水产动物疾病学综合实验2015

水产动物疾病学综合实验安排

第一天第二天第三天第四天第五天

上午现场调查

给药方法操作：

泼洒法

挂袋挂篓

口服法鱼苗鱼种检查

成鱼检查

收集

锥体虫并染

色

染色：

锚头鳋、

中华鳋、

鲺

考试

下午鱼类甲壳动物病及

其病原体的观察

收集锚头鳋、中华鳋等

成鱼检查

收集车轮虫、锚

头鳋、中华鳋、

鱼虱等

收集车轮虫

并染色

染色交寄生虫染

色切片标本

水产动物疾病学综合实验指导

一、实验目的与要求：

1. 水产动物疾病学综合实验是为了满足现代水产养殖行业对生产、培养科研技术操作人员的需要，使学生掌握水产动物疾病学的基本知识及基本技能，同时培养学生的创新、创业及社会服务能力，成为水产养殖行业防病治病的技术人才。

2. 通过实验了解水产动物疾病种类及其特点；能较准确地诊断水产动物疾病。

3. 能正确地使用渔药，能有效地防治水产动物疾病。

二、实验内容：

1. 现场调查；

2. 渔药使用：泼洒法；挂袋挂篓法；口服法；

3. 显微镜诊断疾病；

4. 寄生虫标本的收集与染色；

三、实验操作及其步骤：

1.现场调查：

池塘是水生动物生存的基础，疾病的发生除了由病原生物直接感染和侵袭外，首先应了解池塘周围的环境和水体物理、化学因素的变化对养殖生物发病的影响。发病现场的调查可为全面查明发病原因，及时发现和正确判断病鱼提供依据。

①调查发病养殖水体环境和发病史

发病养殖水体环境是指养殖水体周围有哪些工厂，工厂是否排放污（废）水，这些污（废）水是否含有对鱼类有毒的物质，是否经过处理后排放等。同时，还要着重强调调查养殖水体情况，了解放养前清塘的方法、清塘药物的剂量、清塘

后放养鱼种的时间、鱼种消毒的药量等。这些与养殖生物疾病的发生关系较大，同时还应了解养殖水体近几年发生疾病的危害程度，以及所采用的防治方法和效果等。

②了解池塘水质状况

水温水温是养殖生物疾病发生的重要因素，水温高低与疾病的发生和流行有着密切的关系。一般病毒性鱼病和细菌性鱼病，在水温为25~30℃时传染性最强，32℃以上和18℃以下时感染减弱。因此江苏、浙江和湖南、湖北一带，每年5~6月和8~9月份是细菌病、病毒病流行高峰。暴发性鱼病需要需要的水温范围较大，流行的时间也更长些。有些寄生虫病，如车轮虫病和指环虫病是夏季危害鱼苗、鱼种的流行病，而有些疾病如水霉病、小瓜虫病、斜管虫病和鱼波豆虫病，通常在20℃以下发病，属于低温季节的流行病。

A.谁的酸碱度（pH）由于高密度养殖，池塘有机质多氢离子浓度微偏高

（pH偏低），易发生水霉病。酸性水也常常引起嗜酸性卵甲藻病的暴发。在氢离子浓度较低（pH较高）的盐碱养殖水体，水温较低时易大量繁殖三毛金藻，分泌毒素，致使池鱼中毒死亡。

B.溶解氧水中含氧量的多少关系到养殖生物的生长和生存，同疾病的发生

有明显的相关性。正常池塘的溶解氧含量要求4毫克/升，最低不能低于1毫克/升，对于各种不同的鱼类和不同的生长阶段，因其生理需求不一样而对溶氧的需求不同。溶解氧长时间过低会影响鱼类生长，降低鱼体的抗病能力，同时为病原菌的繁殖，生长创造了条件。

C.检测水质对发病水体进行水的pH、溶解氧、氨氮、亚硝酸盐、磷酸盐、

硬度、化学耗氧量的分析，了解水质的基本营养盐变化情况，对可能因环境因子致病的因素应根据具体情况选择分析。

③调查饲养管理情况

A.了解鱼种放养情况: 放养数量过多就会出现相互拥挤、摄食不足、生长不良

的现象，导致养殖生物体对疾病的抵抗能力降低，有利于病原菌的感染和传播。夏花培育至冬片鱼种一般亩放养量为7000~10000尾。

B.了解投饲和施肥状况: 投喂的饲料不新鲜或不按照“四定”投喂，鱼类很容

易患细菌性肠炎病。夏天在池塘内施用不经发酵的有机肥，易使池塘水质恶化、缺氧、并促使致病菌核寄生虫大量繁殖。

C.了解养育过程中的生产操作情况: 在养殖生产过程中往往由于放养鱼种、运

输和拉网操作不慎，造成鱼体受伤，使细菌、真菌和寄生虫等病原体乘机侵入伤口，引起多种鱼病，如赤皮病、白皮病、白头白嘴病、水霉病等。

因此，了解发病池塘水温、酸碱度、溶解氧的变化以及饲养管理和环境因子，对正确查明疾病的发病原因，及时合理拟定防治方案是很重要的。

2.渔药使用：

⑴泼洒法：

又称遍洒法，是药物防治鱼病时最常用的一种方法。通常采用对某些病原生物有杀灭作用，而对鱼无害的药物，在鱼池中全池遍洒，使药物达到一定的浓度，以杀灭鱼体表和水体中的病原生物，用以防治鱼病的方法称为泼洒法。泼洒时应尽量均匀泼洒，在上风处泼洒效果好。

⑵挂袋挂篓法:

其原理是将药物装在有微孔的器具中，使其在水中缓慢溶解，在池水中人为营造一定的药物区域，使养殖对象在能忍受的药物浓度范围内，利用其摄食过程主动地进入药物区域，接受药物治疗，达到杀灭或驱除体表和鳃部及药物有效作用区域病原体的目的。A. 挂篓法：是将100－150克漂白粉装入一个带盖的小竹楼中，每个食场悬挂3－6个竹楼在食场框架上，悬挂深度大约在水表层20－30厘米处，每天换药1次，每次消毒连挂3天。B. 挂袋法：是将100克硫酸铜、40克硫酸亚铁装入一个质地细密的布袋中对食场进行消毒的方法。技术要点: ①食物周围的药物浓度不宜过低或过高。浓度过低，鱼虽来吃食，但不能杀灭病原体；浓度过高，鱼不来吃食，也达不到防治鱼病的目的。所以挂药后注意观察，及时调整药袋(篓)数量或增减药量。

②食物周围药物浓度的保持时间，一般应不短于2～3小时，否则对迟来的

鱼就不能起到消毒的作用此外，鱼每次在食场停留时间短暂，一次不能全部杀灭病原体，需经多次反复。为了达到这一目的，在下雨天和刮大风时不应使用，以免药物有效浓度保持时间太短，宜选择天气好、风浪小时使用。③为了让鱼类在挂药后仍能前来摄食，可在挂药前停食1～2天。在用药的几天内，选择投喂鱼类适口饵料，或在投喂饲料中添加诱食剂，所投饵料量应比平时少，以保证鱼在次日仍能到食场吃食。④应选择对鱼有趋向反应的药物挂袋(篓)，不选用回避反应的药物。并控制药量不超过遍洒药量，鱼池开启增氧

机和注排水时应提起药袋(篓)。

⑶口服法:

口服法是把药物混入饵料投喂，它具有用药量少，操作方便，不污染环境，对不患病鱼，虾类不产生应激反应等特点。常用于增加营养，病后恢复及体内病原生物感染，特别是细菌性肠炎病和寄生肠虫病。但其治疗效果受养殖动物病情轻重和摄食能力的影响，对病重者和失去摄食能力的个体无效，对滤食性和摄食活性生物饵料的种类也有一定的难度。

口服给药的用量计算要考虑到鱼池中能摄食同一饵料的各种鱼，如做成药饵投喂发病的草鱼，必须考虑到草鱼、鲤鱼也会摄食。用药拌草投喂时应考虑到同池中鳊鱼也会摄食。药饵可根据鱼的生活习性制作，如草鱼应使用浮性药饵，将药物拌入到米糠和面粉（或榆树粉）中，米糠和面粉的药物的比例为3:1，充分拌匀后加热水调和，捏成软硬适度的块状，或压成药条或切成小块，晾干投喂。用于青鱼、鲤鱼的药饵要将药物拌入菜饼粉及面粉（或榆树粉）中。菜饼粉和面粉药物比例为5:1，充分拌匀后加热水调和，按上法制成沉性颗粒投喂。如用药物拌青饲料投喂，可将少量面粉用温水调和煮成糊状，冷却后拌入药物，再与嫩青草拌和，晾干后投喂。

3.显微镜诊断疾病：

由于疾病的发生情况比较复杂往往存在多种并发症，肉眼通常局限于观察疾病的外表症状和大型寄生虫引起的鱼病，则需要经过显微镜检查。

①体表：用解剖刀刮取少许黏液置于载玻片，加滴适量的蒸馏水盖上盖玻片，放在显微镜下检查是否有寄生虫。

②鳃丝：用小剪刀剪取一小块鳃组织放在载玻片上，加滴适量的蒸馏水盖上盖

玻片，放在显微镜下检查是否有寄生虫和异常变化。

③肠道：剖开腹腔取出肠道，剪开肠管，分别取前、中，后三段肠壁上的少许

黏液置于载玻片上，滴上适量的生理盐水，加盖玻片放在显微镜下检查。寄生在肠道内的寄生虫有黏孢子虫、球虫、肠袋虫、六鞭毛虫以及复殖吸虫、绦虫和线虫的虫卵。

④镜检注意事项

a)检查鱼体（刚死或未死的病鱼）和取出的各器官要保持湿润。

b)检查器官用过的解剖工具，须洗净、消毒后再用。

c)使用显微镜时，先用低倍镜后用高倍镜检查。没有显微镜也可用倍数较

高的放大镜。

d)检查病鱼的尾数与肉眼检查相同。

⑤各种病原体的计数

传染性鱼病。如草鱼出血病、烂鳃病、白皮病、赤皮病等。按病状的严重程度分别用“+”表示轻微；“++”表示较重；“+++”表示严重。还需用文字描述病状的情况。

原生动物的个体小，并且不同种类个体大小差异有很大，纤毛虫、毛管虫在低倍显微镜（10×10）视野下有1-20个虫体记“+”；21~50个记“++”，51个以上记“+++”。小瓜虫除按上面标准计数外，如计算囊泡时，则可用文字说明。鞭毛虫、变形虫、孢子虫则以显微镜的高倍（10×40）视野为单位，具体标准同上。胞囊的计数。用文字说明。

单殖吸虫、线虫、绦虫、棘头虫、甲壳动物、软体动物的幼虫，在50个一下均以数字说明，例如，一片鳃，一段肠子里的虫体数。（低倍显微镜为10×8；高倍显微镜为10×40。病原体的数量，用载玻片镜检时，都是以同一玻片中观察3个视野的平均标准）

4.寄生虫标本的收集与染色：

⑴车轮虫

收集：载玻片收集。车轮虫常寄生在鱼的鳃和体表，当在显微镜（10×10）下观察到车轮虫时，取下盖玻片，将载玻片晾干，贴上标签，放入载玻片盒即可。

染色：硝酸银染色法：主要是用染车轮虫的齿环等结构。

具体操作：是把空气中晾干的涂片（载玻片），平放于桌上，用吸管吸取2%硝酸银液滴于涂片上，将涂片移到近窗口光线强处（避免直射阳光）0.5～1小时，然后弃掉片子上的染液，用清水轻轻冲去硝酸银液。放入清水中泡洗1～2小时，取出晾干，对于染色较好的切片用中性树胶封固。

（2）锥体虫

收集：载玻片收集。锥体虫常寄生在鳝鱼的血液中。当在显微镜（10×10）下观察到锥体虫时，取下盖玻片，将载玻片晾干，贴上标签，放入载玻片盒即可。

染色：吉姆萨染色法。

具体操作：将在空气中晾干的血液涂片（载玻片），放在甲醇中固定5分钟，取出，让它在空气中晾干。然后将稀释的吉姆萨染色液滴在涂片上，静置2小时以上，弃掉染色液，用中性水（即蒸馏水和自来水各半混合）冲洗0.5～1分钟，取出晾干，然后镜检，如果染色过深，用85%的酒精褪色0.2～0.5分钟，再镜检。对于染色较好的切片用中性树胶封固。

（3）复殖吸虫、绦虫、棘头虫

收集：载玻片压片法收集。复殖吸虫、绦虫、棘头虫等通常寄生在鱼类的肠或胃中，有的肉眼可见；有的则需在低倍显微镜（10×10，10×4）或解剖镜下观察，用镊子或解剖针小心挑取虫子，放到载玻片上，然后将另一载玻片轻轻压上，用细线系好，放入70%酒精中固定，第二天补加70%酒精。

染色：步骤①水化：由70%酒精中取出标本退至50%酒精→30%酒精→蒸馏水，每一阶段约10-15分钟。②用硼砂洋红染色。染色4～6小时后，水洗。用自来水慢慢冲洗至少1～2分钟（或多次换水）。

③脱水：自30%酒精→50%→70%→80%→90%→95%（Ⅰ）→95%（Ⅱ）→100%（Ⅰ）→100%（Ⅱ）→1/2100%酒精+1/2二甲苯，每一阶段需停留10～15分钟。时间也要延长一些。标本愈大，每一次脱水阶段停留的时间也要增长。从100%酒精开始，松开载玻片，放入无水酒精（Ⅱ）1/2无水酒精+1/2二甲苯接着升至纯二甲苯中，到虫体透明为止。

④封片：虫体透明后，挑取虫体迅速滴入中性树胶，盖上盖玻片，待中性树胶阴干后，贴上标签，装入载玻片盒。

（4）中华鳋、锚头鳋、鱼虱

收集：在收集这类虫子时要小心，不能损坏虫体。固定前，标本应充分洗涤干净用4%的福尔马林固定，第2天换液，并用4%的福尔马林保存。

染色：步骤①水洗，24~48小时，去除福尔马林。或用自来水慢慢冲洗2小时（或多次换水）以上；②用硼砂洋红染色。染色4～6小时后，水洗。用自来水慢慢冲洗至少1～2分钟（或多次换水）。

③脱水：自30%酒精→50%→70%→80%→90%→95%（Ⅰ）→95%（Ⅱ）→100%（Ⅰ）→100%（Ⅱ）→1/2100%酒精+1/2二甲苯，每一阶段需停留15～20分钟。时间也要延长一些。标本愈大，每一次脱水阶段停留的时间也要增长。从100%酒精开始，松开载玻片，放入无水酒精（Ⅱ）1/2无水酒精+1/2二甲苯接着升至纯二甲苯中，到虫体透明为止。

④封片：虫体透明后，挑取虫体迅速滴入中性树胶，盖上盖玻片，待中性树胶阴干后，贴上标签，装入载玻片盒。

5. 药品的配置

①吉姆萨染液：适于染血液涂片

吉姆萨液3～5毫升

蒸馏水3毫升

缓冲液1毫升

其缓冲液pH为6.4，配法：

磷酸二氢钾 6.63克

磷酸二氢钠 2.56克

蒸馏水1000毫升

吉姆萨液的配法是：取吉姆萨粉剂0.76克，溶于60℃的50毫升甲醇中，然后加入60℃的甘油50毫升。不断地搅拌。混合均匀。并放在干燥箱中过滤，其过滤液即为母液。

②各种浓度的酒精：市上出售的普通酒精，通常浓度是95%。如需要各种不同的浓度，可自行配制。如要配50%的酒精，可量50毫升的酒精，加入45毫升的蒸馏水即成。如果要配制70%的酒精，可量70毫升95%的酒精，加入25毫

升的蒸馏水即成。其余各种浓度可依此类推。

③福尔马林溶液：福尔马林又称甲醛溶液，市售一般含甲醛36-40%，但在配制各种浓度的福尔马林液时，都是以市售福尔马林为100%。所以，要配制5%福尔马林，取5毫升市售的福尔马林溶液，加95毫升水即成。配置10%福尔马林液，取10毫升甲醛液，加入90毫升的水即成。

④硼砂洋红：用于染完整寄生虫。

洋红1-2克

4%的硼砂水溶液100毫升

70%酒精100毫升

将洋红加入硼砂水溶液中。煮开至完全溶解，然后加入酒精，静置数天过滤，即可使用。