杀菌和抑菌试验操作规范

一、总则

适用范围：本方法适用于医疗、卫生、食品等行业的杀菌和抑菌试验。

引用标准：消毒技术规范2002

二、术语

消毒 disinfection

杀灭或清除传播媒介上病原微生物,使其达到无害化的处理。

灭菌 sterilization

杀灭或清除传播媒介上一切微生物的处理。

消毒剂 disinfectant

用于杀灭传播媒介上的微生物使其达消毒或灭菌要求的制剂。

灭菌剂 sterilant

可杀灭一切微生物(包括细菌芽孢)使其达到灭菌要求的制剂。

杀灭时间 killing time, KT

用于生物指示物抗力鉴定时, 指受试指示物样本，经杀菌因子作用不同时间后, 培养后的全部样本均无菌生长的最短作用时间 (min)

杀灭率 killing rate, KR

在微生物杀灭试验中，用百分率表示微生物数量减少的值，以其表达杀灭效果。

灭对数值 killing log value

微生物数量以对数表示时，消毒后与消毒前比较, 以其减少的对数值来表达杀灭效果。

三、菌悬液与菌片的制备

(一) 试验前应选择合适的细菌，在下述规定中表中‘+’为必做试验的微生物，根据消毒剂特定用途或试验特殊

需要，还可增选其他菌株。

(二) 试验器械

A. 无菌蒸馏水

B. 细菌培养基：胰蛋白胨大豆琼脂培养基（TSA），胰蛋白胨大豆肉汤培养基（TSB）和营养肉汤培养基等

C. 刻度吸管（1.0ml、5.0ml、10.0ml），毛细吸管。

D. 数字可调移液器（10μl~200μl）及配套用一次性塑料吸头。

E. 浊度计

F. 游标卡尺

(三) 细菌繁殖体悬液的制备

1 取冻干菌种管，在无菌操作下打开，以毛细吸管加入适量营养肉汤，轻柔吹吸数次，使菌种融化分散。取含 5.0 ml～10.0ml 营养肉汤培养基试管，滴入少许菌种悬液，置 37 ℃培养18h～24h。用接种环取第 1 代培养的菌悬液，划线接种于营养琼脂培养基平板上，于 37℃培养 18h～24h。挑取上述第

2 代培养物中典型菌落，接种于营养琼脂斜面，于 37℃培养 18h～24h，即为第

3 代培养物。

2 取菌种第 3代～14 代的营养琼脂培养基斜面新鲜培养物（18h～24h），用 5.0ml 吸管吸取 3.0 ml～5.0ml 稀释液加入斜面试管内，反复吹吸，洗下菌苔。随后，用5.0ml 吸管将洗液移至另一无菌试管中，用电动混合器混合（振荡）20s，或在手掌上振敲 80 次，以使细菌悬浮均匀。

3 初步制成的菌悬液，先用细菌浓度比浊测定法粗测其含菌浓度，然后以稀释液稀释至所需使用的浓度。

4 细菌繁殖体悬液应保存在 4℃冰箱内备用。应当天使用不得过夜。

5 怀疑有污染时，应以菌落形态、革兰染色与生化试验等法进行鉴定。

四、菌片的制备程序

1 滴染法染菌时，先用浊度计测定的菌悬液浓度，调至含菌量为1～5×108cfu/ml将经灭菌的载体片平铺于无菌平皿内，菌液滴加量每片为10μl。用10μl移液器接灭菌塑料吸头，滴染菌液，并用接种环涂匀整个载体表面。滴染菌液后，染菌载体可置37℃温箱内烤干（约20min～30min），或置室温下自然阴干后再使用。

2 每个菌片的染菌量，即回收菌数，按活菌培养计数所得结果，应为 5×105 cfu/片～5×106 cfu/片。

3 配制菌悬液和制备菌片时，保持环境的洁净和安静，严格按无菌要求操作，以防污染杂菌，影响随后杀菌试验的结果。

五、活菌培养计数技术

1 取含 5.0ml 稀释液无菌试管，对菌片或小型固体样本直接投入即可，对棉拭则将其采样端剪入管内，每管一份样本。而后，用手掌上用力振敲 80 次，形成菌悬液。

2 将试管按需要数量分组排列于试管架上，每管加入 4.5ml 稀释液。各组由左向右，逐管标上 10-1、10-2、10-3......等。

3 将菌悬液样本在手掌上用力振敲 80次，吸取 0.5ml加至 10-1 管内。

4 将 10-1 管依前法在手掌上用力振敲 80次，混匀，再吸取出 0.5ml 加入10-2 管内。如此类推，直至最后一管。

5 选择适宜稀释度试管（以预计生长菌落数每平板为 30cfu～300cfu 者为宜），吸取混合均匀的悬液 1.0ml 加于无菌平皿内。每一稀释度接种 3个平皿。需接种2个～3个不同稀释度。

6 将冷至 40℃～45℃的熔化营养琼脂培养基，倾注于已加入样液的平皿中，每平皿 15ml～20ml。置 37℃温箱内培养

7）每日观察细菌生长情况。培养至规定时间（细菌繁殖体为 48h，白色念珠菌与细菌芽孢为 72h），计数最终结果的菌落数。

六、杀菌试验

1 首先按产品说明书要求配制消毒液。一律使用无菌硬水配制，配制的浓度为待测浓度的1.25倍，置20℃±1℃水浴备用。取已配制浓度为1×108cfu/ml～5×108cfu/ml,(实际作用时菌浓度为107cfu/ml）。在无菌大试管，先加入0.5ml有机干扰物质，再加入0.5ml试验用菌悬液，混匀，置 20℃±1℃水浴中5min后，用无菌吸管吸取上述浓度消毒液 4.0 ml 注入其中，迅速混匀并立即记时。

2 待菌药相互作用至各预定时间，分别吸取 0.5ml 菌药混合液加于 4.5ml 经灭菌的中和剂中，混匀。

3 各管菌药混合液经加中和剂作用 10min 后，分别吸取 1.0ml样液，按活菌培养计数方法测定存活菌数，每管样液接种 2 个平皿。如平板上生长的菌落数较多时，可进行系列10倍稀释后，再进行活菌培养计数。

4 同时用稀释液代替消毒液，进行平行试验，作为阳性对照。

5 所有试验样本均在 37℃温箱中培养，对细菌繁殖体培养48h 观察最终结果；对细菌芽孢需培养 72h 观察最终结果。

6 试验重复3次，计算各组的活菌浓度（cfu/ml），并换算为对数值（N），并按下式计算杀灭对数值：

杀灭对数值 (KL)＝对照组平均活菌浓度的对数值（No）-试验组活菌浓度对数值（Nx）

1) 在悬液定量杀灭试验中,各次试验阴性对照无菌生长，阳性对照回收菌数在1×107cfu/ml～5×107cfu/ml范围内，各次试验的杀灭对数值均≥5，为消毒合格。

2) 在载体定量杀灭试验中，各次试验阴性对照无菌生长，阳性对照回收菌数在5×105cfu/片～5×106 cfu/片范围内，各次试验的杀灭对数值均≥3，为消毒合格。

3) 空气消毒实验室试验和模拟现场试验，各次试验阴性对照无菌生长，阳性对照菌数均在5×104 cfu/m3～5×105cfu/m3范围内，各次试验的杀灭率≥99.90%，现场试验各次自然菌消亡率≥90.00%,为消毒合格。

七、抑菌试验

1) 抑菌片的制备：取无菌并干燥的滤纸片。每片滴加抑菌剂溶液 20μl，后将滤纸片平放于清洁的无菌平皿内，开盖置温箱(37℃) 中烤干，或置室温下自然干燥后备用。溶出性抗（抑）菌产品，可直接制成直径为 5mm，厚不超过 4mm圆片(块)，每 4 片(块) 一组。

2) 阴性样片的制备：取无菌干燥滤纸片，每片滴加无菌蒸馏水 20μl，干燥后备用。溶出性抗（抑）菌产品的阴性对照样本，取同种材质不含抑菌成份的相同大小的样品。

3) 试验菌的接种：用无菌棉拭子蘸取浓度为 5～5×106cfu/ml 试验菌悬液，在营养琼脂培养基平板表面均匀涂抹3次。每涂抹1次，平板应转动 60°，最后将棉拭子绕平板边缘涂抹一周。盖好平皿，置室温干燥 5min。

4) 抑菌剂样片贴放：每次试验贴放1个染菌平板，每个平板贴放4片试验样片，1 片阴性对照样片，共 5 片。用无菌镊子取样片贴放于平板表面。各样片中心之间相距 25mm以上，与平板的周缘相距 15 mm 以上。贴放好后，用无菌镊子轻压样片，使其紧贴于平板表面。盖好平皿，置37℃温箱，培养16h～18h 观察结果。用游标卡尺测量抑菌环的直径 (包括贴片) 并记录。试验重复3次。

5) 测量抑菌环时，应选均匀而完全无菌生长的抑菌环进行。测量其直径应以抑菌环外沿为界。

6)评价规定

抑菌作用的判断：

抑菌环直径大于 7mm 者, 判为有抑菌作用。

抑菌环直径小于或等于 7mm 者, 判为无抑菌作用。

3 次重复试验均有抑菌作用结果者, 判为合格。

阴性对照组应无抑菌环产生。否则试验无效。

实验室基本操作规范、规程、管理办法

实验室基本操作规范、规程为保证化验工作质量，保证人身及设备安全，规范化验操作步骤，特制定本规程。一操作安全（一）化验室用电炉、酒精灯等热源设备，操作人员一定要注意严防火灾发生。（二）化验室用高压灭菌设备等，操作人员一定要严格按规程操作，防止蒸汽灼伤。（三）操作人员配制和使用强腐蚀性药品时，必须做好相应的防护，严防人身伤害的发生。二环境和卫生（一）基本要求 1 进入化验室前必须换上专用拖鞋。 2 化验室内不得有蚊蝇。 3 化验室要保持清洁、有序；各房间要定期打扫，消毒；物品要定点放置且摆放整齐。 4 活体微生物要及时处理，废弃的平板要先洗完再灭菌。 5 化验室人员要注意个人卫生，勤洗衣服，勤洗澡，勤剪指甲等。（二）无菌室使用要求 1 无菌室使用前须先关闭紫外灯管，打开风机，半小时后即可进行无菌操作。操作前要先用75％酒精棉球消毒手

部、腕部等，对放在工作台上的物品也要用棉球擦拭，然后严格按无菌要求进行操作，要尽量缩短操作时间。 2 使用完毕后，要将台面清理干净，关闭风机，再次将台面用酒精棉球擦拭干净，然后打开紫光灯离开。 3 无菌室应每周清扫一次，用来苏水对地面及门窗进行擦拭，如必要时采用甲醛薰蒸法。三基本操作（一）器皿的洗涤与包扎 1 新器皿因含有游离碱，先用1%盐酸处理一夜，再用清水洗，也可用水煮0.5-1小时后，取出再用水清洗干净。 2 常用玻璃仪器如三角瓶、培养皿、试管、漏斗、烧杯等，先用毛刷沾洗衣粉或肥皂粉刷洗，然后用自来水冲洗干净，放入70-80烘箱中烘干或自然晾干，放入清洁柜内备用。检查器皿的内壁，若水均匀分布成一薄层而不出现水珠，说明油污已除净，即可烘干备用。 3 用来做油镜观察的玻片，可以先用滤纸先把油污轻轻地擦去，然后放入肥皂水或洗衣粉水中浸泡，然后用清水冲洗，晾干备用，用时浸泡在75%浓度洒精中。 4 移液管的使用一般先用水冲洗，再插入洗液中，浸泡数十分钟后取出，用自来水冲洗干净即可。 5 接种瓶使用时先用水冲洗，然后用洗衣粉刷洗干净，再用清水冲洗，然后晾干；接种瓶口和胶管口用棉塞塞住，然后盖以纱布、牛皮纸进行包扎，放入蒸柜中进行灭菌。（二）高压蒸汽锅的使用方法 1 往灭菌锅内加水至高水位处；

常用消毒与灭菌方法

常用消毒与灭菌方法含氯消毒剂 C.10．1 适用范围适用于物品、物体表面、分泌物、排泄物等的消毒。 C.10.2 使用方法 C.10.2.1 消毒液配制根据新产品有效氯含量，按稀释定律，用蒸馏水稀释成所需浓度。具体计算方法及配制步骤按C.9.1.2.1进行。 C.10.2.2 消毒方法 C.10.2.2.1 将待消毒的物品浸没于装有含氯消毒剂溶液的容器中，加盖。对细菌繁殖体污染物品的消毒，用含有效氯500mg/L的消毒液浸泡＞10min，对经血传播病原体、分支杆菌和细菌芽孢污染物品的消毒，用含有效氮2000mg/L～5000mg/L消毒液，浸泡＞30min。 C.10.2.2.2 擦拭法大件物品或其他不能用浸泡消毒的物品用擦拭消毒，消毒所用的浓度和作用时间同浸泡法。 C10.2.2.3 喷洒法对一般污染的物品表面，用含有效氯400 mg/L~700 mg/L的消毒液均匀喷洒，作用10min~30min；对经血传播病原体、结核杆菌等污染表面的消毒，用含有效氯2000mg/L的消毒液均匀喷洒，作用＞60min。喷洒后有强烈的刺激性气味，人员应离开现场。

C10.2.2.4干粉消毒法对分泌物、排泄物的消毒，用含氯消毒剂干粉加入分泌物、排泄物中，使有效氯含量达到10000mg/L，搅拌后作用＞2h；对医院污水的消毒，用干粉按有效氯50mg/L用量加入污水中，并搅拌均匀，作用2h后排放。 C10.3 注意事项 C10.3 .1粉剂应于阴凉处避光、防潮、密封保存；水剂应于阴凉处避光、密闭保存。使用液应现配现用，使用时限≤24h。 C10.3.2 配置漂白粉等粉剂溶液时，应戴口罩、手套。 C10.3.3 未加防锈剂的含氯消毒剂对金属有腐蚀性，不应做金属器械的消毒。加防绣剂的含氯消毒剂对金属器械消毒后，应用无菌蒸馏水冲洗干净，干燥后使用。 C10.3.4 对织物有腐蚀和漂白作用，不应做有色织物的消毒。 .16 煮沸消毒 C.16.1 适用范围适用于金属、玻璃制品、餐饮具、织物或其他耐热、耐湿物品的消毒。 C.16.2 使用方法将待消毒物品完全浸没水中，加热水沸腾后维持≥15min。

3常用消毒方法及注意事项

3常用消毒方法及注意事项 -CAL-FENGHAI.-(YICAI)-Company One1

常用消毒方法及注意事项内容一：84消毒液正确使用方法及注意事项一、84消毒液的正确使用方法：首先清洗时带好手套和口罩，避免直接接触。此外在清洗一般物体表面时，与水（冷水）的配比为1:100，消毒时间约为20分钟，而且擦拭、喷洒、拖洗消毒后要用清水洗净。在用84清洗白色织物时，浓度要低，一般是1:160，配比好后将衣物放入水中，切不可将84消毒液直接倒在衣物上或用84消毒液清洗有色衣物，浸泡时间不宜过长，20分钟即可，且在浸泡消毒后仍要用清水多次冲洗。学校在除臭消毒时，清理下水管道、厨房水槽、沟渠、垃圾桶等，可直接倒入84消毒原液两瓶盖或者有原液喷洒在物品的表面，10分钟后再用清水冲洗干净。许多人正是忽略了清水二次清理这一步而导致84中的刺激性气味刺激了呼吸道，对人体造成了损伤。学校可以借鉴医院清洗医院污染物品时配比为1:50，且消毒时间长至30分钟。在浸泡、喷洒消毒后用清水再清洗1-2遍洗净晾干。84消毒液使用后会残留在物体表面，挥发进入空气中，其刺激性气味会刺激人的呼吸道，其中的氯也会对水源造成污染，增大了致癌、致畸的风险，对人体造成危害，因此医院在用84消毒液稀释液清扫完地面、扶手时，要再用清水擦拭2遍以防残留物对人体造成损害。

在使用84消毒液后，还要注意开窗通风，使空气流通尽快散尽残留的刺激性气味。在清理完器具用品后，最好在太阳下晾晒一会。二、84消毒液使用不当的后果: 若家庭中在使用84消毒液后未进行二次清洗和通风，那么在吸入84消毒液挥发出来的气体后，机体可能会出现咳嗽、胸闷、呼吸困难等症状表现。此时应将患者迅速的转往空气新鲜处，保持患者的呼吸道通畅，再即刻联系就医。有一则新闻，家住北京的王女士在清洁马桶时将洁厕灵和84消毒液一起倒入马桶中，结果在清洗一段时间后晕倒，被送入医院抢救。只是清洗马桶，为什么会造成这么严重的后果呢因为洁厕灵的成分中含有盐酸，84消毒液的主要成分是次氯酸钠，二者混合会发生化学反应，产生有毒的氯气。氯气通过呼吸道侵入人体并溶解在黏膜所含的水分里，生成次氯酸和盐酸，对上呼吸道黏膜造成损伤：次氯酸使组织受到强烈的氧化；盐酸刺激黏膜发生炎性肿胀，使呼吸道黏膜浮肿，大量分泌黏液，造成呼吸困难。三、注意事项: 大家切记不要将84消毒液与酸性清洁产品混用，在不了解产品的成分时，每次只使用一种清洁产品，确保不会发生化学反应，危害人体。在储存酒精、84消毒液时，无论量多量少，切记不要二者混储，必须分开储存，并妥善

化验室安全操作规范标准

化验室安全操作规范一、玻璃仪器的安全使用 1.玻璃仪器在使用前要详细检查，有裂纹或损坏的不准使用。 2.搬取装有液体1升以上的瓶子时，必须一手握住颈部，一手托瓶底，不准单独握住颈部以防负荷大、重而崩裂脱落，较大的瓶子宜放在瓶架上搬取。 3.装碱性液的瓶子，宜使用胶皮塞，以免腐蚀粘住。 4.清洗装过腐蚀性、危险性物质的器具，必须将危险物质除净后，再用水清洗干净。 5.非耐热器皿和广口瓶、量筒、表面皿、称量瓶等，禁止用火直接加热，不得在器皿内进行放热的溶液操作，如有水珠应放在烘箱中烘干。 6.注意勿使玻璃棒和瓷器局部受热、受冷。例如在加热、冷却设备的操作过程中，防止器皿局部急剧的温度变化而破裂。 7. 使用分离漏斗或其它密闭玻璃容器摇振挥发性液体时，应经常不断的放出仪器中的气体，以免瓶塞冲出或爆裂二、电器设备的安全使用 1.严格遵守电器作业安全规定，非电工严禁从事电器作业。检修电器设备、线路、开关、照明、安装临时电源作业，均应由电工承担。 2.仪器设备，必须有可靠的安全接地，推上电闸时要扣紧，拉下电闸时要彻底，推进必须快速。 3.在同一电源上，不能同时使用过多仪器设备，以免造成负荷过大。 4.使用电器设备时，要检查电源电压是否与使用设备的电压相符。 5.绝缘不合格,导线裸露或破裂,发现漏电的电器设备仪器,不准使用,要尽快修理。 6.如电器设备的线路一旦发热或温度超过规定,而发生故障,应立即切断电源，由电工检修。 7.电器设备应严防受潮，禁止用湿布擦拭电源开关。如有水珠附上，禁止拉、合电闸。 8.在加热器的附近，不得放置易爆物品，当用电炉加热的容器破裂时，必须切断电源，然后再进行处理。 9..当室内有易燃易爆气体和蒸汽时，必须分析合格后，方可给电器设备和仪器送电。10在有易燃易爆气体、粉尘的室内，所用的电器设备和照明应符合防爆要求。 11.发现有人触电时，应先切断电源，并立即进行抢救。

常用几种灭菌方法

常用灭菌方法简介一、辐射灭菌法本法系指灭菌物品置于适宜放射源辐射的γ射线或适宜的电子加速器发生的电子束中进行电离辐射而达到杀灭微生物的方法。本法最常用的60Co-γ射线辐射灭菌。医疗器械、容器、生产辅助用品、不受辐射破坏的原料药及成品等均可用本法灭菌。采用辐射灭菌法灭菌后的产品其SAL应《10-6。γ射线辐射灭菌所控制的参数主要是辐射剂量（指灭菌物品的吸收剂量）。该剂量的制定应考虑灭菌物品的适应性及可能污染的微生物最大数量及最强抗辐射力，事先应验证所使用的剂量不影响被灭菌物品的安全性、有效性及稳定性。常用的辐射灭菌吸收剂量为 25KGy。对最终产品、原料药、某些医疗器材应尽可能采用低辐射剂量灭菌。灭菌前，应对被灭菌物品微生物污染的数量和抗辐射强度进行测定，以评价灭菌过程赋予该灭菌物品的无菌保证水平。灭菌时，应采用适当的化学或物理方法对灭菌物品吸收的辐射剂量进行监控，以充分证实灭菌物品吸收的剂量是在规定的限度内。如采用与灭菌物品一起被辐射的放射性剂量计，剂量计要置于规定的部位。在初安装时剂量计应用标准源进行校正，并定期进行再校正。 60Co-γ射线辐射灭菌法常用的生物指示剂为短小芽孢杆菌孢子(Spores of Bacillus pumilus)。二、干热灭菌法本法系指将物品置于干热灭菌柜、隧道灭菌器等设备中，利用干热空气达到杀灭微生物或消除热原物质的方法。适用于耐高温但不宜用湿热灭菌法灭菌的物品灭菌，如玻璃器具、金属材质容器、纤维制品、固体试药、液状石蜡等均可采用本法灭菌。干热灭菌条件一般为160~170℃*120min以上、170~180℃*60min以上或250℃*45min 以上，也可采用其他温度和时间参数。应保证物品灭菌后的SAL《10-6。干热过度杀灭后物品的SAL应《10-12，此时物品一般无需进行灭菌前污染微生物的测定。250℃*45min的干热灭菌也可除去无菌产品包装容器及有关生产灌装用具中的热原物质。采用干热灭菌时，被灭菌物品应有适当的装载方式，不能排列过密，以保证

常见的灭菌方法

常见灭菌方法有物理方法，化学方法及生物方法，但生物方法利用生物因子去除病原体，作用缓慢，而且灭菌不彻底，一般不用于传染疫源地消毒，故消毒主要应用物理及化学方法。（一）物理消毒法 1．机械消毒一般应用肥皂刷洗，流水冲净，可消除手上绝大部分甚至全部细菌，使用多层口罩可防止病原体自呼吸道排出或侵入。应用通风装置过滤器可使手术室、实验室及隔离病室的空气，保护无菌状态。 2．热力消毒包括火烧、煮沸、流动蒸气、高热蒸气、干热灭菌等。能使病原体蛋白凝固变性，失去正常代谢机能。（1）火烧凡经济价值小的污染物，金属器械和尸体等均可用此法。简便经济、效果稳定。（车间的一些金属器皿可以用此法进行消毒灭菌。咱们涂抹的时候剪刀要在酒精灯上灼烧就是要达到灭菌的目的。）（2）煮沸耐煮物品及一般金属器械均用本法，100℃1～2分钟即完成消毒，但芽胞则须较长时间。炭疽杆菌芽胞须煮沸30分钟，破伤风芽胞需3小时，肉毒杆菌芽胞需6小时。金属器械消毒，加1～2%碳酸钠或0.5%软肥皂等碱性剂，可溶解脂肪，增强杀菌力。（可以适用于车间的金属器械消毒杀菌）棉织物加1%肥皂水15L/kg，有消毒去污之功效。物品煮沸消毒时，不可超过容积3/4，应浸于水面下。注意留空隙，以利对流。备注：车间最常用的消毒方法是用90℃以上的沸水进行消毒。（3）流动蒸气消毒相对湿度80～100%，温度近100℃，利用水蒸气在物何等表面凝聚，放出热能，杀灭病原体。并当蒸气凝聚收缩产生负压时，促进外层热蒸气进入补充，穿至物品深处，加速热量，促进消毒。（4）高压蒸气灭菌（微生物室使用的灭菌方法）

通常压力为98.066kPa，温度121～126℃，15～20分钟即能彻底杀灭细菌芽胞，适用于耐热、潮物品。（5）干热灭菌干热空气传导差，热容量小，穿透力弱，物体受热较慢。需160～170℃，1～2小时才能灭菌。适用于不能带水份的玻璃容器，金属器械等。不同病原体的热耐受力，以热死亡时间表达。 3．辐射消毒有非电离辐射与电离辐射二种。前者有紫外线，红外线和微波，后者包括丙种射线的高能电子束（阴极射线）。红外线和微波主要依靠产热杀菌。电离辐射设备昂贵，对物品及人体有一定伤害，故使用较少。目前应用最多为紫外线，可引起细胞成份、特别是核酸、原浆蛋白和酸发生变化，导致微生物死亡。紫外线波长范围2100～3280A，杀灭微生物的波长为2000～3000A，以2500～2650A作用最强。对紫外线耐受力以真菌孢子最强，细菌芽胞次之，细菌繁殖体最弱，仅少数例外。紫外线穿透力差，3000A以下者不能透过2mm厚的普通玻璃。空气中尘埃及相对湿度可降低其杀菌效果。对水的穿透力随深度和浊度而降低。但因使用方便，对药品无损伤，故广泛用于空气及一般物品表面消毒。照射人体能发生皮肤红斑，紫外线眼炎和臭氧中毒等。故使用时人应避开或用相应的保护措施。日光曝晒亦依靠其中的紫外线，但由于大气层中的散射和吸收使用，仅39%可达地面，故仅适用于耐力低的微生物，且须较长时间曝晒。此外过滤除菌除实验室应用外，仅换气的建筑中，可采用空气过滤，故一般消毒工作难以应用。（二）化学消毒法根据对病原体蛋白质作用，分为以下几类。 1．凝固蛋白消毒剂包括酚类、酸类和醇类。（1）酚类主要有酚、来苏、六氯酚等。具有特殊气味，杀菌力有限。可使纺织品变色，橡胶类物品变脆，对皮肤有一定的刺激，故除来苏外应用者较少。酚（石炭酸）（carbolic acid）：无色结晶，有特殊臭味，受潮呈粉红色，但消毒力不减。为细胞原浆毒，对细菌繁殖型1：80～1：110溶液，20℃30分钟可杀死，但不能杀灭芽胞和抵抗力强的病毒。加肥皂可皂化脂肪，溶解蛋白质，促进其渗透，加强消毒效应，但毒性较大，对皮肤有刺激性，具有恶臭，不能用于皮肤消毒。来苏（煤酚皂液）（lysol）：以47.5%甲酚和钾皂配成。红褐色，易溶于水，有去污作用，杀菌力较石炭酚强2～5倍。常用为2～5%水溶液，可用于喷洒、擦试、浸泡容器及洗手等。细菌繁殖型10～15分钟可杀灭，对芽胞效果较差。六氯酚

一、常用灭菌消毒方法教案

一、常用灭菌消毒方法一、常用灭菌消毒方法 1、干热灭菌法火焰灭菌（灼烧灭菌）、干热灭菌 2、湿热灭菌巴氏消毒、煮沸消毒、高压蒸汽灭菌、间歇加热灭菌、实罐灭菌 3、过滤除菌 4、放射线灭菌二、常用的消毒剂理想的消毒剂：杀菌力强，使用方便；价廉；对人、畜无害；能长期保存；溶解度大；无腐蚀性等。消毒剂种类：氧化剂、重金属盐、有机化合物相对药效：三、影响灭菌与消毒因素 1、微生物种类 2、培养基 3、消毒剂 4、环境因素 5节：化学疗剂对微生物作用能直接干扰病原微生物的生长繁殖并可用于治疗感染性疾病的化学药物。

化学疗剂能选择性地作用于病原微生物新陈代谢的某个环节，使其生长受到抑制或致死。一、抗代谢物结构上类似，竞争性地与酶结合，只有当正常代谢物量少或不存在时才起作用。最常用的是磺胺类药物。是氨苯磺胺衍生物，其结构与对氨基苯甲酸（PABA）类似，而PABA是叶酸分子组成。叶酸是辅酶，在氨基酸、维生素合成中起重要作用，许多细菌需自己合成叶酸，而人和动物利用现成叶酸，因此不受磺胺干扰。还有异烟肼rimifon，是吡哆醇对抗物。二、抗生素作用范围：抗菌谱作用位点： 1、抑制细胞壁合成：青霉素，多氧霉素 2、影响细胞膜功能：多肽类，多烯类 3、干扰蛋白合成：抑制而非杀死 4、阻碍核酸合成：对细胞有毒三、微生物抗药性对药物的适应性即是抗药性。抗药性主要表现（产生机制） 1、菌体内产生钝化或分解药物的酶

2、改变膜的透性而导致抗药性产生 3、被药物作用的部位发生改变 4、形成救护途径。五章：微生物遗传遗传heredity—亲代将其特有的生物学特性传递给子代。遗传性—子代总保持与亲代相同的生物学特性。遗传型genotype—生物体所具有的全套遗传物质总称。又称基因型。表型phenotype—特定环境中生物体表现出的种种形态与生理特征。变异variation—遗传型的改变。适应或饰变modification—表型的改变。基因—指带有足以决定一个蛋白质全部组成所需信息的最短DNA片段。菌株克隆—指一组遗传型相同的细胞群。微生物在遗传上特点： 1、微生物细胞结构简单，营养体一般为单倍体，方便建立纯系。 2、很多常见微生物都易于人工培养，快速、大量生长繁殖。 3、对环境因素的作用敏感，易于获得各类突变株，操

食品常用杀菌方法

食品常用杀菌方法（1）超高压杀菌技术:食品超高压杀菌(高静水压杀菌)就是食品物料以某种方式包装完好后，放人液体介质(通常是食用油、甘油、油与水的乳液)中，100～1000 MPa压力下作用一定时间后，使之达到灭菌的要求。其灭菌的基本原理就是压力对微生物的致死作用，主要是通过破坏细胞膜抑制酶的活性和影响DNA等遗传物质的复制来实现的。在400～600 MPa的压力下，可以杀灭细菌、酵母菌、霉菌，避免了一般高温杀菌带来的不良变化，因此，能更好地保持食品固有的色、香、味，达到延长保存期的效果。（2）低温杀菌:低温杀菌是对食品中存在的微生物进行部分杀菌的加热方法。通常使用100℃以下的温度。由于低温杀菌后，食品中的菌残存较多，为了延长产品的货架期，再使用冷藏、发酵、加入添加剂、脱氧等加工技术。该法主要适用于pH 4.5以下的酸性食品及采用较强加热处理会明显导致品质降低的食品。在近几年，对牛奶及保存期较短的商品也采用该法。（3）巴氏杀菌法:巴氏杀菌是指温度比较低的热处理方式，一般在低于水沸点温度下进行。它是一门古老的技术，由19世纪法国医生巴斯德首创，至今仍有一定的应用价值。巴氏杀菌是最早的杀菌方法，利用热水作为传热介质。杀菌条件为61～63 ℃，30 min，或72～75 ℃，10～15 min。加热时应注意物料表面温度较内部温度低4～5 ℃；此外，当表面产生气泡时，泡沫部分难以达到杀菌要求。这种杀菌方法，由于所需时间长，生产过程不连续，长时间受热容易使某些热敏成分变化，杀菌也不够理想。目前在大中型食品厂中已很少采用。（4）超高温瞬间杀菌:超高温杀菌简称UHT杀菌。一般加热温度为125～150 ℃，加热时间2～8 s，加热后产品达到商业无菌要求的杀菌过程称为UHT杀菌。这种杀菌方法，能在瞬间达到杀菌目的，杀菌效果特别好，几乎可以达到或接近灭菌要求，而引起的化学变化很小。它具有提高处理能力、节约能源、缩小设备体

实验室分子生物学实验基本操作要求规范及注意事项

实验室分子生物学实验基本操作规范及注意事项一、酶与载体的分装酶类与载体：T载体(50 ng/μl)用灭菌水稀释4倍（12.5 ng/μl）后分装成10 μl或20 μl；连接酶（solutionΙ）按5 μl分装； dNTP（10 mM）分装成50 μl；无菌水分装成1 ml；注意：（1）所有分装都必须用已灭菌的管。（2）所有工具酶和载体的使用过程均在冰浴中进行。（3）工具酶、载体以及试剂盒等实验室共用物品，用完后必须及时放回原处，以免耽误他人使用。（4）当你发现你使用的是最后一管（盒）公用物品时，请马上告知负责人购买，以免耽误使用。（5）感受态，氨苄青霉素和IPTG由研究生轮流负责制备。每人负责六个月。其他试剂则由第一位使用新包装的同学分装。由于分子实验工具酶比较容易失活，必须在冰上进行分装。二、常见抗生素及IPTG的配置以氨苄青霉素为例： 1．准备足够量的1.5 ml的EP管、两个100 ml的离心管、0.22 μm水系滤器、注射器、蒸馏水，以上用品均要进行高压灭菌。 2. 洁净工作台紫外灭菌，然后进行以下操作。 3．称取2 g的氨苄青霉素粉末于离心管中，加入灭菌水至总体积为20 ml，轻摇离心管，至氨苄青霉素粉末完全溶解，以免过滤时堵塞滤膜。 4．用注射器吸取配制好的溶液，然后把滤器安在注射器上，缓缓推动注射器活塞，把溶液经滤膜推至100 ml的离心管中。注意：动作要缓和，使滤出液出口正对着离心管，还要防止染菌。

5．把100 ml离心管中已除菌的氨苄青霉素溶液分装到1.5 ml的EP管中，每管 0.5 ml。在EP管上做好标记，包括名称、浓度、日期等。 6．把做好标记的盛有氨苄青霉素的EP管于-20℃保存。注意：当你发现你使用的是最后一管抗生素时，请马上告知有关人员及时配制，以免耽误使用。表1.常见抗生素的储存浓度及工作浓度名称储存浓度工作浓度氨苄青霉素（ampicillin）100 mg/ml 50 μg/ml～100 μg/ml 卡那霉素（kanamycin）10 mg/ml 10 μg/ml～50 μg/ml 氯霉素（chloramphenicol）25 mg/ml 12.5 μg/ml～25 μg/ml 链霉素（streptomycin）50 mg/ml 10 μg/ml～50 μg/ml 四环素（tetracyyline）10 mg/ml10 μg/ml～50 μg/ml IPTG 1 M 0.05-0.6 mM

灭菌方法汇总

灭菌法系指用适当的物理或化学手段将物品中活的微生物杀灭或除去的方法。本法适用于无菌、灭菌制剂、原料、辅料及医疗器械等生产过程中物品的灭菌。无菌物品是指物品中不含任何活的微生物。然而，对于任何一批灭菌产品来说，绝对无菌是既无法保证也无法被用试验来证实的，因为不可能对每一最小包装的产品进行无菌试验。事实上，物理或化学灭菌方法手段灭菌试验表明：微生物的杀灭曲线遵循对数规则，，因此，所以，批已灭菌物品的无菌性标准一般在概率意义上定义为污染单位低到可接受的程度，一般用以物品灭菌后微生物存活的概率-无菌保证值水平SAL (Sterility Assurance Level)表示。最终灭菌产品产品微生物存活的概率的无菌保证值一般不得低于高于10-6，即灭菌后微生物存活的概率不得大于百万分之一。无菌保证值与灭菌物品中存在的微生物数量及特性密切相关，因此在产品生产的各个环节均应采取各种有效的手段(包括过滤除菌等措施)来降低待灭菌产品的微生物污染并控制在规定的限度内。已灭菌产品达到的无菌保证水平可通过验证确定。灭菌产品的无菌保证并不能依赖于最终产品的无菌检验，而是取决于生产过程中采用合格的灭菌工艺、严格的GMP管理和良好的全面质量保证体系。灭菌工艺的制定确定应综合考虑其被灭菌物品的性质、灭菌方法的有效性、和经济性及、灭菌后产品物品的完整性和稳定性等因素。灭菌程序的验证是无菌保证的重要内容必要条件。对灭菌产品(包括最终容器及包装)而言，；灭菌方法在实际应用前必须对其灭菌程序经进行验证后，方可交付正式使用。验证内容包括： ⑴撰写确定验证方案及制定评估标准。 ⑵确认灭菌设备技术资料齐全、安装正确,并能处于正常运行（安装确认）。 ⑶确认关键控制设备和仪表能在规定的参数范围内正常工作运行（运行确认）。 ⑷采用灭菌物品或模拟物品进行重复试验，提供各参数范围，确认灭菌效果符合规定（性能确认）。 ⑸汇总并完善各种文件和记录，撰写记录完整的验证报告。日常生产中，应对灭菌过程程序的运行情况进行监控，确认灭菌过程中各关键参数（如温度、压力、时间、湿度、灭菌气体浓度及吸收的辐照吸收剂量等）均在验证确定的范围内。；已采用的灭菌程序中关键的设备和工艺应定期进行再验证。当灭菌程序发生较大变化发生变更时，（包括灭菌柜中灭菌物品放置装载方式和数量发生的改变）时，应进行重新再验证。产品在这种概率意义上的无菌保证并不能依赖于最终产品的无菌检验，而是取决于生产过程中采用合格的灭菌工艺、严格的GMP管理和良好的全面质量保证体系。这意味着批生产过程的监控将比批无菌试验结果更能反映产品的无菌保

实验室分子生物学实验基本操作规范及注意事项

菌。 2. 洁净工作台紫外灭菌，然后进行以下操作。 3．称取2 g的氨苄青霉素粉末于离心管中，加入灭菌水至总体积为20 ml，轻摇离心管，至氨苄青霉素粉末完全溶解，以免过滤时堵塞滤膜。 4．用注射器吸取配制好的溶液，然后把滤器安在注射器上，缓缓推动注射器活塞，把溶液经滤膜推至100 ml的离心管中。注意：动作要缓和，使滤出液出口正对着离心管，还要防止染菌。 5．把100 ml离心管中已除菌的氨苄青霉素溶液分装到1.5 ml的EP管中，每管0.5 ml。在EP管上做好标记，包括名称、浓度、日期等。 6．把做好标记的盛有氨苄青霉素的EP管于-20℃保存。注意：当你发现你使用的是最后一管抗生素时，请马上告知有关人员及时配制，以免耽误使用。表1.常见抗生素的储存浓度及工作浓度名称储存浓度工作浓度氨苄青霉素（ampicillin）100 mg/ml 50 μg/ml～100 μg/ml 卡那霉素（kanamycin）10 mg/ml 10 μg/ml～50 μg/ml 氯霉素（chloramphenicol）25 mg/ml 12.5 μg/ml～25 μg/ml 链霉素（streptomycin）50 mg/ml 10 μg/ml～50 μg/ml 四环素（tetracyyline）10 mg/ml10 μg/ml～50 μg/ml IPTG 1 M 0.05-0.6 mM

常用的灭菌方法

一、常用灭菌消毒方法 1、干热灭菌法火焰灭菌（灼烧灭菌）、干热灭菌 2、湿热灭菌巴氏消毒、煮沸消毒、高压蒸汽灭菌、间歇加热灭菌、实罐灭菌 3、过滤除菌 4、放射线灭菌二、常用的消毒剂理想的消毒剂：杀菌力强，使用方便；价廉；对人、畜无害；能长期保存；溶解度大；无腐蚀性等。消毒剂种类：氧化剂、重金属盐、有机化合物相对药效：三、影响灭菌与消毒因素 1、微生物种类 2、培养基 3、消毒剂 4、环境因素 5 节：化学疗剂对微生物作用能直接干扰病原微生物的生长繁殖并可用于治疗感染性疾病的化学药物。化学疗剂能选择性地作用于病原微生物新陈代谢的某个环节，使其生长受到抑制或致死。一、抗代谢物结构上类似，竞争性地与酶结合，只有当正常代谢物量少或不存在时才起作用。最常用的是磺胺类药物。是氨苯磺胺衍生物，其结构与对氨基苯甲酸（PABA）类似，而PABA 是叶酸分子组成。叶酸是辅酶，在氨基酸、维生素合成中起重要作用，许多细菌需自己合成叶酸，而人和动物利用现成叶酸，因此不受磺胺干扰。还有异烟肼rimifon，是吡哆醇对抗物。二、抗生素作用范围：抗菌谱作用位点： 1、抑制细胞壁合成：青霉素，多氧霉素 2、影响细胞膜功能：多肽类，多烯类 3、干扰蛋白合成：抑制而非杀死 4、阻碍核酸合成：对细胞有毒三、微生物抗药性对药物的适应性即是抗药性。抗药性主要表现（产生机制） 1、菌体内产生钝化或分解药物的酶 2、改变膜的透性而导致抗药性产生 3、被药物作用的部位发生改变 4、形成救护途径。五章：微生物遗传遗传heredity—亲代将其特有的生物学特性传递给子代。遗传性—子代总保持与亲代相同的生物学特性。遗传型genotype—生物体所具有的全套遗传物质总称。又称基因型。

生物实验室操作规范安全手册

实验室操作规范本规程中列出了最基本的实验室操作和程序，他们是微生物学操作技术规范的基础。在规划实验室和国家级实验室项目时，可以根据这些规程来制订实验室安全操作的书面程序。每个实验室都应该采用“安全手册”或“操作手册”，其中定义了已知的和潜在的危害，并规定了特殊的操作程序来避免或尽量减小这种危害。规范的微生物学操作技术是实验室安全的基础，而专门的实验设备仅仅是一种补充，绝不能替代正确的操作规范。下面列出了一些最重要的概念。进入规定 1、在处理危险度2 级或更高危险度级别的微生物时，在实验室门上应标有国际通用的生物危害警告标志（图1）。 2、只有经批准的人员方可进入实验室工作区域。 3、实验室的门应保持关闭。 4、儿童不应被批准或允许进入实验室工作区域。 5、进入动物房应当经过特别批准。 6、与实验室工作无关的动物不得带入实验室。人员防护 1、在实验室工作时，任何时候都必须穿着连体衣、隔离服或工作服。 2、在进行可能直接或意外接触到血液、体液以及其他具有潜在感染性的材料或感染性动物的操作时，应戴上合适的手套。手套用完后，应先消毒再摘除，随后必须洗手。 3、在处理完感染性实验材料和动物后，以及在离开实验室工作区域前，都必须洗手。 4、为了防止眼睛或面部受到泼溅物、碰撞物或人工紫外线辐射的伤害，必须戴安全眼镜、面罩（面具）或其他防护设备。 5、严禁穿着实验室防护服离开实验室，（如去餐厅、咖啡厅、办公室、图书馆、员工休息室和卫生间）。 6、不得在实验室内穿露脚趾的鞋子。 7、禁止在实验室工作区域进食、饮水、吸烟、化妆和处理隐形眼镜。 8、禁止在实验室工作区域储存食品和饮料。 9、在实验室内用过的防护服不得和日常服装放在同一柜子内。操作规范 1、严禁用口吸移液管。 2、严禁将实验材料置于口内。严禁舔标签。 3、所有的技术操作要按尽量减少气溶胶和微小液滴形成的方式来进行。 4、应限制使用皮下注射针头和注射器。除了进行肠道外注射或抽取实验动物体液，皮下注射针头和注射器不能用于替代移液管或用作其他用途。 5、出现溢出、事故以及明显或可能暴露于感染性物质时，必须向实验室主管报告。实验室应保存这些事件或事故的书面报告。 6、必须制订关于如何处理溢出物的书面操作程序，并予以遵守执行。 7、污染的液体在排放到生活污水管道以前必须清除污染（采用化学或物理学方法）。根据所处理的微生物因子的危险度评估结果，可能需要准备污水处理系统。 8、需要带出实验室的手写文件必须保证在实验室内没有受到污染。

实验室常用灭菌方法完整版

实验室常用灭菌方法 HEN system office room 【HEN16H-HENS2AHENS8Q8-HENH1688】

实验室常用灭菌方法 1.高压蒸汽灭菌为湿热灭菌方法的一种。是微生物培养中最重要的灭菌方法。这种灭菌方法是基于水在煮沸时所形成的蒸汽不能扩散到外面去，而聚集在密封的容器中，在密闭的情况下，随着水的煮沸，蒸汽压力升高，温度也相应增高。(PV=nRT) 高压蒸汽是最有效的灭菌法，能迅速地达到完全彻底灭菌。一般在15磅/英寸2压力下（℃），15～30分钟，所有微生物包括芽孢在内都可杀死。它适用于对一般培养基和玻璃器皿的灭菌。进行高压蒸汽灭菌的容器是高压蒸汽灭菌锅。高压蒸汽灭菌锅是一个能耐压又可以密闭的金属锅，有立式与卧式两种。可以用电热、煤气、蒸汽等。锅上装有压力表，有的还装有温度计，能及时了解锅内压力及温度。锅上还设有排气口，其作用是在密闭之前，利用蒸汽将锅内的冷空气排净，另外还装有安全活门，如果压力超过一定限度，活门即可自动打开，放出过多的蒸汽。 2.干热灭菌微生物培养中常用的干热灭菌是指热空气灭菌。一般在电烘箱中进行。干热灭菌所需温度较湿热灭菌高，时间也较湿热灭菌长。这是因为蛋白质在干燥无水的情况下不容易凝固。一般须在160℃左右保持恒温3～4小时，方能达到灭菌的目的。干热灭菌适用于空玻璃器皿的灭菌，凡带有橡胶的物品和培养基，都不能进行干热灭菌。 3.间歇灭菌各种微生物的营养体在100℃温度下半小时即可被杀死。而其芽孢和孢子在这种条件下却不会失去生活力。间歇灭菌就是根据这一原理进行的。间歇灭菌的方法是用100℃、30分钟杀死培养基内杂菌的营养体，然后将这种含有芽孢和孢子的培养基在温箱内或室温下放置24小时，使芽孢和孢子萌发成为营养体。这时再以100℃处理半小时，再放置24小时。如此连续灭菌3次，即可达到完全灭菌的目的。间歇灭菌通常在流动蒸汽的灭菌锅中进行，也可用普通铝锅代替。这种灭菌方法多用于明胶、牛乳等物质的灭菌，这类物质在100℃以上的温度下处理较长时间，会被破坏，而用间歇灭菌法就既起到了杀菌作用，又使被处理的物质免遭破坏。 4.紫外线灭菌紫外线杀菌力最强的是波长2650～2660?(10-1nm)的部分。无菌室缓冲间和接种箱常用紫外线灯作空气灭菌。无菌室和缓冲间的照射时间为20～50分钟（视房间大小而定），接种箱照射10～15分钟即可。

常用的灭菌方法

常用的灭菌方法采用强烈的理化因素使任何物体内外部的一切微生物永远丧失其生长繁殖能力的措施称为灭菌。灭菌常用的方法有化学试剂灭菌、射线灭菌、干热灭菌、湿热灭菌和过滤除菌等。可根据不同的需求，采用不同的方法，如培养基灭菌一般采用湿热灭菌，空气则采用过滤除菌。 1、化学试剂灭菌包括气体熏蒸法，是利用环氧乙烷或甲醛等杀灭微生物。最常用试剂灭菌方法为消毒剂喷洒法，常见的消毒剂有异丙醇（75%）、乙醇（75%）、戍二醛、新洁尔灭等。我在日常生产工作中，洁净室的墙面、天花板、门、窗、机器设备、仪器、操作台、车、桌、椅等表面都定期用乙醇、新洁尔灭等消毒剂喷洒。 2、射线灭菌主要有放射线灭菌法和紫外线灭菌法，如从放射源产生γ射线进行照射，本办法主要用于玻璃制品、磁制品、金属制品、橡胶制品、塑料制品与纤维制品等耐受放射线照射的物品；还可利用照射紫外线杀灭微生物，主要用于玻璃制品、金属制品、橡胶制品、塑料制品和纤维制品等，还可用于设施、设备、房间等。我们公司每一间生产间都安有紫外灯，每次生产前会辐照半个小时以上，同时会释放臭氧，效果很好。 3、干热灭菌包含烘箱内热空气灭菌法和火焰灼烧法，可把金属器械或洗净的

玻璃器皿放入电热烘箱内，在150～170℃下维持1～2小时后，可达到彻底灭菌（包括细菌的芽孢）的目的。灼烧是一种最彻底的干热灭菌法，就像我们公司（杭州睿凯干细胞生物科技有限公司）产品质检时，虽然所用的的工具（如镊子）、玻璃器皿等都经湿热灭菌，但是无菌操作时仍将其在酒精灯上灼烧，然后再使用。 4、湿热灭菌煮沸法：煮沸100℃，5分钟，但只能杀死一般细菌的繁殖体；高压蒸汽灭菌法：压力蒸汽灭菌是在专门的压力蒸汽灭菌器中进行的，是热力灭菌中使用最普遍、效果最可靠的一种方法。其优点是穿透力强，灭菌效果可靠，能杀灭所有微生物。适用于耐高温、耐水物品的灭菌。对于那些无法通过过滤方法除菌的粘稠液体，此法是不二的选择，我们公司生产的三维细胞培养水凝胶是一种固液两相可自由切换的产品，液体状态时较粘稠，所以无法用滤膜过滤，所以采用的是高压灭菌锅121℃，20min的方法进行灭菌，另外向大家推荐我们公司这种带自动烘干功能的灭菌锅，耗材、玻璃器皿等可灭菌后直接烘干，非常方便。 5、过滤除菌有些需要灭菌的材料不能受热，例如许多维生素溶液。因此，许多液体可以用过滤法来灭菌。过滤法不是将微生物杀死，而是把它们排除出去。滤膜一般由醋酸纤维素、硝酸纤维素、多聚碳酸酯、聚偏氟乙烯等合成纤维材料制成，滤膜的孔径一般为0.22微米，主要用

细胞实验室操作规范.doc

实验室操作规范细胞收集（抽血）： 1.实验室负责人需提前 1 天接到抽血具体时间的通知，准备工作相关事宜。 2. 工作前实验室超净台、传递窗和整体环境紫外灭菌30 分钟。 3.洁净室内操作人员清洁后提前20 分钟穿戴无菌服帽、口罩，无菌手套等，进入洁净室，做好工作前准备。 4. 抽血前 10 分钟由实验室专门人员穿戴整齐携带灭菌后的无孔消毒盘进入治疗室，等待抽血，仔细阅读知情同意书并在知情同意书上签字。 5.将刚抽取的血液放入灭菌后的无孔消毒盘中迅速送到实验室传递窗，洁净室内操作人员将血液从传递窗取出运送至操作室对细胞进行收集。 6. 实验结束打扫完毕后，再次将实验室超净台、传递窗和整体环境紫外灭菌15 分钟。细胞培养： 1.根据治疗方案确定好细胞培养计划。 2.细胞培养期间应每天观察细胞生长状态并做好相关培养工作。 3.细胞培养时间约为 15 天，若发现因细胞生长等原因需要延长培养时间应及时通知上级领导，一般来说回输时间不能提前。 4.在回输或冻存前需完成细胞质量控制，对细胞进行无菌检测和细胞数量活率检测。 5.如因患者自身或其它原因，需要延迟回输，及时将细胞冻存。 6.培养过程要严格遵守无菌室相关规章制度和操作方法：

①工作前实验室超净台、传递窗和整体环境紫外灭菌30 分钟； ②洁净室内操作人员清洗后穿戴无菌服帽、口罩，无菌手套方可进入洁净室，无菌手套操作前需用75%酒精纱布擦拭； ③实验所使用器械器具均要事先灭菌，使用的吸管，滴管，试管，培养瓶等要确保无尘无菌； ④点燃酒精灯，超净台内应避免放入过多的物品； ⑤打开各类瓶盖前先过火，以固定灰尘； ⑥打开的瓶口、试管口过火焰，镊子使用前应经火焰烧灼； ⑦同一根吸管或滴管不应连续用于几个不同的细胞系； ⑧吸取培养基的吸管应离开培养瓶或试管口，避免伸入培养瓶口或试管口；以防止细胞系的互相混杂污染； ⑨漏在培养瓶上或台上的液体，立即用酒精棉球擦净； ⑩实验结束打扫完毕后，再次将实验室超净台、传递窗和整体环境紫外灭菌15 分钟。细胞回输： 1.实验室负责人需提前 1 天接到回输具体时间通知，准备工作相关事宜。 2. 工作前实验室超净台、传递窗和整体环境紫外灭菌30 分钟。 3.实验室内由至少 2 人确认所需回输的细胞和放置位置。 3. 洁净室内操作人员清洁后应在回输时间提前 1 小时穿戴好无菌服帽、口罩，无菌手套等，进入洁净室，做好工作前准备。

实验室人员安全行为规范通用版

管理制度编号：YTO-FS-PD779 实验室人员安全行为规范通用版 In Order T o Standardize The Management Of Daily Behavior, The Activities And T asks Are Controlled By The Determined Terms, So As T o Achieve The Effect Of Safe Production And Reduce Hidden Dangers. 标准/ 权威/ 规范/ 实用 Authoritative And Practical Standards

实验室人员安全行为规范通用版使用提示：本管理制度文件可用于工作中为规范日常行为与作业运行过程的管理，通过对确定的条款对活动和任务实施控制,使活动和任务在受控状态，从而达到安全生产和减少隐患的效果。文件下载后可定制修改，请根据实际需要进行调整和使用。实验室是进行实验的场所，做好实验室管理对于安全、顺利进行实验尤为重要，进入实验室的人员必须服从管理人员的安排。为了规范实验室管理，特制定如下制度： 1、实验人员必须具备基因工程相关的安全常识及常见突发事故的解决能力，在工作中对所接触的试剂的各种性质、存在的危险性要预先有一定了解。 2、进入实验室要戴防护眼镜、穿长袖实验服、穿长裤、穿不露脚面的鞋，操作实验时带防护手套，手上禁止带饰品，不可以梳披肩发。 3、禁止带手机等与实验无关的物品进入实验室，实验室内不得接打电话。 4、禁止穿实验服、携带实验相关物品进入办公区。 5、实验室内严禁吃东西、喝水、吸烟、打闹和急走，禁止一切非工作目的跨区活动，以免妨碍和分散他人的注意力。 6、对待工作严肃认真，实验前要全面考虑实验过程，

常用的消毒灭菌方法

常用的消毒灭菌方法公司内部编号：（GOOD-TMMT-MMUT-UUPTY-UUYY-DTTI-

2014年7月份手术室业务讲课稿常用的消毒灭菌方法讲课人：杨志婷一、液体化学消毒剂使用规范 1 、戊二醛：光谱、高效。对金属腐蚀性小，受有机物影响小。2%。范围：不耐热的医疗器械和精密仪器等。方法：1)灭菌：浸泡法。将清洗、晾干待灭菌处理的医疗器械及物品浸没于装有2%容器中，加盖。10小时后，无菌操作取出，无菌水冲净，无菌擦干后使用。 2）消毒浸泡法，将清洗、晾干待灭菌处理的医疗器械及物品浸没于装有2%或1%增效戊二醛中，加盖，10-20分钟，取出后无菌水洗干并擦干。注意事项：1）对手术刀片等碳钢制品有腐蚀性，使用前先加入%亚硝酸钠防锈。2）加强浓度监测。3)对皮肤黏膜有刺激性，应戴橡胶手套，防止进入眼内或吸入体内。4）容器应加盖，放于通风良好处。 2、过氧乙酸：广谱、高效低毒对金属织物有腐蚀性，稳定性差。16%-20% 范围：耐腐蚀物品，环境及皮肤等的消毒与灭菌。方法：浸泡、擦拭、喷洒。1）浸泡：加盖。对一般污染物品，用%（500）溶液浸泡。对细菌芽孢用1%（1000毫克每升）浸泡5分钟。灭菌时浸泡30分钟。2）擦拭：对大物品或不能用浸泡法。3）喷洒：对一般污染表面用%%（2000-4000）作用30-60分钟，对肝炎病毒和结核杆菌污染用%30-60分钟。注意事项：1）贮存于通风阴凉处，用前测定有效浓度，原液低于12%禁用。2）稀释液临用前配制。3）配制时忌与碱或有机物相混合。4）金属与织物侵泡后及时用清水冲洗干净。

3，过氧化氢高效消毒剂，广谱，高效，速效，无毒，对金属及织物有腐蚀性，受有机物影响大，稳定性好，稀释液不稳定。范围：用于炳乙酸树脂制成的外科埋织物，隐形眼镜，不耐热的塑料制品，餐具，服装，饮水等消毒和口腔含漱，外科伤口清洗。方法：1）配制：美军蒸馏水稀释。2）消毒处理：浸泡浸泡加盖30分，擦拭：参见浸泡。其他方法：用1%-1,5%漱口，3%冲洗伤口。注意事项：1）通风阴凉，用前测定有效含量。2）先用现配。3）使用浓溶液时防溅入眼内或皮肤黏膜上，用清水冲洗。4）被血液脓液污染时适当延长作用时间。5）忌与还原剂，碱，碘化物，高锰酸钾等强氧化剂相混合。 4，乙醇：中效，速效，无毒，对皮肤黏膜有刺激性，对金属物有腐蚀性，受有机物影响大，易挥发，不稳定范围皮肤，环境表面及医疗器械的消毒。方法：1，浸泡：对细菌繁殖体的75%酒精10分钟以上2，擦拭皮肤75%酒精。注意事项：必须使用医用酒精，严谨使用工业酒精和作为原材料配制消毒剂。5，碘伏：中效消毒剂。中效，速效。低毒。对皮肤黏膜无刺激无黄染。对铜铝碳钢等二价金属有腐蚀性，受有机物影响很大，稳定性好。范围;皮肤，黏膜。方法：浸泡，被细菌繁殖体污染含有效碘250毫克升30分。2，擦拭：皮肤黏膜擦拭。外科洗手用3000到5000毫克升擦拭三分钟。手术部位注射部位用3000到5000毫克升擦拭两遍，作用两分钟，对口腔黏膜及创口黏膜用250毫克升冲洗5分钟。