高效液相色谱法检测大脑神经递质多巴胺-最新文档资料

高效液相色谱法检测大脑神经递质多巴胺

多巴胺（dopamine， DA）是一类儿茶酚胺类物质（CAs），它存在于神经组织及体液中，是下丘脑和脑垂体腺中的一种重要的神经递质，脑垂体内分泌功能的协调与多巴胺在脑内特定区域的分布及含量有密切关系，导致神经功能紊乱，是帕金森病（Parkinson’s disease）发病的一个重要影响因素。另外，多巴胺还能够引起心脏兴奋，使血流量增加，以用于感染性休克和心源性休克。所以，进行多巴胺检测的研究具有重要的现实意义[1]。本文就多巴胺的高效液相色谱法检测作一综述。

高效液相色谱法（high performance liquid chromatography，HPLC）[2，3]也是通用的DA的检测方法。近年来，由于高效液相色谱技术的不断发展，用HPLC法分离测定体液和组织中CAs的方法日趋完善，检测灵敏度可达pmol水平。高效液相色谱法具有高分离率，所以在CAs的分析中受到极大重视，HPLC法同电化学检测和荧光检测相结合是目前最有效且最常用的方法。CAs本身有自然荧光，经HPLC法分离后，可以利用它的荧光进行检测，但是由于其自然荧光相对比较弱，不能用作生物样品灵敏的选择性测定方法。儿茶酚胺类物质具有两个官能团（氨基和邻二羟基），因此可以通过衍生化形成具有强荧光的物质，借此提高检测灵敏度。吴予明等[4]利用HPLC和荧光检测器对嗜铬细胞瘤患者和正常人24h尿中DA含量进行测定，对

莱克多巴胺检测方法

莱克多巴胺检测方法 1．分析目标化合物莱克多巴胺 2、仪器设备高效液相色谱-质谱仪（LC-MS）。 3、试剂除下列试剂外，使用附录2所列试剂。莱克多巴胺：含莱克多巴胺99％以上，熔点为163.9℃～164.6℃。 4．试验溶液的制备 1）肌肉、肝脏、肾脏和其它可食用部分肌肉：尽可能除去脂肪层，搅碎混合均匀后，称取其5.00g。肝脏、肾脏和其它可食用部分：搅碎混合均匀后，称取其5.00g。加入20mL乙酸乙酯和1mL4mol／L碳酸钾溶液，均质后，以每分钟3000转离心分离10分钟，收集乙酸乙酯层。离心管内残留物中加入20mL乙酸乙酯，振荡5分钟后，按上述同样条件离心分离，合并所得的乙酸乙酯层，40℃以下浓缩，除去乙酸乙酯。残留物中加入30mL乙腈溶解，移入分液漏斗中。加入30mL乙腈饱和正己烷，振荡，弃去正己烷层，重复操作2次。乙腈层在40℃以下浓缩，除去乙腈。残留物中加入1.0mL 甲醇溶解，此为试验溶液。 2）脂肪尽可能除去肌肉层，搅碎混合均匀后，称取其5.00g。加入30mL乙腈和30mL乙腈饱和正己烷，均质后，以每分钟3000转离心分离10分钟，乙腈层移入分液漏斗中。离心管内的正己烷层和残留物中加入30mL乙腈，振荡5分钟，按上述同样条件离心分离。合并所得的乙腈层于前面的分液漏斗中，加入30mL 乙腈饱和正己烷。激烈振荡5分钟后，静置，收集乙腈层， 40℃以下浓缩，除去乙腈。残留物中加入1.0mL甲醇溶解，此为试验溶液。 5．标准曲线的制作将盐酸莱克多巴胺标准品配制成0.025～0.5mg（以莱克多巴胺计）/L的甲醇溶液数点，分别注入GC-MS中，用峰高法或面积法绘制成标准曲线。 6．定量试验注入试验溶液于GC-MS中，根据5的标准曲线求出莱克多巴胺的含量。 7．测定条件 LC-MS 柱：十八烷基甲硅烷基化硅胶（粒径2～5μm），内径2.0～6.0mm、100～250 mm 的不锈钢管。柱温：40℃。流动相：乙腈：0.05%三氟乙酸（1：4）混合溶液。主离子(m/z)： ESI+ 302 保持时间标准： 4 ～ 6 分钟 8．定量界 0.01 mg/kg

高效液相色谱法在水质检测中的应用

高效液相色谱法在水质检测中的应用摘要：液相色谱仪已广泛应用于水环境监测中，逐步成为常规检测方法，其适用于分子量大、挥发性低、热稳定性差的有机污染物的分离和分析，具有准确、快速等特点。关键词：液相色谱仪；水环境监测；有机污染物 1、引言高效液相色谱法 ( high performance liquid chro-matography，简称 HPLC)，具有下列主要优点：固定相颗粒细且规则均匀，传质阻抗小，组分间分离效率高；利用高压泵输送流动相，大大缩短分析时间；使用高灵敏检测器，提高了检测灵敏度，在分析速度、分离效能、检测灵敏度和操作自动化方面，达到了和气相色谱法相媲美的程度，气相色谱法仅适于分析蒸汽压低、挥发性高、沸点低、热稳定性好的样品。在全部已知的有机化合物中仅有20%的样品符合这些条件，近80%的有机化合物属于挥发性低、易受热分解或者大分子化合物，适合于高效液相色谱分析，因此，HPLC 应用前景更为广阔。在环境监测中，高翔液相色谱法已逐步上升为常用的监测方法，如检测多环芳烃类、酚类、多氯联苯、苯胺类、阴离子和非离子表面活性剂、有机农药除草剂等。随着经济的快速发展，人们在获取大量化学物质以满足经济、生产和生活需要的同时，也将一些典型的有毒有害的有机污染物带入环境，其中部分有机污染物已经直接或间接被证明具有致癌、致畸和致突变的作用，给人类健康和自然生态环境带来了严重、持久、潜在的危害。根据发达国家的经验和我国经济发展

伴随的污染现状，有毒有机污染物也必将成为我国环境监测的重要目标。 2、实验部分 2.1主要仪器岛津公司生产的高效液相色谱仪（LC-20A），包括： (1)CBM-20A—系统控制器； (2)CTO-20A—色谱柱柱温箱； (3)LC-20A—溶液传输单元； (4)SPD-20A—紫外可见光检测器； (5)RF-20A—荧光检测器； (6)SIL-20A—自动进样器； (7)DGU-20A3R—在线脱气机 (8)数据处理：LC-LabSolutions工作站软件。 (9)色谱柱：Shim-pack column size serial NO.VP-ODS。 2.2液相色谱原理简介液相色谱法是在高压条件下溶质在固定相和流动相之间进行的一种连续多次交换的过程，它借溶质在两相间分配系数、亲和力、吸附力或分子大小不同引起排阻作用的差别使不同溶质得以分离。 2.3建立实验方法研究液相色谱测定苯系物的实验方法，结合查找的资料及实验验证，确定检测苯系物的实验方法如下： (1) 进样量：10微升；色谱柱：Shim-pack column size serial NO.VP-ODS 柱。

快速分析多巴胺和血清素

快速分析多巴胺和血清素摘要：随着神经系统实验室检测多巴胺和血清素样品的增多，对检测的时间和灵敏度的要求也不断提高。本文采用了新型电化学检测器CoulochemⅢ进行分析，在6分钟内即可完成检测灵敏度可达4飞摩尔级别，如果降低色谱柱内径到3毫米灵敏度则升至2飞摩尔，方法快速准确，灵敏度高。关键词：离子色谱ICS-5000，CoulochemⅢ，多巴胺，血清素，脑皮层 1前言近几年，许多神经系统实验室对影响生物神经系统的生物胺的分析需求逐渐增加。随着检测样品频率的增加，对缩短检测时间的要求也在增加。并且，大脑的很多区域现在都在研究中，比如脑皮层，虽然较之前的大脑区域研究已经减少了影响生物神经系统的化学物质的输出量。因此，一个灵敏的检测方法被开发出来以帮助神经系统学家们在6分钟内快速测定多巴胺和血清素。一些神经系统学家仅需要检测脑微量透析样品中的多巴胺，但其他人则希望可以有一个速度快，灵敏度高的方法同时测定两种物质。灵敏度经常会是个问题，因为有些脑区域（例如脑皮质）中含有的多巴胺水平很低，有时会要求色谱柱上的灵敏度达到一飞摩尔。 HR-80的标准分析色谱柱和下面写明的流动相可以测定500毫微微克（相当于4飞摩尔）的多巴胺。然而，通过把色谱柱的内径变为3.0毫米内径并增加流速到0.7ml/min，实验的色谱柱的灵敏度可以增加到250毫微微克（相当于2飞摩尔）（见图1）由于多巴胺可在很低的电压下氧化，检测器的检测条件设置合适可以提供更好的灵敏度和选择性。此外，这种方法可以帮助使人工脑脊液产生的前期产物最小化。但是，如果同时需要检测血清素，电压必须提高到220毫伏左右。 2材料和方法 ICS-5000，包括一个泵一个手动进样器和一个Coulochem Ⅲ检测器。离子色谱条件：色谱柱：HR80 x 3 mm I.D；流动相：按描述；流速:：0.70 mL/min；温度：室温；进样体积:：10 - 20 μL；检测器和检测条件：检测器：

乳制品中三聚氰胺的高效液相色谱检测法

乳制品中三聚氰胺的高效液相色谱检测法三聚氰胺（Melamine）是一种重要的三嗪类含氮杂环有机化工原料，主要用于生产三聚氰胺-甲醛树脂，广泛用于木材加工、塑料、涂料、造纸、纺织、皮革等行业，为白色晶体。三鹿奶粉事件引发了对三聚氰胺检测的广泛关注，国家质量监督检验检疫总局和国家标准化管理委员会相继发布了《原料乳与乳制品中三聚氰胺检测方法》（GB/T22388-2008）和《原料乳中三聚氰胺快速检测液相色谱法》（GB/T22400-2008）的国家标准。本文参考了以上标准并进行配制条件优化，建立了液相色谱检测法，前处理简单，检测限、精密度、重现性以及回收率均符合国家标准。 1 实验部分 1.1 仪器与试剂 LC1620高效液相色谱仪（含UV1620紫外-可见检测器1台，P1620高压恒流泵1台，上海舜宇恒平科学仪器有限公司）；AT-330色谱柱温箱（天津奥特赛恩斯仪器有限公司）；FA2004 分析天平（上海舜宇恒平科学仪器有限公司）；TGL-16G-A离心机（上海安亭科学仪器厂）；三聚氰胺标准品(>99%，上海安谱)；辛烷磺酸钠(色谱纯，北京百灵威)；磷酸(分析纯)、乙腈(色谱纯，美国Tedia)、纯净水(杭州娃哈哈)。 1.2 标准品溶液配制精密称取三聚氰胺标准品，溶于50％的甲醇水溶液，配制称1.422mg/ml的标准储备液，于4℃避光保存。根据实验需要，用流动相逐级稀释成适当浓度的标准工作液。 1.3 样品前处理称取2g酸奶样品与50ml具塞离心管中，加入乙腈：水＝50：50混合溶液15ml，充分混匀后超声提取15min。取提取液250ul，加入0.1mol/l盐酸750ul，混匀，以12000r/min离心 5min，取上清液，0.22um滤膜过滤，作为HPLC测定溶液。 1.4 色谱条件：色谱柱：Globalsil C18 5μm(ID4.6mm×250mm) 流动相：乙腈/缓冲盐=15/85（缓冲盐：10mM辛烷磺酸钠水溶液，含0.1％磷酸）流速：1.0ml/min 波长：240nm 温度：40℃ 进样量：20μl 2 实验结果 2.1 精密度实验取浓度为0.569μg/ml三聚氰胺标准工作液，按上述色谱条件，连续进样5次，以各成分峰面积计算RSD(%)，所得结果如表1所示：保留时间相对标准偏差（RSD）为0.23％，峰面积RSD为0.57％。表1 精密度实验 time（min）Peak High Peak Area NO. Retention 1 11.933 289 4216.8 2 11.990 290 4264.2 3 11.928 287 4246.0 4 11.927 287 4242.8 5 11.923 284 4218.6 RSD(%) 0.23 0.82 0.57

如何使用莱克多巴胺快速检测试剂盒

莱克多巴胺快速检测试剂盒说明书【原理】本试剂盒采用间接竞争ELISA方法检测猪尿和猪肝等样本中的莱克多巴胺，在微孔条上预包被上偶联抗原，利用抗原与抗体的特异性免疫化学反应的原理来进行的，样本中的莱克多巴胺和微孔条上预包被偶联抗原竞争抗莱克多巴胺抗体，加入酶标记物后，用TMB底物显色，样品中的莱克多巴胺含量与样品的吸光度值呈反比，与标准曲线比较即可得出莱克多巴胺含量。【试剂盒组份】 1、酶标板：8孔/条，12条/板 2、莱克多巴胺标准溶液(1ml/瓶)：0ppb、0.1ppb、0.3ppb、 0.9ppb、2.7ppb、8.1ppb 3、酶标记物…………………………………12ml 4、抗体工作液………………………………7ml 5、显色剂A …………………………………7 ml 6、显色剂B …………………………………7 ml 7、终止液…………………………………7 ml 8、20倍浓缩洗液……………………………50ml 9、使用说明书………………………………1 份 10、封板膜：…………………………………1张 11、封口袋：……………………………………1 个【试剂盒技术指标】试剂盒灵敏度：0.1ppb 样本检测下限：尿样、血清……………………………………0.1ppb 组织……………………………………0.1ppb 饲料……………………………………10ppb 交叉反应率：化合物名称%交叉反应性莱克多巴胺 (100) 沙丁胺醇……………………………………<0.01 克伦特罗……………………………………<0.01 卡布特罗……………………………………<0.01 回收率：尿样、血清……………………………95%±15% 组织………………………………95%±15% 饲料………………………………95%±15% 批间、批内变异系数：CV≤10% 【所需仪器和试剂】所需仪器：微孔酶标仪、氮气吹干装置、打印机、均质器、振荡器、离心机、恒温箱、天平（感量0.01g）、刻度移液管、微量移液器(单道20μl-200μl、 100μl-1000μl、多道250μl) 所需试剂：氢氧化钠、乙酸乙酯、浓HCl、磷酸二氢钾、乙腈、【样本前处理】样本处理前须知：（1）实验中必须使用一次性吸头，在吸取不同的试剂时要更换吸头。（2）实验之前须检查各种实验器具是否干净，必要时可对实验器具进行清洁，以避免污染干扰实验结果。尿样、血清样品的处理清亮尿样或血清直接测定，如尿样或血清浑浊须过滤或离心10min（15℃，4000r/min）直至清亮，暂不使用样本应冷冻保存，但避免反复冻融。组织样品（包括肌肉、肝脏和肾脏）前处理（稀释倍数1）1、称2±0.05g组织，加入6ml乙腈-0.1MHCl水溶液(体积比84:16)。 2、振荡10min,室温4000r/min以上离心10min。 3、取上清3ml，加入2ml 0.1M NaOH，加入6ml乙酸乙酯，振荡10min，室温4000r/min 以上离心10min。取全部上清于50℃氮气或空气吹干。 4、加入1ml三蒸水复溶，取50μl进行分析。饲料样品的处理（稀释倍数11） 1、称2 克饲料样品，加入2mL 1M盐酸。 2、加入18mL 双蒸去离子水，混匀，涡旋3分钟。在摇床震动15分钟。 3、在2000rpm下离心20分钟。 4、取出上清液加入1mL 1M 氢氧化钠，用盐酸调整pH值至7-9 之间。 5、在2000rpm下离心20分钟，取上清液50μl进行检测。【检测程序】 1、复温：使用前将试剂盒置于室温（20-25℃）平衡30min 以上，注意每种液体试剂使用前均须摇匀。取出需要数量的酶标板微孔条插入框架中，将不用的微孔条放入自封袋，保存于2-8℃,不要冷冻； 2、编号：将样品和标准品对应微孔按序编号，每个样品和标准品均需做2孔平行； 3、反应：往酶标板微孔中加入标准溶液或试样液50μl/孔，然后加入莱克多巴胺抗体工作液50μl/孔，用盖板膜封板，37℃反应40min。 4、洗板：倒出孔中液体，将酶标板倒置在吸水纸上拍打，去除孔中液体。加入250μl/孔稀释后洗液（将20×浓缩洗液用蒸馏水稀释,稀释比例：1:19），轻拍，15s后

多巴胺的测定

多巴胺的测定神经递质多巴胺的测定,采用荧光分光光度法荧光法测定大鼠脑组织和血液中单胺类物质的方法探讨： 1、主要仪器：荧光分光光度计（日本产，SHIMADZURF-5301PC）；组织高速分散器（上海产，XHF-1）；冷冻离心机（上海产，TGL-16G）；恒温水浴箱；旋涡混合器等。。 2、试剂：剂来源除标明外均为国产分析纯级，试剂配制使用双蒸水。（1）标准品：重酒石酸去甲肾上腺素；盐酸多巴胺；5-羟色胺硫酸肌酐；5-羟吲哚乙酸为瑞士Fluka产品。（2）混合标准储存液的配制：分别精确称取上述标准品各50mg，用0.01N盐酸配制成100ml混合标准储存液（500ugml），置4℃冰箱保存，临用前稀释成1.25ugml应用液。（3）酸性正丁醇：每升正丁醇加入浓盐酸0.85ml，混匀。（4）正庚烷。（5）0.1%OPT-10N盐酸溶液：邻苯二甲醛为瑞士Fluka产品，临用前用10N盐酸稀释成0.001%OPT-10N盐酸溶液。（6）0.25%半胱氨酸溶液：用0.1N盐酸新鲜配制。（7）碘试剂：配制0.02N碘液和5%碘化钠（以70%乙醇溶解），临用前以1∶1体积比混合。（8）115M，PH=7.2的磷酸盐缓冲液。（9）0.33M碳酸氢钠溶液。（10）碱性亚硫酸钠溶液：25%亚硫酸钠与5N氢氧化钠在临用前以1∶9体积比混合。（11）0.1MEDTA试剂：用1M醋酸钠溶液配制，以10N氢氧化钠调节H至7.0。 3、实验方法：

⑴标本处理：大鼠断头处死，立即取血及脑组织。脑组织用冰生理盐水冲洗，去除血膜、嗅球和小脑，沿脑中线剖开，取一半脑组织吸干水分称重，加入10倍体积的冰酸性正丁醇，用组织分散器匀浆备用。血液静置凝固后用冷冻离心机分离血清，立即加入10倍体积冰酸性正丁醇摇匀。 ⑵提取过程：同时制备标准管和空白管，与血、脑标本在相同条件下按下图流程进行提取，获得水相A和水相B。 ⑶NE、DA的测定步骤：各管取水相A0.5ml，按下列流程进行操作： ①水相A0.5ml＋115M磷酸盐缓冲液1.5ml＋0.1MEDTA0.4ml＋碘液0.2ml ②混匀、静置3mn＋碱性磷酸钠（新配）0.4ml ③混匀、静置3mn+5N醋酸0.4ml ④混匀，80℃水浴，冷却 ⑤测NE荧光测度，激发波长为382488 ⑥继续沸水浴20mn，冷却

高效液相色谱方法的验证

高效液相色谱方法的验证 ?方法验证的目的 ?方法验证的内容 ?方法验证的项目及测定方法

方法验证的目的目的：证明采用的方法适合相应检测的要求。方法验证是实验室针对特定方法的研究过程，通过设计方案，有步骤、系统地收集、处理实验数据，最终形成文件，以证明所用试验方法准确、灵敏、专属并重现。同一分析方法用于不同的检测项目会有不同的验证要求。

方法验证的内容 ?准确度 ?精密度 ?专属性 ?检测限 ?定量限 ?线性和范围 ?耐用性

准确度定义：方法测定结果与真实值或参考值的接近程度。一般用回收率%表示。 1. 主成分含量测定原料药：对照品或方法比对 2. 制剂、中药：标准加样回收杂质定量测定：加样回收（n 3 9）杂质对照品方法比对回收率 C-A %=′ B 100% 杂质与主成分的相对含量 A:试验供试品中被测成分的量（通常为含量测定量的50%） B: 试验供试品中加入的对照品的量（通常为±20%） C:试验测定值

精密度定义：在规定测试条件下，同一个均匀供试品，经多次取样测定所得结果之间的接近程度。一般用偏差，相对偏差和相对标准偏差 1. 重复性（n 9） 3 2. 中间精密度 3. 重复性测定：HPLC方法的精密度测试，应从样品制备开始，设计3个浓度，分别平行制备3份，以测定含量计算相对标准偏差；或同一样品平行制备6份供试品，分别进样，以峰面积计算相对标准偏差。同一份供试品连续进样6次，计算得到的相对标准偏差只能表征进样精密度，不能作为方法精密度。

专属性定义：在其它成分可能存在下，方法能正确测定出被测物的特性。 1. 鉴别反应 2. 含量测定杂质测定测定：限量检查空白制剂，模拟复方加速破坏试样测试 DAD峰纯度检查

莱克多巴胺检测标准

ICS 65.120 B 46 备案号： DB33 饲料中莱克多巴胺的测定 Determination of ractopamine in feedstuffs 浙江省质量技术监督局发布

前言本标准是在参阅了国内外文献的基础上，根据我国技术发展水平研究制定的，采用了酶联免疫法、高效液相色谱－荧光检测法和气相色谱-质谱法。本标准由浙江省农业厅提出并归口。本标准由浙江省畜产品质量安全检测中心、浙江省疾病预防控制中心负责起草，浙江一星集团饲料有限责任公司参与起草。本标准主要起草人：陈慧华、吴平谷、应永飞、任玉琴、屈健、周文海、陈勇、浦琴华。

饲料中莱克多巴胺的测定 1 范围本标准规定了以酶联免疫（ELISA）法、高效液相色谱（HPLC）法和气相色谱－质谱（GC－MS）法检测饲料中莱克多巴胺的方法，规定GC－MS法为仲裁法。本标准适用于饲料和饲料添加剂中莱克多巴胺的测定。酶联免疫（ELISA）法为筛选方法，检测限为0.01mg/kg，高效液相色谱（HPLC）法和气相色谱－质谱（GC－MS）法为定量方法，定量限HPLC法为0.1mg/kg、GC－MS法为0.05mg/kg。线性范围：酶联免疫（ELISA）法为0.005ng-0.05ng，高效液相色谱（HPLC）法为2.5ng-10ng，气相色谱－质谱（GC－MS）法为0.05ng-1.0ng。 2 规范性引用文件下列文件中的条款通过本标准的引用而成为本标准的条款。凡是注日期的引用文件，其随后所有的修改单（不包括勘误的内容）或修订版均不适用于本标准，然而，鼓励根据本标准达成协议的各方研究是否可使用这些文件的最新版本。凡是不注日期的引用文件，其最新版本适用于本标准。 GB/T 6682分析实验室用水规格和试验方法 GB/T 14699.1 饲料采样方法 3 试样制备按GB/T 14699.1抽取有代表性的饲料样品，用四分法缩减取约200g，粉碎至过0.45mm孔径的分析筛，混匀，装入磨口瓶中备用。第一法酶联免疫法 4 原理与方法 4.1 原理本测定方法是酶联免疫法中的竞争性测定法，其主要原理是：吸附在孔内的莱克多巴胺与标准或样品中的莱克多巴胺竞争性地与莱克多巴胺抗体相结合，与标准品或样品相结合的莱克多巴胺抗体被洗涤去除后，只剩下与微孔内药物相结合的抗体，其再与加入的酶标记的第二抗体相结合，酶底物在酶作用下产生蓝色产物，吸光度的高低与样品中莱克多巴胺的含量成反比。 4.2 方法采用莱克多巴胺酶联免疫试剂盒或类似产品，按试剂盒的使用说明操作。 5 试剂和溶液 5.1 除非另有说明，本法所用试剂均为分析纯，水为去离子水，符合GB/T 6682二级水的规定。 5.2 PBS缓冲液：用水10倍稀释厂商提供的浓缩PBS缓冲液。 5.3 工作洗液：用水20倍稀释厂商提供的浓缩洗液。 5.4 乙酸乙酯。 5.5 碳酸盐缓冲液：称取4.3g碳酸钠（Na 2CO 3 ?10H 2 O），2.9g碳酸氢钠（NaHCO 3 ），加水至1000mL，摇匀，调节pH值至9.5。

多巴胺的测定

荧光法测定大鼠脑组织和血液中单胺类物质的方法探讨： 1、主要仪器：荧光分光光度计（日本产，SHIMADZU RF-5301 PC）；组织高速分散器（上海产，XHF-1）；冷冻离心机（上海产，TGL-16G）；恒温水浴箱；旋涡混合器等。。 2、试剂：剂来源除标明外均为国产分析纯级，试剂配制使用双蒸水。（1）标准品：重酒石酸去甲肾上腺素；盐酸多巴胺；5-羟色胺硫酸肌酐；5-羟吲哚乙酸为瑞士Fluka产品。（2）混合标准储存液的配制：分别精确称取上述标准品各 50mg，用 0.01N 盐酸配制成 100 ml 混合标准储存液（500ug/ml），置4℃冰箱保存，临用前稀释成1.25ug/ml应用液。（3）酸性正丁醇：每升正丁醇加入浓盐酸0.85ml，混匀。（4）正庚烷。（5）0.1% OPT-10N 盐酸溶液：邻苯二甲醛为瑞士 Fluka 产品，临用前用 10N 盐酸稀释成0.001% OPT-10N盐酸溶液。（6）0.25%半胱氨酸溶液：用0.1N盐酸新鲜配制。（7）碘试剂：配制0.02N碘液和5%碘化钠（以70%乙醇溶解），临用前以1∶1体积比混合。（8） 1/15 M ，PH=7.2的磷酸盐缓冲液。（9） 0.33M碳酸氢钠溶液。（10）碱性亚硫酸钠溶液：25%亚硫酸钠与5N氢氧化钠在临用前以1∶9体积比混合。（11）0.1M EDTA 试剂：用1M醋酸钠溶液配制，以10N氢氧化钠调节pH至7.0。 3、实验方法： ⑴标本处理：大鼠断头处死，立即取血及脑组织。脑组织用冰生理盐水冲洗，去除血膜、嗅球和小脑，沿脑中线剖开，取一半脑组织吸干水分称重，加入10倍体积的冰酸性正丁醇，用组织分散器匀浆备用。血液静置凝固后用冷冻离心机分离血清，立即加入10倍体积冰酸性正丁醇摇匀。 ⑵提取过程：同时制备标准管和空白管，与血、脑标本在相同条件下按下图流程进行提取，获得水相A和水相B。 ⑶NE、DA的测定步骤：各管取水相A 0.5ml，按下列流程进行操作： ①水相A 0.5ml＋1/15M 磷酸盐缓冲液 1.5ml＋0.1M EDTA 0.4ml＋碘液0.2ml ②混匀、静置 3min＋碱性磷酸钠（新配）0.4ml ③混匀、静置 3min+5N 醋酸 0.4ml ④混匀，80℃水浴，冷却 ⑤测NE荧光测度，激发波长为 382/488 ⑥继续沸水浴 20min，冷却

高效液相色谱

高效液相色谱高效液相色谱仪高效液相色谱法（High Performance Liquid Chromatography \ HPLC）又称“高压液相色谱”、“高速液相色谱”、“高分离度液相色谱”、“近代柱色谱”等。高效液相色谱是色谱法的一个重要分支，以液体为流动相，采用高压输液系统，将具有不同极性的单一溶剂或不同比例的混合溶剂、缓冲液等流动相泵入装有固定相的色谱柱，在柱内各成分被分离后，进入检测器进行检测，从而实现对试样的分析。该方法已成为化学、医学、工业、农学、商检和法检等学科领域中重要的分离分析技术。目录化学信息基本信息性状描述物理说明药理作用危险说明历史特点主要类型结构组成综述高压输液泵色谱柱进样器检测器馏分收集器数据获取和处理系统分离原理液—固色谱法离子交换色谱法离子对色谱法

离子色谱法空间排阻色谱法流程使用方法综述色谱柱的理论板数分离度拖尾因子测定方法综述面积归一化法主成分自身对照法内标法外标法设备选型综述相对分子质量溶解度化学结构仪器设备综述高压泵梯度洗提进样装置色谱柱检测器应用实例化学信息基本信息性状描述物理说明药理作用危险说明历史特点主要类型结构组成综述高压输液泵色谱柱进样器检测器馏分收集器数据获取和处理系统

分离原理液—固色谱法离子交换色谱法离子对色谱法离子色谱法空间排阻色谱法流程使用方法综述色谱柱的理论板数分离度拖尾因子测定方法综述面积归一化法主成分自身对照法内标法外标法设备选型综述相对分子质量溶解度化学结构仪器设备综述高压泵梯度洗提进样装置色谱柱检测器应用实例展开化学信息基本信息中文名称：葛根素(HPLC),98% 中文别名：葛根黄酮，8-beta-D-葡萄吡喃糖-4',7-二羟基异黄酮英文名称：Puerarin 英文别名：8-(β-D-Glucopyranosyl-7-hydroxy-3-(4-hydroxyphenyl)-4H-1-benzopyran-4-one 纯度：98% CAS号：3681-99-0 分子式：C21H20O9 分子量：416.38

高效液相色谱法测定手册

高效液相色谱法测定手册一目的：制定高效液相色谱法，规范高效液相色谱法的测定操作。二适用范围：适用于高效液相色谱法的测定。三责任者：品控部。四正文 1 简述高效液相色谱法是一种现代液体色谱法，其基本方法是将具一定极性的单一溶剂或不同比例的混合溶液，作为流动相，用泵将流动相注入装有填充剂的色谱柱，注入的供试品被流动相带入柱内进行分离后，各成分先后进入检测器，用记录仪或数据处理装置记录色谱图或进行数据处理，得到测定结果。由于应用了各种特性的微粒填料和加压的液体流动相，本法具有分离性能高，分析速度快的特点。高效液相色谱法适用于能在特定填充剂的色谱柱上进行分离的药品的分析测定，特别是多组分药品的测定、杂质检查和大分子物质的测定。有的药品需在色谱分离前或后经过衍生化反应方能进行分离或检测。常用的色谱柱填充剂有：硅胶，用于正相色谱；化学键合固定相，根据键合的基团不同可用于反相或正相色谱，其中最常用的是十八烷基硅烷（又称ODS）键合硅胶，可用于反相色谱或离子对色谱；离子交换填料，用于离子交换色谱；具一定孔径的大孔填料，用于排阻色谱。高效液相色谱仪基本由泵，进样器，色谱柱，检测器和色谱数据处理系统组成。检测器最常用的为可变波长紫外可见光检测器，其他检测器有如示差折光检测器和蒸发光散射检测器等。色谱信息的收集和处理常用积分仪或数据工作站进行。梯度洗脱，可用两台泵或单台泵加比例阀进行程控实现。 2 高效液相色谱仪的使用要求 2.1 按国家技术监督局国家计量检定规程汇编中“实验室液相色谱仪检定规程（JJG705—90）”的规定作定期检定，应符合规定。 2.2 仪器各部件应能正常工作，管路为无死体积连结，流路中无堵塞或漏液，在设定的检测器灵敏度条件下，色谱基线噪音和漂移应能满足分析要求。 2.3 具体仪器在使用前应详细参阅各操作说明书。

高效液相色谱法测定有机化合物的含量

实验四高效液相色谱法测定有机化合物的含量 [目的要求] 1、了解仪器各部分的构造及功能。 2、掌握样品、流动相的处理，仪器维护等基本知识。 3、学会简单样品的分析操作过程。 [基本原理] 高效液相色谱仪液体作为流动相，并采用颗粒极细的高效固定相的主色谱分离技术，在基本理论方面与气相色谱没有显著不同，它们之间的重大差别在于作为流动相的液体与气体之间的性质差别。与气相色谱相比，高效液相色谱对样品的适用性强，不受分析对象挥发性和热稳定性的限制，可以弥补气相色谱法的不足。液相色谱根据固定向的性质可分为吸附色谱、键合相色谱、离子交换色谱和大小排阻色谱。其中反相键合相色谱应用最广，键合相色谱法是将类似于气相色谱中固定液的液体通过化学反应键合到硅胶表面，从而形成固定相。若采用极性键合相、非极性流动相，则称为正相色谱；采用非极性键合相，极性流动相，则称为反相色谱。这种分离的保留值大小，主要决定于组分分子与键合固定液分子间作用力的大小。反相键合相色谱采用醇-水或腈-水体系作为流动相，纯水廉价易得，紫外吸收小，在纯水中添加各种物质可改变流动相选择性。使用最广泛的反相键合相是十八烷基键合相，即让十八烷基（C18H37―）键合到硅胶表面，这也就是我们通常所说的碳十八柱。 [仪器试剂] 高效液相色谱仪（包括储液器、高压泵、自动进样器、色谱柱、柱温箱、检测器、工作站）、过滤装置待测样品（浓度约100 ppm）、甲醇、二次水 [实验步骤] 1、仪器使用前的准备工作（1）样品与流动相的处理配好的溶液需要用0.45 μm的一次性过滤膜过滤。纯有机相或含一定比便例有机相的就要用有机系的滤膜，水相或缓冲盐的就要用水系滤膜。水、甲醇等过滤后即可使用；水放置一天以上需重新过滤或换新鲜的水。含稳定剂的流动相需经过特殊处理，或使用色谱纯的流动相。（2）更换泵头里清洗瓶中的清洗液流动相不同，清洗液也不同，如果流动相为甲醇-水体系，可以用50%的甲醇；如果流动相含有电解质，通常用95%去离子水甚至高纯水。如果仪器经常使用建议每周更换两次，如果仪器很少使用则每次使用前必须更换。（3）更换托盘里洗针瓶中的洗液洗液一般为：50%的甲醇。

高效液相色谱法测定饮料中的咖啡因(含问题分析)

实验二高效液相色谱法测定饮料中的咖啡因一、目的要求 1、学习高效液相色谱仪的操作。 2、了解高效液相色谱法测定咖啡因的基本原理。 3、掌握高效液相色谱法进行定性及定量分析的基本方法。二、基本原理咖啡因又称咖啡碱，是由茶叶或咖啡中提取而得的一种生物碱，它属黄嘌呤衍生物，化学名称为1,3,7-三甲基黄嘌呤。咖啡因能兴奋大脑皮层，使人精神兴奋。咖啡中含咖啡因约为1.2~1.8%，茶叶中约含2.0~4.7%。可乐饮料、APC 药片等中均含咖啡因。其分子式为C 8H 10O 2N 4，结构式为： N N CH 3 H 3C O O N N CH 3 定量测定咖啡因的传统分析方法是采用萃取分光光度法。用反相高效液相色谱法将饮料中的咖啡因与其它组分（如：单宁酸、咖啡酸、蔗糖等）分离后，将已配制的浓度不同的咖啡因标准溶液进入色谱系统。如流动相流速和泵的压力在整个实验过程中是恒定的，测定它们在色谱图上的保留时间t R 和峰面积A 后，可直接用t R 定性，用峰面积A 作为定量测定的参数，采用工作曲线法（即外标法）测定饮料中的咖啡因含量。三、仪器和试剂 1、Agilent 1100高效液相色谱仪。 2、色谱柱：Kromasil C18，5μ 150×4.6mm 。 3、流动相：30%甲醇（色谱纯）+70%高纯水；流动相进入色谱系统前，用超声波发生器脱气10min 。 4、咖啡因标准贮备溶液：将咖啡因在110℃下烘干1h 。准确称取0.1000g 咖啡因，用二次蒸馏水溶解，定量转移至100mL 容量瓶中，并稀释至刻度。标样浓度1000μg·mL -1。 5、测饮料试液：可乐，茶叶，速溶咖啡。

(完整word版)高效液相色谱仪常用的检测器及其性能

高效液相色谱仪常用的检测器及其性能 (1)紫外吸收(UV)检测器 UV检测器是目前HPLC应用最广泛的检测器。它是依据光吸收原理，以适当的光路和电路，输出一个与试样组分浓度成正比的紫外一可见光吸收信号，其结构与一般光度计相似。其流通池是组分流过的光学通道，池体积一般为8μl，内径小于lmm，长度10mm左右。这种检测器灵敏度高，线性范围宽，对流速和温度变化不敏感，可用于梯度洗脱分离。紫外吸收检测要求被检测样品组分有紫外一可见光吸收，而使用的流动相无吸收，或在被测组分吸收波长处无吸收。一般选择在欲分析物有最大吸收的波长处进行检测，以获得最大灵敏度和抗干扰能力。在没有最大吸收时，可采用末端吸收。检测波长的选择除取决于待测物质的成分和分子结构外，还必须考虑流动相组成、共存组分干扰等因素。特别是各种溶剂都有一定的透过波长下限值，超过这个波长，溶剂的吸收会变得很强，以至于不能很好地测出待测物质的吸收强度。表1列出了HPLC中一些常用的溶剂透过波长的下限。 (2)光电二极管阵列(IJDA)检测器 PDA检测器又称为二极管阵列检测器(diode array UV detector，DAD)，这种检测器以光电二极管阵列作为检测元件，可进行多通道并行检测，在一次色谱测量中，可同时获得时间、波长、吸光度三者的关系，通过计算机处理，在荧光屏上显示出三维图谱，也可作出任意波长的吸光度一时问曲线和任意时间的吸光度一波长曲线。DAD的光路与紫外检测器不同，光源发出的光聚焦后先通过检测池，通过检测池的透射光由全息光栅色散成多色光，不同波长的色散光按波长顺序聚焦在阵列元件上，每个元件对应一定的纳米数。当光照射到光电二极管时，光电二极管产生讯号。由于色散过程及透射光的检测是全波长范围的，可在瞬间检测流经检测池的全吸收光谱，得到三维色谱一光谱图。计算机化的数据处理，还可进行色谱峰光谱相似性比较、峰纯度检测及利用谱图库对掣定样品进行检索等，为定性、定量分析提供更丰富的信息。 ①多通道多波长检测可以同时得到多个波长的色谱图，每个成分均可在最佳波长下检测定量。 ②光谱相似性比较在HPLC中，两个物质出峰时间一致并不能完全说明为同一物质，通过色谱峰紫外光谱一致性比较，可提高测定的可靠性。 ③峰纯度检测对色谱峰峰顶、上、下3个点的光谱进行比较，完全吻合意味这是1个单组分峰，不吻合则表示为未分离峰。并可计算出纯度系数PI，PI值在0~1之问，越接近1，表示峰纯度越好，PI可由计算机自动计算。 ④光谱检索与比较二极管阵列检测器得到的光谱图可分类存储到光谱库中，当测定类似成分时，可调出相关谱图，进行检索和比较，也可通过比较光谱相似系数比较相似性。

莱克多巴胺对健康的危害及其检测方法研究

莱克多巴胺对健康的危害及其检测方法研究莱克多巴胺是“瘦肉精”的替代品，对人体健康有极大的危害。长期以来各种因非法使用β-兴奋剂造成的中毒事件时有发生。目前常用的检测方法有色谱法和免疫分析法。标签：莱克多巴胺危害检测 1 概述莱克多巴胺（Ractopamine）与盐酸克伦特罗（俗称“瘦肉精”）一样，属于β-兴奋剂类药物，在我国都是严禁在动物养殖过程中作为饲料添加剂的药物。β兴奋剂有着非常广泛的生理作用，作为兽药，在临床上常被用于治疗支气管哮喘、支气管痉挛和产科疾病[1，2，3]。当莱克多巴胺的使用量为临床使用量的5～10倍时，具有增加胴体蛋白质含量，促进骨骼肌合成，减少脂肪组织，改善肉质的作用[4]，是良好的营养重分配剂和生长促进剂，可以有效提高瘦肉率和饲料使用率。 2 对人体健康的危害 2.1 危害动物性食品中激素的残留量虽然很低，但其一旦通过食物链进入人体，会对健康产生极大的危害，人体中毒后常表现为心跳过速、心率失常、肌肉震颤、头晕头痛、呕心呕吐、发热寒战等症，特别对患有“富贵病”等症的病人及免疫力较低的老人和儿童危害更大，甚至会导致死亡[5]。莱克多巴胺的毒性作用虽然没有“瘦肉精”强，但是如作为饲料添加剂长期使用，其致癌、致畸、致突变的作用有待深入研究。莱克多巴胺属于激素，会产生肾上腺样作用，会导致过敏反应，可使机体免疫功能下降[6]。同时兽药通过动物的粪便、尿液排泄污染生态环境，也会间接危害人类健康[7]。 2.2 中毒事件自从1998年香港发生第一起“瘦肉精”中毒事件后，近二十年来，我国因非法添加β-兴奋剂而导致的食物中毒事件屡见不鲜。国外也常有相关的食物中毒事件的报道。目前包括我国在内的许多国家都不允许β-兴奋剂用于食用动物的促生长。我国农业部发布的《关于严禁非法使用兽药的通知》中，明令禁止将β-兴奋剂等药物作为饲料添加剂使用。由于我国加大了打击非法使用“瘦肉精”的力度，使得畜肉产品中“瘦肉精”的检出率大大降低。与此同时属于同一类药物，具有相同促生长作用的莱克多巴胺的非法使用却日益严重。为了有效控制β-兴奋剂中毒事件的发生，我国政府部门

多巴胺的计算方法

1. (体重乘以3)mg 加盐水配制至50ml ，多少ml/h 就是多少ug/kg/min. ，一般5ml/h 开始，以后根据血压调速度，例如：一般早产还有新生儿窒息,新生儿肺炎，多巴胺的浓度在 2 至5Ug ,小剂量可以治疗小儿支气管肺炎以改善肺部微循环、降低肺微循环阻力，促进炎症吸收消散，疗效可观, 还有早产机理都是一样的! 9. 体重乘3 等于多巴胺的量(毫克) ，稀释成50 毫升，以多少ml/h 速度泵入就是以多少ug/kg.min 的速度泵入。如：病人体重60 公斤，多巴胺 180mg( 18ml)+32ml生理盐水，配制成50ml，每小时以10ml的速度泵入，就是以10ug/kg.min 的剂量泵入。 10. 新生儿多用小剂量，一般用2.5ug/kg.min 。比如4kg 的体重。100ml GS 中加入多巴胺 4X6=24mg 。 10GS%100 ml +多巴胺24mg速度2.5ml/h。多巴胺的浓度为2.5ug/kg.min,用这种方法更好的调节浓度。速度7 ml /h 的浓度就是7ug/kg.min. 11. 下面是心源性的休克时的治疗! 首要措施是增加心排血量及组织的血液灌流，要分秒必争，尽可能在休克早期获得充分治疗，以免贻误病情而发展为不可逆性休克。具体措施: ( 1)镇静、吸氧，保持呼吸道畅通，良好静脉通道至少 2 个。 ( 2 )多巴胺和硝普钠两药同一静脉匀速经输液泵输入，多巴胺用量为2?10g ? kg -1 ? min -1 ，硝普钠用量为1?6卩g ? kg -1 ? min -1 ，两药比例一般为2:1 (多巴胺用量：硝普钠用量)或1:1，应由小剂量开始，如多巴胺按41 g ? kg -1 ? min -1 及硝普钠按2 i g ? kg -1 ? min -1溶于10%葡萄糖溶液中匀速滴入。在滴入过程中血压上升不满意时，应适当加大多巴胺用量，遇末梢循环改善不满意时，表现为面色仍苍白、皮肤紫绀，四肢厥冷未改善应适当加大硝普钠的用量，休克缓解后，两药应逐渐减量至0.5?1 1 g ? kg -1 ? min -1左右，再观察1?2h,病情稳定可以停药。(3)快速洋地黄化，休克症状好转或休克缓解后使用地戈辛快速化量。 (4)激素早期大量使用，地塞米松1?2mg/kg，甲基强的松龙10?30mg/kg。(5)限制静脉速度，禁忌扩容，匀速低张力，无异常丢失只补充生理维持液。 (6)利尿剂的使用:血容量充足前提下，前负荷增加因素。(7)纠正酸中毒，心源性休克时出现的代谢性酸中毒主要是循环障碍引起，当有效循环恢复后，可自动纠正，当pH小于7.20时，一般采用5%碳酸氢钠1?1.5ml/kg静注1?2次即可。(8)对症处理。 12. 多巴胺的简易方法：个人所需多巴胺用量= 3X体重将多巴胺加入NS至50ml后用泵维持，如果需要A ug/kg/min,则泵的速度为A ml/h 。例：一60kg 的病人，需5ml/kg/min (一支多巴胺为2ml：20mg) 计算：患者所需多巴胺的支数为3X60-20= 9 (支) 所需生理盐水50 —2X 9 = 32 ( ml),这样配成了50ml的溶液然后用泵维持5ml/h 即可这个方法是ICU 的老师教的，大家可以验证的。证明：设病人体重为M, 按上述方法将泵维持在 A ml/h 则每小时所用量为3M/50X A (mg)，按单位换算后为 ( 3M/50X A X 1000)- M- 60= A (ug/kg/min) 6. 100ml == 50ml == 40 ml == 30 ml == 20 ml == 10 ml 6mg 3mg 2.4mg 1.8mg 1.2mg 0.6mg

高效液相色谱测定法标准操作规程

标准操作规程 1目的：建立高效液相色谱测定法操作规程，以使检验操作规化。 2适用围：适用于高效液相色谱测定法检验操作全过程。 3责任：QC人员对本SOP实施负责。 4容高效液相色谱法系采用高压输液泵将规定的流动相泵入装有填充剂的色谱柱，对供试品进行分离测定的色谱方法。注入的供试品，由流动相带入色谱柱，各组分在柱被分离，并进入检测器检测，由积分仪或数据处理系统记录和处理色谱信号。 4.1.对仪器的一般要求和色谱条件高效液相色谱仪由高压输液泵、进样器、色谱柱、检测器、积分仪或数据处理系统组成。色谱柱径一般为3.9~4.6mm，填充剂粒径为3~10μm。超高效液相色谱仪是适应小粒径（约2μm）填充剂的耐超高压、小进样量、低死体积、高灵敏度检测的高效液相色谱仪。 4.1.1.色谱柱反相色谱柱：以键合非极性基团的载体为填充剂填充而成的色谱柱。常见的载体有硅胶、聚合物复合硅胶和聚合物等；常用的填充剂有十八烷基硅烷键合硅胶、辛基硅烷键合硅胶和苯基键合硅胶等。正相色谱柱：用硅胶填充剂，或键合极性基团的硅胶填充而成的色谱柱。常用的填充剂有硅胶、氨基键合硅胶和氰基键合硅胶等。氨基键合硅胶和氰基键合硅胶也可用作反相色谱。离子交换色谱柱：用离子交换填充剂填充而成的色谱柱。有阳离子交换色谱柱和阴离子交换色谱柱。手性分离色谱柱：用手性填充剂填充而成的色谱柱。色谱柱的径与长度，填充剂的形状、粒径与粒径分布、孔径、表面积、键合基团的表面覆盖度、载体表面基团残留量，填充的致密与均匀程度等均影响色谱柱的性能，应根据被分

离物质的性质来选择合适的色谱柱。温度会影响分离效果，品种正文中未指明色谱柱温度时系指室温，应注意室温变化的影响。为改善分离效果可适当提高色谱柱的温度，但一般不宜超过60℃。残余硅羟基未封闭的硅胶色谱柱，流动相pH值一般应在 2?8之间。残余硅羟基已封闭的硅胶、聚合物复合硅胶或聚合物色谱柱可耐受更广泛pH值的流动相，适合于pH 值小于2或大于8 的流动相。 4.1.2.检测器最常用的检测器为紫外-可见分光检测器，包括二极管阵列检测器，其他常见的检测器有荧光检测器、蒸发光散射检测器、示差折光检测器、电化学检测器和质谱检测器等。紫外-可见分光检测器、荧光检测器、电化学检测器为选择性检测器，其响应值不仅与被测物质的量有关，还与其结构有关；蒸发光散射检测器和示差折光检测器为通用检测器，对所有物质均有响应。结构相似的物质在蒸发光散射检测器的响应值几乎仅与被测物质的量有关。紫外-可见分光检测器、荧光检测器、电化学检测器和示差折光检测器的响应值与被测物质的量在一定围呈线性关系，但蒸发光散射检测器的响应值与被测物质的量通常呈指数关系，一般需经对数转换。不同的检测器，对流动相的要求不同。紫外-可见分光检测器所用流动相应符合紫外-可见分光光度法（通则0401）项下对溶剂的要求；采用低波长检测时，还应考虑有机溶剂的截止使用波长，并选用色谱级有机溶剂。蒸发光散射检测器和质谱检测器不得使用含不挥发性盐的流动相。 4.1.3.流动相反相色谱系统的流动相常用甲醇-水系统和乙腈-水系统，用紫外末端波长检测时，宜选用乙腈-水系统。流动相中应尽可能不用缓冲盐，如需用时，应尽可能使用低浓度缓冲盐。用十八烷基硅烷键合硅胶色谱柱时，流动相中有机溶剂一般不低于5％，否则易导致柱效下降、色谱系统不稳定。正相色谱系统的流动相常用两种或两种以上的有机溶剂，如二氯甲烷和正己烷等。品种正文项下规定的条件除填充剂种类、流动相组分、检测器类型不得改变外，其余如色谱柱径与长度、填充剂粒径、流动相流速、流动相组分比例、柱温、进样量、检测器灵敏度等，均可适当改变，以达到系统适用性试验的要求。调整流动相组分比例时，当小比例组分的百分比例X小于等于33%时，允许改变围为0.7X?1.3X；当X大于33%时，允许改变围为X—10%?X+10% 。