免疫磁珠分离技术及应用

一、前沿

免疫磁珠分离技术(Immunomagnetic beads sep—aration techniques，IMB) 是将免疫学反应的高度特异性与磁珠特有的磁响应性相结合的一种新的免疫学技术；是一种特异性强、灵质纯化敏度高的免疫学检测方法和抗原纯化手段。是近年来国内外研究较多的一种新的免疫学技术。

目前该项技术在细胞分离、蛋白、免疫学及微生物学检测等方面均取得了较大的进展，是目前最有推广价值的技术之一。

二、免疫磁珠分离技术介绍

1、免疫磁珠分离技术原理

利用人工合成的内含铁成分，可被磁铁磁力所吸引，外有功能基团，可结合活性蛋白质(抗体)的磁珠，作为抗体的载体。当磁珠上的抗体与相应的微生物或特异性抗原物质结合后，则形成抗原-抗体-磁珠免疫复合物，这种复合物具有较高的磁响应性，在磁铁磁力的作用下定向移动，使复合物与其他物质分离，而达到分离、浓缩、纯化微生物或特异性抗原物质的目的。

2、免疫磁珠法分类

⑴、阳性分离法

磁珠结合的细胞就是所要分离获得的细胞

⑵、阴性分离法

磁珠结合不需要的细胞，游离于磁场的细胞为所需细胞。一般而言，阴性分离法的磁珠用量比阳性分离法的大，阳性分离法用的更多。磁性微珠是以金属离子为核心，外层均匀包裹高分子聚合体的固相颗粒。磁性微珠上既可标记针对某种细胞表面抗原的特异性抗体（直接法）; 也可标记羊抗鼠IgG抗体(间接法），使分离细胞的范围大大扩大。

3、免疫磁性微球的制备

基本技术路线：制成磁性材料的微球，再在微球表面引入活性基团，通过载体表面偶联反应可将抗体结合到载体上，形成免疫磁性微球。

优质微载体的性能：合适且均一的磁响应强度,较小且均一的粒径,稳定均一、特异吸附的表面性能。

4、该技术的主要优点

⑴、细小而均一的微球为配基与受体的反应提供了较大的接触面积

⑵、磁珠的磁性使其可以用磁力收集器方便快速地获得分离，且对被分离物无损伤

⑶、检测复杂的生物样本和食品样本等时受到颗粒性杂质等的影响较小

⑷、作为一种流动性的固相支持物，其洗涤和反应都进行得更加充分

三、免疫磁分离技术的应用

1、用于细胞分离和提纯

使用IMB进行分离细胞有两种方式；直接从细胞混合液中分离出靶细胞的方法，称为阳性分离；用免疫磁珠去除无关细胞，使靶细胞得以纯化的方法称为阴性分离。免疫磁珠技术可用来分离人类各种细胞如红细胞、外周血嗜酸/碱性粒细胞，神经干细胞、造血细胞、T淋巴细胞、γδT淋巴细胞，人类关节滑膜细胞，树突状细胞，内皮细胞、及多种肿瘤细胞等。

2、体外细胞扩增

树突状细胞(Dendriticcells，DC)、造血干、祖细胞等细胞在科研及临床上都具有巨大的应用价值，但是在体内含量较少而且分布广泛，难以获得大量高纯度的细胞，限制了该领域的发展。体外扩增辅以免疫磁珠技术有望解决这一难题。在这一过程中，用免疫磁性微球分离纯化出待扩增的细胞，用特定的因子组合培养，许多研究者用这样的方法寻找扩增的最佳细胞因子组合和移植的最佳时机。

3、免疫检测

免疫磁性微球可以简单快速地从血液或者骨髓中富集、清除癌细胞，广泛地应用于疾病检测、癌症治疗和自身骨髓移植中，还被用于从母体外周血中分离胎儿细胞进行无创性产前诊断。免疫磁珠分离技术用在微生物检测方面能准确快速地检测出样品中的Coli O 157，这对于食品卫生和预防疾病的传播具有重要的意义。PCR技术与免疫磁珠技术结合在分子生物学、医学诊断学等方面有非常重要的作用，这方面的研究在医学检测方面的应用，可以简便快速地诊断膀胱癌、乳腺癌、前列腺癌、腹膜胃癌、上皮肿瘤细胞等，使免疫磁性分离技术的应用更加广泛。

4、在核酸与基因工程上的应用

免疫磁球可以看作是亲合层析技术中的微型配基裁体，借助亲合素-生物素（Biotin-Avidin）系统免疫磁球可与非蛋白质结合，生物素和亲合素间有着高度的亲和力，两者的结合迅速、专一、稳定，在分子生物学、医学、免疫组织化学等领域中的应用也越来越广泛，与生物磁珠技术结合后，更是产生了诱人的发展前景，并广泛地应用于分离纯化RNA、mRNA、核酸片段等及相关研究。河南惠尔纳米科技有限公司很早就在从事该方面的研究，并且已经研发出多款磁珠法核酸提取试剂盒，性能相当稳定。有兴趣的研友们可以登录https://www.360docs.net/doc/0212778163.html,了解一些具体信息。下面是核酸提取的一般流程：

5、用于分型

免疫磁珠法可被应用于临床器官移植供受者的快速选配。在高梯度磁场下,用免疫磁珠法分离静脉或腹腔血中T、B淋巴细胞，并利用分离的淋巴细胞进行HLA-ⅠⅡ类抗原分型。如采用磁珠技术和单抗试剂建立起可在1.5h完成HLA-Ⅰ

Ⅱ类抗原一类分型的新方法，还可应用免疫磁珠分离技术进行肾移植供受体的HLA分型、探讨血液病患者反复血小板输注的治疗效果与HLA之间的相关性。

6、用作靶向释药系统的载体

免疫磁性微球作为靶向释药系统的载体可使免疫磁性微球上的抗癌药物更易与癌细胞接触，服用这种制剂后，在体外适当部位用一适宜强度的磁铁，将磁性微球引导到体内特定靶区，提高了杀伤癌细胞的效果。很多研究者使用不同的方法制成了针对不同癌细胞的免疫磁性微球，作为靶向释药系统的载体并在实验中证实这种释药载体具有良好的功效。

磁珠法分离纯化DNA原理及其步骤

磁珠法分离纯化DNA原理及其步骤日期：2012-05-22 来源：互联网标签：核酸纯化核酸分离磁珠法纯化DNA 摘要: 磁珠法纯化DNA主要是利用利息交换吸附材料吸附核酸，从而将核酸和蛋白质等其细胞中其他物质分离。本文主要概述了磁珠法纯化DNA原理、核酸分离与纯化的原则、核酸分离与纯化的步骤。欢度大力神杯之夏，参与BRAND竞猜活动，获赠BRAND产品！ GeneCopoeia：qPCR mix免费试用体验活动开始！磁珠法纯化DNA主要是利用利息交换吸附材料吸附核酸，从而将核酸和蛋白质等其细胞中其他物质分离。本文主要概述了磁珠法纯化DNA原理、核酸分离与纯化的原则、核酸分离与纯化的步骤。磁珠法纯化DNA原理磁珠法核酸纯化技术采用了纳米级磁珠微珠，这种磁珠微珠的表面标记了一种官能团，能同核酸发生吸附反应。硅磁(Magnetic Silica Particle)就是指磁珠微珠表面包裹一层硅材料，来吸附核酸，其纯化原理类型于玻璃奶的纯化方式。离心磁珠是指磁珠微珠表面包裹了一层可发生离心交换的材料(如DEAE，COOH)等，从而达到吸附核酸目的。不同性质的磁珠微珠所对应的纯化原理是不一致。使用磁珠法来纯化核酸的最大优点就是自动化。磁珠在磁场条件下可以发生聚集或分散，从而可彻底摆脱离心等所需的手工操作流程。Omega拥有全面的磁珠法核酸分离试剂盒，基于这种技术的试剂盒，名称前都有’Mag-Bind’。核酸分离与纯化的原则核酸在细胞中总是与各种蛋白质结合在一起的。核酸的分离主要是指将核酸与蛋白质、多糖、脂肪等生物大分子物质分开。在分离核酸时应遵循以下原则:保证核酸分子一级结构的完整性：排除其他分子污染。核酸分离与纯化的步骤大多数核酸分离与纯化的方法一般都包括了细胞裂解、酶处理、核酸与其他生物大分子物质分离、核酸纯化等几个主要步骤。每一步骤又可由多种不同的方法单独或联合实现。 1. 细胞裂解:核酸必须从细胞或其他生物物质中释放出来。细胞裂解可通过机械作用、化学作用、酶作用等方法实现。 (1) 机械作用:包括低渗裂解、超声裂解、微波裂解、冻融裂解和颗粒破碎等物理裂解方法。这些方法用机械力使细胞破碎,但机械力也可引起核酸链的断裂,因而不适用于高分子量长链核酸的分离。有报道超声裂解法提取的核酸片段长度从< 500bp ～> 20kb 之间,而颗粒匀浆法提取的核酸一般< 10kb。

免疫磁珠分离技术及应用

免疫磁珠分离技术及应用一、前沿免疫磁珠分离技术(Immunomagnetic beads sep—aration techniques，IMB) 是将免疫学反应的高度特异性与磁珠特有的磁响应性相结合的一种新的免疫学技术；是一种特异性强、灵质纯化敏度高的免疫学检测方法和抗原纯化手段。是近年来国内外研究较多的一种新的免疫学技术。目前该项技术在细胞分离、蛋白、免疫学及微生物学检测等方面均取得了较大的进展，是目前最有推广价值的技术之一。二、免疫磁珠分离技术介绍 1、免疫磁珠分离技术原理利用人工合成的内含铁成分，可被磁铁磁力所吸引，外有功能基团，可结合活性蛋白质(抗体)的磁珠，作为抗体的载体。当磁珠上的抗体与相应的微生物或特异性抗原物质结合后，则形成抗原-抗体-磁珠免疫复合物，这种复合物具有较高的磁响应性，在磁铁磁力的作用下定向移动，使复合物与其他物质分离，而达到分离、浓缩、纯化微生物或特异性抗原物质的目的。 2、免疫磁珠法分类 ⑴、阳性分离法磁珠结合的细胞就是所要分离获得的细胞 ⑵、阴性分离法磁珠结合不需要的细胞，游离于磁场的细胞为所需细胞。一般而言，阴性分离法的磁珠用量比阳性分离法的大，阳性分离法用的更多。磁性微珠是以金属离子为核心，外层均匀包裹高分子聚合体的固相颗粒。磁性微珠上既可标记针对某种细胞表面抗原的特异性抗体（直接法）; 也可标记羊抗鼠IgG抗体(间接法），使分离细胞的范围大大扩大。 3、免疫磁性微球的制备基本技术路线：制成磁性材料的微球，再在微球表面引入活性基团，通过载体表面偶联反应可将抗体结合到载体上，形成免疫磁性微球。优质微载体的性能：合适且均一的磁响应强度,较小且均一的粒径,稳定均一、特异吸附的表面性能。 4、该技术的主要优点 ⑴、细小而均一的微球为配基与受体的反应提供了较大的接触面积 ⑵、磁珠的磁性使其可以用磁力收集器方便快速地获得分离，且对被分离物无损伤 ⑶、检测复杂的生物样本和食品样本等时受到颗粒性杂质等的影响较小

免疫细胞分离及检测技术

第十三章免疫细胞分离及检测技术本章考点 1.免疫细胞的分离 2.淋巴细胞表面标志的检测 3.淋巴细胞功能检测技术 4.免疫细胞检测的临床意义第一节免疫细胞的分离一、外周血单个核细胞的分离 1.原理：外周血中单个核细胞（淋巴细胞和单核细胞）的比重与红细胞、多核白细胞及血小板不同，介于1.075～1.090之间，红细胞及粒细胞在1.092左右，血小板在1.030～1.035之间。因而可利用一种比重介于1.075～1.092之间，而近于等渗的溶液作密度梯度离心，使一定比重的细胞按相应密度梯度分布而加以分离。 2.试剂：常用的分层液有Ficoll与Percoll两种（1）Ficoll分层液法：主要用于分离外周血中单个核细胞，是一种单次密度梯度离心分离法，其分布由上到下依次为：稀释的血浆层，单个核细胞层，粒细胞层和红细胞层。Ficoll分层液即聚蔗糖-泛影葡胺，是一种较理想的细胞分层液，其主要成分是一种合成的蔗糖聚合物，具有高密度、低渗透压、无毒性的特点。操作时，将分层液置于试管下层，然后将肝素化的全血或白细胞悬液以Hanks或PBS液稀释后，轻轻铺于分层液面上，经2000rpm15-20min离心后，红细胞与粒细胞因比重大于分层液，故较快沉于管底。血小板则比重小于分层液而悬浮于血浆中。唯有与分层液比重相当的单核细胞和淋巴细胞密集于血浆层和分层液的界面中。其分布由上到下依次为：稀释的血浆层，单个核细胞层，粒细胞层和红细胞层。见下图。图聚蔗糖-泛影葡胺分层液密度梯度离心法外周血小分布示意图引自陶义训主编：免疫学和免疫学检验，人民卫生出版社1995年9月第1版第4次印刷（2）Percoll分层液法：是一种连续密度梯度离心分离法，其分布由上至下依次为：死细胞层，富含单核细胞组分层，富含淋巴细胞的组分层及红细胞与粒细胞组分层。图连续密度梯度离心法分离单个核细胞中各细胞成分的分布示意图引自陶义训主编：免疫学和免疫学检验，人民卫生出版社1995年9月第1版第4次印刷

免疫细胞的分离及其表面标志检测技术题库1-0-8

问题： [单选,A2型题,A1A2型题]从单个核细胞中去除单核细胞最便捷的方法是（） A.E花环沉淀法 B.尼龙棉吸附法 C.亲和板结合法 D.黏附贴壁法 E.免疫磁珠单核细胞具有黏附玻璃、塑料、尼龙毛的特性，通过黏附贴壁法可去除单个核细胞中的单核细胞，从而获得纯淋巴细胞。

问题： [单选,A2型题,A1A2型题]能长期保存分离细胞的方法是（） A.含10%～20%灭活小牛血清的Hanks B.液氮深低温（-196℃）保存 C.Tc-199 D.RPMI1640 E.4℃保存液氮深低温-196℃能长期保存分离细胞，需加入二甲亚砜作为保护剂。

问题： [单选,A2型题,A1A2型题]哪一种分化抗原又称作绵羊红细胞受体（） A.CD2 B.CD3 C.CD4 D.CD8 E.CD28 CD2表达于全部人T细胞和NK细胞表面，因其能与绵羊红细胞结合，又称绵羊红细胞受体。https://www.360docs.net/doc/0212778163.html,/ 英超直播

问题： [单选,A2型题,A1A2型题]细胞毒T细胞的标志性抗原为（） A.CD3+、CD4+、CD8+ B.CD3+、CD4+、CD8- C.CD3+、CD4+、CD25+ D.CD3-、CD4-、CD8+ E.CD3+、CD4-、CD8+ CD3+、CD4-、CD8+为细胞毒T细胞；CD3+、CD4+、CD8+为辅助性T细胞；CD3+、CD4+、CD25+为调节性T细胞。

问题： [单选,A2型题,A1A2型题]单核巨噬细胞的典型的表面标志是（） A.CD2 B.CD3 C.CD14 D.CD16 E.CD28 单核巨噬细胞的典型的表面标志是CD14。

磁珠分离技术

磁珠分离技术摘要：主要介绍了磁珠分离技术的基本概念，基本原理还有它的特点。磁珠分离技术中应用最广泛的是免疫磁珠分离技术，这里详细说明了免疫磁珠分离技术的结构以及有由它的结构决定的它的一些重要特性，以及免疫磁珠分离技术的制备原理和方法。并且详细说明了免疫磁珠分离技术的重要应用，为帮助同学了解记忆，例举了一些该技术的应用实例。基本概念：磁珠是一种包被有生物活性基团的功能化载体, 可分散于基液中形成磁性液体材料, 它兼有液体的流动性和固体磁性颗粒材料的双重特点, 从而使固一液相的分离变得十分方便快捷。磁珠法的出现和应用,给生命科学的研究提供了一种新式的手段和武器, 也给大、中学生对的直观认识提供了一个简捷、客观的实验途径。其中最常用的事免疫磁珠技术。原理：利用人工合成的内含铁成分，可被磁铁磁力所吸引，外有功能基团，可结合活性蛋白质(抗体)的磁珠，作为抗体的载体。当磁珠上的抗体与相应的微生物或特异性抗原物质结合后，则形成抗原-抗体-磁珠免疫复合物，这种复合物具有较高的磁响应性，在磁铁磁力的作用下定向移动，使复合物与其他物质分离，而达到分离、浓缩、纯化微生物或特异性抗原物质的目的。特点:应用于磁分离技术的磁性载体微球应具备以下特点: 粒径比较小, 比表面积较大, 具有较大的吸附容量; 物理和化学性能稳定, 具有较高的机械强度, 使用寿命长; 具有可活化的反应基团, 以用于亲和配基的固定化; 粒径均一, 能形成单分散体系; 悬浮性好, 便于反应的有效进行。载体微球有纳米级、微粒级的, 纳米级的载体微球与微粒级的载体微球相比具有以下优点: 尺寸小, 扩散速度快, 悬浮稳定性好; 比表面积大, 偶联容量大; 超顺磁性, 能快速实现磁性粒子的分散与回收。免疫磁珠(Immonumagnetic beads，IMB简称磁珠)，由载体微球和免疫配基结合而成。载体微球的核心部分为金属小颗粒(Fe304，Fe203)，是一种磁性高且较稳定的磁性材料，核心外包裹一层高分子材料(如聚氯乙烯，聚苯乙烯，聚乙烯亚胺)，最外层是功能基层，如羟基(．OH)，氨基(．NH2)，醛基(-CHO)，羧基(一COOH)。

磁珠法核酸分离技术概况

磁珠法核酸分离技术概况传统的核酸分离技术包含沉淀，离心等过程，这些纯化方法的步骤繁杂、费时长、收率低，接触有毒试剂，很难实现自动化操作；而采用磁性微球做载体进行核酸分离技术就能很好地克服这些缺点，实现样品的快速、高效制备，是未来核酸纯化方法发展的一个重要方向。一、磁珠法提取核酸简介磁珠法提取核酸是通过细胞裂解液裂解细胞，从细胞中游离出来的核酸分子被特异的吸附到磁性颗粒表面，而蛋白质等杂质不被吸附而留在溶液中。反应一定时间之后，再在磁场作用下，使磁性颗粒与液体分开，回收颗粒（即磁珠-DNA 混合物），再用洗脱液洗脱即可以得到纯净的DNA。磁珠法不需要离心、不需要加入多种试剂，操作简单，符合核酸自动化提取要求，是未来核酸纯化方法发展的一个重要方向。二、技术路线简易流程样品裂解—磁珠与待分离DNA特异性结合—磁珠-DNA混合物的洗涤—磁珠与待分离DNA的洗脱分离（即结合-洗涤-洗脱三步）。细胞裂解后，向裂解液中加入磁珠，当溶液的PH值小于6.5时，磁珠选择性的与优化的DNA结合，此时将吸附有DNA的磁珠置于磁场中，通过缓冲液去除没有被吸附的杂质（蛋白等），然后将磁珠置于PH值8.5的缓冲液中，纯化的DNA即可进入缓冲液中。三、优点配合微纳米磁珠核酸提纯试剂，优化样品回收和提纯效果，直接用于后续实验。 1、自动化操作保证了实验结果稳定，避免人工操作引起的差异及错误。 2、自动化操作系统，严格控制孔孔之间污染，避免操作人员的污染和被污染。四、临床应用乙肝、丙肝、艾滋病、流行性病毒、感染性疾病等。

下图是国外kingfisher磁珠法核酸提取技术原理图，供参考。

免疫磁珠分离技术

磁珠分离技术一、原理免疫磁珠法分离细胞基于细胞表面抗原能与连接在磁珠上的特异性单抗相结合，在外磁场中，通过抗体与磁珠相连的细胞被吸附而滞留在磁场中，无该种表面抗原的细胞由于不能与相连着磁珠的特异性单抗结合而没有磁性，不在磁场中停留，从而使细胞得以分离。免疫磁珠法分正选法和负选法，也称阳性分选法和阴性分选法。正选法-磁珠结合的细胞就是所要分离获得的细胞；负选法-磁珠结合的细胞为不需要细胞。一般负选法分选较为常见，因为此方法获得的所需要的细胞表面不含有抗体及磁珠的干扰。现以两步法分选小鼠CD4+ CD25+ T细胞的分选为例分别介绍负选法、正选法如下。 1、材料试剂： <1>、生物素化的，小鼠CD4阴性分选抗体混合物[cocktail，内含抗B细胞（CD45R，B220）、CD8+T细胞（CD8a，Ly-2）、造血细胞（CD11b,Mac-1），NK细胞（CD49b,DX5）等非CD4+T 细胞表面标志的抗体]。 <2>、结合有磁珠的抗生物素抗体（Scimall科学在线提供）；含0.5%BSA（或0.5%FCS）及2mmol/L EDTA的PBS缓冲液；抗小鼠CD25-PE抗体；结合有磁珠的抗PE抗体（Scimall科学在线提供）；磁珠分离器或分离柱。 2、实验步骤 <1>、负性分选小鼠CD4+T细胞 <2>、阳性分选小鼠CD25+ T细胞收取上述分选的CD4+Ｔ细胞，制成单细胞悬液加入PE标记的抗CD25 直接加结合有磁珠的抗PE抗体用MACS仪器,选择适当的分选程序,收取阳性部分,即为CD25+ CD25+ T细胞 PBS洗涤、重悬 PBS洗涤、重悬 4℃孵育15-20min 4℃孵育15-20min PBS洗涤、重悬取小鼠脾细胞，制成单细胞悬液加入生物素化的、不针对 CD4的抗小鼠抗体混合物加入PBS缓冲液及结合有磁珠的抗生物素抗体用MACS仪器，选择适当的分选程序，取阴性部分，即为 CD4+ T细胞 PBS洗涤、重悬PBS洗涤、重悬4℃孵育15min 4℃孵育10min PBS缓冲液洗涤两次，重悬

免疫细胞的分离和保存技术

免疫细胞的分离和保存技术用体外方法对机体各种具有免疫反应的细胞分别作鉴定、计数和功能测定，是观察机体免疫状态的一种重要手段。为此，须将各种参与免疫反应的细胞从血液或脏器中分离出来。参与免疫反应的细胞主要包括淋巴细胞、巨噬细胞、中性粒细胞等。由于检测的目的和方法有同，分离细胞的需求和技术也异。有的仅需分离白细胞，有的则需分离单个核细胞（mononuclearcell），其中含淋巴细胞和单核细胞（monocyte），有的则需分离T细胞和B细胞以及其亚群。分离细胞选用的方法应力求简便可行，并能获得高纯度、高获得率、高活力的细胞。现用分离细胞群的原则，一是根据各类细胞的大小、沉降率、粘附和吞噬能力加以组分，另一则按照各类细胞的表面标志，包括细胞表面的抗原和受体加以选择性分离。一、白细胞的分离（一）血液中红细胞与白细胞比例约600～1000:1，两者的比重不同其沉降速度亦异，通常用两种方法加以分离。本法是利用血细胞自然沉降率的分离法，采集血液后应及时抗凝，通常选用肝素抗凝法。肝素能阻止凝血酶原转化为凝血酶，从而抑制纤维蛋白原形成纤维蛋白而防止血液凝固。操作原则是将含抗凝血的试管直立静置室温30～60min 后，血液分成明显三层，上层为淡黄色血浆，底层为红细胞，紧贴红细胞层上面的灰白层为白细胞，轻轻吸取即得富含白细胞的细胞群，离心洗涤后加入少量蒸馏水或含氯化铵的Gey溶液，经短时间的低渗处理，使红细胞裂解，经过反复洗涤可得纯度较高的白细胞悬液。（二）聚合物加速沉淀法本法是利用高分子量的聚合物如明胶、右旋糖酐、聚乙烯吡喀烷酮（polyvinylpyrolidone，PVP）等使红细胞凝集成串，加速红细胞沉降，使之与白细胞分离。本法的细胞获得率比自然沉降法高。二、外周血单个核细胞的分离外周血中单个核细胞包括淋巴细胞和单核细胞，其体积、形态和密度与其他细胞不同，红细胞和多核白细胞密度较大，为1.090左右，而淋巴细胞和单核细胞密度为 1.075～1.090，血小板为 1.030～1.035。为此利用一种密度介于1.075～1.092之间而近于等渗的溶液（分层液）做密度梯度离心，使一定密度的

磁珠分离技术

磁珠分离技术摘要:磁珠分离技术是一种分子生物学分离技术, 它利用其表面修饰的磁性颗粒对生物分子或细胞的亲和结合而进行分离, 能对待分离或待检测的靶标进行高效富集, 是一种方便、快速、回收率高、选择性强的方法。磁珠分离技术在生物学方面的应用始于20世纪70年代后期, 目前已经在分子生物学、细胞学、免疫学、微生物学、生物化学等领域取得一些令人瞩目的研究成果。基本概念磁珠磁珠是一种通过一定方法将磁性无机粒子与有机高分子结合形成的具有一定磁性及特殊结构的体积在几纳米到几十微米之间的载体微球。载体微球的核心为金属小颗粒, 常为铁的氧化物或铁的硫化物, 核心外包裹一层高分子材料, 最外层是功能基团, 载体微球表面可根据需要赋予不同的功能基团(如－OH、－COOH、－CHO、－NH2,—SH、—CONO2、—CONH2、—SO3H、—SiH3、—环氧基、—CHCl等)，使其表现具有疏水-亲水、非极性-极性、带正电荷-带负电荷等不同物理性质。同时具有磁响应性，在外磁场作用下具有磁导向性。由于载体微球表现的物理性质不同, 可结合不同的免疫配基, 如抗体、抗原、DNA、RNA 等。应用于磁分离技术的磁性载体微球应具备以下特点: 粒径比较小, 比表面积较大, 具有较大的吸附容量; 物理和化学性能稳定, 具有较高的机械强度, 使用寿命长; 具有可活化的反应基团, 以用于亲和配基的固定化; 粒径均一, 能形成单分散体系; 悬浮性好, 便于反应的有效进行。载体微球有纳米级、微粒级的, 纳米级的载体微球与微粒级的载体微球相比具有以下优点: 尺寸小, 扩散速度快, 悬浮稳定性好; 比表面积大, 偶联容量大; 超顺磁性, 能快速实现磁性粒子的分散与回收。磁珠的制备方法：共沉淀法、悬浮聚合法、乳液聚合法、分散聚合法、包埋法及原子转移自由基聚合法等。

MACS磁珠分选

MACS磁珠分选免疫磁珠法分离细胞原理免疫磁珠法分离细胞是基于细胞表面抗原能与连接有磁珠的特异性单抗相结合，在外加磁场中，通过抗体与磁珠相连的细胞被吸附而滞留在磁场中，无该种表面抗原的细胞由于不能与连接着磁珠的特异性单抗结合而没有磁性，不在磁场中停留，从而使细胞得以分离。一、磁性细胞标记方式应用MACS技术进行磁性细胞分选最重要的一点是高质量的标记。要尽可能地增强阳性细胞的标记，并减弱背景染色。有两种基本的磁性标记方式：直接标记和间接标记。 1、直接磁性细胞标记（Direct magnetic cell labeling）（磁珠结合的细胞就是所要分离获得的细胞）直接标记是最快速、最特异的磁性标记方法。目前有多种分选人、小鼠、大鼠以及非人类灵长类细胞的MACS直标微珠可供选用。 2、间接磁性细胞标记（Indirect magnetic cell labeling）（磁珠结合不需要的细胞，游离于磁场的细胞为所需细胞）间接磁性细胞标记需要联合使用单克隆或者多克隆抗体和MACS间标微珠。未结合抗体、生物素化抗体或者荧光素标记抗体均可作为一抗标记细胞，再使用抗免疫球蛋白微珠、抗生物素或链霉亲和素微珠、抗荧光素微珠作为二抗磁性标记细胞。几乎针对任何种系任何细胞的任何一种单抗或多抗，均可用于间接标记。间接标记主要在如下情况时选用：当没有直标磁珠时；需要用几种抗体的混合物同时分选或去除多种类型的细胞；间接标记有放大作用，因此可在磁性分选抗原表达弱的目的细胞时使用；使用自备抗体或者配体的磁珠分选中。（一般而言，阴性分离法的磁珠用量比阳性分离法的大，阳性分离法用行更多。）二、MACS分选策略有两种基本的分选策略阳性分选和去除分选。复合分选策略是将两种基本分选策略相结合或者联合使用多选微珠，从而实现细胞亚群的分选。 1、阳性分选策略（Positive selection strategy）阳性分选中，目的细胞被磁性标记后，作为阳性标记组分直接分选出来。分选后的细胞不必去除MACS微珠，可立即用于培养

免疫磁珠检测试剂盒

一、研发背景微生物的分离常被称为大海捞针，而微生物免疫磁珠能够利用磁性分选技术从环境、临床和食品样品中富集致病细菌等病原体，具有灵敏、快速、高效的特点。天津生物芯片目前已研制出针对大肠杆菌O157:H7/NM、志贺氏菌、沙门氏菌、霍乱弧菌O1/O139等病原体的系列免疫磁珠分离检测试剂盒，血清型覆盖达200余种，并已在中国CDC、各省市CDC广泛应用，效果良好。二、检测原理免疫磁珠既可结合活性蛋白，又可被磁性吸引。经过一定处理可将抗体结合在磁珠上，使磁珠成为抗体的载体。磁珠上的抗体和特异性抗原物质结合后形成抗原-抗体-磁珠免疫复合物，这种复合物在磁场作用下发生移动，从而使复合物从复杂的环境中高效分离出来，达到分离特异性抗原的目的，减少环境中对细菌培养和检测的干扰因素。三、检测流程四、关键技术（1）高质量和种类齐全的诊断血清是免疫磁珠研发的基础。

天津生物芯片拥有种类齐全的标准菌株，以及多年从事细菌表面多糖抗原多样性的遗传基础和分子进化研究的经验，于2004年开始从事微生物诊断血清的研发和生产，目前已生产推出一系列特异性好、效价高、种类齐全的多克隆诊断血清，确保了免疫磁珠的质量高、种类全。（2）拥有最全的标准菌株库和大量临床分离菌株，能够充分验证免疫磁珠的特异性、灵敏度和重复性。（3）磁珠与抗体的偶联策略。利用每种血清型的抗体分别和磁珠耦联，之后混合耦联抗体的磁珠，以确保致病菌中每种血清型的菌株都能结合到磁珠上，从而降低初筛检测的假阴性。五、独有优势（1）富集特异性好可以从106cfu目标菌进行特异性吸附，且吸附灵敏度和吸附效率高，对102cfu大肠杆菌O157的吸附率可达50%以上，优于国外同类产品（国外同类产品的吸附率为40%）。（2）检测时间短使用该产品检测时间可以从传统检验方法的3天缩短至8小时，弥补了传统检验方法耗时长、特异性差的不足，可满足检验检疫快速通关验放的需要，并用于进出口食品检验检疫中菌的检测。（3）种类齐全包括大肠杆菌O157:H7/NM免疫磁珠分离检测试剂盒、大肠杆菌O157:H7/NM免疫磁珠分离检测试剂盒、沙门氏菌免疫磁珠分离检测试剂盒(A-O67)、沙门氏菌免疫磁珠分离检测试剂盒(B-Z)（同Dynal）、霍乱弧菌O1/O139免疫磁珠分离检测试剂盒等。

第二十四章免疫细胞的分离与检测Chapter24SeparationandAssays

第二十四章免疫细胞的分离与检测 Chapter 24 Separation and Assays for Immunocyte 第一部分教学内容和要求一、目的要求 ·掌握：Ficoll-hypaque分层液分离PBMC的原理、方法，淋巴细胞亚群分离的原理、方法及应用，T细胞增殖试验的方法，B细胞的数量及功能的检测，NK细胞的活性、中性粒细胞、巨噬细胞功能的检测方法；熟悉：T细胞功能的体内试验、T细胞介导的细胞毒检测的方法；了解：淋巴细胞的纯化与亚群分离的方法、吞噬细胞的分离方法、溶血空斑试验。二、教学内容 1。免疫细胞的分离与纯化：细胞的分离，外周血单个核细胞的分离，淋巴细胞的纯化与亚群分离，吞噬细胞的分离。 2。淋巴细胞的数量检测：T细胞数量检测，B细胞数量检测。 3。淋巴细胞的功能检测：T细胞功能检测，B细胞功能检测，NK细胞活性测定。 4．吞噬细胞功能检测：中性粒细胞功能检测，巨噬细胞功能检测。第二部分测试题一、选择题（一）单项选择题（A型题） 1．外周血中的单个核细胞主要是指 A．淋巴细胞B．嗜酸性粒细胞C．单核细胞-淋巴细胞 D．单核细胞E．中性粒细胞 2．分离人外周血淋巴细胞分层液的最佳密度为 A．1.030 B．1.035 C．1.092 D．1.020 E．1.077 3．用Ficoll-hypaque分层液分离PBMC，分离的PBMC层位于试管的 A．血浆层之上B．血浆层之中C．血浆层与分层液之间 D．分层液之中E．试管底部 4．用玻璃纤维或葡聚糖凝胶Sephadex-G10柱分离细胞时，从柱上洗脱下的细胞主要是A．粒细胞B．淋巴细胞C．单核细胞D．T细胞E．B细胞 5．能与SRBC结合形成E花环的细胞主要是 A．T细胞B．B细胞C．单核细胞D．粒细胞E．血小板 6．用小鼠抗人CD3单克隆抗体检测T细胞，其结果代表的是 A．T细胞总数B．Th细胞数C．Ts细胞数D．CD4+细胞数E．CD8+细胞数 7．用尼龙棉柱分离细胞时，不易黏附尼龙棉纤维而被洗脱的细胞是： A．粒细胞B．B细胞C．单核细胞D．T细胞E．血小板 8．表示淋巴细胞的活力常用 A．活淋巴细胞占总淋巴细胞的百分比B．活细胞浓度C．淋巴细胞浓度 D．活细胞和总细胞的比值E．T细胞和B细胞的比例

磁珠法分离纯化DNA原理及其步骤

日期：2012-05-22 来源：互联网标签：核酸纯化核酸分离磁珠法纯化DNA 摘要 : 磁珠法纯化DNA主要是利用利息交换吸附材料吸附核酸，从而将核酸和蛋白质等其细胞中其他物质分离。本文主要概述了磁珠法纯化DNA原理、核酸分离与纯化的原则、核酸分离与纯化的步骤。欢度大力神杯之夏，参与BRAND竞猜活动，获赠BRAND产品！ GeneCopoeia：qPCR mix免费试用体验活动开始！磁珠法纯化DNA主要是利用利息交换吸附材料吸附核酸，从而将核酸和蛋白质等其细胞中其他物质分离。本文主要概述了磁珠法纯化DNA原理、核酸分离与纯化的原则、核酸分离与纯化的步骤。磁珠法纯化DNA原理磁珠法核酸纯化技术采用了纳米级磁珠微珠，这种磁珠微珠的表面标记了一种官能团，能同核酸发生吸附反应。硅磁(Magnetic Silica Particle)就是指磁珠微珠表面包裹一层硅材料，来吸附核酸，其纯化原理类型于玻璃奶的纯化方式。离心磁珠是指磁珠微珠表面包裹了一层可发生离心交换的材料(如DEAE，COOH)等，从而达到吸附核酸目的。不同性质的磁珠微珠所对应的纯化原理是不一致。使用磁珠法来纯化核酸的最大优点就是自动化。磁珠在磁场条件下可以发生聚集或分散，从而可彻底摆脱离心等所需的手工操作流程。Omega拥有全面的磁珠法核酸分离试剂盒，基于这种技术的试剂盒，名称前都有’Mag-Bind’。核酸分离与纯化的原则核酸在细胞中总是与各种蛋白质结合在一起的。核酸的分离主要是指将核酸与蛋白质、多糖、脂肪等生物大分子物质分开。在分离核酸时应遵循以下原则:保证核酸分子一级结构的完整性：排除其他分子污染。核酸分离与纯化的步骤大多数核酸分离与纯化的方法一般都包括了细胞裂解、酶处理、核酸与其他生物大分子物质分离、核酸纯化等几个主要步骤。每一步骤又可由多种不同的方法单独或联合实现。 1. 细胞裂解:核酸必须从细胞或其他生物物质中释放出来。细胞裂解可通过机械作用、化学作用、酶作用等方法实现。 (1) 机械作用:包括低渗裂解、超声裂解、微波裂解、冻融裂解和颗粒破碎等物理裂解方法。这些方法用机械力使细胞破碎,但机械力也可引起核酸链的断裂,因而不适用于高分子量长链核酸的分离。有报道超声裂解法提取的核酸片段长度从< 500bp ～ > 20kb 之间,而颗粒匀浆法提取的核酸一般< 10kb。 (2) 化学作用:在一定的p H 环境和变性条件下,细胞破裂,蛋白质变性沉淀,核酸被释放到水相。上述变性条件可通过加热、加入表面活性剂(SDS、Triton X-100 、Tween 20 、

免疫磁珠分离技术及常见应用

免疫磁珠分离技术及常见应用冯涛201114912 食品科学与工程2班摘要：免疫磁珠分离技术(Immunomagnetic beads separation techniques，IMB )是生物检测技术的一种具有分离迅速和无需离心等优点。免疫磁珠分离技术以其靶向特异性强、操作方便、分离高效的优点，迅速渗透到药剂、病理、生理、药理、微生物、生化及分子遗传学等各个领域，尤其在药物靶向制剂研究方面取得巨大的进展，在微生物检测、细胞分离、蛋白质组学等方面也多有应用。目前该项技术在细胞分离、蛋白、免疫学及微生物学检测等方面均取得了较大的进展，是目前最有推广价值的技术之一关键词：免疫磁珠；分离；检测； 1.免疫磁珠分离技术免疫磁珠分离技术(IMB) 是将免疫学反应的高度特异性与磁珠特有的磁响应性相结合的一种新的免疫学技术；是一种特异性强、灵质纯化敏度高的免疫学检测方法和抗原纯化手段。是近年来国内外研究较多的一种新的免疫学技术〔2〕。其原理是利用人工合成的内含铁成分，可被磁铁磁力所吸引，外有功能基团，可结合活性蛋白质(抗体)的磁珠，作为抗体的载体。当磁珠上的抗体与相应的微生物或特异性抗原物质结合后，则形成抗原-抗体-磁珠免疫复合物，这种复合物具有较高的磁响应性，在磁铁磁力的作用下定向移动，使复合物与其他物质分离，而达到分离、浓缩、纯化微生物或特异性抗原物质的目的〔3〕。 1.1免疫磁珠分离技术的分类免疫磁珠分离技术法按结合的目标物不同有两种方法：（1）阳性分离法，磁珠结合的物质就是所要分离获得目标物质（2）阴性分离法，磁珠结合不需要的物质，游离于磁场的细胞为所需物质。一般而言，阴性分离法的磁珠用量比阳性分离法的大，阳性分离法用的更多。磁性微珠是以金属离子为核心，外层均匀包裹高分子聚合体的固相颗粒〔4〕。磁性微珠上既可标记针对某种细胞表面抗原的特异性抗体（直接法）; 也可标记非特异抗体(间接法），使分离细胞的范围大大扩大〔5〕。 2免疫磁珠分离技术的常见应用 2.1应用磁珠技术提取核酸免疫磁珠技术捕获蛋白质、激素等抗原分子的应用主要体现在定量检测相应的抗原物质。磁珠捕获具有显著的富集效果，再结合精确高效的检测方法，将得到极佳的检测效果。磁微粒化学发光免疫分析技术是这类方法的代表，它具有高灵敏性、高精确性、高稳定性等特点，其检测效果可与放射免疫分析相媲美〔6〕，目前已广泛应用于各种激素、肿瘤标志物及心肌标志物等检测项目。磁微粒化学发光免疫分析技术具有荧光灵敏性，且不需要激发光，避免了荧光分析中激发光、杂散光等背景荧光的影响;同时具有很高的灵敏度，避免了放射免疫分析给操作者带来的健康隐患以及对环境的污染。此项技术在体外免疫诊断试剂上的应用是先进的、科学的，拥有众多的优点和特性，是非常理想的检测方法。免疫磁珠技术在分子水平捕获富集的应用还体现在蛋白质及其它抗原分子的分离纯化，用作

免疫细胞的分离及表面标志检测技术免疫细胞功能

第十四章免疫细胞的分离及表面标志检测技术第十五章免疫细胞功能检测技术 Separation and Assays for Immunocyte 第一部分目的要求和教学内容一、目的要求掌握：Ficoll—hypaque分层液分离PBMC的原理、方法，淋巴细胞亚群分离的原理、方法及应用，T细胞增殖试验的方法，B细胞的数量及功能的检测，NK细胞的活性、中性粒细胞、巨噬细胞功能的检测方法；熟悉：T细胞功能的体内试验、T细胞介导的细胞毒检测的方法；了解：淋巴细胞的纯化与亚群分离的方法、吞噬细胞的分离方法、溶血空斑试验。二、教学内容 1．免疫细胞的分离与纯化：细胞的分离，外周血单个核细胞的分离，淋巴细胞的纯化与亚群分离，吞噬细胞的分离。 2．淋巴细胞的数量检测：T细胞数量检测，B细胞数量检测。 3．淋巴细胞的功能检测：T细胞功能检测，B细胞功能检测，NK细胞活性测定。 4．吞噬细胞功能检测：中性粒细胞功能检测，巨噬细胞功能检测。第二部分测试题一、选择题 (一)单项选择题(A型题) 1．外周血中的单个核细胞主要是指 A．淋巴细胞 B．嗜酸粒细胞 C．单核细胞一淋巴细胞 D．单核细胞 E．中性粒细胞 2．分离人外周血淋巴细胞分层液的最佳密度为 A． 1.030 B． 1.035 C． 1.092 D． 1.020 E． 1.077 3．用FicolI—hypaque分层液分离PBMC,分离的PBMC层位于试管的 A．血浆层之上 B．血浆层之中 C．血浆层与分层液之间 D．分层液之中 E．试管底部 4．用玻璃纤维或葡聚糖凝胶Sephadex-G10柱分离细胞时，从柱上洗脱下的细胞主要是 A．粒细胞