临床研究主要以自体ＢＭ—ＭＳＣ为主， ＰＭＳＣ的研究仍主要集中在实验室和动物实验阶段。 目前，ＰＭＳＣ主要的研究方向是对缺血性疾病如心肌梗 死以及糖尿病导致下肢缺血坏死的治疗。２０１３年，Ｋｒａｎｚ 等＿３ ７。将ＰＭＳＣ移植至小鼠心肌梗死模型上，发现相较于对 照组小鼠，接受干细胞移植疗法的小鼠４周后心肌收缩性更 强、梗死面积更小、坏死面积更少，证实ＰＭＳＣ对于心肌梗死 等缺血性疾病有良好的治疗效果。Ｋｉｎｚｅｒ等Ｈ副在２０１４年进 行的大鼠模型实验证实，ＰＭＳＣ有促进新生血管形成的效 果。钱寒光等口９。的研究证实，ＰＭＳＣ在新西兰白兔中有促进 血管新生的作用，并且可以促进骨组织新生。 近年发现ＰＭＳＣ可以应用于相当广泛的领域。 Ｃｈａｍｂｅｒｓ等Ⅲ１和Ｃａｒｇｎｏｎｉ等。４¨分别在一期临床试验和动
细胞重编程及其影响因素
细胞重编程及其影响因素彭正军;刘路;凌均棨【摘要】细胞重编程是指分化的细胞在特定的条件下反转恢复到全能性状态,或者形成胚胎干细胞系,或者进一步发生形成一个新个体的过程.重编程诱导体细胞为诱导性多能性干细胞,解决了种子细胞来源的问题.氧化应激、低氧和热处理等微环境改变可启动和诱导核心转录因子激活,启动重编程过程,促使已分化体细胞去分化为未分化状态的前体或干细胞.牙髓细胞和牙周膜细胞拥有干细胞性能,是牙再生的种子细胞.牙髓在受到外伤和炎症刺激时易处于低血低氧状态,低氧状态激活牙髓细胞重编程相关基因表达,恢复牙髓细胞再生能力.微环境改变使分化成熟的细胞去分化为未成熟的更原始细胞,为体细胞诱导多能干细胞提供了新的途径.本文就细胞重编、细胞重编程的作用因素、微环境对口腔干细胞重编程的作用等研究进展作一综述.【期刊名称】《国际口腔医学杂志》【年(卷),期】2014(041)003【总页数】4页(P300-303)【关键词】细胞培养微环境;重编程;细胞多能性【作者】彭正军;刘路;凌均棨【作者单位】中山大学光华口腔医学院·附属口腔医院·口腔医学研究所;广东省口腔医学重点实验室广州510055;【正文语种】中文【中图分类】Q256干细胞龛是控制干细胞自我更新和分化以及调节干细胞活性以维持机体内环境稳定及组织再生的细胞微环境，包括细胞和细胞外基质[1]。
微环境是维持细胞新陈代谢、增殖和分化以及信号转导通路的媒介，是细胞之间相互依存、交互作用的基础。
微环境的变化如氧化应激、低氧、热处理、化学诱导、细胞相互作用可能诱导细胞基因表达模式的改变，启动重编程过程，促使已分化的体细胞去分化为未分化状态的前体或干细胞，为组织工程种子细胞诱导增加新的途径。
1 细胞重编程细胞重编程是指分化的细胞在特定的条件下反转恢复到全能性状态，或者形成胚胎干细胞系，或者进一步发生形成一个新个体的过程。
胚胎干细胞具备良好的干细胞潜能，但却难以解决伦理和免疫排斥问题。
第二胚层决定
内容提要
Sox2，Nanog与早期发育 第二胚层决定的分子机制
发育过程中相关的干细胞 DNA甲基化与发育
Sox2 (SRY-related HMG-box gene 2)
属于SOX蛋白质家族，通过79个氨基酸的 HMG （high mobility group)结构域与DNA结 合。 最早表达的干细胞多能性相关基因之一，在 维持干细胞多能性和种系特性方面起到非常 关键的作用。 在植入前胚胎的ICM、ES细胞、EC细胞和生 殖细胞上，SOX2和Oct4共表达。
Nanog在植入前胚胎中的表达
Nanog最早出 现在紧束化桑 椹胚中
Nanog在囊 胚中主要 表达在ICM
Cell, 113(5): 643-655, 2003
Nanog-null embryos
囊胚体外培养10天
分离内细胞团体外 培养4天，缺乏 Nanog使ICM分化 成内胚层样细胞
Nanog与早期胚胎发育
使用化学抑制剂或基因敲除将FGF信号阻断后，所 以的ICM选择EPI 命运。 高剂量的外源FGF4可以诱导相反的表型，所有ICM 细胞选择PrE的命运。
GATA6标记PrE细胞 Nanog标记EPI细胞
早期（E3.75）囊胚中PE和EPI祖细胞 混合在一起，不能从位置区分
Development 137, 715-724 (2010)
DEVELOPMENTAL DYNAMICS 237:2820–2829, 2008
PE标记物
VE标记物
卵圆柱阶段GATA6只表达 在VE上，而GATA4在两 者均有表达
干细胞治疗PPT课件
.东北师范大学
供体细胞核与受体细胞质相互作用
核移植后,延长核质相互作用时间可促 进核重塑及发育程序的重编程。
G0与G1早期细胞此时DNA合成未开始， 细胞活动缓慢，移入卵母细胞后需用 较长时间从抑制状态恢复，这恰好利 于卵母细胞质对移植核的再编程过程。
17
.东北师范大学
干细胞治疗
18
.
干细胞治疗的特点
括营养、生长及抗凋亡因子等。 促进细胞间传导能力，包括电刺激、
电传导、细胞连接、传导通路重建、 离子通道开放与介质释放等。
20
.
干细胞移植的安全性问题
除结果观察外，移植后一般不易证实在 靶器官中能否产生足够的效应细胞。
异源污染：是否能避免动物性污染。 致癌性：干细胞体外培养扩增能否形成
突变积累，干细胞有形成畸胎瘤的倾向。 移植稳定性：移植后的免疫排斥问题。
瞬间性钙震荡是精子入卵后引起激 活及胚胎发育的基础。震荡频率、 振幅及持续时间都将影响胚胎发育。
凡能引起钙震荡的方法都能激活卵 母细胞及核移植胚胎。
11
.东北师范大学
受精瞬间触发的卵细胞钙震荡 (calcium wave)
12
.东北师范大学
重组胚孤雌激活的常用方法
电激活:高压直流脉冲形成瞬间微孔， 钙离子进入，卵母细胞激活，多次脉 动可提高激活率。
40
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脐带间充质干细胞移植治疗结果
8例患者均移植成功，中途无脱落。 治疗有效：对肌强直、震颤等症状改
善显著。与移植前相比专业评分有所 降低，差异比较明显。 治疗无效：对运动迟缓、体位不稳等 症状未见改善，主要可能是观察期较 短的原因。
41
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间充质干细胞治疗帕金森病的可能机制
干细胞存储：人类的生命银行，守护健康未来
干细胞存储：人类的生命银行，守护健康未来什么是“生命银行”？银行，是货币存取，并可通过借贷流通实现财富保值、增值的金融机构。
“生命银行”是一种形象的比喻，将充满健康活性的“生命种子”——干细胞，通过高科技手段安全地保存下来，以备未来为自身或家人治疗重大疾病提供特殊医疗资源的“生命健康储存”方式。
从生命保险的意义上讲，干细胞存储又称为生命健康“大病超级保单”。
❖存储场所“生命银行”的外在形式或场所是干细胞库❖存储物品1.新生儿类：脐带间充质干细胞、胎盘亚全能干细胞、羊膜多能干细胞、胎盘造血干细胞；2.成人类：成人脂肪干细胞、成年女性宫内膜（经血）干细胞、牙髓干细胞、免疫细胞。
❖存储环境-196℃深低温液氮❖存储期限一般可存储10-25年。
长期保存，随用随取。
❖存储程序采集、分离、制备、提纯、检测、低温存储及严苛的监督管理。
❖作用/功能可代替骨髓和外周干细胞移植，治疗诸多传统医学上的“不治之症”，如血液系统疾病、先天性免疫缺损、遗传疾病、帕金森症、糖尿病、老年性痴呆、心脏病、脊髓损伤等多种疾病，防止肿瘤放化疗对骨髓造血机能的抑制。
可用于供体自身或家族成员。
❖治疗特点无排斥反应、成本低、疗效好、无副作用。
01脐带间充质干细胞间充质干细胞（Mesenchymal Stem Cell，MSC），具有亚全能分化潜能，在特定环境下，能够诱导分化成为多种组织细胞——如神经、心脏、肝脏、骨、软骨、肌腱、脂肪、上皮等多种细胞，为多种疾病的治疗提供宝贵的原材料。
一根脐带能够提取间充质干细胞的数量相当于成人5000ml骨髓中的含量，并且纯度高、活性高，品质优良，体外增殖能力强，是理想的间充质干细胞来源。
❖医疗价值我国已开始用间充质干细胞治疗临床上一些难治性疾病，如脊髓损伤、脑瘫、肌萎缩侧索硬化症、系统性红斑狼疮、系统性硬化症、克隆氏病、中风、糖尿病、糖尿病足、肝硬化等。
临床实践表明，间充质干细胞众多疾病的治疗均疗效明显。
对多潜能干细胞技术的一些思考
对多潜能干细胞技术的一些思考作者：张灿灿来源：《武汉科技报·科教论坛》2013年第11期【摘要】胚胎干细胞系可分化为多种细胞类型，又是能在培养基中不断自我更新的细胞来源。
它发展为胚体后的生物系统，可模拟体内细胞与组织间复杂的相互作用，这在药物研究领域具有广泛的用途。
胚胎干细胞有望在短期内就能体现的优势在于药物筛选中。
【关键词】干细胞；潜能；反转录一、引言干细胞（stem cells）是人体及其各种组织细胞的初始来源，其最显著的生物学特征是既有自我更新和不断增殖的能力，又有多向分化的潜能.干细胞根据不同的来源分为成体干细胞（somaticstem cells）和胚胎干细胞（embryonic stem cells，ES细胞）。
成体干细胞包括骨髓间充质干细胞、胰腺干细胞、神经干细胞等成体组织中存在的干细胞，理论上在特定条件下可分化为特定的组织器官，是修复和再生的基础.ES细胞是从着床前的早期胚胎（囊胚）内细胞团中分离得到的一种二倍体细胞，理论上具有发育和分化成为机体内几乎所有组织细胞类型的潜能。
治疗性克隆是开展ES细胞研究的终极目标，但有关ES细胞和治疗性克隆的研究一直存在激烈的伦理学争论。
近1年来，为避开伦理学争论，国外学者通过体细胞体外基因转染技术建立诱导性多潜能干细胞（induced pluripotent stem cells，iPS细胞）系。
Hanna et al近期已经进行了iPS细胞应用基础研究的首次尝试，利用人类镰状细胞性贫血的小鼠动物模型，取其尾尖部皮肤的成纤维细胞，通过导入Oct4、Sox2、Klf4及c-Myc基因，获得自体iPS细胞。
干细胞分为成体干细胞和胚胎干（ES）细胞，ES细胞是从囊胚内细胞团中分离得到的一种二倍体细胞，具有发育和分化成为机体内几乎所有组织细胞类型的潜能。
但ES细胞的研究一直存在激烈的伦理学争论，为避开伦理学争论，国外学者通过体细胞体外基因转染技术建立诱导性多潜能干（iPS）细胞系。