禽流感疫苗研究进展
禽流感疫苗研究进展
摘要对禽流感的预防，必须在采取严格的生物安全措施的同时，加强必要的免疫措施。对不同类型禽流感疫苗的研究现状、优越性与局限性进行了综述。
关键词禽流感；疫苗；研究进展
最近，亚洲一些国家不断暴发的禽流感（Avian influenza，AI）事件引起了人们对全球一系列动物和公众健康问题的极大关注，最近的联合国粮农组织（FAO）罗马提交会议指出[1]，当面临AI大流行威胁时，采取大规模扑杀感染动物的措施会丧失很大一部分食物来源，使地方养禽业遭受严重打击，显得不太合理。对禽流感的预防，必须努力集中在采取严格的生物安全措施的同时，加强必要的免疫措施。免疫能减轻临床症状，降低死亡率，减少病毒的扩散和提高群体对感染的抵抗力，从而控制禽流感病毒（Avian influenza vinus，AIV）的广泛传播[2]。然而，如果疫苗的使用和管理不当，不仅达不到预期的效果，还会污染环境，威胁公众健康。因此，研制安全、高效的AIV疫苗是专家们为之不懈努力的目标。
理想的疫苗应具有高的生物保护容量，同时消除环境污
染和易感动物感染的可能性。总的来说，对于AIV疫苗的发展，以下几种设计思路均已被采用或尝试。
1全病毒灭活疫苗
由于AIV基因组的抗原漂移，AIV疫苗仅能提供70%的保护力。针对这种特点，AIV灭活疫苗通常制备成针对几种不同亚型AIV的多价疫苗，己证明1种灭活疫苗可以至少包括4种不同的AIV亚型。同只含单一亚型的疫苗比，多价疫苗并没有减弱对同一种HA亚型AIV攻击的有效保护[3]，而且各亚型抗原之间不产生免疫干扰。AIV灭活疫苗能使免疫鸡群在感染AIV野毒时有效地减轻损失，并显著减少可能存在于鸡群和环境中的病毒数量，缩短其存活时间，是AI
防治的主动措施、关键环节和最后防线。而且灭活疫苗具有制备工艺简单、免疫效果确实、免疫持续期长等特点，许多国家已将其作为商品化的AIV疫苗应用于家禽中。我国己研制成功不同亚型的AIV疫苗，且证明具有良好的免疫保护作用。但灭活苗本身存在一些缺陷[4]，主要是：影响疫情监测；存在散播病毒的风险；免疫剂量较大，制备成本高。其最突出的缺点是不能诱导产生有效的粘膜免疫抗体和细胞免疫
应答，因而无法有效地抑制呼吸道中AIV的复制。近年来，人们试图从技术上突破此缺点，筛选并利用同亚型弱毒疫苗
株代替高致病性毒株制备灭活苗，是灭活苗研制中的努力方向之一。例如用2种不同的病毒同时感染鸡胚可导致片段间的重排而有可能产生所期望的疫苗株，这些疫苗种子株获得了抗原相关毒株相应的HA和NA基因，和A/Puerto Rico/8/34（H1N1）中的6个基因片段[5]。这些PR/8/34的片段赋予病毒弱毒所以能在鸡胚中迅速生长，适合作为灭活疫苗的生产。
2基因工程亚单位疫苗
亚单位疫苗是提取AIV具有免疫原性的抗原蛋白，加入佐剂而制成。这种疫苗安全性好，能刺激机体产生足够的免疫力，只是抗体持续时间短，且成本高。谢快乐等曾用台湾AIV分离株（H8N4）的HA和NP制备了复合亚单位疫苗，同时制备了灭活的油佐剂疫苗。当以疫苗诱生的HI抗体作为评价标准时，发现2种疫苗的差别不明显，只是在加强免疫后，亚单位疫苗的HI抗体水平的升高比油佐剂疫苗明显[6]。随着基因工程技术的不断发展，将免疫原性基因导入表达载体，经诱导可获得大量表达的免疫原性蛋白，提取所表达的特定多肽，加入佐剂即制成基因工程亚单位疫苗，这样可大大降低疫苗的成本。Kodihalli等研制了火鸡H5N2病毒NP/HA和ISCOM的复合亚单位疫苗，用其免疫火鸡，21d
可产生较高的抗体滴度，并且T、B淋巴细胞被激活，可以对同源和异源（H6N1）亚型病毒的攻击产生保护作用，在攻毒后3d，可清除火鸡肺部和泄殖腔的病毒[7]。另外，将AIV 的基因插入杆状病毒表达载体，利用重组病毒在昆虫细胞中表达的AIV蛋白来制备AIV的亚单位疫苗也已研究成功。Crawford等利用杆状病毒表达系统生产H5、H7亚型AIV的重组HA佐剂疫苗，免疫3周龄白色Rock鸡，用同亚型HPAIV 攻击，结果重组HA佐剂疫苗组所有的鸡只均不发病，而未免疫组鸡只全部死亡，且经H5亚型病毒的重组亚单位疫苗免疫过的鸡攻毒后都不排毒[8]。
基因工程亚单位疫苗产生的抗体不针对病毒的内部蛋白，因此不会干扰AIV的血清学调查，而且其不存在毒力返强、散毒和环境污染的问题，是安全性很好的疫苗。重组杆状病毒表达的HA亚单位疫苗在禽类表现出良好的免疫原性，免疫后只诱导HA特异性抗体应答，不影响疫情监测，显示出了一定的应用前景。
3重组活载体疫苗
鸡痘病毒作为禽用疫苗病毒载体，具有外源基因容量大、可对表达的外源蛋白进行正确加工修饰、严格的宿主特异性和生物安全性等优点[9-11]，利用对禽类致病性很弱的
痘苗病毒或禽痘病毒作载体，构建含有免疫原性基因的重组病毒，用此重组病毒作疫苗，可在动物体内复制，并不断地表达出免疫原性蛋白，从而诱导禽类产生针对目标病原的免疫保护力。Webster（1995）和Swaynes（1997）先后构建了含A/Ty/Ire/1378/83（H5N8）HA基因的禽痘病毒重组疫苗，用其免疫仔鸡，用在墨西哥分离的致死性强毒H5N2攻击，试验结果证明该苗可对H5N2提供0%～100%的保护[12]；冀德君、刘红旗等应用表达H9亚型AIV HA的重组鸡痘病毒疫苗及其传代后第20、30代疫苗免疫5日龄无特定病原（SPF）鸡群，攻毒后第5天各免疫组排毒的鸡数与对照组相比显著减少[13]；程坚等用表达H9亚型AIV HA基因的重组鸡痘病毒在7日龄SPF鸡及含抗FPV母源抗体的商品鸡上进行的免疫效力试验亦表明，重组鸡痘疫苗能显著抑制静脉攻毒后免疫鸡从泄殖腔的排毒，效果与AIV全病毒灭活苗相当[14]。贾立军用构建的表达H5N1 HA的重组鸡痘疫苗免疫SPF鸡和无母源抗体的商品鸡，免疫鸡可抵抗H5N1亚型HPAIV的致死性攻击，诱导95%～100%的免疫保护[15]。陈平用构建的高效表达H9亚型AIV HA基因的重组鸡痘病毒颈部皮下免疫1日龄SPF鸡，攻毒后试验结果表明，
rFPV-Ps-HA明显抑制了病毒的排出[16]。以上试验均表明，携带AIV HA基因的重组鸡痘疫苗具有良好的效果。
同灭活苗相比，携带HA基因的重组活载体疫苗不仅可
提供相当的保护效果，而且具有一些独特的优点：安全性高；可通过刺种和皮下注射接种途径进行免疫，使用方便；免疫应激小；用量少，不需添加佐剂，成本大大降低；而且抗体持续时间长，效果好，用其免疫家禽，既可刺激宿主产生体液免疫，又能刺激宿主产生细胞免疫[17]。基因重组的鸡痘疫苗的最大优点是不干扰血清学调查，因此该重组疫苗适用于监测野毒感染[4]。
4DNA疫苗
Ulmer等[18]报道了小鼠肌肉注射含有编码甲型流感病毒核蛋白（NP）的重组质粒后，不仅产生抗NP的特异性IgG 抗体，而且诱导CTL反应，可有效地保护小鼠抗不同亚型分离时间相隔34a的流感病毒的攻击。Pertmer发现，流感病毒NP基因的核酸疫苗激活机体的免疫反应不受母源抗体的干扰[19]。同样，在有母源抗体存在的情况下，HA和NP基因均能有效激活细胞免疫应答反应。我国研制的H7亚型HA 基因DNA疫苗，在极小的使用剂量下即可成功诱导免疫保护反应，并有效阻断同源MPAIV在机体内的感染和排毒[20]。大量的动物试验都说明在合适的条件下，DNA接种后既能产生细胞免疫又能产生体液免疫[21-24]，于是，DNA疫苗技术应运而生，并逐渐显示出它作为第3代疫苗的优越性。
与传统疫苗相比DNA疫苗有许多优点：能长时间表达抗原；具有与天然抗原相同的构象和免疫原性，可同时激发机体产生细胞免疫、体液免疫和粘膜免疫应答，而且不受母源抗体的干扰；结构简单，制备方便；稳定性好，易于保存和运输；能够克服由于免疫系统发育不完善而导致的免疫力低下的
缺陷；可用于制备多价疫苗或联苗。
本文为全文原貌未安装PDF浏览器用户请先下载安装原版全文目前，对于DNA疫苗存在着安全方面的考虑：质粒DNA低水平整合到宿主基因组的潜在危险性；DNA疫苗载体携带的抗生素基因可能导致的生物学后果；产生针对双链DNA的抗体；引起免疫耐受。针对上述四种潜在的危害性，美国FDA、WHO及EU都对DNA疫苗的研制制定了一些指导性规定，为DNA疫苗的研究、生产及应用指明了方向。由于DNA疫苗代价相对较高，且不适于集约化养殖的群体免疫，因此可考虑改进DNA疫苗生产工艺和优化疫苗接种方式来开发出价格低廉、实用化的DNA 疫苗。其中应用减毒胞内菌运送DNA疫苗的途径取得了一些令人振奋的结果。已经有了一些比较好的减毒沙门氏菌菌株作为禽类DNA疫苗的运送载体的研究报道，张小荣等以减毒沙门氏菌运送H5亚型AIV DNA疫苗的生物学特性研究表明，该疫苗具有良好的安全性和免疫原性，能同时激发细
胞免疫、体液免疫和粘膜免疫应答[25]，这类疫苗仍在探讨中，需对这类疫苗进行进一步优化，才能最终筛选出真正适合临床应用的疫苗。
5RNA复制子疫苗
随着DNA疫苗的深入研究，人们担心DNA会整合到宿主细胞基因组上，造成致癌隐患。此外，DNA通过核膜较为困难，限制了其作用的发挥，在一定程度上阻碍了DNA疫苗的推广应用。于是，人们又设想用RNA替代DNA作基因疫苗，近年来开发的RNA复制子载体应运而生。该RNA复制子可以不依赖于宿主细胞而自主复制，包含病毒基因组5’和3’末端的顺式作用元件、全部非结构蛋白基因编码区（包括复制酶编码基因），而结构蛋白基因被缺失，由外源基因取代，这种重组病毒粒子可以很容易地携带达3kb的外源RNA，并且感染的细胞谱较广，包括非分裂细胞[26]。Vignuzzi 等[27]将A型流感病毒A/PR/8/34（ma）株的NP基因插入塞姆利基森林病毒（SFV）载体上构建RNA疫苗，7～8周龄的C57BL/6老鼠肌肉注射10μg SFV RNA，3～4周后再加强1次，共免疫3次。第3次免疫后1～3周，由鼻腔攻入100pfu的A/PR/8/34（ma）病毒。试验结果不仅有较高的中和抗体出现，而且诱导了有效的CTL反应，试验小鼠能有效
清除肺部的病毒。大量的研究证实DNA/RNA复制子比常规DNA疫苗的免疫原性好[28]，可以产生更强的抗体应答和更多的CTL前体，而且使用比常规DNA疫苗免疫剂量低100倍的复制子疫苗就可以产生与常规DNA疫苗相当的免疫效力。可见，RNA复制子载体的特点包括：复制效率高，用量远远低于常规DNA疫苗；可同时诱导抗体应答和CTL应答；安全性好，RNA复制子在胞浆内复制，避免了核的参与，不存在整合进宿主基因组的可能性；RNA复制子导致转染细胞的溶解，避免了有自主复制能力的病毒的产生；复制子系统能自主复制，可针对多种病原进行连续免疫，而不受己有载体病毒抗体的干扰。
6冷适应流感弱毒疫苗
用野毒株感染鸡胚在较低温度下（25～30℃）培养，连续传代后可较快的使病毒的致病力减弱，从而获得冷适应流感弱毒病毒供体。通过在表达靶HA和NA的野生型病毒和病毒供体如A/Ann Arbor/6/60（H2N2）之间的基因重排可以获得减毒的冷适应性病毒株，病毒的这些特征与多基因的突变有关。滴鼻免疫减毒的冷适应性的流感活疫苗，能引起全身和局部粘膜的免疫反应，显示出保护效力[29]。这些活的减毒病毒显示出高水平的表型和基因稳定性，不会转变成接
近的相关血清学阴性毒株。已经获得H5N1 和H9N2/Ann供体的重组冷适应性病毒。这些病毒不会对哺乳动物和鸡致病[30]。虽然现在流行的肌注禽流感疫苗能够有效地诱导相关病毒特异的血清血凝抑制IgG抗体，他们却不能刺激鼻腔产生分泌型IgA抗体[31]。因为分泌型IgA能与异源型的流感毒株交叉反应，活的减毒的禽流感疫苗能够广泛地提供针对抗原变异株的交叉保护，一旦新的流感毒株流行时它将非常有用[32，33]。美国对冷适应流感弱毒疫苗的研制己有30多年的历史，但由于担心其安全性，至今仍未被批准使用。俄罗斯是目前全球唯一人流感冷适应流感弱毒疫苗获准使用的国家，该疫苗己在数亿儿童中使用，证实能提供良好的保护，并无不良反应。到目前为止，无论俄罗斯还是全球，没有流感病毒扩散的迹象[34，35]，但活的AIV疫苗病毒仍有与人类共感染毒株发生基因重组，或毒力返强，造成新的流感毒株出现的可能，对其大面积的推广使用，还需在生物安全性方面加以时间上的验证。
7复制缺陷型流感病毒疫苗
用反向遗传系统可获得减毒的AIV，在流感流行时对疫苗的供给可能会起很关键的作用。病毒的HA和NA基因被克隆并插入到质粒中，通过去除HA的多个碱性氨基酸裂解
位点序列使其减毒，插入了HA和NA的质粒与携带
A/PR8/34病毒内部基因的质粒共转染细胞系产生相应的非致病性疫苗株。采用该方法产生的疫苗不仅能产生保护性抗体，而且能诱导很强的细胞免疫，是另一个很有发展前途的活疫苗。此疫苗能够在几个星期内获得，从而能应付紧急流感大流行事件来临时疫苗的需求。Watanable等[36]利用反向遗传学从cDNA获得NS2蛋白缺失的病毒粒子，用其感染细胞时，能在细胞内表达病毒蛋白但不能形成有感染力的病毒粒子，用此方法制成的疫苗能保护离最后1次免疫3个月后的老鼠接受10或100 LD50的攻击（9只老鼠存活8只）。其它获得复制缺陷型流感病毒疫苗的途径是使M2基因缺失[37]。此缺失疫苗在组织培养物中生长良好，但在老鼠体内有限生长，因此是一潜在的活疫苗候选。虽然重组减毒的H5病毒在小鼠中只具有限的神经毒力，但其符合理想模式的疫苗设计特点――不会致死鸡胚、减弱的毒力、对模型动物具有易感性，已经开始运用于生产，不过在疫苗生产技术被采用之前仍有一些规章，安全性以及合法性问题需要考虑和克服。在生产人用疫苗时用于转染的哺乳动物细胞系（如vero细胞）的质量必须符合标准。用反向遗传系统产生的病毒可能被认为是“基因改良的有机体”，因此各个国家强加了一些地方和民众的安全性法则限制其研究和发展，而且高科技的反向遗传技术的使用权被保留，需要经过许可才能采
用此方法生产商业化疫苗。
8表位疫苗
根据病毒的抗原表位来研制表位疫苗，尤其是为易变异的病毒疫苗的研制提供了方向。Levi等[38]将流感病毒的3个表位：Ｂ细胞表位HA91-108、CTL表位NP147-158、Th 细胞表位NP55-69分别插入沙门氏菌的鞭毛蛋白基因中构建了3个真核表达质粒，鼻腔免疫小鼠。3种质粒混合免疫组可以诱导长期的免疫应答，并且可以完全抵抗病毒的致死性攻击。Thomson等[39]以1个真核表达质粒投递了10个CTL 抗原表位，其中包括NP基因的3个表位：NP50-58、
NP147-155、NP366-374和NS1基因的1个表位NS1152-160，免疫鼠后通过Cr51释放试验，检测这些表位显示该质粒诱导了强的CTL应答，并且可以清除感染的病毒。
表位疫苗不仅提供了一种更有效地利用病原体中各个
抗原成分的方法，而且对于流感病毒这种高度变异的病毒来说，一方面可以通过选择具有交叉保护性的表位来达到预防多个毒株的目的，另一方面可以通过对流行毒株的监测来及时合成表位，实现对变异毒株的控制。
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9转基因植物疫苗
宋长征等利用转基因马铃薯表达AIV HA蛋白[40]。利用电击穿孔转化法，将含有AIV HA基因的表达质粒pHAO （其中含35S启动子和来源于大豆植物存储蛋白基因的vspB终止末端，另有抗性标记）导入农杆菌EHA105，转化细菌再感染马铃薯的幼茎外植体，转化植株再生和温室栽培。Westernblot分析表明，83%的转化植株在其马铃薯块茎组织中表达了重组HA，表达量占总蛋白量的0.03%～0.04%。结果显示，用转基因马铃薯生产口服AIV疫苗是有前景的。
10参考文献
[1] Ilaria Capua，Stefano Marangon. Vaccination for avian influenza in Asia[J]. Vaccine，2004（22）：4137-4138.
[2] James Mark Simmerman，Pranee Thawatsupha，Darika Kingnatec，et al. Influenza in Thailand：a case study for middle income countries[J].Vaccine，2004（23）：182-187.
[3] 唐秀英，田国斌，于康震，等. 禽流感油乳剂灭活苗的研究[J].中国预防兽医学报.1999，21（6）：401-405.
[4] DL Suarez，S Schultz-Cherry.Immunology of avian influenza virus：a review[J].Developmental & Comparative
Immunology. 2000，24（2-3）：269-283.
[5] FURMINGER IGS. Vaccine production[M]∥NICHOLSON K G，WEBSCER R G，HAY A J，et al. The textbook of influenza. Oxford：Blackwell，1998：325-332.
[6] 陈全娇，金梅林，陈焕春. 禽流感疫苗研究进展[J].中国生物工程杂志，2004，24（4）：34-38.
[7] KODIHALLIS，SIV ANANDANV，NAGARAJA K V，et al. A type specific avian influenza virus subunit vaccine for turkeys：induction of protective immunity to challenge infection[J]. Vaccine，1994（15）：1467-1472.
[8] CRAWFORD J，WILKINSON B，VOSNESENSKY A，et al. Baculovirus-derived hemagglutinin vaccines protect against lethal influenza infections by avian H5 and H7 subtypes[J]. Vaccine，1999，17（18）：2265-2274.
[9] MOSS E. Genetically engineered poxviruses for recombinant gene expression，vaccination，and safety[J].PNAS，1996（93）：11341-11348.
[10] BOYLE D B，HEINE H G.Recombinant fowlpox virus vaccines for poultry[J].Immunol Cell Biol，1993，71（5）：391-397.
[11] BOYLE D B，COUPAR B E.Construction of recombinant fowlpox viruses as vectors for poultry
vaccines[J].Virus Res，1988，10（4）：343-356.
[12] KAWAOKA Y，NAEVE C W，WEBSTER R G. Is virulence ofH5N2 influenza viruses in chickens associated with loss of carbohydrate from the hemagglutinin?[J].Virology，1984，139（2）：303-316.
[13] 冀德君，刘红旗，彭大新，等.H9亚型禽流感重组鸡痘病毒疫苗的免疫保护试验[J].扬州大学学报，2002，23（2）：13-16.
[14] 程坚，刘秀梵，彭大新，等.表达H9亚型禽流感病毒血凝素基因的重组鸡痘病毒及其免疫效力[J].微生物学报，2002，42（4）：442-447.
[15] 贾立军，彭大新，张艳梅，等.H5亚型禽流感重组鸡痘病毒活载体疫苗的构建及其遗传稳定性与免疫效力[J].微生物学报，2003，43（6）：722-727.
[16] 陈平，陈素娟，彭大新，等. 高效表达H9亚型禽流感病毒HA基因的重组鸡痘病毒的构建及免疫效力试验[J].中国兽医学报，2004，24（3）：216-218.
[17] SWAYNE D E，GARCIA M，BECK J R，et al. Protection against diverse highly pathogenic H5 avian influenza virus in chickens immunized with a recombinant fowlpox vaccine containing an H5 avian influenza hemagglutinin gene insert[J].Vaccine，2000（18）：1 088-1 095.
[18] ULMER J B，DONNELLY J J，PARKER S E，et al. Heterologous protection against influenza by injection of DNA encoding a viral protein[J]. Science，1993（259）：1 745-1 749.
[19] PERTRNER T M，ORAN A E，MOSER J M，et al. DNA vaccines for influenza virus：differential effect sof maternal antibody on immune responses to hemagglutinin and nucleoprotein[J]. Jvirol，2000（74）：7 787-7 793.
[20] 陈化兰，于康震，田国斌，等. 禽流感病毒血凝素基因的克隆及其DNA疫苗的免疫原性[J].中国兽医学报，1997，17（6）：555-558.
[21] KODIHALLI S，GOTO H，KOBASA D L，et al. DNA vaccine encoding hemagglutinin provides protective immunity against H5N1 influenza virus infection in mice[J]. J Virol，1999，73（3）：2094?2098.
本文为全文原貌未安装PDF浏览器用户请先下载安装原版全文[22] MITCHELL J A，GREEN T D，BRIGHT R A，et al. Induction of heterosubtypic immunity to influenza A virus using a DNA vaccine expressing hemagglutinin-C3d fusion proteins[J].Vaccine，2003，21（9-10）：902-914.
[23] EPSTEIN S L，TUMPEY T M，MISPLON J A，et
al.DNA vaccine expressing conserved influenza virus proteins protective against H5N1 challenge infection in mice[J].Emerg Infect Dis，2002，8（8）：796-801.
[24] ULMER J B. Influenza DNA vaccines[J].Vaccine，2002，20（2）：74-76.
[25] 张小荣，焦新安，潘志明，等. 以减毒沙门氏菌运送的H5亚型禽流感病毒DNA疫苗的构建及其对小鼠的免疫原性[J].微生物学报，2004，44（2）：157-161.
[26] SCHLE SINGERS，DUBENSKY T W.Alpha virus vectors for gene expression and vaccines[J]. Curr Opin Biotechnol，1999（10）：434-439.
[27] VIGNUZZI M，GERBAUDS，WERF SYLVIE
V ANDER，et al.Naked RNA immunization with replicons derived from polio virus and SemLiki Forest virus genomes for the gene ration of acytotoxic T cell response against the influenza A virus nucleoprotein[J]. Journal of General Virology，2001（82）：1 737-1 747.
[28] DUBEN SKEY T W，LIU M H，ULMER J B. Delivery systems for gene based vaccines[J]. Molecular Medicine，2000（6）：723-732.
[29] CHA T，KAO K，ZHAO J. Genotypic stability of coldadapted influenza vaccine in an efficacy clinical trial[J].J
Clin Microbiol，2000（38）：839-845.
[30] LI S，LIU C，KLIMOV A，et al. Recombinant influenza A virus vaccines for the pathogenic human A/Hong Kong/97（H5N1）viruses[J]. J Infect Dis，1999（179）：1 132-1 138.
[31] COX R J，BROKSTAD，OGRA P. Influenza virus：immunity and vaccination strategies. Comparison of the immune response to inactivated and live，attenuated influenza vaccines[J]. Scand J Immunol，2004（59）：1-15.
[32] BELSHE R B，MENDELMAN P M，TREANOR J J，et al.The efficacy of live attenuated cold adapted trivalent intranasal influenza virus vaccine in children[J].N Eng J Med，1998（338）：1 405-1 412.
[33] TAKADA A，MATSUSHITA S，NINOMIYA A，et al. Intranasal immunization with formalin-inactivated virus vaccine induces a broad spectrum of heterosubtypic immunity against influenza A virus infection in mice[J]. Vaccine，2003（21）：3 212-3 218.
[34] WEREING M T，ANNOCK G. Live attenuated vaccines against influenza：an historical review[J]. Vaccine，2001（9）：3320-3330.
[35] MAASSAB H HEILMAN C，HERLOCHER M. Cold
adapted influenza viruses for use as live vaccines for man[J]. Ade Biotechnol Processes，1990（14）：203-242.
[36] WATANABE T，WATANABE S，NEUMANN G，et al.Immunogeni-city and protective efficacy of replication in competent influenza virus like particles[J]. JVirol，2002（76）：767-773.
[37] WATANABE T，WATANABE S，ITO H，et al. Influenza A virus can undergo multiple cycles of replication
with out M2 ion channel activity[J].Jvirol，2001（75）：5 656-5 662.
[38] LEVI R，ARNON R.Synthetic recombinant influenza vaccine induce sufficient long term immunity and cross strain protection[J].Vaccine，1996（14）：85-92.
[39] THOMSON S A，SHERITT M A，MEDVECZKY J，et al.Delivery of multiple CD8 cytotoxic T cell epitopes by DNA vaccination[J]. J Immuno，1998（160）：1 717-1 723.
[40] 宋长征，HUGH，MASON.禽流感病毒血凝素疫苗在转基因马铃薯中的表达[J].生物技术，2001，11（5）：3-4.
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使用禽流感疫苗应注意的几个问题资料
目前，用于禽流感强制免疫的疫苗主要有三种：禽流感-新城疫重组二联活疫苗(rl-H5)、重组禽流感病毒H5亚型二价灭活疫苗(H5N1，Re-5+Re-4株)、禽流感H5-H9二价灭活疫苗。不论是活疫苗还是灭活苗，影响禽流感免疫效果的因素很多，实践中应对疫苗种类的选择、防疫程序的制订、接种途径、操作方法给予充分的重视，才能尽量减少免疫失败或不良反应。 1、禽流感疫苗使用前的准备工作 1.1制定合理的免疫程序一般在制订禽流感免疫程序时应考虑以下几方面的因素：①当地禽流感疫病的流行情况；②雏鸡的母源抗体水平；③免疫间隔时间；④鸡的免疫应答能力；疫苗的种类；免疫接种的方法；⑤免疫对鸡健康及生产性能的影响等。 鸡禽流感疫苗首免日龄在12~15d，如果日龄太小，鸡免疫系统尚未完全建立，会造成免疫系统损伤，影响免疫效果。另一方面，母源抗体高滴度时，免疫不仅不能刺激机体产生应有的免疫应答，抗体反而会被中和，结果免疫失败。最好通过实验室检测禽流感母源抗体水平来确定首免日龄。说明书中禽流感油乳剂灭活苗免疫保护期为4个月，这是在实验室条件下采用SPF鸡检测得出的数据，而实际生产中影响禽流感疫苗免疫效果的因素很多，如饲养管理、营养水平、日龄大小、健康状况等，导致疫苗的保护期长短不一。所以，不能机械地照搬说明书中的保护期来推测免疫时间，有条件的，应根据HI抗体检测结果来指导何时免疫。 1.2了解禽流感疫苗要选择合适的疫苗对鸡群免疫接种，由于禽流感病毒血清型众多，不同亚型之间不能完全保护。在生产实践中应针对当前和本地流行的疫情来选择血清型、病毒株相同的疫苗。如果疫苗毒株的抗原性与感染病原的差异较大，很难取得良好的防疫效果。疫苗要妥善保存，禽流感疫苗是生物制品，对温度要求很严格，切忌随便存放，否则对疫苗有直接影响。灭活疫苗要保存在低温、干燥、阴暗的地方，适宜温度为2~8℃，活疫苗为冻干苗，则在冰箱冷冻室-15℃以下保存，切忌反复冻融。 有些养殖户将禽流感疫苗随意丢放，甚至被太阳暴晒，这样会使疫苗效价下降，有的还可能失效。 疫苗使用前例行检查，仔细核对禽流感疫苗抗原亚型、毒株、生产厂家、生产日期、失效期，有出现包装破损、活疫苗瓶非真空、油苗破乳分层、颜色改变等现象的疫苗，严禁使用。疫苗的用量不能随便降低或超剂量使用，剂量太低，机体不能产生足够的抗体；剂量过大，可能产生免疫麻痹或副反应。稀释液的选择与用量要掌握好，注射、点眼、滴鼻免疫接种时，可选用蒸馏水、生理盐水。饮水免疫时，最好用凉开水，其次是干净新鲜的深井水，不能用含消毒药物的水。稀释的浓度要根据实际情况配制，浓度不准确，免疫效果也会大打折扣。灭活苗使用前应预温在25℃左右，预温可使油乳剂苗粘度降低、稀薄、易注射、吸收好，否则注射的局部易出现游离肿块。 1.3其他参加免疫操作的人员必须经验丰富，能熟练掌握疫苗的配制、免疫操作方法，确保每只鸡有 足够的疫苗用量，同时疫苗较快地用完。禽流感疫苗注射前，应核对连续注射器刻度容量和实际容量之间的误差，以免与实际注射量偏差太大，对注射器可能出现的故障能及时维修。注射活疫苗用的针头为7号，油苗用9号针头，针头太细，注射时费力，注射器也容易损坏；针头太粗，注射后疫苗会从针孔溢出。同一鸡舍的鸡群，每注射1000羽至少换针头一枚，针头使用前严格消毒，防止疫情传播。鸡群健康是禽流感免疫的基础，只有健康的鸡群才能产生良好的免疫应答，鸡群不健康时接种会造成免疫失败。 2、免疫操作 2.1滴入免疫法滴入免疫法是指滴鼻、点眼、经上呼吸道或眼结膜进行免疫的一种方法。500头份的疫苗用25ml稀释液稀释，把鸡头颈提起，呈水平位置，用手堵住一侧鼻孔，然后将疫苗滴入眼、鼻各一滴，待疫苗吸入和在眼内扩散后才可将鸡轻轻放回，谨防漏滴、重
结核菌疫苗的研究进展
综 述 ?呼吸系统疾病? 结核菌疫苗的研究进展 徐以民Ξ综述,卢贤瑜审校 (重庆医科大学检验系临床免疫学教研室 400016) 摘 要:世界范围内,结核病疫情急剧恶化,而疫苗可能是根治结核病的最佳甚至唯一途径。但是,目前唯一可用的疫苗BCG的免疫效果不理想。因此,开发安全、廉价、实用、有效的新型疫苗就成为结核病防治的研究热点。目前研究的疫苗主要有蛋白质亚单位疫苗、DNA疫苗、减毒活疫苗和改进的卡介苗以及转基因植物疫苗等。本文概括地分析和介绍了结核病疫苗的研究现状和新近进展,并对疫苗的发展趋势进行了展望。 关键词:结核病;疫苗;免疫应答;转基因植物 中图分类号:R52文献标识码:A文章编号:100623730(2003)0520277202 80年代中期以来,随着人口流动的增加,多重耐药结核病的流行,大量隐性感染者的存在(全球约有20亿人)以及结核分枝杆菌(M TB)和HIV的双重感染,导致结核病(TB)的发病率、死亡率大幅上升。因此,控制和预防TB已成为当务之急,疫苗可能是根治TB的最佳甚至唯一途径。近年来结核疫苗的研究方兴未艾,现就近几年结核疫苗的研究进展作如下综述: 1 减毒活疫苗(live attenuated vaccine)2BCG 111 传统BCG的应用及问题 卡介苗(BCG)是目前唯一广泛应用的活菌疫苗,经临床证实其副作用小,并对幼儿粟粒性结核病和结核性脑膜炎有明显的预防作用;并且又是活菌免疫,免疫效果相对较好,免疫接种也相对简单,易操作。结核病专家屠德华教授认为,在我国对新生儿接种卡介苗是预防结核病的有效手段,保持期可达5年至10年,故近年提倡成人复种。然而对照研究也发现,BCG对预防成人肺结核病效果不理想。研究已证实BCG能预防绝大多数原发性结核,但不能防止传染源的发生。尽管BCG在预防小儿结核发病和防止重症化上曾发挥过相当有效的作用,但对青春期或成人追加接种并未证实能取得如同乳儿期初次接种那样的效果。据报道BCG的预防作用从0～80%不等。其原因可能是BCG菌株的变异使保护性抗原丢失、人群间遗传或营养的差异以及环境等因素的影响,尤其是非典型分枝杆菌的感染,可干扰BCG预防效果的观察。与致病M TB相比,BCG无法充分刺激CD8+T细胞使其达到最佳保护作用。因此,在疫苗的研制中应注意尽可能刺激所有的T细胞群体。 112 改变BCG的免疫途径 BCG最早通过口服液体菌苗进行免疫接种,但用菌量大、效果差,并存在一些副作用。随着菌苗保存条件的及菌种冰冻干燥机的使用,皮内注射及皮上划痕逐渐取代口服免疫。1987年后以使用冻干卡介苗为主。近年,Hoft DF[1]、Lagranderie M[2]等研究发现,对小鼠口服和胃内接种BCG与皮内注射保护作用相同,最近Doherty TM 等[3]将去毒的MPL(单磷酸脂质A)佐剂与二种结核杆菌免疫优势抗原蛋白相结合制备亚单位疫苗,经口服与皮下两种途径免疫小鼠。试验发现,口服途径强化免疫可诱发有效的1型免疫应答,其强度和其保护作用均相当于甚至超过了皮下免疫途径。 113 BCG的修饰和改组 有两方面的思路和研究。一为沿袭BCG疫苗模式,构建减毒活性疫苗,它能使机体免疫系统受到更接近于自然感染途径的刺激,但不会导致病理损害。其方法有(1)通过基因置换和转座子诱变使单个基因位点失活制备疫苗,在预防其它细菌的感染中已有成功的例子。(2)诱导菌株突变,构建减毒株。首先诱导出两种突变,其中一种可影响病原体的致病能力,另一种将导致突变株对某类营养物质有特定的依赖性,然后将两种突变结合运用,就可确保新的候选疫苗更有效、更安全。例如一种依赖亮氨酸生长的分枝杆菌所产生的突变株就不能在免疫缺陷的小鼠体内长久存活,这为免疫功能减弱的人群设计较安全的活菌疫苗提供了一条途径[4]。 另一种方法则是对BCG疫苗本身进行改造重组,恢复表达传代丢失的抗原,并通过设计表达重组的哺乳动物的细胞因子如:IL22、IL24、IL26、IFN2γ、GM2CSF等,以增强其免疫原性[4]。Horwitz MA等[5]将编码结核杆菌的30kD的主要分泌蛋白基因经穿梭质粒导入BCG的Connaught株和Tice株,构建重组BCG,发现重组BCG免疫保护作用优于传统BCG。Jackson M[6]通过经典的等位基因置换技术用BCG1173P2株和结核杆菌M T103株分别构建缺失purC基因的营养缺陷突变株M YC1552和M YC1551,豚鼠试验表明两种突变株与BCG有相同免疫保护作用。 2 亚单位疫苗(subunit vaccine) 减毒活疫苗或灭活疫苗存在许多非必要成分,可引起副作用或存在返祖的可能性,而亚单位疫苗因组成明确、结构简单、安全、特异而受人关注。研究发现刺激免疫反应的M TB 短期培养滤液(ST2CF)蛋白分子主要集中在相对分子量为4 000～11000和26000～35000两部分。研究表明滤液蛋白抗原免疫后经气雾途径感染M TB的豚鼠不但没死,且体重还有所增加,同时显示出对所免疫蛋白很强的DTH反应[7].现已知亚单位疫苗中有明显作用及部分作用的分泌蛋白有: Ag85、ESA T26、MPT232、MPT264以及热休克蛋白HSP65、HSP70等,其中ESA T26及Ag85成为近年研究的特点。 211 ESA T26抗原的研究 ESA T26是从ST2CF分离纯化的分子量为6kD的分泌性蛋白,它存在于M TB中,而所有BCG 菌株均缺失其编码基因。在结核病人和各种动物模型的早期阶段中为介导细胞免疫的优势靶抗原。Brandt E[8]用单磷酸脂质A(MPL)和二甲基2双十八烷基溴化铵(DDA)乳化ESA T26免疫接种小鼠,能引起近似于BCG免疫的较强的特异性T细胞反应。Olsen AW等[9]研究了源于ESA T26抗原的两种肽类后,发现结核感染与ESA T26免疫所诱发的是针对ESA T261～20的反应。随后的试验表明只有源于亚优势肽ESA T2651～70的疫苗,其保护作用与ESA T26及BCG免疫后的水平相同。 212 Ag85B与ESA T26的联合免疫 Olsen AW等[10]用DDA2MPL乳化重组融合蛋白Ag85B2ESA T26和ESA T262 Ag85B合并免疫6212周龄,C57BL/6J小鼠,发现Ag85B2 ESA T26对各种抗原刺激产生的应答最强。后分别用ESA T2 772 国外医学临床生物化学与检验学分册 2003年第24卷第5期 Ξ作者简介:徐以民(1967～),男,山东东营人,重庆医科大学临床检验诊断学博士研究生。研究方向:胚泡植入机制研究、结核疫苗的研制。
抗结核药物的研究进展和发展趋势
综 述 文章编号:100128689(2005)0420250204 抗结核药物的研究进展和发展趋势 Trends and advances i n an tituberculosis agen ts 陆宇 段连山 L u Yu and D uan L ian 2shan (北京市结核病胸部肿瘤研究所, 北京101149) (Beijing T uberculo sis and T ho racic T umo r R esearch Institute , Beijing 101149) 摘要: 结核病是除A I D S 外引起死亡最高的感染性疾病,严峻的结核病回升形势要求加速新型抗结核药物的研究开发。缩短疗程,提高M DR 2TB 疗效及对结核潜伏感染(L TB I )提供更有效的治疗是开发新抗结核药物要实现的目标。口恶唑烷酮类、硝基咪唑并吡喃类等药物是近年发现的新药,利用功能基因组学,蛋白质组学等加速药物筛选、有效传递药物至靶位的药物载体、联合抗结核药物的免疫辅助治疗剂等也是抗结核病药物的发展趋势。 关键词: 结核; 抗结核药物; 药物筛选; 载体中图分类号:R 978.3 文献标识码:A 收稿日期:2004207227 作者简介:陆宇,女,生于1971年,博士,助理研究员。主要从事抗结核药物药理学研究。 结核病是除A I D S 外引起死亡最高的感染性疾 病,是严重的全球性健康问题。抗结核药物是结核病化学治疗的基础,结核病的化学治疗是人类控制结核病的主要手段。结核病化疗的出现使结核病的控制有了划时代的改变,以异烟肼、利福平、吡嗪酰胺为核心的短程化疗曾取得令人瞩目的成就。人类迈入新世纪的今天,现有的抗结核治疗方案还远远不够理想,严峻的结核病回升形势要求加速新型抗结核药物的研究开发。目前,结核病治疗的两大难题在于结核分枝杆菌的持留性和耐药性,人们对结核分枝杆菌本质认识的逐步深入及新兴技术的发展,为抗结核药物的研究提供条件。现将抗结核药物的研究和发展情况介绍如下。1 开发新抗结核药物要实现的目标[1]1.1 缩短疗程 结核病是结核分枝杆菌引起的感染性疾病,在感染性疾病中结核病的治疗的一大特点是疗程过长。标准短程化疗的前2个月的强化期使患者的菌负荷量大大降低,转为非传染状态,4～6个月的巩固期主要是消除持留状态的细菌以减少复发的危险,至少6～8个月的疗程使患者的依从性难以保证,进而易导致耐药性的发生。在现有抗结核药物基础上进行超短化研究难以达到满意的治愈率和复发率。如果高效的抗菌剂和 或灭菌剂能将疗程缩短到2个月或更短,将大大有利于提高患者的依从性,当然,一种能缩短总疗程并减 少服药次数,服药数量的化合物将是最好的选择。1.2 提高多耐药结核病(M DR 2TB )的疗效 M DR 2TB 的发生率在全球呈上升趋势,M DR 2TB 患者的治疗药物选择受到极大的关注。但是,抗结核新药开发跟不上M DR 2TB 发生速度。目前M DR 2TB 患者的治疗只能应用异烟肼、利福平以外的价格昂贵、不良反应多的二线药物。改进M DR 2TB 的治疗急需新的药物。 1.3 对结核潜伏感染(L TB I )提供更有效的治疗 估计全世界约有20亿的人口感染结核菌,1000～2000万人在一生中发展成活动性结核病。在北美及一些L TB I 发生率低的地区,异烟肼是预防L TB I 的药物,异烟肼也是W HO 推荐的结核病和H I V 双重感染人群的有效药物,但却存在严重的限制性,L TB I 的治疗有待开发新的药物,以利显著降低结核病的发病率。2 抗结核药物开发的困难 在过去的20年,有1200种新药批准上市,但在发展中国家发现用于抗感染的不足1%,至于结核病,在制药工业中的积极性更是与需要不成比例[2]。在美国、欧洲和日本的实验室,对抗结核新药的研究,已从过去的基本静止状态发展到一个活力相当大的时期,但是自利福平问世至今的30年没有一个新型化合物用于抗结核治疗。除缺少商业利益外,开发有活性的新化合物并发展为临床有希望的抗结核药物还有困难。
抗结核药市场分析报
抗结核药市场分析 19-20世纪初，结核病给人类带来了巨大的灾难。之后，随着医学的进步，结核病的发病率已降到较低水平。然而进入20世纪后期，结核病疫情卷土重来：耐多种药物结核菌株的出现、免疫缺陷病毒（HIV）感染并发症的传播，导致了医院内病原菌的滋生，成为威胁力极高的慢性传染病。 结核病疫情死灰复燃 进入21世纪后，区域性结核病疫情的死灰复燃，又一次给人们敲响了警钟。 据资料介绍：全球每年新发现结核病患者约1000万人，我国是世界上22个结核病高负担的国家之一，由于人口众多，其感染者居世界第2位，在现阶段，有3/4的患者来自农村及贫困地区。据2000年的调查显示，我国受结核杆菌感染者较多，结核病患者约占了总人口的0.4%左右，其中传染性肺结核患者近200万人，年病死率约为3％。随着我国卫生事业的发展，政府对结核病予以高度的重视，与此同时，抗结核药物市场也吸引了业内商家的目光。 全球抗结核病常用药物市场约占抗感染药物市场的12％，2000年抗结核药物市场为4.7亿美元，并且平均每年以5％的速度递增。安万特、诺华、
惠氏、法莫西和Lupin公司占据了抗结核药物市场份额的59%，此外印度生产商占12％，剩余的29％由较小的厂商拥有。 近两年，国内抗结核常用药物市场呈现出上升趋势，据SFDA南方医药经济研究所时每医药信息公司研究数据表明，2002年，抗结核药物在国内大城市重点医院的用量比上一年增长了18％，估计全国抗结核类药物市场销售额为2亿-2.5亿元左右。 常规品种仍占一定份额 目前，常用的抗结核药品由杭生素、合成药和中药三大类组成，其中有20多种西药为国家基本治疗用药，一线治疗药物主要是异烟肼、利福平、链霉素、乙胺丁醇、吡嗪酰胺、利福霉素类等。近几年，氟喹诺酮类也被用于抗结核菌的治疗，在联合治疗中发挥出重要的作用。 链霉素链霉素是1944年由美国瓦克斯曼发现的第一个氨基糖苷类抗生素，抗菌谱广，是最先使用的抗结核菌药物。由于链霉素和其他抗菌药物或抗结核药物联合应用可减少或延缓耐药性的产生，在抗结核联合疗法中显示出较好的效果，目前在许多发展中国家作为抗结核的基础药物，也是结核化疗史上的里程碑药物。
禽流感疫苗研究进展
禽流感疫苗研究进展 摘要对禽流感的预防，必须在采取严格的生物安全措施的同时，加强必要的免疫措施。对不同类型禽流感疫苗的研究现状、优越性与局限性进行了综述。 关键词禽流感；疫苗；研究进展 最近，亚洲一些国家不断暴发的禽流感（Avian influenza，AI）事件引起了人们对全球一系列动物和公众健康问题的极大关注，最近的联合国粮农组织（FAO）罗马提交会议指出[1]，当面临AI大流行威胁时，采取大规模扑杀感染动物的措施会丧失很大一部分食物来源，使地方养禽业遭受严重打击，显得不太合理。对禽流感的预防，必须努力集中在采取严格的生物安全措施的同时，加强必要的免疫措施。免疫能减轻临床症状，降低死亡率，减少病毒的扩散和提高群体对感染的抵抗力，从而控制禽流感病毒（Avian influenza vinus，AIV）的广泛传播[2]。然而，如果疫苗的使用和管理不当，不仅达不到预期的效果，还会污染环境，威胁公众健康。因此，研制安全、高效的AIV疫苗是专家们为之不懈努力的目标。 理想的疫苗应具有高的生物保护容量，同时消除环境污
染和易感动物感染的可能性。总的来说，对于AIV疫苗的发展，以下几种设计思路均已被采用或尝试。 1全病毒灭活疫苗 由于AIV基因组的抗原漂移，AIV疫苗仅能提供70%的保护力。针对这种特点，AIV灭活疫苗通常制备成针对几种不同亚型AIV的多价疫苗，己证明1种灭活疫苗可以至少包括4种不同的AIV亚型。同只含单一亚型的疫苗比，多价疫苗并没有减弱对同一种HA亚型AIV攻击的有效保护[3]，而且各亚型抗原之间不产生免疫干扰。AIV灭活疫苗能使免疫鸡群在感染AIV野毒时有效地减轻损失，并显著减少可能存在于鸡群和环境中的病毒数量，缩短其存活时间，是AI 防治的主动措施、关键环节和最后防线。而且灭活疫苗具有制备工艺简单、免疫效果确实、免疫持续期长等特点，许多国家已将其作为商品化的AIV疫苗应用于家禽中。我国己研制成功不同亚型的AIV疫苗，且证明具有良好的免疫保护作用。但灭活苗本身存在一些缺陷[4]，主要是：影响疫情监测；存在散播病毒的风险；免疫剂量较大，制备成本高。其最突出的缺点是不能诱导产生有效的粘膜免疫抗体和细胞免疫 应答，因而无法有效地抑制呼吸道中AIV的复制。近年来，人们试图从技术上突破此缺点，筛选并利用同亚型弱毒疫苗
外泌体在肺结核中的研究进展
志,２０１１,８(２):１４７Ｇ１４９． [２３]俞小飞,徐燕,张梦．妊娠高血压患者与DＧ二聚体二维生素B１２二血清同型半胱氨酸的关系[J]．医学检验与临床,２０１５,２６(４):６１Ｇ６２,２４． [２４]郭跃丽,奚经巧,孔万仲,等．妊娠期H c y和凝血相关指标与胎儿生长发育的临床研究[J]．中国妇幼健康研究, ２０１６,２７(２):２１０Ｇ２１３． [２５]黄华,梁红梅,罗奇智,等．孕妇血清同型半胱氨酸二叶酸二维生素B１２水平与妊娠高血压综合征关系探讨[J]．国际 检验医学杂志,２０１４,３５(２１):２８６９Ｇ２８７１． (收稿日期:２０１７Ｇ１０Ｇ２４一修回日期:２０１８Ｇ０１Ｇ０５) 综一一述 外泌体在肺结核中的研究进展? 李志强１综述,张俊爱２?审校 (１．广东医科大学医学检验学院,东莞５２３８０８;２．广东医科大学广东省分子诊断重点实验室,东莞５２３８０８)一一摘一要:目的一外泌体可由几乎所有类型细胞产生并释放,其被发现存在于多种体液中,包括血液二尿液二唾液二胸腔积液和支气管肺泡灌洗液(B A L F)等.外泌体含有的组分在不同生理病理条件下不同,外泌体在调节细胞功能及疾病发生中扮演重要角色.外泌体在细菌组分传播中起重要作用.本文阐述了外泌体的研究背景二外泌体的形成和分泌二外泌体与结核分枝杆菌(MT B)的相互作用.旨在为结核疫苗和诊断靶标的研究提供新的思路. 关键词:外泌体;一结核分枝杆菌;一巨噬细胞;一疫苗;一诊断 D O I:１０．３９６９/j．i s s n．１６７３Ｇ４１３０．２０１８．０９．０２５中图法分类号:R５２９．３ 文章编号:１６７３Ｇ４１３０(２０１８)０９Ｇ１１０７Ｇ０６文献标识码:A 一一外泌体是释放到细胞外的直径为４０~１００n m膜性胞外囊泡(E V s),可运载多种蛋白质二脂质及核酸,是一种重要的细胞间信息传递载体[１].结核分枝杆菌(MT B)是肺结核的主要病原菌,作为一种兼性胞内寄生菌,通过感染巨噬细胞为自身创造适宜繁殖环境.MT B在感染后期能诱导宿主细胞死亡以促进胞内M B T外排,也可通过坏死的感染细胞碎片或凋亡小体的释放将致病成分散布到胞外环境.这些外泌体不仅携带各种病原体相关分子模式(P AM P s),还包含T二B细胞抗原蛋白,核酸和病原体相关毒素.根据产生机制不同[２],胞外囊泡分为３类:外泌体二微囊泡和凋亡小体.根据国际外泌体协会建议,文献中所认为的外泌体往往是各种囊泡的混合物,以往多数研究中囊泡纯度并无严格明确,囊泡群中可能包含外泌体,微囊泡甚至细菌胞外囊泡,因此,本文采用 外泌体 一词包括其他类型来源胞外囊泡.本文阐述了MT B感染细胞来源外泌体的免疫调节作用,及其作为结核疫苗和诊断靶标的新思路. １一外泌体的研究背景 一一 外泌体 一词最初由J O H N S T O N E等[３]在研究网织红细胞成熟过程中囊泡形成时提出.R A P O S O 等[４]发现E B病毒转化人B淋巴细胞源囊泡表面表达主要相容性复合体,具有激活免疫系统作用,与红细胞外泌体形成和释放途径相似,这极大激起研究者对外泌体免疫调节作用的研究热情.定义外泌体在免疫应答中的作用的相关研究大多数在自身免疫和癌症生物学背景下进行,而阐述外泌体对感染性疾病如肺结核感染的免疫作用的研究少之又少.在对鸟分枝杆菌的研究中,B E A T T Y等[５]观察到鸟分枝杆菌感染过程中相关P AM P s如脂阿拉伯甘露糖(L AM)和磷脂酰肌醇甘露糖苷(P I M)从吞噬小体被转运至 多囊体并释放到胞外,可在相邻未感染细胞检测到这些P AM P s.观察到鸟分枝杆菌二卡介苗或MT B感染巨噬细胞释放的囊泡含有L AM二糖肽脂和相对分子质量为１９?１０３的脂蛋白等MT B组分,流式细胞术检测发现囊泡释放量与多种内体标志物(包括L AM P１二L AM P２二MH CⅠ二Ⅱ和４次跨膜蛋白C D８１)的数量呈正相关[６Ｇ７].这些具有晚期内体标志物的囊泡通过钙依赖性胞吐释放到胞外,暗示这些囊泡属于外泌体[８].P R A D O SＧR O S A L E S等[９]发现MT B可释放带有菌体成分的胞外囊泡,可引起T o l l样受体(T L R)依赖性免疫应答.研究发现,感染细胞分泌的胞外囊泡中含有脂聚糖与脂蛋白标记的MT B胞外囊泡和C D９二C D６３标记的宿主源性外泌体,但有部分细菌组分掺入宿主外泌体,提示外泌体可作为MT B胞外囊泡运输的次要途径[１０].MT B感染细胞释放的胞 ７０１１ 国际检验医学杂志２０１８年５月第３９卷第９期一I n t J L a bM e d,M a y２０１８,V o l．３９,N o．９ ?基金项目:广东省医学科学基金项目(A２０１６６０６３二A２０１８４３４７);广东医学院面上培育项目(M２０１５０２１);广东医学院大学生创新实验项目(２０１６Z Z D C００３二２０１６Z Y D G００２);国家大学生创新创业训练项目(２０１６１０５７１０１９). ?一通信作者,EＧm a i l:z h a n g j u n a i＠g d m u．e d u．c n. 一一本文引用格式:李志强,张俊爱．外泌体在肺结核中的研究进展[J]．国际检验医学杂志,２０１８,３９(９):１１０７Ｇ１１１２．
禽流感疫苗的研究进展
禽流感疫苗的研究进展 摘要：近年来禽流感在一些国家和地区大规模暴发,不仅给养禽业造成了巨大的经济损失,而且还威胁到人类的生命健康,疫苗是防控禽流感的主要手段和措施。综述了目前世界上几种主要禽流感疫苗的研究现状，分析了其优缺点及禽流感疫苗研究的发展趋势。 关键词:禽流感病毒；疫苗；研究进展 禽流行性感冒(禽流感,AvianInfluenza,AI)是由正黏病毒科流感病毒属的A型流感病毒引起的、发生于各种家禽和野鸟的一种急性传染病。该病呈全球性分布,给养禽业造成巨大的经济损失。从19世纪以来,已出现四次全球性的禽流感大流行,最严重的一次（1918～1919年)全世界死于禽流感的人数超过20万。尤其是在2003年底至2004年初韩国、泰国、日本、越南和我国相继暴发禽流感,越南、泰国出现了禽流感病毒H5N1变异株感染人并致死的病例,因此引起了世界各国的高度重视[1]。由于禽流感病毒血清亚型众多,变异频繁,给疫苗的研制带来了极大困难。目前,商品化禽流感疫苗大都为灭活疫苗,该种疫苗具有制备工艺简单、免疫效果良好、免疫持续时间较长等特点,已被许多国家和地区在家禽中使用,并在预防和控制禽流感暴发中起到一定的积极作用。但灭活疫苗存在免疫效率低下、免疫剂量较大、监测中难于区分疫病的疫苗免疫与野度感染的缺陷,并且还存在散毒的危险等缺点。 防控AIV理想化的疫苗应具备以下特点:①价格低廉,易接种,对家禽具有高度的安全性。②任何日龄家禽接种1份剂量都有效,免疫后既能产生体液免疫应答,又能产生细胞免疫应答,并能迅速建立免疫性保护。③可以区分AIV自然感染禽和疫苗免疫禽。④疫苗生产时对工作人员和环境安全。⑤休药期短或无休药期[3]。但目前,还没有任何一种禽流感疫苗同时具备上述全部特性。因此,高效、安全的AIV新型疫苗的研制一直是科研人员关注的焦点。常见的禽流感疫苗有以下几类: 1全病毒灭活疫苗禽流感灭活疫苗一般是用甲醛灭活禽流感病毒鸡胚尿囊增殖液,辅以佐剂而成[2]。它具有制备工艺简单、免疫效果确实、安全性好、,免疫持续时间长且不会出现毒力返强和变异的优点,可保护同种亚型AIV的攻击,可有效避免禽流感的大暴发或大流行。历史上禽流感灭活疫苗曾经发挥过重要作用，如1987年美国科罗拉多州使用灭活苗成功地控制了H9N2亚型禽流感的流行。目前，我国H5、H7亚型禽流感灭活疫苗已经研制成功，并取得了良好的免疫保护效果。同时，对混合乳化法制备的联苗也有了研究[3]。 全病毒灭活疫苗具有制备工艺简单，免疫效果好，免疫持续期长等特点，已被许多国家作为商品化的禽流感疫苗在家禽中使用，有效的避免了禽流感的大暴发或大流行。但与此同时，全病毒灭活疫苗也存在一定的问题，如疫苗免疫效果是由灭活疫苗的注射剂量和疫苗中的抗原量决定的，因此灭活苗注射的病毒量要比活疫苗高出许多倍。且制备灭活苗还必须添加佐剂，其生产还需要大量的鸡胚，成本非常高，这在禽流感大流行的情况下，鸡胚的供应将会成为疫苗生产的一个限制因素。此外，由于接种灭活苗的机体也会产生针对病毒内部结构蛋白，如NP的特异性抗体，而这类抗体是在进行流行病学调查时的主要判定指标，因此灭活苗的应用将导致无法区分自然感染鸡和疫苗接种鸡，从而干扰AIV疫情的监测和流行病学的调查。 2减毒活疫苗减毒活疫苗是指将野毒株感染鸡胚，并在25～26℃下连续传代得到减毒毒株，即冷适应株，该病毒只能在25℃左右复制，不能在37℃下传代，之后使用该弱毒株免疫使机体产生特异性免疫。多项人体和动物研究证实，冷适应毒株生物学性质有很好的稳定性。弱毒流感疫苗与灭活疫苗的免疫后抗体阳转率都在50%～70%，能够有效控制流感的流行；对群体免疫的意义更加重大，对表面抗原发生转移的流行株病毒有一定的保护作用。但冷适应减毒活疫苗与其他流感病毒可能发生基因重配得到毒力恢复的重配株病毒，此外，冷适应减毒活疫苗在免疫缺陷患者中使用有致病的风险。
现代抗结核药物的研究进展
现代抗结核药物的研究进展 【摘要】由于结核分枝杆菌耐药性的出现和艾滋病的蔓延，结核病已成为全球关注的健康问题，有效的控制结核病疫情面临严峻的考验。本文主要介绍了抗结核新药的研究进展。 【关键词】结核病；结核分枝杆菌；抗结核药物 据了解，结核病是患病率及死亡率最高的疾病之一，也是21世纪发展中国家引起死亡的主要疾病和发达国家再度活跃的疾病。作为发展中国家之一的中国现有活动性肺结核病人约450万人，患病人数居世界第二位。2001-2010年，我国肺结核报告发病人数始终位居全国甲乙类传染病报告发病数的前列。目前，结核病治疗的两大难题在于结核分枝杆菌的持留性和耐药性[1]，随着人们对结核分枝杆菌本质的深入及新技术的发展，为抗结核药物的研究提供了条件。现将现代抗结核药物的研究和发展情况评述如下。 1 开发新抗结核药物药实现的目标[2] 1.1 短疗程：结核病史传染性疾病中治疗疗程较长的一个。标准化的化学治疗，至少需要维持6-8个月，不仅患者的依从性难以保证，更是导致耐药性的发生。而在现有的抗结核药物基础上进行超短疗程研究，难以达到满意的治愈率和复发率，亟需能缩短疗程并减少服药次数，数量的新型抗结核药物。 1.2 结合潜伏感染（LTBI）提供更有效的治疗：全世界约有20亿万人在一生中发展成活动性结核病。虽然异烟肼是预防结核潜伏感染药物，也是WHO推荐的结核病和HW双重感染人群的有效药物，但却存在着严重的限制性，因此还有待于新药的开发。 1.3 高多耐药结核病（MDR-TB）[3]的疗效：MDR-TB的发生率在全球呈上升趋势，其治疗药物的选择受到极大的关注，目前只能应用异烟肼，利福平以外，价格相对昂贵不良反应多的二代药物，急需新的药物。 2 抗结核药物的研究进展 2.1 蛋白质组学的应用加速药物的筛选：中国科学院微生物所张立新实验室使用带有绿色荧光蛋白（GFP）表达载体的牛型结核分支杆菌Mycobacterium bovis减毒株bacillus Calmette-Guérin，即BCG 菌株作为测试菌株，建立了BCG 高通量筛选模型作为抗结核病活性成分的筛选，本研究进一步通过细胞水平的实验验证了abyssomicin J在BCG细胞内会自发转变为atrop-abyssomicin C而发挥其抗结核活性的初步假设，并揭示了该类化合物可以克服atrop-abyssomicin C不稳定的缺点，本论文的发现这为将此类化合物开发成成为新一代稳定的抗结核前体药物提供了理论依据[4]。这些研究成果首次揭示了abyssomicin类化合物的硫醚迈克加成产物是更加稳定的且具有定高反应活性的Michael acceptor，具有更
2017年禽流感疫苗行业分析报告
2017年禽流感疫苗行业分析报告 2017年9月
目录 一、禽流感概述 (4) 二、禽用疫苗市场现状分析 (9) 1、禽流感疫苗 (11) （1）H5亚型：招采规模稳定，是禽苗的主要构成 (14) （2）H7亚型：纳入招采体系，有望推动招采格局变动 (17) （3）H9亚型：单苗市场规模小，以联苗为主 (19) 2、其他禽用疫苗 (21) 三、新苗推广，龙头企业有望脱颖而出 (22) 四、行业主要上市公司 (23) 1、生物股份 (24) 2、中牧股份 (26) 3、海利生物 (26) 4、瑞普生物 (28) 5、天康生物 (29) 6、温氏股份 (30)
高致病性禽流感引起禽类较高的死亡率：根据对禽类致病性的高低，禽流感病毒可分为高致病性和低致病性两大类：高致病性型禽流感，如H5N1可造成禽类死亡率约100%，且会迅速在禽类中蔓延；低致病性禽流感易传播，感染禽只范围广，但造成禽类死亡率低。通常禽流感只在禽类之间传播。但若发现人类感染禽流感病毒起，无论高致病性禽流感或是低致病性禽流感，都会引起较为严重的后果。目前感染人类的禽流感病毒主要有H5N1、H7N9及H9N2。 禽类疫苗目前现状：1）市场规模，根据中国兽药协会数据，2015年禽苗市场规模超过30亿元，根据我们草根调研，禽流感H5类疫苗市场规模约15亿元，占禽苗销售额比例高；2）企业数量少，根据中国兽药信息网数据，2010年后获得生产禽流感疫苗批文的企业只有11家，相对其他疫苗生产企业数量较少；3）H5亚型疫苗以招采为主，招采规模稳定在13亿元左右，生产企业对招采依赖程度高；4）H7亚型纳入招采，联苗发展成为趋势，2016年底到目前为止，H7亚型禽流感疫情增多，需要新型疫苗加强免疫，今年7月农业部宣布将在秋招中推广H5+H7二价苗，一针可增强对H5及H7亚型的免疫，新疫苗价格有望提升，进一步扩大招采苗市场规模；同时联苗发展成为趋势，联苗具有一针多免的优点，可减少注射次数，节约人力成本招采政策变动有望改变竞争格局，龙头企业有望受益：由于近期H7亚型流感疫情增多，预计H5+H7二价苗将逐渐成为招采苗主体，新疫苗纳入招采有望改变禽流感疫苗竞争格局，具有资金、技术优势的龙头企业有望从此轮洗牌中受益。根据我们测算，如果覆盖全国主
抗结核药物的研究进展李萍
抗结核药物的研究进展李萍 发表时间：2019-07-19T17:18:58.657Z 来源：《药物与人》2019年5月作者：李萍 [导读] 结核病的治疗主要是依靠抗结核药物的研究与开发，目前国内外已研究开发了一批临床疗效较好的药物。 桂林市第三人民医院药剂科广西桂林李萍 内容摘要：结核病的治疗主要是依靠抗结核药物的研究与开发，目前国内外已研究开发了一批临床疗效较好的药物。探析当下抗结核药物研究的进展，在立足当下的实际情况和科学研究之后，展望我国抗结核药物未来的发展趋势。 关键词：抗结核药物；结核病；化学治疗 [中图分类号]R978.3[文献标识吗]A [文章编号]1439-3768-（2019）-04-WJK 结核病是一种古老的传染病，是由结核分枝杆菌引起的传染性疾病，主要通过飞沫空气传播，全球约有1/3的人口感染结核病，每年约300万人因结核病而死亡。抗结核药物是结核病化学治疗（简称化疗）的基础，而结核病的化学治疗是人类控制结核病的主要手段。近几年来，随着在药物方面的突破，抗结核药物的出现在很大程度上缓解了结核病的扩散。本文综述当前正在临床使用及开发的抗结核病的药物。 1.氨基糖甙类 链霉素（SM）是最早用抗结核的有效药物，单用SM治疗肺结核2-3个月后就可使临床症状和X线影像得以改善，并可暂获痰菌阴转。链霉素是一种氨基环醇糖苷类抗生素，通过干扰核蛋白体水平上细菌蛋白质的合成而发挥抗菌作用。rpsL基因和rrs基因分别编码核糖体蛋白S12和16SrRNA，在SM耐药分离株中，70%～80%有rpsL或rrs基因突变，并且前者突变率明显高于后者[1]。卡那霉素由于其对听神经及肾脏的损害，不适于长期使用。有关资料证实，阿米卡星（丁胺卡那霉素）在试管中对结核分枝杆菌有高效杀菌作用。近年来临床用丁胺卡那联合对氨基水扬酸异烟肼治疗耐多药结核病取得较为满意的疗效，且副作用也较小。巴龙霉素是从链霉素的培养液中获得的一种氨基糖苷类药物，具有抗结核作用，可用于多药耐药结核杆菌的治疗。[2] 2.对氨基水扬酸（PAS） 对氨基水杨酸对人型结核杆菌有高度的选择抑制作用，但无杀菌作用。过去常与异烟肼、SM联用治疗结核，取得较好的效果，后来因疗效差起效慢，且服用量大，副作用大，加之新的抗结核药的不断开发，现已少用。 3.乙胺丁醇（EMB） 乙胺丁醇地各种结核杆菌均有抑制作用，现几乎取代PAS在抗结核方面的应用，主要用于对INH、SM耐药的结核杆菌所致的各型肺结核及肺外结核。[3]为延缓耐药性的发生和增强疗效，常与SM、INH、RFP等合用。 4.异烟肼（INH）及其衍生物 异烟肼为抗结核病一线药物，它因抗结核作用强，毒性小，剂量小，价格低廉。而帕司烟肼以特殊方法将异烟肼与对氨基水杨酸分子化学结合，动物实验结果表示，比异烟肼的效果高5倍，而且毒性低，耐受性良好，容易服用，耐药发生率低。更适合儿童患者的治疗。丙硫异烟胺为异烟肼的衍生物，对结核分枝杆菌具有抑物或杀菌作用，其作用取决于药物的浓度和细菌的敏感度。丙硫异烟胺属于二线抗结核药，临床上与其它抗结核药物联合治疗经SM、INH、RFP及EMB等治疗无效的结核病。根据文献报告[4]，抗结核药中最常引起血液系统损害的药物为利福平和异烟肼，但主要表现为骨髓抑制。 5.吡嗪酰胺（PAZ） PZA是一种传统的抗结核药物，在细胞酸性PH环境里，吡嗪酰胺有强力的灭菌作用。在INH+RFP或其它化疗方案中加用PZA两个月进行强化治疗，能达到很高几乎无复发的治愈率。目前国外正在研制新的吡嗪酸类衍化物。吡嗪酰胺与异烟肼、利福平、乙胺丁醇等药物组合，是目前使用最广泛的抗痨化疗方案。[5]一直以来，均广泛应用于各种类型的肺结核及肺外结核病治疗，对各种初发或复发的肺结核及肺外结核，均有显著的疗效。 6.利福霉素类 利福平（RFP）至今任是现代短化治疗中的一个主要药物。其抗菌谱广，对细胞内外的菌群均有杀菌作用。利福喷丁（rifapenfine）与利福布汀（nifabufin），该药均为利福霉素的衍生物，但杀菌效果不及利福平。利福喷丁的蛋白结合率可达98%～99%。在组织中停留时间长，消除比较利福平长4～5倍，是一种长效抗结核药物。1周给药1～2次，每次500～600mg。利福布汀的妥脂性，透过细胞壁和干扰DNA 生物合成的能力高于利福平。利福布汀药代动力学更为显著，具有极强的膜穿透力及较高的亲脂性[6]。利福布汀属于新型的抗结核药物，具有较广的抗菌谱与较强的抗菌活性，且最低抑菌浓度明显低于利福喷丁。 7.氟喹诺酮类 氟喹诺酮类药物是一类化学合成的抗菌药物，该类药物对细菌的DNA旋转酶具有抑制作用，从而对DNA的正常形态、功能及复制、转录、转运、重组的过程产生影响，起到快速杀菌的作用，为临床治疗开拓了更为广阔的前景。近年来，全球相继有54个国家报道了耐氟喹诺酮类结核杆菌的出现。临床可用于该疾病治疗的氟喹诺酮类药物主要分作四类，加替沙星、司帕沙星、左氧氟沙星与莫西沙星[7]。不过其中的加替沙星会引发血糖异常与神经系统损害，而司帕沙星光敏反应明显。近年来，由日本第一制药株式会社开发生产的第4代喹诺酮类药物西他沙星也具有较好的抗结核分枝杆菌的作用。此外还有一些新型的氟喹诺酮类药物正处于临床前研究阶段。目前许多国家和地区已将氧氟沙星常规用于耐多药结核(MDR-TB)和复治肺结核患者的治疗，用药剂量300～800mg/d不等，长期用药患者耐受性较好。使用氟喹诺酮药物治疗结核病时须主要以下原则：①虽然氟喹诺酮类药物在治疗时显示较好的疗效，但其对结核分枝杆菌的MIC仍高于异烟肼和利福平，因此无特殊情况，还是应首选一线抗结核药物。②应根据药敏结果合用其他两种以上抗结核敏感药。③临床上对氟喹诺酮的治疗反应是剂量依赖。［8-9］ 8.阿莫西林/克拉维酸 阿莫西林克拉维酸钾联合治疗耐多药结核病，在痰菌阴转率和病灶明显吸收率方面，临床疗效十分显著。阿莫西林克拉维酸钾为阿莫
高致病性禽流感疫苗免疫
高致病性禽流感疫苗免疫 如何预防高致病性禽流感？ 对禽流感的预防必须采取综合性预防措施。养殖场应远离居民区、集贸市场、交通要道以及其他动物生产场所和相关设施等；不从疫区引进种蛋和种禽；对过往车辆以及场区周围的环境、孵化厅、孵化器、禽舍笼具、工作人员的衣帽和鞋等进行严格的消毒；采取全进全出的饲养模式，杜绝鸟类与家禽的接触；在养殖场中应专门设置供给工作人员出入的通道，对工作人员及其常规防护物品应进行可靠的清洗及消毒；严禁一切外来人员进入或参观动物养殖场区。在受高致病性禽流感威胁的地区应在当地兽医卫生管理部门的指导下进行疫苗的免疫接种，定期进行血清学监测以保证疫苗的免疫预防效果确实可靠。 是否有疫苗预防高致病性禽流感？ 我国已经成功研制出用于预防h5n1高致病性禽流感的疫苗。非疫区的养殖场应该及时接种疫苗,从而达到防止禽流感发生的目的。 高致病性禽流感推荐免疫方案是什么？ 一旦疫情发生，必须对疫区周围5公里范围内的所有易感禽类实施疫苗紧急免疫接种，同时，在疫区周围应建立免疫隔离带。疫苗接种只用于尚未感染高致病性禽流感病毒的健康禽群，种禽群和商品蛋禽群一般应进行2次以上免疫接种。免疫接种疫苗时，必须在兽医人员的指导下进行。 疫苗免疫对所有家禽都有效吗？能否考虑对野禽实施免疫？ 在家禽机体机能处于良好状态的情况下，疫苗免疫家禽后其有效率可达到80%或更高，但由于家禽的品种、遗传因素、营养状况、环境因素、疫苗质量、母源抗体、机体状态等原因，也会有一定差异。我国使用的h5n2灭活疫苗对鸡的免疫效果很好，但对鸭等水禽的免疫效果还有待于评估。我国于2005年研制成功的h5n1重组基因工程灭活疫苗对鸡的免疫效果优于h5n2灭活疫苗。 免疫禽流感灭活疫苗应注意什么？ 免疫灭活疫苗应注意：首先应在家禽机体情况良好的情况下进行；其次，灭活疫苗一般需免疫2次以上，采用肌肉接种；再次是在小日龄家禽作首次免疫时，应尽量避开母源抗体高峰期。另外，对鸭等水禽的免疫接种可能会产生一定的副反应。 世界上很多国家不主张使用禽流感疫苗免疫，如何评价中国禽流感免疫政策的合理性和科学性？ 为了彻底扑灭病原，在以往的高致病性禽流感防治工作中，一些发达国家基本上是采取扑杀措施，这便于从根本上消灭禽流感。但在一些国家则允许在紧急情况下使用疫苗，如1994年墨西哥是通过疫苗免疫最后才控制了疫情。巴基斯坦也采用疫苗免疫控制疫情的策略，美国允许火鸡使用禽流感灭活疫苗，意大利使用抵抗低致病力毒株的疫苗。但不提倡使用活疫苗。近期在意大利罗马召开的关于禽流感防治的会议上达成共识，把疫苗免疫作为控制高致病性禽流感的一项主要措施。我国是养殖大国，养殖户分散，养殖条件相对较差（特别是农户小型养殖场），控制禽流感难度较大，特别是在目前多省市、多地区同时出现禽流感的情况下，采用扑杀为主，同时进行疫苗免疫建立免疫隔离带是非常必要的，也是可行的。 目前，我国对疫点周围3公里内的家禽采取扑杀，疫区以外5公里范围内的家禽采取紧急免疫接种的措施来控制禽流感的流行。疫苗接种与扑杀相比在近期能降低经济损失，但遇到强毒攻击时，这些免疫的禽只虽然不表现发病症状，但是有可能因病毒不能从群体中被消除掉，而形成带毒免疫。所以，抓免疫的同时，还要抓扑杀，扑杀能彻底消灭传染源。 疫苗注射后多长时间能产生免疫保护？免疫期有多长？哪些因素影响禽流感的免疫效果？ 一般来说灭活疫苗注射后机体需14天才能产生免疫保护。疫苗的免疫期为4个月。在
抗结核药物的历史与研究进展
【关键词】结核病抗结核药物研究进展 抗结核药物是结核病化学治疗的基础，而结核病的化学治疗是人类控制结核病的主要手段。结核病化疗的出现使结核病的控制有了划时代的改变，全球结核病疫情由此得以迅速下降。 1 抗结核药物的历史 最早出现的有效抗结核药物当数链霉素（sm）。对氨水杨酸（pas）被应用于临床后发现，sm加pas的治疗效果优于单一用药，而且可以防止结核分支杆菌产生耐药性。发明异烟肼（inh）后，有人单用inh和联用inh+pas或sm进行对比治疗试验，再一次证明了联合用药的优势。于是在此基础上产生了著名的结核病“标准”化疗方案，即sm+inh+pas，疗程18个月～2 a，并可根据药源和患者的耐受性将pas替换为乙胺丁醇（emb）或氨硫脲（tb1），俗称“老三化”。70年代随着利福平（rfp）在临床上的应用以及对吡嗪酰胺（pza）的重新认识，在经过大量的实验后，短程化疗成为结核病治疗的最大热点，并取得了令人瞩目的成就。 2 抗结核药物的研究进展 当人类迈入21世纪的今天，抗结核药物的研究已经获得了更进一步的发展，其中最引人注目的主要是利福霉素和氟喹诺酮这两大类药物，尤其以后者更为突出。 2.1 利福霉素类 2.1.1 利福布丁（rbu） rbu对rfp敏感菌的最低抑菌浓度(mic)是低的，而对rfp耐药菌株的mic明显增高，此结果显示rfp与rbu存在交叉耐药。rbu的亲脂性、透过细胞壁和干扰dna生物合成的能力高于rfp，使之能够集中分布在巨噬细胞内而具有较强的活性。 2.1.2 苯并恶嗪利福霉素 1648（krm 1648） krm 1648属于3 羟 5 4 烷基哌嗪，比rfp的mic强16倍～32倍。单剂krm 1648（3 mg/kg）的疗效明显优于rfp（10 mg/kg），与he联用亦比rfp+he疗效佳。由于krm 1648比rfp有更强的杀菌作用，即使结核分支杆菌对rfp具耐药性，本药也能发挥一定的杀菌作用。