化学发光与酶联免疫检测血清甲胎蛋白的比较(精)
化学发光与酶联免疫检测血清甲胎蛋白的比较
颜多清
442400湖南桂阳县人民医院检验科
摘要目的：化学发光与酶联免疫检测血清甲胎蛋白的比较。方法：化学发光法、酶联免疫法，按仪器操作手册各用配套试剂测定质控品。结果：线性实验：化学发光检测更宽；精密度试验：化学发光的重复性较酶联免役法更好。结论：化学发光法与酶联免役法之间差异无显著性，但化学发光法优点更多。
关键词甲胎蛋白线性范围精密度化学发光酶联免疫
材料和方法
标本来源：随机抽取150份临床送检血清标本，包括正常和异常标本，异常标
本中超过仪器检测范围的结果不予统计。
仪器与试剂：化学发光仪使用Bayer Centaur CP。使用原装配套试剂。酶表仪洗板机使用URANUS AE全自动酶免仪和配套洗板机，严格根据使用说明操作。
方法：按仪器操作规程操作，用配套试剂测定，数值在标定值允许的变异范围
内，接着做线性、相关性、回收率、精密度测试。
结果
线性试验：将AFP测定值在1000～1200ng/ml范围内的5份血清标本混合，反复测定5次，取其均值作为原倍血清测定值即为理论值。将此混合血清做5点倍比稀释，随机排列测定顺序，各反复测定5次，以原倍血清测定值为标准按稀释倍数算得其理论值，求两者相关性并进行回归分析。化学发光回归方程
为：Y=10235X+65594，R=09999。
酶联免疫法回归方程为：Y=06578X+38885，R=09558。化学发光法在2～900ng/ml范围内线性良好，酶联免疫法在5～400ng/ml范围内线性良好，
可见化学发光免疫法的检测范围更宽，更能充分满足临床要求。
相关性试验：用上述二种方法分别对受检血清标本进行AFP定量分析，结果表
明，二种方法差异无显著性（P>005），直线回归方程为：Y=1
0667X-05433，R=09858，提示二种方法相关性良好。
回收试验：取三种浓度的血清(1071ng/ml，1808ng/ml，46
83ng/ml)，分别用不同浓度定值血清混合，配制成浓度分别为211ng/ml，
300ng/ml，773ng/ml，278ng/ml，367ng/ml，84
0ng/ml， 538ng/ml，626ng/ml，1100ng/ml的样本，用化
学发光法与酶联免疫法测得的回收率分别为961～979和953～97 1，平均回收率为977和964。
精密度试验：采取批内和批间差异来确定。用上述二种方法分别对低、中、高值质控品进行精密度试验，每份标本连续测定20次，计算 X，S，求批内CV 值。每日测定1次，连续测定20天，计算X ，S，求批间CV值。结果表明，化学发光免疫法的重复性比酶联免疫法的更好，特别是高值化学发光明显优于酶联免疫法。见表1。
表1两种方法的批内和批间变异
讨论
本文测定AFP检测结果表明，化学发光免疫法与酶联免疫没之间无显著性差异(P>005)，相关性良好(R=09858)，但两种方法相比较，化学发
光免疫法有如下优点。
化学发光免疫法检测结果的稳定性，灵敏度，精密度均优于酶联免疫法。
化学发光免疫法检测的线性范围更宽。
试剂稳定性好，有效期长。由于标记物在自然环境下很稳定，因此用它标记的试剂也非常稳定，而酶联免疫法采用酶作为标记物，通过显色强度反映待测物质的浓度，而影响酶和底物活性的因素有很多，因而试剂的稳定性和灵敏度略显不足。
化学发光免疫法能快速进行免疫反应，20分钟内出结果，较酶联免疫法缩短了不少时间，提高了工作效率。一次性加样头的使用及流动冲洗程序，彻底避免
了交叉污染。
甲胎蛋白被认为是辅助诊断肝癌最好的临床检测方法，化学发光免疫法是公认快速、精确、重复性好且安全无毒的方法。ELISA以快速、简便实效的优势在基层广应用。本文检测AFP结果提示化学发光法和ELISA法之间差异无统计学意义(P>005)，相关性好(r=0998)。本文显示化学发光法线性范围宽精密度等方面明显优于ELISA法，但是在人体正常值参考范围内AFP的检测，ELISA法具有快速、简便、成本低廉的优点，在健康体检、人群普查、良性肝病患者定期检查中起到很好筛查作用。化学发光免疫法的应用实现了免疫检测的自动化，具有灵敏度高，线性范围宽，检测快速，结果稳定，试剂稳定
性好，应用范围广等优点，显示出很好的应用前景。
参考文献
1陶义训.免疫测定进展.上海医学检验杂志,1999,19:65-68.
2吴健民.免疫检验自动化.当代医学,2000,6:28-32.
3齐军,车轶群.使用多肿瘤标志物蛋白质芯片诊断系统检测卵巢肿瘤.中华检验医学杂志,2003,26(6):35.
酶联免疫检测技术的应用
酶联免疫检测技术的应用 真菌毒素的检测：黄曲霉毒素 B 1 、M 1 以及T-2 毒素，脱氧雪腐镰刀菌烯醇(呕吐毒素DON )，二乙酰草镰刀菌烯醇(DAS )，玉米赤霉烯酮，赫曲霉毒素A ( OA )。 农药的检测：主要有除草剂与杀虫剂两大类，例如杀暝松( FN )、甲氟磷酸异已酶( SOMAN )、草不绿( Alachor)、西维因( Carbaryl )、多菌灵及克菌丹( Captan )等。 其他类的检测：盐酸克伦特罗，河豚毒素，植物毒素如罌粟硷、吗啡、藻类毒素，苯并( a)芘，抗生素，激素类以及一些营养物质和食品添加剂如麸蛋白( Gliaclin )，酱油蛋白( Soy protein )，花生蛋白(Peanut protein )，牛乳清蛋白( Borine Whey Protein )等。 随着食品工业的发展，对分析检测的要求越来越高，从而也使ELISA 方法将更趋完善。一方面为提高ELISA方法的灵敏度和特异性，制备单克隆抗体的技术的发展，将和ELISA 法互相结合，从而使食品卫生分析达到DNA分子结构水平，促使食品工业的健康发展。 1 放射免疫分析(RIA) 放射免疫法(Radioimmunoassay,RIA)优点是特异性强、灵敏度高、精确、简便易行。它包括以标记抗原(Antigen,Ag)为特点的放射免疫分析(Radioimmunoassay,RIA)和以标记抗体(Antibody,Ab)为特点的免疫放射分析(Immunoradiometric assay,IRMA)。前者以液相竞争结合法居多，既测大分子抗原又测小分子抗原；后者以固相法测大分子抗原为主。 最早建立的农药免疫法中，RIA占了很大比重，建立了狄氏剂、艾氏剂、2,4-D 和2,4，5-T、对硫磷和百草枯等农药的放射免疫法。但由于进行RIA需使用昂贵的计数器，存在放射性防护和废物处理等问题，其应用受到较大限制。1982年后发表的农药免疫分析文章，主要是酶免疫分析法。 2 酶免疫法(EIA) 酶免疫法(Enzyme Immunoassay,EIA)是将抗原、抗体的特异性免疫反应和酶的高效催化作用有机结合起来的一种免疫分析方法。酶免疫法的检测原理与放射免疫法类似，通过测定结合于固相的酶的活力来测定被测定物的量。用作标记物的酶有辣根过氧化物酶(HorseradishPeroxidase,HRP)和碱性磷酸酶(AlkalinePhosphatase)。酶标试剂制备容易、稳定、价廉。酶免疫分析的灵敏度接近放射免疫技术，而可借助于简单的仪器作定量测定，是目前农药监测中应用最广泛的免疫分析技术。 EIA法包括酶联免疫吸附分析法(Enzyme-Linked Immunosorbent
酶联免疫法与化学发光免疫法检测AFP的比较
酶联免疫法与化学发光免疫法检测AFP的比较 发表时间：2013-05-09T17:14:22.000Z 来源：《中外健康文摘》2013年第8期供稿作者：黄海深陈志通唐光定江伟河[导读] 化学发光免疫法检测结果的稳定性，灵敏度，精密度均优于酶联免疫法 黄海深陈志通唐光定江伟河（广东省阳山县人民医院检验科 513100）【中图分类号】R446.6 【文献标识码】A【文章编号】1672-5085（2013）08-0125-02 【摘要】目的对甲胎蛋白(AFP)试验进行方法学探讨。方法①对比实验用酶联免疫法和化学发光免疫法同时测定88例临床送检血清标本甲胎蛋白(AFP)的含量。②线性实验将标准液按不同的浓度稀释后做线性实验。③精密度实验用两法对低、中、高值质控品分别进行精密度实验。结果①结果表明，两法无显著差异(P＞0.05)，相关系数r＝0.995，提示两法呈良好相关性。②线性实验显示酶联免疫法和化学发光免疫法分别在5～400 ng/ml和2～900 ng/ml范围内呈良好的线性关系。③精密度实验表明化学发光重复性好于酶联免疫法,特别是病理高值化学发光明显优于酶联免疫法。结论化学发光免疫法的精密度和准确性均优于酶联免疫法。【关键词】酶联免疫法化学发光免疫法甲胎蛋白比较【Abstract】 Object: The methodology investigate of Alpha-fetoprotein (AFP) test. Methods: ①Comparative experiments: The simultaneous determination of the serum samples of 88 patients censorship alpha-fetoprotein (AFP) levels by ELISA and chemiluminescent immunoassay. ②Linear experiments: the standard solution is diluted at different concentrations,then doing linear experiments.③Precision experiments: Doing precision experiments on low, medium and high-value quality control materials with the two methods. Results: ①The results show that no significant difference in the two methods(P＞0.05). The correlation coefficient of r = 0.995, these two methods showed a good correlation. ②The linear experiments show that the enzyme linked immunosorbent assay and chemiluminescence immunoassay showed a good linear relationship between the range in 5～400ng/ml and 2～900ng/ml.③Precision experiments show that the repeatability of chemiluminescent immunoassay is better than the enzyme-linked immunosorbent assay, specifically at the pathological high value. Conclusion: The precision and accuracy of the chemiluminescent immunoassay are better than enzyme linked immunosorbent assay. 【Key words】 ELISA Chemiluminescent immunoassay Alpha-fetoprotein Comparison 甲胎蛋白（AFP）是哺乳动物胚胎期肝脏卵黄囊合成的一种糖蛋白，是辅助诊断原发性肝癌最常用的检测指标。临床上检测AFP的方法主要有放射免疫法(RIA)、酶免疫法(EIA)、酶联免疫法(ELISA)、荧光免疫法(FIA)、化学发光分析法(ECLIA)等，而近年发展起来的化学发光免疫法因其快速、精确、重现性好及试剂安全无毒的特点，显示出很好的应用前景［1］。酶联免疫法定性检测AFP以其快速、简便、实效的优势在各级医院应用较广。这两种方法临床常用，为进一步了解化学发光免疫法的特点，本文报告用酶联免疫法和化学发光免疫法对比检测88例临床血清标本中AFP的含量，并对结果进行统计分析和比较。 1 材料与方法 1.1材料 1.1.1研究对象：随机抽取88例临床送检血清标本。 1.1.2仪器: 深圳雷杜生命科学股份有限公司RT6100酶标仪，郑州安图生物工程有限公司生产的LUMO化学发光仪。 1.1.3试剂: ①郑州安图生物工程有限公司生产的甲胎蛋白(AFP)测定试剂盒（酶联免疫法） ②郑州安图生物工程有限公司生产的甲胎蛋白(AFP)测定试剂盒（化学发光免疫法） 1.2方法 1.2.1酶联免疫法测定甲胎蛋白(AFP)的操作方法见试剂说明书。 1.2.2化学发光免疫法测定甲胎蛋白(AFP)的操作方法见试剂说明书。 2 结果 2.1 线性实验将标准液按不同的浓度稀释后做线性实验，结果显示酶联免疫法和化学发光免疫法分别在5～400ng/mL和2～900ng/mL 范围内呈良好线性关系。 2.2 对比实验用酶联免疫法和化学发光免疫法同时对受检血清标本进行定量分析。结果表明，两法差异无统计学意义（p＞0.05），相关系数(r=0.995)。 表1 两种方法变异系数比较 CV% 酶联免疫法化学发光免疫法 受检血清标本 14.27 14.20 2.3 精密度实验用两法对低、中、高值质控品分别进行精密度实验。表2表明化学发光重复性好于酶联免疫法,特别是病理高值化学发光明显优于酶联免疫法。 表2 两种方法的精密度对比 批内CV% 批间CV% 酶联免疫法化学发光免疫法酶联免疫法化学发光免疫法低值 5.38 3.30 5.68 4.55 中值 6.40 4.95 6.15 5.82 高值 12.49 6.50 13.50 6.88
酶联免疫法检测试剂注册技术审查指导原则
附件1 酶联免疫法检测试剂注册技术审查指导原则 一、前言 本指导原则主要针对酶联免疫类检测试剂的主要原材料、生产工艺及反应体系、产品质量控制等环节提出指导性技术要求。 本指导原则系对酶联免疫法检测试剂的一般要求，申请人应依据产品特性确定其中的具体内容是否适用，若不适用，需详细阐述其理由及相应的科学依据。 本指导原则是对申请人和审查人员的指导性文件，但不包括注册审批所涉及的行政事项，亦不作为法规强制执行，如果有能够满足相关法规要求的其他方法，也可以采用，但是需要提供详细的研究资料和验证资料。应在遵循相关法规的前提下使用本指导原则。 本指导原则是在现行法规和标准体系以及当前认知水平下制订的，随着法规和标准的不断完善、科学技术的不断发展，其相关内容也将进行适时的调整。 二、适用范围 本指导原则适用于有关病原微生物检测的第三类体外诊断试剂的注册技术审查。其他酶联免疫法检测试剂（如作为二类管理的体外诊断试剂）可参考本指导原则执行。 三、基本要求 （一）基本原则 1.研制、生产用的各种原料、辅料等应制定其相应的质量标准，并应符合有关法规的要求。
2.试剂生产企业应具备相应的专业技术人员、仪器设备以及适宜的生产环境，获得《医疗器械生产许可证》；同时，应按照《体外诊断试剂生产实施细则（试行）》的要求建立相应的质量管理体系，形成文件和记录，加以实施并保持有效运行；还应通过《体外诊断试剂生产企业质量管理体系考核评定标准（试行）》的考核。企业应对试剂的使用范围做出明确规定，并经国家药品监督管理部门批准。 3.诊断试剂的研制应当按照科学、规范的原则，各反应条件的选择和确定应符合基本的科学原理。 4.试剂在研制、生产过程中所用的各种材料及工艺，应充分考虑可能涉及的安全性方面的事宜。 5.生产和质量控制的总体目标：保证试剂使用安全、质量稳定、工艺可控、检测有效。 （二）原材料质量控制 1.主要生物原料 与产品质量最密切相关的生物原料主要包括各种天然抗原、重组抗原、单克隆抗体、多克隆抗体以及多肽类、激素类等生物原科。这类原料可用于包被酶标反应板、标记相关酶（如辣根过氧化物酶、碱性磷酸酶等）、中和反应用抗原或抗体、制备校准品（标准品）等。使用前应按照工艺要求对这类生物原料进行质量检验，以保证其达到规定的质量标准。主要生物原料若为企业自己生产，其工艺必须相对稳定；若购买，其供应商要求相对固定，不能随意变更供应商，如果主要原料（包括工艺）或其供应商有变更，应依据国家相关法规的要求进行变更申请。 主要生物原料的常规检验项目一般包括： （1）外观 肉眼观察，大部分生物原料为澄清均一的液体，不含异物、浑浊或摇不散的沉淀或颗粒；或者为白色粉末，不含其他颜色的杂质；特殊生
胶体金法与酶联免疫法相结合快速检测克伦特罗
胶体金法与酶联免疫法相结合 快速检测克伦特罗 苏存举,陈福生3,高志贤3①,苗颂②,刘楠①,冯屹 (华中农业大学食品科技学院,武汉430070) 摘要:目的研究胶体金免疫层析法(GIC A)与酶联免疫吸附法(E LIS A)相结合,以建立对饲养、屠宰、流通各环节的畜尿克伦特罗(Clenbutero1,C L)定性和定量检测的方法。方法用柠檬酸三钠还原氯金酸,制备20nm粒径的胶体金,胶体金标记单抗后喷涂到玻璃纤维膜上,特异性抗原(C L2BS A)以线状包被在硝酸纤维素膜上,制成快速检测试纸条。用E LIS A进行定量。结果对 G C2MS不确定的36份阴性样品和24份阳性样品用GIC A方法检测,其阴性符合率为97%,阳性 符合率为96%。同样样品用E LIS A方法检测,其符合率为100%。最低检测限为5.0ng/m L;用GIC A法只需在试纸条上滴加4～5滴样液5～10min就可出结果;在2个月的随机抽查中,试纸条的检测结果没有变化。结论本方法准确性高、稳定性好,操作过程简单,适合于作现场大规模、高通量检测。因此本方法具有广泛的应用及推广价值。 关键词: 胶体金; 克伦特罗; 酶联免疫吸附法 中图分类号:R155.5 文献标识码:A 文章编号:1001-5248(2008)03-0176-04 克伦特罗(Clenbutero1,C L)俗称“瘦肉精”,是β2肾2上腺受体激动剂。在家畜养殖中加入C L可以提高瘦肉率或者加速动物的生长。C L作为药物使用时可以治疗哮喘等疾病,但是如果用作家畜生长调节剂,其剂量通常是治疗疾病剂量的5～10倍,这样就可能残留于食品中而引起人体的不良反应,主要包括心跳过快和四肢肌肉颤动等中枢神经中毒后的失控症状,甚至导致死亡〔1〕。目前已有多种方法用于对C L的残留分析,主要包括酶联免疫检测法(E LIS A)、高效液相色谱法(HP LC)、气相色谱2质谱联用法(G C2MS)、液相色谱2质谱联用法(LC2MS)等,主要是依靠特殊仪器进行分析,不能适应市场监督需要快速、简便、价廉的要求。而E LIS A分析法操作简便、检测快捷、灵敏度高、特异性强,适用基层日常应用〔2〕。胶体金免疫层析法(GIC A)解决了以往在现场不能进行快速和定性检测的难题。因此, 基金项目:国家科技支撑计划(2006BAK02A09) 天津市科技攻关基金项目课题(N o.06VFG ZSH02200) 作者简介:苏存举(1981-),男,硕士研究生。从事食品安全快速检测研究。 3通讯作者 ①军事医学科学院卫生学环境医学研究所 ②山东大学将E LIS A和GIC A相结合应用于C L筛选检测已成为各地开展C L检测工作的主要技术手段。 1 材料与方法 1.1 材料 氯金酸为上海化学试剂厂产品;克伦特罗标准品为Sigma公司产品;克伦特罗单克隆抗体为浙江台州金芯生物工程公司产品;硝酸纤维膜(NC)、玻璃纤维膜、吸水纸、PVC背板均为美国Mill2 pore公司产品;克伦特罗检测试剂盒为江苏微生物研究所产品;其他试剂为国产分析纯。 1.2 仪器 紫外可见光分光光度计,Du2530型, Beckman公司;透射电镜,H27500型,日本HIT ACHI 公司;原子力显微镜,SPM29500型,日本岛津公司;磁力恒温搅拌器,79.3型,上海市曹行无线电元件厂;点膜机,Bio2Dot公司;普通离心机,TG L21613型,上海安亭科学仪器公司;纯水制备装置,AS D型,军事医学科学院卫生装备研究所。 1.3 方法 1.3.1 胶体金的制备 按照文献〔324〕采用柠檬酸三钠还原法制备20nm胶体金颗粒〔5〕。取0.01%氯金酸水溶液100m L,用恒温电磁搅拌器加热至沸腾,一次性加入l%柠檬酸三钠水溶液 2.52m L,再加热
化学发光免疫分析法与酶联免疫法检测艾滋病抗体结果比较
化学发光免疫分析法与酶联免疫法检测艾滋病抗体结果比较摘要】目的：分别通过化学发光免疫分析法（CLIA）和酶联免疫法（ELISA）对 艾滋病抗体情况进行检测，对两种方法的检测结果进行比较，从而分析两种方法 的检测价值。方法：2017—2018年在我院进行HIV抗原抗体筛查的人员，包括有 创性诊疗操作前、输血前、孕产妇、门诊、体检等自愿筛查的288名艾滋病高危 患者的血清进行检查。结果：CLIA检测阳性率为95.83%，ELISA检测阳性率为 89.93%，两组检测方法阳性率比较，差异显著（P＜0.05）。结论：CLIA检测阳性率高于ELISA，但两方法各有优缺点，因此，临床中可以将两种方法进行结合检测。 【关键词】化学分光免疫分析法；酶联免疫法；艾滋病抗体 【中图分类号】R512.91 【文献标识码】A 【文章编号】2095-1752（2019）12-0038-02 A contrast study of chemiluminescence immunoassay and enzyme-linked immunoassay for detecting HIV antibody He Hua1,Sun Hongmei2(Corresponding author). 1 Department of Blood Transfusion,No.1 Affiliated Southwest Hospital of Military Medical University,Chongqing 400038,China; 2 Chongqing Angel's Obstetrics and Gynecology Hospital,Chongqing 401120,China 【Abstract】Objective To compare the results of chemiluminescence immunoassay (CLIA) and enzyme-linked immunosorbent assay (ELISA) for HIV antibody detection, and to analyze the value of the two methods. Methods From 2017 to 2018, serum of 288 HIV high-risk patients who underwent HIV antigen antibody screening in our hospital, including those who were screened voluntarily before invasive diagnosis and treatment, before blood transfusion, maternal, outpatient and physical examination, were examined.Results The positive rate of CLIA and ELISA was 95.83% and 89.93%, respectively.Conclusion CLIA has a higher positive rate than ELISA, but both methods have their own advantages and disadvantages. Therefore, the two methods can be combined for clinical detection. 【Key words】Chemical spectroscopic immunoassay;Enzyme-linked immunosorbent assay;AIDS antibody 艾滋病是一种对人类生命安全造成严重威胁的传染性疾病，该病属于一种免 疫系统缺陷疾病，艾滋病是由HIV病毒（人类免疫缺陷病毒）所引起的疾病，临 床中通过对患者血清中的HIV抗体的检测诊断艾滋病。但是，检测方法的准确度 也不尽相同，酶联免疫法（ELISA）是一种传统的艾滋病抗体的检测方法，化学发 光免疫分析法（CLIA）是一种新兴的检测方法，本次研究，笔者分别通过两种方 法对艾滋病抗体进行检测，分析阳性情况，从而对两种方法的检测价值进行评价，现报道如下。 1.资料与方法 1.1 一般资料 对2017年1月—2018年12月到我院进行自查的288名艾滋病高危患者进行 检查，患者中男性205例，女性83例，最小年龄16岁，最大年龄78岁，平均 年龄（46.21±2.0）岁，所有患者均在保证书上签署姓名，实验之前上报我院伦理 委员会，并得到批准。 1.2 方法
泛素-蛋白酶体与蛋白酶体抑制剂
泛素-蛋白酶体及其抑制剂 沈子珒许啸声李稻审校 上海交通大学医学院病理生理学教研室 摘要：蛋白酶体与泛素化信号系统一起构成的泛素—蛋白酶体（UPP）是哺乳动物细胞内主要的蛋白水解酶体系，参与和调控细胞的增殖、分化和凋亡。蛋白酶体是一个由20S 催化颗粒、11S调控因子和2个19S调节颗粒组成的ATP依赖性蛋白水解酶复合体。蛋白酶体的活性状态对细胞功能正常维持是非常重要的。26S蛋白酶体对蛋白的降解依赖于靶蛋白的泛素化和泛素化蛋白识别。蛋白酶体抑制剂能通过抑制蛋白酶体活性进而干扰和影响细胞原有的功能，尤其对肿瘤细胞生长有明显的抑制作用。同时，利用蛋白酶体抑制剂改变蛋白酶体的酶切位点活性也成为免疫、炎症等研究的热点。蛋白酶体的抑制剂可分为天然化合物和合成化合物两类，其中Bonezomib（Velcade，PS-341）是近年研究较多的一种蛋白酶体抑制剂。 关键词：肿瘤蛋白酶体泛素蛋白酶体抑制剂PS-341 泛素—蛋白酶体通路（Ubiquitin–proteasome pathway，UPP）的蛋白酶体（proteasome）是一种具有多个亚单位组成的蛋白酶复合体，蛋白酶体沉降系数为26S，故又称26S蛋白酶体。蛋白酶体水解蛋白的前提是靶蛋白的泛素化。在UPP中，各种靶蛋白质泛素化后，先被26S蛋白酶体的19S亚单位识别，随后泛素化靶蛋白脱泛素链和变性，进入20S亚单位的筒状结构内被降解成3~22个多肽。由于蛋白酶体具有精确降解细胞内各种目的靶蛋白，进而参与基因转录和细胞周期调节，以及受体胞吞、抗原呈递等各种细胞生理过程[1]。因此，应用蛋白酶体抑制剂改变其酶切位点活性已成为抗肿瘤治疗的研究热点，蛋白酶体是影响和改变细胞功能重要的目的靶标。 1．蛋白酶体组成 1979年，Goldberg等首先报道在大鼠肝脏和网织红细胞中存在一种分子质量为700 kD的受A TP激活的中性蛋白水解酶。此后，一些在形态、功能及免疫学特征上与之相同的颗粒通过不同途径被分离出来，被统一命名为蛋白酶体[2]。在真核生物进化中，蛋白酶体具有高度的保守性，其简单形式甚至存在于古细菌和真细菌中。真核细胞内的蛋白酶体分布于胞质与胞核内，有的与内质网或细胞骨架相结合，约占细胞蛋白质总量的1％。有功能的26S蛋白酶体是由20S催化颗粒（catalytic particle, CP）、11S调控因子（11S regulator）和2个19S调节颗粒（regulatory particle, RP）组成，其分子量为2.4MD，是ATP依赖性蛋白水解酶复合体。 1．120S催化颗粒（20S CP） 人类蛋白酶体CP的沉降系数为20S，分子量700~750kD。它由α环和β环组成，每个环各有7个相同的亚单位，分别以α1-7β1-7β1-7α1-7顺序排列成圆桶状结构，20S CP中间由两个β亚单位环组成。几乎所有β亚单位都含有一个N 端前导序列，尽管此序列在20S CP装配过程中被切除，但在引导真核生物β亚单位的正确折叠以及β与α亚单位的组装中有重要作用[3]。当β亚单位的N端前导序列被切除后，Thr残基被暴露出来，Thr是酶的活性位点，分别存在于β环的内表面，使β亚单位具有类似的丝氨酸蛋白酶的催化作用[4]。例如，β亚单位N端的折叠方式允许Thr的-OH对底物发动亲核反应形成半缩醛，而Thr的α-NH3可代替丝氨酸蛋白酶中His的咪唑基作为质子受体。此外，活性位点附近的一个Lys残基与特定的丝氨酸蛋白酶中一样，也起着催化剂的作用。目前认为，在20S CP内起催化作用的亚单位主要是β1、β2、β5。不同的β亚单位的催化活性尽管不同，但能互相协调使蛋白酶体具有多种蛋白酶活性，如类糜蛋白酶活性(chymotrypsin-like, ChTL)、类胰蛋白酶活性（trypsin-like，TL）、肽-谷氨酰肽水解酶活性（post-glutamyl-peptide hydrolyzing，PGPH）、支链氨基酸肽酶活性、中性氨基酸切割活性。在20S CP圆桶状的两端由α亚单位环组形成，环口的中央被α亚单位(α
乙肝病毒血清学检验采用化学发光法与酶联免疫法的效果对比 闫桂敏
乙肝病毒血清学检验采用化学发光法与酶联免疫法的效果对比闫桂敏 发表时间：2018-11-21T09:53:06.807Z 来源：《世界复合医学》2018年第09期作者：闫桂敏 [导读] 乙肝病毒血清学检验，采用化学发光法检验结果阳性率高，提高临床对乙肝患者确诊率，能够准确地对乙肝患者进行定性与定量检测，值得在临床上进行推广应用。 哈尔滨市传染病院黑龙江哈尔滨 150030 摘要：目的：研究应用乙肝病毒血清学检验采用化学发光法与酶联免疫法的效果对比。方法：选取2018年1月-2018年5月我院门诊以及住院患者中疑似乙肝患者64例作为研究对象。采集空腹静脉血，分别进行化学发光检测法和酶联免疫检测法，观察并对比两种检测方法阳性检出率。结果：采用化学发光法检测的32例疑似乙肝患者中，阳性乙肝患者为17例，阴性患者为15例，化学发光法阳性检出率为51%，显著高于酶联免疫法的36%，差异有统计学意义（P＜0.05）。结论：乙肝病毒血清学检验，采用化学发光法检验结果阳性率高，提高临床对乙肝患者确诊率，能够准确地对乙肝患者进行定性与定量检测，值得在临床上进行推广应用。 关键词：乙肝病毒血清学检验；化学发光法；酶联免疫法 Comparison of the effects of chemiluminescence and enzyme-linked immunosorbent assay on hepatitis B virus serological test OBJECTIVE: To compare the effects of chemiluminescence and enzyme-linked immunosorbent assay (ELISA) on the serological test of hepatitis B virus. METHODS: Sixty-four patients with suspected hepatitis B in our outpatient clinic and inpatients from January 20 to 2018 were selected as subjects. Fasting venous blood was collected, and chemiluminescence detection and enzyme-linked immunosorbent assay were performed respectively. The positive detection rates of the two detection methods were observed and compared. RESULTS: Of the 32 suspected hepatitis B patients detected by chemiluminescence, 17 were positive for hepatitis B and 15 were negative. The positive rate of chemiluminescence was 51%, which was significantly higher than 36% of enzyme-linked immunosorbent assay. The difference was statistically significant (P<0.05). Conclusion: Hepatitis B virus serological test, using chemiluminescence test results, high positive rate, improve the clinical diagnosis of hepatitis B patients, can accurately and qualitatively and quantitatively detect hepatitis B patients, it is worthy of clinical application. Key words: hepatitis B virus serological test; chemiluminescence method; enzyme-linked immunosorbent assay 乙型肝炎是慢性传染性疾病之一，是肝癌等肝脏疾病的危险因素之一。我国是乙型肝炎感染人数较多的国家之一，对于我国居民的正常生活有着一定的恶劣影响，因此对其进行及早的治疗有着一定的重要意义。乙型肝炎病毒感染后，无特效药物和治疗方法彻底清除病毒，患者患病后为终身带有病毒。所以，要及时控制乙肝感染率。临床检验应用酶联免疫法和化学发光法检测血清中的乙肝病毒，本文对两种方法检出率进行比较，现报道如： 1.资料与方法 1.1 一般资料 选取2018年1月-2018年5月我院门诊以及住院患者中疑似乙肝患者64例作为研究对象。其中男性患者为34例，女性患者为30例；年龄为20-56岁，平均年龄43岁。将64例患者随机地分为两组，每组均含有32例患者，其中一组选择化学发光法进行乙肝病毒血清学检验，另一组患者选择酶联免疫法进行分析，得出两组患者的阳性检出率，以此作为对比分析两种治疗方法的效果。 1.2方法 所有患者清晨空腹，两只真空管分别采集静脉血 4 mL，高速离心分离血清备用。其中化学发光法使用罗氏Cobas601全自动电化学发光免疫分析系统，检测患者血清，检测结果由检验医师核对后汇报分析；酶联免疫法则使用双抗体夹心法手动操作，使用乙肝表面抗原检测试剂盒，取出试剂盒常温放置30 min，设置空白对照孔、阳性对照孔和阴性对照孔各1个，加入阳性对照、阴性对照标准液或待测样本50μL，加入特异性酶50 μL，封膜，振荡器混匀30 s，37℃水浴箱孵育60 min，洗反应板，加入底物A、B液各1滴，37℃避光孵育15 min，加入终止液1滴。 1.3 统计学方法 本次研究所涉及的相关数据均采用SPSS 19.0统计学软件进行分析，计数资料以百分数（%）表示，采用x2 检验，以P＜0.05为差异有统计学意义。 2.结果 化学发光法阳性检出率为51%，显著高于酶联免疫法的36%，差异有统计学意义（P＜0.05）。化学发光法检测乙肝病毒的准确性为90%，相较于酶联免疫法75%的准确性更加具有可行度，因而在乙肝病毒的检测中使用化学发光法可以得出更加准确的结果，使乙肝病毒患者能够拥有更加具体的检查，在治疗过程中能够及时地开展相关工作，加快乙肝患者的痊愈速度。 3.讨论 目前，乙型肝炎无根治药物和方案。我国乙肝病毒表面抗原携带者占9%，部分患者感染该病毒后，可产生针对乙肝表面抗原的特异性抗体。临床诊断乙肝病毒感染主要是检测乙肝表面抗原、乙肝表面抗原抗体、乙肝病毒核心抗原、乙肝病毒核心抗原抗体等，通常称为“乙肝两对半检测”。本次研究中，化学发光法阳性检出率为51%，显著高于酶联免疫法的36%，差异有统计学意义（P＜0.05）。临床常用酶联免疫法进行定性试验，价格低、操作简便、容易推广和开展。但是酶联免疫法不能进行定量分析，而且操作水平的差异使得假阳性发生率较高。化学发光法能够定性检测的同时进行定量分析，由仪器统一加试剂，降低系统误差，假阳性和假阴性发生率低。本次研究中未发生假阳性和假阴性结果，结果可信。综上所述，乙肝病毒血清学检测使用化学发光法和酶联免疫法均具有一定可行性。其中，化学发光
酶联免疫分析法
酶联免疫分析法 生工121 徐娜 酶联免疫分析法是目前分析化学领域中的前沿课题，它是一种特殊的试剂分析方法，是在免疫酶技术的基础上发展起来的一种新型的免疫测定技术，特别是在食品和饲料中有毒有害物质的检测应用极为广泛。 酶联免疫分析法是把抗原抗体的免疫反应和酶的高效催化作用原理有机地结合起来的一种检测技术。该技术的原理主要有三点：第一、抗原或抗体能结合到固相载体的表面仍具有其免役活性；第二、抗体或抗原与酶结合所形成的结合物仍保持免疫活性和酶的活性；第三，结合物与相应的抗原或抗体反应后，结合的酶仍能催化底物生成有色物质，而颜色的深浅可定量抗体或抗原的含量。 酶联免疫法在医药、食品加工业、农牧渔业等领域有着广泛的应用：如乙型肝炎、莱姆病，急性心肌梗死的早期诊断，定量检测内毒素，HIV抗体初筛，SARS 病毒的快速检测；检测食品中的病毒，残留农药，微生物及其其它成分；检测香蕉有关病毒，小麦黄花叶病毒，检测水产品中氯霉素的残留量，禽脑脊髓抗体等。 一、医学临床中的应用 医学中，检测各种抗原和抗体，为临床疾病的辅助诊断和早期诊断提供了特异性、敏感性强的试验基础。 1、乙型肝炎、原发性肝癌的血清学检测：用血清学方法检测肝炎病毒的抗原或抗体，一直受到各级医疗卫生机构检验科室的高度重视。尤其是对乙型肝炎，甲型肝炎，丙型肝炎的血清学检测，更因为试剂盒的推出而得到广泛开展。上述各种肝炎病毒抗原或抗体的检测方法，绝大部分都是酶联免疫分析法。 2、简化莱姆病的诊断：由于在作出博氏疏螺旋体感染诊断前要进行双重测试，因此莱姆病的测试可能花费很长时间。采用由关键的疏螺旋体抗原决定簇构成的重组蛋白开发出一种新的酶联免疫测定方法。该测试比最常用的商业全细胞酶联免疫测定法特异，而敏感性相同，并且在20分钟就会产生结果。 3、急性心肌梗死的早期诊断：急性心肌梗死为一多发病，病情严重。目前对此病的策略是尽早的确诊并迅速积极的治疗。约有四分之一或更多的患者，在初诊时心电图并不显示典型心肌梗死心电图异常，无Q波。心肌坏死时释放出的Mb可直接快速血液循环。Mb是最早出现的心肌梗死生化标志物，但它在血中滞留时间短。为此，刘宏伟等研制出只需30分钟的酶联免疫快速法，为早期诊断心肌梗死提供了依据。 4、定量检测内毒素：临床上，细菌感染的患者常发生内毒素血症，死亡率高达20%——30%，检测标本中的LPS对早期诊断和防治有重要意义。用优化后的双抗体夹心法检测LPS敏感性为50ng/L,特异性与准确性均高于仪器比浊法和试验定性法。此为内毒素血症提供了一种简便，快速，准确，特异性的诊断参考。 5、快速检测SARS病毒：SARS病毒引起传染性非典型肺炎，发病快，传染性强。2003年4月，北京基因组研究所与军事医学科学院研制出诊断非典的酶联免疫分析法检测试剂，为控制疫情蔓延提供了新的诊断手段。 二、在食品分析中的应用 1、检测食品中的毒素：采用辣根过氧化氢酶标记高亲和力的黄曲霉素B1抗体，建立了直接竞争抑制酶联免疫快速筛选法。该法检测B1抗体的线性范围
抗链球菌溶血素“O”IgG IgM抗体检测试剂盒(酶联免疫法)产品技术要求limi
抗链球菌溶血素“O”IgG/IgM抗体检测试剂盒（酶联免疫法） 适用范围：用于体外定性检测人血清中的抗链球菌溶血素“O”IgG/IgM抗体水平。 1. 产品型号/规格及其划分说明 1.1 产品规格 48人份/盒 1.2 组成及成分 表1. 抗链球菌溶血素“O”IgG/IgM抗体检测试剂盒（酶联免疫法）组成成分
2．性能指标 2.1 外观 2.1.1 试剂盒各组份齐全、完整。标识应清晰、易识别。液体试剂透明、无渗漏、无沉淀或絮状悬浮物。 2.1.2 抗原包被板包装袋应密封性好，无破损、无漏气现象。 2.2 净含量 各液体组份的净含量不少于标示值。 2.3 临界值 2.3.1 对ASO IgG临界值阳性参考品（A值为0.35）检测，检测次数≥20，结果的阳性率应≥95%。 2.3.2 对ASO IgG临界值阴性参考品（A值为0.15）检测，检测次数≥20，结果的阴性率应≥95%。 2.3.3 对ASO IgM临界值阳性参考品（A值为0.35）检测，检测次数≥20，结果的阳性率应≥95%。 2.3.4 对ASO IgM临界值阴性参考品（A值为0.15）检测，检测次数≥20，结果的阴性率应≥95%。
2.4 S/CO值重复性 2.4.1 对ASO IgG重复性参考品（A值为0.60）检测20次，变异系数CV≤15%。 2.4.2 对ASO IgM重复性参考品（A值为0.60）检测20次，变异系数CV≤15%。 2.5 批间差 抽取三个批次的试剂盒，每个批次80人份，按2.3项临界值的要求检测，各浓度反应结果应一致。 2.6 效期稳定性 试剂盒在规定的贮存条件下保存至有效期末或超过有效期二周内进行检测，检测结果应符合2.3、2.4项的要求。
泛素-蛋白酶体通路与癌症关系的研究进展
泛素-蛋白酶体通路与癌症关系的研究进展 张海满 （山东农业大学生命科学学院山东泰安201018） 摘要：泛素化过程是真核细胞内重要的蛋白质质控系统，参与细胞的多种生理活动过程，对维持细胞正常的生理功能具有十分重要的意义。泛素-蛋白酶体途径（UPP）的异常改变不仅与癌症的病因学有着直接关素，并且与癌症的发展和预后有着密切的关系。本文综述了泛素的构成、泛素链的形成过程、UPP的生理和病理功能及UPP与癌症的关系的研究进展。 关键词：泛素-蛋白酶体通路；UPP；癌症；研究 细胞内蛋白质的产生和降解必须保持着动态平衡，才能维持细胞的稳态和正常功能。泛素-蛋白酶体途径( ubiquitin-pro-teasome pathway, UPP)是细胞内蛋白质选择性降解的重要途径，泛素分子主要通过泛素活化酶、泛素结合酶和泛素-蛋白连接酶与靶蛋白结合形成一条多泛素链，将底物蛋白泛素化，使靶蛋白被26S蛋白酶体所识别和降解。UPP可高效并高选择性地降解细胞内蛋白质，尤其是一些短寿命的细胞周期调节蛋白、癌基因和抑癌基因产物以及变性变构蛋白等。 1.泛素-蛋白酶体途径（UPP）的构成 UPP成分十分复杂，主要包括泛素( ubiquitin, Ub)、泛素活化酶( ubiquitin-activatingenzyme, E1)、泛素连接酶( ubiquitin-conjugatingenzyme, E2)、泛素蛋白连接酶( ubiquitin-protein ligating enzyme, E3)、26S蛋白酶体及去泛素化酶( deubiquitinating enzyme, DUBs)等。UPP存在于所有真核生物的细胞内，是蛋白质选择性降解的主要方式。 1.1泛素( ubiquitin, Ub) 泛素是一种广泛分布在真核细胞中的高度保守的小分子球状蛋白质。1975年由Goldstein首次提出，此后不断出现有关报道[1]。单个泛素分子由76个氨基酸残基组成，相对分子质量约8.5×103，有一个明显的疏水核心和大量的氢键，表现出特殊的稳定性，能够防止其自身在结合和靶向性降解循环中变性失活，从而保证泛素循环的进行。依赖于ATP的酶促反应，E1通过在Ub的羧基末端和E1自身激活位点半胱氨酸之间形成一个硫酯键而激活Ub，激活的Ub被转到E2结合酶上，然后E2在E3作用下共价结合到需要降解的胞质或胞核的蛋白上，使底物蛋白发生泛素化，形成Ub单体，多个Ub单体通过异肽键连接形成多聚Ub链，每个多聚Ub链至少含有4个Ub单体。 1.2泛素活化酶( ubiquitin-activating enzymes, E1) 泛素活化酶是单基因编码的相对分子质量分别为110×103和117×103的2个亚基，存在于细胞核
克伦特罗酶联免疫定量检测试剂盒I
克伦特罗酶联免疫定量检测试剂盒（I） 使用说明书 概述： 克伦特罗(Clenbuterol)属于一类β-兴奋剂，具有改进脂肪型动物体内肉与脂肪的比例的作用，亦可促进动物生长。但同时，此药物还会使非横纹肌松弛，人体摄入后可引起心跳、心率不正常等副反应，甚至可导致心脏病。因此在我国，克伦特罗在畜牧业上的使用是被严格禁止的。 本试剂盒利用竞争酶联免疫法对生物样品中的克伦特罗进行定量分析。适用于动物尿液、血清、内脏等物质中克伦特罗的快速检测。由于ELISA法的高通量与简便快速，适合大量样本的定量筛查，自样本加入至结果读出，不超过60分钟，检测灵敏度为0.1ppb。 一、简要原理 试剂盒所提供的微孔板上包被有抗体，然后将校准品或样本中的克伦特罗与酶标记的克伦特罗加入微孔中后，两者可竞争结合克伦特罗抗体，洗去未结合的酶标记克伦特罗。加入底物后，在酶作用下，底物溶液会显蓝色，加入终止剂后，溶液由蓝转为金黄色。在450nm波长光下测吸光度，吸光度高低与校准品或样品中克伦特罗的含量呈反比，根据校准品的读数作出校准曲线，并利用校准曲线计算出样品中克伦特罗的含量。 二、试剂盒组成 1.酶标反应板： 96孔易折板，抗体已包被 2.克伦特罗校准品： 1ml/瓶×6瓶浓度：0ppb、0.1ppb、0.3ppb、0.9ppb、2.7ppb、8.1ppb 3.11×酶标记克伦特罗浓缩液： 1.2ml/瓶×1瓶(稀释11倍使用) 4.底物液： 11ml/瓶×1瓶 5.酶标稀释液： 20ml/瓶×1瓶 6.50×浓缩洗涤液： 20ml/瓶×1瓶(稀释50倍使用) 7.终止剂： 11ml/瓶×1瓶 8.其他：说明书×1份自封袋×1个 2-8℃贮存，有效期一年 三、实验需要但试剂盒不提供的试剂和仪器 1.试剂 ――――――10mM盐酸溶液 ――――――氯化钠 ――――――50mM PH7.0 PBS (配制:9g NaCl；4.65g Na2HPO4·12H2O；0.56g NaH2PO4·2H2O 溶解于1000ml蒸馏水中) ――――――异丙醇 ――――――乙酸乙酯 2 .仪器 ――――――微孔板酶标仪 ――――――涡旋振荡器或超声波粉碎仪 ――――――离心机
化学发光与酶联免疫检测血清甲胎蛋白的比较(精)
化学发光与酶联免疫检测血清甲胎蛋白的比较 颜多清 442400湖南桂阳县人民医院检验科 摘要目的：化学发光与酶联免疫检测血清甲胎蛋白的比较。方法：化学发光法、酶联免疫法，按仪器操作手册各用配套试剂测定质控品。结果：线性实验：化学发光检测更宽；精密度试验：化学发光的重复性较酶联免役法更好。结论：化学发光法与酶联免役法之间差异无显著性，但化学发光法优点更多。 关键词甲胎蛋白线性范围精密度化学发光酶联免疫 材料和方法 标本来源：随机抽取150份临床送检血清标本，包括正常和异常标本，异常标 本中超过仪器检测范围的结果不予统计。 仪器与试剂：化学发光仪使用Bayer Centaur CP。使用原装配套试剂。酶表仪洗板机使用URANUS AE全自动酶免仪和配套洗板机，严格根据使用说明操作。 方法：按仪器操作规程操作，用配套试剂测定，数值在标定值允许的变异范围 内，接着做线性、相关性、回收率、精密度测试。 结果 线性试验：将AFP测定值在1000～1200ng/ml范围内的5份血清标本混合，反复测定5次，取其均值作为原倍血清测定值即为理论值。将此混合血清做5点倍比稀释，随机排列测定顺序，各反复测定5次，以原倍血清测定值为标准按稀释倍数算得其理论值，求两者相关性并进行回归分析。化学发光回归方程 为：Y=10235X+65594，R=09999。 酶联免疫法回归方程为：Y=06578X+38885，R=09558。化学发光法在2～900ng/ml范围内线性良好，酶联免疫法在5～400ng/ml范围内线性良好， 可见化学发光免疫法的检测范围更宽，更能充分满足临床要求。 相关性试验：用上述二种方法分别对受检血清标本进行AFP定量分析，结果表 明，二种方法差异无显著性（P>005），直线回归方程为：Y=1 0667X-05433，R=09858，提示二种方法相关性良好。 回收试验：取三种浓度的血清(1071ng/ml，1808ng/ml，46 83ng/ml)，分别用不同浓度定值血清混合，配制成浓度分别为211ng/ml， 300ng/ml，773ng/ml，278ng/ml，367ng/ml，84 0ng/ml， 538ng/ml，626ng/ml，1100ng/ml的样本，用化 学发光法与酶联免疫法测得的回收率分别为961～979和953～97 1，平均回收率为977和964。 精密度试验：采取批内和批间差异来确定。用上述二种方法分别对低、中、高值质控品进行精密度试验，每份标本连续测定20次，计算 X，S，求批内CV 值。每日测定1次，连续测定20天，计算X ，S，求批间CV值。结果表明，化学发光免疫法的重复性比酶联免疫法的更好，特别是高值化学发光明显优于酶联免疫法。见表1。