甲苯胺蓝染色液
甲苯胺蓝染色液(0.5%,磷酸盐法)
产品简介：
甲苯胺蓝(Toluidine Blue O)是一种常用的人工合成染料, 属于醌亚胺染料类, 这类染料主要含有胺基和醌型苯环两个发色团，从而成色原显色。,甲苯胺蓝中的阳离子有染色作用, 组织细胞的酸性物质与其中的阳离子相结合而被染色。甲苯胺蓝还含有两个助色团助色团，能促使染料产生电离成盐类, 帮助发色团对组织产生染色力, 使切片上的组织细胞着色，可染细胞核使之呈蓝色。另外，肥大细胞胞质内含有肝素和组织胺等异色性物质，遇到甲苯胺蓝可呈异染性紫红色。
临床上，经常用甲苯胺蓝对软骨细胞和肥大细胞进行染色。
主要成分：主要由Toluidine Blue O、磷酸盐缓冲液等组成。
操作步骤（仅供参考）：
(一)肥大细胞染色
1、脱蜡至蒸馏水。
2、根据切片厚度和组织的不同，浸染于甲苯胺蓝染色液5～30min。
3、蒸馏水或去离子水轻轻冲洗3～5min。
4、(可选)0.5%冰乙酸分化，直到细胞核和颗粒清晰可见。
5、快速95%和无水乙醇脱水。
6、 二甲苯透明。
7、封固。
染色结果：肥大细胞呈紫红色；背景呈不同程度的蓝色。
(二)细胞涂片染色
1、按要求稀释甲苯胺蓝染色液, 一般要求稀释到0.1%即可。
2、用稀释后的甲苯胺蓝染色液进行滴染，一般细胞涂片1～2min即可。
3、蒸馏水或去离子水轻轻冲洗3～5min。
4、晾干。
5、镜检。
(三)原位杂交染色
1、用蒸馏水或去离子水稀释到相应的浓度，凭经验一般稀释比例大于1:100。
2、玻片在稀释好的染色液中短暂浸泡。
3、在蒸馏水或去离子水浸泡数次。
4、按需求进行压片固定。
注意事项：
1、为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。
2、针对于胃粘膜组织、软骨组织等较难着色组织的染色，浸染于甲苯胺蓝染色液的时间应
相应延长。
有效期：12个月有效。
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产品编号 产品名称
DZ0040改良苯酚品红染色液
DA0059甲苯胺蓝染色液(0.5%,硼酸盐法)
DA0072中性红染色液(1%)
DC0032Masson三色染色试剂盒
DC0095核固红染色液(0.1%)
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DG0022淀粉样物质染色试剂盒(Highman刚果红法)
DH0006苏木素伊红(HE)染色液试剂盒
革兰氏染色的实验原理
革兰氏染色的实验原理 ●G＋细胞壁的网状结构致密，交联度高，用乙醇处理后，发生脱水作用，肽聚糖层孔径缩小，透性降低，故细菌仍保留初染时的紫色。 ●G－肽聚糖层较薄，交联度低，含较多类脂质，故用乙醇处理后，类脂质被溶解，细胞壁孔径变大，通透性增加，使初染的结晶紫和碘的复合物易于渗出，细胞被脱色，经沙黄复染呈红色。 涂片固定→结晶紫初染（碱性）→碘液媒染→乙醇（丙酮）脱色→番红复染（碱性）
◆◆◆原理： 当用结晶紫初染后，所有细菌都被染成初染剂的兰紫色，碘作为媒染剂，它能与结晶紫结合成结晶紫-碘复合物，从而增强了染料与细菌的结合力。当用脱色剂处理时，两类细菌的脱色效果是不同的。革兰氏阳性细菌的细胞壁主要有舦聚糖形成的网状结构组成，壁厚，类脂含量低，用酒精脱色时细胞壁脱水，使舦聚糖层的网状结构孔径缩小，透性降低，从而使结晶紫碘复合物不易被洗脱而保留在细胞内，经脱色和复染后仍保留初染剂的兰紫色。革兰氏阴性细菌则不同，由于其细胞壁舦聚糖层较薄，类脂含量较高，，所以当脱色处理时，类脂质被酒精溶解，细胞壁透性增大，使结晶紫-碘复合物比较容易被洗脱出来，用复染剂复染后，细胞被染上复染剂的红色。 ◆◆实验步骤： 1、制片 涂片——干燥——固定 2、初染 滴加结晶紫染色1——2分钟，水洗； 3、媒染 用碘液冲去残水，并用碘液覆盖1分钟； 4、脱色 滴加95%酒精脱色，25-30秒，立即水洗； 5、复染 用番红液复染约2分钟，水洗； 6、镜检 干燥后，用油镜观察。 细菌：细菌是一种具有细胞壁的单细胞微生物，在适宜条件下，能进行无性二分裂繁殖，其形态和结构相对稳定。一般体积微小，通常需要借助光学显微镜才能看到，其测量单位用微米表示。
软骨染色液(甲苯胺蓝法)染色步骤及注意事项
软骨染色液(甲苯胺蓝法)染色步骤及注意事项 货号：G2543 规格：100ml 保存：室温，避光，12个月。 产品说明： 甲苯胺蓝(Toluidine Blue O)是一种常用的人工合成染料,属于醌亚胺染料类。这类染料主要含有胺基和醌型苯环两个发色团，从而成色原显色。甲苯胺蓝中的阳离子有染色作用,组织细胞的酸性物质与其中的阳离子相结合而被染色。甲苯胺蓝不仅含有两个发色团，还含有两个助色团，能促使染料产生电离成盐类,帮助发色团对组织产生染色力,使切片上的组织细胞着色，可染细胞核使之呈蓝色；肥大细胞胞质内含有肝素和组织胺等异色性物质遇到甲苯胺蓝可呈异染性紫红色。甲苯胺蓝染色液(甲苯胺蓝法)呈强碱性，更利于组织细胞的着色。操作说明：（仅供参考） 1、常规脱钙，包埋，固定。 2、石蜡切片入二甲苯2次。 3、系列乙醇各1min。自来水洗2min。 4、入Toluidine Blue O Stain浸染30min。根据不同组织，染色时间不完全相同。 5、自来水洗2min，滤纸吸干水分。 6、丙酮分化至软骨细胞呈紫蓝色清楚可见。 7、逐级乙醇脱水。 8、二甲苯透明，中性树胶封固。 染色结果： 软骨、成骨细胞呈紫红色；背景呈淡蓝色。
注意事项： 1、第一次使用本试剂时建议先取1-2个样品做预实验。 2、针对于胃粘膜组织、软骨组织等较难着色组织的染色，浸染于甲苯胺蓝染色液的时间应相应延长。 3、为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。 相关试剂： G3661甲苯胺蓝染色液(1%,磷酸盐法) G3662甲苯胺蓝染色液(0.5%,磷酸盐法) G3665甲苯胺蓝染色液(0.5%,硼酸盐法)
甲苯胺蓝染色液(0.5%,磷酸盐法)使用说明
甲苯胺蓝染色液(0.5%,磷酸盐法)使用说明 货号：G3662 规格：100ml 保存：室温，避光，12个月。 产品说明： 甲苯胺蓝(Toluidine Blue O)是一种常用的人工合成染料,属于醌亚胺染料类。这类染料主要含有胺基和醌型苯环两个发色团，从而成色原显色。甲苯胺蓝中的阳离子有染色作用,组织细胞的酸性物质与其中的阳离子相结合而被染色。甲苯胺蓝不仅含有两个发色团，还含有两个助色团，能促使染料产生电离成盐类,帮助发色团对组织产生染色力,使切片上的组织细胞着色，可染细胞核使之呈蓝色。肥大细胞胞质内含有肝素和组织胺等异色性物质遇到甲苯胺蓝可呈异染性紫红色。 操作说明：（仅供参考） (一)肥大细胞染色 1、脱蜡至蒸馏水。 2、浸染于甲苯胺蓝染色液10-15min，具体的染色时间根据切片厚度和组织的不同而定。 3、蒸馏水或去离子水轻轻冲洗。 4、(可选)0.5%冰乙酸分化，直到细胞核和颗粒清晰可见。 5、快速95%和无水乙醇脱水。 6、二甲苯透明，封固。 染色结果：肥大细胞呈紫红色；背景呈淡蓝色。 (二)软骨染色 1、石蜡切片入二甲苯2次每次15min。
2、系列乙醇各1min。 3、自来水洗2min。 4、入Toluidine Blue O Stain浸染30min。 5、自来水洗2min，滤纸吸干水分。 6、丙酮分化至软骨细胞呈紫蓝色清楚可见。 7、逐级乙醇脱水。 8、二甲苯透明，中性树胶封固。 染色结果：软骨、成骨细胞呈紫红色；背景呈淡蓝色。 (三)细胞涂片染色 1、用20%的乙醇溶液稀释甲苯胺蓝染色液,一般要求稀释到0.1%即可。 2、细胞涂片后，立即放入95%的乙醇中固定，取出放在纸巾上。 3、滴加稀释后的甲苯胺蓝染色液进行滴染，加盖玻片让染料渗透到细胞中。 4、将玻片竖起，稍加压力，使多余染料被纸巾吸去。 5、无需干燥，直接镜检。 染色结果：细胞核、淋巴细胞呈深蓝色；核仁呈紫红色；红细胞呈橘红；细胞质、单核细胞呈淡蓝色。 (四)原位杂交染色 1、用蒸馏水或去离子水稀释到相应的浓度，凭经验一般稀释比例大于1:100。 2、玻片在稀释好的染色液中短暂浸泡。 3、在蒸馏水或去离子水浸泡数次。 4、按需求进行压片固定。 注意事项：
革兰氏染色法的步骤
革兰氏染色法的步骤 详细阐叙革兰氏染色法的步骤 浏览次数:174次悬赏分:0 |解决时间:2011-5-25 17:44 |提问者:肖箫 2011shaw 最佳答案 革兰氏染色 一、目的:在细胞发放之前,利用标准的革兰氏染色法对即将发放的细胞悬液进行检测,判断细胞悬液中是否含有革兰氏阳性菌或革兰氏阴性菌。 二、原理: 通过结晶紫初染和碘液媒染后,在细胞壁内形成了不溶于水的结晶紫与碘的复合物,革兰氏阳性菌由于其细胞壁较厚、肽聚糖网层次较多且交联致密,故遇乙醇脱色处理时,因失水反而使网孔缩小,再加上它不含类脂,故乙醇处理不会出现缝隙,因此能把结晶紫与碘复合物牢牢留在壁内,使其仍呈紫色;而革兰氏阴性菌因其细胞壁薄、外膜层类脂含量高、肽聚糖层薄且交联度差,在遇脱色剂后,以类脂为主的外膜迅速溶解,薄而松散的肽聚糖网不能阻挡结晶紫与碘复合物的溶出,因此通过乙醇脱色后仍呈无色,再经沙黄等红色染料复染,就使革兰氏阴性菌呈红色。 三、实验用品准备: 灭菌玻片、10-100ul移液器、10-100ul灭菌移液吸头、100ul-1000ul移液器、100ul-1000ul移液吸头、接种环、酒精灯、打火机、革兰氏染色液、吸水纸、显微镜、香柏油、擦镜纸、计时器 四、操作: 1 涂片:取灭过菌的载玻片于实验台上,用移液枪吸取10ul待检样品滴在载玻片的中央,用烧红冷却后的接种环将液滴涂布成一均匀的薄层,涂布面不宜过大。 2 干燥:将标本面向上,手持载玻片一端的两侧,小心地在酒精灯上高处微微加热,使水分蒸发,但切勿紧靠火焰或加热时间过长,以防标本烤枯而变形。 3 固定:固定常常利用高温,手持载玻片的一端,标本向上,在酒精灯火焰处尽快的来回通过2-3次,共约2-3秒种,并不时以载玻片背面加热触及皮肤,不觉过烫为宜(不超过60℃),放置待冷后,进行染色。 4 初染:在涂片薄膜上滴加草酸铵结晶紫1-2滴,使染色液覆盖涂片,染色约 1min。 5 水洗:斜置载玻片,在自来水龙头下用小股水流冲洗,直至洗下的水呈无色为止。 6 媒染:用100-1000ul移液枪吸取约300ul碘液滴在涂片薄膜上,使染色液覆盖涂片,染色约1min。
微生实验报告 2012.10.10 实验一 细菌的简单染色和革兰氏染色
微生实验报告 姓名： xx 专业年级：2011级生物技术 学号：1032 实验二细菌的简单染色和革兰氏染色 一、实验目的 学习细菌的简单染色法和革兰氏染色法的实验原理和实验操作。 二、实验原理 用于生物染色的染料主要有碱性染料、酸性染料和中性染料三大类。碱性染料的离子带正电荷，能和带负电荷的物质结合。因细菌蛋白质等电点较低，当它生长于中性、碱性或弱酸性的溶液中时常带负电荷，所以通常采用碱性染料（如美蓝、结晶紫、碱性复红或孔雀绿等）使其着色。酸性染料的离子带负电何，能与带正电荷的物质结合。当细菌分解糖类产酸使培养基pH值下降时，细菌所带正电荷增加，因此易被伊红、酸性复红、或刚果红等酸性染料着色。中性染料是前两者的结合物，又称复合染料，如伊红美蓝、伊红天青等。 简单染色法是只用一种染料使细菌着色以显示其形态的方法，简单染色一般难于辨别细菌细胞的构造。 革兰氏染色法是1884年由丹麦病理学家C.Gram所创立的。革兰氏染色法可将所有的细菌区分为革兰氏阳性菌（G+）和革兰氏阴性菌（G—）两大类，是细菌学上最常用的鉴别染色法。该染色法之所以能将细菌分为G+菌和G—菌，是由这两类菌的细胞壁结构和成分的不同所决定的。G—菌的细胞壁中含有较多的易被乙醇溶解的类脂质，增加了细胞壁的通透性，使处染的结晶紫和碘的复合物易于渗出，结果细菌就被脱色，再经番红复染后就成红色。G+菌细胞壁中肽聚糖层厚且交联度高，类脂质含量少，经脱色剂处理后反而使肽聚糖层的孔
径缩小，通透性降低，草酸铵结晶紫与碘的复合物不易被脱掉，因此细菌仍保留处染时的紫色。 三、实验器材 1、菌种： 金色葡萄球菌、枯草芽孢杆菌、大肠杆菌。 2、染色剂和试剂： 草酸铵结晶紫染液，卢哥氏碘液，95%酒精，番红复染液，复红染液，吕氏美蓝染液，显微镜擦拭液（乙醚： 乙醇=7:3），xx柏油。 3、器材： 废液缸，洗瓶，载玻片，接种环，酒精灯，擦镜纸，双层瓶，显微镜。 四、实验方法 （一）简单染色 1．涂片： 取干净载玻片一片，在载玻片的左右各加一滴生理盐水，按无菌操作法取菌涂片，左边涂金黄色葡萄球菌，右边涂大肠杆菌，做成浓菌悬液。再取干净载玻片一块将刚制成的金黄色葡萄球菌浓菌悬液挑1~2环涂在左边制成薄的涂片，将大肠杆菌的浓菌悬液取1~2环涂在右边制成薄涂片。亦可直接在载玻片上制薄的涂片，注意取菌不要太多。 2．晾干： 让涂片自然晾干。 3．固定：
甲苯胺蓝染色液(1%,磷酸盐法)
甲苯胺蓝染色液(1%,磷酸盐法) 简介： 甲苯胺蓝(T oluidine Blue O)是一种常用的人工合成染料, 属于醌亚胺染料类, 这类染料主要含有胺基和醌型苯环两个发色团，从而成色原显色。甲苯胺蓝中的阳离子有染色作用, 组织细胞的酸性物质与其中的阳离子相结合而被染色。甲苯胺蓝还含有两个助色团，能促使染料产生电离成盐类, 帮助发色团对组织产生染色力, 使切片上的组织细胞着色，可染细胞核使之呈蓝色。 组成： 操作步骤(仅供参考)： (一)肥大细胞染色 1、脱蜡至蒸馏水。 2、根据切片厚度和组织的不同，浸染于甲苯胺蓝染色液。 3、蒸馏水或去离子水轻轻冲洗。 4、(可选)0.5%冰乙酸分化，直到细胞核和颗粒清晰可见。 5、快速95%和无水乙醇脱水。 6、 二甲苯透明，封固。 染色结果：肥大细胞呈紫红色；背景呈淡蓝色。 (二)软骨染色 1、 石蜡切片入二甲苯2次每次。 2、 系列乙醇各1min 。 3、 自来水洗2min 。 4、 入Toluidine Blue O Stain 浸染。 5、 自来水洗2min ，滤纸吸干水分。 6、 丙酮分化至软骨细胞呈紫蓝色清楚可见。 7、 逐级乙醇脱水。 8、 二甲苯透明，中性树胶封固。 染色结果：软骨、成骨细胞呈紫红色；背景呈淡蓝色。 (三)细胞涂片染色 编号 名称 DA0055 Storage Toluidine Blue O Stain(1%,磷酸盐法) 100ml RT 避光 使用说明书 1份
1、用20%的乙醇溶液稀释甲苯胺蓝染色液, 一般要求稀释到0.1%即可。 2、细胞涂片后，立即放入95%的乙醇中固定，取出放在纸巾上。 3、滴加稀释后的甲苯胺蓝染色液进行滴染，加盖玻片让染料渗透到细胞中。 4、将玻片竖起，稍加压力，使多余染料被纸巾吸去。 5、无需干燥，直接镜检。 染色结果：细胞核、淋巴细胞呈深蓝色；核仁呈紫红色；红细胞呈橘红；细胞质、单核细胞呈淡蓝色。 (四)原位杂交染色 1、用蒸馏水或去离子水稀释到相应的浓度，凭经验一般稀释比例大于1:100。 2、玻片在稀释好的染色液中短暂浸泡。 3、在蒸馏水或去离子水浸泡数次。 4、按需求进行压片固定。 注意事项： 1、针对于胃粘膜组织、软骨组织等较难着色组织的染色，浸染于甲苯胺蓝染色液的时间应 相应延长。 2、为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。
甲苯胺蓝染色液(0.5%,硼酸盐法)
甲苯胺蓝染色液(0.5%,硼酸盐法) 简介： 甲苯胺蓝(Toluidine Blue O)是一种常用的人工合成染料, 属于醌亚胺染料类, 这类染料主要含有胺基和醌型苯环两个发色团，从而成色原显色。甲苯胺蓝中的阳离子有染色作用, 组织细胞的酸性物质与其中的阳离子相结合而被染色。甲苯胺蓝还含有两个助色团，能促使染料产生电离成盐类, 帮助发色团对组织产生染色力, 使切片上的组织细胞着色，可染细胞核使之呈蓝色。另外，肥大细胞胞质内含有肝素和组织胺等异色性物质，遇到甲苯胺蓝可呈异染性紫红色，临床上经常用于肥大细胞染色。 Leagene 甲苯胺蓝染色液(Toluidine Blue,1%,硼酸盐法)由于硼酸盐缓冲液呈强碱性，更利于组织细胞的着色。 组成： 操作步骤(仅供参考)： (一)肥大细胞染色 1、脱蜡至蒸馏水。 2、根据切片厚度和组织的不同，浸染于甲苯胺蓝染色液。 3、蒸馏水或去离子水轻轻冲洗。 4、冰乙酸分化，直到细胞核和颗粒清晰可见。 5、快速和无水乙醇脱水。 6、 二甲苯透明，封固。 染色结果：肥大细胞呈紫红色；背景呈淡蓝色。 (二)软骨染色 1、 石蜡切片入二甲苯。 2、 系列乙醇各。 3、 自来水洗。 4、 入Toluidine Blue O Stain ，浸染。 5、 自来水洗，滤纸吸干水分。 6、 丙酮分化至软骨细胞呈紫蓝色清楚可见。 7、 逐级乙醇脱水。 编号 名称 DA0059 Storage Toluidine Blue O stain (0.5%,硼酸盐法) 100ml RT 避光 使用说明书 1份
8、二甲苯透明，中性树胶封固。 染色结果：软骨、成骨细胞呈紫红色；背景呈淡蓝色。 (三)细胞涂片染色 1、用乙醇溶液稀释甲苯胺蓝染色液, 一般要求稀释即可。 2、细胞涂片后，立即放入乙醇中固定，取出放在纸巾上。 3、滴加稀释后的甲苯胺蓝染色液进行滴染，加盖玻片让染料渗透到细胞中。 4、将玻片竖起，稍加压力，使多余染料被纸巾吸去。 5、无需干燥，直接镜检。 染色结果：细胞核、淋巴细胞呈深蓝色；核仁呈紫红色；红细胞呈橘红；细胞质、单核细胞呈淡蓝色。 (四)原位杂交染色 1、用蒸馏水或去离子水稀释到相应的浓度，凭经验一般稀释比例大于1:100。 2、玻片在稀释好的染色液中短暂浸泡。 3、在蒸馏水或去离子水浸泡数次。 4、按需求进行压片固定。 注意事项： 1、针对于胃粘膜组织、软骨组织等较难着色组织的染色，浸染于甲苯胺蓝染色液的时间应 相应延长。 2、为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。 有效期：12个月有效。 相关： 编号名称 DA0056甲苯胺蓝染色液(0.5%,磷酸盐法) DC0032Masson三色染色液 DG0005糖原PAS染色液 DH0006苏木素伊红(HE)染色液 TC0713 葡萄糖检测试剂盒(GOD-POD比色法)
革兰氏染色实验
革兰氏染色实验 革兰氏染色（Gram Staining）是用来鉴别细菌的一种方法：这种染色法利用细菌细胞壁上的生物化学性质不同，可将细菌分成两类，即革兰氏阳性（Gram Positive）与革兰氏阴性（Gram Negative）。(这种染色法是由一位丹麦医生汉斯·克里斯蒂安·革兰于1884年所发明)。 未经染色之细菌，由于其与周围环境折光率差别甚小，故在显微镜下极难观察。染色后细菌与环境形成鲜明对比，可以清楚地观察到细菌的形态、排列及某些结构特征，而用以分类鉴定。 阳性紫色，阴性红色 革兰氏阳性菌和革兰氏阴性菌： 革兰氏阳性菌：葡萄球菌属（主要是金黄色葡萄球菌、表皮葡萄球菌等）、链球菌属（肺炎链球菌、草绿色链球菌、肠球菌等）、白喉杆菌、炭疽杆菌、破伤风杆菌、蜡样芽孢杆菌等，其中，金黄色葡萄球菌、肠球菌等为临床重要的病原菌。
革兰氏阴性菌：埃希氏菌属、枸橼酸菌属、假单胞菌属（绿脓杆 菌等）、莫拉菌属（卡他莫拉菌等）、奈瑟菌属（淋球菌、脑膜炎 双球菌等）、不动杆菌属（鲍曼不动杆菌、罗菲不动杆菌等）、克 雷伯菌属（主要是肺炎克雷伯杆菌）、沙门氏菌属、志贺氏菌属（痢 疾杆菌等）、黄杆菌属、变形杆菌属、军团菌属、耶尔森菌属、嗜 血杆菌属（杜克雷嗜血杆菌、流感嗜血杆菌等）、产气杆菌属、霍 乱弧菌、阴沟肠杆菌等。革兰氏阴性菌在院内感染中的细菌感染中 占了大约65%，且大多菌株容易对抗菌药物耐药，产生“新德里金 属酶”（NDM-1）的绝大多数细菌都是革兰氏阴性菌（主要是大肠 杆菌、鲍曼不动杆菌和肺炎克雷伯杆菌）。 革兰氏阳性菌和革兰氏阴性菌是利用革兰氏染色法来鉴别的两大类细菌。大多数化脓性球菌都属于革兰氏阳性菌，它们能产生外毒素使人致病，而大多数肠道菌多属于革兰氏阴性菌，它们产生内毒素，靠内毒素使人致病。 细胞形态和结构 细胞的基本结构包括细胞壁和原生质体两部分。原生质体位于细胞壁内，包括细胞膜（细胞质膜）、细胞质、核质和内含物。另外细胞还含有有些特殊结构，主要有荚膜、芽孢、鞭毛和菌毛等4种。 1.细胞壁
甲苯胺蓝染色液(软骨专用)使用说明书
甲苯胺蓝染色液(软骨专用)使用说明书 货号：G2493 规格：100ml 保存：室温，避光，12个月。 产品说明： 甲苯胺蓝(Toluidine Blue O)是一种常用的人工合成染料,属于醌亚胺染料类。这类染料主要含有胺基和醌型苯环两个发色团，从而成色原显色。甲苯胺蓝中的阳离子有染色作用,组织细胞的酸性物质与其中的阳离子相结合而被染色。甲苯胺蓝不仅含有两个发色团，还含有两个助色团，能促使染料产生电离成盐类,帮助发色团对组织产生染色力,使切片上的组织细胞着色，可染细胞核使之呈蓝色；肥大细胞胞质内含有肝素和组织胺等异色性物质遇到甲苯胺蓝可呈异染性紫红色。甲苯胺蓝染色液(Toluidine Blue，1%，硼酸盐法)由于硼酸盐缓冲液呈强碱性，更利于组织细胞的着色。 操作说明：（仅供参考） 1、常规脱钙，包埋，固定。 2、石蜡切片入二甲苯2次，每次15min。 3、系列乙醇各1min。自来水洗2min。 4、入Toluidine Blue O Stain浸染15-20min。根据不同组织，染色时间不完全相同。 5、自来水洗2min，滤纸吸干水分。 6、丙酮分化至软骨细胞呈紫蓝色清楚可见。 7、逐级乙醇脱水。 8、二甲苯透明，中性树胶封固。 染色结果： 软骨、成骨细胞呈紫红色；背景呈淡蓝色。 注意事项： 1、第一次使用本试剂时建议先取1-2个样品做预实验。
2、针对于胃粘膜组织、软骨组织等较难着色组织的染色，浸染于甲苯胺蓝染色液的时间应相应延长。 3、为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。 相关产品： G3661甲苯胺蓝染色液(1%,磷酸盐法) G3662甲苯胺蓝染色液(0.5%,磷酸盐法) G3665甲苯胺蓝染色液(0.5%,硼酸盐法)
实验二 革兰氏染色法
实验二革兰氏染色法 【实验目的】 1.学习并初步掌握革兰氏染色法。 2.了解革兰氏染色法的原理及其在细菌分类鉴定中的重要性。 3.巩固显微镜油镜的使用方法。 【实验仪器、材料】 1.菌种：大肠杆菌，金黄色葡萄球菌菌液。 2.染色剂：革兰氏染色试剂盒（结晶紫染色液、碘液、脱色液（95%乙醇）、复红染液）。 3.仪器及其他物品： 显微镜、香柏油、无水乙醇、载玻片、擦镜纸、滤纸、酒精灯、试管架、废液缸、记号笔、接种环、镊子、打火机等。 【实验内容】 革兰氏染色法 一、染色标本制备 1.涂片取一张洁净的载玻片，滴加少许生理盐水，用无菌操作方法从试管中沾取菌液一环，与生理盐水研磨均匀，做一薄而均匀、直径约1cm的菌膜。涂菌后将接种环火焰灭菌。（事先在载玻片的反面滴加菌液的相应位置做好标记） 2.干燥于空气中自然干燥。亦可把玻片置于火焰上部略加温加速干燥。(温度不宜过高) 3.固定目的是杀死细菌并使细菌粘附在玻片上，便于染料着色，常
用加热法，即将细菌涂片膜向上，通过火焰3次，以热而不烫为宜，防止菌体烧焦、变形。此制片可用于染色。 二、染色 l.初染滴加结晶紫覆盖菌膜，染lmin，自来水缓缓冲洗，甩去积水。 2.媒染滴加卢氏碘液，染lmin，水洗，甩去积水。 3.脱色滴加95%乙醇数滴，20s~30s，见紫色脱下立即用水冲洗，甩去积水。 4.复染滴加石炭酸复红液，染lmin，水洗，甩去积水，标本片用滤纸吸干。 三、镜检 待染色片充分干燥后，用油镜观察。 【实验结果】 葡萄球菌呈葡萄状排列，呈紫色，为革兰氏阳性菌； 大肠杆菌为散在的短小杆菌，呈红色，为革兰氏阴性菌。 注：绘图展示染色结果 【结果分析、讨论（结论与评价）】 注：分析你的染色结果是否正确？如果不正确，请分析原因。
甲苯胺蓝水溶液(0.1%)
甲苯胺蓝水溶液(0.1%) 简介： 甲苯胺蓝(Toluidine Blue O)是一种常用的人工合成染料, 属于醌亚胺染料类, 这类染料主要含有胺基和醌型苯环两个发色团，从而成色原显色。甲苯胺蓝中的阳离子有染色作用, 组织细胞的酸性物质与其中的阳离子相结合而被染色。甲苯胺蓝还含有两个助色团，能促使染料产生电离成盐类, 帮助发色团对组织产生染色力, 使切片上的组织细胞着色，可染细胞核使之呈蓝色。另外，肥大细胞胞质内含有肝素和组织胺等异色性物质，遇到甲苯胺蓝可呈异染性紫红色，临床上经常用于肥大细胞染色。 Leagene 甲苯胺蓝水溶液(0.1%)由甲苯胺蓝、去离子水组成，一般用于特殊细胞的染色，不推荐用于软骨、胃粘膜等难染组织的染色。 组成： 操作步骤(仅供参考)： (一)肥大细胞染色 1、脱蜡至蒸馏水。 2、根据切片厚度和组织的不同，浸染于甲苯胺蓝染色液。 3、蒸馏水或去离子水轻轻冲洗。 4、冰乙酸分化，直到细胞核和颗粒清晰可见。 5、快速和无水乙醇脱水。 6、 二甲苯透明，封固。 染色结果：肥大细胞呈紫红色；背景呈淡蓝色。 (二)细胞涂片染色 1、细胞涂片后，立即放入乙醇中固定，取出放在纸巾上。 2、滴加稀释后的甲苯胺蓝染色液进行滴染，加盖玻片让染料渗透到细胞中。 3、将玻片竖起，稍加压力，使多余染料被纸巾吸去。 4、无需干燥，直接镜检。 染色结果：细胞核、淋巴细胞呈深蓝色；核仁呈紫红色；红细胞呈橘红；细胞质、单核细胞呈淡蓝色。 (三)原位杂交染色 编号 名称 DA0051 Storage 甲苯胺蓝水溶液(0.1%) 100ml RT 避光 使用说明书 1份
实验三-普通光学显微镜的使用方法及细菌的革兰氏染色法
实验三-普通光学显微镜的使用方法及细菌的革兰氏染色法
实验三普通光学显微镜的使用及细菌的简单染色、革兰氏染色法 生科15.2 周罡201500181104 【实验目的】 1.复习光学显微镜的结构、各部分的功能和使用方法。 2.学习并掌握油镜的原理和使用方法。 3.掌握利用显微镜观察不同微生物的基本技能，了解球菌、杆菌、放线菌、酵母、真菌在光学显微镜下的基本形态特征。 4.学习并掌握微生物的制片及简单染色的基本要求。 5.学习并掌握革兰氏染色法。 6.了解革兰氏染色原理。 7.巩固显微镜操作技术及无菌操作技术。【实验原理】 （一）普通显微镜的基本原理 1.基本原理 现代普通光学显 微镜利用目镜和物镜 两组透镜系统来昂达 成像，故又称为复式显 微镜。它们包括机械部
分和光学部分两部分。机械部分包括镜座、镜臂、镜筒、载物台、物镜转换器、粗调节螺旋、细调节螺旋、标本夹等。光学部分包括接目镜、接物镜、反光镜、光圈（虹采）、聚光镜（集光器）等。 显微镜的放大效能（分辨率）是由所用光波长短和物镜数值口径决定，缩短使用的光波波长或增加数值口径可以提高分辨率，可见光的光波幅度比较窄，紫外光波长短可以提高分辨率，但不能用肉眼直接观察。所以利用减小光波长来提高光学显微镜分辨率是有限的，提高数值口径是提高分辨率的理想措施。要增加数值口径，可以提高介质折射率，当空气为介质时折射率为1，而香柏油的折射率为1.51，和载片玻璃的折射率（1.52）相近，这样光线可以不发生折射而直接通过载片、香柏油进入物镜，从而提高分辨率。显微镜总的放大倍数是目镜和物镜放大倍数的 乘积，而物镜的放大倍数越高，分辨率越高。 2.油镜微生物学使用的显微镜的物镜通 常有低倍镜（10×）、高倍镜（40×）和油镜（100×），油镜是三者中放大倍数最大的，油镜的焦距和工作距离最短，油镜与其他物镜不同的是载玻片与
实验七革兰氏染色法doc资料
实验七革兰氏染色法
实验四革兰氏染色法 一、目的要求 了解革兰氏染色的原理，学习并掌握革兰氏染色的方法。 二、基本原理 革兰氏染色反应是细菌分类和鉴定的重要性状。它是1884年由丹麦医师Gram创立的。革兰氏染色法（Gram stain）不仅能观察到细菌的形态而且还可将所有细菌区分为两大类：染色反应呈蓝紫色的称为革兰氏阳性细菌，用G+表示；染色反应呈红色（复染颜色）的称为革兰氏阴性细菌，用G-表示。细菌对于革兰氏染色的不同反应，是由于它们细胞壁的成分和结构不同而造成的。革兰氏阳性细菌的细胞壁主要是由肽聚糖形成的网状结构组成的，在染色过程中，当用乙醇处理时，由于脱水而引起网状结构中的孔径变小，通透性降低，使结晶紫-碘复合物被保留在细胞内而不易脱色，因此，呈现蓝紫色；革兰氏阴性细菌的细胞壁中肽聚糖含量低，而脂类物质含量高，当用乙醇处理时，脂类物质溶解，细胞壁的通透性增加，使结晶紫-碘复合物易被乙醇抽出而脱色，然后又被染上了复染液（番红）的颜色，因此呈现红色。 革兰氏染色需用四种不同的溶液：碱性染料（basic dye）初染液；媒染剂（mordant）；脱色剂（decolorising agent）和复染液（counterstain）。碱性染料初染液的作用象在细菌的单染色法基本原理中所述的那样，而用于革兰氏染色的初染液一般是结晶紫（crystal violet）。媒染剂的作用是增加染料和细胞之间的亲和性或附着力，即以某种方式帮助染料固定在细胞上，使不易脱落，碘（iodine）是常用的媒染剂。脱色剂是将被染色的细胞进行脱色，不同类型的细胞脱色反应不同，有的能被脱色，有的则不能，脱色剂常用95％的酒精（ethanol）。复染液也是一种碱性染料，其颜色不同于初染液，复染的目的是使被脱色的细胞染上不同于初染液的颜色，而未被脱色的细胞仍然保持初染的颜色，从而将细胞区分成G+和G-两大类群，常用的复染液是番红。 三、器材 大肠杆菌，枯草芽孢杆菌； 革兰氏染色液，载玻片，显微镜等。 四、操作步骤
革兰氏染色标准操作程序
革兰氏染色标准操作规程 1 目的 确保革兰氏染色的正确操作，使革兰氏染色的操作得到有效控制，以提供稳定的实验结果。 2 适用范围 适用于本公司微生物实验室革兰氏染色实验。 3 职责 实验室技术人员应遵循此程序，确保按标准操作规程进行革兰氏染色。 4 程序 4.1革兰氏染色原理 通过结晶紫初染和碘液媒染后，在细胞壁内形成了不溶于水的结晶紫与碘的复合物，革兰氏阳性菌由于其细胞壁较厚、肽聚糖网层较多且交联致密，故遇丙酮脱色处理时，因失水反而使网孔缩小，再加上它不含类脂，故丙酮处理不会出现缝隙，因此能把结晶紫与碘复合物牢牢留在壁内，使其仍呈紫色；而革兰氏阴性菌因其细胞壁薄、外膜层类脂含量高、肽聚糖层薄且交联度差，在遇脱色剂后，以类脂为主的外膜迅速溶解，薄而松散的肽聚糖网不能阻挡结晶紫与碘复合物的溶出，因此通过丙酮脱色后仍呈无色，再经番红等红色染料复染，就使革兰氏阴性菌呈红色。 4.2实验物品 灭菌玻片、接种环、移液器、酒精灯、计时器、显微镜、香柏油、革兰氏染色液等。 4.3实验步骤 4.3.1涂片：取灭过菌的载玻片于实验台上，用移液器吸取10ul待检样品滴在载玻片的中央，用移液器分别吸取10ul金黄色葡萄球菌和大肠埃希菌位于待检品的两侧（中间要有足够的空间），分别作为阴阳性对照。用无菌接种环将液滴涂布成均匀的薄层，涂布面不宜过大。
4.3.2干燥：将标本面向上，手持载玻片一端的两侧，小心地在酒精灯火焰高处微微加热，使水分蒸发，但切勿紧靠火焰或加热时间过长，以防标本烤枯而变形。 4.3.3固定：固定常常利用高温，手持载玻片的一端，标本向上，在酒精灯火焰处尽快的来回通过2-3次，共约2-3秒种，并不时以载玻片背面加热触及皮肤，不觉得烫为宜（不超过60℃），放置待冷后，进行染色。 4.3.4初染：在涂片薄膜上滴加革兰氏结晶紫试剂1-2滴，使染色液覆盖涂片，染色约1min。 4.3.5水洗：斜置载玻片，用洗瓶小股水流冲洗，直至洗下的水呈无色为止。 4.3.6媒染：取1-2滴革兰氏碘液滴在涂片薄膜上，使染色液覆盖涂片，染色约1min。 4.3.7水洗：斜置载玻片，用洗瓶小股水流冲洗，直至洗下的水呈无色为止。 4.3.8脱色：斜置载玻片，滴加革兰氏脱色剂脱色，至流出的脱色剂不现紫色为止，大约需时20-30S，随即水洗。 4.3.9复染：在涂片薄膜上滴加革兰氏番红精复染剂1-2滴，使染色液覆盖涂片，染色约1min。 4.3.10水洗：斜置载玻片，用洗瓶小股水流冲洗，直至洗下的水呈无色为止。 4.3.11干燥：用吸水纸吸掉水滴，待标本片干后置显微镜下观察。 4.3.12观察：待标本片干后置显微镜下观察，用低倍镜观察，发现目标物后滴一滴香柏油在玻片上，用油镜观察细菌的形态及颜色。 4.4结果判定 显微镜观察由金黄色葡萄球菌制成的标本显示葡萄球状蓝紫色，大肠埃希菌制成的标本显示杆状红色，则实验过程有效。一方不成立则实验结果无效。 此时，如果样品在显微镜下呈蓝紫色，则判定样品菌株为革兰氏阳性菌；如果样品在显微镜下呈红色，则判定样品菌株为革兰氏阴性菌。 4.5实验结束 4.5.1实验结束后，按显微镜使用、维护和保养规程的要求，关闭和清洁显微镜。 4.5.2实验过程中用到的带菌工具，根据工具的不同选择不同的灭菌方式，确保物品丢弃前均已灭菌。
SD大鼠甲苯胺蓝染色步骤
SD大鼠甲苯胺蓝染色步骤 1、甲苯胺蓝染色法鉴定软骨细胞表型 Ⅱ代软骨细胞以2x105／ml的密度接种到铺有多聚赖氨酸盖玻片的24孔细胞培养板中，与原代培养条件相同，制作细胞爬片，常规培养48h后行甲苯胺蓝染色。 具体操作步骤如下： (1)倾去培养液，PBS充分漂洗3次，加入10％的中性甲醛常温下固定30min。 (2)倾去10％的中性甲醛，PBS充分漂洗3次，加入70％的乙醇固定30min除去四价铵离子，以免影响染色。 (3)倾去70％的乙醇溶液，PBS充分漂洗3次，晾干，加入甲苯胺蓝乙醇液(甲苯胺蓝0.2g 溶于30％乙醇100m1)染色_20min。 (4)PBS充分漂洗3次，迅速用无水乙醇再漂洗1次。 (5)取出爬片，干燥后中性树脂封片，电子显微镜下观察、摄片。 2、型胶原免疫细胞化染色法鉴定软骨细胞表型 Ⅱ代软骨细胞以2×105／ml的密度接种到铺有多聚赖氨酸盖玻片的24孔细胞培养板中，与原代培养条件相同，制作细胞爬片，常规培养48h后行免疫细胞化学法染色。实验过程严格遵照免疫细胞化学染色试剂盒说明书进行操作，PBS缓冲液代替一抗作为阴性对照组。 具体操作步骤如下： (1)倾去培养液，冰冷的PBS漂洗3x3min，加入4%多聚甲醛1ml室温固定15min。 (2)PBS清洗标本3x3min，每张标本滴加1滴新鲜配制的3％H202，室温下孵育10min。 (3)PBS清洗标本3x3min，每张标本滴加穿膜液0.5m](0.1％timton+o.1M Glycine)冰上孵育 30min。 (4)PBS清洗标本3x3min，每张标本滴加5mg／ml的动物非免疫封闭血清(BSA)0.5ml，室温 下封闭1h。 (5)滴加1：150稀释的兔抗大鼠II型胶原多克隆抗体50ul于封口膜上，使标本与一抗充分 接触，置于湿盒中4℃过夜。PBS缓冲液代替一抗作为阴性对照组。 (6)PBS清洗标本3x3min，加入二抗工作液，37℃孵育20min。 (7)PBS清洗标本3x3min，每张标本滴加1滴SABC试剂，37℃孵育20min后PBS(pH7．2~7．6) 清洗标本4x5min。 (8)DAB显色：取蒸馏水1ml，加入试剂盒中A、B、C试剂各一滴，混匀后滴加至标本。 室温下显色，显微镜下观察并控制反应时间(约5-30min)。 (9)蒸馏水漂洗，苏木素轻度复染，脱水。 (10)干燥后中性树脂封片，电子显微镜下观察、拍照。 豚鼠关节软骨细胞甲苯胺蓝染色鉴定 将F1代豚鼠关节软骨细胞以1×104／ml的浓度传代至孔底铺有圆形盖玻片的24孔板 中；正常培养，制作细胞爬片，镜下观察细胞状态，取细胞状态及数量适宜(2天左右) 的爬片染色。染色步骤如下： 1取出细胞爬片，用PBS缓冲液漂洗3次，每次3min，吸弃PBS，每张爬片滴加4％多聚甲醛100 ul，铺满爬片，室温固定3h。 2 PBS漂洗3次，每次3min后吸弃PBS，每张爬片滴加70％的乙醇100 ul室温固定20min。 3 PBS漂洗3次，每次3min后吸弃PBS，晾干后每张爬片滴加0．04％的甲苯胺蓝溶液50 ul，室温下处理20min，无水乙醇迅速漂洗1次，晾干封片，观察拍照记录。
实验三细菌革兰氏染色法
实验三细菌革兰氏染色法 【目的要求】了解革兰氏染色原理；掌握革兰氏染色的方法。 【基本原理】 革兰氏染色法是细菌学中广泛使用的一种鉴别染色法，1884 年由丹麦医师Gram 创立。未经染色之细菌，由于其与周围环境折光率差别甚小，故在显微镜下极难观察。染色后细菌与环境形成鲜明对比，可以清楚地观察到细菌的形态、排列及某些结构特征，而用以分类鉴定。革兰氏染色法可将细菌分成革兰氏阳性（G+）和革兰氏阴性（G-） 两种类型，细菌对革兰氏染色的不同反应是由于它们细胞壁的成分和结构不同而造成的。 革兰氏染色的主要步骤包括初染、媒染、脱色和复染。首先利用草酸铵结晶紫初染，所有细菌都会着上结晶紫的蓝紫色。然后利用卢戈氏碘液作为媒染剂处理，由于碘与结晶紫形成碘-结晶紫复合物，增强了染料在菌体中的滞留能力。之后用95%乙醇作为脱色剂进行处理时，两种细菌的脱色效果不同。革兰氏阳性细菌细胞壁肽聚糖含量高，壁厚且脂质含量低，肽聚糖本身并不结合染料，但其所具有的网孔结构可以滞留碘-结晶紫复合物，现在一般认为乙醇处理可以使肽聚糖网孔收缩而使碘-结晶紫复合物滞留在细胞壁，菌体保持原有的蓝紫色。而革兰氏阴性细菌细胞壁肽聚糖含量低，交联度低，壁薄且脂质含量高，乙醇处理时脂质溶解，细胞壁通透性增加，原先滞留在细胞壁中的碘-结晶紫复合物容易被洗脱下来，菌体变为无色。而在最后用复染步骤（染色剂为番红），染色后变为复染剂颜色（红）。 【实验器材】 1.革兰氏染色液： ①草酸铵结晶紫 甲液：结晶紫（2 g）、乙醇（95%）（20 mL）; 乙液：草酸铵（0.8 g）、蒸馏水（0.8 mL）; 将甲、乙两液混合，静置48h 后使用，该染液稳定，在不透气的棕色瓶中可存储数月。 ②卢戈氏碘液 碘（1 g）；碘化钾（2 g）；蒸馏水（300 mL） 先将KI溶于少量（3-5 mL）蒸馏水中，再放入碘，待碘全溶后，加水至300 mL。 此液稳定，可在不透气的棕色瓶中保存数月。 ③脱色液：95%乙醇 ④复染液：即2.5%蕃红（沙黄）水溶液。 沙黄（2.5 g）; 95%的酒精（10 mL）；蒸馏水（90 mL） 将沙黄溶于乙醇中，再用蒸馏水稀释。 2.显微镜、灭菌玻片、灭菌牙签、酒精灯、擦镜纸、计时器。
革兰氏染色的一般步骤
革兰氏染色的一般步骤 革兰氏染色法是细菌学中广泛使用的一种鉴别染色法，1884年由丹麦医师Gram创立。未经染色之细菌，由于其与周围环境折光率差别甚小，故在显微镜下极难观察。染色后细菌 与环境形成鲜明对比，可以清楚地观察到细菌的形态、排列及某些结构特征，而用以分类鉴定。 革兰氏染色属复染法，即将标本固定后，先用结晶紫染色1分钟后水洗，然后加革兰碘 液媒染一分钟后用酒精脱色，再用稀释石炭酸复红复染。染色后除可以看到细菌形态外，还 可将细菌分为两大类，即不被酒精脱色而保留紫色者为革兰氏阳性菌（G＋）。被酒精脱色复染成红色者为革兰氏阴性菌（Gˉ）。 革兰氏染色原理尚不肯定，可能与细菌所带核糖核酸、细菌壁结构通透性、等电点等因 素有关。致病菌如金黄色葡萄球菌、绿色溶血性链球菌、肺炎球菌、白喉杆菌、炭疽杆菌等 属革兰氏染色阳性菌。百日咳杆菌、大肠杆菌（大肠埃希菌）、铜绿假单胞菌、伤寒杆菌、 痢疾杆菌、霍乱弧菌、沙门菌、流行性脑膜炎双球菌、淋病双球菌等均属革兰氏阴性菌。所 以根据细菌的革兰氏染色性质，可以缩小鉴定范围，有利于进一步分离鉴定，以对疾病做出 诊断。又由于各种抗生素的抗菌谱不同，革兰氏染色尚可做为选用抗生素的参考。 革兰氏染色法一般包括初染、媒染、脱色、复染等四个步骤，具体操作方法是： 1）涂片固定。 2）草酸铵结晶紫染1分钟。 3）纯化水冲洗。 4）加碘液覆盖涂面染1分钟。 5）水洗，用吸水纸吸去水分。 6）加95%酒精数滴，并轻轻摇动进行脱色，30秒后水洗，吸去水分。 7）番红染色液（稀）染10秒钟后，纯化水冲洗。干燥，镜检。 染色的结果，革兰氏正反应菌体都呈紫色，负反应菌体都呈红色。
甲苯胺蓝染液使用说明
甲苯胺蓝染液使用说明 货号：G3668 规格：100mL/500mL 保存：室温避光储存，有效期至少12个月。 产品说明： 甲苯胺蓝(Toluidine Blue O)是一种常用的人工合成染料，属于醌亚胺染料类，是碱性染料，甲苯胺蓝中的阳离子有染色作用，组织细胞的酸性物质与其中的阳离子相结合而被染色，可染细胞核使之呈蓝色；肥大细胞胞质内含有肝素和组织胺等异色性物质遇到甲苯胺蓝可呈异染性紫红色，可用于尖锐湿疣的初筛及肥大细胞的检测。 染色方法:（仅供参考） (一)肥大细胞染色： （1）组织切片脱蜡至水： ①二甲苯（I）中脱蜡5-10min。 ②换用新鲜的二甲苯（Ⅱ），再脱蜡5-10min。 ③无水乙醇5min。 ④95%乙醇2min。 ⑤80％乙醇2min ⑥70%乙醇2min。 （2）蒸馏水浸洗2-3次。 （3）甲苯胺蓝染液染色(具体时间根据染色结果和实验要求调整)。 （4）稍水洗，洗去多余染色液。 （5）95%酒精分色，在镜下控制分色效果。
（6）用100%酒精脱水。 （7）二甲苯透明，中性树胶封片： ①二甲苯（I）1min。 ②二甲苯（Ⅱ）1min。 ③中性树胶封固，镜下观察。 染色结果：肥大细胞颗粒呈紫红色，胞核呈蓝色。 (二)细胞涂片染色 （1）用20%的乙醇溶液稀释甲苯胺蓝染色液，一般要求稀释到0.1%即可。 （2）细胞涂片后，立即放入95%的乙醇中固定，取出放在纸巾上。 （3）滴加稀释后的甲苯胺蓝染色液进行滴染，加盖玻片让染料渗透到细胞中。 （4）将玻片竖起，稍加压力，使多余染料被纸巾吸去。 （5）无需干燥，直接镜检。 染色结果：细胞核、淋巴细胞呈深蓝色；核仁呈紫红色；细胞质、单核细胞呈淡蓝色。 注意事项： 1、第一次使用本试剂时建议先取1-2个样品做预实验。样品数量很多时，可使用染色架和染色缸，以便于操作。 2、本产品为1%浓度水溶液，具体使用浓度可自行稀释。 3、由于温度对染料的溶解度与着色力有很大的影响，若快速染色，当室温较低时，可以适当加温。 4、为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。
甲苯胺蓝水溶液(1%)
甲苯胺蓝水溶液(1%) 简介： 甲苯胺蓝(T oluidine Blue O)是一种常用的人工合成染料, 属于醌亚胺染料类, 这类染料主要含有胺基和醌型苯环两个发色团，从而成色原显色。甲苯胺蓝中的阳离子有染色作用, 组织细胞的酸性物质与其中的阳离子相结合而被染色。甲苯胺蓝还含有两个助色团，能促使染料产生电离成盐类, 帮助发色团对组织产生染色力, 使切片上的组织细胞着色，可染细胞核使之呈蓝色。 组成： 操作步骤(仅供参考)： 甲苯胺蓝水溶液(1%)一般用于特殊用途，如果用于染色，可参考如下步骤： (一)肥大细胞染色 1、脱蜡至蒸馏水。 2、根据切片厚度和组织的不同，浸染于甲苯胺蓝染色液。 3、蒸馏水或去离子水轻轻冲洗。 4、(可选)0.5%冰乙酸分化，直到细胞核和颗粒清晰可见。 5、快速95%和无水乙醇脱水。 6、 二甲苯透明，封固。 染色结果：肥大细胞呈紫红色；背景呈淡蓝色。 (二)软骨染色 1、 石蜡切片入二甲苯2次。 2、 系列乙醇各1min 。 3、 自来水洗2min 。 4、 入Toluidine Blue O Stain 浸染。 5、 自来水洗2min ，滤纸吸干水分。 6、 丙酮分化至软骨细胞呈紫蓝色清楚可见。 7、 逐级乙醇脱水。 8、 二甲苯透明，中性树胶封固。 染色结果：软骨、成骨细胞呈紫红色；背景呈淡蓝色。 编号 名称 DA0052 Storage 甲苯胺蓝水溶液(1%) 100ml RT 避光 使用说明书 1份
(三)细胞涂片染色 1、用20%的乙醇溶液稀释甲苯胺蓝染色液, 一般要求稀释到0.1%即可。 2、细胞涂片后，立即放入95%的乙醇中固定，取出放在纸巾上。 3、滴加稀释后的甲苯胺蓝染色液进行滴染，加盖玻片让染料渗透到细胞中。 4、后将玻片竖起，稍加压力，使多余染料被纸巾吸去。 5、无需干燥，直接镜检。 染色结果：细胞核、淋巴细胞呈深蓝色；核仁呈紫红色；红细胞呈橘红；细胞质、单核细胞呈淡蓝色。 (四)原位杂交染色 1、用蒸馏水或去离子水稀释到相应的浓度，凭经验一般稀释比例大于1:100。 2、玻片在稀释好的染色液中短暂浸泡。 3、在蒸馏水或去离子水浸泡数次。 4、按需求进行压片固定。 注意事项： 1、针对于胃粘膜组织、软骨组织等较难着色组织的染色，浸染于甲苯胺蓝染色液的时间应 相应延长。 2、为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。
甲苯胺蓝染色液
甲苯胺蓝染色液(0.5%,磷酸盐法) 产品简介： 甲苯胺蓝(Toluidine Blue O)是一种常用的人工合成染料, 属于醌亚胺染料类, 这类染料主要含有胺基和醌型苯环两个发色团，从而成色原显色。,甲苯胺蓝中的阳离子有染色作用, 组织细胞的酸性物质与其中的阳离子相结合而被染色。甲苯胺蓝还含有两个助色团助色团，能促使染料产生电离成盐类, 帮助发色团对组织产生染色力, 使切片上的组织细胞着色，可染细胞核使之呈蓝色。另外，肥大细胞胞质内含有肝素和组织胺等异色性物质，遇到甲苯胺蓝可呈异染性紫红色。 临床上，经常用甲苯胺蓝对软骨细胞和肥大细胞进行染色。 主要成分：主要由Toluidine Blue O、磷酸盐缓冲液等组成。 操作步骤（仅供参考）： (一)肥大细胞染色 1、脱蜡至蒸馏水。 2、根据切片厚度和组织的不同，浸染于甲苯胺蓝染色液5～30min。 3、蒸馏水或去离子水轻轻冲洗3～5min。 4、(可选)0.5%冰乙酸分化，直到细胞核和颗粒清晰可见。 5、快速95%和无水乙醇脱水。 6、 二甲苯透明。 7、封固。 染色结果：肥大细胞呈紫红色；背景呈不同程度的蓝色。 (二)细胞涂片染色 1、按要求稀释甲苯胺蓝染色液, 一般要求稀释到0.1%即可。 2、用稀释后的甲苯胺蓝染色液进行滴染，一般细胞涂片1～2min即可。 3、蒸馏水或去离子水轻轻冲洗3～5min。
4、晾干。 5、镜检。 (三)原位杂交染色 1、用蒸馏水或去离子水稀释到相应的浓度，凭经验一般稀释比例大于1:100。 2、玻片在稀释好的染色液中短暂浸泡。 3、在蒸馏水或去离子水浸泡数次。 4、按需求进行压片固定。 注意事项： 1、为了您的安全和健康，请穿实验服并戴一次性手套操作。 2、针对于胃粘膜组织、软骨组织等较难着色组织的染色，浸染于甲苯胺蓝染色液的时间应 相应延长。 有效期：12个月有效。 相关产品： 产品编号 产品名称 DZ0040改良苯酚品红染色液 DA0059甲苯胺蓝染色液(0.5%,硼酸盐法) DA0072中性红染色液(1%) DC0032Masson三色染色试剂盒 DC0095核固红染色液(0.1%) DG0005糖原PAS过碘酸雪夫染色试剂盒 DG0022淀粉样物质染色试剂盒(Highman刚果红法) DH0006苏木素伊红(HE)染色液试剂盒