茶树黄酮醇糖苷积累的研究及CsFLS基因功能的验证

摘要 ................................................. I

ABSTRACT ........................................ III

1 文献综述 (1)

1.1茶树黄酮醇及其糖苷 (1)

1.2黄酮醇糖苷的定性与定量方法 (1)

1.3黄酮醇合成酶的功能 (3)

1.4黄酮醇合成酶的表达调控 (4)

2 引言 (5)

2.1研究的目的与意义 (5)

2.2研究的内容 (5)

3 材料与方法 (6)

3.1实验材料 (6)

3.2主要仪器设备 (6)

3.3主要药品与试剂 (6)

3.4主要试剂的配方 (7)

3.5质粒与菌株 (7)

3.6实验方法 (7)

4 结果与分析 (16)

4.1茶树黄酮醇糖苷的研究结果 (16)

4.2茶树黄酮醇合成酶的研究结果 (25)

5 讨论 (34)

5.1茶树中黄酮醇糖苷的定量方法 (34)

5.2黄酮醇合成酶 (34)

6结论 (36)

参考文献 (37)

致谢 (44)

作者简介 (45)

万方数据

1 文献综述

1.1茶树黄酮醇及其糖苷

茶，咖啡与可可为世界三大无酒精饮品，其中茶不仅具有提神解渴的功效，而且具有良好的医药保健功效[1-5]。茶树中含有丰富的类黄酮类化合物，主要包

括黄酮，黄酮醇及其糖苷，黄烷酮，花青素等，是茶汤中重要的风味物质以及功能成分。其中黄酮醇及其糖苷是茶汤苦涩味和色泽形成的重要因子，对茶叶品质非常重要[6]。黄酮醇主要有三类，分别是山奈酚、槲皮素和杨梅素，在植物体中多与糖结合，形成黄酮醇糖苷类形式存在。由于其结合的糖（有葡萄糖、鼠李糖、半乳糖、芸香糖等）和连接的位置不同，已鉴定和报道的黄酮醇糖苷数量达到

2000多种[7]。目前，在绿茶和发酵茶中鉴定了约19种黄酮醇3-O糖苷[8-10]，其中的14种黄酮醇3-O糖苷在茶汤的风味中扮演着重要的角色，它们不仅使口腔产生干燥和柔滑的收敛感，而且通过增强咖啡因的苦味而增加了茶汤苦感。因此，黄酮醇糖苷作为含量次于儿茶素的酚类化合物，以很低的阈值赋予茶叶柔和涩

感，被鉴定是黑茶中的涩味贡献因子[11]。黄酮醇糖苷还是茶叶水溶性黄色素的主体，被认为是绿茶汤色的主要成分[12]。研究还表明黄酮醇在植物的花色修饰，

激素运输，抵御微生物入侵，以及保护植物免受紫外辐射等具有很重要的生理功能[7]，同时还具有消炎，抗氧化，保护心脏，预防肿瘤生成等药理学功能[13, 14]

1.2黄酮醇糖苷的定性与定量方法

1.2.1 纸色谱法和薄层色谱法

最早关于黄酮醇糖苷的研究是通过使用纸色谱法（PC）和薄层色谱法（TLC）[15, 16]。薄层层析法是利用混合物中各个组份的物理性质的差别，在以覆有薄薄

一层如硅胶、氧化铝、纤维素吸附剂材料的玻璃、塑料、铝箔为固定相，在溶剂或混合溶剂（流动相）的流动过程中使各组份以不同速度移动，从而达到分离出目的组分的技术[17]。Forrest等利用薄层色谱法以5%甲醇水溶液和1-丁醇-乙酸-水（体积比为4:1:5）的混合溶液作为展开剂检测分析儿茶素[18]。纸色谱法是用于对混合物的纯度和性质进行检测的一类方法，也属于薄层色谱法的一种。

Roberts等人利用纸色谱法分离研究绿茶茶叶中的儿茶素[19]。纸色谱法和薄层色谱法操作简单，成本低，能够快速分离检测试样，但是定量不够准确。

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