ATCC15834发根农杆菌使用说明

枯草芽孢杆菌试验方案

枯草芽孢杆菌浓度测定试验方案 一、材料准备 （1）实验仪器 培养皿、烧杯、天平、玻璃棒、移液枪（5ml 1ml 200ul）、枪头（黄、蓝）、电子天平、250ml锥形瓶、15ml试管、涂布棒、酒精灯、记号笔、封口膜、灭菌锅、漩涡震荡仪 （2）实验试剂 NA培养基： 牛肉膏、蛋白胨、琼脂、水、盐酸、氢氧化钠、无菌水 枯草芽孢杆菌（不同浓度梯度）：101、102、103、104、105 （3）培养基配方 牛肉膏（3g）、蛋白胨（5g）、琼脂（20g）、水（1000ml）、无菌水（100ml）、盐酸、氢氧化钠（调节PH7.0-7.2），121°C下灭菌30 min。 二、实验步骤 （1）制备菌液 称取1.0g枯草芽孢杆菌转移至灭菌试管中，用移液枪分别移取9ml无菌水至试管，并用漩涡震荡仪震荡20-30秒保证完全混匀，标记为①； 用移液枪从①中移取1ml混匀菌液至一新试管，用移液枪分别移取9ml 无菌水，并用漩涡震荡仪震荡20-30秒保证完全混匀，标记为②；同理，分别进行稀释，得到③-⑧; （2）进行涂板 向每个培养皿中倒入约12ml50℃左右的灭菌的NA培养基，排除气泡；

待培养基凝固后，用移液枪分别从①-⑧中吸取200ul菌液，加至已灭菌的培养皿中，用涂布棒进行均匀涂抹，并标记； 每个样品做两个处理，每个稀释度重复3次； 将密封后的培养皿倒置于36℃的恒温培养箱内培养18h—24h，观察记录实验结果。 （3）菌落计数 以平板上出现30个——300个菌落数的稀释度平板为记数标准，并确定为稀释倍数： 当只有一个稀释度，其平均菌落数在30个-300个之间时，则以该平均菌落数乘以其稀释倍数； 若有两个稀释度，其平均菌落数30个-300个之间时，应按两者菌落总数之比值来决定。若其比例小于2应计数两者的平均数，若大于2则计数其中稀释较小的菌落总数； 若三个稀释度的平均菌落数大于300个，则应按稀释度最高的平均菌落数乘以稀释倍数； 若三个稀释度的平均菌落数小于300个，则应按稀释度最低的平均菌落数乘以稀释倍数。5.6若三个稀释度的平均菌落数不在30个-300个之间，则以最接近300个或30个的平均菌落数乘以稀释倍数。 （4）结果统计与计算 有效活菌总数按式（1）计算； A=B×C /D (1)

em菌发酵剂怎么发酵鸡粪

em菌发酵剂是微生物制剂，可以用来发酵多种的粗饲料来饲养动物，例如：粪便、潲水、豆渣、秸秆、豆粕等。em菌发酵剂来发酵鸡粪喂猪可以提高猪的免疫力减少生病，还可以改变鸡粪的适口性，像鸡粪我们都知道，鸡的肠胃较短吃进去的饲料有些根本来不及消化吸收就随着粪便排解出去，不过这些粪便在经过em菌发酵剂发酵过之后却是用来喂猪很好的饲料，因为从本身改变了鸡粪的适口性，所以猪非常爱吃。 那怎么来使用em菌发酵剂来发酵鸡粪喂猪的呢？ 由于鸡的肠子较短，食物在肠道中逗留的时间不长，吃下饲料中的养分一般只能吸收30%左右，大部分通过直肠而被排出体外。鸡粪中含有的营养物质随鸡所摄取饲料的不同而有所差异，一般地说，每公斤鸡粪的干物质中有13.4～18.8千焦的总能量，其含氮量达30～70克。现在使用农盛乐粪便发酵剂即（农盛乐饲料发酵剂）将鸡粪发酵过后就可以直接来喂猪了，因为鸡粪发酵过后是很好的喂猪饲料。 既然鸡粪里面含有这么多的营养成分，那该怎么用粪便发酵剂来发酵鸡粪喂猪的呢？ 1、鸡粪的收集 (1)使用的鸡粪必须是健康鸡的粪便，越新鲜质量越好。如果是饲喂大剂量抗生素添加剂的鸡粪，使用 (2)为避免营养的损失，夏季不要超过一日清粪，冬季不要超过三日，以当日清理当日发酵效果最好 2、发酵料配制

将无霉变无病菌的新鲜鸡粪60%(或鸽子粪、鸭粪也可发酵使用)，玉米粉15%，谷糠10%、麦麸5%、农盛乐粪便发酵剂0.5-1%(加入与菌液等比例红糖效果更好)，充分搅拌均匀，调节水分到60%左右(可以提前将农盛乐粪便发酵剂加入适量水中稀释，更利于其搅拌均匀)。其简单判断办法为：即用手紧抓物料一把能成团，松手落地能散开为宜，水分过高过低均不利。然后装入塑料袋或能密封的池子(缸或者做个小发酵池)，密封发酵5-7天(冬天时间略长)，当鸡粪呈黄绿色，无臭味而略带酒酸味时(发酵时间过长酒味过浓)，发酵基本完成，即可饲喂。饲喂时应注意遵从“由少到多，慢慢适应”的原则，猪很爱吃，不易生病，皮毛红润发亮，喜睡，一般能替代最多30%的精饲料。 3、鸡粪发酵后喂猪的技术 发酵后鸡粪的缺点是：能值仍然较低，非蛋白氮仍然较多，所以，需要结合能量高的饲料如玉米、大小麦、薯粉，高粱、麦麸等一起喂养，同时供给大量的清洁饮水，而对于生长较快的动物如肉用仔鸡，肉用仔猪等，不宜多喂。 ①空怀母猪和怀孕前90天的母猪：发酵鸡粪50%、玉米37%、麦麸7%、豆粕6%。(注意先从5%开始用起，慢慢增加用量，有一个适应的过程)，将上述混合饲料混合拌匀后喂猪更好。怀孕90天后的、哺乳母猪要少量饲喂或不饲喂发酵鸡粪。 ②中大猪：发酵鸡粪30%、玉米45%、麦麸5%、豆粕18%、鱼粉2%、。(注意先从5%开始用起，慢慢增加用量，有一个适应的过程)，将上述混合饲料混合拌匀后喂猪。

枯草芽孢杆菌发酵工艺2

(10)申请公布号 (43)申请公布日 (21)申请号 201510320760.5(22)申请日 2015.06.11 C12N 1/20(2006.01)C12R 1/125(2006.01) (71)申请人山东西王糖业有限公司 地址256209 山东省滨州市邹平县韩店镇驻 地西王工业园电厂路南侧(72)发明人王棣 王居亮 李伟 杨荣玉 唐海静 夏颖颖(74)专利代理机构济南舜源专利事务所有限公 司 37205 代理人宋玉霞(54)发明名称 一种用玉米粗蛋白粉生产枯草芽孢杆菌微生态制剂的方法(57)摘要 本发明提供一种以玉米淀粉生产过程中的副产品玉米粗蛋白粉为原料生产枯草芽孢杆菌微生态制剂的生产方法，采用本方法在不添加其它碳源和氮源的条件下，单纯以玉米粗蛋白粉为营养源经过固态培养可以生产出活菌数为3000亿-5000亿/g 的枯草芽孢杆菌微生态制剂。生产过程不需要通压缩空气，不产生任何废水废气。减少了枯草芽孢杆菌微生态制剂的生产成本。且所得产品以玉米纤维低聚糖为载体具有益生元的功能提高了产品质量。 (51)Int.Cl. (19)中华人民共和国国家知识产权局 (12)发明专利申请 权利要求书1页 说明书4页 (10)申请公布号CN 104988088 A (43)申请公布日2015.10.21 C N 104988088 A

1.一种用玉米粗蛋白粉生产枯草芽孢杆菌微生态制剂的方法，步骤如下： (1)取玉米粗蛋白粉移入固体发酵罐中，加水调到料水比为1：0.7-0.9，加氧化钙调pH 到6.0-7.0； (2)打开循环水使固体发酵罐温度上升到80-90℃后，通入蒸汽消毒30分钟； (3)待原料冷却到40℃-44℃后，加入物料干基重量1/9-1/10培养15h以后的种子液，固含量为5％； (4)维持30-40℃培养50-60h，24h后每隔6h搅拌一次物料； (5)培养到50-60h后，物料明显粘湿，有较浓的枯草芽孢杆菌特有气味，升温到44-56℃继续培养12-22h； (6)共计培养72h后移出物料，65-80℃烘干物料； (7)烘干物料水份到小于6％后，粉碎物料； (8)将粉碎的物料进行包装，取样检测产品质量。 2.根据权利要求1所述的用玉米粗蛋白粉生产枯草芽孢杆菌微生态制剂的方法，其特征在于，所述的步骤(1)中，料水比是指：物料干基质量即无水的物料质量。 3.根据权利要求1所述的用玉米粗蛋白粉生产枯草芽孢杆菌微生态制剂的方法，其特征在于，所述的种子液为将枯草芽孢杆菌菌种在液体培养基中通气搅拌培养15小时以后的液体培养基和菌种的混合物，所述的液体培养基为：葡萄糖5％w/w，玉米浆10％w/w,硫酸镁0.03％w/w,碳酸钙调pH到7.0，其余为黄河水，所述的玉米浆干基含量为26％。 4.根据权利要求1所述的用玉米粗蛋白粉生产枯草芽孢杆菌微生态制剂的方法，其特征在于，所述的步骤(4)中，维持温度为33-38℃。 5.根据权利要求1所述的用玉米粗蛋白粉生产枯草芽孢杆菌微生态制剂的方法，其特征在于，所述的步骤(5)中，升温到45-50℃。 6.根据权利要求1所述的用玉米粗蛋白粉生产枯草芽孢杆菌微生态制剂的方法，其特征在于，所述的步骤(4)(5)中，发酵过程罐体与空气相通，有空气过滤器装置过滤掉空气中的杂菌。 7.根据权利要求1所述的用玉米粗蛋白粉生产枯草芽孢杆菌微生态制剂的方法，其特征在于，得到的枯草芽孢杆菌微生态制剂，活菌数3000-5000亿/g。 8.根据权利要求1所述的用玉米粗蛋白粉生产枯草芽孢杆菌微生态制剂的方法，其特征在于，采用的玉米粗蛋白粉的情况见表1， 表1 玉米粗蛋白粉指标 蛋白质％脂肪％纤维质％淀粉％灰分％木质素％水份％玉米皮1125412 2.612 粗蛋白10 2.41250 4.6—10 胚芽粕1825314 2.3— 。

大肠杆菌基因型及遗传符号说明系列一DXY

大肠杆菌基因型及遗传符号说明系列一 点击次数：982 作者：佚名发表于：2009-09-27 00:00转载请注明来自丁香园 来源：丁香园 实验室的一般大肠杆菌拥有4288条基因，每条基因的长度约为950bp,基因间的平均间隔为118bp （基因Ⅷ）。E.coli基因组中还包含有许多插入序列，如λ-噬菌体片段和一些其他特殊组份的片段，这些插入的片段都是由基因的水平转移和基因重组而形成的，由此表明了基因组具有它的可塑造性。 利用大肠杆菌基因组的这种特性对其进行改造，使其中的某些基因发生突变或缺失，从而给大肠杆菌带来可以观察到的变化，这种能观察到的特征叫做大肠杆菌的表现型（Phenotype），把引起这种变化的基因构成叫做大肠杆菌的基因型（Genotype）。具有不同基因型的菌株表现出不同的特性。 分子克隆中常用的大肠杆菌及其遗传标记按Demerec等1966年提出的命名原则，采用的菌株所有的基因都假定处于野生型状态，除非在基因型上另外注明。 大肠杆菌基因型的表示方法（Demerec, et, al. 1966）： 一、一般规则： 1、根据基因产物或其作用产物的英文名称的第一个字母缩写成3个小写斜体字母来表示。例如：D NA Adenine Methylase→dam。 2、不同的基因座，其中任何一个突变所产生的表型变化可能相同，其表示方法是在3个小写斜体字母后加上一个斜体大写字母来表示区别。例如：Recombination→recA、recB、recC。 3、突变位点应通过在突变基因符号后加不同数字表示。如supE44（sup基因座E的44位突变）。

如果不知道几个等位基因中哪一/几个发生了功能性突变，则用连字符“ -”代替大写字母，如trp-31。 4、细菌的基因型中应该包含关于其携带的质粒或附加体的的信息。这些符号包括菌株携带的质粒或附加体、质粒或附加体上的突变基因座和突变位点。其基因符号应与基因座的表示符号明显区别，符号的第一个字母大写、不斜体并位于括号内；质粒或附加体上的突变基因座和突变位点的基因符号的表示方法与染色体上突变基因座、突变位点的符号相同。 5、对于携带附加体的菌株的完整基因型描述应包括附加体的状态（游离或整合）。以F因子为例，F-:F因子缺失；F+:自主性F因子，不携带任何遗传可识别染色体片段；F':携带有遗传可识别细菌染色体片段的自主性F因子；Hfr:整合到染色体上的F因子（high frequency of recombination）。当这些质粒或噬菌体片段变异或缺失时，用（）“或”/“等以区别。例如：/F' [traD3 6、proAB、lac I q、lacZ. M 15] 6、某个基因或某个领域缺失时，在其基因型前面加上“ ”表示。例如：lac-proAB基因缺失时它的基因型表示为（lac-proAB）。 7、由于某种基因的变异导致大肠杆菌可以明显观察到特征变化，有时也用其表现型代替基因型进行表示。例如：某些抗药性的获得或丧失，用如下方式表示：Streptomycin抗性→Str +或Str r，Ampicilli n敏感性→ Amp-。（第一个字母要大写，“+”或“r”表示有抗性，“-”表示无抗性或敏感）。 8、根据某些特异性蛋白的变异及其导致的结果变化进行表示。例如：TH2菌株上有一种基因型表示如下：hsdS20 （rB-、mB-），其中S20代表特异性识别蛋白发生变异，（）中的rB-、mB-表示由于 S20的变异而导致B株来源的hsdR和hsdM的功能缺失。 9、蛋白质的名称与对应的基因或等位基因相同，但不用斜体，且首字母大写，如，UvrA、UvrB。 二、基因符号和意义（见表1）

浅谈枯草芽孢杆菌(参考内容)

浅谈枯草芽孢杆菌 1. 抗生作用 抗生作用是指拈抗微生物通过产生代谢产物在低浓度下就能够对病原微生物的生长和代谢产生抑制作用，从而来影响病原微生物的生存和活动。近半个世纪以来，人们从枯草芽孢杆菌不同菌株的代谢产物中分离纯化了多种有效的抗菌物质。 2 溶菌作用 枯草芽孢杆菌的溶菌作用主要表现在是通过吸附在病原菌的菌丝上，并随着菌丝生长而生长，而后产生溶菌物质造成原生质泄露使得菌丝体断裂；或者是产生抗菌物质通过溶解病原菌孢子的细胞壁或细胞膜，致使细胞壁穿孔、畸形等现象从而抑制孢子萌发。 3 诱导植物产生抗性及促进植物生长 诱导植物产生抗性作用是指枯草芽孢杆菌不但能够抑制植

物病原菌，而且还能够诱发植物自身抗病机制从而增强植物的抗病性能的作用。什么是PGPR国际上把土壤中能促进植物生长的根际自生细菌通称为植物促生根圈细菌(Plant growth promoting rhizobaceria)，简称为PGPR。 其中以枯草芽孢杆菌的抗逆性最强、功能最多、适应性最广、效果最稳定。枯草芽孢杆菌能够产生类似细胞分裂素、植物生长激素的物质，促进植物的生长使植物抵抗病原菌的侵害。 4保护环境。 枯草芽孢杆菌大量应用于生物肥料。当作用于作物或土壤时，能够在作物根际或体内定殖，并起到特定肥料效应。目前，微生物肥料在培肥地力，提高化肥利用率，抑制农作物对硝态氮、重金属、农药的吸收，净化和修复土壤，降低农作物病害发生，促进农作物秸秆和城市垃圾的腐熟利用。提高农作物产品品质和食品安全等方面表现出了不可替代的作用。

5 枯草芽孢杆菌对土壤中的菲与苯并芘的吸附及生物降解功能 土壤与其相连的水环境称为土壤-水环境系统，其中存在着大量的土壤固有微生物，并在表面存在生物膜，因为生物膜形成了隔离层，有机污染物在接触到支撑生物膜的固体基底之前，必须首先到达并且穿过这个隔离层，这样就强烈地改变矿物颗粒或基底的吸附行为，对吸附作用有重要的影响，近年的研究表明，由于受污染影响，导致土壤中含有多环芳烃（PAHs），沉积物中PAHs主要为原油污染以及工业或民用煤不完全燃烧所致，枯草芽孢杆菌对菲与苯并芘的吸附及生物降解研究，研究表明以枯草芽孢杆菌为接种微生物，对菲与苯并芘都可进行吸附或生物降解，48h液相PAHs浓度达到平衡时，微生物对菲消除了98％，对苯并芘消除85％；接种的样品48h吸附等温线均呈线形，能较好地符合线性方程；在接种微生物情况下，沉积物与土壤对菲和苯并芘吸附特征均发生较大变化，对菲的吸附量增大约35倍，而对苯并芘的吸附量却降低了2／3左右；未接种微生物的土壤和沉积物对菲解吸率为20％，接种的样品组为2.9％，而对苯并芘的解吸结果与菲相反，未接种

使用em菌发酵剂发酵鸡粪的方法

鸡粪、鸽粪、鸭粪、猪粪、牛粪、羊粪等动物粪便有很多的营养价值，直接排放不仅污染环境，而且造成很大的浪费，其实这些粪便经过专业的发酵剂处理之后不仅可以制作成肥料，还可以发酵做成动物饲料。 （一）、利用农盛乐em菌发酵剂发酵鸡粪做肥料的方法： 1）发酵原料：如谷糠、杂草、人、畜、禽粪便、作物秸秆（切碎）、茎叶、锯末木屑、食用菌基质残渣和饼粕等。 2）工具：搅拌机；塑料容器或水泥池（或者土坑垫塑料薄膜）；塑料薄膜；粉碎机（普通农用型）；铁锹。 3）发酵菌：种植em菌发酵剂 4）配比：谷糠、杂草、人、畜、禽粪便、作物秸秆（切碎）、茎叶、锯末木屑、食用菌基质残渣和饼粕等。准备400公斤材料和种植em 菌发酵剂1公斤 5）操作规程： ①将发酵原料按配比准备400公斤，此为发酵原料待用； ②将1公斤种植em菌发酵剂倒入50公斤水中稀释搅拌均匀，稀释用水最好为井水或河水，若为自来水请放置24小时后再用；能够适当的溶解一些红糖在里面效果更佳。 ③如有搅拌机：可以先将发酵原料混合2分钟后，再倒入发酵剂稀释液搅拌6分钟；没有搅拌机：用铁锹搅拌按由少到多的原则，即先将菌液稀释液倒入少量发酵原料中搅拌均匀，直到没有团块，然后再将搅拌好的少量发酵原料倒入剩余发酵原料中搅拌均匀，直到没有团

块；（注意：视发酵原料干湿程度增减稀释用水水量，稀释的em菌发酵剂用水应是发酵原料的40%左右，拌成以手握成团，指缝见水但不滴水珠，松手即散为好。注意：水多了易酸，少了发酵不透。如发酵原料较湿，应减少稀释的用水量。） ④将混合后的发酵原料放入塑料容器或水泥池（或者土坑垫塑料薄膜）中，最后装满压实，排去空气后用塑料薄膜密封，一定要完全密闭，适宜温度为25-35℃，发酵5-10天（一般夏4天，春秋7天，冬10天），注意温度和时间的掌握，直到没有臭味含有酒味即为发酵成功。 （二）利用农盛乐em菌发酵剂发酵鸡粪做饲料的方法：将无霉变无病菌的新鲜鸡粪60%(或鸽子粪、鸭粪也可发酵使用），玉米粉15%，谷糠10%、麦麸5%、em菌发酵剂0.5-1%（加入与菌液等比例红糖效果更好），充分搅拌均匀，调节水分到60%左右（可以提前将em菌发酵剂加入适量水中稀释，更利于其搅拌均匀）。其简单判断办法为：即用手紧抓物料一把能成团，松手落地能散开为宜，水分过高过低均不利。然后装入塑料袋或能密封的池子（缸或者做个小发酵池），密封发酵5-7天（冬天时间略长），当鸡粪呈黄绿色，无臭味而略带酒酸味时（发酵时间过长酒味过浓），发酵基本完成，即可饲喂。饲喂时应注意遵从“由少到多，慢慢适应”的原则，猪很爱吃，不易生病，皮毛红润发亮，喜睡，一般能替代最多30%的精饲料。 发酵后鸡粪的缺点是：能值仍然较低，非蛋白氮仍然较多，所以，需

大肠杆菌的基因型 Takara公司

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枯草芽孢杆菌使用技术

枯草芽孢杆菌使用技术 制剂：1000亿活芽孢/克可湿性粉剂毒性：低毒级 枯草芽孢杆菌特点： 1、绿色环保――对人畜微毒、对环境无污染、对作物安全（本剂虽属细菌活体杀菌剂，但不会侵染作物引起病 害，亦不会对作物产生药害） 2、高效广谱――对水稻稻瘟病，西瓜、黄瓜、草莓、番茄等多种作物白粉病、灰霉病，马铃薯晚疫病，大豆、油菜菌核病，瓜类、谷物、三七等作物根腐病等多种真菌性病 害具有优良防效。 3、增产提质――枯草芽孢杆菌还能够分泌促进作物生长的活性物质，使植株叶片浓绿肥厚，提高作物免疫力，增产提质效果显著，发酵过程中产生多种氨基酸，对作物有生 长调节的作用。 枯草芽孢杆菌防治机理 １、竞争作用：通过生物间争夺氧气、营养物质及竞争

排它性，形成局部生物优势种群，防止其它菌侵入；同时争夺周围菌的营养，抑制病原菌生长―起到疫苗的作用。 ２、溶菌作用：枯草芽孢杆菌吸附于病原菌的菌丝上，随着菌丝生长而生长，从而消耗病原菌的营养，使病原菌菌丝发生断裂、解体、细胞质消解，使病原菌失去进一步侵染 能力―起到寄生作用。 3、生物拮抗作用：枯草芽孢杆菌生长过程中能产生细菌素（枯草菌素、多粘菌素、制霉菌素、短杆菌素）、有机酸、天然脂肽类化合物等，对病原菌抑制其生长或溶解其细胞壁、使细胞穿孔、畸形，最终杀死病原菌，。 ４、杀灭作用诱导作物产生抗病性、促进作物生长，增产提质。据统计，使用枯草芽孢杆菌可有效增产 5.6-20.2%。 枯草芽孢杆菌使用方法 1、稻瘟病、纹枯病、稻曲病。施药方法：水稻孕穗破口期和齐穗期各施药一次。每亩用枯草芽孢杆菌10克均匀 喷雾，喷药药间隔7-12天，

2、枯草芽孢杆菌与咪鲜胺、三环唑、井冈霉素等混用，有明显的相互增效作用。在病害集中、急性暴发时，更能显 示出混用的效果。 枯草芽孢杆菌使用注意事项 1、本品用量少，为减少浪费，兑药时应用小容器将所需用量药剂充分溶解后再倒入喷雾器中，加水至喷雾器最佳 水平线进行喷雾； 2、早上10点前或下午4点后施药，避免阳光直射，杀死芽孢。尤其是4点后用药，夜间潮湿的环境更有利于芽孢 萌发。 3、不能与铜制剂、链霉素等杀菌剂及碱性农药混用； 4、病害初期或发病前施药效果最佳，施药时注意使药 液均匀喷至作物各部位。

枯草芽孢杆菌酶在发酵工艺上的应用

枯草芽孢杆菌酶在发酵工艺上的应用 王伟王上俞志敏丛丽娜* （大连工业大学生物工程学院辽宁大连 116034） 摘要：枯草芽孢杆菌（Bacillus subtilis）是当今工业酶的主要生产菌种之一，由于其产酶量高、种类多、安全性好、环保等优点在现代发酵工业生产中被广泛应用，其发酵生产的酶在工业、医学、食品、饲料、洗涤、纺织、皮革、造纸、水产养殖等领域均发挥着十分重要的作用。 关键词：枯草芽孢杆菌；发酵；酶 B. subtilis enzyme used in the fermentation process WANG Wei WANG Shang YU Zhi-Min CONG Li-Na* (School of Biological Engineering,Dalian polytechnic University,Dalian,Liaoning 116034, China) Abstract:Bacillus subtilis (Bacillus subtilis) is one of today's major producing strain of industrial enzymes,enzyme production because of its high volume,variety,safety, environmental protection,etc.are widely used in modern industrial production fermentation,fermentation enzymes produced in the fields of industry,medicine,food, feed,wash,textile,leather,paper,aquaculture and other have played a very important role. Keywords:Bacillus subtilis; fermentation; Enzyme 长期以来，枯草芽孢杆菌一直是工业微生物的主力军之一，它的使用可追溯到一千多年前，早在日本平安时代（794～1192年）日本人就已经利用枯草芽孢杆菌在大豆中采用固态发酵的方法生产他们的传统食品——纳豆，开创了利用枯草芽孢杆菌的历史[1]。由于其具有发酵周期短、产物丰富、可利用开发价值高以及作为食品药品安全性好等显著优点，使得它的应用一直延续至今，并在过去的一百多年中有了长足的进步。近年来，由于分子生物学的飞速发展，新的分子手段和技术的不断介入使得枯草芽孢杆菌的研究利用进入了新时期，在食品加工、农业生产、能源开发等方面不断地涌现新突破，在工业微生物中的地位不断得到

枯草芽孢杆菌产淀粉酶试验要点

枯草芽孢杆菌产α-淀粉酶发酵试验 化学与生命科学学院 摘要：以枯草芽孢杆菌（BacilusSubtilisBF—7658）为实验菌株，通过种子扩大培养，选出生长力旺盛的菌株进行液体摇瓶发酵。通过测定不同发酵时间生产的酶活，来初步估计发酵最佳时期和终点。 关键词：枯草芽孢杆菌，α-淀粉酶，液体摇瓶发酵，酶活 淀粉酶是能够分解淀粉糖苷键的一类酶的总称，包括α-淀粉酶、β-淀粉酶、糖化酶和异淀粉酶。芽孢杆菌主要用来产生α-淀粉酶和异淀粉酶，其中α-淀粉酶又称淀粉1，4-糊精酶，能够切开淀粉链内部的α-1，4-糖苷键，将淀粉水解为麦芽糖、含有6 个葡萄糖单位的寡糖和带有支链的寡糖；而异淀粉酶又称淀粉α-1，6-葡萄糖苷酶、分枝酶，此酶作用于支链淀粉分子分枝点处的α-1，6-糖苷键，将支链淀粉的整个侧链切下变成直链淀粉。通过发酵实验，我们可以以酶活为依据，初步估计发酵的最佳时期和发酵终点。 实验材料和方法 一、实验材料： （一）实验菌株：以枯草芽孢杆菌（BacilusSubtilisBF—7658） （二）培养基： 1、种子培养液 葡萄糖 1% Tryptone(胰蛋白胨)：1%, Yeast Extract(酵母提取物)：0.5%, NaCl(氯化钠)：1% 调pH7.2 若配置固体培养基，则再加入1.5% 琼脂。 2、产淀粉酶发酵培养液 玉米粉 2 .0 % 黄豆饼粉1 .5% CaCl 2 0 .02 % MgSO4 0 .02% NaCl 0 .25% K2HPO4 0 .2% 柠檬酸钠0 .2% 硫酸铵0 .075% Na2HPO4 0 .2 % 调节pH 值7 .0

枯草芽孢杆菌实验报告

微生物技术综合实验 年级：13级生物工程（专升本）班级：2013011201 学号：1301014026 姓名：徐红贞 指导老师：刘凤霞教授 日期：二零一三十月五号

目录 1实验目的及原理 (1) 1.1实验目的 (1) 1.2实验原理 (1) 2实验材料 (1) 2.1实验仪器 (1) 2.2实验试剂 (1) 2.3培养基 (2) 2.3.1 生长培养基 (2) 2.3.2鉴定培养基 (2) 2.3.3摇瓶培养基 (2) 3试验方法 (2) 3.1仪器的准备 (2) 3.2培养基的配置 (2) 3.3初步筛选及鉴定 (2) 3.3.1采集土样 (3) 3.3.2富集培养 (3) 3.3.3稀释分离、纯化 (3) 3.3.4初筛 (3) 3.4复筛及鉴定 (4) 3.4.1革兰染色 (4) 3.5酶活力的测定 (4) 3.5.1摇瓶培养 (4) 3.5.2酶液稀释 (4) 3.5.3酶液测定 (4) 4结果分析 (5) 4.1平板涂布分离 (5) 4.2平板划线分离 (5) 4.3初筛 (5) 4.4复筛 (5) 4.5摇瓶培养 (6) 4.6酶活力测定 (6) 5参考资料 (7) 6附录 (8)

微生物上游技术综合实验 枯草芽孢杆菌的分离、纯化、筛选及鉴定 1.实验目的及原理 1.1实验目的 （1）学习从土壤中分离、纯化枯草芽孢杆菌的原理和方法。 （2）学习掌握枯草芽孢杆菌的鉴定方法。 （3）掌握微生物的摇瓶培养方法及淀粉酶活力的测定的原理和方法。 （4）培养学生综合应用微生物实验方法的能力。 （5）培养学生自行设计实验流程、综合分析问题解决问题和判断实验结果的能力。 1.2实验原理 选择合适与待分离微生物的生长条件，如营养成分、酸碱度、温度和氧等要求，或加入某种抑制剂造成只利于该微生物生长，而抑制其他微生物的环境，从而淘汰一些不需要的微生物。 将土壤稀释液倒在不同类型的培养基平板上，在适宜的环境中培养几天，细菌或是其他的微生物便能在平板上生长繁殖，形成菌落。将初次筛选得到的微生物接到淀粉培养基上培养，因为只有能够产生淀粉酶的细菌才能够利用培养基中的淀粉成分来完成自身的生命活动，才能够生存。故在淀粉部分不显现蓝色，出现透明圈，可以通过透明圈的大小来初步判断培养物中是否有产淀粉酶微生物及产淀粉酶的能力。 2. 实验材料 2.1实验仪器 无菌玻璃涂棒无菌移液管接种环无菌培养皿土样电子天平三角瓶烧杯试管酒精灯擦镜纸载玻片吸水纸恒温摇床恒温培养箱高压蒸汽灭菌锅玻璃珠显微镜无菌铲胶头滴管记号笔试管架棉塞牛皮纸报纸细绳无菌纸袋电炉搪瓷缸分光光度计恒温水浴锅白瓷皿等。 2.2 实验试剂 ○1碘液储备液：称取22.0g碘化钾溶于约300mL水中，加入11.0g碘，搅拌溶液，移入500mL容量瓶，用水定容，贮于棕色瓶中备用（每月配制一次）。 ○2碘液使用液：称取20.0g碘化钾，溶于约300mL水中，移入500mL容量瓶中，

EM菌的简易生产方法

EM菌的简易生产方法 1．EM菌的生产方法 (1)场地设备：生产场地可选择光线较暗的室内或能遮光的楼上阳台。主要生产设备是容量50千克或25千克的有盖塑料桶、提水桶、塑料瓶、锅和台秤。 (2)生产原料：EM菌种(原露)、红糖、干净的井水或自来水。 (3)发酵方法：以生产50千克为例，先将容量50千克的塑料桶洗干净，加入干净生水45千克静置24小时备用，再将2千克红糖溶于4千克热水中，冷却至35～37℃后加入EM菌种2千克，密封2小时使菌种活化，然后倒人大塑料水桶中盖上桶盖，不必完全密封，让其在半密封状态下发酵。在发酵期间要注意开盖观察，发酵到第四天，水面会出现泡沫，到第十天泡沫消失，水面浮起一片白色悬浮物，15天后悬浮物沉人桶底，发酵结束。一般气温在30℃以上，发酵15～20天完成，气温在30℃以下，发酵时间要延长到25～35天才完成(比原来资料介绍的时间要长得多)。 2．EM活菌剂质量检测方法 (1)看颜色：正常为棕黄色。若为乳白色，说明发酵失败。 (2)闻气味：有较浓的甜酸味。没有酸味或变味说明变质。 (3)pH值：用试纸检测pH值在3．2～3．8之间达标。若pH值未达标，说明发酵时间不够或红糖放得少，必须加糖继续发酵。 (4)把EM装入一个矿泉水瓶中，装到大半瓶就拧紧瓶盖，用力摇几下，如果瓶中有大量气体，说明发酵成功，没有气体说明发酵失败。瓶里出现一些悬浮物属于正常现象。 (5)有条件的要定期对EM菌液内5科、10属、80种微生物的含量进行检测，以保证EM菌种的质量。 3．EM贮存及使用的注意事项

(1)EM活菌制剂要保存在不透明的容器内，保存期为6个月。如用透明塑料瓶装，很快就会变质。自产EM用做2级菌种，使用期为3个月；用于养殖业，使用期为6个月。 (2)长时间不使用，要放在阴暗干燥处半密封保存。若完全密封保存时间过长，气味会发生变化，影响质量。 (3)一次引种，可连续不断生产使用。在生产过程中，应注意不断提纯复壮菌种。没有提纯复壮能力的，一般连续接种生产4～6代以后就要更换新菌种。 (4)在EM生产和使用过程中，不能接触任何抗生素药品。养殖使用抗生素药品，用EM时要注意间隔期(一般要求间隔12～24小时)。

枯草芽孢杆菌生产工艺

枯草芽孢杆菌生产工艺-实验室操作 1. 培养基 1.1 种子培养基蛋白胨1 %，酵母浸出物0. 5 %，氯化钠1 % ，自然pH。 1.2 基础发酵培养基蔗糖1 %，蛋白胨1 %，磷酸氢二钠0. 2 %，磷酸二氢钠0. 2 %，pH 7. 0。 1.3 主要试剂 蔗糖、葡萄糖、淀粉、玉米淀粉、麦芽糖、酵母浸出物、胰蛋白胨、牛肉膏、尿素、氯化铵、硫酸锰、硫酸镁、磷酸二氢钠、磷酸氢二钠、硫酸亚铁、氯化钠和氯化钙。 1.4 仪器设备 控温摇床、高压蒸气灭菌锅、电子天平、pH 测定仪、无菌操作台和紫外分光光度计。 2.方法 2. 1培养方法 2. 1. 1菌种活化 将保存的菌种转接到斜面培养基，37 ℃培养24 h，备用。 2. 1. 2种子液的制备 取一环活化的菌种，接入装量为50 mL种子培养基的250mL三角瓶中，37℃，180 r/ min 培养18 h。 2. 1. 3摇瓶培养 分别取1 mL 种子液，接入盛有50 mL 发酵培养基的200 mL三角瓶中(接种量为2 % ，V/ V) 。置摇床中，30 ℃振荡培养12 h，转速为160 r/ min 3. 培养条件 3.1碳源 以葡萄糖、蔗糖和麦芽糖为碳源时枯草芽孢杆菌的生长明显优于可溶性淀粉和玉米淀粉。最佳碳源是葡萄糖，其次是蔗糖。 3.2氮源 氮源为有机氮源时枯草芽孢杆菌的生长明显优于无机氮源。最适氮源是酵母浸出物，从发酵成本考虑，酵母浸出物、胰蛋白胨及氯化铵组成的复合氮源较合适。

4.发酵条件 4.1生长曲线 接种12 h后细菌数量开始减少，枯草芽孢杆菌进入生长衰亡期。因此，采用8～12 h 时的菌液作为菌种较合适，此时枯草芽孢杆菌为对数生长末期，既可保持高的细胞活力，又可获得尽可能多的细胞数。 4.2 初始PH 在初始pH 5. 5～8范围内枯草芽孢杆菌均可良好生长，pH 为6. 0 时生长最好，说明枯草芽孢杆菌对pH 的适应性较宽，但随pH 的增大，活菌数呈下降趋势。 4.3温度 枯草芽孢杆菌在25～40℃均可良好生长，其生长的最适温度为35℃。 4.4装液量及接种量 枯草芽孢杆菌为需养菌，在生长过程中需要大量的氧气，装液量不可过多，培养液与容器体积比可设定为2:25；接种量3 % (V/ V) 较适合其生长。 5.干燥方式 采用喷雾干燥和低温冷冻干燥。低温冷冻干燥更利于芽孢的形成，但其操作复杂、成本高，不利于规模化工业生产。而喷雾干燥同样可产生高芽孢率，且成本相对低，更适合工业生产。

发根农杆菌诱导玉米毛状根发生及再生植株

中国科学 C 辑 生命科学 2005, 35 (6): 497~501 497 发根农杆菌诱导玉米毛状根发生及再生植株* 徐洪伟 ①② 周晓馥② 陆静梅① 王俊杰① 王兴智 ①** (① 东北师范大学生命科学学院, 长春 130024; ② 吉林师范大学基因工程研究所, 四平 136000) 摘要 发根农杆菌(Agrobacterium rhizogenes )侵染玉米愈伤组织15天左右获得毛状根. 转化根在不含激素的培养基上快速生长, 并表现出典型的毛状根性状. 在含ZT 1.6 mg/L 和NAA 0.4 mg/L 的MS 培养基上, 毛状根再生成完整转化植株. PCR-Southern 杂交证实T-DNA 已整合入转化株的染色体组. 关键词 发根农杆菌 玉米 毛状根 PCR-Southern 2005-06-24收稿, 2005-09-28收修改稿 * 国家植物转基因中试及产业化基地(批准号: J99-B-001)资助项目 ** 联系人, E-mail: xingzhi@https://www.360docs.net/doc/222779790.html, 单子叶植物是人类粮食的主要来源. 因此, 单子叶植物的基因转化研究引起人们广泛重视. 农杆菌介导的基因转化系统是一种天然有效的遗传转化工程系统. 但是由于单子叶植物不是农杆菌的天然寄主, 阻碍了其在单子叶植物上的应用. 上世纪80年代初期, 根瘤农杆菌侵染单子叶植物开始获得成功, 利用根瘤农杆菌转化玉米的报道很多[1,2], 但是发根农杆菌能侵染的寄主植物还仅限于双子叶植物[3,4]. 然而, cross-inoculation 实验大大地扩大了发根农杆菌的宿主侵染范围. 从上世纪90年代初期以来有关发根农杆菌诱导极少数单子叶植物[5]和多数双子叶植物[6]产生毛状根的报道开始出现. 发根农杆菌感染寄主时, 被损伤的植物细胞合成特殊的小分子酚类化合物如乙酰丁香酮等, 并与vir A 基因产物结合, 诱导其他基因活化, 从而发生感染过程. Ri 质粒不能侵染的单子叶植物可能缺少这种小分子 酚类化合物. 但最近有人报道小麦的种子和胚、玉米幼苗也存在这种小分子酚类化合物. 然而, 迄今为止, 发根农杆菌遗传转化单子叶植物还未见报道[7~9]. Ri 质粒转化具有很多优点: (ⅰ) Ri 质粒可以不经“解除武装(disarm)”进行转化, 并且转化产生的毛状根能够再生植株; (ⅱ) 毛状根是一个单细胞克隆, 可以避免嵌合体, 并且毛状根每一个细胞都是通过转化而来的有利于遗传操作; (ⅲ) 可直接作为中间载体; (ⅳ) Ri 质粒和Ti 质粒可以配合使用, 建立双元载体, 拓展了两类质粒在植物基因工程中的应用范围; (ⅴ) 毛状根适于进行离体培养, 而且很多植物的毛状根在离体培养条件下都表现出原植株的所有特征. 由于发根农杆菌Ri 质粒的TL-DNA 上有rol A-D 基因群, TR-DNA 有tms 基因, 被感染的寄主植物伤口可产生大量的不定根, 从而改善生根状况, 有益于对干旱的抵抗[12], 因此为培育成抗旱型玉米具有重要

大肠杆菌的基因型

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