养殖场饮用水微生物检测方法的建立
养殖场饮用水微生物检测方法的建立
养殖场饮用水质量直接关系到畜禽健康及生产水平。养殖场饮用水受到微生物污染会引起畜禽肠道疾病反复发作。养殖场饮用水受到微生物污染的途径很多：浅井水和地表水易受畜禽粪便污染；供水塔、贮水池及输水管道长期不清洗会造成微生物滋生；饮水线中残留有药物载体（淀粉、葡萄糖等）会成为细菌长期滋生的基质。养殖场应该定期检测饮用水的微生物指标，为开展饮水系统的清洁与消毒工作提供依据。
人的饮用水微生物指标由专业机构检测，依据
GB/T5750.12-2006《生活饮用水标准检验方法》，动物饮用水和人的饮用水微生物指标最好一致，但是养殖场饮用水易受污染，尤其是饮水线末端的水，因此养殖场饮用水微生物检测需求多，频繁送水到专业机构检测既不现实又不经济。笔者多次对养殖场饮用水进行微生物检测，总结出一套简便易行的检测方法，检测结果与GB/T5750.12-2006的标准方法有很好的一致性，适于在养殖场或基层畜牧兽医实验室推广应用。
1实验原理
1.1评价指标
评价水质清洁度有三个重要指标：菌落总数、总大肠菌群、耐热大肠菌群。总大肠菌群指自然环境中的大肠菌群，用提高培养温度的方法可以将自然环境中的大肠菌群与粪
便中的大肠菌群区分开，因此耐热大肠菌群的检出是水质被粪便污染的标志。
1.2指标限值
养殖场贮水池、水塔、饮水线入口三处水质的微生物学指标是：菌落总数 2实验方法 2.1水样采集 分别采集供水塔或蓄水池，饮水线入口，饮水线末端三处的水样，装入灭菌容器中。 2.2实验器材 2.2.1仪器设备高压蒸汽灭菌器，干热灭菌箱，恒温培养箱（2台），水浴锅，天平，菌落计数器。 2.2.2实验耗材试管，平皿，吸管、三角烧杯、玻璃瓶等，耗材使用前要干热灭菌。 2.3培养基 营养琼脂，双料乳糖蛋白胨培养液（常规乳糖蛋白胨培 养液除蒸馏水外其他成份加倍），伊红美蓝培养基，这些培养基可以使用市售的成品，也可以按下面方法自制：营养琼脂：蛋白胨10g，牛肉膏3g，氯化钠5g，琼脂15g，蒸馏水1000 mL，这些成分混合后，水浴加热溶解，调整PH 值为7.4-7.6，121℃高压灭菌20 min。 双料乳糖蛋白胨培养液：蛋白胨20g，牛肉膏6g，乳糖10g，氯化钠10g，溴甲酚紫乙醇溶液（16g/L）2mL，蒸馏水1000mL，先将蛋白胨、牛肉膏、乳糖和氯化钠溶于蒸馏水中，调整PH值为7.2-7.4，再加入2mL的溴甲酚紫乙醇溶液，充分混匀，分装于装有倒立小试管的大试管中，每管10mL，115℃高压灭菌20min。 伊红美蓝培养基：蛋白胨10g，乳糖10g，磷酸氢二钾2g，琼脂25g，蒸馏水1000mL，伊红水溶液（20g/L）20mL，美蓝水溶液（5g/L）13mL，将蛋白胨，磷酸氢二钾和琼脂溶解于蒸馏水中，调整PH值为7.2-7.4，加入乳糖，115℃高压灭菌20 min，冷却至50℃左右加入伊红和美蓝溶液，混匀，倾注平皿。 2.4接种与培养 2.4.1水样稀释先充分混匀水样，无菌操作吸取1mL水样注入9mL灭菌生理盐水中，混匀成1：10稀释液，同法倍比稀释1：100、1：1000、1：104、1：105、1：106的稀释液。 2.4.2营养琼脂接种用灭菌吸管分别吸取1mL未稀释的 水样和各稀释度的水样，注入不同的灭菌平皿中，然后倒入15mL左右已融化并冷却至45℃左右的营养琼脂，立即轻轻 旋摇平皿将水样与培养基混匀，待培养基冷却凝固后放入湿盒中在37℃培养48h后进行菌落计数。 2.4.3双料乳糖蛋白胨培养液接种取10管双料乳糖蛋白 胨培养液，每管无菌接种10mL未稀释的水样，接种后5管 置于37℃培养24h，作为总大肠菌群检测，5管置于44.5℃培养24h，作为耐热大肠菌群检测。 2.4.4伊红美蓝琼脂接种取双料乳糖蛋白胨培养液产酸 产气管（37℃或44.5℃培养，培养液变黄，倒立小试管浮起，内含气泡），用接种环蘸取少量培养液，在伊红美蓝琼脂上 进行细菌划线分离接种，按接种的双料乳糖蛋白胨培养液的培养温度分别置于37℃或44.5℃培养24h。 3结果判定 3.1菌落总数判定 选择平均菌落数在30～300之间的培养皿进行计数，如果所有稀释度菌落数都>300，则计数最高稀释度平皿菌落数；如果所有稀释度的菌落数都<30，则计数最低稀释度平皿菌 落数；如果所有稀释度平皿菌落数都不在30～300之间，则计数最接近30或300的平皿。计数后，再乘以稀释倍数， 得出每毫升水样菌落总数（CFU/mL）。 3.2大肠菌群判定 观察37℃培养的双料乳糖蛋白胨培养液，产酸产气者为大肠菌群疑似阳性管，疑似阳性管经37℃伊红美蓝琼脂分离培养后观察有紫黑色或边缘浅紫红色中心紫黑色，略带金属光泽的特征菌落，证实为阳性管，根据阳性管数，按表1判定每100mL水样总大肠菌群最可能数（MPN/100mL）。 3.3耐热大肠菌群判定 观察44.5℃培养的双料乳糖蛋白胨培养液，产酸产气者为耐热大肠菌群疑似阳性管，疑似阳性管经44.5℃伊红美蓝琼脂分离培养后观察有3.2中描述的特征菌落，证实为阳性管，同样按表1判定每100mL水样耐热大肠菌群最可能数（MPN/100 mL）。 3.4结果 菌落总数、总大肠菌群、耐热大肠菌群三项指标低于1.2中的指标限值报告水样微生物检测合格，高于则报告不合格。 4总结 两年来，笔者定期对某种猪场、某种禽场进行饮用水微生物指标检测，指导两场合理进行饮水系统的清洗和消毒，种猪场仔猪黄白痢、种禽场禽腹泻病的发生率明显下降，同时减少了预防性投药。建议养殖场将饮用水微生物检测做为疫病综合防控措施之一开展起来。 养殖场饮用水微生物检测方法的建立 养殖场饮用水质量直接关系到畜禽健康及生产水平。养殖场饮用水受到微生物污染会引起畜禽肠道疾病反复发作。养殖场饮用水受到微生物污染的途径很多：浅井水和地表水易受畜禽粪便污染；供水塔、贮水池及输水管道长期不清洗会造成微生物滋生；饮水线中残留有药物载体（淀粉、葡萄糖等）会成为细菌长期滋生的基质。养殖场应该定期检测饮用水的微生物指标，为开展饮水系统的清洁与消毒工作提供依据。 人的饮用水微生物指标由专业机构检测，依据 GB/T5750.12-2006《生活饮用水标准检验方法》，动物饮用水和人的饮用水微生物指标最好一致，但是养殖场饮用水易受污染，尤其是饮水线末端的水，因此养殖场饮用水微生物检测需求多，频繁送水到专业机构检测既不现实又不经济。笔者多次对养殖场饮用水进行微生物检测，总结出一套简便易行的检测方法，检测结果与GB/T5750.12-2006的标准方法有很好的一致性，适于在养殖场或基层畜牧兽医实验室推广应用。 1实验原理 1.1评价指标 评价水质清洁度有三个重要指标：菌落总数、总大肠菌群、耐热大肠菌群。总大肠菌群指自然环境中的大肠菌群，用提高培养温度的方法可以将自然环境中的大肠菌群与粪 便中的大肠菌群区分开，因此耐热大肠菌群的检出是水质被粪便污染的标志。 1.2指标限值 养殖场贮水池、水塔、饮水线入口三处水质的微生物学指标是：菌落总数 自来水的饮用标准及常见的检测指标 一、自来水能否饮用？ 自来水厂生产的水是符合饮用标准的。但是，这并不表明它是标准的饮用水。原因有二：（1）自来水在生产过程中用氯净化水虽可杀死病原微生物等有害物质，但加入氯本身又可造成新的化学污染。氯可与水中的有机物生成三氯甲烷，它是一种致癌物质。同时，氯还破坏营养，易导致心脏病。（2）在自来水的管网中，长距离管道运输，管道陈旧生锈，城市高楼水箱和楼群蓄水池不清洁或常年使用不消毒，都可造成二次污染。二次污染使细菌、病毒和藻类繁殖，再加上原有的氯及氯化物、铁锈、重金属、放射性物质、使水体浑浊、有异味，其害无穷。所以说，自来水并不是标准的饮用水。在各种污染日益加重的环境下，我们喝到身体里的水一定要有严格的标准。还水的本来面目，喝纯净水才符合人体的需要，并且喝生水比喝开水更有利于人的健康。因为开水失去氧气太多，喝开水不利于向人体供氧。可能有的朋友要说，我喝了一辈子自来水，身体不照样挺好的吗？其实不然，首先，人体的疾病是个积累和渐进的过程，如果您不饮或少饮不洁的水，身体肯定比现在更健康。其次，现在的水环境也不能与若干年前相比。以前的水污染主要来源于有机物和自然界的污物，主要污染物质为细菌和病毒，因此，经过煮沸后的自来水基本可以达到消毒的目的。而现代水污染我们以上已经讲到，主要是工业废水中的化学污染和重金属，而这些污染物通过把水煮沸的办法是不可能去除掉的。因此，煮沸的开水同样不是标准的饮用水。 二、为什么自来水有时发浑、发白、发黄 1．发浑的原因主要是因城市供水管道实发性爆管，在抢修过程中带入了泥沙。当打开供水阀门恢复通水时，泥沙随着水流的冲击，可能造成局部、短时的浑水现象，很快就会恢复正常。 2．发白的原因主要是供水管网中溶入了空气，经压力作用分解成微小气泡（凭肉眼观察不到），气泡的紧密排列就会感觉到流出的水呈乳白色，当在容器中静止数分钟后，随着气泡消失，水就会变清。这种现象不会影响到自来水水质。另一种原因，某些二次供水储水池（箱）微生物超标，投加了漂白粉产生一种轻微白灰色。漂白粉主要成分为Ｃａ（ＣｌＯ）２、Ｃａ（ＯＨ）２、ＣａＣｌ２等成分，主要有效成分是次氯酸钙：２Ｃａ（ＣｌＯ）２＋２Ｈ２Ｏ＝Ｃａ（ＯＨ）２＋ＣａＣｌ２＋２ＨＯＣｌ。当放水后，流出水的颜色是一种轻微白灰色，并能闻到轻微刺鼻氯气味，待静置数分钟后，有很少量微小颗粒沉淀物（一般情况不会有）。这种现象不会危害人体健康。如你感兴趣的话，可以用白色透明杯观察水的颜色。打开水龙头放水，将水流入杯中后观察水的颜色，如水发白，你可以观察到白色逐渐从杯底向上变清，这就是水中溶入了气体的现象。也就是水中微小气泡逐渐从杯底向上逸出，逐步变清，而且透明。如水中投加漂白粉，流入杯中水，排除气泡形成水发白外，观察杯中水仍然有轻微白灰色，能闻到轻微氯气味。 3. 发黄原因有两个。一是从用户总表后第一个阀门至用户家中的镀锌管道因长年使用或管材质量问题造成锈蚀而形成的自来水二次污染。这种现象在早晨尤为突出。二是使用二次供水设施水的用户，因产权单位未按规定定期清刷、清毒水池及水箱，容易造成自来水的二次污染。 三、常见水处理技术 随着人类物质生活的提高,环境污染的程度也日趋严重,特别是对水的污染尤为严重,为了人类的健康,而产生了净化水的概念,最原始的水处理方法是通过沉淀的方法,是混浊的水变清, 但这只能除去水中的泥沙等肉眼能见大颗粒,而对看不见的有害菌束手无策,进而人们用消毒 生活饮用水检测标准 生活饮用水卫生标准是从保护人群身体健康和保证人类生活质量出发，对饮用水中与人群健康的各种因素（物理、化学和生物），以法律形式作的量值规定，以及为实现量值所作的有关行为规范的规定，经国家有关部门批准，以一定形式发布的法定卫生标准。 生活饮用水卫生标准可包括两大部分：法定的量的限值，指为保证生活饮用水中各种有害因素不影响人群健康和生活质量的法定的量的限值；法定的行为规范，指为保证生活饮用水各项指标达到法定量的限值，对集中式供水单位生产的各个环节的法定行为规范。 生活饮用水的水质标准： 1．为防止介水传染病的发生和传播，要求生活饮用水不含病原微生物。 2．水中所含化学物质及放射性物质不得对人体健康产生危害，要求水中的化学物质及放射性物质不引起急性和慢性中毒及潜在的远期危害（致癌、致畸、致突变作用）。 3．水的感官性状是人们对饮用水的直观感觉，是评价水质的重要依据。生活饮用水必须确保感官良好，为人民所乐于饮用。 生活饮用水水质标准共35项。其中感官性状和一般化学指标15项，主要为了保证饮用水的感官性状良好；毒理学指标15项、放射指标2项，是为了保证水质对人不产生毒性和潜在危害；细菌学指标3项是为了保证饮用水在流行病学上安全而制定的。 科标能源实验室科提供一些水质检测项目，如下： 色度浑浊度臭和味肉眼可见物PH总硬度（以CaCO3计）铁铝铜锰锌挥发酚类（以苯酚计）阴离子合成洗涤剂硫酸盐氯化物溶解性总固体耗氧量（以O2计）砷镉铬（六价）氰化物铅氟化物汞硝酸盐（以N计）硒四氯化碳三氯甲烷菌落总数总大肠菌群耐热大肠菌群游离余氯总α放射性总β放射性硫化物锑钠钡铍硼镍钼铊银二氯甲烷一氯二溴 生活饮用水标准检验方法 微生物指标 1 菌落总数 1.1平皿计数法 1.1.1范围 本标准规定了用平皿计数法测定生活饮用水及其水源水中的菌落总数。 本法适用于生活饮用水及其水源水中菌落总数的测定 1.1.2术语和定义 下列术语和定义适用于本标准。 1.1. 2.1 菌落总数 standard plate-count bacteria 水样在营养琼脂上有氧条件下37℃培养48h后，所得1mL水样所含菌落的总数 1.1.3 培养基与试剂 1.1.3.1 营养琼脂 1.1.3.1.1 成分： A 蛋白胨10g B 牛肉膏 3 g C 氯化钠5g D 琼脂10g~20g E 蒸馏水1000mL 1.1.3.1.2 制法：将上述成分混合后，加热溶解，调整pH为7.4～7.6，分装于玻璃容器中（如用含杂质较多的琼脂时，应先过滤），经103.43kPa（121℃，151b）灭菌20min，储存于冷暗处备用。 1.1.4 仪器 1.1.4.1 高压蒸汽灭菌器。 1.1.4.2 千热灭菌箱。 1.1.4.3 培养箱36℃±1℃。 1.1.4.4 电炉。 1.1.4.5 天平。 1.1.4.6 冰箱。 1.1.4.7 放大镜或菌落计数器。 1.1.4.8 pH计或精密pH试纸。 1.1.4.9 灭菌试管、平皿（直径9cm）、刻度吸管、采样瓶等。 1.1.5 检验步骤 1.5.1 生活饮用水。 1.1.5.1.1 以无菌操作方法用灭菌吸管吸取1mL充分混匀的水样，注入灭菌平皿中，倾注约15mL 已融化并冷却到45℃左右的营养琼脂培养基，并立即旋摇平皿，使水样与培养基充分混匀。每次检验时应做一平行接种同时另用一个平皿只倾注营养琼脂培养基作为空白对照。 设为首页 加入收藏 联系站长首页食品资讯政策法规生产技术质量管理检验技术仪器设备食品标准资料中心食品图库食品人才食品安全食品课堂专业英语食品专题食品网刊食品网址食品百科个人空间食品论坛 水质微生物 一、水质微生物及指示菌 在各种水体，特别是污染水体中存在有大量的有机物质，适于各种微生物的生长，因此水体是仅次于土壤的第二种微生物天然培养基。水体中的微生物主要来源于土壤，以及人类的动物的排泄物及污染。水体中微生物的数量和种类受各种环境条件的制约。 一般认为，水中微生物以革兰氏阴性杆菌占有较大优势。与其他水体相比，河水及溪水中革兰氏阳性菌相对较多，这是因为陆地微生物冲洗污染的缘故。 水体中的致病性微生物一般并不是水中原有微生物，大部分是从外界环境污染而来，特别是人和其它温血动物的粪便污染。水中常见的致病性细菌主要包括：志贺氏菌、沙门氏菌、大肠杆菌、小肠结炎耶尔森氏菌、霍乱弧菌、副溶血性弧菌等。 在实际控制中，对水质卫生质量的评价和控制，是无法对各种可能存在的致病微生物一一进行检测，而一般利用对指示菌的检测和控制，来了解水体是否受到过人畜粪便的污染，是否有肠道病原微生物存在的可能，从而评价水的质量，以保证水质的卫生安全。 目前，世界各国一般认为大肠菌群是指示水质受粪便污染较好的指示菌。 我国水质控制也采用大肠菌群作为指示菌，GB5749-85《中华人民共和国国家标准生活饮用水卫生标准》规定，生活饮用水中大肠菌群每升不得超过3个。 在某些情况下，水体中的细菌总数也可指示水体受粪便等污染物污染的情况。这里的细菌总数其实是指营养琼脂培养后形成的菌落总数。目前世界各国对于控制饮用水的卫生质量，除采用大肠菌群等指标外，一般还采用细菌总数这个指标。我国GB5749-85《中华人民共和国国家标准生活饮用水卫生标准》中规定生活饮用水细菌总数每毫升不得超过100个。 二、水质微生物检验方法 GB5750-85《中华人民共和国国家标准生活饮用水标准检验法》提供了水质中细菌总数和总大肠菌群的检测方法。 （一）细菌总数的检测： 生活饮用水标准检验方法 在各种水体，特别是污染水体中存在有大量的有机物质，适于各种微生物的生长，因此水体是仅次于土壤的第二种微生物天然培养基。水体中的微生物主要来源于土壤，以及人类的动物的排泄物及污染。水体中微生物的数量和种类受各种环境条件的制约。 一般认为，水中微生物以革兰氏阴性杆菌占有较大优势。与其他水体相比，河水及溪水中革兰氏阳性菌相对较多，这是因为陆地微生物冲洗污染的缘故。 《中华人民共和国国家标准生活饮用水标准检验法》提供了水质中细菌总数和总大肠菌群的检测方法。 1、国家标准中，细菌总数是指1ml水样在营养琼脂培养基中，于37℃经24h培养后，所生长的细菌菌落的总数。 对生活饮用水，直接吸取1ml水样于平皿中，加入营养琼脂后混匀，37℃培养24h，进行计数。 对水源水，根据情况对样品进行10倍梯度稀释，选择适宜稀释液1ml，加注平皿，营养琼脂混匀，37℃培养24h，进行计数。 按照规定格式报告每毫升水中细菌总数。 2、国家标准中，利用总大肠菌群作为粪便污染的指标。总大肠菌群是指一群需氧及兼性厌氧的，37℃生长时能使乳糖发酵，在24h内产酸产气的革兰氏阴性无芽胞杆菌。水样中总大肠菌群数的含量，表明水被粪便污染的程度，而且间接地表明有肠道致病菌存在的可能。 国家标准物质提供了多管发酵法及滤膜法检测总大肠菌群的方法。 3、多管发酵法检测总大肠菌群，分为三步：初发酵试验，平板分离，复发酵证实试验。 初发酵试验，采用乳糖蛋白胨培养液37℃培养24h，观察产酸产气情况。对阳性管培养物，接种于品红亚硫酸钠培养基或伊红美蓝培养基，观察菌落特征，并进行革兰氏染色和镜检。对典型和可疑菌落，接种于乳糖蛋白胨培养液，进行复发酵证实试验，并根据标准所附检数表报告结果。 其中，对生活饮用水，初发酵试验接种水样总量300ml，即100ml接种2管，10ml接种10管，采用两个稀释度，12支发酵管。对水源水，初发酵试验接种水样总量55.5ml，即10ml接种5管，1ml接种5管，0.1ml接种10管，共采用三个稀释度，15支发酵管。两种接种方法，所用的检数表是不同的。 4、滤膜法检测总大肠菌群，就是利用微孔滤膜，过滤一定量水样，将水样中含有的细菌截留在滤膜上，然后将滤膜帖放在选择性培养基上(如品红亚硫酸钠培养基)，经培养和证实试验后，直接计数滤膜上生长的典型大肠菌群菌落，并计算出每升水样中含有的总大肠菌群数 注意;菌落总数测定中，应选择合适的稀释度进行。生活饮用水，国家标准规定每毫升不得超过100个，因此可以直接吸取1毫升到平板进行培养。 培养时间。与食品中菌落计数不同，测定水中细菌总数，培养时间采用24h。 生活饮用水微生物检验方法和评价标准分析 发表时间：2018-01-12T16:04:32.283Z 来源：《中国误诊学杂志》2017年第23期作者：刘杰 [导读] 在本文中，笔者将针对生活饮用水中的卫生检测进行讨论，特别是针对总大肠菌群的两种检验方法进行讨论。 天津市宁河区疾病预防控制中心检验科 301500 摘要：生活饮用水对社会上生存的每一个人来说都是必不可少的，国家政府和相关部门要保障人们的生活质量水平和身心健康就必须要重视起用水安全问题，这样才能更好的维持社会的安全和稳定。在本文中，笔者将针对生活饮用水中的卫生检测进行讨论，特别是针对总大肠菌群的两种检验方法进行讨论，希望能够帮助民众在未来更加安全、放心的用水。 关键词：生活饮用水；微生物检验；方法和评价 伴随着社会经济建设的不断发展，人们的生活水准也有了质的飞跃。在当前这个时代，由于时代不断地进步，以及民众自身经济水平的提高，对生活质量也有了更高的要求。而生活饮用水的质量问题，就是民众最为关注的问题之一。这不仅仅是因为生活饮用水关系到民众日常的生活和生产，更是因为生活饮用水的质量直接关系到民众的身体健康。对于普通人来说，水是必不可少的。从生理学上来解释，水不仅仅是人体构成的重要物质之一，同时对于人体体温的调节以及人体的新城代谢都有着极为重要的作用。在这样的情况下，不仅仅是民众个体，政府自然而然也会重视起生活饮用水的质量问题。而我国政府，更是根据社会情况的不同，多次修改了生活饮用水的质量标准，希望能够为民众带来更加便捷、绿色的生活。 一般情况，生活饮用水都需要经过过滤、沉淀、消毒等步骤，让水中有害的微生物有效减少后再进行供水使用，避免造成人体上的不适。然而，从目前的情况上来看，水源污染、用水质量不合格、供水管道损害等情况时有发生，威胁到民众的用水安全。因此，在这样的情况下，如何提高生活饮用水质量，保障民众的用水安全就成了国家政府和相关部门最为重要的议题之一。而除开因为供水管道损害在供水过程中造成的水污染，加强生活饮用水微生物检验就成了保障用水安全的重要手段之一。就目前我国的情况来说，对于生活饮用水的质量需要达到在2006年底由卫生部和国家标准化管理委员会修订并于2007年7月1日全面实施的《生活饮用水卫生标准》（GB5749-2006）的要求。新的《生活饮用水卫生标准》对于水质的要求更加严格，水质指标从原来的35项增加至106项，总共增加了71个项目。而在这71个项目中，对于微生物指标也增加了4项，同时规定CFU/mL为100，并且绝对不能检出总大肠菌群。在本文中，笔者就将针对总大肠菌群的两种检测方法进行分析，判断出其中的差别。 一、多管发酵法 对管发酵法是针对民众生活饮用水中总大肠菌群的检测方法之一。此方法是根据总大肠菌群的特性来进行。由于总大肠菌群属于革兰氏阴性无芽胚杆菌，因此当培养温度达到37摄氏度的时候，如果进行24小时的培养，那么就会发酵乳糖并产出酸和糖，同时还具有厌氧和需氧的特性。 （一）实验器材 冰箱、灭菌试管、灭菌吸管、载玻片、试管（带试管塞）、小倒管、试管架、量筒、酒精灯、恒温箱、移液管、吸耳球、接种环、蛋白胨培养液、EC培养液、烧杯、玻璃棒、电子天平、取样勺、标签纸、记号笔、灭菌锅、蒸馏水、洗瓶、其他辅助实验器材等（二）实验步骤 1）首先要在双料乳糖蛋白胨培养液以及单料蛋白胨培养液中放入不同量的水样。水样的量可选取10mL和1mL，而蛋白胨培养液分别需要10mL。在此之后，还需要采取1mL的水样与9mL的无菌生理盐水混合到一起。然后再将此溶液取1mL放进单料乳糖蛋白胨培养液中，并且对于每一种稀释度的样品进行5管接种。 2）在进行水样取样的时候，如果发现水源被污染的十分严重，那么就需要加大稀释度。而如果水样少于1mL的时候，那么在稀释的时候应当稀释10倍再进行接种。当然在接种的时候应当采取逐次递增的方式来进行稀释，稀释的时候还需要注意，所采用的吸管必须要是灭菌吸管。 3）在接种之后，就需要将其放入恒温为37摄氏度的恒温箱中进行培养，培养应当要持续24小时。24小时之后，需要对试管进行观察，看其中是否有酸和气的产生。如果没有产生酸和气，那么对于总大肠菌群的检测结果为阴性。如果有，那么还需要进行其他的操作来进行检验。 4）当发现试管中溶液产生了酸和气的时候，首先要将溶液放置于伊红美蓝琼脂板之中进行转种，并且在放入恒温箱中进行时间为24小时的培养。24小时之后对伊红美蓝琼脂板上的菌落进行观察并进行染色，随后再采用镜检的方式来查看其结果。如果证实为革兰氏阴性无芽胚杆菌，那么还需要使用乳糖蛋白胨培养液来进行培养，并且同样需要放置于恒温箱中度过24小时的培养期。如果发生了产酸气的现象，那么总大肠菌群结果则为阳性。 二、滤膜法 使用滤膜法对总大肠菌群进行检测，可以十分精确的检测出水样中的总大肠菌群。采用滤膜法主要是采用对水样过滤的方式来进行，其大致的操作方法就是通过对乳糖黏贴微孔滤膜，然后再在恒温箱中进行培养，通过观察是否有产酸产气的现象以此来检测出水样中的总大肠菌群。 （一）实验器材 0.45 μm 微米孔滤膜、分度吸管、恒温箱、电子天平、冰箱、显微镜、试管、酒精灯、锥形瓶、载玻片、抽滤设备、无齿镊子等其他辅助实验器材。 （二）实验步骤 1）采用滤膜法首先要做的就是灭菌，而灭菌时所常见的手法有两种，一种是滤器灭菌法，一种是滤膜灭菌法。滤器灭菌法是使用火焰进行高温灭菌，通常灭菌时间会需要20~25分钟。而滤膜灭菌法就是将滤膜加入烧杯之中，之后倒入蒸馏水，通过将水连续煮沸的方法来达到灭菌的目的，煮沸的次数需要连续3次。 2）在灭菌之后要做的就是对水样进行过滤。在进行水样过滤的时候需要用到灭菌滤膜和无齿镊子。将滤膜取出后放到无菌滤床上， 自来水水质的细菌学检查 一、文献综述 1.（1）水质细菌学检验的意义 生活自来水及其水源水等水体受到生活污水、工农业废水或人和动物粪便的污染后,水中的细菌数可大量增加,其中病原菌也随之增加引发传染危害人类健康因而水中细菌总数和大肠菌数量可反映水体受微生物污染的程度水中细菌总数往往同水体受有机物污染的程度呈正相关。故水的细菌学检验对了解水体受污染程度在流行病学和提供水质标准中有重要意义和价值它是评价水质污染程度的重要指标之一。 （2）总大肠菌群的检测意义 大肠菌群系：指一群在37°C、24小时能发酵乳糖产酸产气，需氧或兼性厌氧的革兰氏阴性无芽孢杆菌。 测定的意义：大肠菌群分布较广，在温血动物粪便和自然界广泛存在。调查研究表明，大肠菌群细菌多存在于温血动物粪便、人类经常活动的场所以及有粪便污染的地方，人、畜粪便对外界环境的污染是大肠菌群在自然界存在的主要原因。粪便中多以典型大肠杆菌为主，而外界环境中则以大肠菌群其他型别较多。大肠菌群是作为粪便污染指标菌提出来的，主要是以该菌群的检出情况来表示食品中有否粪便污染。大肠菌群数的高低，表明了粪便污染的程度，也反映了对人体健康危害性的大小。粪便是人类肠道排泄物，其中有健康人粪便，也有肠道患者或带菌者的粪便，所以粪便内除--般正常细菌外，同时也会有一些肠道致病菌存在(如沙门氏菌、志贺氏菌等)，因而食品中有粪便污染，则可以推测该食品中存在着肠道致病菌污染的可能性，潜伏着食物中毒和流行病的威胁，必须看作对人体健康具有潜在的危险性。该菌主要来源于人畜粪便，故以此作为粪便污染指标来评价食品的卫生质量，具有广泛的卫生学意义。它反映了水源是否被粪便污染，同时间接地指出水源是否有肠道致病菌污染的可能性。大肠菌群数系以每1g (或mL)检样内大肠菌群近似可能数MPN (the most probable number-简称MPN)表示 （3）耐热大肠菌群的检测意义 作为一种卫生指标菌，耐热大肠菌群中很可能含有粪源微生物，因此耐热大肠菌群的存在表明可能受到了粪便污染，可能存在大肠杆菌。但是，耐热大肠菌群的存在并不代表对人有什么直接的危害。作为粪便污染指标菌，耐热大肠菌群与大肠菌群、大肠杆菌相似，主要以其检出情况来判断食品是否受到了粪便污染。粪便是肠道排泄物，有健康者，也有肠道病患者或带菌者粪便，所以粪便中既有正常肠道菌，也可能有肠道致病菌(如沙门氏菌、志贺式菌、霍乱弧菌、副溶血弧菌等)和食物中毒者。因此，食品既然受到粪便污染就有可能对食用者造成潜在的危害。通常情况下，耐热大肠菌与大肠菌群相比，在人和动物粪便中所占的比例较大，而且由于在自然界容易死亡等原因，耐热大肠菌群的存在可认为食品直接或间接的受到了比较近期的粪便污染。因而，耐热大肠菌群在食品中的检出，与大肠菌群相比，说明食品受到了更为不清洁的加工，肠道致病菌和食物中毒菌的可能性更大。 耐热大肠菌群比大肠菌群能更贴切地反应食品受人和动物粪便污染的程度，且检测方法比大肠杆菌简单地多，而受到重视。 2.(1)细菌总数测定的原理与方法 原理：水中细菌总数往往同水体受有机物污染的程度呈正相关。由于重金属及其他有毒物质对细菌有杀灭或抑制作用，因此总细菌数少的水样，并不能排除已被这些物质所污染。细菌总数主要作为判定被检水样污染程度的标志在水质卫生学检验中，细菌菌落总数(CFU)是 指lmL水样在营养琼脂培养基(LB培养基)中，于37C培养24h后所生长的腐生性细菌菌落总 生活饮用水标准检验方法水样的采集与保存GB/T 5750.2-2006 1范围 本标准规定了生活饮用水及其水源水样的采集、样品保存和采样质量控制的基本原则、措施和要求。 本标准适用于生活饮用水及其水源水样的采集和样品保存。 2规范性引用文件 下列文件中的条款通过本标准的引用而成为本规范的条款.，凡是注日期的引用文件，其随后所有的修改单(不包括勘误的内容）或修订版均不适用于本标准.然而鼓励根据本标准达成协议的各方研究是否可使用这些文件的最新版本。凡是不注明日期的引用文件.其最新版本适用于本标准。 GB 5749生活饮用水卫生标准 GB/T 12998水质采样技术指导 GB/T 12999水质采样样品的保存和管理技术规定 GB 17051 二次供水设施卫生规范 3采样计划 采样前应根据水质检验目的和任务制定采样计划，内容包括：采样目的、检验指标、采样时间、采样地点、采样方法、采样频率、采样数量、采样容器与清洗、采样体积、样品保存方法、样品标签、现场测定项目、采样质量控制、运输工具和条件等。 4采样容器 4.1应根据待测组分的特性选择合适的采样容器。 4.2容器的材质应化学稳定性强.且不应与水样中组分发生反应，容器壁不应吸收或吸附待测组分。 4.3采样容器应可适应环境温度的变化，抗震性能强。 4.4采样容器的大小、形状和重量应适宜，能严密封口，并容易打开，且易清洗。 4.5应尽量选用细口容器，容器的盖和塞的材料应与容器材料统一。在特殊情况下需用软木塞或橡胶塞时应用稳定的金属箔或聚乙烯薄膜包裹，最好有蜡封。有机物和某呰微生物检测用的样品容器不能用橡胶塞，碱性的液体样品不能用玻璃塞。 综合实验二：水中细菌总数和大肠菌群的测定 一、实验目的 1学习并掌握水样采集的方法、规则及注意事项； 2了解检查水中细菌总数和总大肠菌群的测定方法及检测意义； 3学习对所检测的水样作综合分析。 二、实验原理 1.水体的微生物污染问题日趋严重： 在各种水体，特别是污染水体中存在有大量有机物质，适于各种微生物的生长； 水中的微生物污染来源：土壤，以及人类、动物的排泄物污染； 水体中少数致病微生物（主要来自人或动物的粪便污染）可导致某些肠道传染病传播。 2.水微生物检测可用于评价水质情况，预报水质的污染趋势，以保证水质的卫生安全。 在实际工作中，对水质卫生质量的评价和控制，是无法对水体中各种可能存在的致病性微生物一一进行检测。一般选择有代表性的一种或一类微生物作为指示菌，通过对指示菌的检测，来了解水体是否受到过的微生物污染，是否有肠道病原微生物存在的可能。 3.水微生物的监测指标： ⑴菌落总数 ①是指1ml水样在营养琼脂培养基中，于37℃经24h培养后，所生长的细菌菌落的总数。 ②检测意义：作为一般性污染的指标，即评价被检样品的微生物污染程度和安全性。水样菌落总数越多，说明水被微生物污染程度越严重，病原微生物存在的可能性越大，但不能说明污染的来源。 ⑵总大肠菌群 ①是指一群需氧及兼性厌氧的，37℃生长时能使乳糖发酵，在24h内产酸产气的革兰氏阴性无芽胞杆菌。 ②检测意义：作为粪便污染的指标。水样总大肠菌群数的含量，表明水被粪便污染的程度，而且间接地表明有肠道致病菌存在的可能。 4.多管发酵法测定总大肠杆菌群 ⑴初发酵试验：采用乳糖蛋白胨培养液37℃培养24h，观察产酸产气情况，产酸产气说明水中存在大肠菌群，为阳性结果。但是，有个别其他类型细菌在此条件下可能产气，而不属于大肠菌群；产酸不产气的发酵管，也不一定是非大肠菌群，因其量少，可能延迟48 h后产气，这两种视为可疑结果，需进行下面的实验，才能确定是否是大肠菌群。 ⑵平板分离：对阳性管培养物及假阳性管培养物，接种于伊红美蓝培养基，观察菌落特征，将符合大肠菌群菌落特征的菌落并进行革兰氏染色和镜检，只有染色为革兰式阴性、无芽孢杆菌的菌落才是大肠菌群菌落。 ⑶复发酵证实试验：将以上两次实验已证实为大肠菌群阳性的菌群，接种于乳糖蛋白胨培养液，进行复发酵证实试验，经24 h培养产酸又产气的，最终确定为大肠菌群阳性结果。 最后，根据确定有大肠菌群存在的初发酵管（瓶数目），查阅专用统计表，得出总大肠菌指数。 三、实验用品 1.溶液及试剂： 蛋白胨、Nacl、20%乳糖、2%伊红水溶液、0.5%美兰水溶液、牛肉膏、1.6%溴甲酚紫乙醇溶液、草酸铵结晶紫染液、卢戈氏碘液、95%乙醇、番红复染液、蒸馏水、NaOH溶液、HCl溶液等 2.仪器和其他用品： 试管、德汉式小管、三角瓶、注射器、搪瓷缸、培养皿、载玻片、电磁炉、玻璃棒、移液管、酒精灯、接种环、试管架、恒温培养箱、灭菌锅、显微镜等 四、实验内容及步骤 1.培养基配制 1．目的：使生活饮用水检查操作规范化、标准化。 2．范围：生活饮用水微生物限度检查 3．职责：生活饮用水微生物限度检查操作人员 4.引用标准：GB5749-2006 中国药典2015年版四部 5．内容 5.1主要设备、仪器及用具 5.1.1 生化培养箱、恒温水浴锅、0.45μm滤膜及薄膜过滤器、灭菌柜、乙醇灯等。 5.1.2玻璃器皿锥形瓶、培养皿（直径90mm）、量筒、试管、刻度吸管等。刻度吸管、量筒用前应洗涤干净。吸管口上端距0.5cm处塞入约2cm适宜疏松的棉花，置不锈钢盒内。锥形瓶、量筒、试管均应加硅胶塞，再用牛皮纸包扎。玻璃器皿，均于高压蒸汽121℃灭菌30 min，备用。 5.2操作步骤： 5.2.1需氧菌总数：采用薄膜过滤法处理。 5.2.2用10ml无菌水，润湿滤膜，取供试液10ml 2份，分别过滤；取出滤膜，菌面朝 上，贴于R2A琼脂培养基上； 5.2.3用10ml无菌水，照上述薄膜过滤法操作，作为阴性对照； 5.2.4将上述计数平板倒置于30-35℃培养箱中培养5天，逐日观察菌落生长情况，点计 菌落数并报告； 标准规定：每1ml需氧菌总数不得过100cfu。 5.2.5菌数报告规则以1ml供试液的菌落数报告菌数；若滤膜上无菌落生长，以＜1报告菌数（每张滤膜过滤1ml供试液）。 5.3耐胆盐革兰氏阴性菌标准规定：不得检出。 5.3.1菌种试验用菌株的传代次数不得超过5代（从菌种保藏中心获得的冷冻干燥菌 种为第0代），并采用适宜的菌种保藏技术进行保存，以保证试验菌株的生物学特性。大肠埃希菌［CMCC（B）44102］ 铜绿假单胞菌［CMCC（B）10104］ 5.3.2菌液制备接种大肠埃希菌和铜绿假单胞菌的新鲜培养物至胰酪大豆胨琼脂培养基中，30一35 ℃培养18一24小时；上述培养物用0.9%无菌氯化钠溶液制成含菌数不大于100cfu的菌悬液。 菌悬液在室温下放置应在2小时内使用，若保存在2-8℃可在24小时内使用。 5.3.3 操作步骤 5.3.3.1供试液制备和预培养取供试品10ml 3份，分别接种至100ml胰酪大豆胨液体培养基中，混匀，制成1:10的供试液。一份作为供试品，一份加入不大于100cfu的大肠埃希菌菌悬液1ml，一份加入不大于100cfu的铜绿假单胞菌菌悬液1ml，作为阳性对照。取10ml灭菌水同法操作，作为阴性对照在20-25℃培养，培养约2小时。5.3.3.2 定性试验分别取上述10ml供试品的预培养物接种至100ml肠道菌增菌液体培养基中，30-35℃培养48小时，划线接种于紫红胆盐葡萄糖琼脂培养基平板上30-35℃培养24小时。如果平板上无菌落生长，判供试品未检出耐胆盐革兰氏阴性菌；阳性对照应生长良好。 5．4大肠埃希菌 5.4.1 操作步骤 5.4.1.1 供试液的制备和增菌培养：取供试液100ml 2份，分别接种至1000m l的胰酪大豆胨液体培养基中，混匀，一份加入不大于100cfu 的试验菌做为阳性对照，在 30-35℃培养18-24小时， 5.4.1.2选择和分离培养：取上述培养物1mL接种至100mL 麦康凯液体培养基中，42～44℃培养24-48 小时。取麦康凯液体培养物划线接种于麦康凯琼脂培养基平板上，30～35℃培养18-72小时，阳性对照应检出相应的控制菌。 5.4.1.3阴性对照试验取试验用的稀释剂，同法操作，作为阴性对照。阴性对照不得有菌生长。 5.4.1.4结果判断若麦康凯琼脂培养基平板上，有菌落生长，应进行分离、纯化及适宜的鉴定试验，验证是否为大肠埃希菌；若麦康凯琼脂培养基平板上，没有菌落生长，或虽有菌落生长但鉴定结果为阴性、判供试品未检出大肠埃希菌。 水质检测九项指标简介 人类在生活和生产活动中都离不开水，生活饮用水水质的优劣与人类健康密切相关。随着社会经济发展、科学进步和人民生活水平的提高，人们对生活饮用水的水质要求不断提高，饮用水水质标准也相应地不断发展和完善。由于生活饮用水水质标准的制定与人们的生活习惯、文化、经济条件、科学技术发展水平、水资源及其水质现状等多种因素有关，不仅各国之间，而且同一国家的不同地区之间，对饮用水水质的要求都存在着差异。 在这我介绍日常生活中最基本的九项检测,让大家对水质有着进一步的了解： 1、色度：饮用水的色度如大于15度时多数人即可察觉，大于30度时人感到厌恶。标准中规定饮用水的色度不应超过15度。 2、浑浊度：为水样光学性质的一种表达语，用以表示水的清澈和浑浊的程度，是衡量水质良好程度的最重要指标之一，也是考核水处理设备净化效率和评价水处理技术状态的重要依据。浑浊度的降低就意味着水体中的有机物、细菌、病毒等微生物含量减少，这不仅可提高消毒杀菌效果，又利于降低卤化有机物的生成量。 3、臭和味：水臭的产生主要是有机物的存在，可能是生物活性增加的表现或工业污染所致。公共供水正常臭味的改变可能是原水水质改变或水处理不充分的信号。 4、余氯：余氯是指水经加氯消毒，接触一定时间后，余留在水中的氯量。在水中具有持续的杀菌能力可防止供水管道的自身污染，保证供水水质。 5、化学需氧量：是指化学氧化剂氧化水中有机污染物时所需氧量。化学耗氧量越高，表示水中有机污染物越多。水中有机污染物主要来源于生活污水或工业废水的排放、动植物腐烂分解后流入水体产生的。 6、细菌总数：水中含有的细菌，来源于空气、土壤、污水、垃圾和动植物的尸体，水中细菌的种类是多种多样的，其包括病原菌。 7、总大肠菌群：是一个粪便污染的指标菌，从中检出的情况可以表示水中有否粪便污染及其污染程度。在水的净化过程中，通过消毒处理后，总大肠菌群指数如能达到饮用水标准的要求，说明其他病原体原菌也基本被杀灭。标准是在检测中不超过3个/L。 8、耐热大肠菌群：它比大肠菌群更贴切地反应食品受人和动物粪便污染的程度，也是水体粪便污染的指示菌。 9、大肠埃希氏菌：大肠细菌(E. coli)为埃希氏菌属(Escherichia)代表菌。一般多不致病，为人和动物肠道中的常居菌，在一定条件下可引起肠道外感染。某些血清型菌株的致病性强，引起腹泻，统称病致病大肠杆菌。肠道杆菌是一群生物学性状相似的G-杆菌，多寄居于人和动物的肠道中。埃希菌属（Escherichia）是其中一类，包括多种细菌，临床上以大肠埃希菌最为常见。大肠埃希菌（E.coli）通称大肠杆菌，是所有哺乳动物大肠中的正常寄生菌，一方面能合成维生素B及K供机体吸收利用。另一方面能抑制腐败菌及病原菌和真菌的过度增殖。但当它们离开肠道的寄生部位，进入到机体其他部位时，能引起感染发病。有些菌型有致病性，引起肠道或尿路感染性疾患。简而言之，大肠埃希菌=大肠杆菌 水质微生物的检测文件编码（GHTU-UITID-GGBKT-POIU-WUUI-8968） 水质微生物 一、水质微生物及指示菌 在各种水体，特别是污染水体中存在有大量的有机物质，适于各种微生物的生长，因此水体是仅次于土壤的第二种微生物天然培养基。水体中的微生物主要来源于土壤，以及人类的动物的排泄物及污染。水体中微生物的数量和种类受各种环境条件的制约。 一般认为，水中微生物以革兰氏阴性杆菌占有较大优势。与其他水体相比，河水及溪水中革兰氏阳性菌相对较多，这是因为陆地微生物冲洗污染的缘故。 水体中的致病性微生物一般并不是水中原有微生物，大部分是从外界环境污染而来，特别是人和其它温血动物的粪便污染。水中常见的致病性细菌主要包括：志贺氏菌、沙门氏菌、大肠杆菌、小肠结炎耶尔森氏菌、霍乱弧菌、副溶血性弧菌等。 在实际控制中，对水质卫生质量的评价和控制，是无法对各种可能存在的致病微生物一一进行检测，而一般利用对指示菌的检测和控制，来了解水体是否受到过人畜粪便的污染，是否有肠道病原微生物存在的可能，从而评价水的质量，以保证水质的卫生安全。 目前，世界各国一般认为大肠菌群是指示水质受粪便污染较好的指示菌。 我国水质控制也采用大肠菌群作为指示菌，GB5749-85《中华人民共和国国家标准生活饮用水卫生标准》规定，生活饮用水中大肠菌群每升不得超过3个。 在某些情况下，水体中的细菌总数也可指示水体受粪便等污染物污染的情况。这里的细菌总数其实是指营养琼脂培养后形成的菌落总数。目前世界各国对于控制饮用水的卫生质量，除采用大肠菌群等指标外，一般还采用细菌总数这个指标。我国GB5749-85《中华人民共和国国家标准生活饮用水卫生标准》中规定生活饮用水细菌总数每毫升不得超过100个。 二、水质微生物检验方法 GB5750-85《中华人民共和国国家标准生活饮用水标准检验法》提供了水质中细菌总数和总大肠菌群的检测方法。 生活饮用水水质检测项目及规定限值 l 范围 本规范规定了生活饮用水及其水源水水质卫生要求。 本规范适用于城市生活饮用集中式供水(包括自建集中式供水)及二次供水。 2 引用资料 生活饮用水检验规范(20XX) 二次供水设施卫生规范(GBl7051—1997) WHO Guidelines for Drinking Water Quality，1993 WHO Guidelines for Drinking Water Quality，Addendum to Volume 2，1998 3 定义 3.1 生活饮用水：由集中式供水单位直接供给居民作为饮水和生活用水，该水的水质必须确保居民终生饮用安全。 3.2 城市：国家按行政建制设立的直辖市、市、镇。 3.3 集中式供水：由水源集中取水，经统一净化处理和消毒后，由输水管网送到用户的供水方式。 3.4 自建集中式供水：除城建部门建设的各级自来水厂外，由各单位自建的集中式供水方式。 3.5 二次供水：用水单位将来自城市集中式供水系统的生活饮用水经贮存或再处理(如过滤、软化、矿化、消毒等)后，经管道输送给用户的供水方式。 4生活饮用水水质卫生要求 4.1 生活饮用水水质应符合下列基本要求 4.1.1 水中不得含有病原微生物。 4.1.2 水中所含化学物质及放射性物质不得危害人体健康。 4.1.3 水的感官性状良好。 4.2 生活饮用水水质规定 4.2.1 生活饮用水水质常规检验项目 生活饮用水水质常规检验项目及限值见表1 表１生活饮用水水质常规检验项目及限值 序号项目限值 感官性状和一般化学指标 1 色色度不超过15 度，并不得呈现其它异色 2 浑浊度不超过l 度(NTU) ①，特殊情况下不超过5 度(NTU) 3 臭和味不得有异臭、异味 4 肉眼可见物不得含有 5 pH 6.5—8.5 总硬度( 以CaCO 3 450(mg ／L) 6 计) 7 铝0.2(mg ／L) 8 铁0.3(mg ／L) 9 锰0.1(mg ／L) 10 铜 1.0(mg ／L) 11 锌 1.0(mg ／L) 12 挥发酚类( 以苯酚计) 0.002(mg ／L) 13 阴离子合成洗涤剂0.3(mg ／L) 14 硫酸盐250(mg ／L) 15 氯化物250(mg ／L) 中华人民共和国国家标准生活饮用水标准检验方法微生物指标Standard examination methods for drinking water一Microbioloical parameters 1、菌落总数 1.1平皿计数法1.1.1范围本标准规定了用平皿计数法测定生活饮用水及其水源水中的菌落总数本法适用于生活饮用水及其水源水中菌落总数的测定。1.1.2术语和定义下列术语和定义适用于本标准。1.1. 2.1菌落总数standard plate - count 加cteria水样在营养琼脂上有氧条件下37℃培养48h后，所得1ml水样所含菌落的总数 1.1.3培养基与试剂1.1.3.1营养琼脂1.1.3.1.1成分：A 蛋白陈10gB 牛肉膏3g C 氯化钠5g D 琼脂10g——20g E 蒸馏水1000ml1.3.1.2制法：将上述成分混合后，加热溶解，调整pH为7.4一7.6，分装于玻璃容器中（如用含杂质较多的琼脂时，应先过滤），经103.43 kPa (121℃，15lb）灭菌20 min，储存于冷暗处备用。 1.1.4仪器 1.1.4.1高压蒸汽灭菌器。 1.1.4.2干热灭菌箱。 1.1.4.3培养箱36℃士2℃。 1.1.4.4电炉。 1.1.4.5天平。 1.1.4.6冰箱。1.1.4.7放大镜或菌落计数器。1.1.4.8 pH计或精密pH试纸。1.1.4.9灭菌试管、平皿（直径9cm）、刻度吸管、采样瓶等1.1.5检验步骤1.1.5.1生活饮用水1.1.5.1.1门以无菌操作方法用灭菌吸管吸取1mL充分混匀的水样，注人灭菌平皿中，倾注约15mL已融化并冷却到45℃左右的营养琼脂培养基，并立即旋摇平皿，使水样与培养基充分混匀每次检验时应做一平行接种，同时另用一个平皿只倾注营养琼脂培养基作为空白对照1.1.5.1.2待冷却凝固后，翻转平皿，使底面向上，置于36℃士1℃培养箱内培养48h，进行菌落计数，即为水样1 ml 中的菌落总数1.1.5.2水源水1.1.5. 2.1以无菌操作方法吸取lml充分混匀的水样，注入盛有9ml、灭菌生理盐水的试管中，混匀成1 : 10稀释液。1.1.5.2.2吸取I : 10的稀释液工ml注入盛有9mL灭菌生理盐水的试管中，混匀成l ：10稀释液。按同法依次稀释成l : 1000 , l : 10000稀释液等备用。如此递增稀释一次，必须更换一支1mL灭菌吸管。1.1.5.2.3用灭菌吸管取未稀释的水样和2个——3个适宜稀释度的水样1ml，分别注入灭菌平皿内以下操作同生活饮用水的检验步骤。1.1.6菌落计数及报告方法作平皿菌落计数时，可用眼睛直接观察，必要时用放大镜检查，以防遗漏。在记下各平皿的菌落数后，应求出同稀释度的平均菌落数，供下一步计算时应用在求同稀释度的平均数时，若其中一个平皿有较大片状菌落生长时，则不宜采用，而应以无片状菌落生长的平皿作为该稀释度的平均菌落数。若片状菌落不到平皿的一半，而其余一半中菌落数分布又很均匀，则可将此半皿计数后乘2以代表全皿菌落数。然后再求该稀释度的平均菌落数。1.1.7不同稀释度的选择及报告方法1.1.7.1首先选择平均菌落数在30一300之间者进行计算，若只有一个稀释度的平均菌落数符合此范围时，则将该菌落数乘以稀释倍数报告之（见表1中实例1）1.1.7.2若有两个稀释度，其生长的菌落数均在30一300之间，则视二者之比值来决定，若其比值小于2应报告两者的平均数（如表1中实例2）若大于2则报告其中稀释度较小的菌落总数（如表l中实例3）若等于2亦报告其中稀释度较小的菌落数（见表l中实例4）。1.1.7.3若所有稀释度的 生活饮用水水质监测项目都哪八项？ 具体来讲，生活饮用水卫生标准可包括两大部分：法定的量的限值，指为保证生活饮用水中各种有害因素不影响人群健康和生活质量的法定的量的限值；法定的行为规范，指为保证生活饮用水各项指标达到法定量的限值，对集中式供水单位生产的各个环节的法定行为规范。 生活饮用水水质标准和卫生要求必须满足三项基本要求： 1．为防止介水传染病的发生和传播，要求生活饮用水不含病原微生物。2．水中所含化学物质及放射性物质不得对人体健康产生危害，要求水中的化学物质及放射性物质不引起急性和慢性中毒及潜在的远期危害（致癌、致畸、致突变作用）。 3．水的感官性状是人们对饮用水的直观感觉，是评价水质的重要依据。生活饮用水必须确保感官良好，为人民所乐于饮用。 生活饮用水水质标准共35项。其中感官性状和一般化学指标15项，主要为了保证饮用水的感官性状良好；毒理学指标15项、放射指标2项，是为了保证水质对人不产生毒性和潜在危害；细菌学指标3项是为了保证饮用水在流行病学上安全而制定的。 随着经济和工农业的迅速发展，化学物质对水的污染越来越引起政府和广大居民的关注，生活饮用水卫生标准更引起了有关部门的重视，为了和国际先进标准接轨，卫生部于2001年6月颁布了《生活饮用水卫生规范》，自2001年9月1日起实施。《生活饮用水卫生规范》是在《生活饮用水卫生标准》GB5749-85的基础上修改而成，该规范共包括生活饮用水水质卫生规范、生活饮用水输配水设备及防护材料卫生安全评价规范、生活饮用水化学处理剂卫生安全评价规范、生活饮用水水质处理器卫生安全与功能评价规范、生活饮用水集中式供水单位卫生规范、涉及饮用水卫生安全产品生产企业卫生规范和生活饮用水检验规范。《生活饮用水水质卫生规范》中水质指标共96项，常规检测项目34项，非常规检测项目62项，与《生活饮用水卫生标准》GB5749-85相比，增加和修改了某些指标，加强了对有机污染的监测，对人体健康危害大的指标限值更加严格。基本上是一个既符合国情，又与国际接轨的生活饮用水卫生规范。通过卫生部和各级卫生行政部门的宣传贯彻，目前已在全国范围内得到较好的落实。 今后广大人民群众可通过有关部门定期发布的饮用水水质公告，对照生活饮用水卫生标准或规范，随时了解饮用水水质状况，使饮用水卫生标准更贴近群众的生活，在保护人群身体健康，提高生活质量方面发挥重要的作用。 《生活饮用水卫生标准》（GB 5749-2006） 随着经济的发展，人口的增加，不少地区水源短缺，有的城市饮用水水源污染严重，居民生活饮用水安全受到威胁。1985年发布的《生活饮用水卫生标准》（GB5749－85）已不能满足保障人民群众健康的需要。为此，卫生部和国家标养殖场饮用水微生物检测方法的建立
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