氨基酸分析方法

氨基酸概述

第三节氨基酸 氨基酸是一类具有特殊重要意义的化合物。因为它们中许多是与生命活动密切相关的蛋白质的基本组成单位,是人体必不可少的物质,有些则直接用作药物。 α-氨基酸是蛋白质的基本组成单位。蛋白质在酸、碱或酶的作用下,能逐步水解成比较简单的分子,最终产物是各种不同的α-氨基酸。水解过程可表示如下: 蛋白质→月示→胨→多肽→二肽→α-氨基酸 由蛋白质水解所得到的α-氨基酸共有20多种,各种蛋白质中所含氨基酸的种类和数量都各不相同。有些氨基酸在人体内不能合成,只能依靠食物供给,这种氨基酸叫做必需氨基酸(见表18-3,*)。 一、氨基酸的构造、构型及分类、命名 (一)氨基酸的构造和构型 分子中含有氨基和羧基的化合物,叫做氨基酸。 由蛋白质水解所得到的α-氨基酸,可用通式表示如下: 除甘氨酸(R=H)外,所有α-氨基酸中的α碳原子均是手性碳,故有D型与L型两种构型。天然氨基酸均为L-氨基酸。 L-氨基酸 (二)α-氨基酸的分类和命名 氨基酸有脂肪族氨基酸、芳香族氨基酸和杂环氨基酸。 在α-氨基酸分子中可以含多个氨基和多个羧基,而且氨基和羧基的数目不一定相等。因此,天然存在的α-氨基酸常根据其分子中所含氨基和羧基的数目分为中性氨基酸、碱性氨基酸和酸性氨基酸。所谓中性氨基酸是指分子中氨基和羧基的数目相等的一类氨基酸。但氨基的碱性和羧基的酸性不是完全相当的,所以它们并不是真正中性的物质,只能说它们近乎中性。分子中氨基的数目多于羧基时呈现碱性,称为碱性氨基酸;反之,氨基的数目少于羧基时呈现酸性,称为酸性氨基酸。

氨基酸的系统命名方法与羟基酸一样,但天然氨基酸常根据其来源或性质多用俗名。例如胱氨酸是因它最先来自尿结石;甘氨酸是由于它具有甜味而得名(见表18-3)。 表18-3 常见的α-氨基酸

氨基酸自动分析仪

氨基酸自动分析仪 1.实验目的 ①了解氨基酸自动分析仪的分析原理; ②掌握氨基酸自动分析仪的操作技巧。 2.实验原理 测定原理是利用样品各种氨基酸组分的结构不同、酸碱性、极性及分子大小不同,在阳离子交换柱上将它们分离,采用不同pH值离子浓度的缓冲液将各氨基酸组分依次洗脱下来,再逐个以另一流路的茚酮试剂混合,然后共同流至螺旋反应管中,于一定温度下(通常为115~120℃)进行显色反应,形成在570nm有最大吸收的蓝紫色产物。其中的羟脯氨酸与茚三酮反应生成黄色产物,其最大吸收在440nm。这些有色产物对570nm、440nm光的吸收强度与洗脱出来的各氨基酸的浓度(或含量)之间的关系符合比耳定律,可与标准氨基酸比较作定性和定量测定。 3.实验仪器与耗材 实验仪器: 耗材: 4.实验步骤 ①样品处理: 测定样品中各种游离氨基酸含量,可以除去脂肪杂质后,直接上柱进行分析。 测定蛋白质的氨基酸组成时样品必须经酸水解,使蛋白质完全变成氨基酸后才上柱进行分析。 ②样品分析:经过处理后的样品上柱进行分析。上柱的样品量根据所用自动分析仪的灵 敏度来确定。一般为每种氨基酸0.1μmol 左右(水解样品干重为0.3mg 左右)。测定必须在pH5~5.5、100℃下进行,反应进行时间为10~15min,生成的紫色物质在570nm 波长下进行比色测定。而生成的黄色化合物在440nm 波长下进行比色测定。做一个氨基酸全分析

一般只需1h 左右,同时可将几十个样品一起装入仪器,自动按序分析,最后自动计算给出精确的数据。仪器精确度在±1~3%。用阳离子交换柱分离及测定氨基酸所的如下图 自动分析仪氨基酸分离图谱 5.结果计算 带有数据处理机的仪器,各种氨基酸的定量结果能自动打印出来,否则,可用尺子测量峰高或用峰高乘以半峰宽确定峰面积进而计算出氨基酸的精确含量。另外,根据峰出现的时间可以确定氨基酸的种类。 6.说明 ①显色反应用的茚三酮试剂,随着时间推移发色率会降低,故在较长时间测样过程中应随时采用已知浓度的氨基酸标准溶液上柱测定以检验其变化情况。 ②近年出现的采用反相色谱原理制造的氨基酸分析仪,可使蛋白质水解出的17 种氨基酸在12min 内完成分离,且具有灵敏度高(最小检出量可达1pmol)、重现性好以及一机多用等优点。

分析化学中常用的分离和富集方法教案

第8章 分析化学中常用的分离和富集方法 教学目的:学习各种常用分离和富集方法的原理、特点及应用,掌握复杂体系的 分离与分析;分离法的选择、无机和有机成分的分离与分析。 教学重点:掌握各种常用分离和富集方法的原理、特点及应用。 教学难点:萃取分离的基本原理、实验方法和有关计算。 8.1 概述 干扰组分指样品中原有杂质(溶解)或加入试剂引入的杂质,当杂质量少时可加掩蔽剂消除干扰,量大或无合适掩蔽剂时可采用分离的方法。 分离完全的含义:(1)干扰组分少到不干扰;(2)被测组分损失可忽略不计。 完全与否用回收率表示 100?分离后测得的量回收率=%原始含量 对回收率的要求随组分含量的不同而不同: 含量(质量分数) 回收率 1%以上 >99.9% 0.01-1% >99% 0.01%以下 90-95% 常用的分离方法:沉淀、挥发和蒸馏、液-液萃取、离子交换、色谱等。 8.1.1沉淀分离法 1.常量组分的分离(自己看书:5分钟) (1) 利用生成氢氧化物 a. NaOH 法 b. NH3法(NH 4+存在) c. 有机碱法 六次(亚)甲基四胺 pH =5-6 d. ZnO 悬浮液法 pH =6 (2) 硫化物沉淀 (3) 有机沉淀剂 2.痕量组分的共沉淀分离和富集 (1) 无机共沉淀分离和富集 a. 利用表面吸附进行共沉淀 CuS 可将0.02ug 的Hg 2+从1L 溶液中沉淀出 b. 利用生成混晶 (2) 有机共沉淀剂 灼烧时共沉淀剂易除去,吸附作用小,选择性高,相对分子质量大,体积也大,分离效果好。 a. 利用胶体的凝聚作用进行共沉淀:辛可宁,丹宁,动物胶b. 利用形成离子缔合物进行共沉淀:甲基紫,孔雀绿,品红,亚甲基蓝c. 利用“固体萃取剂”进行共沉淀。 8.1.2挥发和蒸馏分离法 挥发法:选择性高 As 的氢化物,Si 的氟化物,As 、Sb 、Sn 、Ge 的氯化物 蒸馏法:N -NH 4+-NH 3↑(酸吸收) 利用沸点不同,进行有机物的分离和提纯。 8.2 液-液萃取分离法 8.2.1萃取分离法的基本原理 萃取:把某组分从一个液相(水相)转移到互不相溶的另一个液相(有机相)的过程。 反萃取:有机相→水相

各种氨基酸的作用

天然的氨基酸现已经发现的有300多种,其中人体所需的氨基酸约有22种,分非必需氨基酸和必需氨基酸(人体无法自身合成)。另有酸性、碱性、中性、杂环分类,是根据其化学性质分类的。1、必需氨基酸(essential amino acid):指人体(或其它脊椎动物)不能合成或合成速度远不适应机体的需要,必需由食物蛋白供给,这些氨基酸称为必需氨基酸。共有8种其作用分别是:①赖氨酸(Lysine ):促进大脑发育,是肝及胆的组成成分,能促进脂肪代谢,调节松果腺、乳腺、黄体及卵巢,防止细胞退化;②色氨酸(Tryptophan):促进胃液及胰液的产生;③苯丙氨酸(Phenylalanine):参与消除肾及膀胱功能的损耗; ④蛋氨酸(又叫甲硫氨酸)(Methionine);参与组成血红蛋白、组织与血清,有促进脾脏、胰脏及淋巴的功能;⑤苏氨酸(Threonine):有转变某些氨基酸达到平衡的功能;⑥异亮氨酸(Isoleucine ):参与胸腺、脾脏及脑下腺的调节以及代谢;脑下腺属总司令部作用于甲状腺、性腺;⑦亮氨酸(Leucine ):作用平衡异亮氨酸;⑧缬氨酸(Valine):作用于黄体、乳腺及卵巢。8种人体必需氨基酸的记忆口诀①"借一两本蛋色书来" 谐音: 借(缬氨酸), 一(异亮氨酸),两(亮氨酸),本(苯丙氨酸),蛋(蛋氨酸),色(色氨酸),书(苏氨酸),来(赖氨酸). ②"笨蛋来宿舍,晾一晾鞋" 笨(苯丙氨酸)蛋(蛋氨酸)来(赖氨酸)宿(苏氨酸)舍(色氨酸),晾(亮氨酸)一晾(异亮氨酸)鞋(缬氨酸)③”携带一两本甲硫色书来”携(缬氨酸)带一(异亮氨酸)两(亮氨酸)本(苯丙氨酸)甲硫(甲硫氨酸)色(色氨酸)书(苏氨酸)来(赖氨酸) 其理化特性大致有:1)都是无色结晶。熔点约在230°C 以上,大多没有确切的熔点,熔融时分解并放出CO2;都能溶于强酸和强碱溶液中,除胱氨酸、酪氨酸、二碘甲状腺素外,均溶于水;除脯氨酸和羟脯氨酸外,均难溶于乙醇和乙醚。2)有碱性[二元氨基一元羧酸,例如赖氨酸(lysine)];酸性[一元氨基二元羧酸,例如谷氨酸(Glutamic acid)];中性[一元氨基一元羧酸,例如丙氨酸(Alanine)]三种类型。大多数氨基酸都呈显不同程度的酸性或碱性,呈显中性的较少。所以既能与酸结合成盐,也能与碱结合成盐。3)由于有不对称的碳原子,呈旋光性。同时由于空间的排列位置不同,又有两种构型:D型和L型,组成蛋白质的氨基酸,都属L型。由于以前氨基酸来源于蛋白质水解(现在大多为人工合成),而蛋白质水解所得的氨基酸均为α-氨基酸,所以在生化研究方面氨基酸通常指α-氨基酸。至于β、γ、δ……ω等的氨基酸在生化研究中用途较小,大都用于有机合成、石油化工、医疗等方面。氨基酸及其衍生物品种很多,大多性质稳定,要避光、干燥贮存。2、非必需氨基酸(nonessential amino acid):指人(或其它脊椎动物)自己能由简单的前体合成,不需要从食物中获得的氨基酸。例如甘氨酸、丙氨酸等氨基酸。1,2萘醌、4磺酸钠在碱性溶液深红色(检验α-氨基酸)肽键(peptide bond):一个氨基酸的羧基与另一个氨基酸的氨基缩合,除去一分子水形成的酰胺键。肽(peptide):两个或两个以上氨基通过肽键共价连接形成的聚合物。是氨基酸通过肽键相连的化合物,蛋白质不完全水解的产物也是肽。肽按其组成的氨基酸数目为2个、3个和4个等不同而分别称为二肽、三肽和四肽等,一般含10个以下氨基酸组成的称寡肽(oligopeptide),由10个以上氨基酸组成的称多肽(polypeptide),它们都简称为肽。肽链中的氨基酸已不是游离的氨基酸分子,因为其氨基和羧基在生成肽键中都被结合掉了,因此多肽和蛋白质分子中的氨基酸均称为氨基酸残基(amino acid residue)。多肽有开链肽和环状肽。在人体内主要是开链肽。开链肽具有一个游离的氨基末端和一个游离的羧基末端,分别保留有游离的α-氨基和α-羧基,故又称为多肽链的N端(氨基端)和C端(羧基端),书写时一般将N端写在分子的左边,并用(H)表示,并以此开始对多肽分子中的氨基酸残基依次编号,而将肽链的C端写在分子的右边,并用(OH)来表示。目前已有约20万种多肽和蛋白质分子中的肽段的氨基酸组成和排列顺序被测定了出来,其中不少是与医学关系密切的多肽,分别具有重要的生理功能或药理作用。多肽在体内具有广泛的分布与重要的生理功能。其中谷胱甘肽在红细胞中含量丰富,具有保护细胞膜结构及使细胞内酶蛋白处于还原、活性状态的功

BLAST_核酸氨基酸序列相似性比较

BLAST 核酸/氨基酸序列相似性比较 Blast (Basic Local Alignment Search Tool)是一套在蛋白质数据库或DNA数据库中进行相似性比较的分析工具。BLAST程序能迅速与公开数据库进行相似性序列比较。BLA ST结果中的得分是对一种对相似性的统计说明。 BLAST 采用一种局部的算法获得两个序列中具有相似性的序列。如果您想进一步了解BLAST算法,您可以参考NCBI的BLAST Course ,该页有BLAST算法的介绍。 BLAST的功能 BLAST对一条或多条序列(可以是任何形式的序列)在一个或多个核酸或蛋白序列库中进行比对。BLAST还能发现具有缺口的能比对上的序列。 BLAST是基于Altschul等人在J.Mol.Biol上发表的方法(J.Mol.Biol.215:403-410(19 90)),在序列数据库中对查询序列进行同源性比对工作。从最初的BLAST发展到现在NC BI提供的BLAST2.0,已将有缺口的比对序列也考虑在内了。BLAST可处理任何数量的序列,包括蛋白序列和核算序列;也可选择多个数据库但数据库必须是同一类型的,即要 么都是蛋白数据库要么都是核酸数据库。 所查询的序列和调用的数据库则可以是任何形式的组合,既可以是核酸序列到蛋白库中作查询,也可以是蛋白序列到蛋白库中作查询,反之亦然。 通常根据查询序列的类型(蛋白或核酸)来决定选用何种BLAST。假如是作核酸-核酸查询,有两种BLAST供选择,通常默认为BLASTN。如要用TBLASTX也可,但记住此时不考虑缺口。 BLAST适用于本地查询。可以下载公共数据库,对于该数据库的更新和维护是必不可少的。如果要直接到网上查询也可以(即NetBlast),但记住如果你认为自己的序列很有价值的话,还是谨慎为宜。 如何访问在线的BLAST功能服务? 您只要通过浏览器访问Blast主页(https://www.360docs.net/doc/2f18928353.html,/) 。所有的查询和分析都通过浏览器来完成,就象您在您的本地机上一样方便和快捷。 BLAST 采用一种局部的算法获得两个序列中具有相似性的序列。 Blast中常用的程序介绍: 1、BLASTP是蛋白序列到蛋白库中的一种查询。库中存在的每条已知序列将逐一地同每条所查序列作一对一的序列比对。 2、BLASTX是核酸序列到蛋白库中的一种查询。先将核酸序列翻译成蛋白序列(一条核酸序列会被翻译成可能的六条蛋白),再对每一条作一对一的蛋白序列比对。 3、BLASTN是核酸序列到核酸库中的一种查询。库中存在的每条已知序列都将同所查序列作一对一地核酸序列比对。

氨基酸的讲解

氨基酸的讲解 一、判断题 ()1.蛋白质的营养价值主要决定于氨基酸酸的组成和比例。 ()2.谷氨酸在转氨作用和使游离氨再利用方面都是重要分子。 ()3.氨甲酰磷酸可以合成尿素和嘌呤。 ()4.半胱氨酸和甲硫氨酸都是体内硫酸根的主要供体。 ()5.限制性蛋白水解酶的催化活性比非限制性的催化活性低。 ()6.磷酸吡哆醛只作为转氨酶的辅酶。 ()7.在动物体内,酪氨酸可以经羟化作用产生去甲肾上腺素和肾上腺素。 ()8.尿素的N原子分别来自谷氨酰胺和天冬氨酸。

()9.芳香族氨基酸都是通过莽草酸途径合成的。 ()10.丝氨酸能用乙醛酸为原料来合成。 二、选择题(单选题) 1.生物体内氨基酸脱氨基的主要方式为: A.氧化脱氨基B.还原脱氨基C.直接脱氨基D.转氨基E.联合脱氨基 2.成人体内氨的最主要代谢去路为: A.合成非必需氨基酸B.合成必需氨基酸C.合成NH4+随尿排出D.合成尿素E.合成嘌呤、嘧啶、核苷酸等 3.转氨酶的辅酶组分含有: A.泛酸B.吡哆醛(或吡哆胺)C.尼克酸D.核黄素E.硫胺素

4.GPT(ALT)活性最高的组织是: A.心肌B.脑C.骨骼肌D.肝E.肾 5.嘌呤核苷酸循环脱氨基作用主要在哪些组织中进行? A.肝B.肾C.脑D.肌肉E.肺 6.嘌呤核苷酸循环中由IMP生成AMP时,氨基来自: A.天冬氨酸的α-氨基B.氨基甲酰磷酸C.谷氨酸的α-氨基D.谷氨酰胺的酰胺基E.赖氨酸上的氨基 7.在尿素合成过程中,下列哪步反应需要ATP? A.鸟氨酸+氨基甲酰磷酸→瓜氨酸+磷酸B.瓜氨酸+天冬氨酸→精氨酸代琥珀酸 C.精氨酸代琥珀酸→精氨酸+延胡素酸D.精氨酸→鸟氨酸+尿素E.草酰乙酸+谷氨酸→天冬氨酸+α-酮戊二酸

氨基酸序列推导

氨基酸序列推导 1.请指出天冬氨酸分别在(1)pH 1.0, (2)pH 3.0 ,(3) pH 6.0 ,(4) pH 11.0 时占优势的净电荷形 式(分别用“+”“-”“0”表示)。 2.将含有Gly, Ala , Glu ,Lys ,Arg , His 的溶液点在滤纸条的中央,用 pH 6的缓冲液浸湿,放入 电场中,请问(1)哪些氨基酸移向正极?(2)哪些氨基酸移向负极?(3)哪些氨基酸停留在原处或接近原处? 3.下述每组混合物分别在正丁醇-醋酸-水系统进行纸层析,指出每组中各组分的相对迁移率(假定水 相的pH 为4.5 ,用“ >”表示):(1).Val和Lys,(2).Phe 和Ser,(3).Ala、Val和 Leu, (4).Tyr、Ala 、Ser和 His 。 4.将含有Asp (pI=2.98),Gly (pI= 5.97),Thr (pI= 6.7),Lys (pI=9.74)的pH为3.0 的柠檬酸溶液, 加到预先用相同缓冲液平衡过的阳离子交换树脂柱上,随后用逐渐增加NaCl浓度的相同缓冲液洗脱,问这四种氨基酸的洗脱顺序? 5.将Lys ,Arg ,Asp ,Glu ,Tyr ,Ala的混合溶液在高pH 时,加到阴离子交换树脂柱上,用连续递减 pH值的溶液洗脱,请预测这些氨基酸的洗脱顺序。 6.已知一个八肽的氨基酸组成为:Asp, Ser ,Gly ,Ala ,Met ,Phe 和Lys2 ,又作了一系列分析结果 如下:(1)FDNB反应后可得到DNP-Ala,(2)胰凝乳蛋白酶水解后,得到一个四肽,其组成为:Asp, Gly, Lys, Met,此四肽的FDNB反应后得到DNP-Gly。(3)胰蛋白酶水解该八肽后得到两个三肽和一个二肽,三肽的组成分别为:Lys , Ala ,Ser和Phe , Lys , Gly。二肽经CNBr处理后产生Asp。请写出该八肽的氨基酸顺序。 7.某肽经CNBr处理得到三个肽段,其顺序分别为:Asn-Trp-Gly-Met; Gly-Ala-Leu; Ala-Arg-Tyr-Asn-Met, 用胰凝乳蛋白酶水解此肽也得到三个片断,其中一个为四肽,用6N的盐酸水解此四肽只得到Asp2和Met,问此肽的氨基酸排列顺序? 8.根据下列数据推导出氨基酸的顺序:(1)完全水解得到Phe, Pro, Glu , Lys2, Met 。(2)用FDNB 处理得到DNP-Phe。(3)CNBr处理得到一个两肽和一个四肽。(4)胰蛋白酶水解得到两个三肽。(5)羧肽酶A或羧肽酶B处理都不能得到阳性结果。 9.一个由Ala, Cys, Lys, Phe和Ser组成的五肽,用TIPC分析,得到PTH-Ser;用胰蛋白酶水解得到 一个N端为Cys的三肽和一个N端为Ser的二肽;用胰凝乳蛋白酶水解上述三肽生成Ala 和一个二肽,写出该五肽的顺序。 10.从以下资料推出五肽的氨基酸序列:(1)含有Phe , Pro , Glu , Lys2(2)Edman 试剂处理得到 PTH-Glu (3)用胰蛋白酶、羧肽酶A和羧肽酶B处理都不能得到阳性结果。 1.(1)pH 1.0, +1;(2)pH 3.0 , 0;(3) pH 6.0, -1 ; (4) pH 11.0,-2 2. Glu 移向正极;Gly, Ala接近原处;Lys ,Arg , His移向负极 3. Val > Lys, (2).Phe > Ser,(3) Leu > Val > Ala,(4).Tyr > Ala > Ser > His 4. Asp、 Gly 、Thr、 Lys 5. Arg ,Lys , Ala ,Tyr , Glu ,Asp , 6. Ala-Ser-Lys-Phe-Gly-Lys- Met-Asp 7. Ala-Arg-Tyr-Asn-Met-Asn-Trp-Gly-Met-Gly-Ala-Leu; 8. 任一答案: Phe-Met-Lys-Glu-Lys-Pro Phe-Met-Lys-Glu-Pro-Lys Phe-Glu-Lys-Met-Pro-Lys Phe-Glu-Lys-Met-Lys-Pro 9. Ser-Lys-Cys-Phe-Ala,

18种氨基酸分析方法

1) 天平一台(精度0.1mg)2) 恒温水浴锅一台3) 容量瓶 4) 试管(1.5×15cm或1.5×10cm)5) 微量进样器(5μL或10μL)一支 6) 微量可调移液枪(1000μL,200μL)一支、吸头多个。7) 旋涡混匀器一台 8) HPLC系统及氨基酸分析专用柱(4.6×250mm 5μm) 一. 仪器及试剂 二. 流动相的配制 三. 衍生化反应 1. 对照品溶液浓度值 18种氨基酸分析方法 仪 器: 流动相 A:0.1mol/L醋酸钠溶液(pH 6.5):乙睛=93.0:7.0 流动相 B:水:乙腈=20.0:80.0 配制方法:准确量取水200mL和乙腈800mL,混合均匀,抽滤过0.22μm滤膜1) 超纯水(≥18MΩ·cm)2) 乙腈(HPLC级)3) 三水合醋酸钠(分析纯)4) 冰醋酸(分析纯) 5) 衍生试剂A和衍生试剂B溶液,至于冰箱保存(衍生试剂包对身体有害,用时请做好防护措施)6) 正己烷(HPLC级) 7) 0.1mol/L盐酸溶液:量取9.0mL浓盐酸,加去离子水稀释至1000mL。 8) 正亮氨酸内标溶液:称取正亮氨酸约10mg,加0.1mol/L 盐酸溶液 10mL溶解,混匀。 试 剂: 配制方法:准确称取三水合醋酸钠13.6g于1000mL水中,搅拌均匀,使之溶解,用冰醋酸或氢氧化钠溶液调pH值至6.50;准确量取配制好的三 水合醋酸钠溶液930mL和乙腈70mL,混合均匀,抽滤过0.22μm滤膜。。

月旭科技(上海)股份有限公司 公司官网:https://www.360docs.net/doc/2f18928353.html, 服务热线:400-808-6760 2. 注意事项: 1)进样分析:先进对照品溶液,后进供试品溶液;2)缓冲溶液,隔天需重新配制;3)防止缓冲盐析出。 5)运行一次空白梯度; 6)进样分析;7) 分析完成后: I)用乙腈:水=20:80代替流动相A ,进水样(清洗自动进样器), 进行梯度洗脱; II)换90%乙腈冲洗色谱柱40min以上。 波 长:254nm 进样量:10μL min 51015202530100 80 60 40 20 12 3 45 6 78 9 10 11 12 14 13 1516 17 18 19 色谱图:

天津第三中心医院全自动氨基酸分析仪项目需求书

天津市第三中心医院全自动氨基酸分析仪项目需求书数量:一台 一、环境条件: 1.电源电压:220V±10%,50Hz。 2.温度:15~30℃。 3.湿度:25~85%。 二、全自动氨基酸分析仪功能要求及配置: (一)功能要求: 1.蛋白水解液及生理体液分析。 2.缓冲液、反应液试剂配方公开,可采用国产试剂。 3.色谱工作站,能够实现仪器的控制、数据采集和处理。能够实现系统的自动清洗,符合GLP/GMP规则,能够进行系统校验性试验、订制客户报告。 (二)配置要求: 1.蛋白水解液的标准分析系统。 2.生理体液分析系统。 3.色谱柱装填工具:1 套。 4.树脂。 5.光源灯:2个。 6.泵密封件:若干。 7.清洗密封件。 8.保护柱芯:若干。 9.电脑系统和打印机。 三、全自动氨基酸分析仪技术要求: (一)系统指标: 1.净分析时间:蛋白水解≤ 50 min; 生理体液90-180 min。 2.保留时间重现性:全部氨基酸平均≤0.5%CV。 3.峰面积重现性:全部氨基酸平均≤1.0%CV。 4.检测限:全部氨基酸平均≤10pmol。

5.分离度:平均≥1.2。 (二)分离柱:可自行填充。 1.柱温范围:室温~99℃。 2.温度稳定性:≤±1℃。 (三)自动进样器:带制冷单元。 1.进样体积:1~500 uL 2.样品位:≥80 (四)检测器: 1.检测波长:570nm,440nm。 2.反应器温度范围:40-140℃。 3.温度稳定性:≤±1℃。 (五)泵系统:具备梯度控制功能。 1.流速稳定性:RSD≤1.0%。 2.最大压力:≥19.6MPa。 3.压力波动≤0.1%。 (六)数据处理工作站: 1.硬件:CPU Pentium IV以上,内存≥1GB,硬盘≥120 GB,DVD刻录光驱,17寸液晶彩显。 2.操作系统:32位操作系统。 四、技术服务:在用户单位现场提供应用技术培训,符合用户指定安装,要求完善的售后服务,以确保临床使用。 五、售后服务:保修期两年,保证开机率95%以上(以365天计算),软件终身免费升级。提供10年以上备件供应。境内具备正规维修机构,出具相关法律文件。境内具备零备件保税库,出具相关法律文件。 六、投标价为免税美元价,按7.7比率折合人民币价格。

分析化学习题(第7章重要分离方法)

习题 1 1. 分离方法在定量分析中有什么重要性?分离时对常量和微量组分的回收率要求如何?(参考答案)答: 在定量分析,对于一些无法通过控制分析条件或采用掩蔽法来消除干扰,以及现有分析方法灵敏度达不到要求的低浓度组分测定,必须采用分离富集方法。换句话说,分离方法在定量分析中可以达到消除干扰和富集效果,保证分析结果的准确性,扩大分析应用范围。 在一般情况下,对常量组分的回收率要求大于99.9%,而对于微量组分的回收率要求大于99%。样品组分含量越低,对回收率要求也降低。 2.在氢氧化物沉淀分离中,常用的有哪些方法?举例说明。(参考答案) 答: 在氢氧化物沉淀分离中,沉淀的形成与溶液中的[OH-]有直接关系。因此,采用控制溶液中酸度可使某些金属离子彼此分离。在实际工作中,通常采用不同的氢氧化物沉淀剂控制氢氧化物沉淀分离方法。常用的沉淀剂有: A.氢氧化钠:NaOH是强碱,用于分离两性元素(如Al3+,Zn2+,Cr3+)与非两性元素,两性元素的含氧酸阴离子形态在溶液中,而其他非两性元素则生成氢氧化物胶状沉淀。 B.氨水法:采用NH4Cl-NH3缓冲溶液(pH 8-9),可使高价金属离子与大部分一、二金属离子分离。 C.有机碱法:可形成不同pH的缓冲体系控制分离,如pH5-6六亚甲基四胺-HCl缓冲液,常用于Mn2,Co2+,Ni2+,Cu2+,Zn2+,Cd2+与Al3+,Fe3+,Ti(IV)等的分离。 D.ZnO悬浊液法等:这一类悬浊液可控制溶液的pH值,如ZnO悬浊液的pH值约为6,可用于某些氢氧化物沉淀分离。 3. 某试样含Fe,A1,Ca,Mg,Ti元素,经碱熔融后,用水浸取,盐酸酸化,加氨水中和至出现红棕色沉淀(pH约为3左右),再加六亚甲基四胺加热过滤,分出沉淀和滤液。试问。为什么溶液中刚出现红棕色沉淀时人们看到红棕色沉淀时,表示pH为3左右?过滤后得到的沉淀是什么?滤液又是什么?试样中若含Zn2+和Mn2+,它们是在沉淀中还是在滤液中?(参考答案)

氨基酸对人体的作用

氨基酸对人体地作用 一.甘氨酸() 、降低血液中地胆固醇浓度,防治高血压 、降低血液中地血糖值,防治糖尿病 、能防治血凝、血栓 、提高肌肉活力,防止胃酸过多 、甜味为砂糖地倍,对人体有补益等营养作用 二.亮氨酸() 、降低血液中地血糖值,对治疗头晕有作用 、促进皮肤、伤口及骨头有愈合作用 、如果缺乏时,会停止生长,体重减轻 .促进睡眠,减低对疼痛地敏感,缓解偏头痛·缓和焦躁及紧张情绪 .减轻因酒精而引起人体中化学反应失调地症状,并有助于控制酒精中毒参考食物:牛奶、鱼类、香蕉、花生及所有含丰富蛋白质地食物 三.甲硫氨酸(蛋氨酸)() 、参与胆碱地合成,具有去脂地功能,防治动脉硬化高血脂症 、有提高肌肉活力地功能,防止肌肉软弱无力 、促进皮肤蛋白质和胰岛素地合成 .参与组成血红蛋白、组织与血清,有促进脾脏、胰脏及淋巴地功能 .帮助分解脂肪,能预防脂肪肝、心血管疾病和肾脏疾病地发生 .将有害物质如铅等重金属除去 . 治疗风湿热和怀孕时地毒血症 .一种有利地抗氧化剂 参考食物:大豆、其它豆类、鱼类、大蒜、肉类、洋葱和酸奶 四.酪氨酸() 、造肾上腺激素、甲状腺激素和黑色素地必需氨基酸 、可防治老年痴呆症 、促进新陈代谢,增进食欲 .医药用作甲状腺功能亢进;食品添加剂. 、对治疗胃溃疡等慢性疾病、神经性炎症及发育不良等效果 、与色素形成有关系,缺乏时会利白化症 .是一种重要地生化试剂,是合成多肽类激素、抗生素、多巴等药物地主要原料. .广泛用于农业科学研究,也作饮料添加剂和配制人工昆虫饲料. 五.组氨酸() 、参与血球蛋白合成,促进血液生成 、产生组氨、促进血管扩张,增加血管壁地渗透性 、医治胃病、十二指肠等有特效 、促进腺体分泌,对过敏性疫病有效果 、可治疗消化性溃疡、发育不良等症状 、对治疗心功能不全、心绞痛、降低血压、哮喘及类风湿关节炎有效果 六.苏氨酸() .人体必需,缺乏时会使人消瘦,甚至死亡 .有转变某些氨基酸达到平衡地功能 .是协助蛋白质被人体吸收、利用所不可缺少地氨基酸 .防止肝脏中脂肪地累积 .促进抗体地产生,增强免疫系统 参考食物:肉类等

国内外主要氨基酸使用概述

国内外主要氨基酸使用概述 世界上最大的氨基酸消费市场是饲料添加剂,目前国内用于饲料添加剂的氨基酸主要有赖氨酸、蛋氨酸、苏氨酸。其中赖氨酸和蛋氨酸占饲料工业的95% 以上,而苏氨酸的使用呈增长趋势。表1 为近年来,世界三种氨基酸产量及主要生产商。 表1 近年来世界三种氨基酸产量(万吨)及主要生产商 1、赖氨酸 1.1 赖氨酸的作用 赖氨酸是谷物中最缺乏的氨基酸,因此,一般来说它是第一限制性氨基酸,是限制猪、肉禽蛋白质沉积的主要氨基酸;是猪的第一限制性氨基酸,是禽的第二限制氨基酸。 工业生产的赖氨酸至少发挥着下面几个方面的作用:(1)补充动物赖氨酸需要的不足,(2)改善饲料氨基酸的平衡,提高动物的生长速度(3)改善谷物饲料的营养价值;(4)降低动物饲粮蛋白质含量,配制低蛋白质日粮。 1.2 国内外主要生产商及产量 2011年全球赖氨酸产量为148万吨,主要生产商为中国长春大成实业集团公司、日本味之素公司、美国ADM公司、德国德固萨公司、日本协和公司、韩国的希杰、台湾的味丹和德国巴斯夫公司等。 近几年我国赖氨酸产能高速增长。从2001 年不足5 万吨/年增长到2011年的近68万吨/年,成为世界最大的赖氨酸生产国。仅大成集团的赖氨酸产量已占全球45%。目前国内主要生产企业有长春大成、川化味之素、聊城希杰、宁夏伊品、山东金玉米、安徽丰原等。 1.3 赖氨酸主要品种 2003年以前,中国市场主要赖氨酸产品为98.5%的赖氨酸盐酸盐,品种比较单一。大成生化公司于2003年自行研发生产65%赖氨酸硫酸盐,是继德国德固萨(Degussa)公司后,世界上第二家生产赖氨酸硫酸盐的制造商,有相当的竞争优势。2011年中国98%赖氨酸产量为22.1万吨,同比下降1.34%,65%赖氨酸产量为45.8万吨,同比上升10.1%。近年该2种氨基

2010版药典氨基酸检测方法(未施行)

2010年版新增的“氨基酸检测方法”如下: 新增附录 附录XX 氨基酸分析法 氨基酸分析法是指用于测定蛋白质、肽及其他药物制剂的氨基酸组成或含量的方法。 根据氨基酸组成分析可以对蛋白质及肽进行鉴别,氨基酸分析法可用于确定蛋白质、肽及氨基酸的含量,及测定可能存在于蛋白质及肽中的非典型氨基酸。进行氨基酸分析前,必须将蛋白质及肽水解成单个氨基酸,具体水解方法由各品种项下规定。蛋白质及肽水解后,其氨基酸分析过程与用于其他药物制剂中游离氨基酸的分析过程相同。 本法包括四种柱前衍生法,分别为异硫氰酸苯酯(PITC)法、6-氨基喹啉-N-羟基琥珀酰亚氨基氨基甲酸酯(AQC)法、邻苯二醛(OPA)和9-芴甲基氯甲酸甲酯(FMOC)法、2,4-二硝基氟苯(DNFB)法,以及一种茚三酮柱后衍生法。不同的品种应针对自身所含的氨基酸种类及各氨基酸的含量选择适宜的氨基酸分析方法并做相应的方法学验证。 由于本法衍生过程中衍生溶液量较少,且容易挥发,外标法极易出现较大的误差,建议采用内标法进行测定,内标的确定由各品种项下规定。在本法中,由于半胱氨酸或胱氨酸的衍生产物不稳定,因此对于含半胱氨酸或胱氨酸的样品衍生后应尽快测定,或者在衍生前对半胱氨酸或胱氨酸进行适当的处理,使其转化为稳定地产物(如磺基丙氨酸或半胱氨酸-硫代丙酸)后再衍生测定,具体方法由各品种项下规定。在测定过程中,可根据所用的仪器、色谱柱品牌、色谱柱的长度及要分离的氨基酸种类,对流动相的有机溶剂和洗脱梯度作适当调整以获得较好的分离度。 第一法PITC柱前衍生氨基酸分析法 本法系根据氨基酸与异硫氰酸苯酯(PITC)反应,生成有紫外响应的氨基酸衍生物苯氨基硫甲酰氨基酸(PTC-氨基酸),PTC-氨基酸经反相高效液相色谱分离后用紫外检测,在一定的范围内其吸光值与氨基酸浓度成正比。本方法的线性浓度范围为0.025~1.25μmol/ml。 试剂(1)流动相A 0.1mol/L醋酸钠溶液(取无水醋酸钠8.2g,加水900ml溶解,用冰醋酸调pH至6.5,然后加水至1000 ml)-乙腈(93:7)。 (2)流动相B 乙腈-水(8:2)。 对照品溶液按各品种项下规定的方法制备。 供试品溶液按各品种项下规定的方法制备。 色谱条件与系统适用性试验用十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂(4.6×250mm,5μm);流速为每分钟1.0ml;柱温为40℃;检测波长为254nm。各氨基酸峰间的分离度均应大于1.0。洗脱梯度如下: 时间(min) 流动相A(%)流动相B(%) 0 100 0 14 85 15 29 66 34 30 0 100 37 0 100 37.1 100 0 45 100 0 测定法精密量取氨基酸对照品溶液200μl,置一2ml塑料离心管中,精密加入1mol/L三乙胺乙腈溶液100μl,混匀,精密加入0.1mol/L异硫氰酸苯酯乙腈溶液100μl,混匀,室温放置1小时,加0.8ml正己烷,剧烈振摇,放置10min,精密取下层溶液2μl,注入液相色谱仪,记录色谱图;另精密量取供试品溶液200μl,自“置一2ml塑料离心管中”起同法测定。

分析化学中常用的分离富集方法

分析化学中常用的分离富集方法 思考题 11-1 在分析化学中,为什么要进行分离富集?分离时对常量和微量组分的回收率要求如何?答:在定量分析,对于一些无法通过控制分析条件或采用掩蔽法来消除干扰,以及现有分析方法灵敏度达不到要求的低浓度组分测定,必须采用分离富集方法。换句话说,分离方法在定量分析中可以达到消除干扰和富集效果,保证分析结果的准确性,扩大分析应用围。在一般情况下,对常量组分的回收率要求大于99.9%,而对于微量组分的回收率要求大于99%。样品组分含量越低,对回收率要求也降低。 11-2 常用哪些方法进行氢氧化物沉淀分离?举例说明。 答:在氢氧化物沉淀分离中,沉淀的形成与溶液中的[OH-]有直接关系。因此,采用控制溶液中酸度可使某些金属离子彼此分离。在实际工作中,通常采用不同的氢氧化物沉淀剂控制氢氧化物沉淀分离方法。常用的沉淀剂有: a 氢氧化钠:NaOH是强碱,用于分离两性元素(如Al3+,Zn2+,Cr3+)与非两性元素,两性元素的含氧酸阴离子形态在溶液中,而其他非两性元素则生成氢氧化物胶状沉淀。 b 氨水法:采用NH4Cl-NH3缓冲溶液(pH8-9),可使高价金属离子与大部分一、二金属离子分离。 c 有机碱法:可形成不同pH的缓冲体系控制分离,如pH5-6六亚甲基胺-HCl缓冲液,常用于Mn2+,Co2+,Ni2+,Cu2+,Zn2+,Cd2+与Al3+,Fe3+,Ti(IV)等的分离。 d ZnO悬浊液法等:这一类悬浊液可控制溶液的pH值,如ZnO悬浊液的pH值约为6,可用于某些氢氧化物沉淀分离。 11-3 某矿样溶液含Fe3+,A13+,Ca2+,Mg2+,Mn2+,Cr3+,Cu2+和Zn2+等离子,加入NH4C1和氨水后,哪些离子以什么形式存在于溶液中?哪些离子以什么方式存在于沉淀中?分离是否完全? 答:NH4Cl与NH3构成缓冲液,pH在8-9间,因此溶液中有Ca2+,Mg2+,,Cu(NH3)42-、Zn(NH3)42+等离子和少量Mn2+,而沉淀中有Fe(OH)3,Al(OH)3和Cr(OH)3和少量Mn(OH)2沉淀。试液中Fe3+,A13+,Cr3+可以与Ca2+,Mg2+,Cu2+和Zn2+等离子完全分开,而Mn2+分离不完全。 11-4 如将上述矿样用Na2O2熔融,以水浸取,其分离情况又如何? 答:Na2O2即是强碱又是氧化剂,Cr3+、Mn2+分别被氧化成CrO42-和MnO4-。因此溶液有AlO22-,ZnO22-,MnO4-和CrO42-和少量Ca2+,在沉淀中有:Fe(OH)3,Mg(OH)2和Cu(OH)2和少量Ca(OH)2或CaCO3沉淀。Ca2+将分离不完全。

10种必需氨基酸及作用

人体必需氨基酸 人体必需氨基酸指人体不能合成或合成速度远不适应机体的需要,必需由食物蛋白供给,这些氨基酸称为必需氨基酸。共有赖氨酸(Lysine )、色氨酸(Tryptophane)、苯丙氨酸(Phenylalanine)、蛋氨酸(Methionine)、苏氨酸(Threonine)、异亮氨酸(Isoleucine )、亮氨酸(Leucine )、缬氨酸(Viline)8种,另一种说法把组氨酸(Hlstidine)、精氨酸(Argnine)也列为必需氨基酸总共为10种。 8种人体必须氨基酸的简单记忆方法:―假设来写一两本书‖就是甲硫氨酸、色氨酸、赖氨酸、缬氨酸、异亮氨酸、亮氨酸、苯丙氨酸、苏氨酸 氨基酸的种类有20种,大致可以分为三类:必需氨基酸、和非必需氨基酸。其中,有8种氨基酸,人体不能自己合成,而且这些氨基酸都非常重要,必须通过食物来摄取,这些氨基酸就称为必需氨基酸。此外,人体合成精氨酸、组氨酸的力不足于满足自身的需要,需要从食物中摄取一部分,我们称之为半必需氨基酸。另外的十种氨基酸,人体可以自己合成,不必靠食物补充,我们称为非必需氨基酸。 一、赖氨酸 促进大脑发育,是肝及胆的组成成分,能促进脂肪代谢,调节松果腺、乳腺、黄体及卵巢,防止细胞退还。 赖氨酸为碱性必需氨基酸。由于谷物食品中的赖氨酸含量甚低,且在加工过程中易被破坏而缺乏,故称为第一限制性氨基酸。 赖氨酸可以调节人体代谢平衡。赖氨酸为合成肉碱提供结构组分,而肉碱会促使细胞中脂肪酸的合成。往食物中添加少量的赖氨酸,可以刺激胃蛋白酶与胃酸的分泌,提高胃液分泌功效,起到增进食欲、促进幼儿生长与发育的作用。赖氨酸还能提高钙的吸收及其在体内的积累,加速骨骼生长。如缺乏赖氨酸,会造成胃液分沁不足而出现厌食、营养性贫血,致使中枢神经受阻、发育不良。 赖氨酸在医药上还可作为利尿剂的辅助药物,治疗因血中氯化物减少而引起的铅中毒现象,还可与酸性药物(如水杨酸等)生成盐来减轻不良反应,与蛋氨酸合用则可抑制重症高血压病。 单纯性疱疹病毒是引起唇疱疹、热病性疱疹与生殖器疱疹的原因,而其近属带状疱疹病毒是水痘、带状疱疹和传染性单核细胞增生症的致病者。印第安波波利斯Lilly 研究室在1979年发表的研究表明,补充赖氨酸能加速疱疹感染的康复并抑制其复发。 长期服用赖氨酸可拮抗另一个氨基酸――精氨酸,而精氨酸能促进疱疹病毒的生长。 二、色氨酸(促进胃液及胰液的产生) 色氨酸可转化生成人体大脑中的一种重要神经传递物质――5–羟色胺,而5–羟色胺有中和肾上腺素与去甲肾上腺素的作用,并可改善睡眠的持续时间。当动物大脑中的5–羟色胺含量降低时,表现出异常的行为,出现神经错乱的幻觉以及失眠等。此外,5–羟色胺有很强的血管收缩作用,可存在于许多组织,包括血小板和肠粘膜细

18种天然氨基酸分析

18种天然氨基酸分析 迪马科技摘要 氨基酸组成测定是蛋白质组学、食品质量检测以及药品质量检测中的重要分析项目。本文分别以异硫氰酸苯酯、2,4-二硝基氟苯作为衍生剂对蛋白质水解液和游离氨基酸注射液进行衍生,使用Diamonsil AAA柱250×4.6 mm,5 μm,梯度洗脱进行分离,能够满足19种天然氨基酸的分析,各组分分离度较高、定量结果准确而稳定。 Abstract The amino acid determination is an important analysis project in proteomics, food and drug quality testing.The method determination of 19 nature amino acid in protein hydrolyzed solution and free amino acid injection, the derived reagent is phenyl isothiocyanate (PITC) and 1-Fluoro-2,4-dinitrobenzene. The column is Diamonsil AAA (250 × 4.6 mm, 5 μm), gradient elution, the results are accurate and stable. 引言 从化学角度讲,同时含有一个或多个氨基和羧基的脂肪酸均可称为氨基酸。自然界存在300多种氨基酸,但构成天然蛋白质的氨基酸只有20种,这20种氨基酸又称为天然氨基酸。天然氨基酸分析是食品、饲料和药品分析的重要项目。目前氨基酸分析常常采用这样两种方式:离子交换色谱分离-柱后衍生和柱前衍生-反相色谱法分离。后者以操作灵活、费用低廉而被广泛应用。在柱前衍生-反相色谱法分离中,异硫氰酸苯酯(PITC)和2,4-二硝基氟苯(DNFB)均可与一级胺、二级胺反应,是理想的柱前衍生剂。尽管天然氨基酸多达20种,但由于蛋白质水解过程中天冬酰胺和谷氨酰胺分别转化为天冬氨酸和谷氨酸,半胱氨酸则以胱氨酸形式存在,因而对于含蛋白食品、饲料等样品的氨基酸分析时,只需分析Asp(天冬氨酸)、Glu(谷氨酸)、Ser(丝氨酸)、Gly(甘氨酸)、His(组氨酸)、Arg(精氨酸)、Thr(苏氨酸)、Ala(丙氨酸)、Pro(脯氨酸)、Tyr(酪氨酸)、Val(缬氨酸)、Met(甲硫氨酸)、Cys-Cys(胱氨酸)、Ile(异亮氨酸)、Leu(亮氨酸)、Phe(苯丙氨酸)、Trp(色氨酸)、Lys(赖氨酸)等18种氨基酸,PITC和DNFB均能与这些氨基酸生成稳定的衍生物。此外,DNFB还能对半胱氨酸进行衍生,对PITC衍生法是一个重要的补充,能够满足氨基酸注射液中涉及的19种氨基酸分析。 1 分析原理 对于含蛋白样品(饲料、动物组织等),先对样品进行酸水解或碱水解处理,得到游离氨基酸

氨基酸的作用和功能详解

氨基酸的作用和功能详解 作者: MEILIN 位于: 保健食品 什么是氨基酸? 氨基酸是蛋白质的构建模块。从生命诞生起它们就相互链接在一起构筑人体,因此可以把氨基酸看做生命的积木。这是有两个步骤的过程:氨基酸链接到一起,形成肽或多肽。蛋白质由这些群组制成。 氨基酸的种类不止一个。其中构成蛋白质的氨基酸总共有20个不同种类。氨基酸的种类决定了蛋白质的形状。 人们比较熟悉的氨基酸包括谷氨酰胺,甘氨酸,苯丙氨酸,色氨酸,缬氨酸。其中的苯丙氨酸,色氨酸,缬氨酸是人类必需氨基酸,其他的必需氨基酸还有异亮氨酸,亮氨酸,赖氨酸,蛋氨酸和苏氨酸。人体本身不能合成必需氨基酸,因此需要从食物获得。 其中一个最知名的必需氨基酸是色氨酸,它在人体许多功能中扮演了重要角色。色氨酸诱导正常睡眠,帮助减轻压力,抑郁,和动脉痉挛风险,并促进免疫系统健康。色氨酸最著名的用途可能是产生血清素,正是这种物质帮助你睡个好觉。 氨基酸的作用 氨基酸是蛋白质的组成部分,而蛋白质是肌肉,腺体,器官,肌腱,酶,指甲和头发的组成部分。这使氨基酸的地位变得至关重要。尽管我们掌握很多关于维生素的知识,但大部分人对氨基酸的作用了解的很少。 你会发现氨基酸涉及到生活中的各个方面,甚至还与睡眠呼吸暂停有联系,缺乏它会导致一系列疾病。虽然这种元素的缺乏通常不能用传统诊断方法获知,但生化检查可以发挥很大作用,它可以帮助医生认识和治疗疾病。 每日需要量 当身体感觉疲劳和锻炼受损时,就需要引起一些注意。。氨基酸可以帮助修复,恢复和建立人体组织。身体可以自然产生10种氨基酸(总共20种),这些氨基酸被称为非必需氨基酸。其他的氨基酸必须从食物获取。如果不能获得足够的氨基酸,身体蛋白质就会降低,从而导致疾病发生。人体不能像储存脂肪一样存储氨基酸,因此,每日饮食必须包含氨基酸。 制造蛋白质 氨基酸是组成蛋白质的基本元素。 当某些人体细胞需要蛋白质时(例如当人体“增长”肌肉时),氨基酸排列连接在一起形成RNA(即核糖核酸、DNA的复制品)。

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