两种重要抗真菌药敏试验的比较研究

王小丽,钟有添

(赣南医学院病原生物学教研室,江西　赣州　341000)

摘　要:目的:比较NCCL S 方案与Etest 法两种重要的抗真菌药敏试验的优劣。方法:对NCCL S 方案与Etest 法方法的过程、条件、对唑类药物抗真菌MIC 的一致性方面进行比较。结果:Etest 法更优。结论:NCCL S 方案准确性强,但操作步骤复杂,而Etest 较为简便、可靠、准确。关键词:抗真菌药敏试验;NCCL S 方案;Etest 法

中图分类号:R965 文献标识码:A 文章编号:1001-5779(2004)06-0748-02

随着系统性真菌感染和抗真菌药物的不断增多,借助药敏试验进行抗真菌药物的选择越来越被人们所关注。美国国家临床实验室标准化委员会(NCCL S )M -27A 方案[1],经全世界各地多个实验室广泛应用,对酵母菌进行抗真菌药物体外敏感试验方案上得到了很好的一致性和稳定性结果。浓度梯度(Etest )法是在NCCL S 方法基础上开发出的一种比较简便、省时、省力的抗真菌药敏试验新方法。现将近年来国外对这两种试验方法的比较研究做一综述。

NCCL S M -27方案,即“酵母菌液体培养基稀释法抗真菌药物敏感试验方案”,是用液体培养基配制一系列稀释度的药液,然后接种受试菌株的菌悬液,经一定温度孵育后,测定药物在体外抑制真菌生长的最低药物浓度,此方法准确性佳、重复性好,实验室间结果的一致性可以与抗细菌的药物敏感试验相媲美[2]。但方法的操作较费时、繁琐;由于真菌生长部分受抑制出现的拖尾现象,而使某些药物终点的判定困难;此外,对于检测一些耐药株特别是两性霉素B 耐药株方面也不够敏感。因此,M -27方案仍有待改进[3]。

Etest 法是1988年AB Biodisk 公司推出,它结

合扩散法和稀释法的特点,是一种新的利用琼脂扩散技术进行的M IC 测定法,它已广泛应用于抗细菌药物的体外药敏测定方法[4]。其基本原理是用特殊技术将抗菌药物在一试剂条上形成一个定量连续梯度,其培养基、菌接种浓度、培养温度及时间等条件基本按照M -27方案所推荐的条件。自1993年起开始应用于酵母菌的抗真菌药敏试验[5]。

自1994年开始有不少学者将NCCL S 方案与

Etest 方法对唑类药物抗真菌M IC 的一致性进行了

比较研究。Espinel -Ingroff [6]在1994年采用Etest 法和NCCL S 方案大量稀释法测定了氟康唑、5-氟胞嘧啶对10株质控菌株和78株临床分离酵母菌株M IC 值一致性比较研究。结果显示:质控菌株10株有8株M IC 值与NCCL S 方案结果一致,有较好的一致性。Colombo 等[7]用Etest 法和NCCL S 方案多量稀释法测定氟康唑、伊曲康唑、酮康唑对100株临床分离酵母菌的M IC 值,M IC 值一致率:酮康唑71%、氟康唑80%、伊曲康唑为84%,结果证实Etest 与NCCL S 液体培养基稀释法有较好的一致性。Wanger 等[8]的研究结果表明:Etest 方法与NCCL S 法一致率达95%～97%,同时发现24小时的结果一致性优于48小时,而且对采用NCCL S 方案对两性霉素B 耐药性检测不敏感的念珠菌,Etest 法也能容易地将其检测出来。Espinel -Ingroff 等[9]分别采用酪蛋白琼脂和含2%葡萄糖的RPM I 1640琼脂基用Etest 法检测伊曲康唑、氟康唑、5-氟胞嘧啶、酮康唑和两性霉素B 的M IC 值,在不同实验室间进行了试验。检测了83株念珠菌、隐球菌和光滑球拟酵母,结果显示:酪蛋白培养基对于两性霉素B 、伊曲康唑、酮康唑,实验室间一致性较好,分别为84%～90%、87%、94%～96%。而RPM I 1640培养基对氟康唑和5氟胞嘧啶的一致率较好,分别为96%～98%和80%,说明Etest 是很有应用价值的酵母菌药敏试验方法,但仍需要寻找最佳的培养基配方和M IC 终点判定标准来提高实验室间的一致性。Warnock 等[10]为代表的工作小组也对Etest 药敏试验进行了多中心观察。共10个实验室参加测试了18株念珠菌和2株新生隐球菌对两性

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作者简介:王小丽(1977年—

),女,大学本科,助教,研究方向:中草药抗菌。第24卷第6期　2004年12月

赣南医学院学报

J OURNA L OF G ANNAN MEDICA L COLLEGE

Vol.24　No.6

DEC.2004

霉素B、氟胞嘧啶、氟康唑和伊曲康唑的药敏性。由两人分别读结果。总的结果,对于两性霉素B,一致率为88.5%,对氟胞嘧啶为94%,氟康唑为92%,伊曲康唑为79%。Etest结果有时将敏感株误归为耐药株,因此,本试验结果认为Etest比较适合念珠菌对两性霉素B和氟胞嘧啶药敏性的常规筛选试验,而用于唑类则不大可靠,如发现唑类耐药株,应用标准方法重新测定。我们知道,M IC值与临床疗效之间的关系是非常复杂的,不能单纯根据其M IC 值来预测临床疗效,M IC值高低并不一定与临床治疗成败一致。目前多采用动物试验与临床疗效相结合的方法研究,关于体外药敏试验和临床疗效之间的关系有许多问题亟待解决。NCCL S方案准确性强、重复性好,但还不能将其作为常规的检查方法,不能单纯根据其M IC值来预测临床疗效。Ruhnke 等做了NCCL S法与Etest法两种方法敏感性比较及与氟康唑临床治疗疗效的比较研究,结果发现体外试验结果与临床疗效有一定相关性,所有的白念珠菌是来自口腔念珠菌病病人。在较理想的受试条件下临床对氟康唑治疗无效者体外M IC值> 256μg/ml。对氟康唑治疗有效病人分离的白念珠菌M IC值小于耐药标准值,他认为用3种方法所做体外耐药菌株与临床治疗失败是一致的,说明Etest 在检测M IC值与临床治疗之间的关系方面与NCCL S方法基本一致。Pfaller等又对Etest对酵母菌对两性霉素B的体外药敏性进行了评价,共采用了660株临床分离株,Etest与NCCL S方法总一致性为98.3%,同时证明Etest方法对发现两性霉素B耐药株较NCCL S方法更为敏感。

通过上述比较说明,NCCL S方案重复性好准确性强,虽操作步骤比较繁杂,但仍不失为一种可行的药敏试验方法,它将为耐药性标准的确立及尽早与国际接轨,提供参考。而Etest是一个较为简便、可靠、准确的方法,无需特殊条件,可在一般实验室用作药敏检测并可指导临床用药,是一个很有应用前景的临床实验室抗真菌药敏试验方法。

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(收稿日期:2004-10-27)

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