红芪有效部位对肺间质纤维化模型大鼠肺组织胶原面积、
红芪有效部位对肺间质纤维化模型大鼠肺组织胶原面积、
目的观察红芪对肺间质纤维化模型大鼠肺组织胶原面积、透明质酸（HA）及层黏连蛋白（LN）表达的影响，探讨其作用机制，并筛选红芪最佳有效部位。方法将144只SPF级Wistar大鼠随机分为空白组、模型组、强的松组，以及红芪多糖、黄酮、皂苷的高、中、低剂量组。采用气管滴注博莱霉素法建立肺纤维化模型，从造模后第2日起，各药物组分别给予相应剂量药物，每日1次，共28 d。Masson染色观察肺组织胶原纤维的变化，放射免疫法检测各组大鼠肺组织匀浆中HA、LN含量。结果与模型组比较，红芪黄酮各剂量组、红芪多糖低剂量组肺泡炎明显减轻。红芪黄酮低剂量组、红芪多糖中剂量组、红芪皂苷低剂量组肺组织胶原面积明显减小。与模型组比较，红芪多糖高剂量组、红芪黄酮各剂量组、红芪皂苷高剂量组HA含量明显下降。红芪多糖高剂量组，红芪黄酮中、低剂量组，红芪皂苷中、低剂量组LN含量明显下降。结论红芪多糖、黄酮、皂苷在适宜剂量下均能减轻肺泡炎症，抑制胶原纤维增生、沉积，降低肺组织中HA、LN含量，其中红芪黄酮效果较佳。
Abstract：Objective To observe the effects of Radix Hedysari on collagen area，hyaluronic acid （HA）and laminin （LN）of lung tissues in rat with pulmonary interstitial fibrosis；To investigate the mechanism and screen the best active ingredients in Radix Hedysari. Methods Totally 144 SPF Wistar rats were randomly divided into control group，model group，metacortandracin group，and Radix Hedysari polysaccharide，flavone and saponin groups were set as high-，medium-，and low-dose groups. Pulmonary interstitial fibrosis models were set up by dropping bleomycin into air tube of rats. All groups were taken corresponding medicine with appropriate dose daily on day 2 after models were established for 28 days. Collagen fibrils in lung tissue were observed by Masson dying and contents of HA and LN in lung tissue of rats in each group were detected by radioimmunoassay. Results Compared with the model group，pulmonary alveoli in Radix Hedysari flavone high-，medium-，and low-dose groups and Radix Hedysari polysaccharide low-dose group were relieved obviously；collagenous fiber area in Radix Hedysari flavone low-dose group，Radix Hedysari polysaccharide medium-dose group，and Radix Hedysari saponin low-dose group decreased obviously. Compared with the model group，the content of HA in Radix Hedysari polysaccharide high-dose group，Radix Hedysari flavone high-，medium-，and low-dose groups，and Radix Hedysari saponin high-dose group decreased obviously；the content of LN in Radix Hedysari polysaccharide high-dose group，Radix Hedysari flavonemedium- and low-dose groups，and Radix Hedysari saponin medium- and low-dose groups decreased obviously. Conclusion Polysaccharide，flavone and saponin of Radix Hedysari have the abilities to alleviate inflammation of pulmonary alveoli，inhibit proliferation and deposition of collagen fibrils，and reduce the contents of HA and LA in lung tissue. Among these active ingredients，flavone has the best effect.
Key words：pulmonary fibrosis；active ingredients in Radix Hedysari；
大鼠肺成纤维细胞的原代培养和鉴定
气管镜肺活检（TBLB）和局部肺泡灌洗，肺活检报告示慢性肉芽肿性病变伴凝固性坏死，灌洗液和痰均找到抗酸杆菌，最终诊断为两肺肺结核。经过HRZE四联抗结核治疗，辅以激素控制结核中毒症状，患者病情迅速好转出院。 成人继发性肺结核影像常常呈现为多形态表现（即同时出现渗出、增殖、纤维和干酪性病变，还可伴有钙化），容易形成空洞。而本例患者起病较急，影像表现为两肺弥漫性肺间质病变、左肺大片实变、两肺斑片状阴影等多种病变，显然与典型继发性肺结核的表现有许多不同。与一般的成人继发性肺结核相比，有免疫损害及老年肺结核患者表现常常不典型。有资料认为成人继发性肺结核的不常见的X线表现有：①下肺结核；②粟粒性肺结核伴两肺间质性病变；③类似肺癌的纤维干酪块；④胸片正常。 回顾本例的诊治过程，我们的体会是：目前肺结核的临床表现多种多样，为了尽可能的减少肺结核的漏诊和误诊，提高对类似下呼吸道感染表现的肺结核的认识，了解和熟悉肺结核少见的X线表现，注意结核的高危因素和高危人群及胸部影像学的追踪观察，重视痰找抗酸杆菌、纤维支气管镜、组织活检病理等检查是十分必要的。 成年大鼠肺成纤维细胞的原代培养和鉴定 徐卫华沈华浩 浙江大学医学院附属二院呼吸科，浙江大学呼吸疾病研究所（310009） 体外培养肺成纤维细胞是研究肺部疾病如支气管哮喘、慢性阻塞性肺疾病、肺纤维化等的重要手段和工具。目前对于成年大鼠肺成纤维细胞的原代培养，国内尚未见报道。我们利用组织块培养法对成年SD大鼠肺成纤维细胞进行了原代培养，并用免疫细胞化学的方法进行了鉴定。 一、材料和方法 1．试剂和器材 0.25%胰蛋白酶（杭州吉诺公司），DMEM细胞培养液（杭州吉诺公司），胎牛血清（杭州四季清公司），兔抗人Ⅷ因子相关抗原多克隆抗体及鼠抗人肌动蛋白单克隆抗体（北京中山生物技术有限公司），免疫组化染色SP试剂盒（北京中山生物技术有限公司），小鼠抗波形蛋白单克隆抗体及免疫组化染色试剂盒（武汉博士德生物工程有限公司）。 2．细胞培养 250g清洁级雄性SD大鼠一只，断头处死后浸入75%酒精5分钟。大鼠移入超净台，开胸取肺，去除肺组织表面胸膜。剪切距离肺周边1mm内的肺组织，并将其放入玻璃培养皿。用手术剪将周边肺组织反复剪切成1mm×1mm大小的组织块，用PBS反复吹打冲洗直至PBS液变为澄清。用眼科镊小心钳取肺组织块，放入 3.5cm细胞培养皿，组织块之间距离约为1cm。将细胞培养皿放入℃2的细胞培养箱内培养4小时后取出培养皿，沿培养皿壁向培养皿内小心加入含10%胎牛375%CO ?281?
家兔实验性肺水肿
家兔急性肺水肿 目的： 复制家兔急性肺水肿模型；了解急性肺水肿表现及其发生机制。肺水肿是指肺血管内液体渗入肺间质和肺泡，使肺血管外液量增多的病理状态。用生理盐水扩充血容量，静注大剂量肾上腺素复制家兔肺水肿模型，肾上腺素可引起交感活性加强，导致体循环外周阻力增高，大量血液从体循环转移到肺循环，而左心未能及时适应，引起肺毛细血管静水压明显上升，肺血管内液体渗入肺间质和肺泡，发生肺水肿。 快速滴注生理盐水，使循环血容量急剧增多（静脉回心血量增加，血浆胶体渗透压降低）；大剂量的给予肾上腺素，一方面可激活肾上腺素α受体，使体循环血管剧烈收缩（A外周阻力增大，V回心血量增多）导致心脏前后负荷明显增加，而肺血管反应轻收缩弱，肺淤血水肿；另一方面中毒剂量的肾上腺素使心动速度加快，左心室不能把注入的血液充分排出，左心室舒张期末压力递增，可引起左心房的压力增高，亦使肺静脉回流受阻发生淤血。随快速输液，右心输出量加大，肺血流量增加，一旦超过血浆胶体渗透压，进入肺组织肺泡液体增多，引起急性心源性肺水肿。 复制肺水肿模型 2.3.1输入37℃生理盐水，输入量100ml/kg，输入速度180-200滴/min。滴注接近完毕时，立即向输液瓶中加入肾上腺素生理盐水（1：9）10ml/kg继续输液。 当家兔呼吸频率明显变化，用听诊器听到肺部出现湿性罗音，急性肺水肿发生时（有粉红色泡沫样液体溢出时），立即夹住气管停止输液，快速处死家兔。 2.3.5 打开家兔胸腔，支气管分叉处用线结扎，防止水肿液溢出。在结扎处上方切断气管，将肺清理出（把心脏等清除），置于滤纸上，切勿挤压，准确称肺重量，并计算肺系数。 【肺系数=肺重量（g）/体重（kg）】正常肺系数：4～5，肺系数超过此值，提示肺内有渗出物聚集，肺水肿形成。 观察指标 死亡动物记录死亡时间；观察家兔的呼吸频率变化；观察家兔肺部呼吸音的变化；
肺水肿实验报告
篇一：肺水肿实验报告 实验性肺血容量增高性肺水肿 一、实验目的 1.复制家兔实验性肺水肿 2.观察肺水肿的表现，并探讨其有关的发病机理。 二、实验药品与器材 生理盐水、乌拉坦、气管插管和与之配套的呼吸描记装置（二道生理记录仪）或生物信号采集系统、血气分析仪。静脉导管和静脉输液装置，颈部小手术器械，婴儿秤，天平，听诊器，兔固定台，1ml、2ml注射器各2具，丝线，纱布，滤纸，烧杯等。 三、实验步骤 本实验分为实验组和对照组。 1、将实验组家兔准确称重后，麻醉、仰卧固定于兔台上，剪去颈前部手术视野被毛，切开颈部前部皮肤，然后分离气管及一侧颈外静脉和二侧颈总动脉并穿线备用。切开气管，插入气管插管，用丝线结扎固定后将呼吸描记装置与之相连，以描记呼吸。结扎颈外静脉远心端，在近心端靠近结扎处剪一小口，插入静脉导管，结扎固定后将输液装置与之相接并试行滴注，通畅后暂停输液。 2、由颈总动脉插入动脉插管以描记血压，由颈外静脉插入静脉插管并连接输液装置缓慢滴人0．9％的生理盐水以保持管道通畅 3、描记一段正常呼吸，用听诊器听肺的呼吸音。 4、用lml肝素化注射器从耳朵动脉抽血0．5m1，立即将针头插入橡皮塞中以防空气进入。经血气分析仪测定血液的ph、pac02、pa02、k+、na+、cl-等，作为实验前对照。 5、然后输入37℃(摄氏度)生理盐水，输入量按100ml/㎏（体重）计算，输液速度180-200滴/min。 6、输药液过程中密切观察机体的变化： ①呼吸曲线有否变化，有否呼吸急促，困难。 ②肺部是否出现罗音。 7、对照组除不使用肾上腺素外，其余实验步骤和条件与实验组相同。8、上述各组实验完成以后，分别夹住气管，剪开胸前壁，在气管分叉处用线结扎，防止水肿液溢出。在结扎处上方剪断气管，然后分离心脏及其血管，将肺取出。用滤纸吸干肺表面的水份后，准确称取肺重量，以计算肺系数 肺系数= 肺重量（g） 体重(kg) 正常肺系数约为4~5 g。 此后观察肺大体改变，切开肺，注意切面的变化，是否有粉红色泡沫液体溢出（注意其量，性质，颜色）。还可在显微镜下对比观察肺水肿和正常肺的组织切片。 四、实验结果 1.家兔呼吸的变化曲线图像 2.本组肺的重量为8.2g，兔子重量为1.6kg，本组所测得的肺系数为5.13（正常肺系数约为4~5）。 3.呼吸变浅变慢，心率加快，皮肤黏膜发绀，听诊肺部出现轻度湿罗音。 4.家兔肺水肿前后血气指标 指标肺水肿前肺水肿后ph pco2 mmhg po2 mmhg
红芪有效部位对肺间质纤维化模型大鼠肺组织胶原面积、
红芪有效部位对肺间质纤维化模型大鼠肺组织胶原面积、 目的观察红芪对肺间质纤维化模型大鼠肺组织胶原面积、透明质酸（HA）及层黏连蛋白（LN）表达的影响，探讨其作用机制，并筛选红芪最佳有效部位。方法将144只SPF级Wistar大鼠随机分为空白组、模型组、强的松组，以及红芪多糖、黄酮、皂苷的高、中、低剂量组。采用气管滴注博莱霉素法建立肺纤维化模型，从造模后第2日起，各药物组分别给予相应剂量药物，每日1次，共28 d。Masson染色观察肺组织胶原纤维的变化，放射免疫法检测各组大鼠肺组织匀浆中HA、LN含量。结果与模型组比较，红芪黄酮各剂量组、红芪多糖低剂量组肺泡炎明显减轻。红芪黄酮低剂量组、红芪多糖中剂量组、红芪皂苷低剂量组肺组织胶原面积明显减小。与模型组比较，红芪多糖高剂量组、红芪黄酮各剂量组、红芪皂苷高剂量组HA含量明显下降。红芪多糖高剂量组，红芪黄酮中、低剂量组，红芪皂苷中、低剂量组LN含量明显下降。结论红芪多糖、黄酮、皂苷在适宜剂量下均能减轻肺泡炎症，抑制胶原纤维增生、沉积，降低肺组织中HA、LN含量，其中红芪黄酮效果较佳。 Abstract：Objective To observe the effects of Radix Hedysari on collagen area，hyaluronic acid （HA）and laminin （LN）of lung tissues in rat with pulmonary interstitial fibrosis；To investigate the mechanism and screen the best active ingredients in Radix Hedysari. Methods Totally 144 SPF Wistar rats were randomly divided into control group，model group，metacortandracin group，and Radix Hedysari polysaccharide，flavone and saponin groups were set as high-，medium-，and low-dose groups. Pulmonary interstitial fibrosis models were set up by dropping bleomycin into air tube of rats. All groups were taken corresponding medicine with appropriate dose daily on day 2 after models were established for 28 days. Collagen fibrils in lung tissue were observed by Masson dying and contents of HA and LN in lung tissue of rats in each group were detected by radioimmunoassay. Results Compared with the model group，pulmonary alveoli in Radix Hedysari flavone high-，medium-，and low-dose groups and Radix Hedysari polysaccharide low-dose group were relieved obviously；collagenous fiber area in Radix Hedysari flavone low-dose group，Radix Hedysari polysaccharide medium-dose group，and Radix Hedysari saponin low-dose group decreased obviously. Compared with the model group，the content of HA in Radix Hedysari polysaccharide high-dose group，Radix Hedysari flavone high-，medium-，and low-dose groups，and Radix Hedysari saponin high-dose group decreased obviously；the content of LN in Radix Hedysari polysaccharide high-dose group，Radix Hedysari flavonemedium- and low-dose groups，and Radix Hedysari saponin medium- and low-dose groups decreased obviously. Conclusion Polysaccharide，flavone and saponin of Radix Hedysari have the abilities to alleviate inflammation of pulmonary alveoli，inhibit proliferation and deposition of collagen fibrils，and reduce the contents of HA and LA in lung tissue. Among these active ingredients，flavone has the best effect. Key words：pulmonary fibrosis；active ingredients in Radix Hedysari；
2019间质性肺病诊治指南
间质性肺病诊治指南 疾病简介： 间质性肺疾病(ILD)是以弥漫性肺实质、肺泡炎症和间质纤维化为病理基本病变，以活动性呼吸困难、X线胸片弥漫性浸润阴影、限制性通气障碍、弥散(DLCO)功能降低和低氧血症为临床表现的不同种类疾病群构成的临床-病理实体的总称。 ILD病谱的异质性(heterogeneity)具有多层含义，即病因学的多源性;发生或发病学的异质性;病种或表现型的多样性以及临床症状的异因同效的相似性。从异质角度的分类看，ILD病理组织学可呈肺泡炎、血管炎、肉芽肿、组织细胞或类淋巴细胞增殖。特发性肺纤维化(IPF)为肺泡炎，其病理异质性变化表现为普通型间质性肺炎(UIP)、脱屑型间质性肺炎(DIP)/呼吸性细支气管炎间质性肺病(RBILD)和非特异性间质性肺炎/纤维化 (NSIP/fibrosis)。此分类是由Katzenstein等(1998年)在Liebow(1970年)UIP、DIP、双侧性间质性肺炎 (BIP)、淋巴细胞间质性肺炎(LIP)和巨细胞间质性肺炎(GIP)分类基础上经修正后提出的新分类。Liebow原分类(1970年)中的BIP现已公认即为闭塞性细支气管炎并机化性肺炎(BOOP)。LIP与免疫缺陷有关，GIP与硬金属有关，已不属于IPF分类范畴。Katzenstein在新分类中指出DIP命名不当而应采用RBILD。UIP属IPF 的原型，多见于老年人，激素疗效不佳，而RBILD和NSIP患者年龄较低，对糖皮质激素有疗效反应，预后良好。 发病机制发病阶段 ILD确切的发病机制尚未完全阐明。假设ILD的演变过程可区分为三个阶段，即启动阶段、进展阶段和结局阶段。 启动阶段 启动ILD的致病因子通常是毒素和(或)抗原，已知的抗原吸入如无机粉尘与石棉肺、尘肺相关，有机粉尘与外源性过敏性肺泡炎相关等，而特发性肺纤维化(IPF)和结节病等的特异性抗原尚不清楚。 进展阶段 一旦暴露和接触了最初的致病因子，则产生一个复杂的炎症过程——肺泡炎，这是ILD发病的中心环节，肺泡炎的性质决定着肺损伤的类型、修复程度及纤维化形成等。炎性及免疫细胞的活化，不仅释放氧自由基等毒性物质，直接损伤I型肺泡上皮细胞和毛细血管内皮细胞，还释放蛋白酶等直接损伤间质、胶原组织和基底膜等。同时释放各种炎性介质，已发现的包括单核因子(monokines)、白介素-1(IL-1)、白介素-8(IL-8)、白介素-2(IL-2)、血小板衍化生长因子(platelet-derived growth factor,PDGF)、纤维连接蛋白(fibronectin,FN)、胰岛素样生长因子-1(insulin-like growth factor，IGF-1)、
观察Zc3h12d在急性肺损伤大鼠肺中的表达情况
观察Zc3h12d在急性肺损伤大鼠肺中的表达情况 小肠缺血再灌注损伤( small intestinal ischemia-reperfusion injury，IIＲI) 是一种临床常见的病理现象，常危及生命。肠系膜上动脉( superior mesentericartery，SMA) 阻塞或失血性休克等许多损伤因素都能导致小肠缺血再灌注损伤的发生。小肠缺血再灌注可导致严重的局部创伤并引起多器官功能障碍，常可累及到肺组织，而且有研究显示继发的急性肺损伤( acute lung injury，ALI) 或/和急性呼吸窘迫综合征( acute respiratory distress syndrome，AＲDS) 是造成小肠缺血再灌注损伤病人死亡的主要原因。因此，为找到新的防治措施，降低小肠缺血再灌注损伤患者的死亡率，进行小肠缺血再灌注肺损伤分子机制的研究是非常关键和必要的。具有CCCH 锌指结构域的蛋白12D( zinc fingerCCCH type containing 12d，Zc3h12d) ，也称为TFL 或P34，是近期发现的包含单个锌指结构域蛋白家族中的一员，拥有相对分子质量( Mr) 58 000 和36 000 两种剪接体，在炎症因子或脂多糖( lipopolysaccharide，LPS) 刺激单核细胞时其表达量会发生变化，从而对细胞的生理和病理过程产生影响。然而Zc3h12d 在动物肺损伤中的表达尚未见报道。本实验通过建立大鼠II Ｒ肺损伤模型，初步观察Zc3h12d 在急性肺损伤大鼠肺中的表达情况并探讨其可能的作用及意义，为进一步了解IIＲ肺损伤发生、发展的分子机制奠定基础。 1 材料和方法1．1 材料纯化LPS、兔抗大鼠β-actin 抗体、辣根过氧化酶标记的兔抗山羊IgG、辣根过氧化物酶标记的山羊抗兔IgG 购自Sigma 公司; 山羊抗大鼠Zc3h12d 抗体购自Santa Cruz 公司; 大鼠TNF-α、IL-1β ELISA 试剂盒购自北京鼎国生物技术公司; 两步法免疫组化试剂盒购自武汉博士德生物工程有限公司; TＲIzol 试剂盒、逆转录试剂盒及实时定量PCＲ( realtime quantitative PCＲ，qＲT-PCＲ) 试剂盒购自大连TaKaＲa 公司; SDS 细胞裂解液、ECL 显色液购自西安晶彩生物技术公司; BCA 蛋白定量试剂盒购自上海碧云天生物技术有限公司。电热恒温干燥箱为北京科伟永兴仪器有限公司产品，荧光显微镜为徕卡公司产品，紫外分光光度计为Beckman 公司产品，实时定量PCＲ仪、Western blot 蛋白电泳仪为Bio-Ｒad公司产品。1．2 方法1．2．1 实验动物分组与模型制备健康雄性SPF 级SD 大鼠40 只，体质量200 ～230 g，由第四军医大学动物实验中心提供。大鼠随机分为对照组( contro1) 、缺血再灌注30 min 组( IＲ30 min) 、缺血再灌注60 min 组( IＲ60 min) 和缺血再灌注120 min 组( IＲ120 min) ，每组10 只，均适应性饲养7 d 后用于实验。实验前禁食12 h，自由饮水。10 g/L 戊巴比妥纳40 mg / kg腹腔注射麻醉，经大鼠口气管插管并连接呼吸机。麻醉后常规备皮消毒，行正中开腹手术，切口3 ～4 cm 入腹，探查大鼠腹腔内情况; 探查后将全部消化道及网膜向右掀起，找到腹主动脉分支肠系膜上动脉( superior mesenteric artery，SMA) 并钝性分离; 对照组大鼠缝合切口，3 个缺血再灌注组以无创伤动脉夹夹闭SMA 起始部，缺血60 min 后恢复再灌注，分别再灌注30 min、60 min 和120 min; 过量戊巴比妥纳腹腔注射，麻醉处死。1．2．2 肺组织湿质量/ 干质量( W / D) 比值测定取大鼠右肺上叶称取质量为湿重，而后放入70℃恒温干燥箱中烘烤12 h 称质量为干质量，以湿质量/干质量得出肺湿干质量( W/D) 比值。1．2．3 ELISA 检测血清及肺组织上清液中IL-1β 及TNF-α 水平心脏取血制备血清，取左肺叶一部分制备组织匀浆液，采用ELISA 检测血清及肺组织上清IL-1β 及TNF-α 的水平。心脏取血约3 mL，37℃水浴加热30 min 后，4℃ 2 000 g 离心20 min，收集上清即血清，取肺组织约300 mg，用0．01 mmol / LPBS( pH7．4) 1．5 mL 充分匀浆后，4℃ 12 000 g 离心20 min，收集上清，两者均采用双抗体夹心ELISA 进行检测。1．2．4 肺组织病理学检查取右肺中下叶置于100 mL / L 的中性甲醛中固定24 h、梯度酒精脱水、石蜡包埋，保存于4℃ 。使用时切片( 厚度 3 μm) 、HE 染色、中性树胶封片，光镜下观察肺组织病理形态学改变。
肺脾气虚动物模型造模方法
一、肺脾气虚动物模型的复制方法： 模型的建立方法：模型组采用<实用中医证侯动物模型学》之"烟熏法肺气虚证动物模型"复制法，并复合木瓜蛋白酶雾化吸人法复制SD大鼠"肺气虚证"模型。番泻叶冷服泻下法复制"脾气虚证"模型。 具体方法如下：将以上3组大鼠分别置于特制的lm3烟室中。用刨花、锯末、烟叶各30-50g，另加硫磺5-10g，点燃烟熏，每日2次，每次30分钟，注意适当通风，以防大鼠窒息。造模期6o天。并于造模开始后第3o、32、34、36天给以上各组大鼠木瓜蛋白酶雾化吸人，具体方法如下：在大鼠清醒状态下，每次将5只大鼠放入一40×40×40cm的与超声波雾化器相连的透明雾化箱中，通过雾化管向箱中喷入用0．9％Nacl液稀释为3g的木瓜蛋白酶，每次雾化量2ml。造模第20天开始，以浓度为lg／ml冰冷的番泻叶浸液，按lml／100g体重的剂量给大鼠灌胃，每日1次，持续3o天。正常对照组，分室常规喂养，不做任何处理。参考文献：李亚光，曹柏龙，贾东岩.慢性阻塞性肺疾病"肺脾气虚证"复合证型动物模型的研究.内蒙古中医药,2005年第5期：18-19. 二、肺气虚动物模型的复制方法： 1. 造模方法：气管内注入脂多糖(LPS)并烟熏方法复制肺气肿/COPD肺气虚证大鼠模型。(此法最常用) 具体方法：于模型复制的第1和14天用10％水合氯醛腹腔麻醉后，行气管内注入LPS200ug ／200ul，庆大霉素局部抗炎，缝合皮肤并消毒。术后第2～13、15～28天，置于1 m×1 m ×1 m的烟室中，香烟(焦油量为12 mg，烟气烟碱量为1．1 mg)烟熏，每日30 min；自由进食、饮水。对照组：将每只大鼠于第1、14天气管内注入0．9％氯化钠注射液200 u1；于第2～13、15-28天，置于无烟熏同样环境中饲养，余法同模型组。 参考文献： 王哲，王春田，任艳玲.肺气虚模型大鼠血ET、IL一1β及TNF-α含量的变化.中国老年学杂志,2008,12月第28卷:2414-2416. 刘向国，方志斌，蔡圣荣，肺气肿肺气虚证模型大鼠肺组织中基质金属蛋白酶表达的变化. 中国中医药科技,2006,13( 5):289-291. 刘茜，刘向国,武松. 肺气肿肺气虚证模型大鼠胸腺指数、脾脏指数变化的实验研究. 甘肃中医学院学报, 2006,23(1):20-22. 李泽庚,彭波,杰根.肺气虚证模型大鼠的建立. 北京中医,2005,24(1):53-55. 2．方法：用烟熏并复合木瓜蛋白酶雾化吸入法复制COPD"肺气虚证"大鼠模型。 具体方法：动物造模采用《实用中医证候动物模型学》之"烟熏法肺气虚证动物模型"复制法，并复合木瓜蛋白酶雾化吸人法，复制SD大鼠"肺气虚证"COPD模型。每5只大鼠置于自制透明塑料箱中，用刨花、锯末、烟叶各30～50g，另加硫磺5～10g，点燃烟熏，每日2次，每次30min，注意适当通风，以防大鼠窒息。并于造模开始后第30、32、34、36天将超声波雾化器与透明塑料箱相连，通过雾化管向箱中大鼠喷人浓度为0．3％的木瓜蛋白酶，每5只大鼠2mL。造模期60天。正常对照组置于正常无烟环境中饲养。 参考文献：张葵,刘良丽, 欧江琴.COPD肺气虚证模型大鼠血清TNF-αIL-8的表达和意义，
双肺间质纤维化最佳治疗方法
双肺间质纤维化最佳治疗方法 胡斌清 双肺间质纤维化，即肺脏间质组织由胶原蛋白、弹性素及蛋白醣类构成，当纤维母细胞受到化学性或物理性伤害时，会分泌胶原蛋白进行肺间质组织的修补，进而造成肺脏纤维化;即肺脏受到伤害后，人体修复产生的结果。那么，引发双肺间质纤维化的病因是什么呢? 引发双肺间质纤维化的病因： ⒈ 环境因素：有吸入无机粉尘如石棉、煤 ; 有机粉尘如霉草尘、棉尘;还有烟尘、二氧化硫等有毒气体的吸入。 ⒉ 病毒、细菌、真菌、寄生虫等引起的反复感染，常为此病急性发作的诱因，又是病情加重的条件。 ⒊ 药物影响及放射性损伤。 ⒋ 继发于红斑狼疮等自身免疫性疾病。 双肺间质纤维化最佳治疗方法，中医磁药叠加调节免疫疗法是您最好的选择! 1.磁药叠加调节免疫疗法中的中医药罐是用经过特殊方法炮制的地道天然药材以纳米提纯技术提取，将中医拔罐疗法与中药疗法相结合，即在局部或经络腧穴上，同特质药罐加以高压渗透，促使局部毛细血管张，使药物有效成分直达病灶，迅速带走炎性渗出物，增强肺泡及气管粘膜活性，自动修复病变组织，促进肺部微循环，解除呼吸道平滑肌痉挛，抑制腺体分泌，减少痰液生成，促进肺部病变组织细胞的回复和再生能力。 2.磁药叠加调节免疫疗法中的穴位免疫激活法包括穴位磁药贴敷、刺络放血、穴位点划、磁药使药物和生物磁有机结合，磁借药力，药借磁劲使药效得以充分发挥，增强机体免疫力。肺部有热患者，在经过前期步骤治疗后仍需配之以刺络放血疗法。根据经络学说和针刺原理，用针具刺破特定部位或穴位放血，以疏通经脉，祛瘀生新，调理气血，给疾病一个出口。具有解表泄热、疏通经络、解毒消炎，调整肺部乃至全身脏腑气血功能的作用。 以上就是双肺间质纤维化最佳治疗方法的全部内容，相信您对此也有了一定的了解。既然我们知道它的病因，一定要多加留意。如果患有双肺间纤维化的话，请一定要及时到医院治疗，这样就不会耽误病情的最佳治疗时间。
实验急性肺水肿
急性肺水肿(acute pulmonary edema) 实验目的： （1）复制家兔实验性水肿 （2）了解急性肺水肿表现及其发生机理。 （3）探讨急性肺水肿的治疗方案。 实验原理： 肺水肿是由于液体从毛细血管渗透至肺间质或肺泡所造成的。临床上常见的肺水肿是心源性肺水肿和肾性肺水肿。病理上可分间质性和肺泡性两类，可同时并存或以某一类为主。间质性肺水肿大都为慢性，肺泡性可为急性或慢性肺水肿。本实验主要是通过静脉大量滴注生理盐水并注射肾上腺素导致急性心源性肺泡性肺水肿。 中毒剂量的肾上腺素使心动速度加快，左心室不能把注入的血液充分排出，左心室舒张期末压力递增，可引起左心房的压力增高，从而使肺静脉发生淤血，肺毛细血管液体静压随而升高，一旦超过血浆胶体渗透压，使组织液形成增多，不能为淋巴充分回流，即可形成肺水肿。实验动物：家兔，雌雄不限。 实验器材：动脉插管，气管插管，静脉导管及静脉输液装置，注射器，兔急性手术器械，烧杯，纱布，线，胶布，兔手术台，血气分析仪，四道生理记录仪，婴儿秤。 实验药物：生理盐水，乌拉坦（20%），肾上腺素（0.1%），肝素（3g/L），盐酸(10g/L)。 速尿（0.1%），盐酸消旋山莨菪碱注射液（1%） 实验步骤： （1）每实习分4个小组，各取家兔1只，分为[1]实验组，[2] 速尿治疗组，[3] 山莨菪碱治疗组，[4]对照组。 （2）称重，用20%乌拉坦5ml/kg耳缘静脉注射麻醉，固定于兔台上。 （3）进行颈部手术，分离气管和一侧颈总动脉，一侧颈外静脉。作气管插管。 （4）肝素化后，作动脉插管和静脉插管，静脉管连于输液装置。进行腹股沟手术进行股动脉插管。 （5）各组动物分别描记正常呼吸和血压曲线，股动脉取血，进行血气分析。 （6）输入生理盐水（输入总量按100ml/kg,输速150~200滴/分），待滴注接近完毕时立 即向输液瓶中加入肾上腺素(0.5ml/kg)继续输液（对照组不加肾上腺素）。 （7）输液完毕，立即股动脉取血，进行血气分析。 （8）取血完毕治疗组立即进行抢救。速尿治疗组耳缘静脉注射速尿（1ml/kg）,观察疗 效；山莨菪碱治疗组耳缘静脉注射山莨菪碱（1.5ml/kg）,观察疗效。 （9）密切观察呼吸改变和气管插管内是否有分红色泡沫液体流出，死亡动物记录死亡 时间，存活动物造病后30min则夹住气管，放血处死。所有动物均打开胸腔，用 线在气管分叉处结扎以防止肺水肿液渗出，在结扎处以上切断气管，把肺取出， 用滤纸吸去肺表面的水份后称重，根据"肺系数=肺重量(g)/体重(kg)"的公式计算 系数，然后肉眼观察肺大体改变，并切开肺，观察切面的改变。 理论结果：
大鼠肺成纤维细胞原代提取及培养实验具体步骤及方法
大鼠肺成纤维细胞原代提取及培养实验具体步骤及方法将大鼠的肺成纤维细胞从机体中取出，经胰酶、螯合剂（常用EDTA）处理，分散成单细胞，置合适的生长培养基培养基中培养，使细胞得以生存、生长和繁殖。 一、实验材料准备 1. 动物 出生后1-4天的Wistar乳鼠1只。 2. 试剂 PBS、培养液(Hyclone的低糖DMEM，含Hyclone的10%新生牛血清、100 U/ml 青链霉素、1%明胶PBS、0.25%胰酶(含EDTA，GIBCO)，碘酒和酒精绵球。 3. 器械 眼科直剪2把、眼科弯剪2把、眼科直镊2把、眼科弯镊2把、玻璃平皿3套，25 cm2塑料培养瓶(Costar)。 二、具体操作 1. 明胶包被培养瓶过夜(准备2-3个)，取出明胶，用2 ml培养液冲洗培养瓶一遍，置于超净台中。
2. 解剖取肺：将乳鼠在酒精中浸泡后取出，转移至超净台上的玻璃培养皿中，用碘酒消毒胸部皮肤，再用酒精棉球脱碘。左手捏紧乳鼠颈背部皮肤以充分展露胸部，右手以眼科直剪剪开皮肤，充分撕拉开，再用酒精棉球消毒，继而以另一把眼科弯剪沿胸骨柄左下缘向上剪开肋骨，然后在切口中间横剪胸骨。用眼科镊取出肺，置于盛有PBS(含有200 U/ml青链霉素)的玻璃平皿中，冲洗去血。 3. 用眼科剪将肺分成几个肺叶，用镊子去除周边的血凝块及纤维组织，用眼科剪剪去肺门处的支气管和血管，再用含有双抗的PBS冲洗1遍。 4. 用眼科弯剪将肺组织剪碎成1 mm3大小，加入含有双抗的PBS，将肺组织块吹打开，静置15 min后，更换新的PBS。 5. 用200 ul微量加样器(最好是超净台中专用的，临用时用酒精绵球好好擦拭枪柄)取200 ul加样枪头一个，剪去尖，在酒精灯上用火焰烧弯。用枪头吸取组织块接种于培养瓶中，每瓶20-25块左右，每小块间距0.5 cm左右。组织块放置好后，轻轻将培养瓶翻转，让瓶底朝上，向瓶内加入2 ml左右的培养液，盖好瓶盖，将培养瓶倾斜放置在温箱中，干贴壁2-4 h后，将培养瓶慢慢翻转平放，继续静置培养。注意上述操作过程中动作要轻柔，让液体慢慢覆盖组织小块，严禁动作过快致使液体产生的冲力使粘贴的组织块漂起而造成原代培养失败。48 h后换液，更换2-3 ml即可。 6. 贴块贴壁72 h后，镜下可见大量的成纤维细胞爬出，将组织块去除，继续培养2-3天，待细胞长满，即可传代。注：因为血清浓度低，内皮细胞可以爬出少量，但是很快就
间质性肺炎与肺纤维化
间质性肺炎与肺纤维化的区别 来源：北京总院肺病中医诊疗中心：https://www.360docs.net/doc/0c9027890.html,/ 间质性肺炎与肺纤维化的区别。肺纤维化的科学叫法为肺间质纤维化，因为 叫法与间质性肺炎很相像，因此常常被患者所误解，将两者混淆。但是这是两种不同疾病，特征以及治疗方式都有所不同，因此对于患者来说，知道两者之间的区分，也是很重要的。 间质性肺炎与肺纤维化的区别 而其外部症状虽然有类似的地方，比如咳嗽、咳痰、呼吸困难等，但是从其内部的病理分析变化就大有区别了。 间质性肺炎： 隐藏性强的慢性疾病，最初反应在肺和肺泡壁内表现为炎症反应，导致肺泡炎，最后炎症将蔓延到邻近的间质部分和血管，最终产生间质性纤维化，导致瘢痕产生和肺组织破坏，使通气功能降低，炎症也可累及气管、毛细支气管，往往伴机化性肺炎，也是间质性肺炎的一种表现。而其不但有如此症状反应，还与其他同类疾病有许多类似症状，因此极容易混淆。 肺间质纤维化： 复杂的致病因素激发各种细胞活素、组胺、蛋白酶、氧化剂等形成免疫复合物与肺泡巨嗜细胞、中性白细胞、淋巴细胞和成纤维母细胞共同聚集于肺间质，形成肺间质炎症，致使肺间质成纤维细胞和过量的胶原蛋白沉积，产生疤痕和肺组织的破坏，终成肺间质纤维化。 由此可见，肺间质纤维化是间质性肺炎的其中一种阶段或者叫结果，属于间质性肺炎的范畴。由于间质性肺炎的持续影响，致使肺间质成纤维细胞和过量的胶原蛋白沉积，产生疤痕和肺组织的破坏，最终形成肺间质纤维化。也就是说间质性肺炎不过是形成肺纤维化的一个基础，并不能和肺间质纤维化相同并论。 当间质性肺炎患者被诊断为肺间质纤维化时，通常会怀疑其可逆性，而往往放弃治疗努力。其实早期大部分是肺泡炎和部分纤维化并存，其肺泡炎是完全可以逆转的。当肺部出现损害之后尽早进行规范的治疗，争取可逆部份和时间，控制病情发展，改善症状，完全可以提高生存质量，因此患者不要放弃希望，到正
(完整版)2019间质性肺病诊治指南
间质性肺病诊治指南 疾病简介: 间质性肺疾病(ILD)是以弥漫性肺实质、肺泡炎症和间质纤维化为病理基本病变，以活动性呼吸困难、X线胸片弥漫性浸润阴影、限制性通气障碍、弥散(DLCO) 功能降低和低氧血症为临床表现的不同种类疾病群构成的临床-病理实体的总 称。 ILD病谱的异质性(heterogeneity)具有多层含义，即病因学的多源性；发生或发病学的异质性；病种或表现型的多样性以及临床症状的异因同效的相似 性。从异质角度的分类看，ILD病理组织学可呈肺泡炎、血管炎、肉芽肿、组织细胞或类淋巴细胞增殖。特发性肺纤维化(IPF)为肺泡炎，其病理异质性变化表现为普通型间质性肺炎(UIP)、脱屑型间质性肺炎(DIP)/呼吸性细支气管炎间质性肺病(RBILD)和非特异性间质性肺炎/纤维化(NSIP/fibrosis) 。此分类是由Katzenstein 等(1998年)在Liebow(1970年)UIP、DIP、双侧性间质性肺炎(BIP)、淋巴细胞间质性肺炎(LIP)和巨细胞间质性肺炎(GIP)分类基础上经修正后提出的新分类。Liebow原分类(1970年)中的BIP现已公认即为闭塞性细支气管炎并机化性肺炎(BOOP。LIP与免疫缺陷有关，GIP与硬金属有关，已不属于IPF分类范畴。Katzenstein在新分类中指出DIP 命名不当而应采用RBILBUIP属IPF 的原型，多见于老年人，激素疗效不佳，而R BILD和NSIP患者年龄较低，对糖 皮质激素有疗效反应，预后良好。 发病机制发病阶段 ILD确切的发病机制尚未完全阐明。假设ILD的演变过程可区分为三个阶段，即启动阶段、进展阶段和结局阶段。 启动阶段 启动ILD的致病因子通常是毒素和(或)抗原，已知的抗原吸入如无机粉尘与石棉肺、尘肺相关，有机粉尘与外源性过敏性肺泡炎相关等，而特发性肺纤维化(IPF)和结节病等的特异性抗原尚不清楚。 进展阶段 一旦暴露和接触了最初的致病因子，则产生一个复杂的炎症过程一一肺泡炎，这是ILD发病的中心环节，肺泡炎的性质决定着肺损伤的类型、修复程度及 纤维化形成等。炎性及免疫细胞的活化，不仅释放氧自由基等毒性物质，直接损伤I型肺泡上皮细胞和毛细血管内皮细胞，还释放蛋白酶等直接损伤间质、胶原组织和基底膜等。同时释放各种炎性介质，已发现的包括单核因子(monokines)、白介素-1(IL-1)、白介素-8(IL-8)、白介素-2(IL-2)、血小板衍化生长因子(platelet-derived growth factor,PDGF)、纤维连接蛋白(fibronectin,FN) 、胰岛素样生长因子-1(insulin-like growth factor ,IGF-1)、
大鼠肺微血管内皮细胞培养及鉴定
大鼠肺微血管内皮细胞培养及鉴定* 谢 崧 杨晓静 钱桂生 王关嵩 (第三军医大学新桥医院, 重庆 630037) 摘要 取大鼠周边肺组织进行肺微血管内皮细胞培养。将肺组织切成小块,用含有20%新生牛血清、肝素90L g/ ml、L-谷胺酰胺4mmol、青霉素100U/ml和链霉素100L g/m l的R PM I-1640培养基培养。血细胞立即从肺组织周围游出。继而是肺微血管内皮细胞。成纤维细胞及其他细胞72h才游出。培养60h后取出肺组织块,培养瓶中只有微血管内皮细胞和血细胞。后者可通过传代除去。获得的肺微血管内皮细胞具有规律的鹅卵石样形态和对异植物血凝素结合试验及八因子相关抗原免疫荧光染色均阳性。 关键词 大鼠 肺循环 微循环 内皮细胞 细胞培养 肺微血管在生理和病理情况下都起着重要作用,如与成人呼吸窘迫综合征、肺动脉高压[1]等的发生有关。目前仅限于肺动脉内皮细胞的研究,而肺微血管和大血管之间据文献报道在表型和功能有着显著的不同[2]。故有培养和研究肺微血管内皮细胞的必要。 虽然肺有大量的血管内皮细胞,但同时存在40多种类型的细胞尤其成纤维细胞和平滑肌等细胞的迅速生长,使内皮细胞生长受抑制。分离和培养纯的肺微血管内皮细胞较为困难。国内未见肺微血管内皮细胞培养的报道。本文采用简单的方法成功地分离和培养出大鼠肺微血管内皮细胞。 1 材料和方法 1.1 主要试剂 RPM I-1640培养基为美国Gibco 公司产品。新生牛血清由华西医科大学公共卫生学院生产。兔抗人八因子相关抗原抗血清为DAKO公司产品,华美分装。荧光标记异植物血凝素为Sigm a 公司产品。荧光标记羊抗兔1gG由卫生部上海生物制品研究所生产。抗菌素为青霉素钠盐和硫酸链霉素。L-谷氨酰胺为第二军医大学分装。胰蛋白酶和肝素钠均为上海生化试剂商店提供。大鼠肺动脉内皮细胞按本研究所建立的方法[3]培养。 1.2 取材 选重200-300g健康雄性Wistar大鼠,10%乌拉坦(10L l/mg)腹腔麻醉。颈动脉放血后,将整个大鼠泡于75%酒精中2-3s,以后用组织剪逐层剪开胸腔。切下心肺放入盛有含青霉素200U/m、链霉素200L g/ml和Hanks液的三角烧瓶内备用。 1.3 大鼠肺微血管内皮细胞培养 大鼠肺微血管内皮细胞原代培养:将盛有心肺组织的无菌三角烧瓶置于超净台,抗生素Hanks液冲洗心肺组织的血迹。眼科剪剪去肺组织表面的脏层胸膜,剪取胸膜下肺组织(厚度不应大于1.5mm)。并将肺组织用锋利的手术刀切成1.5×1×1mm3大小的组织块。贴入无菌的25cm2培养瓶(1%明胶预置过夜,4℃,用前2h移入CO2培养箱,培养液冲洗)中进行培养。每瓶贴10块,置培养箱固化2h后,加入含20%新生牛血清、肝素90U/m l、L-谷氨酰胺4mm ol、青霉素100U/ml和链霉素100L g/ml的RPM I-1640培养基3m l,放入培养箱中培养。60h后将肺组织块取出。继续培养7-10d,细胞汇合成单层细胞。肺组织贴瓶后3d换液,以后每两天换液一次,每次均换1/2。 大鼠肺微血管内皮细胞传代培养: 将长成单层的原代细胞用0.08%胰蛋白酶进行消化,每瓶加入1ml,置常温5m in左右。镜下观察,当细胞间连接疏松时立即倒出消化液,加入培养基3ml,用吸管吹打使细胞脱落并充分混匀,吸出0.1m l计数,得出细胞总数后,将含细胞的培养液稀释成(2.5-3.0)×105个细胞/ml的接种浓度。每25cm2培养瓶接种3ml细胞悬液,与肺微血管内皮细胞相混的血细胞就通过传代除去了。 1.4 肺微血管内皮细胞的鉴定 制片: 如同细胞传代将细胞消化成细胞悬液。再以800rpm离心5min除去含血清的培养液。向沉降的细胞中加少许Hanks液,用吸管轻轻吹打漂洗后,取少许细胞悬液薄涂于玻片上。用吸水纸吸干后甲醇固定5-10min取出备用。 189 中国应用生理学杂志1997;13(2) X1996-9-20收稿 1997-2-6修回
中药芪红合剂对肺间质纤维化模型大鼠肺组织中TGF-β1表达的影响
中药芪红合剂对肺间质纤维化模型大鼠肺组织中TGF-β1表达的影响 （作者:___________单位: ___________邮编: ___________） 【摘要】目的：探讨中药芪红合剂在肺间质纤维化过程中的作用及其机理。方法：采用气管内注射博来霉素A5建立肺间质纤维化的大鼠模型。将40只Wistar大鼠随机分为4组：假手术组、模型组、泼尼松治疗组、芪红合剂治疗组，每组10只。给各组大鼠灌胃相应的生理盐水或药物，术后15 d处死各组大鼠，取两肺组织，一部分行石蜡包埋切片，HE染色，观察病理改变，另一部分采用ELISA法定量测定TGF-β1。结果：与假手术组比较，模型组大鼠肺组织有明显的纤维化改变，TGF-β1的含量显著升高（P0.01）；与模型组比较，泼尼松治疗组和芪红合剂治疗组大鼠肺组织中TGF-β1含量显著下降（P0.01）。结论：中药芪红合剂可能通过降低肺组织中TGF-β1的含量而减轻肺间质损伤及纤维化改变。 【关键词】芪红合剂TGF-β1 间质纤维化 Abstract Objective：To study the effect of Qihong decoction on rats with pulmonary fibrosis and its mechanism. Methods：Model
rats were induced by injecting bleomycin A5 into trachea. 40 Wistar rats were randomized into sham operation control group（given saline），model group（given saline），prednisone treatment group，Qihong decoction treatment group（n=10）. The lung tissues were collected after 15 days treatment. The level of TGF-β1 was measured by ELISA，and the level of fibrosis was observed by HE stain. Results：Compared with sham operation control group，the change of pulmonary fibrosis and the level of TGF-β1 in model group rats were obviously increase（P＜0.01）. Compared with model group，the levels of TGF-β1 in two treatment groups were obviously decreased（P＜0.01）. Conclusion：Qihong decoction can alleviate lung tissue damage and pulmonary fibrosis through down-regulating TGF-β1 expression. Key words Qihong decoction; Transforming Growth Factor-β1; pulmonary fibrosis 特发性肺纤维化（idiopathic pulmonary fibrosis，IPF）是由弥漫性间质性肺疾病引起、以弥漫性肺泡单位慢性炎症和间质纤维化为主要病理特征的一大疾病［1］。该病发病率约为5/10万人，近年来有上升趋势。统计资料显示其5年生存率低于50％，目前临床治疗常用的药物是糖皮质激素、免疫抑制剂和一些抗纤维化制剂，这些治疗尚不能使患者的生存率有所改善。 中药制剂芪红合剂是我们在临床上治疗各种肺脏疾病的基础方剂，