酶工程与蛋白质工程

酶工程与蛋白质工程

酶工程与蛋白质工程是现代生物技术的重要领域,它们以分子水平为基础,通过基因工程技术来改造酶和蛋白质。酶工程主要研究酶的结构与功能关系以及酶催化反应机理,以此来优化酶的性质和功能;而蛋白质工程则致力于蛋白质的高表达、纯化和改造,进而实现分子水平的控制和利用。两者交叉融合,共同应用于工业、医药、环保和食品等各个领域,促进了生物技术的发展和推广。

一、酶工程简介

酶是一种生物催化剂,具有极高的选择性和催化效率。酶工程旨在通过对酶的分子结构和催化机理的研究,优化酶的性质和功能,使其在特定条件下能够更高效地催化反应。比如,通过改变酶的氨基酸序列,可以实现酶催化活性和稳定性的提高。再比如,通过引入新的催化中心或变异剂,可以改变酶的底物特异性和反应特性。这些优化方法可以显著提高酶的效率和选择性,为实现工业生产和科学研究提供了有效手段。

酶工程的具体步骤如下:

1. 酶的筛选和分离。这个步骤是酶工程的基础,通常需要从自然界中分离出能够催化特定反应的酶。现代酶工程技术一般采用高通量筛选法,通过分子筛、高速离心、色谱法等方法来分离出酶的纯品。

2. 酶的分子结构分析。这个步骤是为了了解酶的分子结构和功能关系,找到优化方案的基础。目前,常用的酶的分析方法有X射线晶体学和核磁共振法。

3. 酶的基因工程改造。通过基因工程技术,改变酶的氨基酸序列和三维结构,使其获得更高的活性和稳定性。常用的方法有扩展、交换和修饰等方法。

4. 酶的活性和特性检测。通过活性酶测定、底物特异性、pH和温度对酶催化反应的影响等方法来检测酶的改造效果。

5. 酶的产量提高。通过使用表达载体、调节生产菌株的生长条件等方法,使酶的产量达到最高。

二、蛋白质工程简介

蛋白质工程是将目标蛋白基因从生物体内放大、纯化、定位和表达,以达到高效率和高纯度的目的。主要应用于药物研发、工业化生产、分子诊断和分子工业等领域,对于制造可溶性蛋白、表达蛋白、纯化蛋白和修饰蛋白等方面都发挥着重要作用。

蛋白质工程的具体步骤如下:

1. 蛋白基因的放大和插入载体。将目标蛋白基因从DNA中放大,通过重组DNA技术将其插入表达载体中,使其能够在宿主细胞中得到表达。

2. 蛋白质表达的筛选和鉴定。在宿主细胞中大规模表达目标蛋白,对表达得到的蛋白进行筛选和鉴定。

3. 蛋白质的纯化和定位。将表达得到的蛋白进行纯化和定位,使其达到所需的纯度和功能要求。

4. 蛋白质的修饰。通过协同表达系统,如包括糖基化系统、脂肪基化系统等,使得蛋白质达到复杂的化学修饰。

5. 蛋白质的工业化生产。将蛋白质生产工艺工业化,并制成成品,达到市场需求。

三、相互作用与应用领域

酶工程和蛋白工程有很多相同之处,比如它们都需要对蛋白质的三维结构和功能进行研究,了解基本原理和关键技术。此外,它们的应用领域也是相似的。比如酶和蛋白质都被广泛应用于制药、工业化生产和分子诊断等领域。在生物科技研究中,若将两者结合使用,能够发挥更大的效益。比如,酶和蛋白质相互作用可以高效地合成复杂小分子化合物,具有广泛的应用前景。

总之,酶工程和蛋白质工程在现代生物技术中有重要的地位和作用。其应用已经覆盖了医药、工业、环保和食品等各个领域,极大地推动了生物技术的发展和应用。尽管这些技术仍在不断地更新和发展,但是将来一定会有更多的进展和突破。

酶工程与蛋白质工程

酶工程与蛋白质工程 酶工程与蛋白质工程是现代生物技术的重要领域,它们以分子水平为基础,通过基因工程技术来改造酶和蛋白质。酶工程主要研究酶的结构与功能关系以及酶催化反应机理,以此来优化酶的性质和功能;而蛋白质工程则致力于蛋白质的高表达、纯化和改造,进而实现分子水平的控制和利用。两者交叉融合,共同应用于工业、医药、环保和食品等各个领域,促进了生物技术的发展和推广。 一、酶工程简介 酶是一种生物催化剂,具有极高的选择性和催化效率。酶工程旨在通过对酶的分子结构和催化机理的研究,优化酶的性质和功能,使其在特定条件下能够更高效地催化反应。比如,通过改变酶的氨基酸序列,可以实现酶催化活性和稳定性的提高。再比如,通过引入新的催化中心或变异剂,可以改变酶的底物特异性和反应特性。这些优化方法可以显著提高酶的效率和选择性,为实现工业生产和科学研究提供了有效手段。 酶工程的具体步骤如下: 1. 酶的筛选和分离。这个步骤是酶工程的基础,通常需要从自然界中分离出能够催化特定反应的酶。现代酶工程技术一般采用高通量筛选法,通过分子筛、高速离心、色谱法等方法来分离出酶的纯品。

2. 酶的分子结构分析。这个步骤是为了了解酶的分子结构和功能关系,找到优化方案的基础。目前,常用的酶的分析方法有X射线晶体学和核磁共振法。 3. 酶的基因工程改造。通过基因工程技术,改变酶的氨基酸序列和三维结构,使其获得更高的活性和稳定性。常用的方法有扩展、交换和修饰等方法。 4. 酶的活性和特性检测。通过活性酶测定、底物特异性、pH和温度对酶催化反应的影响等方法来检测酶的改造效果。 5. 酶的产量提高。通过使用表达载体、调节生产菌株的生长条件等方法,使酶的产量达到最高。 二、蛋白质工程简介 蛋白质工程是将目标蛋白基因从生物体内放大、纯化、定位和表达,以达到高效率和高纯度的目的。主要应用于药物研发、工业化生产、分子诊断和分子工业等领域,对于制造可溶性蛋白、表达蛋白、纯化蛋白和修饰蛋白等方面都发挥着重要作用。 蛋白质工程的具体步骤如下: 1. 蛋白基因的放大和插入载体。将目标蛋白基因从DNA中放大,通过重组DNA技术将其插入表达载体中,使其能够在宿主细胞中得到表达。

蛋白质与酶工程教学大纲

《蛋白质与酶工程》教学大纲 课程名称:蛋白质与酶工程 学分:2 学时:32 先修课程:生物化学 适用专业:生物工程 开课系部:生命科学学院 一、课程性质、目的和培养目标 课程性质:专业选修课 课程目的:本课程是生物工程本科专业选修课,目的是让学生在学习了普通生化的基础上,进一步对蛋白质和酶工程进行深入系统的学习。并对于酶在生产实践中的应用,也能有一些感性和理性的认识。 课程培养目标:采用多媒体课件和国内外最新的教学参考书、教案,灵活运用多种教学方法,因材施教,使学生在牢固掌握基础知识和基本概念的同时,得到科学研究、科学思维和科学方法的良好训练,为其他专业基础课和专业课的学习及日后的研究工作打下基础。 二、课程内容和建议学时分配 第一章绪 论 2课时 (一)教学基本要求 掌握蛋白质工程和酶工程的定义,了解其发展史,以及应用前景。 (二)教学内容 第一节蛋白质工程概论 第二节蛋白质工程的应用 第三节蛋白质工程展望 第四节酶工程简介 一酶工程 二组成:酶的产生;酶的分离纯化;酶的固定化;生物反应器。 三分类:化学酶工程;生物酶工程。 第五节酶与酶工程的发展简史 一酶学研究简史 二酶工程研究简史

(三)教学重点和难点 重点:蛋白质与酶工程定义; 难点:酶工程的组成分类 第二章蛋白质的结构与功能 2课时(一)教学基本要求 掌握蛋白质的基本结构组成及功能 (二)教学内容 第一节蛋白质的基本结构与功能 一蛋白质的组成 二蛋白质的一级结构 三蛋白质一级结构与功能的关系 第二节蛋白质的空间结构与功能 一蛋白质的二级结构 二超二级结构和结构域 三蛋白质的三级结构 四蛋白质空间结构与功能的关系 五蛋白质-蛋白质相互作用 (三)教学重点和难点 重点:蛋白质的空间结构;难点:蛋白质间的相互作用; 第三章蛋白质的修饰和表达4课时(一)教学基本要求 掌握蛋白质的化学修饰途经,了解蛋白质改造的一些途经等。 (二)教学内容 第一节蛋白质修饰的化学途径 一功能基团的特异性修饰 1多位点取代 2 3 二基于蛋白质片段的嵌合修饰 第二节蛋白质改造的分子生物学途径 一编码基因的专一性位点和区域性定向突变 1 2 二基因融合和基因剪接 三tRNA介导定点搀入非天然氨基酸 第三节重组蛋白质的表达

蛋白质与酶的工程改造技术及其应用

蛋白质与酶的工程改造技术及其应用蛋白质是构成生物体细胞的基本结构单元,对于生命活动的各 种过程都具有重要的作用。酶则是生物体内催化反应的重要媒介,通过发挥催化活性加速生命过程,维持了细胞的生存。传统的酶 工程技术主要将重点放在酶的分离和纯化上,但是这种方法成本高、效率低,对于大规模生产和应用场景并不适用。随着现代生 物技术的不断发展,蛋白质与酶的工程改造技术不断更新,为生 物制药、酶催化反应等领域提供了新的解决方案。本文将介绍蛋 白质与酶的工程改造技术及其应用。 一、蛋白质工程改造技术 1.点突变技术 点突变技术是将蛋白质基因的某个碱基或氨基酸序列进行改变,从而使其具有不同的功能、活性或特定的理化性质。这种技术在 人类疾病治疗、新型药物研发、工业酵素等领域有着广泛的应用。例如,通过点突变技术可以将普通抗体转化为更强力、更稳定的 人源化抗体,提高其在治疗上的效果;也可以将酵素的催化速率、热稳定性等进行调整,以适应特定的工业需求。

2.融合蛋白技术 融合蛋白技术是将两个或多个不同蛋白质结构域进行连接,形成一个新的分子,从而具有多种不同的功能。融合蛋白技术不仅可以产生新的蛋白质,还可以对原有蛋白质的稳定性、性质等进行调整。例如,通过将大肠杆菌外膜蛋白(OmpA)与绿色荧光蛋白(GFP)进行融合,可以得到具有膜定位与荧光表达功能的融合蛋白,用于生物成像和药物靶向测定等领域。 3.点突变与融合蛋白技术的结合 将点突变和融合技术相结合可以使得蛋白质的活性和稳定性得到双重提升。例如,通过将发酵产物氨基酸脱羧酶(ADC)与乙醇磷酸酸转移酶(EPAT)进行融合,并进行点突变,可以得到具有更高催化效率和稳定性的蛋白质。 二、酶工程改造技术

蛋白质与酶工程名词解释

蛋白质与酶工程名词解释 一、名词解释 1.蛋白质工程(Protein Engineering):以蛋白质分子的结构规律及其与生物功能 的关系为基础,通过有控制的修饰和合成,对现有蛋白质加以定向改造,设计、构建并最终生产出性能比自然界存在的蛋白质更加优良、更加符合人类社会需要的新型蛋白质。 2.蛋白质分子设计(Protein Molecule Design):从分子、电子水平上,通过 数据库等大量实验数据,结合现代量子化学方法,通过计算机图形学技术等设计新的分子。 3.亲和标记/亲和标记试剂(Affinity Labeling /reagent):试剂对蛋白质分子中被修 饰部位的专一性修饰,为亲和标记或专一性的不可抑制作用。(亲和标记试剂,不仅具有对被作用基团的专一性,而且具有对被作用部位的专一性,即试剂作用于被作用部位的某一基团,而不与被作用部位以外的同类基团发生作用。 这类修饰试剂也被称为位点专一性抑制剂) 4.定向进化(Directed Evolution):在较短时间内完成漫长的自然进化过程(突 变、重组和筛选),有效地改造蛋白质,使之适合于人类的需要,这种策略只针对特定的蛋白质的特定性质,因而被称为定向进化。 5.DNA改组技术(DNA Shuffling):是指DNA分子的体外重组,是基因在分子 水平上进行有性重组,通过改变单个基因原有的核苷酸序列,创造新基因,并赋予表达产物以新功能。 DNA家族改组技术(DNA Family Shuffling):是以来自不同种属的同源基因作为重排对象进行DNA改组操作的技术。该技术打破不同种、属间的遗传界限,利用同源基因之间的同源序列进行DNA改组 6.超滤(Ultrafiltration):利用压力或离心力使溶液中的小分子物质通过超滤膜, 而大分子则被截留,一次实验就可以将蛋白质混合物分为分子大小不同的两部分的分离方法。 7.亲和层析(Affinity Chromatography):是利用蛋白质与配体专一性识别并结合 的特性而分离蛋白质的一种层析方法。将与目标蛋白质专一性结合的配体固定于支持物上,当混合样品流过此支持物时,只有目标蛋白能与配体专一性结合,而其他杂蛋白不能结合。 8.蛋白质免疫印迹法(Western Blotting):印迹法是将样品转移到固相载体上, 而后利用相应的探测反应来检测样品的一种方法。对单向电泳后的蛋白质分子的印记分析称为蛋白质免疫印迹法。 9.酶联免疫吸附技术(ELISA):是采用抗原与抗体的特异反应将待测物与酶连接, 然后通过酶与底物产生颜色反应,根据颜色反应深浅进行定性或定量分析的一种技术。 10.蛋白质芯片(Prion Chip):又称蛋白质微阵列,是将大量蛋白质有规则的固 定在某种介质载体上,利用蛋白质与蛋白质、酶与底物、蛋白质与其他小分子之间相互作用检测分析蛋白质的一种芯片。 11.酶工程(Enzyme Engineering):将酶所具有的生物催化作用,借助工程学的手 段,应用于生产、生活、医疗诊断和环境保护等方面的一门科学技术。概括的说,酶工程是由酶制剂的生产和应用两方面组成的。酶工程的应用主要集中于食品工业、轻工业以及医药工业中。

蛋白质工程技术或ai技术在酶工程领域的应用

蛋白质工程技术或ai技术在酶工程领域的应用一、引言 酶工程是指利用生物催化剂——酶,对生产过程中的废水、废气、废渣等进行处理和利用的一种技术。近年来,蛋白质工程技术和人工智能技术的发展,为酶工程领域带来了新的机遇和挑战。本文将从蛋白质工程技术和AI技术两个方面分别探讨在酶工程领域的应用。 二、蛋白质工程技术在酶工程领域的应用 1. 蛋白质表达优化 蛋白质表达是蛋白质工程中非常重要的一步。通过对基因序列进行修改或选取适当的宿主表达系统,可以大幅提高目标蛋白质表达量和纯度。在酶工程领域中,通过对目标酶基因进行点突变或插入突变等操作,可以得到具有更高催化活性或稳定性的突变体。 2. 酶催化反应改良 通过对目标酶结构进行分析并进行定向进化,可以得到具有更好催化性能或特殊反应特性的新型酶。例如,利用蛋白质工程技术对木聚糖

酶进行改造,可以得到具有更高水解效率和更广泛的底物特异性的新型木聚糖酶。 3. 酶稳定性提高 在酶工程领域中,酶的稳定性是非常重要的一项指标。通过对酶分子结构进行修改或选择适当的载体材料,可以大幅提高酶的稳定性。例如,在制备生物传感器时,需要将目标酶固定在载体上,并保证其长期稳定性和活性。通过对载体材料进行改良或选择合适的交联剂等操作,可以大幅提高生物传感器的灵敏度和稳定性。 三、AI技术在酶工程领域的应用 1. 预测催化效率 利用人工智能技术对目标酶结构进行分析和建模,可以预测其催化效率和反应特异性。例如,在制备生物柴油时,需要选择具有高转化率和高选择性的脂肪酸甲基转移酶。通过利用机器学习算法对已知脂肪酸甲基转移酶的结构和性能进行建模,可以预测新型脂肪酸甲基转移酶的催化效率和反应特异性。 2. 预测底物特异性

大学酶工程与蛋白质工程教案

大学酶工程与蛋白质工程教案 引言 酶工程和蛋白质工程是生物技术领域中最重要的研究方向之一。这两个领域是紧密联系的,它们的研究旨在开发制造更加高效、可持续和环保的生产方法。本教案将介绍酶工程和蛋白质工程的基本知识和实践技术。 一、酶工程介绍 1. 酶的定义和种类:酶是一种生物催化剂,可加速特定化学反应的速率。酶的种类包括氧化酶、酯酶、纤维素酶、葡萄糖酶等。 2. 酶的制备和分离:酶的制备和分离过程主要包括培养酶产生菌株、酶提取、酶纯化等步骤。常用的酶提取方法包括超声波法、高压破碎法等。 3. 酶的催化机理:酶的催化方式与机理因酶而异,通常情况下,酶作用的方式可分为四种基本类型:酸碱催化、亲和催化、共价催化和金属离子催化等。 二、蛋白质工程介绍 1. 蛋白质工程的概念:蛋白质工程是指通过有创新性的技术手段,改变蛋白质的某些性质和结构,使其具有特定的功能和应用价值。 2. 蛋白质工程的基本技术:蛋白质工程的基本技术包括蛋白质表达及纯化、变异、修饰、折叠、精细调节、重组等。 3. 蛋白质工程的应用领域:蛋白质工程的应用领域非常广泛,如药物、生物材料、生物传感器、工业酶等。 三、酶工程和蛋白质工程的联系与应用 1. 酶工程和蛋白质工程的联系:酶工程和蛋白质工程紧密相连,两者都是通过改变酶或蛋白质的结构和特性来实现更高效的生产。 2. 酶工程和蛋白质工程的应用:酶工程和蛋白质工程的应用领域非常广泛,涉及到药物、食品、能源、生物传感器等领域。此外,酶工程和蛋白质工程技术也可以用于污水处理、环保等领域。 四、实验与教学内容

1. 酶的制备和分离实验:通过培养酶产生菌株,提取和纯化酶,学生们可以掌握酶制备和分离的技术方法。 2. 蛋白质折叠和纯化实验:通过对蛋白质的表达、修饰和折叠过程进行实验,增强学生对蛋白质折叠和纯化的理解。 3. 酶与底物反应动力学实验:通过对酶的催化速率和底物反应动力学的测定,学生们可以学习酶的催化原理和催化机理。 结论 总之,酶工程和蛋白质工程是重要的研究领域,在工业生产和医药发展中具有广泛的应用前景。通过本教案的学习,学生们将掌握酶工程和蛋白质工程的基本原理和技术方法,为今后的科研和工作奠定坚实的基础。

简述生物技术涉及的五大工程及其研究内容

简述生物技术涉及的五大工程及其研究内容 一、基因工程 基因工程,又称为遗传工程,是利用分子生物学技术,对生物体的遗传物质进行操作和改造,以达到定向改变生物性状和性能的目的。基因工程的研究内容包括基因克隆与表达、基因突变与功能研究、基因组编辑等。基因工程在农业、医药、工业等领域有着广泛的应用,如转基因作物、基因治疗、生物制药等。 二、细胞工程 细胞工程是指利用细胞生物学和分子生物学技术,对细胞进行培养、改造和繁殖,以获得具有特定性状的细胞或组织。细胞工程的研究内容包括细胞培养与繁殖、细胞分化与发育、细胞融合与基因转移等。细胞工程在农业、医学、环保等领域有广泛的应用,如组织工程、干细胞治疗、胚胎工程等。 三、酶工程 酶工程是利用酶学和生物化学技术,对酶进行分离、纯化、改造和大规模生产,以获得具有特定催化性能的酶。酶工程的研究内容包括酶的分离与纯化、酶的改造与定向进化、酶的生产与应用等。酶工程在工业、医药、环保等领域有广泛的应用,如生物传感器、生物催化、环保治理等。 四、发酵工程 发酵工程是指利用微生物的代谢特点和反应机制,通过大规模培养和控制发酵条件,生产出具有特定性能的代谢产物。发酵工程的研究内容包括微生物的代谢调控、发酵过程优化、发酵产物分离纯化等。发酵工程在食品、饮料、化工、医药等领域有广泛的应用,如酒精制造、抗生素生产等。

五、蛋白质工程 蛋白质工程是指利用分子生物学技术,对蛋白质进行设计和改造,以达到改变蛋白质的性状和性能的目的。蛋白质工程的研究内容包括蛋白质结构与功能分析、蛋白质设计与合成、蛋白质修饰与改造等。蛋白质工程在医药、农业、工业等领域有广泛的应用,如抗体药物研发、酶制剂生产等。 总结:生物技术涉及的五大工程各有其独特的研究内容和应用领域,但它们之间也存在相互联系和交叉。基因工程和细胞工程是其他三大工程的基础,酶工程和发酵工程则分别涉及到生物催化和大规模培养技术,而蛋白质工程则更侧重于蛋白质的设计和改造。这五大工程的深入研究和发展,将为人类带来更多的科学发现和技术创新,推动生命科学领域的不断进步和发展。

蛋白质工程和酶工程在现代工艺中的应用

蛋白质工程和酶工程在现代工艺中的应用 06120801 20081903 付婷钰 摘要:蛋白质工程[1],是指在基因工程的基础上,结合蛋白质结晶学,计算机辅助设计和蛋白质化学等多学科的基础知识通过对基因的人工定向改造等手段,对蛋白质进行修饰,改 造和拼接以生产出能满足人类需要的新型蛋白质;酶作为一种生物催化剂,已广泛地应用 于轻工业的各个生产领域。近几十年来,随着酶工程不断的技术性突破,在工业、农业、医药卫生、能源开发及环境工程等方面的应用越来越广泛。 关键词:蛋白质工程酶工程应用 正文: 一、蛋白质工程的应用 1、在医药方面[2] 许多蛋白质工程的目标是设法提高蛋白质的稳定性。在酶反应器中可延长酶的半衰期或 增强其热稳定性,也可以延长治疗用蛋白质的贮存寿命或重要氨基酸抗氧化失活的能力。在这个领域已取得了一些重要研究成果。用蛋白质工程来改造特殊蛋白质为制造特效抗癌药物 开辟了新途径。如人的3-干扰素和白细胞-2是两种抗癌作用的蛋白质。但在它们的分子结构中,有一个不成对的基因,是游离的,因而很不稳定,会使蛋白质失去活性。当通过蛋白质工程修饰这种不稳定的结构就可以提高这两种抗癌物质的生物活性。美国的Cetus公司 成功地修饰了这两种治疗癌瘤的蛋白质,大大提高了它们的稳定性,已用于临床试验并取得 了良好的效果。具有抗癌作用的蛋白质工程产品免疫球蛋白质是一种高效治癌药物,它能成为征服癌症的“生物导弹”,即具有对准目标杀死特定癌细胞而不伤害正常细胞的特效。近年来,澳大利亚医学科学研究所的一个微生物研究课题组经过多年的研究后发现了激发基因开始或停止产生癌细胞的蛋白质。这种蛋白质在癌细胞生长过程中对癌基因起着开通或关闭 的作用。这个发现,对于通过蛋白质工程研制鉴别与控制多种类型的血液癌、固体癌的蛋白 质有很好的作用,并为诊断和治疗癌症提供了新的方法。目前,应用蛋白质工程研究开发抗 癌及抗艾滋病等重大疑难病症等方面,均取得了重大进展。 另据实验,蛋白质工程还可以改变a 1抗胰蛋白(ATT)。运用此工程技术在ATT的Met358 和Ser359之间切开后,可以与嗜中性白细胞弹性蛋白酶迅速结合而引发抑制作用。在病理学的氧化条件下可导致Met358变成蛋氨酸硫氧化物使ATT不可能与弹性蛋白酶的弹性位点相结合。通过位点直接诱变,Met358被Vai代替就成为抗氧化疗法的AAT突变体。含AAT突变体的血浆静脉替代疗法已经用于AAT产物基因缺陷疾病患者的治疗,并已取得明显疗效。 2、在农业方面 蛋白质工程正在成为改造农业,大幅度提高粮食产量的新途径。如植物光合作用是利用白光能将二氧化碳转化成贮成能量淀粉,在植物叶片中普遍存在着一种重要的起催化作用的 酶,它能固定住二氧化碳,这种酶叫核酮糖-1.5- 二磷酸羧化酶。而这种酶具有双重性: 它既能固定二氧化碳,又会使二氧化碳在光照条件下通过光呼吸作用损失一半,即光合效率只有50%现在。这种酶的三维结构已经搞清楚了。参与研究的工作人员认为,可以通过蛋白质工程改造这种酶,控制其不利于人需要的一面,从而大大提高其光合作用效率,增加粮食产量。近年来,美国坎布里奇的雷普里根公司的科研人员立题,以蛋白质工程作为 设计优良微生物农药的新思路,他们实施对微生物蛋白质结构进行修改,仅此一举,使微生 物农药的杀虫率提高了10倍。 3、在工业方面[3]

酶与蛋白质工程原理及概况

酶与蛋白质工程原理及概况 摘要:酶工程就是指将酶所具有的生物催化作用,借助工程学的手段,应用于生产、生活、医疗诊断和环境保护等方面的一门科学技术。概括地说,酶工程是由酶制剂的生产和应用两方面组成的。酶工程的重点在于对已存酶的合理充分利用,而蛋白质工程的重点则在于对已存在的蛋白质分子的改造。当然,随着蛋白质工程的发展,其成果也会应用到酶工程中,使酶工程成为蛋白质工程的一部分。 关键词:酶工程蛋白质工程 一、酶工程:由酶学与化学工程技术、基因工程技术、微生物学技术相结合而产生的一门新的技术科学。它从应用目的出发,研究酶的产生、酶的制备与改造、酶反应器以及酶的各方面应用。分为:化学酶工程与生物酶工程。 1、酶工程原理和基本过程: 菌种→扩大培养→发酵→发酵酶液→酶的提取→酶成品 ↓ 原料→前处理→杀菌→酶反应器←酶的固定化 ↓ 反应液→产品提取→产品 2、酶工程研究热点:新酶或已有酶的新功能的开发;根据已有底物开发新的酶反应;利用突变或定向进化技术改善生物催化剂性能;利用重组DNA技术大规模生产生物催化剂;利用有机溶剂或共溶剂开发新的反应体系;体内或体外合成的多酶体系;克服底物和产物抑制;精细化工品或医药合成技术的放大;辅因子再生;生物催化剂的修饰;生物催化剂的固定化 二、蛋白质工程: 1、定义:以蛋白质结构和功能的研究为基础,运用基因工程的方法,借助计算机信息处理技术的支持,从改变或合成基因入手,定向地改造天然蛋白质或设计全新的人工蛋白质分子,使之具有特定的结构、性质和功能,能更好地为人类服务的一种生物技术。 2、原理:天然的正常构象是蛋白质的最佳状态,它既能高效地发挥功能,又便于机体的正常调控,因而极易失活而中止作用。但在生物体外,特别是工业化的粗放生产条件下,这种可被灵敏调节的特性就表现为酶分子性质的极不稳定性,导致难以持续发挥应有的功能,成为限制其推广应用的主要原因。如温度、压力、机械力、重金属、有机溶剂、氧化剂以及极端pH值等蛋白质工程技术针对这一现状,对天然蛋白质进行改造改良或全新设计模拟,使目的蛋白质具有特殊的结构和性质,能够抵御外界的不良环境,即使在极端恶劣条件下也能继续发挥作用,因而蛋白质工程具有广阔的应用前景。主要包括:分子遗传学、蛋白质结构功能相关的理论与技术。 3、蛋白质分子设计及其新方法研究: 我国在研究和发展蛋白质分子设计及其定量方法方面,取得了一系列具有创新意义的成果:.酶与底物、药物与受体结合自由能及稳定性的计算机模拟;蛋白质及其周围溶剂的静电相互作用的计算机模拟;多肽及蛋白质的随机动力学模拟。 4、蛋白质工程的意义与展望: 作为第二代遗传工程,蛋白质工程研究为当代生物技术的产业化发展注入了新的生命力。它已经在蛋白质药物改造、酶工程、抗体工程、分子电子器件和新型医学生物材料研制中获得越来越广泛的应用。 已成功地设计并合成了以α-螺旋和β-折叠层为主体的简单蛋白质,跨出了人工构建蛋白质的第一步。同时蛋白质工程正在推动一个从预定生物功能到期望的蛋白质结构,再到编

《蛋白质与酶工程实验》实验教学大纲

《蛋白质与酶工程实验》实验教学大纲 课程名称:蛋白质与酶工程实验课程类别:专业主干课 适用专业:生物技术所属实验室:生化与蛋白质工程实验室 实验学时、学分:32 学时 1 学分 一、实验教学目的 通过系列综合实验设计与实践操作,使学生能自主综合运用所学基本理论与基本实验技术进行综合实验设计与操作,从而更加系统深入的理解蛋白质与酶工程的基础理论与相关实验技术,培养学生综合运用知识与分析、解决问题的能力,为学生进一步独立开展科研课题奠定基础。 二、实验教学要求 蛋白质与酶工程实验以设计性和综合性实验为主,学生分组进行,每组约20~25人。授课教师通过发放微课视频与实验题目,并结合讲解和演示,使学生明白实验目的与任务,掌握实验仪器原理和操作使用过程,提前撰写思维导图式实验方案与流程,经教师审核通过后,方可进生化与蛋白质工程实验室进行实验,并要求在规定时间内熟悉、学习仪器设备的使用与操作,并完成相关实验任务。 三、对学生的指导和要求 (一)实验指导要求:教师通过网络教学平台上学生的实验记录,定期检查学生的实验进度,并对学生所出现的问题进行线上与线下指导,引导学生独立分析并解决问题,鼓励学生积极创新。 (二)实验报告要求:采用山西师范大学设备处统一印制的实验纸,以思维导图模式撰写实验目的、实验原理、实验内容、实验材料与方法、实验结果与分析。或以科研论文形式撰写电子版。以上两种形式均需上传到网络教学平台。教师进行线上评阅。 四、实验考核方式

主要包括四个方面:思维导图式实验方案与流程、实验操作规范、网络平台实验进度与过程性结果撰写、实验报告,每项各占25%。五、实验教学内容 实验项目(一):抑制条件下Km和Vmax的测定及抑制类型的判定(5学时) (1)项目类别:必做■ 选做□ (2)项目性质:演示性□ 验证性■设计性□综合性■ (3)项目主要目的要求: 1.掌握米氏方程基本理论; 2.掌握抑制条件下Km和Vmax的测定方法; 3.掌握酶的抑制类型。 (4)主要仪器: 移液器、锥形瓶、恒温水浴锅、分光光度计。 实验项目(二):固定化酵母细胞及蔗糖酶的检测(3学时) (1)项目类别:必做■ 选做□ (2)项目性质:演示性□ 验证性■设计性□综合性□ (3)项目主要目的要求: 1.掌握固定化细胞的原理与方法; 2.掌握蔗糖酶酶活检测原理与方法。 (4)主要仪器: 注射器、烧杯等。 实验项目(三):大蒜细胞SOD的提取和分离(6学时) (1)项目类别:必做■ 选做□ (2)项目性质:演示性□ 验证性■设计性□综合性□ (3)项目主要目的要求:

蛋白质与酶工程 期末考试资料

第一章绪论 1、蛋白质工程:广义上来说,蛋白质工程是通过物理、化学、生物和基因重组等技术改造蛋白质或设计合成具有特定功能的新蛋白质。 2、蛋白质工程的研究内容:(1)确定蛋白质的化学组成、空间结构与生物功能之间的关系。(2)根据需要合成具有特定氨基酸序列和空间结构的蛋白质。 3、酶工程:酶工程(enzyme engineering )是指从细胞和分子水平上对酶进行改造和加工,使酶最大限度地发挥其效率的过程。虽然目前已发现少数酶具有核酸本质,但目前一般所指的酶工程主要对象是化学本质为蛋白质的酶类。 4、酶:酶是具有生物催化功能的生物大分子(蛋白质或RNA)。 5、酶的分类:①主要由蛋白质组成——蛋白类酶(P酶)②主要由核糖核酸组成——核酸类酶(R酶) 6、“基因工程+发酵工艺+先进的发酵设备”可以算是酶工业的第三次飞跃。 7、酶的催化作用特点:①催化效率高、②专一性强、③反应条件温和、④反应容易调节控制、⑤需要辅因子参与作用8、生物技术的四大支柱:基因工程,细胞工程,酶工程,发酵工程。 基因工程:“剪刀+糨糊”跨越物种界限的工程。 细胞工程:微观水平的嫁接技术。

酶工程:让工业生产高效、安静而环保的工程。 发酵工程:将微生物或细胞造就成无数微型工厂,将神话变为现实的桥梁。 第二章蛋白质结构基础 9、在有机体内通过生物合成连接成多肽链,其顺序由编码基因中的核苷酸三联体遗传密码决定。 10、20种常见氨基酸中,19种都具有如下共同的化学结构: R H2N-C H-CO2H 另有一种脯氨酸具有类似而不相同的化学结构。 11、20种氨基酸在蛋白质中是通过肽键(peptide bond)连接在一起的。一个氨基酸的羧基与下一个氨基酸的氨基经缩合反应形成的共价连接称为肽键: 12、结构域:二级结构和结构模体以特定的方式组织连接,在蛋白质分子中形成两个或多个在空间上可以明显区分的三级折叠实体,称为结构域(domain)。 第三章蛋白质分子的设定 13、大改、中改、小改、 第一类为“小改”,可通过定位突变或化学修饰来实现;小改是指对已知结构的蛋白质进行少数几个残基的替换,这是目前蛋白质工程中最为广泛使用的方法。

10生物技术蛋白质与酶工程复习题与答案.

一. 名词解释 1.生物酶工程又称高级酶工程它是酶学与现代分子生物学技术相结合的产物。 2.蛋白质工程蛋白质工程就是运用蛋白质结构功能和分子遗传学知识,从改变或合成基因入手,定向地改造天然蛋白质或设计制造新的蛋白质。 3.多核糖体把细胞放在极其温和的条件下处理,就能得到几个到几十个核糖体在一条mRNA上结合起来的形态 4.固定化酶水溶性酶经物理或化学方法处理后,成为不溶于水的但仍具有酶活性的一种酶的衍生物。在催化反应中以固相状态作用于底物 5.酶反应器以酶或固定化酶为催化剂进行酶促反应的装置。 6.酶工程又叫酶技术,是酶制剂的大规模生产和应用的技术 7.生物传感器对生物物质敏感并将其浓度转换为电信号进行检测的仪器。 8. motif (模体指的是蛋白质分子结构中介于二级结构与三级结构之间的一个结构层次,又称超二级结构 9. domain功能域生物大分子中具有特异结构和独立功能的区域,特别指蛋白质中这样的区域 10.PDB蛋白质数据库(Protein Data Bank,PDB是一个生物大分子, 11. DNA shuffling体外同源重组技术。通过改变单个基因原有的核苷酸序列创造新基因,并赋予产物以新功能。 12.生物催化剂是指生物反指应过程中起催化作用的游离或固定化细胞各游离或固定化酶的总称

13.必需基团有的基团既在结合中起作用,又在催化中起作用,所以常将活性部位的功能基团统称为必需基团(essential group 14.活性中心。酶的活性中心是酶与底物结合并发挥其催化作用的部位。 15.有性PCR dna改组 16.DNA改组通过改变单个基因原有的核苷酸序列创造新基因,并赋予产物以新功能。 17.免疫传感器偶联抗原/抗体分子的生物敏感膜与信号转换器组成的,基于抗原抗体特异性免疫反应的一种生物传感器。 18.易错PCR是从酶的单一基因出发,在改变反应条件的情况下进行聚合酶链反应,使扩增得到的基因出现碱基配对错误,从而引起基因突变的技术过程。 19.酶化学修饰通过对酶蛋白分子的主链进行“切割”、“剪切”以及在侧链上进行化学修饰来达到改造酶分子的目的。 20.抗体酶通过改变抗体中与抗原结合的微环境,并在适当的部位引入相应的催化基团,所产生的具有催化活性的抗体。 二.简答 1.细胞固定化方法有哪些 细胞固定化:吸附法、包埋法。 2.酶的分子修饰方法主要有哪些 金属离子置换修饰、大分子结合修饰、侧链基团修饰、肽链有限水解修饰、核苷酸链剪切修饰、氨基置换修饰、核苷酸置换修饰、物理修饰。 3.遗传密码的特点有哪些。

蛋白质酶工程

蛋白质酶工程

蛋白质工程: 2.结构基础(少量,选择题,填空题) 蛋白质空间结构的基本组件:α螺旋,β层,环肽链,疏水内核。 蛋白质结构的共同特征:疏水内核,疏水相互作用是指非极性基团在任何极性环境中强烈趋于彼此聚集的择优效应。 稳定α-螺旋的因素:α-螺旋具有极性,所有氢键都沿螺旋轴指向同一方向α-螺旋的中心没有空腔 氨基酸的旋光性:除甘氨酸外,都具有旋光性。 氨基酸的光吸收:酪氨酸(Tyr、278nm)、色氨酸(Trp、279)和苯丙氨酸(Phe、259)能够吸收紫外光——共轭双键。 蛋白质一级结构:多肽链中的氨基酸的排列顺序,包括二硫键的位置数量和链内共价连接的方式。稳定因素,肽键、二硫键(都属于共价键) 蛋白质二级结构:主要有α螺旋,平行β层,反平行β层,β转折、310 螺旋 稳定因素,主要由其内部形成的主链氢键所稳定,氢键的排布方式为二级结构重要特征。 蛋白质三级结构:在二级和超二级结构及结构域的基础上进一步卷曲形成复杂球状分子结构。 蛋白质四级结构:蛋白质分子的亚基结构,α1,α2,β1,β2。 无亚基并只有单结构域的蛋白质:三级结构就是它的完整的三维结构。

蛋白质在体内的形成分为两个阶段:多肽链的生物合成,新生肽链折叠。 蛋白质折叠:由多肽链的一维线性氨基酸序列转化为具有特征三维结构的活性天然蛋白质的过程。 结构模体:一级顺序上相邻的二级结构在三维折叠中也靠近,彼此按特定的几何排布形成简单的组合。 结构域:二级结构和结构模体以特定的方式组合连接,在空间上可以明显区分的三级折叠实体,称为结构域。 结构域水平划分蛋白质:(1)α型结构(2)β型结构(3)α/β型结构(4)α+β型(5)无规型/富含二硫键和金属离子型。α,β,α/β为主要结构。 增加蛋白质稳定性的途径:(1)引进二硫键,替换甘氨酸,增加脯氨酸。(2)稳定α螺旋。(3)填充疏水内核。 帮助折叠的蛋白质和酶:(1)分子伴侣。(2)帮助正确二硫键形成的酶。(3)催化脯氨酸残基 cis-trans 异构化的酶。 目前较为系统和广泛使用的数据库: SCOP、

皖西学院 生物工程专业 大三蛋白质与酶工程复习题及答案

蛋白质与酶工程课程复习题 一.名词解释: 1.蛋白质工程概念:通过基因工程技术或化学修饰技术改造现有蛋白或组建新型蛋白的现代生物技术、 2.蛋白质的一级结构;蛋白质多链中氨基酸残基的排列顺序 3.蛋白质的二级结构:指肽链主链不同区段通过自身的相互作用,形成氢键,沿某一主轴盘旋折叠而形成的局部空间结构,是蛋白质结构的构象单元 4结构域:对于较大的蛋白质分子或亚基,多肽链往往由两个或两个以上相对独立的三维实体缔合而成三级结构,这种相对独立的三维实体称结构域。现在结构域的概念有三种不同而又相互联系的涵义:即独立的结构单位、独立的功能单位和独立的折叠单位。 5.β-折叠:是蛋白质中的常见的二级结构,是由伸展的多肽链组成的。 6.α-螺旋: 是蛋白质分子的一种基本结构 7.超二级结构:在蛋白质分子中,特别是球状蛋白质中,由若干相邻的二级结构单元(即α—螺旋、β—折叠片和β—转角等)彼此相互作用组合在一起,,形成有规则、在空间上能辨认的二级结构组合体,充当三级结构的构件单元,称超二级结构。 8.三级结构是指球状蛋白质的多肽键在二级结构的基础上,通过侧链基团的相互作用进一步卷曲折叠,借助次级键维系使β-折叠α-螺旋和无规则卷曲等二级结构相互配置而形成特定的构象。 9四级结构指由相同或不同的称作亚基(subunit)的亚单位按照一定排布方式缔合而成的蛋白质结构,维持四级结构稳定的作用力是疏水键、离子键、氢键、范得华力。 10蛋白质折叠: 。蛋白质可凭借相互作用在细胞环境(特定的酸碱度、温度等)下自己组装自己 11蛋白质变性: 是指蛋白质在某些物理和化学因素作用下其特定的空间构象被改变,从而导致其理化性质的改变和生物活性的丧失,这种现象称为蛋白质变性。 12蛋白质复性:、 13回拆:所连接的肽链发生180°的反相弯曲 14第二遗传密码:氨基酸顺序与蛋白质三维结构之间存在的对应关系 15分子伴侣:是一类相互之间有关系的蛋白,它们的功能是帮助其他含多肽结构的物质在体内进行非共价健的组装和卸装,但不是这些结构在发挥其正常生物学功能的永久组成成分、 蛋白质的化学修饰:凡通过活性基团的引入或除去,而使蛋白质一级结构发生改变的过程、 16定点突变:是指通过聚合酶链式反应(PCR)等方法对已知的目的基因DNA片段进行碱基的添加、删除、点突变等,从而改变对应的氨基酸序列和蛋白质结构。 17重叠延伸PCR技术:采用具有末端的引物,使PCR形成产物形成了重叠链,从而在随后的扩增反应中,通过重叠链的延伸,将不同来源的扩增片段重叠拼接起来 18报告基因:是指一组编码易被检测的蛋白质或酶的基因,将其与目的基因融合表达后,可通过报告基因产物的表达来“报告”目的基因的表达调控。、 19模拟酶:就是利用有机化学的方法合成一些比酶简单的非蛋白质分子,可以模拟酶对底物的络合和催化过程,既可达到酶催化的高效性,又可以克服酶的不稳定性、20生物传感器—将生物体的成份(酶、抗原、抗体、DNA、激素)或生物体本身(细胞、细胞器、组织)固定化在一器件上作为敏感元件的传感器。 21分子印迹:是制备对某一化合物具有选择性的聚合物的过程,这个化合物叫印迹

生物工程—蛋白质与酶工程复习题

生工13级蛋白质与酶工程复习题 二、分析与应用题 1.酶在制造业、食品工业、制药、实验等众多领域有许多用处,但游离酶因生产成本高、不易回收、稳定性差,有时与产物混杂难以分离,用何种具体方法可以解决这些问题。固定化酶:用物理或化学手段定位在限定的空间区域,并使其保持催化活性,可重复利用的酶。 固定化细胞:将具有一定生理功能的生物细胞(如微生物细胞、植物细胞或动物细胞等),用一定的方法将其固定,作为固体生物催化剂而加以利用的一门技术。 2.目前固定化酶技术常用吸附法、包埋法、共价偶联法、交联法等多种方法,分析比较各自的优缺点。 1).吸附法:依据带电的酶或细胞和载体之间的静电作用,使酶吸附于惰性固体的表面或离子交换剂上。 优点:条件温和,操作简便,酶活力损失少。缺点:结合力弱,易解吸附。 (2)共价偶联法:借助共价键将酶的活性非必需侧链基团和载体的功能基团进行偶联。 优点:酶与载体结合牢固,不会轻易脱落,可连续使用。缺点:反应条件较激烈,易影响酶的空间构象而影响酶的催化活性

(3).交联法:借助双功能试剂使酶分子之间发生交联的固定化方法。 优点:反应条件激烈,酶分子多个基团被交联,酶活力损失大。 缺点:制备的固定化酶颗粒较小,使用不便 (4)包埋法(entrapment):将酶用物理的方法包埋在各种载体(高聚物)内。 优点:不与酶蛋白氨基酸残基反应,很少改变酶的高级结构,酶活回收率高。 缺点:只适合作用于小分子底物和产物的酶 3.分析模拟酶与天然酶的不同之处及优点,分析说明模拟酶为什么可以进行一些催化反应? 天然酶的特点: 优点:温和条件下,高效、专一地催化某些化学反应;应用于糖生物工业、能源工业、饮料产业以及医药行业。 不足:对热敏感、稳定性差、分离回收不易、来源有限,限制了天然酶的规模开发和利用。 模拟酶:是用有机化学方法设计和合成一些较天然酶更简单的非蛋白质分子,以这些分子作为模型来模拟酶对其作用底物的结合和催化过程。

蛋白质与酶工程

蛋白质与酶工程重点 1.蛋白质工程:以蛋白质结构与功能的关系研究为基础,利用基因工程技术或化学修饰技术对现有蛋白质加以改造,组建成新型蛋白质的现代生物技术。 2.酶工程:利用酶、细胞器或细胞的特异催化功能,通过适当的反应器工业化生产人类所需产品或达到某种特殊目的的一门技术科学。 3.酶工程研究的主要内容:1)化学酶工程2)生物酶工程3)固定化酶与细胞4)酶反应器与传感器5)酶的非水相催化 4.蛋白质的融合:将编码一种蛋白质的部分基因重组到另一种蛋白质基因上,或将不同蛋白质基因的片段组合在一起,经基因克隆和表达产生新的融合蛋白。 5.蛋白质的融合的作用:1)用于表达产物的分离纯化;2)提高表达产物的溶解度;3)提高蛋白质稳定性。 6.蛋白质晶体学:利用X 射线衍射技术,进行生物大分子结构研究的工程,是结构生物学的一个重要组成部分。 8.定点突变:通过分子克隆手段定点的改变特定基因的局部核苷酸序列,通常被用来研究蛋白质的功能结构以及用于目的蛋白的改造。 10.酶工程的研究范围: 1)各类自然酶的开发和生产; 2)酶的分离纯化和鉴定技术; 3)固定化技术; 4)利用其他的生物技术领域交叉渗透; 5)多酶反应器的研制和应用。 11.酶的稳定性和稳定化: (一)引起酶失活的原因: 1)酶的活性中心一些特定氨基酸残基被化学修饰,使酶活性丧失(微观); 2)外部环境的影响,酶活性中心出现空间障碍,使其不能与底物结合; 3)酶的高级结构发生变化(螺旋、折叠发生变化); 4)多肽链的断裂(很强烈); (二)酶的稳定化: 1)低温保存(酶的本身不易变性,不易使其他酶把目的蛋白降解); 2)添加盐类(高浓度(NH4)2SO4 ); 3)添加底物辅酶等配体; 4)添加强变性剂(保护一级结构,使用时可复活); 5)结晶化。 12.微生物作为酶源的优越性: 1)容易获得酶需要的酶类; 2)容易获得高产菌株; 3)生产周期短; 4)生产成本低; 5)生产易管理; 6)提高微生物产酶的途径比较多。 13.固定化酶:指在一定空间呈封锁状态存在的酶,能连续地进行反应,反应后的酶可以回收重复使用。 14.固定化酶的优点: 1)极易将固定化酶与产物和底物分开;

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