实验Basic-NAT
Basic-NAT
基础NAT：
客户端192.168.0.2/24 连路由器Ethernet0/0：192.168.0.1/24
服务器端10.10.10.2/24连路由器Ethernet0/1：10.10.10.1/24
地址池为：10.10.10.10-10.10.10.20
[H3C]interface Ethernet 0/0
[H3C-Ethernet0/0]ip address 192.168.0.1 24
[H3C-Ethernet0/0]un sh
Interface Ethernet0/0 is not shut down
[H3C-Ethernet0/0]quit
[H3C]interface e0/1
[H3C-Ethernet0/1]ip address 10.10.10.1 24
[H3C-Ethernet0/1]
%Apr 20 12:06:10:740 2010 H3C IFNET/4/UPDOWN:
Line protocol on the interface Ethernet0/1 is UP
[H3C-Ethernet0/1]un sh
Interface Ethernet0/1 is not shut down
[H3C-Ethernet0/1]quit
[H3C]acl number 2000
[H3C-acl-basic-2000]rule 0 permit source 192.168.0.0 0.0.0.255 [H3C-acl-basic-2000]quit
[H3C]nat address-group 1 10.10.10.10 10.10.10.20
[H3C]interface Ethernet0/1
[H3C-Ethernet0/1]nat outbound 2000 address-group 1
[H3C-Ethernet0/1]quit
NAPT
网络地址端口转换 (Network Address Port Translation) ：
[H3C]interface Ethernet 0/0
[H3C-Ethernet0/0]ip address 192.168.0.1 24
[H3C-Ethernet0/0]un sh
Interface Ethernet0/0 is not shut down
[H3C-Ethernet0/0]quit
[H3C]interface e0/1
[H3C-Ethernet0/1]ip address 10.10.10.1 24
[H3C-Ethernet0/1]
%Apr 20 12:06:10:740 2010 H3C IFNET/4/UPDOWN:
Line protocol on the interface Ethernet0/1 is UP
[H3C-Ethernet0/1]un sh
Interface Ethernet0/1 is not shut down
[H3C-Ethernet0/1]quit
[H3C]acl number 2000
[H3C-acl-basic-2000]rule 0 permit source 192.168.0.0 0.0.0.255 [H3C-acl-basic-2000]quit
[H3C]nat address-group 1 10.10.10.10
NAPT和BasicNAT相比，减少公网地址，节约作用。
[H3C]interface Ethernet0/1
[H3C-Ethernet0/1]nat outbound 2000 address-group 1
[H3C-Ethernet0/1]quit
细胞迁移侵袭实验操作步骤
实验介绍 细胞迁移与侵袭实验将Transwell小室放入培养板中，小室内称上室，培养板内称下室，上下层培养液以聚碳酸酯膜相隔，将研究的细胞种在上室内，由于聚碳酸酯膜有通透性，下层培养液中的成分可以影响到上室内的细胞，应用不同孔径和经过不同处理的聚碳酸酯膜，就可以进行共培养、细胞趋化、细胞迁移、细胞侵袭等多种方面的研究。 实验步骤： 1材料准备： 可拍照显微镜，Transwell小室，孔径8μm，没包被胶的(Coster和Corning公司的也较常用)，Transwell迁移实验的细胞培养板24孔板。细胞培养板应当与购买的Transwell小室相配套，BD公司的Matrigel，无血清DMEM，(1%胎牛血清)DMEM和1640培养基，DMEM完全培养基，1640完全培养基（也可加到20%血清），无菌PBS，棉签，胰酶，4%多聚甲醛固定液或者甲醇，结晶紫染液（%（g/ml）PBS结晶紫） 2步骤和流程 基质胶铺板： 用BD公司的Matrigel 1：8（根据细胞产生mmp的量来决定）稀释，包被Transwell小室底部膜的上室面，置37℃30min使Matrigel聚合成凝胶。使用前进行基底膜水化。 制备细胞悬液 ①制备细胞悬液前可先让细胞撤血清饥饿12－24h，进一步去除血清的影响。但这一步并不是必须的。 ②消化细胞，终止消化后离心弃去培养液，（用PBS洗1－2遍），用含BSA的无血清培养基重悬。调整细胞密度至5×105/ml。 接种细胞 ①取细胞悬液100μl加入Transwell小室。 ②24孔板下室一般加入600μl含20%FBS的培养基，特别注意的是，下层培养液和小室间常会有气泡产生，一旦产生气泡，下层培养液的趋化作用就减弱甚至消失了，在种板的时候要特别留心，一旦出现气泡，要将小室提起，去除气泡，再将小室放进培养板。 ③培养细胞：常规培养12－48h（主要依癌细胞侵袭能力而定）。24h较常见，时间点的选择除了要考虑到细胞细胞侵袭力外，处理因素对细胞数目的影响也不可忽视。 结果统计 直接计数法，“贴壁”细胞计数，这里所谓的“贴壁”是指细胞穿过膜后，可以附着在膜的
物理实验要求及数据表格实验05示波器
实验示波器观测信号波形 专业___________________学号___________________姓名___________________ 一、预习要点 1.实验中需要用到数字信号源与示波器，两台仪器为全英文面板，预习时必须认真阅读仪器简易 说明，熟悉其常用功能； 2.掌握以下知识：（1）示波器显示波形原理；（2）整流、滤波电路的作用、基本原理及各部分的 输出波形；（3）李萨如图形的定义与信号频率间的关系；在写预习报告的原理部分时，请体现以上内容，注意抓住重点； 3.记录实验数据时需要画图，请备好铅笔、直尺和橡皮； 4.在课前写好预习报告，上课时务必将预习报告和原始数据表格一并带来，否则扣分。 二、实验注意事项 1.使用示波器与信号源时，不得胡乱调节，否则后果自负； 2.使用电路板时应小心，避免扎到探针，不得损坏电路板及元器件，否则照价赔偿； 3.实验开始前到指导教师处领取电路板，结束后交回；关闭仪器电源，断开各种信号线与仪器的 连接并将信号线捆好，将仪器恢复成实验前的初始状态。 三、思考题 1.使用信号源的____________功能可以使同频率或频率呈倍数关系的两个信号相位对齐。 2.按下示波器上垂直控制中的 可以将波形的垂直位移____________；按下垂直 控制中的 ____________或____________。 3.通道耦合方式有____________、____________和____________三种。 4.时基模式中的Y-T模式：Y轴表示____________，X轴表示____________；X-Y模式：Y轴表 示____________，X轴表示____________。用于观察李萨如图形的是____________模式。 5.示波器用户界面中，左上角的时基参数变大时，屏幕上波形的周期个数将变________（填“多” 或“少”）；左下角的电压档位参数变小时，屏幕上波形的幅度将变________（填“大”或“小”）。 6.要使用示波器的光标测量功能，应按下____________按键。 7.使用示波器的____________旋钮，可以使“走动”的波形稳定下来。 8.若输入信号的频率为50Hz，则半波整流后输出信号的频率为____________Hz，桥式整流后输出 信号的频率为____________Hz，滤波后输出信号的频率为____________Hz。 9.用公式表示李萨如图形在水平方向和垂直方向的切点数与信号频率间的关系 _______________。 10.由两列正弦波合成的李萨如图形如右图所示，则频率比:x y f f ____________。 11.合成李萨如图形的两列正弦波相位差变化时，图形的切点数____________，切点位置 ____________（以上两空填“不变”或“变化”）。 12.列出用光标功能测量正弦波周期的步骤（分点描述，如：第一、第二、第三……）。 13.列出用光标功能测量恒定直流电（波形为直线）电压值的步骤（分点描述，同上）。 四、实验总结 y
检验与试验计划表
1总则 为保证中天合创煤化工项目甲醇合成装置压缩厂房网架工程的各项质量检验工作都在 受控状态，严格按照ISO9001.：2008标准执行，特制定本检验计划，项目部各参战单 位有关人员均应认真执行。本检验计划只适用于中天合创煤化工项目甲醇合成装置压缩 厂房网架工程。待工程结束后自行废止。 2工程概况 工程名称：中天合创煤化工项目甲醇合成装置压缩厂房网架工程 建设单位：中天合创能源有限责任公司 监理单位：岳阳巴陵石化工程建设监理有限公司 总包单位：中石化宁波工程有限公司 设计单位：潮峰钢构集闭有限公司 施工单位：潮峰钢构集团有限公司 工程地点：内蒙古自治区鄂尔多斯市乌审旗图克镇 施工范围：网架结构单体(2个)投形面积的为900平方米。屋面排水为有组织排水。 建筑物设计基准期为50年，建筑物抗震烈度6度，场地类别二类。网架结构形式为正 放四角锥网架。上弦柱点支承，整体跨度为30米，网架长度为30米。. 3质量目标 3.1工程质量目标 (I)一次交验合格率100%； (2)争创优质工程。 3.2质量管理目标 （1）分项、分部工程一次验收合格率100% 4编制标准 中天合创煤化工顶目甲醇合成装置压缩厂房网架工程工方案是根据下列文件、图纸、工程法规、质量检验评定标准等依据编制而成。 4.1潮峰钢构集团有限公司设计的施工图纸； 4.2现场勘察实际情况； 4.3国家有关建筑工程法规、舰范与文件: 4.4本公司ISO9001国际质量体系、《质量手册》、《程序文件》、《技术标准》
及拥有的技术力量。 4.5施工采用标准 4.5.1施工规范 《钢结构设计规范》GB50017—2003 《建筑结构荷载规范》GB50009—2012 《钢网架螺栓球结点高强度螺栓》GB/T16939—97 《建筑钢结构焊接技术规程》JGJ81—2002 《钢结构工程施工质量验收规范》GB50205—2001 《建筑施工安全检查标准》 JGJ59-2011 《施工现场临时用电安全技术规范》JGJ46—2005 《工程测量规范》GB50026-2007 5质量检验控制程序 5.1主要质量控制项目 报据以上的质量目标要求，在整个工程的结构施工阶段。质量检查员拟对以下分部分项和重点进行预控和检验： (1)所有进场材料质量状况、合格证明文件；主要建筑材料(钢材)复试检验等。 (2)钢网架安装、天基板安装。 5.2材料检验程序和方法 5.2.1对材料质量严格按“建筑安装资料管理规程”及本公司质量程序文件相关规 定进行，对进场物资材料进行全面的检验和试验，不合格品严格按ISO9001：2008标准控制程序进行控制，进场材料及时按规范要求进行现场取样。 5.2.2建立物资验证台帐，定期检验各种材料质量证明。与材料部门紧密联系，对 进场物资验证其各种质量证明及复试和其实体质量，并认真做好台帐。 5.3 重点检查顶目及检验方法 5.3.1网架材料 5.3.1.1钢管、螺栓球、高强螺栓等材料检查产品的质量合格证明文件、中文 标志或厂方检验报告。 5.3.2网架安装过程检查 5.3.2.1现场施工过程中，应对网架安装质量及时进行检查。
实验中细胞铺板的方法
于侵袭、迁移等试验的细胞计数及铺板 [实验步骤] 1、准备工作用 75% 的酒精擦拭双手，同时用酒精棉球擦拭超净台。2）将培养液、实验所需材料也放入超净台进行灭菌（血清、培养基除外）3）倒置显微镜下，观察细胞的状态，是否已经长满培养瓶，需要进行分瓶。 2、弃去培养基，用枪尽量去培养基。贴壁加入5mlPBS液清洗一遍，四个方向晃动倒掉。 3、将0.25%胰酶600ul加入培养皿内,拍皿，上下左右铺匀，37°消化30分钟左右，随时观察，见到细胞泥沙状留下时，即消化完全. 4、加入4ml的含5%血清的新鲜培养基，反复吹打消化好的细胞使其脱壁并分散，制成细胞悬液，然后装到15ml离心管中。1000rpm,3min. 5、弃上清。用PBS 3ml 洗细胞，吹打或涡旋混匀，洗2次，离心1000rpm,3min.弃上清。 6、配细胞稀释液（BSA 终浓度为0.1%）每种细胞需3ml稀释液,共6个样品，所以配20ml稀释液(无血培20ml+10%BSA 200ul.) 7、细胞沉淀中加3ml细胞稀释液，吹打混匀，即得稀释过的细胞悬液。 8、细胞计数板每孔加15ul悬液。每个样品计数2次，算均值。（8个大格总数/8=数值*104） 9、根据铺板密度，计算稀释过的细胞悬液用量，剩余体积用细胞稀释液补。 普通的细胞计数及铺板(免疫荧光，WB等不需定量) [实验步骤] 1、准备工作用75% 的酒精擦拭双手，同时用酒精棉球擦拭超净台。2）将 培养液、实验所需材料也放入超净台进行灭菌（血清、培养基除外）3）倒置显 微镜下，观察细胞的状态，是否已经长满培养瓶，需要进行分瓶。 2、弃去培养基，用枪尽量去培养基。贴壁加入5mlPBS液清洗一遍，四个方向晃动倒掉。 3、将0.25%胰酶600ul加入培养皿内,拍皿，上下左右铺匀，37°消化30分钟左右，随时观察，见到细胞泥沙状留下时，即消化完全. 4、加入4ml的含血清的新鲜培养基，反复吹打消化好的细胞使其脱壁并分散，制成细胞悬液，然后装到15ml离心管中。1000rpm,3min.若细胞较多，则需稀释。 5、取上述1ml细胞悬液，在加1ml含血清的新鲜培养基，混匀。 6、细胞计数板每孔加15ul悬液。每个样品对角线计数2次，算均值。 7 、根据铺板密度，计算稀释过的细胞悬液用量，剩余体积用含血清的新鲜 培养基补。
细胞迁移和侵袭实验
细胞迁移和侵袭实验 实验准备： 细胞，24孔板，transwell小室（8μm，24孔板专用），ECM Gel，10%FBS+培养基，无血清培养基，10 μ、200 μL、1000 μL移液器及配套枪头，1.5 mL EP 管，冰盒 实验设计： 实验分组一般分为阴性组（上下层均没有趋化因素），实验组（按照实验需要，上层或者下层加入趋化因素），对照组（趋化因素与实验组中的相反）。如果有特别需要，可以再加上阳性组（上下层都有趋化因素）。 实验操作（请细读注意事项）： 一、细胞侵袭实验 1.ECM Gel原液提前1 h放在4 ℃冰箱中解冻，实验前转移到冰盒中。 2.将1.5 mL EP、枪头盒、transwell放在24孔板里面后，置于冰上预冷。 3.根据自己的使用量，按照ECM Gel : 无血清培养基=1 : 7.5在冰上稀释成使 用液。 4.把枪头剪去一小段（约3 μm）后在冰上吸取40 μL/孔ECM Gel使用液轻轻 加入transwell上室中，加入时慢慢移动枪头，保证液体平铺在底部。 5.放在37 ℃孵箱15 min，让胶凝固。 6.消化、离心、计数细胞后，按照2.5x104 / mL用无血清培养基稀释细胞， 制成细胞悬液（如果细胞很多，这一步可以提前，在4、5之前做）。 7.按照每孔200 μL，将细胞悬液加入transwell上室，同时在transwell下室加 入10%FBS+培养基500 μL，放入37 ℃孵箱培养。 8.若干小时后取出，吸去transwell上室多余液体，用PBS清洗两次，用棉棒 在上室中轻轻转动，吸干水分并擦去膜内侧的细胞。 9.在上室中加入结晶紫染液，染色5 min，回收染液，用流水缓缓冲去染液， 再次用棉棒在上室中轻轻转动，吸干水分。 10.在正置显微镜上放置一块载玻片，将transwell小孔倒置放在上面，拍照。 11.在100倍视野下，对膜的上下左右及中间计数，做平均数。
物理实验要求及数据表格实验10 牛顿环
实验10 牛顿环 专业___________________ 学号___________________ 姓名___________________ 一、预习要点 1. 读数显微镜的结构和用法； 2. 等厚干涉实验的原理，平凸透镜曲率半径计算公式。 二、实验内容 1. 置牛顿环装置于显微镜工作台上，调测微鼓轮使镜筒位于标尺中部（约25mm 左右处），牛顿环 装置中心接触点（肉眼可见一暗斑）对准镜筒中央。 2. 钠光灯发出的光线射到镜筒下方与水平约45°角的半反镜上，经反射垂直入射到牛顿环装置上； 略微转动半反镜（可全方位转动即上、下、左、右）使光线入射牛顿环装置，这时从显微镜中观察到一片均匀明亮的钠黄光。 3. 调节目镜调焦，使视场中的十字叉丝清晰；调节目镜放大倍数。 4. 转动镜筒调焦手轮至见到最清晰的牛顿环干涉图像。 5. 移动牛顿环装置，使十字叉丝对准牛顿环中心暗斑的中心，旋转测微鼓轮，使镜筒向牛顿环某 方向（如向右）移动，用十字叉丝切准各暗环，并数出级数。数到中心暗斑的右端第34暗环，将测微鼓轮反转回到第30暗环开始测量，记录右端第30环读数，再用十字叉丝对准右第28、26······暗环，每隔2环记下读数到右端第12暗环[注意记录表格内填写的位置]，再使十字叉丝回到牛顿环中心暗斑，核对该中心是否0=k 。经过中心后继续向左运行，记录牛顿环左端12、14······30暗环位置读数。重复测一遍，但是从牛顿环的左30暗环测到右30暗环。 三、实验注意事项 1. 测量时测微鼓轮只能单方向转动，否则有空程差引入；不能数错环数，把k 级当作k+1级读数； 2. 钠光灯点燃后通常要过十几分钟才能正常发光，使用时一经点燃不要轻易灭，也不要在点燃时 移动、撞击，钠光灯关闭后，必须稍等片刻才能重新打开。 3. 当用镜筒对待测物聚焦时，为防止损坏显微镜物镜，正确的调节方法是使镜筒移离待测物（即 提升镜筒）。注意将显微镜底座中的反光镜转到背光一侧。 4. 测量过程中，不要碰动牛顿环和震动实验台，以免影响测量的准确性。 5. 爱护实验台上的所有仪器，特别小心光学仪器。 四、原始数据记录表格 组号________ 同组人姓名____________________ 成绩__________ 教师签字_______________ 表1 测牛顿环直径（从右测到左） 单位：mm
试验检测工作计划表
附件7 浙江顺畅衢州市沿江公路工程衢江区段（一期工程）工程试验检测计划 编制：（钟婷） 审核：（技术负责人审核） 批准：（母体检测机构负责人） 项目部（盖章） 2017年12月10日 编制说明
1、工程概况 本工程位于宾港大桥北岸，向东延伸跨邵源溪，过黄甲山村，西山村跨铜山源，经社屋前和松旺至终点洪家村附近，主 要包括公路和慢行道两部分工程。衢江区一期工程公路长 11.35千米，路基宽6.5米，路面宽度6米，设计速度20km/h， 全线设置大桥2座，中桥1座，涵洞38道。慢行道长10.9千 米，宽4米，全线设置桥梁3座，涵洞15道。 2、工地试验室基本情况 机构名称：浙江交工集团股份有限公司测试中心衢州市沿江公 路PPP项目工地试验室 试验室主任：陈琼 联系电话：、 QQ：709674958 本项目试验室隶属于衢州市沿江公路工程PPP项目部，根据 YJQJ合同段施工任务的需要组建于2017年09月12日。本试 验室的任务主要是承担该标段的建筑工程原材料、混合料和构 件成品、半成品的质量检验及桥梁工程、路基……..工程的检 测任务。
工地试验室基本情况
项目试验人员分工表 3、编制依据 ⑴工地试验室试验检测工作参照《公路路基施工技术规范》JTG F10-2006，《公路路面基层施工技术细则》JTG/T F20-2015，《公路水泥混凝土路面施工技术细则》JTG/T F30-2014，《公路沥青路面施工技术规范》JTG F40-2004，《公路交通安全设施质量检验抽样方法》JT/T 495-2014，《公路工程质量检验评定标准》JTG F80/1-2004等，并结合本工程实际特点执行。 ⑵若招投标文件及设计文件中对相关技术指标有明确规定的，应以 招投标文件及设计文件为准，并在工作计划中予以说明。 ⑶若在本标段《监理细则》中未提及的内容，应根据本项目实际情
实验计划进度表
九年级化学实验教学计划 化学是一门以实验为基础的学科。实验教学可以激发学生学习化学的兴趣，帮助学生形成概念，获得知识和技能，培养观察和实验能力，还有助于培养实事求是、严肃认真的科学态度和科学的学习方法。因此，加强实验教学是提高化学教学质量的重要一环。组织和指导学生开展化学课外活动，对于提高学生学习化学的兴趣，开阔知识视野，培养和发展能力，发挥他们的聪明才智等都是很有益的。因此，特制定本化学实验教学计划。 一、指导思想： 培养出来的学生能够适应时代，并使他们在一定程度上能够超越时代，真正能够面向未来，面向现代化，同时在教学过程中，去做学生的贴心人，积极投入到新课程改革的浪潮中去，将新课程的理念贯彻到教学实践中去，注重实验教学，提高学生动手操作能力，要使得学生能在实验中用探究的方法去学习，领会知识的内涵，同时在一定程度上能够学会去发明创造。争取将实验教学工作推上一个新的台阶。 二、实验内容分析： 新课程标准强调科学探究的重要性与有效性，旨在转变学生的学习方式，使学生积极主动地获取化学知识，激发学生亲近化学、热爱化学并渴望了解化学的兴趣，培养他们的创新精神和实践能力，同时，为了突出学生的实践活动，充分发挥化学学科内容特点，重视科学、技术与社会的联系，新教材将原有的部分演示实验和分组实验全部改为“活动与探究”、“家庭小实验”等。这就为学生创造了良好的实验氛围，为他们积极主动地获取化学知识、在实验中切身体会到过程提供了条件。 演示实验有：空气成分的测定、物质的变化、水的组成、氧气和二氧化碳的性质与制法、燃烧的条件等。这些实验有助于研究基本概念、基本理论，同时，也有助于学生养成良好的实验习惯、掌握一定的实验方法并形成严谨的科学态度和求实的精神。 活动与探究有：探究蜡烛及蜡烛燃烧时的变化；探究吸入的空气和呼出的气体有什么不同；探究氧气的实验室制法；探究实验室中制取二氧化碳的装置；探究质量守恒定律；探究燃料燃烧的条件等；通过这些实验，让学生从实验成果中体会到实验是进行科学探究的重要手段，让学生体会到实验基本操作技能在完成一定的实验过程所起的重要作用，从而增强学生对实验的认识并提高实验中掌握基本操作技能的科学自觉性、积极性和主动性。 三、实验目标： 化学实验是进行科学探究的重要手段，学生具备基本的化学实验技能是学习化学和进行科学探究的基础和保证，化学课程要求学生遵守实验室的规则，初步形成良好的实验工作
Transwell侵袭实验全面总结
Transwell侵袭实验全面总结 第一节概念 这里想明确两个概念，一个是Transwell，另一个是肿瘤细胞侵袭模型。 1．Transwell trans-这个词根有转移、转运、穿过等意思，well有小室的意思，可以从字面上理解，这是一类有通透性的杯状的装置，根据Corning公司的Transwell说明书中的介绍，可以认为这是一种膜滤器（Membrane filters），也可认为是一种有通透性的支架（permeable support s）。更准确地说，Transwell应该是一种实验技术，这项技术的主要材料是Transwell小室（T ranswell chamber，Transwell insert），其外形为一个可放置在孔板里的小杯子，不同厂家对Transwell会有不同的命名，而不同型号也可有不同形状，不同大小，根据实验需要，可有不同选择。 但无论是何种外形，其关键部分都是一致的，那就是杯子底层的一张有通透性的膜，而杯子其余部分的材料与普通的孔板是一样。这层膜带有微孔，孔径大小有－μm，根据不同需要
可用不同材料，一般常用的是聚碳酸酯膜（polycarbonate membrane）。下图是一个Trans well装置的纵切面 将Transwell小室放入培养板中，小室内称上室，培养板内称下室，上室内盛装上层培养液，下室内盛装下层培养液，上下层培养液以聚碳酸酯膜相隔。我们将细胞种在上室内，由于聚碳酸酯膜有通透性，下层培养液中的成分可以影响到上室内的细胞，从而可以研究下层培养 液中的成分对细胞生长、运动等的影响。 应用不同孔径和经过不同处理的聚碳酸酯膜，就可以进行共培养、细胞趋化、细胞迁移、细胞侵袭等多种方面的研究。当然不同细胞其体积不同，具体选择时要考虑到细胞大小。这里主要谈几种大家常用的实验： （1）共培养体系： 小于孔径条件下，细胞不会迁徙通过，因此，若研究不涉及细胞运动能力，不需要细胞穿过聚碳酸酯膜，则应选择μm以下孔径。常用、μm。我们实验室用的是μm。将细胞A种于上室，细胞B种于下室，可以研究细胞B分泌或代谢产生的物质对细胞A的影响。
细胞迁移侵袭实验操作步骤(Transwell)
迁移实验（cell migration assay） 实验介绍 细胞迁移与侵袭实验将Transwell小室放入培养板中，小室内称上室，培养板内称下室，上下层培养液以聚碳酸酯膜相隔，将研究的细胞种在上室内，由于聚碳酸酯膜有通透性，下层培养液中的成分可以影响到上室内的细胞，应用不同孔径和经过不同处理的聚碳酸酯膜，就可以进行共培养、细胞趋化、细胞迁移、细胞侵袭等多种方面的研究。 实验步骤： 1材料准备： 可拍照显微镜，Transwell小室，孔径8μm，没包被胶的(Coster和Corning公司的也较常用)，Transwell迁移实验的细胞培养板24孔板。细胞培养板应当与购买的Transwell小室相配套，BD公司的Matrigel，无血清DMEM，(1%胎牛血清)DMEM和1640培养基，DMEM 完全培养基，1640完全培养基（也可加到20%血清），无菌PBS，棉签，胰酶，4%多聚甲醛固定液或者甲醇，结晶紫染液（0.1%（g/ml）PBS结晶紫） 2步骤和流程 2.1基质胶铺板： 用BD公司的Matrigel 1：8（根据细胞产生mmp的量来决定）稀释，包被Transwell小室底部膜的上室面，置37℃30min使Matrigel聚合成凝胶。使用前进行基底膜水化。 2.2制备细胞悬液 ①制备细胞悬液前可先让细胞撤血清饥饿12－24h，进一步去除血清的影响。但这一步并不是必须的。 ②消化细胞，终止消化后离心弃去培养液，（用PBS洗1－2遍），用含BSA的无血清培养基重悬。调整细胞密度至5×105/ml。 2.3接种细胞 ①取细胞悬液100μl加入Transwell小室。 ②24孔板下室一般加入600μl含20%FBS的培养基，特别注意的是，下层培养液和小室间常会有气泡产生，一旦产生气泡，下层培养液的趋化作用就减弱甚至消失了，在种板的时候要特别留心，一旦出现气泡，要将小室提起，去除气泡，再将小室放进培养板。 ③培养细胞：常规培养12－48h（主要依癌细胞侵袭能力而定）。24h较常见，时间点的选择除了要考虑到细胞细胞侵袭力外，处理因素对细胞数目的影响也不可忽视。 2.4结果统计 直接计数法，“贴壁”细胞计数，这里所谓的“贴壁”是指细胞穿过膜后，可以附着在膜的下室侧而不会掉到下室里面去，通过给细胞染色，可在镜下计数细胞。 取出Transwell小室，弃去孔中培养液，用无钙的PBS洗2遍，甲醇固定30分钟，将小室适当风干。 0.1%结晶紫染色20 min，用棉签轻轻擦掉上层未迁移细胞，用PBS洗3遍。 400倍显微镜下随即五个视野观察细胞，记数。 实验材料
细胞迁移划痕实验
细胞迁移实验技术 —划痕实验 一、基本原理 细胞划痕（修复）法是简捷测定细胞迁移运动与修复能力的方法，类似体外伤口愈合模型，在体外培养皿或平板培养的单层贴壁细胞上，用微量枪头或其它硬物在细胞生长的中央区域划线，去除中央部分的细胞，然后继续培养细胞至实验设定的时间（例如72h），取出细胞培养板，观察周边细胞是否生长（修复）至中央划痕区，以此判断细胞的生长迁移能力，实验通常需设定正常对照组和实验组，实验组是加了某种处理因素或药物、外源性基因等的组别，通过不同分组之间的细胞对于划痕区的修复能力，可以判断各组细胞的迁移与修复能力。 二、操作步骤 1．先用marker笔在6孔板背后，用直尺比着，均匀的划横线，大约每隔0.5~1cm一道，横穿过孔。每孔至少穿过5条线。 2．在孔中加入约5×105个细胞，具体数量因细胞种类不同而不同，接种原则为过夜后融合率达到100%。 3．第二天用枪头比着直尺，尽量垂至于背后的横线划痕，枪头要垂直，不能倾斜(不同孔之间最好使用同一只枪头)。 4．PBS洗细胞3次，去处划下的细胞，加入无血清培养基。 5．放入37℃5%CO2培养箱，培养。可按0，6，12，24h时间点取样，拍照(具体时间依实验需要而定)。 6.统计方法：使用ImageJ软件打开图片后，随机划取6至8条水平线，计算细胞间距离的均值。
三、注意事项： 1.在用PBS 缓冲液冲洗时，注意贴壁慢慢加入，以免冲散单层贴壁细胞，影响实验拍照结果。 2.一般做划痕实验，都是无血清或者低血清（<2%）否则细胞增殖就不能忽略。 3.按照6孔板背后画线的垂直方向划痕，可以形成若干交叉点，作为固定的检测点，以解决了前后观察时位置不固定的问题。
肿瘤细胞迁移实验(细胞划痕法)讲义
抗肿瘤药物5氟尿嘧啶对肿瘤细胞 迁移的影响 欧阳学文 （细胞划痕法） 实验导读 瘤组织的增殖失控、瘤细胞的分化异常、瘤细胞具有侵袭和转移的能力是恶性肿瘤最基本的生物学特征，而侵袭和转移又是恶性肿瘤威胁患者健康乃至生命的主要原因。因此研究肿瘤侵袭和转移的规律及其发生机制，对恶性肿瘤的防治有重要意义。 肿瘤转移是指恶性肿瘤细胞从原发部位侵入淋巴管、血管或体腔，至靶组织或靶器官，长出与原发瘤不相连续而组织学类型相同的肿瘤。前者称为原发瘤，后者称为转移瘤或继发瘤。 图1 肿瘤转移示意图 根据肿瘤异质性理论，大多数恶性肿瘤最初虽属单克隆起源，但它在不断增殖演进至临床明显的肿瘤时，由于瘤细
胞遗传性状的不稳定性(来自基因突变或缺失等)而不断地变异，造成该肿瘤内瘤细胞亚群表型的多样性，诸如瘤细胞的侵袭性、生长速率、转移能力，核型乃至对激素的反应性和抗肿瘤药物的敏感性等，这些瘤细胞亚群具有被此不同的特性即所谓异质性。异质性与肿瘤转移直接有关的就是癌细胞的转移潜能，癌细胞的转移潜能有高低之分，具有高转移潜能的筋细胞易发生转移。 肿瘤细胞的运动性，来源于细胞运动“接触抑制”的概念。通过体外培养正常和恶性结缔组织细胞，发现正常纤维母细胞在移动过程中引起的皱栖脑膜与其他细胞的表面接触时，往往产生细胞膜活动的抑制和移动中细胞的缩短，然后停止。当纤维母细胞生长过程中在培养皿上融合形成一单层时，细胞运动即显著受到抑制。间变的肉瘤细胞则缺乏接触抑制，瘤细胞的运动不会被正常纤维母细胞所抑制。 针对肿瘤转移这一复杂的过程，人们研制了各种抗转移药物，如血小板凝集抑制剂、血管生成抑制因子、内皮稳定因子、干扰素－α以及其他化学药物。
初中物理实验记录标准表格.docx
初中物理实验记录表格
一、要求得出实验规律的探究实验表格设计 1、“探究光是如何传播的” 象 激光在不现 同介质中 烟雾中 在透明牛 奶中 在玻璃中 在不均匀 的糖水中 2、探究“光的反射规律” 的反射角与入射角的关系 实验123 次数 入射 角 / 反射 角 / 3、探究：平面镜成像特点
实验蜡烛到平像到平面像与物能否用次数面镜的距镜的距离大小比光屏承离/cm/cm较接1 2 3 4、凸透镜成像的规律：f=cm 物体到凸透镜像到凸透镜像的大小（放大像的正倒像的虚实的距离 u的距离 v或缩小） 总结分析表格： 成像的条件成像性质应用 物体到凸透像的正倒像的大小像的虚实像到凸透镜 镜的距离（u）的距离（v） u>2f U=2f F 数I A /A I B/A I C/A 1 2 3 6、探究：串联、并联电路中电压关系 实验次AB间电压BC间电压AC间电压数U AB /V U BC /V U AC /V 1 2 3 7、探究：阻力对物体运动的影响 表面粗糙阻力大小车运动的程度小距离s/m 毛巾表面 木板表面 玻璃表面小车运动时间 t/s 绝对光滑 表面 8、探究：滑动摩擦力的大小与什么因素有关？ 次压力 F接触面弹簧测力计示摩擦数压 /N材料数 F 拉 /N力 f/N 1F1木块和 木板 2F2木块和 木板 3F3木块和 木板 4F1木块和 毛巾 5F1木块和 棉布 或 次数压力 F接触面弹簧测力计摩擦力 压/N材料示数 F 拉 /N f/N 1F1木块和 木板2F2木块和 木板 Transwell侵袭实验总结 第一节概念 这里想明确两个概念，一个是Transwell，另一个是肿瘤细胞侵袭模型。 1.Transwell 关于Transwell这个词该如何解释，查了很多资料也未见准确的注解，我觉得可以这么理解吧，trans-这个词根有转移、转运、穿过等意思，well有小室的意思，可以从字面上理解，这是一类有通透性的杯状的装置，根据Corning公司的Transwell说明书中的介绍，可以认为这是一种膜滤器（Membrane filters），也可认为是一种有通透性的支架（permeable supports）。 更准确地说，Transwell应该是一种实验技术，这项技术的主要材料是Transwell小室（Transwell chamber，Transwell insert），其外形为一个可放置在孔板里的小杯子，不同厂家对Transwell会有不同的命名，而不同型号也可有不同形状，不同大小，根据实验需要，可有不同选择。 但无论是何种外形，其关键部分都是一致的，那就是杯子底层的一张有通透性的膜，而杯子其余部分的材料与普通的孔板是一样。这层膜带有微孔，孔径大小有0.1－12.0μm，根据不同需要可用不同材料，一般常用的是聚碳酸酯膜（polycarbonate membrane）。 下图是一个Transwell装置的纵切面 将Transwell小室放入培养板中，小室内称上室，培养板内称下室，上室内盛装上层培养液，下室内盛装下层培养液，上下层培养液以聚碳酸酯膜相隔。 我们将细胞种在上室内，由于聚碳酸酯膜有通透性，下层培养液中的成分可以影响到上室内的细胞，从而可以研究下层培养液中的成分对细胞生长、运动等的影响。 应用不同孔径和经过不同处理的聚碳酸酯膜，就可以进行共培养、细胞趋化、细胞迁移、细胞侵袭等多种方面的研究。 下面参考guxuefeng战友和cosmosci战友的帖子具体来谈谈孔径的选择，当然不同细胞其体积不同，具体选择时要考虑到细胞大小。这里主要谈几种大家常用的实验： （1）共培养体系： 小于3.0um孔径条件下，细胞不会迁徙通过，因此，若研究不涉及细胞运动能力，不需要细胞穿过聚碳酸酯膜，则应选择3.0μm以下孔径。常用0.4、3.0μm。我们实验室用的是0.4μm。 细胞运动及迁移检测方法的比较与选择关键词：细胞仪器分析仪试剂标准物质北京标准物质网 一.transwell试验 transwell技术是检测细胞运动能力的经典方法，由于其原理简单、操作相对简便，该法目前已被广泛用于检测不同类型细胞的运动能力。内室底部的薄膜是整个实验装置的核心部分，待测细胞的直径决定了薄膜孔径的选择。通常情况下，薄膜的孔径应略小于细胞的直径以防止细胞直接漏入到外室。transwell试验对细胞运动和迁移能力的评价主要依赖于对转移至底膜外侧细胞的染色和计数。甲紫是transwell试验中常用的细胞染料，在染色前需要使用棉签将底膜内侧的细胞拭去以免残余的细胞着色后影响最终的细胞计数和统计。然而，通常使用棉签很难将膜内侧的细胞全部拭去，因此这是制约本试验精确度的主要因素之一。同时，甲紫染色后的细胞计数常由操作者在显微镜下完成，导致实验的最终结果缺乏稳定性和准确度。此外，该方法只适宜于终点检测法，难以实时检测细胞的运动变化。 目前已有改良的方法或实验装置可弥补以上几点不足。如在对发生迁移的细胞进行定量分析时，可以荧光染料将细胞着色，而后将底膜外侧的细胞经处理(如胰酶等)转移至计数板内，使用电子计数器对细胞总数进行定量分析。又如Roche 和AceaBio公司联合开发的xcELLigenee系统，将经典的transwell实验装置与微电子阻抗感应系统整合，实现了对细胞运动的实时监测。微电子阻抗系统所检测到的微电阻与细胞的数量，伸展状态，贴壁紧密程度等多项生理指标密切相 关，将其整合于内室底部微孔膜的下表面上，当细胞迁移至微孔膜底面时，则可引起细胞微电阻的升高，通过记录微电阻的变化可精确的反映细胞的运动状态。该系统提高了传统transwell的精确度，同时可以获取细胞运动的实时动态数据。然而，由于该系统需要借助于特殊的仪器设备，且成本相对较高，因此常应用于大规模及高通量的筛选工作。 二、二维平面内细胞运动的检测方法 1.划痕试验原理简单，操作便捷，不需要借助特殊的实验仪器，适用于任何具有贴壁特性的细胞，因此在细胞运动的检测中应用广泛。本方法中，细胞运动的能力反映为划痕宽度的变化，通常情况下划痕由实验操作者以移液器的吸管端划出，导致划痕的宽度并不均一，因此在一定程度上影响了划痕愈合度的评估。同时，有观点认为超过24小时的检测并不能排除细胞增殖对划痕愈合的影响，尽管在实验过程中通过降低培养基的血清浓度可在一定程度上削弱细胞增殖的影响，但划痕试验中观察时间点的设置仍宜控制在24小时以内。此外，在人为制造划痕时可对周围细胞产生一定的机械损伤，可能会影响划痕边界周围细胞的活性和运动潜能。同时，脱落的部分细胞可能在培养板静置后重新在无细胞区域定植和迁移，从而制造划痕愈合的假象。 目前，Applied BioPhysics公司推出了基于微电阻感应系统的划痕试验装置。借助于整合在细胞培养板l的电极，通过电流的脉冲刺激可产生宽度恒定均一的无细胞区域。同时通过检测无细胞区域的微电阻的增加，可以判断细胞向内迁移的数量。这种改良后的装置实现了实验条件的标准化和实验结果统计的精准化，但其对设备器材的要求和成本均相对较高。 一．伏安法测电阻 1、定义：用电压表和电流表分别测出电路中某一导体两端的电压和通过的电流就可以根据欧姆定律算出这个导体的电阻，这种用电压表电流表测电阻的方法叫伏安法。 2、原理：I=U/R 3、电路图： （右图） 4、步骤：①根据电路图连接实物。 连接实物时，必须注意 开关应断开 ② 检查电路无误后，闭合开关S ，三次改变滑动变阻器的阻值，分别读出电流表、电压表的示数，填入表格。 ③算出三次Rx 的值，求出平均值。 ④整理器材。 5、讨论：⑴本实验中，滑动变阻器的作用：改变被测电阻两端的电压（分压），同时又保护电路（限流）。 ⑶如图是两电阻的伏安曲线，则R 1＞R 2 (4)若UI 线是曲线：说明组织随温度的变化而变化 二．伏安法测灯泡的额定功率： ①原理：P=UI 2电路图 ③选择和连接实物时须注意： 电源：其电压高于灯泡的额定电压 滑动变阻器：接入电路时要变阻，且调到最大值。根据能否调到灯泡的额定电压选择滑动变阻器。 电压表：并联在灯泡的两端“+”接线柱流入，“－”接线柱流出。 根据额定电压选择电压表量程。 电流表：串联在电路里““+”接线柱流入，“－”接线柱流出。 根据I 额=P 额/U 额 或I 额=U 额/R 选择量程。 滑动变阻器 变阻（“一上一下”） 阻值最大（“滑片远离接线柱”） 串联在电路中 电流表 “+”接线柱流入，“-”接线柱流出 量程选择：算最大电流 I=U/Rx 并联在电路中 电压表 “+”接线柱流入，“-”接线柱流出 量程选择：看电源电压 R 1 R 2 I U V A Rx R ′ 三.电热 1、实验：目的：研究电流通过导体产生的热量跟那些因素有关？ 原理：根据煤油在玻璃管里上升的高度来判断电流通过电阻丝通电产生电热的多少。 实验采用煤油的目的：煤油比热容小，在相同条 件下吸热温度升高的快：是绝缘体 2、焦耳定律：电流通过导体产生的热量跟电流的平方成正比，跟导体的电阻成正比，跟通电时间成正比。 3、计算公式：Q=I2Rt (适用于所有电路)对于纯电阻电路可推导出：Q =UIt= U2t/R=W=Pt ①串联电路中常用公式：Q= I2Rt 。Q1:Q2:Q3:…Qn=R1:R2:R3:…:Rn 并联电路中常用公式：Q= U2t/R Q1:Q2= R2:R1 ②无论用电器串联或并联。计算在一定时间所产生的总热量常用公式Q= Q1+Q2+…Qn ③分析电灯、电炉等电热器问题时往往使用：Q= U2t/R=Pt 四.影响电阻大小因素： 1、实验原理：在电压不变的情况下，通过电流的变化来研究导体电阻的变化。（也可以用串联在电路中小灯泡亮度的变化来研究导体电阻的变化） 2、实验方法：控制变量法。所以定论“电阻的大小与哪一个因素的关系”时必须指明“相同条件” 3、结论：导体的电阻是导体本身的一种性质，它的大小决定于导体的材料、长度和横截面积，还与温度有关。 4、结论理解： ⑴导体电阻的大小由导体本身的材料、长度、横截面积决定。与是否接入电路、与外加电压及通过电流大小等外界因素均无关，所以导体的电阻是导体本身的一种性质。 ⑵结论可总结成公式R=ρL/S，其中ρ叫电阻率，与导体的材料有关。 记住：ρ银<ρ铜<ρ铝，ρ锰铜<ρ镍隔。假如架设一条输电线路，一般选铝导线，因为在相同条件下，铝的电阻小，减小了输电线的电能损失；而且铝导线相对来说价格便宜。 检验和试验计划表 篇二：检验和试验计划 版次：a 换页状态：0 nepctd zb 014 2002 检验和试验计划 1 目的 为保证项目部质量/环境管理体系有效运行，建筑和安装工程质量达到规定要求，严格控 制中间环节，让顾客满意，特制定本计划。 2 适用范围 本程序适用于项目部所承担的建筑及安装工程在施工活动中，对施工管理、工程质量、 环境管理活动的检验和试验。 3 职责 3.1 项目部总工程师负责组织检验和试验工作。 3.2 项目部质保部负责组织实施分项、分部、单位工程质量检验评定的报验工作。 3.3 项目部物质部负责进货检验和试验计划的编制和实施工作。 3.4 项目部工程部负责组织实施分项、分部系统试验工作。 3.5 项目部经营部负责对分承包队伍动态管理。 3.6 试验中心负责混凝土配合比试验、无损检验和理化试验。 3.7 各施工工地专责工程师负责组织本工地检验和试验工作的实施，填报工序交接单， 填写工程施工记录表和检验评定表并向上级部门报检，。 4 程序 4.1 产品的进货检验和试验 4.1.1采购物资的验证 物质部负责进货检验和试验计划的编制和实施工作。 a) 接收与工程有关的物资都必须进行验证，a类物资验证后必须填写《物资到货验 证记录》，b类物资验证后可不填写； b) 如确需在供货商处进行验证时，供应部门应在采购合同中作出规定并组织实施； c) 当业主或其代表需要对供货商的物资进行验证时，在合同中应规定顾客进行验证 的具体方式，不论业主是否参与对供货商物资的验证，都不能免除物资供应部门 1 nepctd zb 014 200 2 对物资的验证；版次：a 换页状态：0 d) 验证方法采取观察外观质量、检查物资标牌、规格、型号、计量或点验物资数量、 测量和度量物资的几何尺寸、审核物资质量/环境证明文件的符合性等办法。重要的工程 物资由供应部门组织有关部门共同验证； e) 随a类物资提供的有关质量/环境等证明资料应进行登记并妥善保存； f) 必须出具物资质量证明文件的材料，如钢材、水泥、焊条、建材、油漆、保温材 料等，未接到质量证明文件或质量证明文件不合格的材料禁止发放使用； g) 对环境可能产生重大影响的物资（如放射源等），供货商需提供其环境性能和检测 报告，否则作不合格处置； h) 当发现质量/环境证明文件的内容有缺项或存在不合格项目时，该物资作不合格处 置，执行物资供应过程管理程序条款4.11不合格物资的控制。 4.1.2物资复验 a) 对需进行复试的原材料，如钢材、水泥等建筑材料，供应部门按《进货检验和试 验计划》的规定进行取样，并填写《试验委托单》送试验部门进行试验。 Transwell实验原理与操作步骤 Trans-这个词根有转移、转运、穿过等意思，well有小室的意思，可以从字面上理解，这是一类有通透性的杯状的装置，根据Corning公司的Transwell说明书中的介绍，可以认为这是一种膜滤器（Membrane filters），也可认为是一种有通透性的支架（permeable supports）。更准确地说，Transwell应该是一种实验技术，这项技术的主要材料是Transwell 小室（Transwell chamber，Transwell insert），其外形为一个可放置在孔板里的小杯子，不同厂家对Transwell会有不同的命名，而不同型号也可有不同形状，不同大小，根据实验需要，可有不同选择。但无论是何种外形，其关键部分都是一致的，那就是杯子底层的一张有通透性的膜，而杯子其余部分的材料与普通的孔板是一样。这层膜带有微孔，孔径大小有0.1－12.0μm，根据不同需要可用不同材料，一般常用的是聚碳酸酯膜（polycarbonate membrane）。 将Transwell小室放入培养板中，小室内称上室，培养板内称下室，上室内盛装上层培养液，下室内盛装下层培养液，上下层培养液以聚碳酸酯膜相隔。我们将细胞种在上室内，由于聚碳酸酯膜有通透性，下层培养液中的成分可以影响到上室内的细胞，从而可以研究下层培养液中的成分对细胞生长、运动等的影响。 应用不同孔径和经过不同处理的聚碳酸酯膜，就可以进行共培养、细胞趋化、细胞迁移、细胞侵袭等多种方面的研究。当然不同细胞其体积不同，具体选择时要考虑到细胞大小。这里主要谈几种大家常用的实验： （1）共培养体系： 小于3.0um孔径条件下，细胞不会迁徙通过，因此，若研究不涉及细胞运动能力，不需要细胞穿过聚碳酸酯膜，则应选择3.0μm以下孔径。常用0.4、3.0μm。我们实验室用的是0.4μm。将细胞A种于上室，细胞B种于下室，可以研究细胞B分泌或代谢产生的物质对细胞A的影响。 （2）趋化性实验： 可用5.0、8.0、12.0μm膜，上室细胞可穿过聚碳酸酯膜进入下室，计数进入下室的细胞量可反映下室成分对上室细胞的趋化能力。 ①细胞B对细胞A的趋化作用：将细胞A种于上室，细胞B种于下室，可以研究细胞B分泌或代谢产生的物质对细胞A的趋化作用。 ②趋化因子对细胞的趋化作用：将细胞种于上室，下室加入某种趋化因子，可研究该趋化因子对细胞的趋化作用。 （3）肿瘤细胞迁移实验： 常用8.0、12.0μm膜，上室种肿瘤细胞，下室加入FBS或某些特定的趋化因子，肿瘤细胞会向营养成分高的下室跑，计数进入下室的细胞量可反映肿瘤细胞的迁移能力。Transwell实验 超详细
细胞运动及迁移检测方法的比较与选择
(完整版)初中物理实验总结
检验试验计划表1
(完整版)Transwell实验原理与操作步骤