植物生理指标

1、植物酶液提取：

1)PVPP(固体,PVP单体与金属元素结合) 酚类吸附剂，酚的羟基与蛋白质

的羰基形成氢键，醌导致蛋白质聚合。或polyclarAT（Polyclar-AT is insoluble PVP, also called as PVPP (PolyVinyl PolyPyrrolidine).

It binds phenols etc more efficiently than PVP and is easily

removable by filtration or a low speed spin）去除酚的毒害防止醌

颜色干扰。PVP的肽键中的氧与酚羟基上的质子牢固结合，防止酚与酶

中肽键结合，保护了酶。

2)母液制备：0.1mol/L二硫苏糖醇DTT: 100mg至微量离心管，+650ul 水

0.5mo/L EDTA : 93gEDTANa,10g NaOH,定容到500ml

10mg/ml BSA：100mgBSA于9.5ml 水中

2、可溶性总糖测定（蒽酮比色法）

（1）原理：糖+硫酸—糠醛，其与蒽酮形成绿色络合物，620nm下显色。本实验采用浓硫酸，倒入水中产生大量热，促进反应发生。

（2）标准曲线绘制：取略大于0.01g的葡萄糖，105度烘干至恒重，取0.01g 定容至100ml，配成100ug/ml的溶液。取200mg蒽酮，溶于100ml 浓硫酸，冷却，保存于棕色瓶。（注意：不需定容，量取100ml硫酸倒入烧杯即可，定容混匀时产气热溅出。注意硫酸中是否存在杂质。蒽酮非常敏感，不能用勺等挖取，只能直接倒，否则就会污染。溶液配后呈亮黄色，放置

620nm.

实验结果：实际上并不理想，因abs均偏低，可试将标糖浓度适当升高。

葡萄糖含量ug 20 40 60 80 100

abs 0.09 0.169 0.259 0.332 0.427

3、电导率（DDS-11A）

1)接通电源前观

否指零，若有偏

差调节表头下

方凹孔，使其恰

指零。

2)接通电源，仪器预热10分钟。

3)将电极浸入去离子水中，须确保极片浸没，校正零。

4)根据数值选择量程，我选10ms

5)常数设为1

4、培养液PH测定(PHS-3C)

1)PH计在不使用时需使用KCL浸泡液浸泡，用枪从上小孔和帽注满，至

少浸泡24h。将PH4.0缓冲剂包定容至250ml,再加入56g分析纯KCL，

加热溶解。

2)仪器使用前至少预热30min.

3)首先进行定位调节、斜率调节：将测量头用蒸馏水洗后，根据所测溶液

性质不同，放入不同溶液，待示数平衡，再分别调节定位、斜率至

6.86,4.00.

5、细胞活力测定（TTC法）

1)《植物生理学通讯》TTC法测定红豆杉细胞活力刘华[1] 梅兴园[2][1]湖北

省卫生职工医学院生物教研室，湖北荆州434000 [2]华中理工大学生命科学与技术学院，武汉430074）

2)药品配置：0.4%(m/v)TTC红四氮唑溶液：0.2gTTC, 加1.5ml 95%乙醇溶解，

用蒸馏水定容至50ml。随配随用，不宜久藏，遮光，变红不可用。

3)原理：TTC氧化态为无色，被呼吸作用产生的H还原成红色的三苯基甲

4)步骤：10ml试管：2.5ml 0.4% TTC+2.5ml PH7.0 0.1mol/L PBS+0.2g鲜细胞,25

度避光13-16h,倒掉液体，以蒸馏水洗细胞三次，加5ml 95%乙醇使细胞完全脱色，70度水浴20min,以乙醇为对照，测485nm处吸光度，此数值可直接作为细胞活力的衡量标准。一般所得值1-2

6、可溶性蛋白含量测定（考马斯亮蓝G250染色）

1)原理：

2)溶液配置：

a)考马斯亮蓝溶液：100mg G250,溶于50ml 95%乙醇，加入100ml 85%(w/v)的

磷酸，定容至1000ml。于棕色瓶常温保存30天。蓝黑色过滤后形成棕褐色稀释成淡蓝色；

b)50mmol/LPBS PBS直接稀释对PH无太大影响。

c)100ug/ml标准蛋白溶液：精确称取牛血清蛋白10mg,加水定容至100ml

3)步骤：

a)标准曲线绘制：6ml反应体系，盖盖摇匀程度均一，放置反应3分钟，

测595nm处吸光度。比色在1h内完成。

b)样品测定：100ul 样品提取液

900ul 蒸馏水

5ml G250溶液

7、苯丙氨酸解氨酶PAL（陈建勋）

1)原理：PAL催化苯丙氨酸的脱氨反应，使氨释放形成反式肉桂酸，反式肉桂

酸在290nm处有重要吸收。此酶在植物体内次生物质代谢如木质素等起重要作用。

2)药品配置：PH8.8 0.1mol/L 硼酸缓冲液

0.02mol/L L-苯丙氨酸：0.330g L-苯丙氨酸,上述缓冲液定容至100ml

3)步骤：1ml 0.02mol/L L-苯丙氨酸

2ml PH8.8 0.1mol/L 硼酸缓冲液

100ul 酶液（2份ck : 100ul 提取缓冲液）

混匀，290nm处测起始OD，精确计时，30度保温30分钟后，290nm处测吸光度。以每30min 吸光度增加0.01所需酶量为1U.

4)计算：PAL活性（U/gFW）= 30min内OD差值*酶液总体积

0.1ml（酶液）*提取酶液时样品重*0.01

5）注意：

a)PAL为诱导酶，除光诱导外，切割受伤，病害感染等也能诱导此酶活性升高。

b)除直接用新鲜材料提取进行测定外，也可将诱导好的材料制成丙酮粉，然后

再提取测定。

8、过氧化氢酶CAT

德]B．施特尔马赫著．钱嘉渊译．酶的测定方法[M]．第1版．中国轻工业出版社，1992．p186-188

1)原理：CAT催化H2O2 分解，240nm处检测H2O2 减少量。CAT以PH7.0，

37度时活性最高，冷冻，阳光，氧气降低酶活。

2)药品：0.18%H2O2 ：600ul 30% H2O2 用PH7.0 PBS稀释至100ml.现配。

（一般情况下，配置的双氧水冬天两周用完，夏天一周，避光）

25度预热的蒸馏水

3)步骤：

a)为检查在不加酶的情况下吸光度是否也降低，以蒸馏水为参比，用移液

管将1.0ml底物溶液和1.9ml蒸馏水滴入一只1厘米比色皿，并调水温

至25℃。在连续5分钟内240nm处测定吸光度，若吸光度的降低幅度超

过0.01，则在计算主值时须减去此值。

b)以蒸馏水为对照，实验组：1ml0.18%H2O2 +1.9ml蒸馏水+100ul酶液，在

连续5分钟内240nm处测定吸光度。（每隔1分钟读取一次结果，直至

每分钟吸光度的降低值达到稳定为止）

c)计算：在上述条件下，每分钟酶促分解1umol过氧化氢的酶量定为1个

酶活力单位。

×3 ／0.0436×Ew

U/mg = E

240

式中：E240—240nm处每分钟内吸光度的降低值

Ew—每0.10ml所用酶液中含酶的重量（mg）

0.0436—240nm处1umol过氧化氢的吸光度

3—反应混合液的总体积。

4)注意：酶液浓度应为5-20u/ml

8、超氧化物歧化酶SOD（NBT光还原法陈建勋）

1)原理：NBT在Met和核黄素存在下，照光后发生光化还原反应生成蓝色甲

腙，蓝色甲腙在560nm处有最大光吸收。SOD能够抑制这个还原反应，抑制强度与酶活性在一定范围内成正比。

2)药品配制：

a)50mmol/L PH7.8 PBS

b)220mmol/L Met: 3.2824g Met,用50mmol/L PH7.8 PBS溶解定容至100ml.

现配现用，于4度冰箱保存1-2d.

c) 1.25mmol/L NBT（氯化硝基四氮唑兰）溶液：避光现配，0.102gNBT,用

50mmol/L PH7.8 PBS溶解定容至100ml. 于4度冰箱保存2-3d.

d)0.033mmol/L核黄素：2.52mg核黄素，用50mmol/L PH7.8 PBS溶解定容

至200ml于棕色瓶，4度冰箱保存8-10d.

3）步骤：反应总体积5ml ,两个光对照，两个暗对照

比色时终浓度每个管中：50mmol/L PH7.8 PBS 4.05ml

220mmol/L Met 300ul 13mmol/L

1.25mmol/L NBT 300ul 75umol/L

0.033mmol/L核黄素300ul 2umol/L

酶液50ul 对照以缓冲液混匀后，光对照与样品均置于4000lx日光灯（我置于3根2000lx）反应20min,保证受光一致！否则严重影响结果。以暗对照为参比，检测560nm处吸光度。4）计算：以抑制NBT光化还原的50%为一个酶活单位。

SOD总活性(u/gFW)= （光对照吸光值—样品吸收值）*酶液总体积

光对照吸光值*0.5*样品重*样液体积（此处为50ul）SOD比活力（u/mg Pro）= SOD总活性

蛋白质浓度

5）加入酶量以抑制反应的50%为最佳？

生理指标测定实验方案设计设计汇总情况情况

预测指标： 1?抗氧化酶系统、MDA 2. 可溶蛋白、超氧阴离子自由基 3. 叶绿素、类胡萝卜素 4. 可溶性糖 5. 游离氨基酸 6. 过氧化氢 7. 谷胱甘肽、ASA 1. 抗氧化酶系统、MDA A酶活测定试剂： PBS 缓冲液0.05M （pH 7.8 ）:取0.663g NaH2PO4 ? 2H2O 16.384g Na2HPO4 ? 12H2O , 加PVPIOg，并加EDTA或者EDTA盐，使其浓度为2mM，加蒸馏水定容至1L。用前冰箱或冰上预冷。样品制备鲜样0.1-0.5g加入1 ml磷酸缓冲液（0.05M , pH 7.8 ）,稍许石英砂，研磨成匀浆；移入 10 ml离心管中，再用4ml磷酸缓冲液分两次洗涤研钵并全部转入离心管中；10000 X g 4 C 下离心20 min ;上清夜贮于4 C冰箱中保存备测。同时称取鲜样一份（0.1g左右）烘干称重。试剂配制：实验步骤： 2.725mL反应液+ 250uL蒸馏水+ 25uL酶液【样品管】 2.75mL反应液+ 250uL蒸馏水（光照作为100%CK ）【照光对照管】 2.75mL反应液+ 250uL蒸馏水（黑暗作为调零）【空白调零管】 4000IX日光灯下反应20分钟，560nm比色。反应温度25~35 C。已知SOD活性单位以抑制NBT光化还原的50 %为一个酶活性单位表示按下式计算SOD 活性：SOD 总活性=（Ack —AE）*V/ （0.5*Ack*w*Vt ）（式中SOD总活性以鲜重酶单位每克表示，Ack为照光对照管的吸光度，AE为样品管的吸光度，V为样品液的总体积ml , Vt为测定时样品用量ml , w为样品鲜重g）

植物生理生化测定

2.1.8转基因植株在盐胁迫下的超氧化物歧化酶(SOD)活性测定将转基因植株与非转基因对照植株继代于含有0.5% NaCl的MS固体培养上进行胁迫培养，培养条件为27±1℃，每天13 h、3000 lux光照。胁迫培养4 w后，取其叶片测定其SOD 活性，每个样品设3次重复，求其平均数，并进行多重比较。 2.1.8.1主要试剂及配方（1）0.1 mol/l pH 7.8磷酸钠（Na2HPO4-NaH2PO4）缓冲液 A液（0.1 mol/l Na2HPO4溶液）：称取Na2HPO4·12H2O 7.163 g，用少量蒸馏水溶解后定容至200 ml，4℃冰箱中保存备用； B液（0.1 mol/l NaH2PO4溶液）：称取NaH2PO4·2H2O 0.780 g，用少量蒸馏水溶解后定容至50 ml，4℃冰箱中保存备用；取上述A液183 ml与B液17ml充分混匀后即为0.1 mol/l pH 7.8的磷酸钠缓冲液，4℃冰箱中保存备用。（2）0.026 mol/l甲硫氨酸（Met）磷酸钠缓冲液称取甲硫氨酸（C5H11NO2S）0.388 g，用少量0.1 mol/l pH 7.8的磷酸钠缓冲液溶解后，再用相同磷酸钠缓冲液定容至100 ml，现用现配，4℃冰箱中保存可用1～2 d。（3）7.5 × 10-4 mol/l NBT溶液称取NBT（C40H30Cl2N10O6）0.153 g，用少量蒸馏水溶解后，定容至250 ml，现用现配，4℃冰箱中保存可用2～3 d。（4）含1.0 μmol/l EDTA的20 μmol/l核黄素溶液 A液：称取EDTA 0.003 g，用少量蒸馏水溶解； B液：称取核黄素0.075 g，用少量蒸馏水溶解； C液：合并A液和B液，定容至100 ml，此溶液即为含0.1 mmol/l EDTA的2 mmol/l 核黄素溶液，避光保存（可用黑纸将装有该液的棕色瓶包好），4℃冰箱中可保存8～10 d，当测定SOD酶活时，将C液稀释100倍，即为含1.0 μmol/l EDTA的20 μmol/l核黄素溶液。（5）含2% PVP的0.05 mol/l pH7.8磷酸钠缓冲液取0.1 mol/l pH7.8的磷酸钠缓冲液50 ml，加入2 g PVP（聚乙烯吡咯烷酮），充分溶解后移入100 ml容量瓶中用蒸馏水定容至刻度，充分混匀，4℃冰箱中保存备用。 2.1.8.2提取及测定方法（1）称取1.0 g样品叶片于预冷的研钵中，加入4 ml预冷的提取介质（含2% PVP的0.05 mol/l pH7.8磷酸钠缓冲液），冰浴研磨匀浆，转入10 ml离心管，并用提取介质定容至

常用运动生理学实验操作流程

常用运动生理学实验操作流程体育系运动人体科学实验中心

人体安静、运动时脉搏、血压的测定 [实验目的] 了解人体动脉血压测定的原理，学会人体在安静时和运动前后脉搏及血压的测定。 [实验原理] 血压的测定，最常用的是间接法。通过使用血压计在动脉外加压，根据血管音的变化测定血压。通常血液在血管内流动时并没有声音，如果对血管施加压力，使血管腔变窄而形成血液涡流时可发生血管音。当外加压力超过动脉血压的收缩压时，受压部位的血流完全被阻挡，此时在受压部位的远侧听不到声音。当外加压力低于收缩压而高于舒张压时，血液则可断续地通过受压部位使血流形成涡流而发出声音。当继续降低压力时，且外加压力等于舒张压时，受压部位的血流由断续流动恢复到持续流动，受压部位远侧的声音则由强变弱或突然消失。因此，动脉血流刚能发出声音时的最大外加压力相当于收缩压，而动脉内血流声音突变后消失时的外加压力则相当于舒张压。正常成人安静时心率约在60—-100次/分。心率常受年龄、性别、生理状况、训练水平、体力劳动及体育运动的影响。在实践中通过测定血压、心率可了解受检查者循环系统的功能，了解运动量、运动强度、运动训练对人的影响、运动后的恢复情况、运动的密度。 [实验对象] 人体 [实验器材]

血压计、听诊器、秒表、电子节拍器 [实验步骤] 一、安静时脉搏血压的测定（一）脉搏的测定 1.扪诊法桡动脉扪诊法：在测试安静脉搏时较为方便。颞浅动脉扪诊法：位于耳前部略偏上，颞浅动脉经过此处，适合于运动后。心前区扪诊法：位于左心前区心尖部，适合于运动后。颈动脉扪诊法：位于胸锁乳头肌前、下颌角下部。 2.器械法听诊法：用听诊器在心前区直接听诊，计算心率。心率遥测仪：可准确记录运动中和运动后心率。（二）安静时动脉血压的测定。 1.将脉压带绑在被试者的上臂，其下缘应距肘关节上约2--3厘米，松紧以能放入一指为宜。 2.在肘窝内侧找到搏动点，将听诊器头紧贴肘窝肱动脉处。 3.把气球的气门旋紧打气，随脉压带内的压力升高，逐渐可以听到有节奏的“咚咚”声，继续打气等声音消失时再使压力升高20--30毫米汞柱或2--4千帕，然后旋开气门徐徐放气。 4.在放气时注意听有节奏的“咚咚”声响的第一声出现时，水银面所指示的压力即为收缩压。 5.继续放气，随压力逐渐下降，听到突然变声或声音消失时，水银面

测定各生理指标的试验方法

测定各生理指标的试验方法 1.4.1 电导率的测量(浸泡法)[5] 取大小相当的植物叶片（尽量保证叶片的完整性，少含茎节），用自来水洗净后再用蒸馏水冲洗3次，用滤纸吸干表面水分，将叶片剪成适宜长度的长条（避开主脉），快速称取鲜样，每份0.1g,分别置于10ml去离子水的刻度试管中，盖上玻璃塞置于室温下浸泡处理12h,用电导仪测定浸提液电导（R1），然后沸水浴加热30min,冷却至室温后摇匀，再次测定浸提液电导（R2）。根据公式：相对电导率=R1/R2×100% 算出电导率。 1.4.2 超氧化物歧化酶(SOD)活性的测定（氮蓝四唑法）[5] 取各株植物相同部位的叶片（去叶脉）0.5g于预冷的研钵中，加1ml预冷的磷酸缓冲液在冰浴上研磨成浆，加缓冲液使最终体积为5ml。取1.5~2ml于4000r/min 下离心10min，上清液即为SOD粗提取液。取32支试管（30支测定管，2支对照管），分别加入1.5ml0.05mol/l磷酸缓冲液、0.3ml130nmolMet溶液、0.3ml750μmol/l NBT溶液、0.3mol100μmol/l EDTA液、0.3ml20μmol/l核黄素、0.05ml酶液（其中2支对照管以缓冲液代替酶液）、0.25ml蒸馏水，混匀，将一支对照管置于暗处，其他各管于4000lx日光下反应20min（要求各管受光情况一致，温度高时缩短，低时延长）。反应结束后，以不照光的对照管做空白，分别测定其他各管的吸光度。计算公式：SOD总活性（U/g)=[(A CK -A E )×V]/(0.5×A CK ×W×Vt) 注：SOD总活性以每克样品鲜质量的酶单位表示（U/g）；A CK 为照光对照管的吸光度；A E 为样品管的吸光度；V为样品液总体积（ml）；Vt为测定时样品用量（ml）；W为样品鲜质量（g）。 1.4.3 过氧化物酶(POD)活性的测定（愈创木酚法) [5] 酶液提取：取5.0g植物叶片，洗净，剪碎，放入研钵中。加适量的磷酸缓冲液研磨成匀浆。将匀浆液全部转入离心管中，于3000rmp离心10min，上清液转入25ml容量瓶中。沉淀用5ml磷酸缓冲液再提取2次，上清液并入容量瓶中，定容至刻度，低温下保存备用。分别在各试管中加入0.05mol/l磷酸缓冲液 2.9ml,2%H2O21.0ml，0.05mol/l愈创木酚1.0ml和0.1ml酶液来制备酶活性测定

常见生理参数的测量范围

常见生理参数的测量范围三大组成部分传感器：将生理信号转换为电信号。２. 放大器和测量电路：将微弱的电信号放大、转换、调整。 3.数据处理和记录、存储、显示装置。低频电流对人体的三个作用：产生焦耳热；刺激神经、肌肉等细胞；化学效应。这些作用使组织液中的离子、大分子等粒子振动、运动和取向。在整体情况下，由感知电流造成的电击称为宏电击（0.7~1.1mA），通常指加于体表引起的电流效应。由感觉阈以下的电流所造成的电击，成为微电击，通常指电流直接加到心脏产生的电流效应临床上用双极或单极记录方法在头皮上观察皮层的电位变化，记录到的脑电波称为脑电图EEG。周期：正常值为8~12HZ 脑电图的分类：（1）α波：可在头颅枕部检测到，频率为8~13HZ，振幅为20~100uV，它是节律性脑电波中最明显的波。（2）β波：在额部和颞部最为明显，频率为18~30HZ，振幅为5~20uV，是一种快波，它的出现意味着大脑比较（3）θ波：频率为4~7HZ，振幅为10~50uV，它是在困倦时，中枢神经系统处于抑制状态时所记录的波形。（4）δ波：在睡眠，深度麻醉，缺氧或大脑有器质性病变是出现，频率是1~3.5HZ，振幅为20~200uV。根据脑电与刺激之间的时间关系，可将电位分为特异性诱发电位和非特异性诱发电位。在临床上一般只进行特异性诱发电位的检查，简称EP。EP是指中枢神经系统在感受外在或内在刺激过程中产生的生物电活动，是代表中枢神经系统在特定功能状态下的生物电活动的变化临床上常用的诱发电位有：视觉诱发电位VEP，脑干听觉诱发电位BAEP体感诱发电位SEP和事件相关电位ERP。肌电图记录的是不同机能状态下骨骼肌的电位变化肌肉的生物电活动形成的电位随时间的变化曲线称为肌电图EMG，肌电活动是一种快速的电变化，它的振幅是20uV到几个毫伏，频率为2Hz~10kH 所谓运动电位就是用来表示肌肉基本功能的单位，它是由一个运动神经元和由它所支配的肌纤维构成的，运动单位为肌肉活动的最小单位。运动神经传导速度是研究神经在传递冲动过程中的生物电活动。利用一定强度和形态的脉冲电刺激神经干，在该神经支配的肌肉上，用同心针电极或皮肤电极记录所诱发的动作电位，然后根据刺激点与记录电极之间的距离，发生肌收缩反应与脉冲刺激后间隔的潜伏时间来推算在该距离内运动神经的传导速度。临床上血压测量技术可以分为直接法和间接法两种：直接测量: 直接通过传感器在血液中测量,有创。间接测量: 测量血管壁压力,无创。常用血压计:1)水银血压计2)无液血压计3)数字式血压计直接式血压测量心导管术：用心导管从手臂的肘正中贵要静脉、下肢的大隐静脉及颈动脉、股动脉等血管的切口插入血管借助X线透视技术监视导管尖端的位置使其进入待测部位测量血压的微型传感器

植物生理生化指标测定

小黑豆相关生理指标测定 1.表型变化：鲜重、株高、主根长和叶面积鲜重：取处理好的植株，擦干根和叶表面水分，测量整株植物的重量，每个测6个重复。株高：取处理好的植株，测量从根和茎分隔处到植株最高点的高度，记录，每个测6个重复。主根长：取处理好的植株，测量从根和茎分隔处到主根最远点长度，记录，每个测6个重复。叶面积：取处理好的植株，选择第二节段的叶片，测量叶面积，叶面积测量方法是测每个叶片最宽处长度作为叶的长，测叶片最窄处长度作为叶的宽，叶片长和宽的乘积即为叶表面积。每个测6个重复。 2.总蛋白、可溶性糖、丙二醛（MDA）和H2O2含量测定样品处理：取0.5g样品（叶片要去除叶脉、根要先用清水清洗干净），速在液氮中冻存，在遇冷的研钵中加液氮研磨，然后加入1.5ml的Tris-HCl（pH7.4）抽提，将抽提液转移到2ml的EP管中，于4℃，12000rpm离心15min，取上清，保存在-20℃下，上清液可用于总蛋白、丙二醛（MDA）、可溶性糖和H2O2含量测定。总蛋白测定（Bradford法）：样品反应体系（800ul H2O+200ul Bradford+5ul 样品），空白对照为（800ul H2O+200ul Bradford）。测定后带入标准曲线Y=32.549X-0.224(Y代表蛋白含量，X代表OD595)，计算得出蛋白含量。可溶性糖测定：样品反应体系（1ml蒽酮+180ul ddH2O+20ul样品提取液）；空白对照（1ml蒽酮+180ul ddH2O），测定OD625后带入标准曲线：Y=0.0345X+0.0204(Y代表OD625，X代表可溶性糖含量（ug）) 蒽酮配方：称取100mg蒽酮溶于100ml稀硫酸（76ml浓硫酸+30mlH2O）.注意：浓硫酸加入水中时，一点一点递加，小心溅出受伤。丙二醛（MDA）测定：在酸性和高温条件下，丙二醛可与硫代巴比妥（TBA）反应生成红棕色的3,5,5-三甲基恶唑2,4-二酮，在532nm处有最大吸收波长，但该反应受可溶性糖的极大干扰，糖与TBA的反应产物在532nm处也有吸收，但其最大吸收波长在450nm处。采用双组分分光光度法，可计算出MDA含量。MDA的计算公式为：MDA（umol/L）=6.45OD532-0.56OD450. 反应体系为：400ul 0.6%TBA+350ul H2O+50ul样品，80℃水浴10min后，测OD532和OD450。对照用Tris-HCl. 0.6%TBA配方：称取硫代巴比妥0.6g，溶于少量1M NaOH中，待其完全溶解后用10%TCA（称取10gTCA三氯乙酸，溶于100ml蒸馏水中，待其溶解即可）定容至100ml。 H2O2测定（二甲酚橙法）：样品反应体系（82ul溶液A+820ul溶液B （A:B=1:10）+150ul样品提取液），30℃水浴30min，测OD560。标准曲线为:Y=0.01734X-0.0555(Y代表OD560，X代表H2O2含量)

植物生理生化指标测定(精)

小黑豆相关生理指标测定 1. 表型变化:鲜重、株高、主根长和叶面积鲜重 :取处理好的植株,擦干根和叶表面水分,测量整株植物的重量,每个测 6个重复。株高 :取处理好的植株,测量从根和茎分隔处到植株最高点的高度,记录,每个测6个重复。主根长 :取处理好的植株,测量从根和茎分隔处到主根最远点长度,记录,每个测6个重复。叶面积 :取处理好的植株,选择第二节段的叶片,测量叶面积,叶面积测量方法是测每个叶片最宽处长度作为叶的长, 测叶片最窄处长度作为叶的宽, 叶片长和宽的乘积即为叶表面积。每个测 6个重复。 2. 总蛋白、可溶性糖、丙二醛(MDA 和 H2O2含量测定样品处理:取 0.5g 样品(叶片要去除叶脉、根要先用清水清洗干净 ,速在液氮中冻存,在遇冷的研钵中加液氮研磨,然后加入 1.5ml 的 Tris-HCl (pH7.4 抽提, 将抽提液转移到 2ml 的 EP 管中, 于 4℃, 12000rpm 离心 15min , 取上清, 保存在 -20℃下,上清液可用于总蛋白、丙二醛(MDA 、可溶性糖和 H2O2含量测定。总蛋白测定(Bradford 法 :样品反应体系(800ul H2O+200ul Bradford+5ul样品 , 空白对照为(800ul H2O+200ul Bradford 。测定后带入标准曲线 Y=32.549X-0.224(Y代表蛋白含量, X 代表 OD595 ,计算得出蛋白含量。可溶性糖测定:样品反应体系(1ml 蒽酮 +180ul ddH2O+20ul样品提取液 ; 空白对照 (1ml 蒽酮 +180ul ddH2O , 测定 OD625后带入标准曲线 : Y=0.0345X+0.0204(Y代表 OD625, X 代表可溶性糖含量(ug

土壤生理生化参数测定方法大全

土壤过氧化氢酶活性的测定土壤过氧化氢酶,高锰酸钾滴定法（周礼恺，张志明.土壤酶活性的测定方法[J].土壤通报，1980，11(5)：37-38.）（1）所用试剂 ①0.3%的过氧化氢(现配)：1ml过氧化氢（30%）定容至100ml ② 1.5M硫酸：80ml浓硫酸定容至1L ③0.02M高锰酸钾（最多保存2周）：3.16g高锰酸钾定容至1L （2）测定步骤 ①取2g过1mm筛的风干土样，置于100ml锥形瓶中，然后注入40ml蒸馏水和5ml0.3%过氧化氢。另设对照（往瓶中注入40ml蒸馏水和5ml0.3%过氧化氢，不加土样）。 ②将瓶塞紧，置于120次/分钟往返式摇床上（温度调至25度，放干水），震荡20min。停止震荡，注入5ml1.5M硫酸以终止反应。将瓶中内容物用定量滤纸过滤。 ③取25ml滤液用0.02M高锰酸钾滴定至微红色。（对照，将5ml0.3%过氧化氢与40ml水、5ml1.5M的硫酸混合，取25ml该混合液，用0.02M的高锰酸钾滴定至微红色）。（3）结果计算从用于滴定原始的过氧化氢所消耗的高锰酸钾的量（A）中，减去用于滴定土壤滤液的高锰酸钾的量(B)，获得的差（考虑高锰酸钾滴定度的校正值T）即为土壤的过氧化氢酶活性：（A-B）﹡T。过氧化氢酶活性以20min1g干土的0.02M 的高锰酸钾的ml数表示，单位0.02M MnkO4ml/20min·g

蔗糖酶,3，5二硝基水杨酸比色法（关松荫.土壤酶及其研究法[M].北京：农业出版社，1986：275-276.）（1）所用试剂 ①3，5二硝基水杨酸溶液：称2.5g二硝基水杨酸，溶于100ml2M氢氧化钠（8gNaOH溶于100ml水）和250ml水中，再加150g酒石酸钾钠，用水稀释至500ml（不能超过7d）②PH5.5磷酸缓冲液：1/15 mol/L磷酸氢二钠(23.87 g Na2HPO4·12H2O溶于1 L蒸馏水中)25mL加1/15 mol/L磷酸二氢钾(9.078 g KH2PO4 溶于1 L蒸馏水中)475mL即成。 ③8%蔗糖溶液：8g蔗糖用蒸馏水定容至100ml ④甲苯 ⑤标准葡萄糖溶液：将葡萄糖先在50-58 ℃条件下，干燥至恒重。然后取500 mg溶于100 mL苯甲酸溶液中(5 mg/mL)，即成标准葡萄糖溶液。再用标准液制成1 mL含0.3-1.3 mg 葡萄糖的工作溶液。（即吸取5mg/ml的标准液3、5、7、9、11、13ml定容至50ml）标准曲线绘制：取1ml不同浓度的工作液，并按与测定蔗糖酶活性同样的方法进行显色，比色后以光密度值为纵坐标，葡萄糖浓度为横坐标绘制成标准曲线。（2）操作步骤 ⑥称5 g风干土，置于50 mL三角瓶中，注入15 mL8％蔗糖溶液，5 mL pH 5.5磷酸缓冲液和5滴甲苯。 ⑦摇匀混合物后，放入恒温箱，在37 ℃下培养24 h。到时取出，迅速过滤。从中吸取滤液l mL，注入50 mL容量瓶中，加3 mL 3，5-二硝基水杨酸并在沸腾的水浴锅中加热10min，随即将容量瓶移至自来水流下冷却3 min。 ⑧溶液因生成3-氨基-5-硝基水杨酸因而呈橙黄色，最后用蒸馏水稀释至50 mL，并在分光光度计上于波长508 nm处进行比色。 ⑨为了消除土壤中原有的蔗糖、葡萄糖而引起的误差，每一土样需做无基质对照，整个试验需做无土壤对照。（3）结果计算蔗糖酶活性以24h后1g土壤葡萄糖的毫克数表示：葡萄糖（mg）=a﹡4 式中a表示从标准曲线查得得葡萄糖毫克数4表示换算成1g土的系数

植物生理指标检测方法

植物组织中可溶性糖含量的测定在作为营养物质主要是指可溶性糖和淀粉。它们在营养中的作用主要有：合成纤维素组成细胞壁；转化并组成其他有机物如核苷酸、核酸等；分解产物是其他许多有机物合成的原料，如糖在呼吸过程中形成的有机酸，可作为NH 3 的受体而转化为氨基酸；糖类作为呼吸基质，为作物的各种合成过程和各种生命活动提供了所需的能量。由于碳水化合物具有这些重要的作用，所以是营养中最基本的物质，也是需要量最多的一类。 Ⅰ蒽酮法测定可溶性糖一、原理糖在浓硫酸作用下，可经脱水反应生成糠醛或羟甲基糠醛，生成的糠醛或羟甲基糠醛可与蒽酮反应生成蓝绿色糠醛衍生物，在一定范围内，颜色的深浅与糖的含量成正比，故可用于糖的定量测定。该法的特点是几乎可以测定所有的碳水化合物，不但可以测定戊糖与己糖含量，而且可以测所有寡糖类和多糖类，其中包括淀粉、纤维素等（因为反应液中的浓硫酸可以把多糖水解成单糖而发生反应），所以用蒽酮法测出的碳水化合物含量，实际上是溶液中全部可溶性碳水化合物总量。在没有必要细致划分各种碳水化合物的情况下，用蒽酮法可以一次测出总量，省去许多麻烦，因此，有特殊的应用价值。但在测定水溶性碳水化合物时，则应注意切勿将样品的未溶解残渣加入反应液中，不然会因为细胞壁中的纤维素、半纤维素等与蒽酮试剂发生反应而增加了测定误差。此外，不同的糖类与蒽酮试剂的显色深度不同，果糖显色最深，葡萄糖次之，半乳糖、甘露糖较浅，五碳糖显色更浅，故测定糖的混合物时，常因不同糖类的比例不同造成误差，但测定单一糖类时，则可避免此种误差。糖类与蒽酮反应生成的有色物质在可见光区的吸收峰为 620 nm ，故在此波长下进行比色。二、实验材料、试剂与仪器设备（一）实验材料任何植物鲜样或干样。（二）试剂 1. 80 ％乙醇。 2. 葡萄糖标准溶液（100 μg/mL ）：准确称取100 mg 分析纯无水葡萄糖，溶于蒸馏水并定容至100 mL ，使用时再稀释 10 倍（ 100 μg/mL ）。 3 ．蒽酮试剂：称取 1.0 g 蒽酮，溶于 80% 浓硫酸（将 98% 浓硫酸稀释，把浓硫酸缓缓加入到蒸馏水中） 1000 mL 中，冷却至室温，贮于具塞棕色瓶内，冰箱保存，可使用 2 ～ 3 周。（三）仪器设备分光光度计，分析天平，离心管，离心机，恒温水浴，试管，三角瓶，移液管（ 5 、 1 、0.5 mL ），剪刀，瓷盘，玻棒，水浴锅，电炉，漏斗，滤纸。三、实验步骤 1. 样品中可溶性糖的提取称取剪碎混匀的新鲜样品0.5 ～ 1.0 g （或干样粉末 5 ～100 mg ），放入大试管中，加入15 mL 蒸馏水，在沸水浴中煮沸20 min ，取出冷却，过滤入100 mL 容量瓶中，用蒸馏水冲洗残渣数次，定容至刻度。 2. 标准曲线制作取 6 支大试管，从 0 ～ 5 分别编号，按表 24-1 加入各试剂。表 24-1 蒽酮法测可溶性糖制作标准曲线的试剂量将各管快速摇动混匀后，在沸水浴中煮10 min ，取出冷却，在620 nm 波长下，用空白调零测定光密度，以光密度为纵坐标，含葡萄糖量（ μg ）为横坐标绘制标准曲线。 3 ．样品测定取待测样品提取液 1.0 mL 加蒽酮试剂 5 mL ，同以上操作显色测定光密度。重复 3 次。

各生理指标的测定方法

各生理指标的测定方法一、脯氨酸含量的测定 1.茚三酮法 1.1原理在正常环境条件下，植物体内游离脯氨酸含量较低，但在逆境（干旱、低温、高温、盐渍等）及植物衰老时，植物体内游离脯氨酸含量可增加10-100倍，并且游离脯氨酸积累量与逆境程度、植物的抗逆性有关。用磺基水杨酸提取植物样品时，脯氨酸游离于磺基水杨酸的溶液中，然后用酸性茚三酮加热处理后，溶液即成红色，再用甲苯处理，则色素全部转移至甲苯中，色素的深浅即表示脯氨酸含量的高低。在520nm波长下比色，从标准曲线上查出（或用回归方程计算）脯氨酸的含量。 1.2步骤试剂：（1）25%茚三酮：茚三酮------------0.625g 冰乙酸------------15ml 6mol/L磷酸--------10ml 70°C水浴助溶；（2）6mol/L磷酸：85%磷酸稀释至原体积的2.3倍；（3）3%磺基水杨酸：磺基水杨酸------3g 加蒸馏水至------100ml 实验步骤：（1）称取0.1g样品放入研钵，加5ml 3%磺基水杨酸研磨成匀浆，100°C沸水浴15min；（2）冰上冷却，4000rpm离心10min；（3）提取液2ml+冰醋酸2ml+25%茚三酮2ml混合均匀，100°C沸水浴30min，冰上冷却；（4）加4ml甲苯混合均匀，震荡30s，静置30min；（5）以甲苯为空白对照，再520nm下测定吸光值。 1.3计算方法脯氨酸含量（μg/gFW）＝ X * 提取液总量（ml）/ 样品鲜重（g）*测定时提取液用量（ml）*10^6 公式中：X-----从标准曲线中查得的脯氨酸含量（μg）提取液总量---------------------------5ml 测定时提取液用量---------------------2ml 问题及质疑： 1.酸性体系下，脯氨酸与茚三酮加热反应后的最终产物为红色，再实验过程中，仅有少数时候能发现红色产物。原因有待确定。 2.经查看文献资料，反应步骤已经是优化的，没有问题。甲苯萃取脯氨酸与茚三酮的反应产物，消除了多余未反应的茚三酮，磺基水杨酸，提取液中其他杂质（如色素）以及PH变化

Siemens Advia 系列生化仪参数详解

Siemens Advia 系列生化仪参数详解本详解主要针对的是市场上常见的四种西门子机型：ADVIA1200/1650/1800/2400。大致分为五个章节：简介、基本参数介绍、读点前移、前带监测、参数设置。一、简介： ADVIA1650是最早进入中国的拜耳生化仪，虽然师出日本，也是日本电子制造，但还是能看出拜耳的设计理念在里面。后来拜耳被西门子收购，ADVIA生化也保留了下来。 ADVIA系列生化仪都是将ISE作为标配安装，ADVIA1200生化速度是800测试每小时，ISE400测试每小时；ADVIA1650和升级版1800的生化速度都是1200测试每小时，ADVIA2400的生化速度是1800测试每小时。 Advia系列的操作控制软件都大同小异，几乎没有什么本质上的变化，所以延续性较强。加上西门子特有的流水线兼容性，使ADVIA系列的生命力变得异常顽强，在国内流水线市场里占据相当大的份额。在ADVIA老版本的程序中，是支持四种试剂的，也就是R1、R2、R3和R4；但在后续版本中，四种试剂变为2种，只有R1和R2，这一点厂家并没有说明为什么。所有的Advia系列，都是两个试剂盘，两个试剂针，反应盘是单盘，塑料反应杯，一根样本针。除ADVIA1200外，都有一个稀释盘和稀释样本针，稀释样本针将原始样本加入到稀释样本盘中，按照最高可达1:75的比例进行样本稀释，然后通过样本针将稀释后的样本转移到反应盘中。同样，在反应盘上也可以进行最高1:75的样本稀释，这样二者相乘，样本的稀释比例高达1:5625。稀释样本盘也是塑料杯，有自己单独的搅拌器、冲洗站。 ADVIA的试剂也可以进行稀释，所以节省试剂。但由于设计理念的关系，其孵育介质有孵育油，也就是油浴。3M生产的孵育油价格较贵，而且需要半年更换。除常规的清洗剂外，反应杯空白比色也需要单独的活化剂，加上稀释样本或试剂用的生理盐水，总体下来ADVIA 的耗材较多，而且总成本也不少。所有的ADVIA系列都是R1+S+R2方式。反应时间可选择：3分钟、4分钟、5分钟、10分钟、15分钟、长程反应21分钟和31分钟。 ADVIA1200没有稀释样本盘，所以样本直接被转移到反应杯上。加样速度4.5秒，读点13.5秒，R1+S后读第一点，10分钟反应读点42个，R2在19点前加入。反应杯总数231个，反应体积为80-430ul，R1和R2加入体积范围在5-300ul之间。反应时间可选择：3分钟（最后读点14）、4分钟（最后读点18）、5分钟（最后读点21）、10分钟（最后读点42）、15分钟（最后读点63）、长程反应21分钟和31分钟。 ADVIA1650和1800加样速度为3秒，读点时间是6秒，R1+S后读第一点，10分钟反应读点98个，R2在49点前加入。

测生理指标的方法

实验路线及安排：项目主要在晋西北地区展开区域化试验，供试品种4个，均为当年生扦插苗,每个品种15株，采用完全随机区组设计进行，其中包括4个处理，3个重复。所测定内容包括12项生理指标在相应部位(根、茎、叶)的年变化规律，并从形态、生理和生物化学方面对其抗寒抗旱性机理进行研究探讨。在每个小区分别选健康植株2株，每株取其中上部位叶片1-2片，组成混合样，编号,带回实验室用一部分样品进行抗旱指标测定,其余样品放入冰箱低温处理，处理温度为0℃、-10℃，-20℃，然后进行抗寒指标测定,每月采样一次。根的取样方法为每个小区分别选健康植株10株，挖出其部分根系组成混合样,处理方法同叶片；茎的取样方法为选健康植株10株，取其上部嫩茎组成混合样，处理方法同上。2009年10月-2010年3月对所选材料进行人工低温干旱处理,完成相关实验指标的测定工作。低温处理通过相对电导率及相关指标评价其抗寒性；干旱处理是通过对所栽品种进行适宜土壤水分、中度干旱、严重干旱条件的人为处理，测定杨树的蒸腾速率和相应指标，评价其抗旱性。实验方法一．光合效率、气孔导度、蒸腾速率三项指标用光合仪直接测定；二．水势（小液流法） 1.取10个干净的试管，分成A组和B组，都贴上0.05mol/L、0.1 mol/L、 0.15 mol/L、0.2 mol/L、0.3 mol/L 6个不同浓度标签，并向这两组试管中分别移取相应浓度的CaCl 2 溶液4mL。 2.取待测叶子数片，用打孔器在其上均匀打孔，混匀，将其分别装入A组试管（每支试管装10片），摇匀，滴入一滴相同浓度的甲烯蓝溶液，再摇匀。 3.用干净的毛细移液管，吸取1～2滴蓝色溶液，小心的插入装着相同浓度的 B组试管中部，轻轻的挤出一滴蓝色溶液，观察蓝色液滴流动方向。按下公式计算植物组织水势：Ψ=-iRTC 式中：Ψ为植物组织水势（MPa）；C为CaCl2溶液的摩尔浓度（mol/L）；R为摩尔气体常数，0.008314MPa·L/mol·K；T为热力学温度（K），即273+t(t为当时摄氏温度)；I解离常数（CaCl 2 =2.6）三．叶绿素含量（直接浸提法） 80％的丙酮液的配制：4L丙酮 + 1L蒸馏水。称0.5g左右的叶片放在50ml的离心管（做三个重复），加入25ml浓度为80％的丙酮液，放在黑暗处浸提大约36小时后取出，稀释4倍后分别在波长663nm、645nm、652nm下测定光密度，以80％的丙酮液为空白。按下列公式计算样品中叶绿素含量。 C A =12.72A 663 -2.59A 645 (1) C B =22.88A 645 -4.67A 663 (2) C T =C A +C B =A 652 ×1000/34.5 (3)在652nm时可一次测出叶绿素总含量 mg/g FW）=(CV T /FW×1000)n (4) 以上公式中，C A 、C B 、C A+B 分别为叶绿素a、叶绿素b、叶绿素a+b的浓度（mg/L）； FW为鲜重(g)；C：叶绿体色素的浓度；V T 为提取液总体积(mL)；n为稀释倍数。

生化仪方法及参数设置有关的知识

方法及参数有关的知识 1、导向知识：生化分析仪的基本原理是分光光度计，或者俗称比色计。分光光度计的依据是“朗伯—比尔定律”。朗伯—比尔定律阐述了液体吸光度与液体浓度的关系，并且引申出相应的公式及推导公式。吸光度越高，溶液的色度也就越深，反之越浅。当然前提是同波长下。一般来说，生化反应把吸光度增加的叫做正反应，或者叫做上升反应，色度越来越深；吸光度下降的反应叫做负反应或者下降反应，色度越来越浅。应用和维修的界限其实很难划分，一般来说操作问题属于应用，故障属于维修。但结果问题有可能是应用问题，也有可能是故障，所以生化仪区分应用和维修我认为纯属找麻烦。 2、生化的测试方法：从分光光度计的方法来说，有透射和散射两种方法，生化仪只用到透射法，因为它只有一套光路。贝克曼的自有机型和特定蛋白仪及免疫类血凝类设备，还增加有散射法等等。生化的测试方法只有两种，那就是终点法和速率法，其余方法都是衍生法。而单试剂或者双试剂与否与方法关系不大，只跟衍生法有关。 2.1 终点法顾名思义，在反应终点进行吸光度测定的方法，其衍生方法有一点终点法，对应单试剂；两点终点法对应双试剂。还有一些相关的概念：试剂空白、血清空白。先声明一下，下面出现的所有例图都是选自日立、奥林巴斯、东芝、拜耳这些生化仪的手册，选择的目的一是有代表性，而是清晰度好，并非我个人有所倾向。 2.2 一点终点法：也就是单试剂采用的方法。这是奥林巴斯的曲线示意图，它是R1+S方式，所有生化仪都是以样本S的加入为正式读点的开始，之前加入的试剂读点都为0或负数。所有试剂和样本加入后，都进行搅拌。上图中R1加入搅拌后进行第一个读点吸光度测试，读点编号为0，然后加入样本再次搅拌开始正式读点1-27。而测试读点是27，也就是反应终点。当然，不一定非要到最后一个读点，很多蛋白反应速度很快，几分钟就到达终点，所以根据情况设置。奥林巴斯的机型算是一类机型，与贝克曼自有机型类似，R和S间隔读点，也正是这个特性引发了试剂空白和血清空白的应用。而日立的机器代表着另一类机型，那就是S+R方式，但S和R在同一圈内加入，所以读点从1开始，没有0也没有负数。如下图：

植物生理学实验指导

植物生理学实验指导主编胡君艳陈国娟张汝民浙江农林大学植物学科 2013年8月

实验一植物组织水势的测定水势与渗透势的测定方法可分为3大类：⑴液相平衡法，包括小液流法、重量法测水势，质壁分离法测渗透势；⑵压力平衡法（压力室法测水势）；⑶气相平衡法，包括热电偶湿度计法、露点法等。 Ⅰ小液流法【实验目的】了解采用小液流法测定植物组织水势的方法。【实验原理】水势表示水分的化学势，像电流由高电位处流向低电位处一样，水从水势高处流向低处。植物体细胞之间，组织之间以及植物体和环境间的水分移动方向都由水势差决定。当植物细胞或组织放在外界溶液中时，如果植物的水势小于溶液的渗透势（溶质势），则组织吸水而使溶液浓度变大；反之，则植物细胞内水分外流而使溶液浓度变小；若植物组织的水势与溶液的渗透势相等，则二者水分保持动态平衡，所以外部溶液浓度不变，而溶液的渗透势即等于所测植物的水势。可以利用溶液的浓度不同其比重也不同的原理来测定试验前后溶液的浓度变化，然后根据公式计算渗透势。【实验器材与试剂】 1.实验材料：八角金盘、大叶黄杨等。 2.实验试剂：0.05、0.10、0.15、0.20、0.30mol·L-1蔗糖溶液、甲烯蓝溶液。 3.实验仪器：试管10支、微量注射器、镊子、打孔器、垫板。【实验步骤】 1.取干燥洁净的试管5支为甲组，标记1~5，各支中分别加入0.05~0.30mol·L-1蔗糖溶液5mL。另取5支干燥洁净的试管为乙组，标记1'~5'，各试管中分别加入0.05~0.30mol·L-1蔗糖溶液2ml。 2.取待测样品的功能叶数片，用打孔器打取小圆片约50片（避开叶脉），混合均匀。用镊子分别夹入10个小圆片到乙组试管中。并使叶圆片全部浸没于溶液中。放置约30~60min，为加速水分平衡，应经常摇动试管。 3.到时间后，在乙组试管中加入甲烯蓝溶液1~2滴，并用微量注射器取各试管糖液少许，将注射器插入对应浓度甲组试管溶液中部，小心地放出一滴蓝色溶液，并观察蓝色小液流的

生理指标测定

生理指标测定_16种 1、冻害指数——3~5株观察形态【４种常绿水生鸢尾抗寒性的初步研究】张京，2012 李刚，姜卫兵，翁忙玲，等．木兰科６种常绿树幼苗抗寒性的初步研究［Ｊ］．园艺学报，２００７，３４（３）：７８３－７８６．描述叶色变化：在最冷月( 2月中旬) , 所有供试树种均有不同程度的冻害表现, 乐东拟单性木兰受冻害最轻,只有部分植株的少量叶片有些许水渍状, 大部分植株完好无损, 冻害指数为041, 基本不受冻害;阔瓣含笑也长势良好, 有少部分叶片出现褐色水渍状, 冻害指数为14, 受轻度冻害; 金叶含笑受到了中度水平的冻害, 部分植株的叶片整个叶面呈现红褐色水渍状, 冻害指数为25; 红花木莲、醉香含笑和观光木受到了重度冻害, 大多数植株的部分叶片呈焦黄、褐色脱落, 有的整个植株呈萎蔫状,长势非常差, 冻害指数分别为3.2、3.9、4.3. 2、相对含水量叶片相对含水量采用饱和称重法［21］测定。选取各处理部位一致、成熟完好的叶片迅速称其鲜重，再用蒸馏水浸泡8~24 h，使组织吸水达到饱和状态，取出后吸去表面水后立即称其饱和重，然后在105 ℃下杀青30min，在80 ℃下烘干至恒重（1h~24h），放在干燥器中冷却，称其烘干重。根据公式计算:LRWC( %) = [ (鲜重－干重) /(饱和重－干重) ] × 100%

3、光合参数（光合仪测定）光合速率、CO2浓度、光合有效辐射、叶绿素或用95%乙醇浸泡法，浸泡4~5d，测定叶绿素。《植物生理生化实验原理和技术》 4、膜质过氧化：相对电导率（略）、MDA MDA（丙二醛）的测定试剂：三氯乙酸10% （TCA 溶液）：称取100g溶于1L 蒸馏水中； 0.6％硫代巴比妥酸溶液（6%TBA）：1.8g溶于300ml TCA 溶液中（加热溶解）称取植物叶片0.3克, 先加入2ml TCA和少量石英砂研磨至匀浆，再加入4ml 10%三氯乙酸(TCA)进一步研磨（总体积为6ml），然后以4000g离心10min, 取上清液待测。吸取离心的上清液2ml(对照加2ml蒸馏水)，加入2ml 0.6% TBA，混匀物于沸水浴上反应15分钟，迅速冷却后再离心(在冰箱中冷却较快)。取上清液测定在532，600和450nm波长下比色。公式C MDA (nmol L-1)＝[(A532－A600)-0.0571×(A450-A600)]/0.155计算MDA量（排除多糖干扰），用每克干（鲜）重中MDA的量表示MDA的含量，单位μmol g-1干（鲜）重或nmol g-1干（鲜）重。 1、含量计算双组分光光度计法：已知蔗糖与TBA反应产物在450nm和532nm波长下的比吸系数分别为 85.40,7.40；MDA与 TBA显色反应产物在450nm波长下无吸收，其吸收系数为0，532nm下比吸收系数为155，根据双组分光光度计法建立方程组，计算公式如下： C 1（mmol/L）=11.71 D 450 C 2 =[6.45(D 532 —D 600 ) — 0.56 D 450 ]X提取液总体积/测定时用的提取液体积*样品鲜重 C 1:可溶性糖的浓度, C 2 为MDA的浓度, D 450 D 532 D 600 分别代表450,532,600nm下的消光度值. 参：Brege J G.Microsomal lipid peroxiodation. Methods in Ezymmology.1978,52:302-306 J.G. Buege and S.D. Aust, Microsomal lipid peroxidation. Methods Enzymol.52(1978), pp. 302–306. 注: 沸水浴时,可使用小试管,然后上部用保鲜膜包扎.(如橡皮筋) 附4.1 MDA、可溶糖含量—硫代巴比妥酸加热显色法【原理】植物遭遇逆境胁迫或衰老过程中，由于自由基、活性氧的积累引起膜脂过氧化，产生脂质自由基，进一步诱发膜脂连续过氧化并导致蛋白质交联变性，而引起细胞损伤或死亡。MDA 是膜脂过氧化的最终产物，通过其含量的测定可了解膜脂氧化伤害的程度，比较不同植物抗逆性的差异。在酸性和高温条件下，MDA可与硫代巴比妥酸（TBA）反应，生成红棕色的产物三甲川（3，5，5-三甲基恶唑2，4-二酮）。该产物在532nm处有最大吸收峰，测定反应产物在532nm处的光密度值，可计算出MDA含量。但植物组织中的可溶性糖亦与TBA产生颜色反应，其产物对532nm 光的吸收干扰测定。采用双组分光光度法及其计算式，可排除干扰，计算出MDA的含量。【器材】分光光度计离心机水浴锅研钵剪刀试管