血小板计数
血小板计数
实验目的
掌握血小板的显微镜目视计数方法
实验原理
血液经稀释按一定的比例稀释和破坏红细胞后，滴入血细胞计数板中，在一定的范围内计数血小板的数量，经过换算求出每一升血液中的血小板的数量。
实验器材
1.试管试管架
2.吸管洗耳球
3.微量吸管胶吸头干脱脂棉
4.玻棒
5.改良牛泡板盖玻片绸布
实验试剂
10g/L草酸安稀释液；草酸铵10g EDTA~Na0.12g溶于1000ml蒸馏水中，混匀
实验操作
1.吸取稀释溶液准确吸取10g/l草酸铵多的稀释液0。38ml于小试管里
2.采血加血常规消毒无名指，穿刺后，让血液自然流出，准确采取20ul置于含有草
酸铵的稀释液中，充分的混匀。
3.稀释待完全溶血后混匀1min
4.冲液静置去混匀的血小板混匀液充入计数池，静置10~15min，使血小板充分的下沉。
保持计数池的湿润，
5.计数用高倍镜计数中央大方格的五个角以及中央的共五个中方格内的血小板的数
量
6.计算血小板数量/L=N*5*10*20*1000000=N*100000000000
参考值
注意事项
1.稀释液的要求定期检查稀释液的质量，检测前要用稀释液空白计数，计数值为零时
方可以充液计数。草酸安要洁净，无细菌，没有尘埃污染
2.制备悬浮液时一定要混匀，不可有气泡，要摇动试管至少200次，不可以剧烈摇动
3.计数时光线要求计数时光线不可太强，注意微有折光性的血小板与尘埃的鉴别，附
着在细胞旁的血小板也要计数在内。
4.器材要求器材要标准化。草酸安质量要达到AR或是GR的级别如使用CP级别溶血
的效果是差的
5.药物影响检测前患者要避免服用阿司匹林及其他的抗血小板药物。
血小板计数
血小板计数 实验目的 掌握血小板的显微镜目视计数方法 实验原理 血液经稀释按一定的比例稀释和破坏红细胞后，滴入血细胞计数板中，在一定的范围内计数血小板的数量，经过换算求出每一升血液中的血小板的数量。 实验器材 1.试管试管架 2.吸管洗耳球 3.微量吸管胶吸头干脱脂棉 4.玻棒 5.改良牛泡板盖玻片绸布
实验试剂 10g/L草酸安稀释液；草酸铵10g EDTA~Na0.12g溶于1000ml蒸馏水中，混匀 实验操作 1.吸取稀释溶液准确吸取10g/l草酸铵多的稀释液0。38ml于小试管里 2.采血加血常规消毒无名指，穿刺后，让血液自然流出，准确采取20ul置于含有草 酸铵的稀释液中，充分的混匀。 3.稀释待完全溶血后混匀1min 4.冲液静置去混匀的血小板混匀液充入计数池，静置10~15min，使血小板充分的下沉。 保持计数池的湿润， 5.计数用高倍镜计数中央大方格的五个角以及中央的共五个中方格内的血小板的数 量 6.计算血小板数量/L=N*5*10*20*1000000=N*100000000000 参考值 注意事项
1.稀释液的要求定期检查稀释液的质量，检测前要用稀释液空白计数，计数值为零时 方可以充液计数。草酸安要洁净，无细菌，没有尘埃污染 2.制备悬浮液时一定要混匀，不可有气泡，要摇动试管至少200次，不可以剧烈摇动 3.计数时光线要求计数时光线不可太强，注意微有折光性的血小板与尘埃的鉴别，附 着在细胞旁的血小板也要计数在内。 4.器材要求器材要标准化。草酸安质量要达到AR或是GR的级别如使用CP级别溶血 的效果是差的 5.药物影响检测前患者要避免服用阿司匹林及其他的抗血小板药物。
血小板计数
编写：伍海波 制定日期：2011.01.01 审核：周可成 核准：伍海波 修订日期：2012.06.01 1．项目名称: 血小板计数 2．测定原理： 用稀释液将血液稀释一定倍数，红细胞及白细胞在稀释液作用下破裂或溶解，剩下血小板。混匀后充入计数池中，计数一定体积内血小板，即可算得每升血液血小板数。 3．标本要求： 用含EDTA.K 2抗凝剂塑料管抽取静脉血1.5ml ，混匀，镜下无PLT 聚集 4．试剂： 4.1 1%草酸铵稀释液：草酸铵 1g 福尔马林（40％甲醛液）0.1ml 枸橼酸钠 0.5g 蒸馏水加至100ml 溶解后过滤即可 4.2 保存条件：2-8℃。放冰箱可保存稍长。 5．仪器和材料： 显微镜、计数板、试管、吸管 6．操作程序： 6.1 在试管中加血小板稀释液0.38ml ； 6.2 CBC 管充分混匀，取血标本20ul ，轻轻加入已盛稀释液试管底部，吸上清液洗吸管三次，轻轻混匀，置10-30分钟待红细胞溶解； 6.3 取干净计数板，试管轻轻振摇，用吸管吸悬液充池，避免产生气泡或溢出，充好液计数板放置10-15分钟； 6.4 低倍找到计数池中央大格，换高倍镜计数全部大方格（400小格）内血小板 6.5 注意事项： a. 全部用具和稀释液要特别清洁； b. 血小板易聚集，充池前要充分混匀，但又不宜用力过猛； c. 一定要等血小板完全下沉后计数； d. 仪器计数高于300×103/ul 或低于60×103/ul 须做直接计数（排除试管内血小板聚集）。 7．计算和参考值 计算：1个大方格内所数血小板数×200=血小板数/ul 。 正常参考值：100×109～300×109/L 警示值：〈10×109/L 8. 参考文献 全国临床检验操作手册
浅析血小板计数异常的原因及解决办法
浅析血小板计数异常的原因及解决办法 发表时间：2012-07-16T15:39:47.547Z 来源：《中外健康文摘》2012年第9期供稿作者：吴守义 [导读] 消除临床医务人员及患者对结果的质疑，而达到和谐的医患关系，促进科室健康发展。 吴守义 (甘肃省会宁县中医院检验科甘肃会宁 730700) 【中图分类号】R445【文献标识码】A【文章编号】1672-5085（2012）9-0166-02 【摘要】寻找血小板计数异常的各种原因，提高实验室对血小板计数检测的准确性，为临床医生提供可靠的诊断依据和疾病的治疗依据，确保用药的安全，需加强对标本的验收，仪器影响，治疗等过程中引导起变化进行分析，从主观和客观因素两方面进行严格要求，尽而减少分析异常，而得到准确结果，就必须对分析仪器进行监测、纠正系统误差、严把标本接收关，对治疗前后标本做好时间与用药的备注，及时与临床进行联系，确保结果真实可靠。 【关键词】血小板异常原因 随着现代检验医疗设备的飞速发展，血球分析仪已成为各医院进行血细胞计数的主要工具，已基本取代了过去传统的手工做法，具有快速、方便、准确、重复性好的优点。因此血小板计数的准确性也得到相应提高。但是在某些因素的影响下，血小板计数的结果出现较大的异常，仪器却无法直接体现。由于检验工作量大，实验室呈流水线形式报告，而个别标本的抽查和手工复查也未能完全防止异常结果的产生。因此，检验人员对仪器各种性能掌握，对血小板影响因素的了解就显得十分重要，只有掌握这些影响因素，才能对结果做出准确判断，查找原因，及时进行纠正，避免异常报告发出，确保临床诊断和治疗。多年来，笔者对住院及门诊病人就血小板结果出现较大异常进行原因查找，从中对患者的准备、标本质量、仪器本身、药物作物四方面进行了探讨，现做如下分析： 1 患者的准备 采血前患者应尽量减少运动保持平静。住院患者应在早晨卧床时取血，冬天门诊患者从室外进入室内，应等其暖和后采血。患者的精神状态、样本采集时间、吸烟、季节等因素，对血小板计数结果均有一定影响。 2 加强对标本的验收查对，是确保血小板计数准确的主要因素 2.1 抗凝剂的使用要求标本是否用EDTA-K2进行抗凝且抽取的血量是否符合抗凝剂比例要求，不适宜的抗凝剂以及血量过多直接影响血小板计数结果偏低。接收标本时要仔细查对。 2.2 正确的采血方法抽血时避免反复穿刺将组织液抽出或将气泡混入，抽血时要求流畅，避免在淤血、伤口、溃疡等附近采血，使用压脉带时间不宜过长，避免血小板总数结果不降，坚决杜绝输液侧进行抽血。对于预稀释血进行测定时，采血针刺应稍深，使血自然流流出，避免因挤压而产生结果异常。 2.3 标本的转运对于采集的标本要在半小时内送检，避免血小板因聚集、黏附破坏等因素而造成结果偏低，红细胞大量破坏，细细胞碎片增加，而使血小板计数结果假性升高，因此应避免不正确的抽血和标本时间过长导致红细胞破坏的主观因素。 3 由仪器因素引起血小板计数结果的异常 3.1 试剂要求对于使用的溶血素必须在有效期内，避免使用过期、失效、变质的溶血剂，对溶血素的加样必须准确。否则因红细胞的破坏不全，使红细胞碎片及小红细胞计入血小板总数而引起血小板假性增高，在血小板直方图20fl处出现上扬不与横坐标重合，而红细胞直方图左侧出现一小峰。此时应对仪器进行清洗维护并校标溶血素加样器，再进行标本测定，避免出现成批异常结果。 3.2 计数仪的安装及工作环境 血小板的测定是通过电压变化形成脉冲信号或光散射进行检测计数，因此，必须要求有稳压器并有良好的接地线，否则产生静电脉冲信号而使血小板的起点左偏，并有许多小峰形成。计数仪必须安装在干净清洁，避免阳光直射的地方，远离电滋波及噪音对仪器的干扰，确保计数准确可靠。 3.3 加强仪器维护保养，定期进行液路管道系统检查 科室要有专人对仪器进行维护保养，避免堵孔半堵孔现象。定期检查液路管道系统，对老化变形的管道及时清洗或更换，避免血小板因黏附和聚集而导致计数结果异常变化，影响计数准确性。 4 疾病在治疗中引起计数结果的异常变化 4.1 输血因素对于输血后的患者，其血小板出现大小不一，计数后结果常常现出错误提示（R）。表现为血小板直方图血小板宽度增大，重复测定时会出现很大差距，从而使结果极不可靠。对于多次输血的患者体内产生外源性抗原的同种免疫，再次输入后产生血小板特异性抗原—抗体复合物，使输入的血小板及自身血小板受到破坏，而使计数结果不够稳定。 4.2 脂肪乳的影响对于输入脂肪乳的患者，由于脂肪乳的颗粒很小，直径约为2-4微米，而血小板的测试范围为2-20微米，因此测定结果计入了脂肪乳颗料而使总数假性增高。过于输入脂肪乳患者如需进行血常规检测，建议在5—6小时后再进行采血检查，确保计数准确。 4.3 药物因素对于长期使用青霉素、地高辛、双氢克尿塞、甲基多巴等药物的患者，这些药物与血浆蛋白结合形成抗原，刺激机体产生血小板抗体，有的药物还可引导起血小板卫星现象，从而使血小板总数减少。 综上所述，做为一名检验人员不权要求具有扎实的专业理论基础知识和熟练的操作技能，更应该有丰富的实验经验，严谨细致的工作作风。在日常工作中随时观察和分析处理问题，不能盲目的进行操作测试和签发报告。只有对合格标本进行正确的测定，科学合理的检测结果，才能为病人提供真实可信的实验数据，满足临床诊断和治疗的需求，这就要求我们加强业务学习，随时结合临床实际，及时查找出现问题的原因，并加以分析解决。消除临床医务人员及患者对结果的质疑，而达到和谐的医患关系，促进科室健康发展。参考文献 [1]BC-5380血液细胞计数仪操作. [2]叶应妩，王毓三，申子瑜.全国临床检验操作规程. [3]钱敏，张杰、童明庆.病人输脂肪乳后血小板计数准确性的探讨[J].临床检验杂志.2011，19（4）:252-253.
血小板检查
第三节血小板检查 一、选择题 【A题型】 1.血小板计数的适应证不包括· A.不明原因的出血 B.排除血友病 C.监测病人的化疗和放疗过程 D.疑为骨髓增生 E.疑为血小板破坏增加 2.血小板计数首选的稀释液是 A.高铁氰化钾 B.复方碘 C.草酸钱 D.复方尿素 E.稀盐酸 3.血小板计数的参考方法为 A.普通光学显微镜直接计数法 B.普通光学显微镜间接计数法 C.免疫法 D.血细胞分析仪法 E.相差显微镜直接计数法 4.血小板计数的稀释液必须具备的条件不包括 A.能有效抑制血液凝固 B.能防止血小板形态变化 C.能完全破坏红细胞 D.组成复杂并易于保存 E.不利于细菌生长 5.可导致血小板假性减少的是 A.巨大血小板 B.小红细胞 C.红细胞碎片 D.淋巴细胞核碎片 E.细胞质碎片 6.可导致血小板假性增多的是 A.卫星现象 B.红细胞碎片 C.巨大血小板 D.异常蛋白血症 E.血小板聚集或凝集 7.血小板计数规范化操作不包括 A.充液前必须轻轻摇动血小板悬液2分钟 B.显微镜下观察光线要亮 C.器材必须洁净、干燥 D.灌人计数池后静置15分钟再计数 E.采血1小时后完成计数 8.血小板计数生理性变化正确的是 A.午后低，早晨高 B.春季低，冬季高 C.月经后低，月经前高 D.静脉血低，毛细血管血高 E.妊娠中晚期低，分娩后高 9.可引起自发性出血的血小板计数小于 A. 400 X 109/L B.200 X 109/L C. 100 X 109/L D.60 X 109/L E. 10 X 109/L 10.常有血栓形成危险的血小板计数大于 A. 1000 X 109/L B.400 X 109/L C. 300 X 109/L D.100 X 109/L E. 60 X 109/L 11.血小板增多常见于 A.慢性粒细胞性白血病 B.血栓性血小板减少性紫癜 C.脾功能亢进 D.急性白血病 E.放射性损伤 12.血小板反应性增多见于 A.慢性粒细胞性白血病 B.原发性血小板增多症 C.急性化脓性感染 D.真性红细胞增多症 E.脾切除 13.不能导致血小板生成障碍的是 A.急性白血病 B.系统性红斑狼疮 C.再生障碍性贫血D巨幼细胞性贫血 E.恶性肿瘤骨髓转移 .14.导致血小板消耗过多的是 A.脾肿大 B.血液被稀释C一巨大血小板综合征 D.脾功能亢进 E.弥漫性血管内凝血 15.不是原发性血小板增多的是 A.常见脾肿大 B.为干细胞缺陷 C.血小板功能减低 D.并发症少 E.血小板常大于1000 X 109 /L 16.不是继发性血小板增多的是 A.多为反应性 B.脾肿大罕见 C.并发症多见 D.血小板功能正常 E.血小板常小于1000 X 109 /L 17.血小板计数质量保证的主要原则是 A.可选用尿素稀释液 B.避免血小板被激活一和破坏 C.准确辨认血小板 D.可用肝素抗凝血 E.血标本可以低温保存 18.普通光镜直接计数血小板，首选的是 A.生理盐水 B.复方尿素稀释液 C.草酸按稀释液 D.高铁氰化钾稀释液 E.自动血细胞分析仪稀释液 19.关于血小板的主要功能，错误的是 A.粘附功能 B.聚集功能 C.促进血块收缩 D.维持血管内皮完整 E.抗凝血功能 二、问答题 1.血小板计数的稀释液必备的条件有哪些? 2.如何鉴别原发性血小板增多和继发性血小板增多? 3.如何评价普通显微镜直接计数血小板的方法?
血小板计数的参考方法
WS 中华人民共和国卫生行业标准 WS/T 244—2005 ___________________________________________________ 血小板计数的参考方法 Reference method for platelet counting 2005-5-16发布2005-12-1实施 ___________________________________________________________中华人民共和国卫生部发布
WS/T 244-2005 前言 为了保证血小板的计数结果具有溯源性和准确性，特制定本标准。 本标准从2005年5月16日起实施。 本标准由卫生部医政司提出。 本标准起草单位：卫生部临床检验中心 本标准主要起草人：彭明婷、申子瑜、陆红、谷小林、杨振华。 本标准由卫生部委托卫生部临床检验中心负责解释。
中华人民共和国卫生行业标准 血小板计数的参考方法WS/T 244—2005 Reference method for platelet counting _____________________________________________________________________ 1 范围 本标准规定了血小板计数参考方法的技术要求。 本标准适用于建立血小板计数参考方法的实验室。 2 规范性引用文件 国际血液学标准化委员会（ICSH）-2001 血小板计数的参考方法 3 定义 参考方法（Reference method） 一种可清楚和准确描述的用于特定检测的技术，该技术要有依据，可提供足够准确和精密的实验数据以评价其他实验方法检测结果的有效性。若有决定性方法，参考方法的准确性必须与决定性方法进行比较。参考方法应溯源至一级计量标准并且须标示不准确度和不精密度。 4 总则 4．1本标准采用间接法计数血小板（Platelet，PLT）。即用荧光标记PLT后，用流式细胞仪检测红细胞（Red blood cell，RBC）和PLT的比值，同时用单通道阻抗原理的半自动细胞计数仪准确计数RBC，用RBC除以RBC和PLT的比值得出PLT的计数值。 4. 2 为了保证参考方法检测结果的精密度和准确性，建立参考方法的实验室必须进行比对。 5 血小板计数参考方法的原理 首先将EDTA抗凝血标本用无菌缓冲液进行预稀释，再用特定的荧光抗体对PLT进行染色。溶液中已染色的血小板被稀释成计数浓度，用流式细胞仪检测血小板和红细胞，根据荧光强度和散射光强度将阈值设在可从RBC中区分PLT的
血小板计数方法-血涂片法不容忽视
血小板计数方法-血涂片法不容忽视 摘要】目的探讨血涂片血小板计数方法的意义。方法取抗凝静脉血制成血涂片，经瑞氏染色后普通光学显微镜下间接数血小板，将其结果血细胞分析仪上测出血 小板计数和手工法计数进行比较。结果配对t检验比较，血小板降低组血涂片法 与血细胞分析仪计数进行比较，差异有统计学意义（P＜0.01），与手工法计数血 小板结果相比较，差异无统计学意义（P＞0.05），血小板正常组和增高组用血涂 片法分别与血细胞分析仪计数和手工法计数进行比较，各方法间差异无统计学意 义（P＞0.05）。结论结果显示，对血小板正常或升高的标本，血细胞分析仪计 数结果比较准确，但对血小板降低的标本，计数结果准确性较差。血涂片法间接 计数血小板直观、准确，具有一定的临床应用价值，对血细胞分析仪有复核作用。【关键词】血小板计数血涂片法血细胞分析仪手工法 作为血常规检查项目之一的血小板计数，临床医生和患者都越来越关心其检 查结果的准确性。因此，迫切要求准确计数血小板，保证实验室所测得的血小板 数是患者体内血小板数的真实体现。另一方面引起人们对血小板计数结果关注的 原因是目前所有的血小板计数方法都存在不少缺陷。迄今为止，所有计数血小板 的方法对于血小板减少的标本的准确性都比较差，亟需研究改进。本文采用两种 血涂片间接计数血小板的方法，将其结果与自动血细胞分析仪和手工法计数结果 进行比较，探讨血涂片法计数血小板的临床意义。 1 材料与方法 1.1标本采集收集2006年10月至2009年10月在本院住院及门诊患者标本 共150例。以同期血细胞分析仪所做质控结果为标准，根据血小板数量将患者标 本分成3组：血小板降低组（血小数小于100×109/L）50例；血小板正常组[血小 板数（100-300）×109/L]50例；血小板增高组（血小板数大于300×109/L）50例，所有标本均为乙二胺四乙酸抗凝静脉血。 1.2仪器与试剂日立牌CA-800型血细胞分析仪、普通显微镜、血细胞计数板。瑞氏染液、10g/L草酸铵稀释液。 1.3方法 1.3.1血涂片法取抗凝血10uL涂片，经瑞氏染色后分别用两种方法计数血涂 片中的血小板数。（1）血涂片A法：选择血涂片上细胞分布均匀的区域，在计 数1000个红细胞的同时计数血小板数，求得血小板与红细胞比值，将此比值乘 以同一份标本经血细胞分析仪测定所得的红细胞数，得到该血涂片法计数的血小 板数[3]。（2）血涂片B法：计数血涂片上100个白细胞的同时计数血小板数， 求得血小板与白细胞数，得到该血涂片法计数的血小板数[4]。 1.3.2血细胞分析仪法采用CA-800型血细胞分析仪测定标本的血小板、红细胞、白细胞数，所有标本采集后于1h内完成检测。 1.3.3手工法计数采用草酸铵稀释法同时计数血小板数。 1.4统计学方法数据处理、采用配对t检验比较和P值判断。 2 结果 结果见表1。由表1可见，血小板降低组4种方法两两比较，血涂片A、B法 及手工法分别与血细胞分析仪法比较，差异有统计学意义（P＜0.01），血涂片A、B法与手工法比较，差异无统计学意义（P＞0.05）；血小板升高组4种方法两两 比较，差异均无统计学意义（P＞0.05）；血小板正常组4种方法两两比较，差异 统计学意义（P＞0.05）。
血小板手工计数法
血小板手工计数 血小板计数，指单位体积血液中所含的血小板数目。血小板是血液中最小的细胞，可保护毛细血管的完整性。 正常范围 (100~300)×10^9/L 临床意义 血小板计数有助于临床上止血和血栓性疾病的诊断和鉴别诊断。 增多:见于原发性血小板增多症、慢性粒细胞白血病、真性红细胞增多症、急性大出血、急性溶血、恶性肿瘤、感染、缺氧、创伤、骨折等。 减少:见于以下情况: 血小板生成减少(见于急性白血病和再生障碍性贫血等) 血小板破坏过多(见于原发性血小板减少性紫癜、脾功能亢进等疾病) 血小板消耗增加(见于弥散性血管内凝血、血栓性血小板减少性紫癜等)。 血小板手工计数法操作步骤： 1、于清洁试管中加入稀释液0.38ml(草酸铵)。 2、准确吸取毛细血管血20μl,擦去管尖外附着血液,置于血小板稀释液内,立即充分混匀。待完全溶血后再次混匀1min。 3、取上述均匀的血小板悬液1滴,注入计数池内,静置10~15min,使血小板下沉。 4、用高倍镜计数中央1个大方格(即400个小格)内血板,乘以0.2×10^9/L即为每升血液内血小板数。
下图可见最多的是双凹圆盘状的红细胞，两个红色箭头所指的是白细胞，而那些比红细胞小很多，具有折光性的“小点”则是血小板。
公式解读 ①×5：将5个中方格的血小板数换算为1个大方格的血小板数； ②×10：将1个大方格（0.1ul）的血小板数换算为1.0ul中的血小板数； ③×20：血液的稀释倍数； ④×10e6：由1.0ul换算为1L； 所以，5个中方格内数到多少个血小板，该标本的血小板计数就是多少（×10e9/L）。 注意： 1、全部用具和稀释液要特别清洁，显微镜仔细的擦净，无任何斑点玻璃器械清洁光滑，因为显微镜目镜，物镜，计数池和盖片上的尘埃可被误认为血小板。 2、刺血一定要深（3mm）。 3、血小板容易聚焦，在滴入计数池前充分混匀，用力太大会破坏血小板，