实验五 叶绿体的分离与荧光观察
实验五叶绿体的分离与荧光观察
叶绿体是植物细胞所特有的能量转换细胞器，光合作用就是在叶绿体中进行的。由于具有这一重要功能，所以它一直是细胞生物学、遗传学和分子生物学的重要研究对象。叶绿体是植物细胞中较大的一种细胞器，利用低速离心即可分离集中进行各种研究。
实验目的
一、通过植物细胞叶绿体的分离，了解细胞器分离的一般原理和方法。
二、观察叶绿体的自发荧光和次生荧光，并熟悉荧光显微镜的使用方法。
实验原理
将组织匀浆后悬浮在等渗介质中进行差速离心，是分离细胞器的常用方法。一个颗粒在离心场中的沉降速率取决于颗粒的大小、形状和密度，也同离心力以及悬浮介质的粘度有关。在一给定的离心场中，同一时间内，密度和大小不同的颗粒其沉降速率不同。依次增加离心力和离心时间，就能够使非均一悬浮液中的颗粒按其大小、密度先后分批沉降在离心管底部，分批收集即可获得各种亚细胞组分。
叶绿体的分离应在等渗溶液(0.35 mol／L氯化钠或0.4 mol／L蔗糖溶液)中进行．以免渗透压的改变使叶绿体受到损伤。将匀浆液在1000 r／min的条件下离心2min，以去除其中的组织残渣和一些未被破碎的完整细胞。然后，在3000 r／min的条件下离心5min，即可获得沉淀的叶绿体（混有部分细胞核）。分离过程最好在0～5℃的条件下进行；如果在室温下，要迅速分离和观察。
荧光显微术是利用荧光显微镜对可发荧光的物质进行观测的一种技术。某些物质在一定短波长的光(如紫外光)的照射下吸收光能进入激发态，从激发态回到基态时，就能在极短的时间内放射出比照射光波长更长的光(如可见光)，这种光就称为荧光。若停止供能荧光现象立即停止。有些生物体内的物质受激发光照射后可直接发出荧光，称为自发荧光(或直接荧光)，如叶绿素的火红色荧光和木质素的黄色荧光等。有的生物材料本身不发荧光，但它吸收荧光染料后同样也能发出荧光．这种荧光称为次生荧光(或间接荧光)，如叶绿体吸附吖啶橙后可发桔红色荧光。
利用荧光显微镜对可发荧光的物质进行检测时，将受到许多因素的影响，如温度、光、淬灭剂等。因此在荧光观察时应抓紧时间．有必要时立即拍照。另外，在制作荧光显微标本时最好使用无荧光载片、盖片和无荧光油。
实验用品
一、器材
1．主要设备：普通离心机、组织捣碎机、粗天平、荧光显微镜。
2．小型器材：500ml烧杯2个，250ml量筒1个，滴管10支，10ml刻度离心管20支，纱布若干，无荧光载片和盖片各4片。
二、材料
新鲜菠菜。
三、试剂
0.35 mol／L氯化钠溶液，．0.01％吖啶橙(acridine orange)。
实验方法
一、叶绿体的分离与观察
1. 选取新鲜的嫩菠菜叶，洗净擦干后去除叶梗及粗脉，称30g于150ml 0.35 mol／L NaCI
溶液中，装入组织捣碎机。
2. 利用组织捣碎机低速(5 000 r／min)匀浆3~5min。
3. 将匀浆用6层纱布过滤于500ml烧杯中。
4. 取滤液4ml在1000 r／min下离心2 min。弃去沉淀。
5. 将上清液在3000 r／min下离心5min，弃去上清液，沉淀即为p为叶绿体(混有部分细
胞核)。
6. 将沉淀用0.35 mol／L NaCl溶液悬浮。
7. 取叶绿体悬液一滴滴于载片上，加盖片后即可在普通光镜和荧光显微镜下观察。
①在普通光镜下观察。
②在荧光显微镜下观察。
③取叶绿体悬液一滴滴在无荧光载片上，再滴加一滴0．01％吖啶橙荧光染料，加无
荧光盖片后即可在荧光显微镜下观察。
二、菠菜叶手切片观察
用剃须刀将新鲜的嫩菠菜叶切削一斜面置于载片上，滴加1～2滴0．35mol／L NaCl 溶液，加盖片后轻压，置显微镜下观察。
①在普通光镜下观察。
②在荧光显微镜下观察。
③用同样方法制片，但滴加1～2滴0.01％吖啶橙染液染色l min，洗去余液，加盖
片后即可在荧光显微镜下观察。
实验结果
一、叶绿体的分离和观察
1. 普通光镜下，可看到叶绿体为绿色橄榄形，在高倍镜下可看到叶绿体内部含有较深的
绿色小颗粒，即基粒。
2. 以Olympus荧光显微镜为例，在选用B(blue)激发滤片、B双色镜和0ss。(orange)阻断
滤片的条件下，叶绿体发出火红色荧光。
3. 加入吖啶橙染色后，叶绿体可发出桔红色荧光，而其中混有的细胞核则发绿色荧光。
二、菠菜叶手切片观察
1. 在普通光镜下可以看到三种细胞
(1) 表皮细胞：为边缘呈锯齿形的鳞片状细胞。
(2) 保卫细胞：为构成气孔的成对存在的肾形细胞。
(3) 叶肉细胞：为排成栅状的长形和椭圆形细胞。‘
叶绿体呈绿色橄榄形，在高倍镜下还可以看到绿色的基粒。
2. 在荧光显微镜下，叶绿体发出火红色荧光，但其荧光强度要比游离叶绿体弱。气孔发绿
色荧光，两保卫细胞内的火红色叶绿体则环绕气孔排列成一圈，表皮细胞内叶绿体数量要比叶肉细胞少。
3. 用吖啶橙染色后，叶绿体则发出桔红色荧光，细胞核可发出绿色荧光，气孔仍为绿色。
作业
1. 在普通光镜下，用目微尺和台微尺测量一下叶绿体的长轴和短轴，分别测量5～l0个叶
绿体，求其平均值。
2. 在荧光显微镜下观察叶绿体的自发荧光时，更换滤片系统，叶绿体的颜色是否有变化?
3. 游离叶绿体和整体细胞内的叶绿体，在荧光显微镜下，其颜色和强度有无差异?为什么?
思考题
1. 叶绿体分离的实验原理是什么?在分离叶绿体时应注意些什么问题?
2. 普通光镜与荧光显微镜有何异同点?
用高倍显微镜观察 叶绿体和细胞质的流动实验
用高倍显微镜观察叶绿体和细胞质流动 一、教学目标： 1.练习使用显微镜，掌握高倍显微镜的使用方法。 2.观察叶绿体的形态和分布。 3.通过在显微镜下的实际观察，理解细胞质的流动是一种生命现象。 二、教学重点： 1.掌握高倍显微镜的使用方法。 2.观察叶绿体的形态和分布，理解叶绿体的形态和分布与功能的关系。 3.通过在显微镜下的实际观察，理解细胞质的流动是一种生命现象。 三、实验原理： 1.高等绿色植物的叶绿体存在于细胞质基质中，叶绿体一般是绿色的，扁平的椭球形或球形，可以用高倍显微镜观察它的形态和分布。 2.活细胞中的细胞质处于不断流动的状态。观察细胞质的流动，可用细胞质基质中的叶绿体的运动作为标志。 四、材料用具： 菠菜叶（或藓类的叶）、新鲜的黑藻 显微镜、载玻片、盖玻片、滴管、镊子、刀片、培养皿、台灯、铅笔 五、实验步骤： （1）观察叶绿体装片： 取材：取一片藓类小叶或波菜叶稍带叶肉的下表皮（薄且有叶绿体） 制片：载玻片中央滴一滴清水，将叶片放入，加上盖玻片，制成临时装片 观察：先低倍镜找到叶片细胞后高倍镜观察叶绿体（形态和分布）[光强度的变化与叶绿体的位置关系] 绘图：（用铅笔画一个叶绿体形态和分布情况清楚的叶肉细胞） 注意事项：
1）选用藓类的小叶或者菠菜叶的下表皮（稍带叶肉）作观察叶绿体的实验材料是实验成功的关键， 因为藓类属阴生植物，菠菜叶的下表皮是菠菜叶的背阳面，这样的细胞中的叶绿体大且数目少，便于观察。） 2）实验过程中的临时装片要始终保持有水状态，目的是为了防止叶绿体失水。 如果叶绿体失水，叶绿体就缩成一团，无法观察叶绿体的形态和分布。 3）正确使用低倍镜：取镜——对光——安放装片——下降镜筒——调焦。下降镜筒时，必须双眼注视物镜和装片的距离，以免压坏装片和碰坏物镜。 4）正确使用高倍镜：将低倍镜下看到的物像移到视野中央——转动转换器，换用高倍物镜——调整光圈和反光镜，使视野亮度适宜——调节细准焦螺旋，直至物像清晰。 （2）用显微镜观察细胞质的流动： 取材：将黑藻先放在光下、25℃左右的水中培养（生成足量叶绿体） 制片：载玻片滴水、放叶，加盖玻片，制成临时装片 观察：先低倍镜找到黑藻叶片细胞，后高倍镜观察到细胞内的叶绿体随细胞质液定向呈环形流动[适当增强光照、适当提高温度、切伤等均可加速流动。] 注意事项： 1）课前应检查实验材料，以便做到心中有数。观察细胞质的流动，理想的实验材料是黑藻。实验前教师必须检查供实验用的黑藻叶片细胞质的流动情况，如果发现细胞质不流动，或者流动很慢，应立即采取措施，加速其细胞质的流动。方法有三种，可以任选一种。一是进行光照，即在阳光或灯光下放置15～ 2Omin；二是提高盛放黑藻的水温，可加入热水将水温调至25℃左右；三是切伤一小部分叶片。 2）观察细胞质流动时，首先要找到叶肉细胞中的叶绿体，然后以叶绿体作为参照物，在观察时眼睛注视叶绿体，再来观察细胞质的流动。最后，再来仔细观察细胞质的流动速度和流动方向。 3）细胞质流动与新陈代谢有密切关系，呼吸越旺盛，细胞质流动越快，反之，则越慢。细胞质流动可朝一个方向，也可朝不同的方向，其流动方式为转动式（旋转式、环流式）。这时细胞器随细胞质基质一起运动，并非只是细胞质的运动。 4）寻找最佳观察部位：应寻找靠近叶脉部位的细胞进行观察，此处细胞水分供应充足，容易观察到细胞质的流动。
实验五 叶绿体的分离与荧光观察
实验五叶绿体的分离与荧光观察 叶绿体是植物细胞所特有的能量转换细胞器，光合作用就是在叶绿体中进行的。由于具有这一重要功能，所以它一直是细胞生物学、遗传学和分子生物学的重要研究对象。叶绿体是植物细胞中较大的一种细胞器，利用低速离心即可分离集中进行各种研究。 实验目的 一、通过植物细胞叶绿体的分离，了解细胞器分离的一般原理和方法。 二、观察叶绿体的自发荧光和次生荧光，并熟悉荧光显微镜的使用方法。 实验原理 将组织匀浆后悬浮在等渗介质中进行差速离心，是分离细胞器的常用方法。一个颗粒在离心场中的沉降速率取决于颗粒的大小、形状和密度，也同离心力以及悬浮介质的粘度有关。在一给定的离心场中，同一时间内，密度和大小不同的颗粒其沉降速率不同。依次增加离心力和离心时间，就能够使非均一悬浮液中的颗粒按其大小、密度先后分批沉降在离心管底部，分批收集即可获得各种亚细胞组分。 叶绿体的分离应在等渗溶液(0.35 mol／L氯化钠或0.4 mol／L蔗糖溶液)中进行．以免渗透压的改变使叶绿体受到损伤。将匀浆液在1000 r／min的条件下离心2min，以去除其中的组织残渣和一些未被破碎的完整细胞。然后，在3000 r／min的条件下离心5min，即可获得沉淀的叶绿体（混有部分细胞核）。分离过程最好在0～5℃的条件下进行；如果在室温下，要迅速分离和观察。 荧光显微术是利用荧光显微镜对可发荧光的物质进行观测的一种技术。某些物质在一定短波长的光(如紫外光)的照射下吸收光能进入激发态，从激发态回到基态时，就能在极短的时间内放射出比照射光波长更长的光(如可见光)，这种光就称为荧光。若停止供能荧光现象立即停止。有些生物体内的物质受激发光照射后可直接发出荧光，称为自发荧光(或直接荧光)，如叶绿素的火红色荧光和木质素的黄色荧光等。有的生物材料本身不发荧光，但它吸收荧光染料后同样也能发出荧光．这种荧光称为次生荧光(或间接荧光)，如叶绿体吸附吖啶橙后可发桔红色荧光。 利用荧光显微镜对可发荧光的物质进行检测时，将受到许多因素的影响，如温度、光、淬灭剂等。因此在荧光观察时应抓紧时间．有必要时立即拍照。另外，在制作荧光显微标本时最好使用无荧光载片、盖片和无荧光油。 实验用品 一、器材 1．主要设备：普通离心机、组织捣碎机、粗天平、荧光显微镜。 2．小型器材：500ml烧杯2个，250ml量筒1个，滴管10支，10ml刻度离心管20支，纱布若干，无荧光载片和盖片各4片。 二、材料 新鲜菠菜。 三、试剂 0.35 mol／L氯化钠溶液，．0.01％吖啶橙(acridine orange)。 实验方法 一、叶绿体的分离与观察 1. 选取新鲜的嫩菠菜叶，洗净擦干后去除叶梗及粗脉，称30g于150ml 0.35 mol／L NaCI 溶液中，装入组织捣碎机。 2. 利用组织捣碎机低速(5 000 r／min)匀浆3~5min。 3. 将匀浆用6层纱布过滤于500ml烧杯中。
观察线粒体和叶绿体的实验
选材→制片→低倍镜观察→高倍镜观察 3．实验分析 (1)选材：用菠菜叶稍带些叶肉的下表皮的原因是接近下表皮，海绵组织较多，叶绿体大而排列疏松，便于观察；带叶肉是因为表皮细胞不含叶绿体。 (2)实验条件：实验过程中的临时装片要始终保持有水状态。 (3)实验试剂：健那绿染液是专一性对线粒体染色的活细胞染料，可使活细胞中线粒体呈现蓝绿色，而细胞质接近无色。 角度以基础判断的形式，考查叶绿体和线粒体的观察 1．(2015·通化模拟)下列关于“用高倍显微镜观察叶绿体和线粒体”的实验说法不正确的是() A．健那绿染液是一种活细胞染料，几乎不损伤细胞 B．选用含叶绿体少而大的细胞来观察 C．高倍镜下，可看到叶绿体内部有许多基粒 D．藓类叶片可直接放在载玻片上观察叶绿体 解析：选C健那绿染液是活细胞染料，可将线粒体染成蓝绿色，而细胞质则几乎无色；藓类叶片很薄，可直接用于制作临时装片；选用叶绿体少而大的细胞观察较清楚；叶绿体的基粒在电子显微镜下才能看到。 2．(2011·江苏高考)将有关生物材料直接制成临时装片，在普通光学显微镜下可以观察到的现象是() A．菠菜叶片下表皮保卫细胞中具有多个叶绿体 B．花生子叶细胞中存在多个橘黄色的脂肪颗粒 C．人口腔上皮细胞中线粒体数目较多 D．紫色洋葱鳞片叶外表皮细胞中细胞核清晰可见 解析：选A菠菜叶片的下表皮保卫细胞中含有多个扁平的叶绿体，不需染色即可作为观察叶绿体的材料；花生子叶细胞需制成临时装片再经苏丹Ⅲ染液染色后才能观察到橘黄色的脂肪颗粒；人的口腔上皮细胞需用健那绿染液染色后才能观察到线粒体；紫色洋葱鳞片叶外表皮细胞中清晰可见的是紫色的大液泡。 3．(2011·山东高考)只有在保持细胞活性的条件下，才能显示细胞中某物质或结构的实验是() A．苏丹Ⅲ染液染色观察花生种子子叶细胞中的脂肪 B．龙胆紫溶液染色观察洋葱根尖分生区细胞的有丝分裂 C．健那绿(詹纳斯绿B)染液染色观察动物细胞中的线粒体 D．甲基绿、吡罗红染色观察动物细胞中的DNA和RNA 解析：选C依据题干提供的信息，“只有在保持细胞活性的条件下”来判断，选项A 不需要保持活性；选项B在用龙胆紫溶液染色观察洋葱根尖分生区细胞之前需用盐酸和酒精混合液解离，此时细胞已被杀死；选项C中的健那绿(詹纳斯绿B)染液是活细胞染料，所以细胞必须要保持活性；选项D中需用盐酸处理后再染色，细胞也不需要保持活性。
高一生物：实验观察叶绿体教学设计
新修订高中阶段原创精品配套教材 实验观察叶绿体教材定制 / 提高课堂效率 /内容可修改 Experimental observation of chloroplast 教师：风老师 风顺第二中学 编订：FoonShion教育
实验观察叶绿体 高中生物第一册（必修）学案 第7课时实验：高倍显微镜的使用和观察叶绿体 实验原理 高等植物的叶绿体存在于细胞质中，叶绿体呈色、形，高倍显微镜下清晰可见。 实验目的 1、初步掌握高倍显微镜的使用方法。 2、观察叶绿体形态和分布。 实验程序 观察细胞质的流动 实验原理 活细胞中的细胞质处于不断流动的状态，用的运动作为标记可观察细胞质的流动。 实验目的 1、掌握高倍显微镜的使用方法。 2、通过显微镜的实际观察的实际观察，理解细胞质流动
是一种生命现象。 实验程序 光照、室温条件下水中培养黑藻 取一片幼嫩的小叶 临时装片：清水+小叶+盖玻片 低倍观察叶片细胞 高倍观察叶绿体的流动及流动方向 注意事项： 1、细胞质的流动受细胞的代谢状况和外界环境因素的影响，增进细胞代谢作用的因素，如适宜的光照、温度、ph 值、生长素等，都可以促进细胞质的流动。反之，不利的环境变化和某些化学药品，如麻醉剂等，则可抑制细胞质的流动。 2、在做此实验时，如果发现细胞质不流动，或者流动很慢，应立即采取措施，加速其细胞质的流动。其方法有三种：一是进行光照，即在阳光或灯光下放置15~20分钟；二是提高盛放黑藻的水温，可加入热水将水温调至25℃左右；三是切伤一小部分叶片。 自我评价 1、普通光学显微镜是生物学实验中最常用的仪器之一，试回答下列关于显微镜使用中的有关问题： （1）一细胞或物体被显微镜放大50倍，这时“被放大50
实验三 叶绿体的分离与荧光观察
实验三叶绿体的分离与荧光观察 一、实验目的 1．了解差速离心法分离细胞成分的一般原理和方法。 2．掌握从植物叶组织中分离叶绿体的方法。 3．熟悉荧光显微镜的使用方法，并观察叶绿体的自发荧光和次生荧光。 4．熟悉利用叶绿体得率来测量叶绿素含量。 二、实验原理 叶绿体是是植物细胞中由双层膜围成，含有叶绿素能进行光合作用的能量转换细胞器。由于具有这一重要功能，所以它一直是植物学、细胞生物学和遗传学等的重要研究对象。 植物细胞被细胞壁所包围，因此实验中必须破碎细胞壁的同时保持叶绿体的完整。叶绿体是植物细胞中较大的一种细胞器。将组织匀浆后悬浮在等渗介质中进行差速离心，是分离叶绿体等细胞器的常用方法。 差速离心就是根据一个颗粒在离心场中的沉降速率取决于颗粒的大小、形状和密度，及离心力以及悬浮介质的粘度等因素进行的。在一给定的离心场中，同一时间内，密度和大小不同的颗粒其沉降速率不同。依次增加离心力和离心时间，就能够使非均一悬浮液中的颗粒按其大小、密度先后分批沉降在离心管底部，分批收集即可获得各种亚细胞组分。 叶绿体的分离应在等渗溶液（0.35 mol/L氯化钠或0.4 mol/L蔗糖溶液）中进行，以免渗透压的改变使叶绿体受到损坏。先将匀浆液在1 000 rpm的条件下离心2 min（以去除其中的组织残渣和一些未被破碎的完整细胞），然后在 3 000 rpm的条件下离心5 min，即可获得沉淀的叶绿体（混有部分细胞核）。分离过程最好在0～4℃的条件下进行；如果在室温下，要迅速分离和观察。 有些生物体内的物质受激光照射后可直接发出荧光，称为自发荧光（或直接荧光），有的生物材料本身不发荧光，但它吸收荧光染料后同样也能发出荧光，这种荧光为次生荧光（或间接荧光）。叶绿体含有的叶绿素发出火红色荧光属于自发荧光，叶绿体吸附吖啶橙后可发桔红色荧光属于次生荧光。 三、实验仪器、材料和试剂 1．设备与器材
观察叶绿体
观察叶绿体 一、学习任务分析 《观察叶绿体》选自浙科版高中生物必修一第二章第三节，本节着重介绍了细胞质中的各种细胞器结构和功能。本节想着重培养学生识图——感知科学的过程和方法——实验观察——解决问题的能力。叶绿体作为光合作用的的场所，有其特定的结构，有其学习的必要性。 二、学习者分析 高二学生已具有一定的实验探究能力，同时对生物实验充满了浓厚的兴趣，能够在教师的指导下完成验证实验。学生在本模块前面的学习中，已经进行过类似的探究活动，对探究实验的过程和方法有一定的认识，在操作技能上也有一定的基础。 三、教学重难点 1、教学重点：观察叶绿体的形态和分布； 2、教学难点：观察叶绿体的形态和分布。 四、教学目标 根据《中学生物新课程标准》精神、教材的内容、所教班级学生状况、和谐的师生关系和课题研究的需要，确立了以下几个目标： 1、知识与技能目标： (1)初步掌握高倍显微镜的使用方法； (2)观察叶绿体形态和分布； (3)通过显微镜的实际观察的实际观察，理解细胞质流动是一种生命现象； 2、过程与方法目标： (1)通过显微镜下观察叶绿体的结构，感知科学的过程和方法； (2)通过制作与观察叶绿体的生物材料临时装片，学会一般的生物绘图技能； (3)运用间接观察的科学方法，正确表述观察到的现象，撰写规范的实验报告； 3、情感态度与价值观目标： 通过观察叶绿体的形态与分布，真正理解叶绿体对于植物光合作用的重要作用，养成严谨的科学态度，善于观察生活中常见的生物学现象。 五、教学过程 本实验将以教师为主导，学生为主体，师生之间相互合作的方式，学生在教师指导下独立完成用高倍镜观察叶绿体的实验。教师将借助多媒体，视频等教学工具。 1、教师向学生说明实验目的：观察黑藻叶肉细胞中叶绿体的形态和分布。 2、教师向学生展示本次实验将用到的材料及用具：黑藻、载玻片、盖玻片、镊子、水、台 灯、培养皿和显微镜。 3、教师给学生播放观察叶绿体的实验视频，一边看一边讲实验的注意点及实验步骤：①事 先将观察用的黑藻放在光照充足、温度适宜的条件下培养。将黑藻从水中取出，用镊子从新鲜枝上取一片幼嫩的小叶；实验时，取载玻片，滴上一滴干净的水，将小叶放在载玻片的水滴中，盖上盖玻片。制成临时装片。②先用低倍镜找到黑藻叶肉细胞，再换用高倍镜观察黑藻叶肉细胞。注意叶绿体在细胞中的运动和细胞中的其他结构。③绘制你所观察到的细胞简图。
用高倍显微镜观察叶绿体和线粒体(实验报告及答案)
实验名称：用高倍显微镜观察叶绿体和线粒体 一、实验原理（补充完整） 叶肉细胞中的叶绿体，散布于细胞质中，呈＿＿色、＿＿＿＿＿＿或球形。无需染色即可在高倍显微镜下观察到。 线粒体普遍存在于＿＿＿＿＿和＿＿＿＿＿中。线粒体形态多样，有＿＿＿＿、＿＿＿、线形、哑铃形等。＿＿＿＿染液是将＿＿＿＿中的线粒体染色的专一性燃料，可以使活细胞中的线粒体呈现＿＿＿＿，而细胞质接近＿＿＿＿。 二、实验目的和要求 1、使用高倍显微镜观察叶绿体、线粒体的形态和分布 2、绘制相关细胞图像 三、材料及用具 黑藻、口腔上皮细胞、1℅的健那绿染液、清水； 显微镜、载玻片、盖玻片、滴管、镊子、消毒牙签 四、方法步骤（补充完整） 1、观察叶绿体 ①制作临时装片：＿＿＿＿＿＿＿＿＿＿＿＿＿＿＿＿＿＿＿＿＿＿＿＿＿＿＿ ＿＿＿＿＿＿＿＿＿＿＿＿＿＿＿＿＿＿＿＿＿＿＿＿＿＿。 注意：临时装片的中的材料不能放干了，要随时保持＿＿＿＿状态。 ②低倍镜观察。 ③高倍镜观察。 2、观察线粒体 ①制作临时装片：＿＿＿＿＿＿＿＿＿＿＿＿＿＿＿＿＿＿＿＿＿＿＿＿＿＿＿ ＿＿＿＿＿＿＿＿＿＿＿＿＿＿＿＿＿＿＿＿＿＿＿＿＿＿。 ②低倍镜观察。 ③高倍镜观察。 四、作业 1、绘制你所观察到的细胞图像实验名称：用高倍显微镜观察叶绿体和线粒体 绿扁平的椭球形植物细胞动物细胞短棒状圆球状健那绿 活细胞蓝绿色无色 三、材料及用具 黑藻、口腔上皮细胞、1℅的健那绿染液、清水； 显微镜、载玻片、盖玻片、滴管、镊子、消毒牙签 四、方法步骤（补充完整） 1、观察叶绿体 ①在洁净的载玻片上滴一滴清水，用镊子取一片干净嫩绿的黑藻叶片，放入清水中， 盖上盖玻片。有水 2、观察线粒体 ①在洁净的载玻片上滴一滴健那绿染液，用消毒的牙签在自己漱净的口腔内侧壁上轻 轻地刮几下把牙签附有碎屑的一端。放在染液中涂抹几下，盖上盖玻片，实验名称：探究植物细胞的吸水和失水（质壁分离及复原实验）一、实验原理（补充完整） 大于大质壁分离小于质壁分离复原 三、材料及用具 0.3g/mL的蔗糖溶液、清水、紫色的洋葱鳞片叶； 显微镜、载玻片、盖玻片、刀片、镊子、滴管、吸水纸。 四、方法步骤（补充完整） 1、用刀片在洋葱鳞片叶外表皮上，划出2－5平方毫米的小方格，然后用镊子 撕下方格内的表皮放在载玻片的水滴中，铺平，盖上盖玻片。 3、从盖玻片的一侧滴入蔗糖溶液，在盖玻片的另一侧用吸水纸吸引，反复几次，使洋 葱鳞片叶外表皮浸润在蔗糖溶液中。 5、从盖玻片的一侧滴入清水，在盖玻片的另一侧用吸水纸吸引，反复几次，使洋葱鳞 片叶外表皮浸润在清水中。
实验一 叶绿体的分离与荧光观察
实验一叶绿体的分离与荧光观察 一、实验目的： （1）通过植物细胞叶绿体的分离，了解细胞器分离的一般原理和方法。 （2）观察叶绿体的自发荧光和次生荧光，并熟悉荧光显微镜的使用方法。 二、实验原理： 将组织匀浆后悬浮在等渗介质中进行差速离心，是分离细胞器的常用方法。一个颗粒在离心场中的沉降速率取决于颗粒的大小、形状和密度，也同离心力以及悬浮介质的黏度有关。在一给定的离心场中，同一时间内，密度和大小不同的颗粒其沉降速率不同。一次增加离心力和离心时间，就能够使非均一悬浮液中的颗粒按其大小、密度先后分批沉降在离心管底部，分批收集即可获得各种亚细胞组分。 叶绿体的分离应在等身溶液（0.35mol/L氯化钠或0.4mol/L蔗糖溶液）中进行，以免渗透压的改变使叶绿体损伤。将匀浆液在1000r/min的条件下离心2 分钟，以去除其中的组织残渣和未被破碎的完整细胞。然后，在3000r/min的条件下离心5分钟，即可获得沉淀的叶绿体（混有部分细胞核）。分离过程最好在0℃~5℃的条件下进行；如果在室温下，要迅速分离和观察。 利用荧光显微镜对可发荧光的物质进行检测时，将受到许多因素的影响，如温度、光、淬灭剂等。因此在荧光观察时应抓紧时间，有必要时立即拍照。另外，在制作荧光显微标本时最好使用无荧光载玻片、盖玻片和无荧光油。 三、实验用品： 1、材料：新鲜菠菜 2、试剂： （1）0.35mol/L氯化钠溶液 （2）0.01%吖啶橙（acridine orange） 3、器材： （1）主要设备：普通离心机，组织捣碎机，粗天平，荧光显微镜。 （2）小型器材：500ml烧杯2个，250ml量筒1个，滴管20支，10ml刻度离心管20支，试管架5个，纱布若干，无荧光载玻片和盖玻片各4片等。 四、实验方法： 1、叶绿体的分离与观察： （1）选取新鲜的嫩菠菜叶，洗净擦干后去除叶梗脉，称30g于150ml 0.35mol/L NaCl溶液中，装入组织捣碎机。 （2）利用组织捣碎机低速（5000r/min）匀浆2~3分钟。 （3）将匀浆用6层纱布过滤于500ml烧杯中。 （4）取滤液4ml在1000r/min下离心2min。弃去沉淀。 （5）将上清液在3000r/min下离心5分钟。弃去上清液，沉淀即为叶绿体（混
高一生物：实验观察叶绿体
高中生物新课程标准教材 生物教案( 2019 — 2020学年度第二学期 ) 学校： 年级： 任课教师： 生物教案 / 高中生物 / 高一生物教案 编订：XX文讯教育机构
实验观察叶绿体 教材简介:本教材主要用途为通过学习生物这门课程，可以让学生打开对世界的认识，提高自身的见识，本教学设计资料适用于高中高一生物科目, 学习后学生能得到全面的发展和提高。本内容是按照教材的内容进行的编写，可以放心修改调整或直接进行教学使用。 高中生物第一册（必修）学案 第7课时实验：高倍显微镜的使用和观察叶绿体 实验原理 高等植物的叶绿体存在于细胞质中，叶绿体呈色、形，高倍显微镜下清晰可见。 实验目的 1、初步掌握高倍显微镜的使用方法。 2、观察叶绿体形态和分布。 实验程序 观察细胞质的流动 实验原理 活细胞中的细胞质处于不断流动的状态，用的运动作为标记可观察细胞质的流动。实验目的 1、掌握高倍显微镜的使用方法。
2、通过显微镜的实际观察的实际观察，理解细胞质流动是一种生命现象。 实验程序 光照、室温条件下水中培养黑藻 取一片幼嫩的小叶 临时装片：清水+小叶+盖玻片 低倍观察叶片细胞 高倍观察叶绿体的流动及流动方向 注意事项： 1、细胞质的流动受细胞的代谢状况和外界环境因素的影响，增进细胞代谢作用的因素，如适宜的光照、温度、ph值、生长素等，都可以促进细胞质的流动。反之，不利的环境变化和某些化学药品，如麻醉剂等，则可抑制细胞质的流动。 2、在做此实验时，如果发现细胞质不流动，或者流动很慢，应立即采取措施，加速其细胞质的流动。其方法有三种：一是进行光照，即在阳光或灯光下放置15~20分钟；二是提高盛放黑藻的水温，可加入热水将水温调至25℃左右；三是切伤一小部分叶片。 自我评价 1、普通光学显微镜是生物学实验中最常用的仪器之一，试回答下列关于显微镜使用中的
叶绿体的分离及荧光染色观察
叶绿体的分离及荧光染色观察 泮力菁 2011级生物基地 201100140091 同组者：商倩倩【实验目的】 1、通过植物细胞叶绿体的分离，了解细胞器分离与纯化的原理和方法； 2、熟悉荧光显微镜的使用方法，观察叶绿体的自发荧光和间接荧光； 3、复习巩固制片及染色的基本技术。 【实验原理】 1、真核细胞由细胞膜、细胞核和细胞质组成。细胞质中含有若干细胞器和细胞骨架，这些结构被称为亚细胞组分。分离亚细胞组分的方法主要有差速离心和密度梯度离心两种。 2、差速离心和密度梯度离心： 差速离心法是在密度均一的介质中由低速到高速的逐级离心用于分离不同大小的物体。离心速度逐渐提高，样品会按先大后小的顺序沉淀。在差速离心中细胞器沉降的顺序为：细胞核、线粒体、溶酶体和过氧化物酶体、内质网和高尔基体。最后为核糖核蛋白复合体。由于各种细胞器在大小和密度上可能相互重叠。一般差速离心2-3次，分离效果会好一些。差速离心只用于分离密度和大小悬殊的细胞或细胞器，并且得到的产物纯度较低。若对产物纯度的要求较高，则需要密度梯度离心来分离纯化。 密度梯度离心法是利用一定的介质在离心管内形成连续的密度梯度，将细胞悬浮液或匀浆置于介质的顶部，通过离心力的作用使细胞或细胞器分层、分离，最后不同密度的细胞或细胞器位于与自身密度相同的沉降区带中。这种离心技术又可分为速度沉降和等密度沉降两种。速度沉降主要用于分离密度相近而大小不同的物体，而等密度沉降用于分离密度不同的物体。 叶绿体是植物细胞所特有的能量转换细胞器。它是一种比较大的细胞器，利用差速离心即可分离收集，然后用密度梯度离心纯化，便可用于各种研究。 3、荧光： 光致发光：某些物质在照射下，吸收光能进入激发态，当从激发态进入基态时，可以以电磁辐射的形式释放出吸收的光能，这种现象称之为“光致发光”。紫外辐射，可见光及红外辐射均可引起光致发光，如磷光与荧光。 荧光：在光致发光中，如果一定波长的短波光（如紫外光）照射某种物质，这种物质吸收光能后进入激发态，并立即激发在极短的时间内能发射出比照射光波长更长的光（如可见光），这种光就称为荧光。一旦停止入射光，发光现象也随之立即消失。 荧光的性质：A、吸收光，必须有激发光源；B、荧光波长大于激发波长（损失热能）；C、荧光强度小于激发光的强度；D、有不同程度的衰减（影响因素：如温度、光。猝灭剂等，因此可以先拍照，后观察）；E、荧光强度取决于激发光强度，被检物浓度、荧光效率（在制作荧光显微标本时最好使用无荧光载玻片、盖玻片和香柏油）。 荧光显微镜的光源有汞灯光源（提供激发光：U,V,B,G），疝灯光源：高峰值更宽，更稳定）。
高中生物《活动观察叶绿体》的教学设计
“活动：观察叶绿体”的教学设计 一、设计理念 生物科学本质上是实验科学。实验教学既是一类探究活动，也是生物学教学的基本形式之一。实验教学对学生掌握生物学知识和科学方法、提高学生的实验能力、培养学生生物科学素养有着其他教学方式不可替代的重要作用，是向学生渗透科学意识及养成科学态度的必由之路。《课程标准》中也强调通过实验教学切实发展学生科学探究的能力，并以此推动学习方式的改变。 本节实验课基于既重视实验过程又重视实验结果的设计理念，采用“实验观察-解决问题”的教学模式。希望通过实验材料种类的增加和选择，增加实验的趣味性和学生的自主选择性，并使学生体会在实验中实验材料选择的重要性和选择的依据。通过实验过程的各种材料的观察的比较，体会科学实验需要严谨和一丝不苟的精神。通过实验结果的观察和分析，体会生物学知识的获得是实验研究的结果，并启发学生从不同角度思考问题、分析问题，拓展生物学思维的深度和广度。 二、教材分析 叶绿体是植物细胞中较大的一种细胞器，是真核生物光合作用的唯一场所，能发生特有的能量转换。由于具有这一重要功能，所以它一直是细胞生物学、遗传学和分子生物学的重要研究对象。 本实验选自浙科版生物必修1第二章第三节的实验部分，是掌握叶绿体的形态及其在细胞内的分布规律的常规实验。本实验主要是观察叶绿体在细胞中的形态、分布，增加学生对叶绿体的感性认知，使学生更好地掌握叶绿体的结构知识，为后续的光合作用学习打下扎实的基础。 三、学情分析 在第一章《细胞的分子组成》中，学生已经使用高倍镜观察过花生子叶中油脂的鉴定，也在第二章《细胞的结构》中观察过多种多样的细胞，对高倍镜的使用步骤有了一定的了解。此外在第一章中学生也在油脂的鉴定实验这种制作过花生子叶的切片和临时装片。这些都为本实验的顺利开展奠定了实验技能的基础。 在本实验之前学生已经学习了叶绿体的大致结构和功能，为本实验的观察做了知识上的铺垫，本实验可以进一步增加学生对叶绿体的感性认识。 而且高二学生已经具有一定的逻辑推理、分析问题和解决问题的能力，使实验结果的分析成为可能。 四、教学目标 1、知识目标：（1）通过实验观察正确描述叶绿体的颜色、形态、分布等特点。
叶绿体的分离和观察
生命科学学院 Life Scie nee College 细 胞 生 物 学 实验报告 姓名：柳伟雄班级：2013级生科一班
山东大学实验报告 2015年5月10日 学号：2同组者：曾玮璠 姓名：柳伟雄 系年级：生科一班2013级 科目：细胞生物学实验 题目：叶绿体的分离和观察 一、目的和要求 1. 通过植物细胞叶绿体的分离，了解细胞器分离的一般原理和方法 2. 观察叶绿体的自发荧光和次生荧光，并熟悉荧光显微镜的使用方法 、原理 将组织匀浆后悬浮在等渗介质中进行差速离心， 是分离细胞器的常用方法。 一个颗粒在离心场中的 沉降速率取决于颗粒的大小、 形状和密度，也同离心力以及悬浮介质的黏度有关。 在一给定的离心场中， 同一时间内，密度和大小不同的颗粒其沉降速率不同。 一次增加离心力和离心时间， 就能够使非均一悬 浮液中的颗粒按其大小、 密度先后分批沉降在离心管底部， 分批收集即可获得各种亚细胞组分。 叶绿体 的分离应在等身溶液（0.35mol/L 氯化钠或0.4mol/L 蔗糖溶液）中进行，以免渗透压的改变使叶绿体 损伤。将匀浆液在1000r/min 的条件下离心2分钟，以去除其中的组织残渣和未被破碎的完整细胞。 然 后，在3000r/min 的条件下离心5分钟，即可获得沉淀的叶绿体（混有部分细胞核） 。分离过程最好在 0C — 5C 的条件下进行；如果在室温下，要迅速分离和观察。 利用荧光显微镜对可发荧光的物质进行检 测时，将受到许多因素的影响，如温度、光、淬灭剂等。因此在荧光观察时应抓紧时间，有必要时立即 拍照。另外，在制作荧光显微标本时最好使用无荧光载玻片、盖玻片和无荧光油。 三、试剂和器材 1. 材料：新鲜菠菜 2. 试剂：（1） 0.35mol/L 氯化钠溶液（2） 0.01%吖啶橙（acridine orange ） 3、 器材：（1 ）主要设备：普通离心机，组织捣碎机，粗天平，荧光显微镜 （2）小型器材：500ml 烧杯2个，250ml 量筒1个，滴管20支，10ml 刻度离心管 纱布若干，无荧光载玻片和盖玻片各 4片等 四、实验步骤 1. 选取新鲜的嫩菠菜叶，洗净擦干后去除叶梗脉，称 30g 于150ml 0.35mol/LNaCI 溶液中，装入组织捣 碎机 2. 利用组织捣碎机低速（5000r/min ）匀浆2— 3分钟 3. 将匀浆用6层纱布过滤于500ml 烧杯中 4. 取滤液4ml 在1000r/min 下离心2min ,弃去沉淀 同组者：曾玮皤 20支，试管架5个,
用高倍显微镜观察叶绿体实验步骤
活动目标 1．使用高倍显微镜观察叶绿体和线粒体的形态和分布。 2．识别光学显微镜下的叶绿体和线粒体。 背景资料 1．相关知识 地球上绝大多数生命活动所需能量的最终源头是太阳能。绿色植物是主要的能量转换者，完成这一能量转换的细胞器是叶绿体。叶绿体利用光能将二氧化碳和水合成糖类等有机物，同时产生氧。在高等植物细胞中叶绿体呈椭球形，长径5～10 μm，短径2～4 μm，厚2～3 μm。高等植物的叶肉细胞中一般含50～200个叶绿体，可占细胞质的40%。叶绿体的数目因同种植物不同细胞类型、生态环境、生理状态而有所不同。在藻类细胞中，叶绿体形状多样，有网状、带状、裂片状和星形等，而且体积巨大，长径可达100 μm。 线粒体是动植物细胞中重要的细胞器，与能量转换有关。线粒体一般呈粒状或棒状，因不同的细胞种类和生理状态而不同，可呈环形、哑铃形、线状、分支状或其他形状。线粒体数目因细胞种类和生理状态不同有所差异，一般在一个细胞中有数百到数千个。植物细胞因有叶绿体的缘故，线粒体数目相对较少；肝细胞中约有1 300个线粒体，占细胞体积的20%；巨大变形虫中线粒体数目可达50万个；许多哺乳动物成熟的红细胞中无线粒体；酵母细胞中有一个大型分支状的线粒体。线粒体通常分布在细胞生命活动旺盛的区域。例如，在肝细胞中呈均匀分布；在肾细胞中靠近微血管，呈平行或栅栏状排列；在精子中集中在尾的基部。线粒体在细胞质中可以向生命活动旺盛的区域迁移。 2．实验原理 （1）叶绿体的观察植物绿色部位的细胞中含有叶绿体。如果将叶片的横切片制成临时装片，就可以在显微镜下观察到叶绿体。某些植物幼嫩的叶也可直接用于观察叶绿体。 （2）线粒体的观察线粒体是细胞进行有氧呼吸的主要场所，内含细胞色素氧化酶系。健那绿是一种碱性染料,可以专一性地对线粒体进行染色。与线粒体内的细胞色素氧化酶系发生作用时，染料始终保持氧化状态,呈蓝绿色;而线粒体周围的细胞质中的染料被还原为无色的状态。通过染色可以在高倍显微镜下观察到呈现蓝绿色的线粒体。 操作指南 1．材料藓类、菠菜或黑藻的叶，人的口腔上皮细胞，洋葱内表皮细胞。 2．用具显微镜，载玻片，盖玻片，滴管，镊子，消毒牙签。 3．试剂及配制方法
实验1叶绿体的分离与荧光分析
中国海洋大学实验报告姓名：系年级：**级专业：生物科学 科目：分子细胞生物学实验学号：** 一、实验目的： （1）、通过对植物叶绿体的分离，了解细胞器分离的一般原理和方法 （2）、观察叶绿体的间接荧光，并了解荧光显微镜的使用方法 二、实验原理 颗粒在离心场中的沉降速率取决于颗粒的大小、形状和密度，也同离心力以及悬浮介质的黏度有关。在一定的离心场中，同一时间内，密度和大小不同的颗粒其沉降速率不同，一次增加离心力和离心时间，就能使非均一悬浮液中的颗粒按其大小。密度的先后分批沉降在离心管的底部分批收集，即可获得各个亚细胞的组分。 叶绿体的分离应该在等渗溶液中进行，以免渗透压影响叶绿体，对其造成损伤。 在荧光显微镜下可以观察叶绿体的自发荧光和间接荧光。 三、实验材料 新鲜菠菜。 等渗溶液：0.35mol/L氯化钠溶液， 试剂：0.01%吖啶橙(acridine orange)
四、实验方法 １、叶绿体的分离 2、菠菜叶手撕片的制备 ①、下表皮因海绵组织较疏松，可以直接手撕下表皮的薄膜在显微镜下观察。
②、上表皮因栅栏组织较致密，可以用刀片将下表皮刮掉，在显 微镜下观察上表皮的细胞和气孔。 3、菠菜的叶绿体的观察 在普通光学显微镜下，将制得的手撕片放在载玻片的等渗溶液中，游离的叶绿体悬浊液点在在载玻片上，轻轻地盖上盖玻片（防止气泡 产生），即可观察。 在荧光显微镜下，将游离叶绿体悬浊液的的标本放在荧光显微镜下，先后用绿光、蓝光对其进行照射，在电脑上观察其产生的自发荧 光。 向手撕片的标本、游离叶绿体悬浊液的的标本中加入1-2滴 0.01% 吖啶橙染液，先后用绿光、蓝光对其进行照射，在电脑上观察 其产生的间接荧光。 五、实验结果 气孔保卫细胞 叶绿体 图1菠菜手撕片的标本中，上表皮及其气孔
高中生物实验 叶绿体的分离和荧光观察 实验报告
实验十一叶绿体的分离和荧光观察 一．实验目的 了解细胞匀浆和差速离心分级分离细胞组分的原理。了解提取叶绿体的基本原理及其过程，通过光学显微镜的观察了解体外分离的叶绿体的一般 形态，增加对叶绿体的感性认识。 掌握吖啶橙染色叶绿体的方法。 掌握显微数码拍照的方法。 二．实验内容 提取叶绿体，吖啶橙染色，观察染色结果。 显微数码拍照。 三．实验原理 将组织匀浆后悬浮在等渗介质中进行差速离心，是分离细胞器的常用方法。 在一定的离心场中，同一时间内，密度和大小不同的颗粒其沉降速度不同。依次增加离心力和离心时间，就能够使非均一悬浮液中的颗粒按其大小、密度先后分批沉降在离心管底部。叶绿体的分离应在等渗溶液（0.35mol/LNacl或0.4mol/L 蔗糖溶液）中进行。离心后可得沉淀的叶绿体。 四．实验方法与步骤 1．取嫩叶3g，洗净去柄去叶脉，剪碎放入研钵中。 2．加4ml0.35mol/LNacl，研磨匀浆，尼龙布过滤于离心管中1ml。 3．1000rpm离心2分钟弃去沉淀。 4．3000rpm离心15分钟，弃去上清液，将沉淀用少量0.35mNacl悬浮。 5．提取叶绿体观察：①普通光镜②荧光光镜③加吖啶橙。 6．撕取叶表皮观察：①普通光镜②荧光光镜③加吖啶橙。 a．在普通光镜下，可看到叶绿体为绿色椒榄形，在高倍镜下看到叶绿体内部含有较深的绿色的绿色小颗粒即基粒。 b．在荧光显微镜下，叶绿体发出火红色荧光。 c．加入吖啶橙染后，叶绿体可发也桔红色荧光。而其中混有的细胞核发
出绿色荧光菠菜叶手切片观察。 d．在普通光镜下可以看到三种细胞：表皮细胞：为边缘吐锯齿表的鳞片状细胞。保卫细胞：为构成气孔的成对存在的肾形细胞。叶肉细胞：为排成栅状的长形和椭圆形细胞。 5．显微数码拍照。 五．实验结果
叶绿体的分离与荧光观察
实验二叶绿体的分离与荧光观察 一、实验目的 了解叶绿体分离的一般原理和方法，并熟悉应用荧光显微镜方法观察叶绿体荧光现象。 二、实验原理 1、叶绿体的分离应在等渗溶液L氯化钠或L蔗糖溶液)中进行,以免渗透压 的改变使叶绿体受到损伤。利用差速离心法将匀浆液离心，从而使叶绿体得到分离。分离过程最好在0～5℃的条件下进行；如果在室温下，要迅速分离和观察。 2、有些生物体内的物质受激发光照射后直接发出荧光，称为自发荧光(或直 接荧光)，如叶绿素的火红色荧光和木质素的黄色荧光等。有的生物材料本身不发荧光，但它吸收荧光染料后同样也能发出荧光，这种荧光称为次生荧光(或间接荧光)，如叶绿体吸附吖啶橙后可发桔红色荧光。本实验利用荧光显微镜对叶绿体的荧光进行观察。 三、实验步骤 1.选取新鲜的嫩白菜叶片，洗净擦干后去除叶梗和粗脉，撕成小碎块，称 3g放于玻璃研钵中，加入LNaCl溶液，匀浆3～ 5min。 2.匀浆液用2层尼龙布过滤于50ml烧杯中。 3.将滤液平分到2个离心管中，天平配平，1000r/min下离心2min。弃去沉 淀。 4.将上清液在3000r/min下离心5min。弃去上清，沉淀即为叶绿体。 5.将沉淀用LNaCl溶液悬浮，做两张临时装片：①取一滴叶绿体悬液滴于 载片上，加盖片观察；②取一滴叶绿体悬液滴于载片上，再滴加1-2滴%吖啶橙荧光染料，加盖片观察： ①在普通光镜下观察； ②在荧光显微镜下观察：先用明视野（白炽光灯下）和用低倍镜头观察， 找到适当的标本后，再转高倍镜头，并将白炽光灯转换成以汞灯激发光 作光源，用暗视野观察。 6.撕取白菜叶片下表皮一小片置于滴有清水的载片上，盖上盖玻片，在普通 光镜下观察气孔的形状，保卫细胞里面的叶绿体；随后转置荧光显微镜下观察。 四、结果与分析
实验1 叶绿体的分离与荧光观察
中国海洋大学实验报告 2019年 3 月30 日姓名杨慧慧学号17050031803 系年级海洋生命学院2017 专业生物技术科目细胞生物学实验上课时间周六12节题目实验一叶绿体的分离和荧光观察 一、实验目的 1. 通过植物细胞叶绿体的分离, 了解细胞器分离的一般原理和方法。 2. 观察叶绿体的自发荧光和次生荧光, 并熟悉荧光显微镜的使用方法。 二、实验原理 1. 将组织匀浆后悬浮在等渗介质中进行差速离心，是分离细胞器的常用方法。 2. 叶绿体的分离应在等渗溶液中进行, 以免渗透压的改变使叶绿体受到损伤。 3. 因为叶绿体有自发荧光，因此用荧光显微镜进行观察。 三、实验用品 1. 材料：新鲜菠菜。 2. 试剂：0.35mol/L氯化钠溶液，0.01%吖啶橙(acridine orange)。 3. 器材： (1)主要设备: 普通离心机、组织捣碎机、粗天平、荧光显微镜。 (2)小型器材: 烧杯, 量筒, 滴管, 刻度离心管, 纱布，无荧光载片和盖片。 四、实验步骤与方法 一、叶绿体的分离与观察 1.选取新鲜的嫩菠菜叶，洗净擦干后去除叶梗脉，称30g于150ml 0.35mol/L NaCl溶液中，装入组织捣碎机。 2.低速匀浆3~5min。 3.将匀浆用6层纱布过滤于500ml烧杯中。 4.每组取滤液4ml，1000r/min下离心2min，弃去沉淀。 5.将上清液在3000r/min下离心5min，弃去上清液，沉淀即含叶绿体(混有部分细胞核)。 6.将沉淀用0.35mol/L NaCl溶液悬浮。 7.取叶绿体悬液一滴滴于载玻片上，加盖玻片后即可在普通光镜和荧光显微镜下观察。 (1)在普通光镜下观察。 (2)在荧光显微镜下观察叶绿体的直接荧光。 (3)在荧光显微镜下观察叶绿体的间接荧光：取叶绿体悬液一滴滴在无荧光载片上，再滴加一滴0.01%吖啶橙荧光染料, 加盖片后即可在荧光显微镜下观察。 二、菠菜叶手撕片观察 轻轻撕取新鲜嫩菠菜叶的表皮，展平置于载玻片上，滴加1~2滴0.35mol/L NaCl溶液，加盖片后置显微镜下观察。 (1)在普通光镜下观察。 (2)在荧光显微镜下观察其直接荧光。 (3)观察其间接荧光：向所制手撕片上滴加1~2滴0.01%吖啶橙染液，染色1min，洗去余液, 加盖片后即可在荧光显微镜下观察其间接荧光
实验观察叶绿体.doc
实验观察叶绿体 高中生物第一册（必修）学案第7课时实验：高倍显微镜的使用和观察叶绿体实验原理高等植物的叶绿体存在于细胞质中，叶绿体呈色、形，高倍显微镜下清晰可见。实验目的1、初步掌握高倍显微镜的使用方法。 2、观察叶绿体形态和分布。实验程序 观察细胞质的流动实验原理活细胞中的细胞质处于不断流动的状态，用的运动作为标记可观察细胞质的流动。实验目的 1、掌握高倍显微镜的使用方法。2、通过显微镜的实际观察的实际观察，理解细胞质流动是一种生命现象。实验程序光照、室温条件下水中培养黑藻取一片幼嫩的小叶临时装片：清水+小叶+盖玻片低倍观察叶片细胞高倍观察叶绿体的流动及流动方向注意事项：1、细胞质的流动受细胞的代谢状况和外界环境因素的影响，增进细胞代谢作用的因素，如适宜的光照、温度、ph值、生长素等，都可以促进细胞质的流动。反之，不利的环境变化和某些化学药品，如麻醉剂等，则可抑制细胞质的流动。2、在做此实验时，如果发现细胞质不流动，或者流动很慢，应立即采取措施，加速其细胞质的流动。其方法有三种：一是进行光照，即在阳光或灯光下放置15~20分钟；二是提高盛放黑藻的水温，可加入热水将水温调至25℃左右；三是切伤一小部分叶片。自我评价1、普通光学显微镜是生物学实验中最常用的仪器之一，试回答下列关于显微镜使用中的有关问题：（1）一细胞或物体被显微镜放大50倍，这时“被放大50倍”是指该细胞或生物体的（）a、体积 b、
表面积 c、像的面积 d、长度或宽度（2）当显微镜的目镜为10×，物镜为10×时，视野范围内看到一行相连的8个细胞，若目镜不变，物镜换成40×时，则在视野中可看到这行细胞中的 --------------------（） a、2个 b、4个 c、16个 d、32个（3）用4台显微镜观察黑藻细胞。在相同环境中，若视野的明暗程度相仿，反光镜的选用一致，则：显微镜的光圈最大的一台是（）；目镜和物镜均最短的一台是（）；观察到的细胞数目最多的一台是 -------------------------------------------------------------（） a、目镜15×和物镜45× b、目镜15×和物镜10× c、目镜5×和物镜10× d、目镜5×和物镜45×2、选择藓类作为观察叶绿体材料的原因与下列哪项无关 ---------------------------------（） a、制片简单 b、叶绿体清楚 c、叶子薄而小 d、细胞质流动速度快 2017-03-19 高中生物第一册（必修）学案第7课时实验：高倍显微镜的使用和观察叶绿体实验原理高等植物的叶绿体存在于细胞质中，叶绿体呈色、形，高倍显微镜下清晰可见。实验目的1、初步掌握高倍显微镜的使用方法。 2、观察叶绿体形态和分布。实验程序 观察细胞质的流动实验原理活细胞中的细胞质处于不断流动的状态，用
用高倍镜观察叶绿体和线粒体实验实验报告单
1.使用高倍显微镜观察叶绿体和线粒体的形态和分布。 2. 识别光学显微镜下的叶绿体和线粒体。 1.叶肉细胞中的叶绿体，散布于细胞质中，呈绿色、扁平的椭球形或球形。可以在高倍显微镜下观察它的形态和分布。 2.线粒体普通存在于植物细胞和动物细胞中。线粒体的形态多样，有短棒状、圆球状、线形、哑铃形等。健那绿染液是专一性染线粒体的活细胞染料，可以使活细胞中的线粒体呈现蓝绿色，而细胞质接近无色。线粒体能在健那绿染液中维持活性数小时，通过染色，可以在高倍显微镜下观察到生活状态的线粒体的形态和分布。 材料与试剂：藓类、菠菜或黑藻的叶，人的口腔上皮细胞；1%的健那绿染液（将0.5g 健那绿溶解于50mL 生理盐水中,加温到30-40℃,使其充分溶解）、清水； 用具：显微镜，载玻片，盖玻片，滴管，镊子，消毒牙签。 班级： 姓名： 日期： 实验名称：用高倍显微镜观察叶绿体和线粒体 实验材料 实验原理 高 中 生 物 学 实 验 报 告 单 实验目的
实验Ⅰ、制作藓类叶片临时装片，观察叶绿体 1.取出一个干净的载玻片，在中央滴一滴清水； 2.用镊子取一片藓类的小叶，放在水滴中，盖上盖玻片； 3.把制作好的装片放在低倍显微镜下观察，找到观察目标并移至视野中央； 4.换用高倍显微镜，同时把物象调到最清，仔细观察叶片细胞内叶绿体的形态和分布情况。 实验Ⅱ、制作人的口腔上皮细胞，观察线粒体 1.取一干净的载玻片，在中央滴一滴键那绿染液； 2.用消毒牙签在自己漱净的口腔内侧壁上轻轻刮几下，把牙签下附有碎屑的一端，放在染液中涂抹几下，盖上盖玻片； 3.把制作好的装片放在低倍显微镜下观察，找到观察目标并移至视野中央； 4.用吸水纸吸去盖玻片周围的多余液体。 5.换用高倍显微镜，同时把物象调到最清，仔细观察经过染色的人的口腔上皮细胞临时装片。 实验步骤 实验结果