百度文库-苯胺蓝染色液说明书

百度文库-苯胺蓝染色液说明书

广州市外显子生物技术有限公司

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苯胺蓝染色液

产品说明:

苯胺蓝染色液是 Masson 三色染色试剂盒的组成之一。 苯胺蓝染色液主要有苯胺蓝、弱酸等组成,呈酸性,常与丽春红品红染色液等配合使用对胶原纤维进行染色,染色后肌纤维呈红色,胶原纤维呈蓝色,主要用于区分胶原纤维和肌纤维。 产品组成:

货号 产品 规格 储存条件 S-1528 苯胺蓝染液 100ml

2-4℃ -- 说明书

1份

有效期:12个月 操作步骤(仅供参考): 以Masson 三色染色为例 1.切片脱蜡至水。

2.Weigert 铁苏木素使用前(Weigert 铁苏木素 A 、 B 液等比例混合)。染 10-20 分钟,流水稍洗。

3.盐酸酒精分化,流水冲洗数分钟。

4.丽春红酸性品红染液染 5-10 分钟,蒸馏水稍冲 洗。

5.磷钼酸溶液处理约 5 分钟,去掉溶液,不用水洗, 直接用苯胺蓝染液复染 5 分钟。

6.1%冰醋酸处理 1 分钟,95%酒精脱水。

7.无水酒精脱水,二甲苯透明,中性树脂封固。 注意事项:

1. 切片脱蜡应尽量干净。

2. 切片入苯胺蓝染色液染色前不要水洗,否则可能出现不着色。

3. 不同染色参照具体的实验要求。

4. 为了您的安全和健康,请穿实验服并戴一次性手套操作 染色结果:

神经节组织×400 结果判定:主要用于神经组织、细胞、结缔组织的染色,使胶原纤维呈蓝色。

软骨染色液(甲苯胺蓝法)染色步骤及注意事项

软骨染色液(甲苯胺蓝法)染色步骤及注意事项 货号:G2543 规格:100ml 保存:室温,避光,12个月。 产品说明: 甲苯胺蓝(Toluidine Blue O)是一种常用的人工合成染料,属于醌亚胺染料类。这类染料主要含有胺基和醌型苯环两个发色团,从而成色原显色。甲苯胺蓝中的阳离子有染色作用,组织细胞的酸性物质与其中的阳离子相结合而被染色。甲苯胺蓝不仅含有两个发色团,还含有两个助色团,能促使染料产生电离成盐类,帮助发色团对组织产生染色力,使切片上的组织细胞着色,可染细胞核使之呈蓝色;肥大细胞胞质内含有肝素和组织胺等异色性物质遇到甲苯胺蓝可呈异染性紫红色。甲苯胺蓝染色液(甲苯胺蓝法)呈强碱性,更利于组织细胞的着色。操作说明:(仅供参考) 1、常规脱钙,包埋,固定。 2、石蜡切片入二甲苯2次。 3、系列乙醇各1min。自来水洗2min。 4、入Toluidine Blue O Stain浸染30min。根据不同组织,染色时间不完全相同。 5、自来水洗2min,滤纸吸干水分。 6、丙酮分化至软骨细胞呈紫蓝色清楚可见。 7、逐级乙醇脱水。 8、二甲苯透明,中性树胶封固。 染色结果: 软骨、成骨细胞呈紫红色;背景呈淡蓝色。

注意事项: 1、第一次使用本试剂时建议先取1-2个样品做预实验。 2、针对于胃粘膜组织、软骨组织等较难着色组织的染色,浸染于甲苯胺蓝染色液的时间应相应延长。 3、为了您的安全和健康,请穿实验服并戴一次性手套操作。 相关试剂: G3661甲苯胺蓝染色液(1%,磷酸盐法) G3662甲苯胺蓝染色液(0.5%,磷酸盐法) G3665甲苯胺蓝染色液(0.5%,硼酸盐法)

甲苯胺蓝染色液(0.5%,磷酸盐法)使用说明

甲苯胺蓝染色液(0.5%,磷酸盐法)使用说明 货号:G3662 规格:100ml 保存:室温,避光,12个月。 产品说明: 甲苯胺蓝(Toluidine Blue O)是一种常用的人工合成染料,属于醌亚胺染料类。这类染料主要含有胺基和醌型苯环两个发色团,从而成色原显色。甲苯胺蓝中的阳离子有染色作用,组织细胞的酸性物质与其中的阳离子相结合而被染色。甲苯胺蓝不仅含有两个发色团,还含有两个助色团,能促使染料产生电离成盐类,帮助发色团对组织产生染色力,使切片上的组织细胞着色,可染细胞核使之呈蓝色。肥大细胞胞质内含有肝素和组织胺等异色性物质遇到甲苯胺蓝可呈异染性紫红色。 操作说明:(仅供参考) (一)肥大细胞染色 1、脱蜡至蒸馏水。 2、浸染于甲苯胺蓝染色液10-15min,具体的染色时间根据切片厚度和组织的不同而定。 3、蒸馏水或去离子水轻轻冲洗。 4、(可选)0.5%冰乙酸分化,直到细胞核和颗粒清晰可见。 5、快速95%和无水乙醇脱水。 6、二甲苯透明,封固。 染色结果:肥大细胞呈紫红色;背景呈淡蓝色。 (二)软骨染色 1、石蜡切片入二甲苯2次每次15min。

2、系列乙醇各1min。 3、自来水洗2min。 4、入Toluidine Blue O Stain浸染30min。 5、自来水洗2min,滤纸吸干水分。 6、丙酮分化至软骨细胞呈紫蓝色清楚可见。 7、逐级乙醇脱水。 8、二甲苯透明,中性树胶封固。 染色结果:软骨、成骨细胞呈紫红色;背景呈淡蓝色。 (三)细胞涂片染色 1、用20%的乙醇溶液稀释甲苯胺蓝染色液,一般要求稀释到0.1%即可。 2、细胞涂片后,立即放入95%的乙醇中固定,取出放在纸巾上。 3、滴加稀释后的甲苯胺蓝染色液进行滴染,加盖玻片让染料渗透到细胞中。 4、将玻片竖起,稍加压力,使多余染料被纸巾吸去。 5、无需干燥,直接镜检。 染色结果:细胞核、淋巴细胞呈深蓝色;核仁呈紫红色;红细胞呈橘红;细胞质、单核细胞呈淡蓝色。 (四)原位杂交染色 1、用蒸馏水或去离子水稀释到相应的浓度,凭经验一般稀释比例大于1:100。 2、玻片在稀释好的染色液中短暂浸泡。 3、在蒸馏水或去离子水浸泡数次。 4、按需求进行压片固定。 注意事项:

甲苯胺蓝染色液(1%,磷酸盐法)

甲苯胺蓝染色液(1%,磷酸盐法) 简介: 甲苯胺蓝(T oluidine Blue O)是一种常用的人工合成染料, 属于醌亚胺染料类, 这类染料主要含有胺基和醌型苯环两个发色团,从而成色原显色。甲苯胺蓝中的阳离子有染色作用, 组织细胞的酸性物质与其中的阳离子相结合而被染色。甲苯胺蓝还含有两个助色团,能促使染料产生电离成盐类, 帮助发色团对组织产生染色力, 使切片上的组织细胞着色,可染细胞核使之呈蓝色。 组成: 操作步骤(仅供参考): (一)肥大细胞染色 1、脱蜡至蒸馏水。 2、根据切片厚度和组织的不同,浸染于甲苯胺蓝染色液。 3、蒸馏水或去离子水轻轻冲洗。 4、(可选)0.5%冰乙酸分化,直到细胞核和颗粒清晰可见。 5、快速95%和无水乙醇脱水。 6、 二甲苯透明,封固。 染色结果:肥大细胞呈紫红色;背景呈淡蓝色。 (二)软骨染色 1、 石蜡切片入二甲苯2次每次。 2、 系列乙醇各1min 。 3、 自来水洗2min 。 4、 入Toluidine Blue O Stain 浸染。 5、 自来水洗2min ,滤纸吸干水分。 6、 丙酮分化至软骨细胞呈紫蓝色清楚可见。 7、 逐级乙醇脱水。 8、 二甲苯透明,中性树胶封固。 染色结果:软骨、成骨细胞呈紫红色;背景呈淡蓝色。 (三)细胞涂片染色 编号 名称 DA0055 Storage Toluidine Blue O Stain(1%,磷酸盐法) 100ml RT 避光 使用说明书 1份

1、用20%的乙醇溶液稀释甲苯胺蓝染色液, 一般要求稀释到0.1%即可。 2、细胞涂片后,立即放入95%的乙醇中固定,取出放在纸巾上。 3、滴加稀释后的甲苯胺蓝染色液进行滴染,加盖玻片让染料渗透到细胞中。 4、将玻片竖起,稍加压力,使多余染料被纸巾吸去。 5、无需干燥,直接镜检。 染色结果:细胞核、淋巴细胞呈深蓝色;核仁呈紫红色;红细胞呈橘红;细胞质、单核细胞呈淡蓝色。 (四)原位杂交染色 1、用蒸馏水或去离子水稀释到相应的浓度,凭经验一般稀释比例大于1:100。 2、玻片在稀释好的染色液中短暂浸泡。 3、在蒸馏水或去离子水浸泡数次。 4、按需求进行压片固定。 注意事项: 1、针对于胃粘膜组织、软骨组织等较难着色组织的染色,浸染于甲苯胺蓝染色液的时间应 相应延长。 2、为了您的安全和健康,请穿实验服并戴一次性手套操作。

精子核蛋白染色液(苯胺蓝染色法)

精子核蛋白染色液(苯胺蓝法) 产品简介: 正常情况下,与精核DNA 结合的碱性蛋白(核蛋白)将经历从组蛋白到鱼精蛋白的自然成熟过程,这种成熟后的鱼精蛋白对精子基因(DNA )具有特殊保护作用。组蛋白被鱼精蛋白逐渐取代的过程,称之为精子核蛋白组型转换,这种组型转换具有重要的生理意义。 精子核携带着全部来自父方的遗传信息,这些基因必须在受精后才能开始表达。受精前精子基因在鱼精蛋白的特殊保护下,紧密浓集,无任何DNA 转录作用。但当核蛋白组型转换异常可引起男性不育或胚胎早期夭折流产,其机理为:①精子DNA 不稳定且易受损伤而难以受孕;②一旦受精,由于核蛋白组型异常,精子核不能正常解聚,从而影响了雌雄原核的融合;③胚胎不能正常发育,造成胚胎夭折而流产。 因此,组蛋白的多少是精子成熟度的一个重要指标,酸性条件下苯胺蓝能特异地与精子核组蛋白富含的赖氨酸残基结合生成紫蓝色化合物,根据着色的深浅来判断精子的成熟程度。 产品组成: 自备材料: 1、 蒸馏水 2、 新鲜精液样本 3、 恒温箱 4、 防脱载玻片 操作步骤(仅供参考): 1、配制洗涤工作液: 取适量的10×浓缩洗涤液,以蒸馏水10稀释后即为洗涤工作液。 2、取新鲜精液标本置于恒温箱37℃或常温放置,至完全液化。 3、取上述液化精液0.2~0.5ml 置于EP 管,再加入1-1.5ml 洗涤工作液,用吸管或移液器反复吹打数次,室温2000rpm 离心5min ,弃去上清液,保留管底精子沉淀团;重复操作 编号 名称 DA1201 20T DA1201 40T Storage 试剂(A): 10×浓缩洗涤液 10ml 20ml RT 试剂(B): 固定液 10ml 20ml 4℃ 避光 试剂(C): 苯胺蓝染色液 5ml 10ml RT 避光 使用说明书 1份

甲苯胺蓝染色液(0.5%,硼酸盐法)

甲苯胺蓝染色液(0.5%,硼酸盐法) 简介: 甲苯胺蓝(Toluidine Blue O)是一种常用的人工合成染料, 属于醌亚胺染料类, 这类染料主要含有胺基和醌型苯环两个发色团,从而成色原显色。甲苯胺蓝中的阳离子有染色作用, 组织细胞的酸性物质与其中的阳离子相结合而被染色。甲苯胺蓝还含有两个助色团,能促使染料产生电离成盐类, 帮助发色团对组织产生染色力, 使切片上的组织细胞着色,可染细胞核使之呈蓝色。另外,肥大细胞胞质内含有肝素和组织胺等异色性物质,遇到甲苯胺蓝可呈异染性紫红色,临床上经常用于肥大细胞染色。 Leagene 甲苯胺蓝染色液(Toluidine Blue,1%,硼酸盐法)由于硼酸盐缓冲液呈强碱性,更利于组织细胞的着色。 组成: 操作步骤(仅供参考): (一)肥大细胞染色 1、脱蜡至蒸馏水。 2、根据切片厚度和组织的不同,浸染于甲苯胺蓝染色液。 3、蒸馏水或去离子水轻轻冲洗。 4、冰乙酸分化,直到细胞核和颗粒清晰可见。 5、快速和无水乙醇脱水。 6、 二甲苯透明,封固。 染色结果:肥大细胞呈紫红色;背景呈淡蓝色。 (二)软骨染色 1、 石蜡切片入二甲苯。 2、 系列乙醇各。 3、 自来水洗。 4、 入Toluidine Blue O Stain ,浸染。 5、 自来水洗,滤纸吸干水分。 6、 丙酮分化至软骨细胞呈紫蓝色清楚可见。 7、 逐级乙醇脱水。 编号 名称 DA0059 Storage Toluidine Blue O stain (0.5%,硼酸盐法) 100ml RT 避光 使用说明书 1份

8、二甲苯透明,中性树胶封固。 染色结果:软骨、成骨细胞呈紫红色;背景呈淡蓝色。 (三)细胞涂片染色 1、用乙醇溶液稀释甲苯胺蓝染色液, 一般要求稀释即可。 2、细胞涂片后,立即放入乙醇中固定,取出放在纸巾上。 3、滴加稀释后的甲苯胺蓝染色液进行滴染,加盖玻片让染料渗透到细胞中。 4、将玻片竖起,稍加压力,使多余染料被纸巾吸去。 5、无需干燥,直接镜检。 染色结果:细胞核、淋巴细胞呈深蓝色;核仁呈紫红色;红细胞呈橘红;细胞质、单核细胞呈淡蓝色。 (四)原位杂交染色 1、用蒸馏水或去离子水稀释到相应的浓度,凭经验一般稀释比例大于1:100。 2、玻片在稀释好的染色液中短暂浸泡。 3、在蒸馏水或去离子水浸泡数次。 4、按需求进行压片固定。 注意事项: 1、针对于胃粘膜组织、软骨组织等较难着色组织的染色,浸染于甲苯胺蓝染色液的时间应 相应延长。 2、为了您的安全和健康,请穿实验服并戴一次性手套操作。 有效期:12个月有效。 相关: 编号名称 DA0056甲苯胺蓝染色液(0.5%,磷酸盐法) DC0032Masson三色染色液 DG0005糖原PAS染色液 DH0006苏木素伊红(HE)染色液 TC0713 葡萄糖检测试剂盒(GOD-POD比色法)

甲苯胺蓝染色液(软骨专用)使用说明书

甲苯胺蓝染色液(软骨专用)使用说明书 货号:G2493 规格:100ml 保存:室温,避光,12个月。 产品说明: 甲苯胺蓝(Toluidine Blue O)是一种常用的人工合成染料,属于醌亚胺染料类。这类染料主要含有胺基和醌型苯环两个发色团,从而成色原显色。甲苯胺蓝中的阳离子有染色作用,组织细胞的酸性物质与其中的阳离子相结合而被染色。甲苯胺蓝不仅含有两个发色团,还含有两个助色团,能促使染料产生电离成盐类,帮助发色团对组织产生染色力,使切片上的组织细胞着色,可染细胞核使之呈蓝色;肥大细胞胞质内含有肝素和组织胺等异色性物质遇到甲苯胺蓝可呈异染性紫红色。甲苯胺蓝染色液(Toluidine Blue,1%,硼酸盐法)由于硼酸盐缓冲液呈强碱性,更利于组织细胞的着色。 操作说明:(仅供参考) 1、常规脱钙,包埋,固定。 2、石蜡切片入二甲苯2次,每次15min。 3、系列乙醇各1min。自来水洗2min。 4、入Toluidine Blue O Stain浸染15-20min。根据不同组织,染色时间不完全相同。 5、自来水洗2min,滤纸吸干水分。 6、丙酮分化至软骨细胞呈紫蓝色清楚可见。 7、逐级乙醇脱水。 8、二甲苯透明,中性树胶封固。 染色结果: 软骨、成骨细胞呈紫红色;背景呈淡蓝色。 注意事项: 1、第一次使用本试剂时建议先取1-2个样品做预实验。

2、针对于胃粘膜组织、软骨组织等较难着色组织的染色,浸染于甲苯胺蓝染色液的时间应相应延长。 3、为了您的安全和健康,请穿实验服并戴一次性手套操作。 相关产品: G3661甲苯胺蓝染色液(1%,磷酸盐法) G3662甲苯胺蓝染色液(0.5%,磷酸盐法) G3665甲苯胺蓝染色液(0.5%,硼酸盐法)

甲苯胺蓝水溶液(0.1%)

甲苯胺蓝水溶液(0.1%) 简介: 甲苯胺蓝(Toluidine Blue O)是一种常用的人工合成染料, 属于醌亚胺染料类, 这类染料主要含有胺基和醌型苯环两个发色团,从而成色原显色。甲苯胺蓝中的阳离子有染色作用, 组织细胞的酸性物质与其中的阳离子相结合而被染色。甲苯胺蓝还含有两个助色团,能促使染料产生电离成盐类, 帮助发色团对组织产生染色力, 使切片上的组织细胞着色,可染细胞核使之呈蓝色。另外,肥大细胞胞质内含有肝素和组织胺等异色性物质,遇到甲苯胺蓝可呈异染性紫红色,临床上经常用于肥大细胞染色。 Leagene 甲苯胺蓝水溶液(0.1%)由甲苯胺蓝、去离子水组成,一般用于特殊细胞的染色,不推荐用于软骨、胃粘膜等难染组织的染色。 组成: 操作步骤(仅供参考): (一)肥大细胞染色 1、脱蜡至蒸馏水。 2、根据切片厚度和组织的不同,浸染于甲苯胺蓝染色液。 3、蒸馏水或去离子水轻轻冲洗。 4、冰乙酸分化,直到细胞核和颗粒清晰可见。 5、快速和无水乙醇脱水。 6、 二甲苯透明,封固。 染色结果:肥大细胞呈紫红色;背景呈淡蓝色。 (二)细胞涂片染色 1、细胞涂片后,立即放入乙醇中固定,取出放在纸巾上。 2、滴加稀释后的甲苯胺蓝染色液进行滴染,加盖玻片让染料渗透到细胞中。 3、将玻片竖起,稍加压力,使多余染料被纸巾吸去。 4、无需干燥,直接镜检。 染色结果:细胞核、淋巴细胞呈深蓝色;核仁呈紫红色;红细胞呈橘红;细胞质、单核细胞呈淡蓝色。 (三)原位杂交染色 编号 名称 DA0051 Storage 甲苯胺蓝水溶液(0.1%) 100ml RT 避光 使用说明书 1份

甲苯胺蓝水溶液(1%)

甲苯胺蓝水溶液(1%) 简介: 甲苯胺蓝(T oluidine Blue O)是一种常用的人工合成染料, 属于醌亚胺染料类, 这类染料主要含有胺基和醌型苯环两个发色团,从而成色原显色。甲苯胺蓝中的阳离子有染色作用, 组织细胞的酸性物质与其中的阳离子相结合而被染色。甲苯胺蓝还含有两个助色团,能促使染料产生电离成盐类, 帮助发色团对组织产生染色力, 使切片上的组织细胞着色,可染细胞核使之呈蓝色。 组成: 操作步骤(仅供参考): 甲苯胺蓝水溶液(1%)一般用于特殊用途,如果用于染色,可参考如下步骤: (一)肥大细胞染色 1、脱蜡至蒸馏水。 2、根据切片厚度和组织的不同,浸染于甲苯胺蓝染色液。 3、蒸馏水或去离子水轻轻冲洗。 4、(可选)0.5%冰乙酸分化,直到细胞核和颗粒清晰可见。 5、快速95%和无水乙醇脱水。 6、 二甲苯透明,封固。 染色结果:肥大细胞呈紫红色;背景呈淡蓝色。 (二)软骨染色 1、 石蜡切片入二甲苯2次。 2、 系列乙醇各1min 。 3、 自来水洗2min 。 4、 入Toluidine Blue O Stain 浸染。 5、 自来水洗2min ,滤纸吸干水分。 6、 丙酮分化至软骨细胞呈紫蓝色清楚可见。 7、 逐级乙醇脱水。 8、 二甲苯透明,中性树胶封固。 染色结果:软骨、成骨细胞呈紫红色;背景呈淡蓝色。 编号 名称 DA0052 Storage 甲苯胺蓝水溶液(1%) 100ml RT 避光 使用说明书 1份

(三)细胞涂片染色 1、用20%的乙醇溶液稀释甲苯胺蓝染色液, 一般要求稀释到0.1%即可。 2、细胞涂片后,立即放入95%的乙醇中固定,取出放在纸巾上。 3、滴加稀释后的甲苯胺蓝染色液进行滴染,加盖玻片让染料渗透到细胞中。 4、后将玻片竖起,稍加压力,使多余染料被纸巾吸去。 5、无需干燥,直接镜检。 染色结果:细胞核、淋巴细胞呈深蓝色;核仁呈紫红色;红细胞呈橘红;细胞质、单核细胞呈淡蓝色。 (四)原位杂交染色 1、用蒸馏水或去离子水稀释到相应的浓度,凭经验一般稀释比例大于1:100。 2、玻片在稀释好的染色液中短暂浸泡。 3、在蒸馏水或去离子水浸泡数次。 4、按需求进行压片固定。 注意事项: 1、针对于胃粘膜组织、软骨组织等较难着色组织的染色,浸染于甲苯胺蓝染色液的时间应 相应延长。 2、为了您的安全和健康,请穿实验服并戴一次性手套操作。

SD大鼠甲苯胺蓝染色步骤

SD大鼠甲苯胺蓝染色步骤 1、甲苯胺蓝染色法鉴定软骨细胞表型 Ⅱ代软骨细胞以2x105/ml的密度接种到铺有多聚赖氨酸盖玻片的24孔细胞培养板中,与原代培养条件相同,制作细胞爬片,常规培养48h后行甲苯胺蓝染色。 具体操作步骤如下: (1)倾去培养液,PBS充分漂洗3次,加入10%的中性甲醛常温下固定30min。 (2)倾去10%的中性甲醛,PBS充分漂洗3次,加入70%的乙醇固定30min除去四价铵离子,以免影响染色。 (3)倾去70%的乙醇溶液,PBS充分漂洗3次,晾干,加入甲苯胺蓝乙醇液(甲苯胺蓝0.2g 溶于30%乙醇100m1)染色_20min。 (4)PBS充分漂洗3次,迅速用无水乙醇再漂洗1次。 (5)取出爬片,干燥后中性树脂封片,电子显微镜下观察、摄片。 2、型胶原免疫细胞化染色法鉴定软骨细胞表型 Ⅱ代软骨细胞以2×105/ml的密度接种到铺有多聚赖氨酸盖玻片的24孔细胞培养板中,与原代培养条件相同,制作细胞爬片,常规培养48h后行免疫细胞化学法染色。实验过程严格遵照免疫细胞化学染色试剂盒说明书进行操作,PBS缓冲液代替一抗作为阴性对照组。 具体操作步骤如下: (1)倾去培养液,冰冷的PBS漂洗3x3min,加入4%多聚甲醛1ml室温固定15min。 (2)PBS清洗标本3x3min,每张标本滴加1滴新鲜配制的3%H202,室温下孵育10min。 (3)PBS清洗标本3x3min,每张标本滴加穿膜液0.5m](0.1%timton+o.1M Glycine)冰上孵育 30min。 (4)PBS清洗标本3x3min,每张标本滴加5mg/ml的动物非免疫封闭血清(BSA)0.5ml,室温 下封闭1h。 (5)滴加1:150稀释的兔抗大鼠II型胶原多克隆抗体50ul于封口膜上,使标本与一抗充分 接触,置于湿盒中4℃过夜。PBS缓冲液代替一抗作为阴性对照组。 (6)PBS清洗标本3x3min,加入二抗工作液,37℃孵育20min。 (7)PBS清洗标本3x3min,每张标本滴加1滴SABC试剂,37℃孵育20min后PBS(pH7.2~7.6) 清洗标本4x5min。 (8)DAB显色:取蒸馏水1ml,加入试剂盒中A、B、C试剂各一滴,混匀后滴加至标本。 室温下显色,显微镜下观察并控制反应时间(约5-30min)。 (9)蒸馏水漂洗,苏木素轻度复染,脱水。 (10)干燥后中性树脂封片,电子显微镜下观察、拍照。 豚鼠关节软骨细胞甲苯胺蓝染色鉴定 将F1代豚鼠关节软骨细胞以1×104/ml的浓度传代至孔底铺有圆形盖玻片的24孔板 中;正常培养,制作细胞爬片,镜下观察细胞状态,取细胞状态及数量适宜(2天左右) 的爬片染色。染色步骤如下: 1取出细胞爬片,用PBS缓冲液漂洗3次,每次3min,吸弃PBS,每张爬片滴加4%多聚甲醛100 ul,铺满爬片,室温固定3h。 2 PBS漂洗3次,每次3min后吸弃PBS,每张爬片滴加70%的乙醇100 ul室温固定20min。 3 PBS漂洗3次,每次3min后吸弃PBS,晾干后每张爬片滴加0.04%的甲苯胺蓝溶液50 ul,室温下处理20min,无水乙醇迅速漂洗1次,晾干封片,观察拍照记录。

肥大细胞-甲苯胺蓝

肥大细胞-甲苯胺蓝 目的:此细胞广泛分布于结缔组织中。胞质含有异染性颗粒,由肝磷脂和组胺构成。原理:肥大细胞被染成红-紫色(异染质着染)和蓝色的背景(正染质着染)。异染性组织染色原理是一种染液染出不同的颜色。是因为碱性染料的PH值、染料浓度和温度。蓝色和紫色染料可显出红色,红色染料可显出黄色异染色组织原理。 对照:皮肤 固定:10%甲醛 技术:4μ石蜡切片 设备:染色,蒸馏水稍洗。 试剂: 甲苯胺蓝 原液: 甲苯胺蓝Toluidine Blue O 1.0 gm 70%酒精alcohol 100.0 ml 混合溶解,保存期6个月。 警告:避免接触和吸入。 工作液: 甲苯胺蓝Toluidine blue, Stock 5.0 ml 1%氯化钠Sodium chloride 45.0 ml 新鲜配制,用后丢弃。 警告:避免接触和吸入。 1%氯化钠: 氯化钠Sodium chloride 0.5 gm 蒸馏水Distilled water 50.0 ml 新鲜配制。 安全:穿戴手套、护目镜和白大衣。在通风场所进行。避免接触和吸入。 甲苯胺蓝O:有引起人的胃肠道和血液紊乱报导。 程序: 1. 脱蜡至蒸馏水。 2. 甲苯胺蓝工作液1-2 minutes。 3.蒸馏水稍洗×3。 4. 快速95%和无水乙醇脱水。 5. 二甲苯透明和封固。 结果: 肥大细胞紫红色 背景蓝色 参考文献: Sheehan D, Hrapchak B, Theory and practice of Histotechnology, 2nd Ed, 1980, pp282,Battelle Press, Ohio Luna L, Manual Of Histologic Staining Methods from the AFIP, 3rd Ed, 1968, pp 162-163, McGraw-Hill, NY Crookham,J, Dapson,R, Hazardous Chemicals in the Histopathology

甲苯胺蓝染液使用说明

甲苯胺蓝染液使用说明 货号:G3668 规格:100mL/500mL 保存:室温避光储存,有效期至少12个月。 产品说明: 甲苯胺蓝(Toluidine Blue O)是一种常用的人工合成染料,属于醌亚胺染料类,是碱性染料,甲苯胺蓝中的阳离子有染色作用,组织细胞的酸性物质与其中的阳离子相结合而被染色,可染细胞核使之呈蓝色;肥大细胞胞质内含有肝素和组织胺等异色性物质遇到甲苯胺蓝可呈异染性紫红色,可用于尖锐湿疣的初筛及肥大细胞的检测。 染色方法:(仅供参考) (一)肥大细胞染色: (1)组织切片脱蜡至水: ①二甲苯(I)中脱蜡5-10min。 ②换用新鲜的二甲苯(Ⅱ),再脱蜡5-10min。 ③无水乙醇5min。 ④95%乙醇2min。 ⑤80%乙醇2min ⑥70%乙醇2min。 (2)蒸馏水浸洗2-3次。 (3)甲苯胺蓝染液染色(具体时间根据染色结果和实验要求调整)。 (4)稍水洗,洗去多余染色液。 (5)95%酒精分色,在镜下控制分色效果。

(6)用100%酒精脱水。 (7)二甲苯透明,中性树胶封片: ①二甲苯(I)1min。 ②二甲苯(Ⅱ)1min。 ③中性树胶封固,镜下观察。 染色结果:肥大细胞颗粒呈紫红色,胞核呈蓝色。 (二)细胞涂片染色 (1)用20%的乙醇溶液稀释甲苯胺蓝染色液,一般要求稀释到0.1%即可。 (2)细胞涂片后,立即放入95%的乙醇中固定,取出放在纸巾上。 (3)滴加稀释后的甲苯胺蓝染色液进行滴染,加盖玻片让染料渗透到细胞中。 (4)将玻片竖起,稍加压力,使多余染料被纸巾吸去。 (5)无需干燥,直接镜检。 染色结果:细胞核、淋巴细胞呈深蓝色;核仁呈紫红色;细胞质、单核细胞呈淡蓝色。 注意事项: 1、第一次使用本试剂时建议先取1-2个样品做预实验。样品数量很多时,可使用染色架和染色缸,以便于操作。 2、本产品为1%浓度水溶液,具体使用浓度可自行稀释。 3、由于温度对染料的溶解度与着色力有很大的影响,若快速染色,当室温较低时,可以适当加温。 4、为了您的安全和健康,请穿实验服并戴一次性手套操作。

甲苯胺蓝染色液

甲苯胺蓝染色液(0.5%,磷酸盐法) 产品简介: 甲苯胺蓝(Toluidine Blue O)是一种常用的人工合成染料, 属于醌亚胺染料类, 这类染料主要含有胺基和醌型苯环两个发色团,从而成色原显色。,甲苯胺蓝中的阳离子有染色作用, 组织细胞的酸性物质与其中的阳离子相结合而被染色。甲苯胺蓝还含有两个助色团助色团,能促使染料产生电离成盐类, 帮助发色团对组织产生染色力, 使切片上的组织细胞着色,可染细胞核使之呈蓝色。另外,肥大细胞胞质内含有肝素和组织胺等异色性物质,遇到甲苯胺蓝可呈异染性紫红色。 临床上,经常用甲苯胺蓝对软骨细胞和肥大细胞进行染色。 主要成分:主要由Toluidine Blue O、磷酸盐缓冲液等组成。 操作步骤(仅供参考): (一)肥大细胞染色 1、脱蜡至蒸馏水。 2、根据切片厚度和组织的不同,浸染于甲苯胺蓝染色液5~30min。 3、蒸馏水或去离子水轻轻冲洗3~5min。 4、(可选)0.5%冰乙酸分化,直到细胞核和颗粒清晰可见。 5、快速95%和无水乙醇脱水。 6、 二甲苯透明。 7、封固。 染色结果:肥大细胞呈紫红色;背景呈不同程度的蓝色。 (二)细胞涂片染色 1、按要求稀释甲苯胺蓝染色液, 一般要求稀释到0.1%即可。 2、用稀释后的甲苯胺蓝染色液进行滴染,一般细胞涂片1~2min即可。 3、蒸馏水或去离子水轻轻冲洗3~5min。

4、晾干。 5、镜检。 (三)原位杂交染色 1、用蒸馏水或去离子水稀释到相应的浓度,凭经验一般稀释比例大于1:100。 2、玻片在稀释好的染色液中短暂浸泡。 3、在蒸馏水或去离子水浸泡数次。 4、按需求进行压片固定。 注意事项: 1、为了您的安全和健康,请穿实验服并戴一次性手套操作。 2、针对于胃粘膜组织、软骨组织等较难着色组织的染色,浸染于甲苯胺蓝染色液的时间应 相应延长。 有效期:12个月有效。 相关产品: 产品编号 产品名称 DZ0040改良苯酚品红染色液 DA0059甲苯胺蓝染色液(0.5%,硼酸盐法) DA0072中性红染色液(1%) DC0032Masson三色染色试剂盒 DC0095核固红染色液(0.1%) DG0005糖原PAS过碘酸雪夫染色试剂盒 DG0022淀粉样物质染色试剂盒(Highman刚果红法) DH0006苏木素伊红(HE)染色液试剂盒

甲苯胺蓝染色液(1%,硼酸盐法)

甲苯胺蓝染色液(1%,硼酸盐法) 货号:G3663 规格:100ml 保存:室温,避光,12个月。 产品说明: 甲苯胺蓝(Toluidine Blue O)是一种常用的人工合成染料,属于醌亚胺染料类。这类染料主要含有胺基和醌型苯环两个发色团,从而成色原显色。甲苯胺蓝中的阳离子有染色作用,组织细胞的酸性物质与其中的阳离子相结合而被染色。甲苯胺蓝不仅含有两个发色团,还含有两个助色团,能促使染料产生电离成盐类,帮助发色团对组织产生染色力,使切片上的组织细胞着色,可染细胞核使之呈蓝色;肥大细胞胞质内含有肝素和组织胺等异色性物质遇到甲苯胺蓝可呈异染性紫红色。甲苯胺蓝染色液(Toluidine Blue,1%,硼酸盐法)由于硼酸盐缓冲液呈强碱性,更利于组织细胞的着色。 操作说明:(仅供参考) (一)肥大细胞染色 1、脱蜡至蒸馏水。 2、浸染于甲苯胺蓝染色液10-15min,具体的染色时间根据切片厚度和组织的不同而定。 3、蒸馏水或去离子水轻轻冲洗。 4、(可选)0.5%冰乙酸分化,直到细胞核和颗粒清晰可见。 5、快速95%和无水乙醇脱水。 6、二甲苯透明,封固。 染色结果:肥大细胞呈紫红色;背景呈淡蓝色。 (二)软骨染色 1、石蜡切片入二甲苯2次每次15min。 2、系列乙醇各1min。 3、自来水洗2min。 4、入Toluidine Blue O Stain浸染30min。

5、自来水洗2min,滤纸吸干水分。 6、丙酮分化至软骨细胞呈紫蓝色清楚可见。 7、逐级乙醇脱水。 8、二甲苯透明,中性树胶封固。 染色结果:软骨、成骨细胞呈紫红色;背景呈淡蓝色。 (三)细胞涂片染色 1、用20%的乙醇溶液稀释甲苯胺蓝染色液,一般要求稀释到0.1%即可。 2、细胞涂片后,立即放入95%的乙醇中固定,取出放在纸巾上。 3、滴加稀释后的甲苯胺蓝染色液进行滴染,加盖玻片让染料渗透到细胞中。 4、将玻片竖起,稍加压力,使多余染料被纸巾吸去。 5、无需干燥,直接镜检。 染色结果:细胞核、淋巴细胞呈深蓝色;核仁呈紫红色;红细胞呈橘红;细胞质、单核细胞呈淡蓝色。 (四)原位杂交染色 1、用蒸馏水或去离子水稀释到相应的浓度,凭经验一般稀释比例大于1:100。 2、玻片在稀释好的染色液中短暂浸泡。 3、在蒸馏水或去离子水浸泡数次。 4、按需求进行压片固定。 注意事项: 1、第一次使用本试剂时建议先取1-2个样品做预实验。 2、针对于胃粘膜组织、软骨组织等较难着色组织的染色,于甲苯胺蓝染色的时间应相应延长。 3、为了您的安全和健康,请穿实验服并戴一次性手套操作。 相关产品: G3661甲苯胺蓝染色液(1%,磷酸盐法) G3662甲苯胺蓝染色液(0.5%,磷酸盐法) G3665甲苯胺蓝染色液(0.5%,硼酸盐法)

甲苯胺蓝染色方法改进_沈瑞莲

关键词:甲苯胺蓝;尼氏体;染料中图分类号:G424.31 文献标识码:B 文章编号:1671-1246(2009)21-0092-01 染料的主要成分是色原,能使染料发生颜色的原子团称发色团。一种染料中可含有一个或多个发色团。甲苯胺蓝属噻嗪类染料,为碱性染料,可作细胞核染色剂。这类染料一般有2个发色团,一个是口印胺基,一个是醌型苯环。醌型苯环有明显的异染性,可分别表示为α-异染性(阴性),呈蓝色,即正染性;β-异染性(弱阳性),为紫色或紫红色;γ-异染性(阳性),为红色。但此种异染性染色后经酒精脱水时,又转变成正色性[1]。此染料特点是对于神经元的尼氏体染色效果好,还可染黏液、软骨基质、肥大细胞等。 甲苯胺蓝在组织学、病理学中应用较为广泛。具文献报道,甲苯胺蓝可快速染肥大细胞[2];在胃黏膜免疫组织化学反应中,经甲苯胺蓝复染后,胃黏膜组织内的幽门螺旋杆菌被染为蓝色[3];可早期识别活体中无症状的口腔鳞癌,良性溃疡通常具有非常明确的边缘着色,而癌前病变或恶性病变的边缘是弥散的[4]; 口服甲苯胺蓝胃内染色有助于胃癌的初步诊断[5];此外,甲苯胺蓝还可做宫颈涂片染色,能使上皮细胞核着蓝色,此法简便易行、效果好,但只限于宫颈癌的早期诊断[6]。尼氏体位于神经元的核周部,由大量平行排列的粗面内质网和游离核糖体组成,为易被碱性染料着色的嗜染质。笔者就甲苯胺蓝显示神经元尼氏体的方法进行了改进,具体如下。1方法 (1)取材:家兔脊髓,以新鲜为好。(2)固定:4.00%甲醛。 (3)染液:0.50%甲苯胺蓝、0.25%复制伊红。(4)制片:常规石蜡包埋,石蜡切片。 (5)染色过程:切片脱蜡下行至水,入0.50%的甲苯胺蓝溶液(55℃温箱) 20分钟,水洗2~3次入0.15%盐酸酒精分色2~3秒再水洗,上行酒精脱水至90.00%酒精,进0.25%复制伊红5~8秒,95.00%酒精脱色、脱水,透明、中性树胶封片。2结果 脊髓灰质和白质均呈淡红色,尼氏体呈紫蓝色块状,核膜、核仁清晰(见图1)。3讨论图1家兔脊髓石蜡切片显微照片(甲苯胺蓝染色,40×10 )经甲苯胺蓝染色后,用酸酒精分色较为重要。过去常用浓度为0.50%~1.00%酸酒精分色,笔者认为酸酒精浓度不宜过高,过高容易导致着色偏淡,且分色时间不易掌握,本实验室经反复摸索得出,酸酒精浓度为0.15%较为适宜。 此外,实验用水的pH 值与染色效果密切相关,一般在HE 染色中用酸酒精分色后要进行流水冲洗以达到蓝化的目的,但经甲苯胺蓝染色、 酸酒精分色后,用流水冲洗则需注意实验用水的pH 值,若pH 值小于6.50可使其褪色。笔者认为不需流水冲洗,尼氏体着色效果更佳。可能是由于尼氏体为嗜碱性物质,在碱性环境中更易着色。不同神经元的尼氏体形态和大小不一,如脊髓前角运动神经元的尼氏体较大且多呈虎斑样,而小脑蒲肯野纤维则呈细粒状。尼氏体的粗细与神经元的大小并无明显直接关系,但神经元处于正常状态时,尼氏体一般都有比较固定的形态;当神经元受损或代谢功能发生障碍时,尼氏体即出现形态变化甚至溶解[7]。 因此实验用水pH 值对实验结果非常重要,尤其在临床病理诊断中,一定要排除实验条件对实验结果的干扰。 参考文献: [1]杜卓民.实用组织学技术[M].北京:人民卫生出版社,1998. [2]陆云,汤美蓉.甲苯胺蓝快染肥大细胞的体会[J].皖南医学院学报,1991,10(4):289. [3]闭慎金.幽门螺杆菌甲苯胺蓝法在胃黏膜免疫组化复染中的应用[J].广西医学,1996,21(3):497~498. [4]朱光第.用甲苯胺蓝染色检查口腔癌前病变与恶性病变[J].实用医学杂志,1985,10:36. [5]赵怀玉.口服甲苯胺蓝体内染色对胃癌的诊断价值[J].兰州大学学报, 1982,9(3):155.[6]梁锐.用甲苯胺蓝染液做宫颈涂片染色[J].山西中医学院学报,2006,7(1):27. [7]成令忠.现代组织学[M].上海:上海科学技术文献出版社,2003.蒉 甲苯胺蓝染色方法改进 沈瑞莲,金洁,范慧杰,邵长玲,周秀艳,孔军伶 (首都医科大学燕京医学院,北京101300 ) 卫生职业教育实验与实习Vol.272009No.21 92--

甲苯胺蓝(TB)染色实验

甲苯胺蓝(TB)染色 一、甲苯胺蓝(TB)染色简介 甲苯胺蓝(Toluidine blue,TB)是常用的人工合成染料的一种,属于醌亚胺染料类,这类染料一般含有两个发色团,一个是胺基,一个是醌型苯环,来构成色原显色。染料除有发色团外,还要有能使色原对组织及其他被染物产生亲和力的原子团即助色。助色团能促使染料产生电离成盐类,帮助发色团对组织产生染色力,使切片上的组织细胞着色。甲苯胺蓝不仅含有两个发色团,还含有两个助色团,为碱性染料,甲苯胺蓝中的阳离子有染色作用,组织细胞的酸性物质与其中的阳离子相结合而被染色。 二、染色步骤(软骨组织为例) 1、常规脱钙,包埋、固定。 2、石蜡切片入二甲苯2次。 3、系列乙醇各1min自来水洗。 4、入软骨染色液浸染。根据不同组织,染色时间不完全相同。 5、自来水洗2min,滤纸吸干水分。 6、丙酮分化至软骨细胞呈紫蓝色清楚可见。 7、逐级乙醇脱水,二甲苯透明,中性树胶封固。 8、结果:软骨、成骨细胞呈紫红色;背景呈淡蓝色 三、样本说明 1、石蜡切片 取材:1、组织离体后需及时固定;2、组织标本不宜过大、过厚。 固定:1、固定液:10%福尔马林(4%多聚甲醛)或10%中性甲醛;2、用量:一般固定液的量与组织体积比为10:1~20:1;3、固定:适宜的固定时间,主要根据材料的大小、松密程度及固定液的穿透速度而定。 保存:切片经60℃烤片3-5小时后,可于常温或4℃干燥保存。 2、冰冻切片 取材:取材后需立即置于超低温冰箱或液氮中保存。 固定:样本冰冻切片后,应立即放入甲醇、丙酮、95%酒精、4%多聚甲醛等固定液中固定。

保存:固定好的切片自然风干,密封后置于-80℃、-20℃保存,尽快用于后续实验。 3、细胞块石蜡切片 细胞量较多的样品,可离心分离所需细胞,用中性甲醛固定后制作成琼脂细胞块,然后按照制作石蜡切片的操作流程进行切片。 4、细胞爬片 在孔板里做的细胞爬片,爬片取出后,用PBS洗涤2次(根据研究目的,PBS洗涤可选择不做),用4%多聚甲醛4℃固定15分钟,将表面液体吹干,置于-20℃保存。若在短时间内即开展实验,可在加固定液后,于4℃冰箱中放置一段时间。 5、细胞涂片细胞涂片常用的固定液有95%酒精(最为常用)、酒精-冰醋酸液、乙醚-酒精液和Carney’s液等。 四、注意事项 1、常用的固定液为中性甲醛和4%多聚甲醛,能使大多数抗原保存良好,适用于免疫组织化学。 2、病理实验切片最好是防脱片,以免实验过程中出现掉片。若客户提供切片,应告知切片有无防脱处理。 3、骨组织、皮肤组织或脂肪含量较高的样本,实验过程中有较高的掉片几率。 4、客户可提供组织块(以10%福尔马林、4%多聚甲醛或10%中性甲醛固定,如组织块极小请事先说明)、蜡块或切片(使用免疫组化专用切片,以避免实验过程中掉片) 5、待检测蛋白的种属、实验分组情况及实验背景资料、其他具体要求等需事先说明。 6、若客户提供骨组织或钙化程度较高的组织进行实验,需进行脱钙处理。 7、浸泡在固定液中的组织样本,在运输中容器需密封,防止破碎、渗漏。

尼氏染色液(甲苯胺蓝法)

南京森贝伽生物科技有限公司 网址:https://www.360docs.net/doc/4514745408.html,/ 第1页 仅供科研 版本号:180917 尼氏染色液(甲苯胺蓝法) 【产品组成】 【保存条件】 室温,避光,12个月 【产品概述】 神经元细胞体包括一个具有皱褶核膜的大细胞核、稀疏的染色质和一个明显的核仁。在细胞体中细胞质是尼氏颗粒,即能够代表粗面内质网并在很多神经元中产生特异的斑点状嗜碱性表现的嗜碱性颗粒。尼氏颗粒可以用很多染色来显示如中性红、亚甲基蓝、甲苯胺蓝和甲基紫等。染色的变异、pH 和分化的时间使一些染色既可以仅突出尼氏物质,也可以显示神经元的细胞核和神经胶质。尼氏体(Nissl body)或称尼氏小体是分布于神经细胞胞质内的三角形或椭圆形小块状物质,能被碱性染料如硫堇、亚甲蓝、甲苯胺蓝和焦油紫等染料染成紫蓝色。各种神经细胞内都含有尼氏体,但其形状、数量、分布位置常常不同。尼氏体也存在于树突中,但不在于轴突和包体的轴丘。尼氏体会因为生理状态的变化而变化,尼氏体是神经元内合成蛋白质合成的重要部位,当神经元受到刺激后,包体内的尼氏体会明显减少。 尼氏染色液(Nissl Stain ,甲苯胺蓝法)采用甲苯胺蓝(Toluidine blue)作为核心染料,可以用于石蜡组织切片的尼氏体染色,尼氏体的存在和消失是神经细胞是否受损的重要指标,当发生脑炎、脑缺血、轴突反应等情况时,尼氏体会发生溶解甚至消失。 【使用方法】 1、新鲜组织固定于乙醇、Carnoy 固定液或10%中性福尔马林溶液后,常规脱水包埋。 2、切片厚6-8μm ,常规脱蜡至水。 3、蒸馏水冲洗。 4、切片入Toluidine blue Stain ,将染色缸置于恒温箱50-60℃浸染25-50min 。 5、蒸馏水稍冲洗。 6、入 70%乙醇冲洗。 7、95%乙醇迅速分化。分化不易控制,如果分化失败,可重复步骤4。 8、无水乙醇迅速脱水。二甲苯透明,中性树胶封固。 【染色结果】 【注意事项】 1、尼氏体离体后容易溶解,所以组织取出后应立即固定,否则难以着色。 2、组织固定起着非常重要的作用,固定可采用乙醇、Carnoy 固定液或中性福尔马林溶液。 3、本染色液对石蜡组织切片的尼氏染色效果较好。

尼氏染色液(甲苯胺蓝法)

尼氏染色液(甲苯胺蓝法) 简介: 尼氏体(Nissl body)或称尼氏小体是分布于神经细胞胞质内的三角形或椭圆形小块状物质,能被碱性染料如硫堇、亚甲蓝、甲苯胺蓝和焦油紫等染料染成紫蓝色。各种神经细胞内都含有尼氏体,但其形状、数量、分布位置常常不同。尼氏体也存在于树突中,但不在于轴突和包体的轴丘。尼氏体会因为生理状态的变化而变化,尼氏体是神经元内合成蛋白质合成的重要部位,当神经元受到刺激后,包体内的尼氏体会明显减少。 Leagene 尼氏染色液(Nissl Stain,甲苯胺蓝法)采用甲苯胺蓝(Toluidine blue)作为核心染料,可以用于石蜡组织切片的尼氏体染色,尼氏体的存在和消失是神经细胞是否受损的重要指标,当发生脑炎、脑缺血、轴突反应等情况时,尼氏体会发生溶解甚至消失。组成: 操作步骤(仅供参考): 1、新鲜组织固定于乙醇、Carnoy 固定液或10%中性福尔马林溶液后,常规脱水包埋。 2、切片厚6-8μm,常规脱蜡至水。 3、蒸馏水冲洗。 4、切片入Toluidine blue Stain,将染色缸置于恒温箱浸染。 5、蒸馏水稍冲洗。 6、入70%乙醇冲洗。 7、95%乙醇迅速分化。分化不易控制,如果分化失败,可重复步骤4。 8、无水乙醇迅速脱水。二甲苯透明,中性树胶封固。染色结果: 尼氏体 紫蓝色细胞核棕红色 注意事项: 1、尼氏体离体后容易溶解,所以组织取出后应立即固定,否则难以着色。 2、组织固定起着非常重要的作用,固定可采用乙醇、Carnoy 固定液或中性福尔马林溶液。编号 名称DK0023 Storage Toluidine blue Stain 100ml RT 避光使用说明书1份

改良甲苯胺蓝染色法

pression of M DM2in primary(de nov o)glioblastomas.J Neuropathol Exp Neurol,1997,56:1802185. 5Jung JM,Bruner JM,Ruan S,et al.Increased levels of p21W AF1/ Cip1in human brain tum ors.Oncogene,1995,11:202122028 6Hermans on M,Funa K,K oopmann J,et al.Ass ociation of loss of het2 erozyg osity on chrom os ome17p with high platelet derived growth factorαreceptor expresslon in human malignant gliomas.Cancer Res,1996,56: 1642171. 7Ng HK,Lau K M,Tse J Y,et al.C ombined m olecular genetic studies of chrom os ome22q and the neurofibromatosis type2gene in central nerv ous system tum ors.Neurosurg,1995,37:7642773. 8Y ahanda AM,Bruner JM,D onehower LA,et al.Astrocytes derived from p532deficient m ice provide a multistep in vitro m odel for develop2 ment of malignant gliomas.M ol Cell Biol,1995,15:424924259. 9Louis DN.A m olecular genetic m odel of astrocytoma histopathology. Brain pathol,1997,7:7552764. 10Ueki K,Ono W,Hens on JW,et al.CDK N2/p16or RB alterations oc2 cur in the majority of glioblastomas and are inversely correlated.Cancer Res,1996,56:1502153. 11R ollbrocker B,W aha A,Louis DN,et al.Am plifcation of the cyclin2 dependent kinase4(CDK4)gene is ass ociated with high cdk4protein levels in glioblastoma multiforme.Acta Neuropathol,1996,92:70274. 12Ono Y,T am iya t,Lchikawa T,et al.M alignant astrocytomas with ho2 m ozyg ous CDK N2/p16gene deletions have higher K i267proliferation in2 dices.J Neuropathol Exp Neurol1996,55:102621031. 13R osenberg J E,Lisle DK,Burwick JA,et al.Refined deletion mapping of the chrom os ome19q glioma tum or suppress or gene to the D19S4122 ST D interval.Oncogene,1996,13:2483. 14S onoda Y,Lizuka M,Y asuda J,et al.Loss of heterozyg osity at11p15in malignant glioma.Cancer Res,1995,55:216622168. 15Rasheed BK A,M clendon RE,Friedman HS,et al.Chrom os ome10 deletion mapping in human gliomas:a comm on deletion region in10q25. Oncogene,1995,10:224322246. 16S teck PA,Pershouse M A,Jasser S A,et al.Identification of a candidate tum our suppress or gene,M M AC1,at chrom os one10q23.3that is mutat2 ed in multiple advanced cancers.Nature G enet,1997,15:3562362. 17Cheney IW,Johs on DE,Vaillancourt M,et al.Suppression of tum ori2 genicity of glioblastoma cells by adenovirus2mediated M M AC1/PTE N gene.Cancer Res,1998,58:233122334, 18Shayester L,Lu Y,K uo W L,et al.PIK3CA is im plicated as an onco2 gene in ovarian cancer.Nat G enet,1999,21:992102 19Leung SY,Chan T L,Chung LP,et al.M icrosatellite instability and mu2 tation of DNA m ismatch repair genes in gliomas.Am J Pathol,1998, 153:118121188. 20G oldman CK,K im J,W ong W J,et al.E pidermal growth factor stimu2 lates vascular endothelial growth factor production by human malignant glioma cells:a m odel of glioblastoma multiforme pathophysiology.M ol Biol Cell,1993,4:1212133. 21Biemat W,T ohma Y,Y onekawa Y,et al.Alterations of cell cycle regu2 latory genes in primary(de nov o)and secondary gliobiastoma.Acta Neu2 ropathol,1997,94:3032309. 22T ohma Y,G ratas C,Biernat W,et al.PTE N(M M AC1)mutations are frequent in primary glioblastomas(de nov o)but not in secondary glioblas2 tomas.J Neuropathol Exp Neurol,1998,57:6842689. 23M eyer2Puttlitz B,Hayashi Y,W aha A,et al.M olecular genetic analysis of giant cell glioblastomas.Am J Pathol,1997,151:8532857. (收稿:1999203215) (本文编辑:常秀青) ?技术交流? 改良甲苯胺蓝染色法密方元 杨洪才 在常规病理工作中,为观察肿瘤的性质和预后,需对脑肿瘤标本作尼氏小体染色,在做动物实验时,也需对动物的脑组织进行尼氏小体染色,以观察神经元的存活情况。我们对原甲苯胺蓝染色法进行了一些改良,效果令人满意,现介绍如下。 一、材料和方法 11材料:作鼠脑损伤后应用人神经生长因子预防神经元死亡研究的雄性大鼠脑组织18例,冷冻切片10μm;人体尸检脑组织和正常小白鼠脑组织各2例,4%甲醛固定24小时,经常规法脱水,浸蜡,石蜡切片10μm。 21方法:(1)石蜡切片用二甲苯脱蜡,酒精清洗至水,冷冻切片无需此步骤;(2)1%甲苯胺蓝(上海试剂三厂生产,批号79047)水溶液室温下染3分钟,自来水清洗;(3)95%酒精分化至不掉色,显微镜下观察至尼氏小体清晰时止,水洗: (4)复染015%伊红染液1~2秒钟;(5)水洗切片后用吸水纸吸干切片上的水分,二甲苯透明,中性树胶封片。 二、结果 神经细胞中的尼氏小体呈深蓝色,胞核若无色,切片背作者单位:210002 南京,解放军第八一医院病理科景呈淡红色。鼠脑组织和人体尸检脑组织的染色结果一致,冷冻切片和石蜡切片的鼠脑组织染色结果一致。 三、讨论 原甲苯胺蓝法要求将甲苯胺蓝染液预热至50℃,再置56℃温箱染15~20分钟。在预实验中,我们按照原法加温染色均不满意,染色分化困难或无法分化。后来我们在室温下分别染1,3和5分钟,经分化后,认为染3分钟效果最好。 原甲苯胺蓝染色法显示的尼氏小体呈深蓝色,其背景为淡蓝色,尼氏小体与背景对比不够鲜明是其缺点,给观察带来一定的难度,我们在工作中试用伊红作复染,也即增加了一步复染步骤。采用伊红复染后,尼氏小体和背景对比清晰,比未复染伊红者明显清晰可辨。 病理状态下神经细胞中的尼氏小体会发生数量和位置的改变,实验动物受伤或病变时尼氏小体也会减少或消失。改良后的甲苯胺蓝染色法比原法简便,无须加温,结果清晰,便于观察和照像,有助于某些脑肿瘤的诊断和一些实验动物的研究。 (收稿:1998206210 修回:1999201214) (本文编辑:常秀青) ? 8 6 1 ?中华病理学杂志1999年6月第28卷第3期 Chin J Pathol,June1999,V ol28,N o.3

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