western的操作步骤Word版
Western Blot操作全过程
一，收蛋白
a（如果要收集死细胞）
1.取冰，将4°C离心机提前降温。
2.将死细胞收集到离心管：孔板内的细胞用PBS洗1-2遍，用适量
的胰酶消化，用离心管内的原培养液将孔板内细胞吹打下来，收集到离心管，室温离心1000rpm，5min。
3.弃上清，将离心管倒扣在滤纸上，尽量吸尽残留上清。
4.视细胞量的多少加入细胞裂解液。（1×Cell Lysis Buffer：
PMSF=100：1，1×Cell Lysis Buffer，PMSF-20°C保存。PMSF 常温易降解，拿出时间不得超过30min，必须放置冰上。）
5.冰上裂解15min，将裂解液转移至EP管离心，4°C，12000rpm，
15min。
6.小心将上清转移至另一EP管，记下吸取的量。如：100μL。
7.将收集好的蛋白保存与—20°C。（可长期保存）
b （如果不收集死细胞）
1．弃上清，孔板PBS洗1-2遍，吸尽PBS。在孔板中视细胞量的多少加入相应细胞裂解液。（同上）
2．冰上裂解15min，用细胞刮在孔板里将细胞刮刮。（不同的孔不能用同一个刮子，刮前用水冲洗，擦干。）
3．将裂解液转移至EP管离心，4°C，12000rpm，15min。
4．小心将上清转移至另一EP管，记下吸取的量。
5．将收集好的蛋白保存与—20°C。（可长期保存）
二，测蛋白浓度
BCA法（或者按照自己的试剂盒说明操作）
1.需96孔板，测蛋白浓度的A液，B液，标准蛋白，要测的样品蛋
白。
2.按要测的样品蛋白的数量来配AB液，每孔需AB混合液80μl（A：
B=50：1）。例：有5个样品，加上5个标准蛋白和空白对照。共有11个孔。则A液取11×80=880μl，B液取880÷50=17.6两液混匀，加入96孔板，每孔80μl。然后加入标准蛋白及样品蛋白4μl。（标准蛋白先配好浓度125，250，500，1000，2000）
3.将孔板放入37°C温箱孵育30min。
4.用酶标仪测蛋白浓度。
5.记下蛋白浓度，根据要上样的μg量算出μl量。例：蛋白浓度为
1000，需上样15μg。则需上样15÷1000=？上样量不超过20μl。
三，配胶
1.将薄板和厚板用洁净的布擦干净，对齐，夹好。（板必须擦干净，
下端对齐，否则容易漏胶。）
2.配分离胶，根据要跑的蛋白分子量，配相应浓度的胶。
3.快速将分离胶加入薄厚板之间，不能太满，留出浓缩胶的部分。(浓缩胶高度大约1CM)
4.在分离胶上灌水，要缓慢，为了让胶凝的更好。
5.30分钟左右，分离胶凝了，将水倒掉，滤纸吸干，找好梳子。制
浓缩胶。
6.灌胶，快速插入相应的梳子。
7.约15min胶可以凝固。
四，煮蛋白
1.煮蛋白前将蛋白中加入6×SDS+DTT(即上样缓冲液)。例样品蛋白
共有100μl，则需加100÷5=20μl 6×SDS+DTT。混匀。（加有DTT的SDS应-20°C保存。DTT应-20°C保存。SDS：DTT=9：1）。
2.将蛋白沸水煮10min。煮过的蛋白在两周内有效。
五，上样，跑胶，转膜
1.电泳巢内加入电泳液，夹好胶板。拔去梳子。
2.每孔上样量不超过20μl，每块胶应上有Maker。剩余的孔里上1
×SDS。
3.蛋白上样前要震荡混匀。
4.浓缩胶80V，分离胶120V。
5.转膜
半干法转膜或者湿转自己的试验条件决定。
根据分子量的大小，按照Maker的位置裁胶，根据胶的大小，剪相应大小的NC膜。（NC膜要先用甲醇活化）。
六，封闭
5%牛奶（TBST稀释的脱脂牛奶）室温封闭1-2h，
七，封一抗
摸清抗体要用的浓度。用TBST或5%牛奶加抗体。室温1-2h，或4°C过夜。
用过的抗体要回收，做记号，用的第几次。放入-20°保存。
八，洗膜
用TBST摇床上洗3遍，每次10min。（一抗不要摇的太剧烈）
九，封二抗
摸清二抗的浓度。室温45min-2h。抗体回收，做记号，用的第几次。放入-20°保存。
十，洗膜
用TBST摇床上洗3遍，每次10min。（二抗可以摇的稍快些）
十一，发光
1.在发光板内放入干净的可以夹住NC膜的薄膜，放好已经洗好
的膜。用滤纸吸干膜上的水。
2.拿齐发光板，发光液，1ml的枪及枪头（至少两根），胶片，一
张滤纸，一个离心管。
3.进入暗室，反锁好门，开红灯，在离心管内配发光液，A液：B
液=1：1。先A后B。切记换枪头，打开薄膜，将AB液混匀，均匀的洒在NC膜上。盖上薄膜，将多余的发光液推开，以防水多膜移动。漏出薄膜外的可用滤纸吸干。
4.关灯，看见荧光，盖上胶片。胶片盖上之前先在左上角（个人
习惯）折个角，好辨认方向。
5.根据荧光强度按压几秒或几分钟。将胶片放入洗片机冲洗。
6.等片子完全洗好，可开灯。
或者DAB显色需要买试剂盒。
十二，扫描保留结果
（注：可编辑下载，若有不当之处，请指正，谢谢!）
最全的word使用方法
最全的word使用方法 快速学习WORD和OFFICE系列 插入日期和时间的快捷键：? Alt+Shift+D：当前日期? Alt+Shift+T：当前时间 把文字替换成图片：? ?????首先把图片复制到?剪贴板中，然后打开替换对话框，在“查找内容”框中输入将被替换的文字，接着在?“替换为”框中输入“^c”（注意：输入的一定要是半角字符，c要小写），单击替换?即可。 批量转换全角字符为半角字符? 首先全选。然后“格式”→“更改大小写”，在对话框中先选中“半角”，确定即可。 格式刷的使用? 1、设定好文本1的格式。? 2、将游标放在文本1处。?
3、单击格式刷按钮。? 4、选定其它文字(文本2)，则文本2的格式与文本1?一样。? 若在第3步中单击改为双击，则格式刷可无限次使用，直到再次单击格式刷(或按Esc键)为止。 如何输入分数 在“插入”菜单上，单击“对象”，然后单击“新建”选项卡。 单击“对象类型”框中的“Microsoft 公式”选项。 单击“确定”按钮。 输入循环小数（3循环）时，方法如下 1. 在Word文档中输入“”，选中数字“3”。 2. 在“格式”菜单中，指向“中文版式”，单击“拼音指南”。 3. 单击“3”后面的“拼音文字”下的方框，然后切换到你习惯使用的中文输入法，右键单击输入法状态条右端的软键盘按钮，单
击“标点符号”，打开标点符号软键盘。 4. 在标点符号软键盘，单击数字9键，输入间隔符“·”，然后单击软键盘按钮，关闭软键盘。?（或按SHIFT+2） 5. 在“字号”框中选择一个合适的字号，注意字号过小在文档中将看不到添加的间隔符，单击〔确定〕按钮。 word里的空白页怎么删除 重新插入分页符,在插入的时候选择下一页..插入之后会有个空白页,按DEL键删除一下,就OK. 分页的话,可以按CTRL+ENTER,。 自动生成文章目录的操作： 一、设置标题格式 1.选中文章中的所有一级标题； 2.在“格式”工具栏的左端，“样式”列表中单击“标题1”。 仿照步骤1、2设置二、三级标题格式为标题2、标题3。 二、自动生成目录
Western操作步骤
Western-Blot 操作流程 （一）组织中总蛋白的提取 用干净的剪刀剪取绿豆大小的组织块于1.5ml的EP管中，加入200uLRIPA裂解液(含PMSF，比例为97：1：1：1)，用杵子研磨3-4min, 段事先在酒精里浸泡至少30min，用之前用滤纸吸干酒精，） 20-30s,每隔5min 后在 4℃下12000rpm 离心 5min，取上清分装于 1.5mlEP管中并置于-80℃冰箱保存。 （二）BCA法蛋白含量的测定 (1) 从-20℃取出 1mg/ml BSA，室温融化后，备用。 (3)以上步骤完成后，在所有加样的孔里各加上200uLBCA蛋白浓度测定试剂（按试剂A：试剂B=50：1的比例配置），然后置于37℃水浴锅30min后取出。 (4)酶标仪测定OD值。 (5)EXCEL表格制作标准曲线，按照标准曲线计算各样本的蛋白浓度。 （三）稀释蛋白及蛋白变性 如果计算出的样本的蛋白浓度偏高，需要用RIPA裂解液将蛋白稀释（一般将蛋白浓度稀释至5-10ug/uL）;稀释完后取10-30uL的样本蛋白置于新的1.5mLEP管中，加入新EP管中总体积1/4体积的上样缓冲液，置于99-100℃的干式恒温器中加热5-10min,使蛋白变性。（注意：将EP管的盖子盖紧，插入加热器的大圆孔中）煮过的蛋白置于-20℃冰箱保存。 （四）制作SDS电泳胶 ⑴清洗玻璃板，双蒸水冲洗晾干后，根据厂家说明安装玻璃板。 ⑵配置10%的分离胶 配方：H2O2 4.0ml 30%丙烯酰胺液 3.3ml 1.5mol/l Tris （ PH8.8） 2.5ml 10%SDS 100ul 10%过硫酸胺 100ul TEMED 4ul ⑶分离胶溶液中加入 TEMED 以及 10%过硫酸胺后需立即混匀（防止未灌胶就发生凝固），将混合液立即加入玻璃板内，距梳子下缘约 lcm 处即可，蒸馏水封顶，待凝胶完全聚合（约30min）后，倒去双蒸水。 ⑷制备5%的浓缩胶 配方；H2O2 3.4ml 30%丙烯酰胺液 0.83ml 1.5mol/l Tris （ PH6.8） 0.63ml 10%SDS 50ul
word基本操作教学课件
word基本操作教学课件 word基本操作教学课件 word基本操作教学课件一 教学设想:通过课堂练习，培养一定的操作技能、体验生活中word 实际应用的版面设计的多样性和解决问题的复杂性、体会与他人合作交流的情感。 教学目标:认知目标：1、了解Word中字体的概念，熟练掌握字体设置方法。 2、了解Word中段落的概念，熟练掌握段落设置方法。 3、熟练掌握在Word文档中插入艺术字和图片。 4、锻炼学生综合运用知识点，培养学生的动手实践操作能力。能力目标：通过课堂练习，使学生回忆Word常用操作并进行练习。教学重点：对操作练习要求的正确理解，图文混排，文本框，自绘图形。 教学难点:对题目的理解准确无误。 德育目标：1．激发学生的创新意识2．增进学生之间的团体融合，培养合作精神3．培养学生的成功心理品质 教学准备:黑板和粉笔、极域电子教室。 教学过程： 【学法指导】 对于学法指导，主要是（1）在老师的提示下，让学生自己分析
问题、解决问题的能力。（2）学生通过练习完成指定的任务，强调对题目要求或考核目标的正确理解。在上课的过程中，要引导学生自己理解习题的 要求，不死记操作步骤，老师不说自己就不能做。 【学生现状】 1.学生已掌握的知识：能进行字体、段落的一些基本操作，能进行文字编辑、页面设置、对象插入等技巧性操作，比较熟悉该软件的操作界面。 2.学生掌握程度：初中学过，现在操作的准确性和熟练性很差，需要更多的练习来复习巩固操作技能。 3.部分学生学习有主动性，部分学生看初中真的没怎么学习过。 导言： 电子教室演示观看文字处理软件word2000在实际生活中的应用，如（报纸、书籍、板报）。用Word编写出的各种诗歌、日记、短文等作品。并注意引导学生进行观察、欣赏所展示的各种文学素材。 实际生活中我们要做的事情多种多样，对字处理软件---WORD的要求也是多种多样的。 新授课： 1、word字处理软件功能 1．讨论： 实际应用中还有哪些例子和功能？ 2．提出问题：
套word操作过程
字处理 北京明华中学学生发展中心的小刘老师负责向校本部及相关分校的学生家长传达有关学生儿童医保扣款方式更新的通知。该通知需要下发至每位学生，并请家长填写回执。参照“结果示例～结果示例”、按下列要求帮助小刘老师编排家长信及回执： 1.在考生文件夹下，将“Word素材.docx”文件另存为“”（“.docx”为扩展名），后续操作均基于此文件，否则不得分。 [解析]打开Word素材.xlsx-文件-另存为-文件名框中输入Word-保存类型框中选择（Word文档.docx）-保存。 2.进行页面设置：纸张方向横向、纸张大小A3（宽42厘米×高厘米），上、下边距均为厘米、左、右边距均为厘米，页眉、页脚分别距边界厘米。要求每张A3纸上从左到右按顺序打印两页内容，左右两页均于页面底部中间位置显示格式为“-1-、-2-”类型的页码，页码自1开始。 [解析]页面布局-页面设置-页边距-横向-上、下左、右纸张-宽度42 -高度版式-距边界页边距-多页-框中选择拼页-双击页脚位置-设计-页眉和页脚-页码-设置页码格式-编号格式- “-1-、-2-”-页码编号-起始页-1-确定-页码-页面底端-普通数字2。 3.插入“空白（三栏）”型页眉，在左侧的内容控件中输入学校名称“北京明华中学”，删除中间的内容控件，在右侧插入考生文件夹下的图片代替原来的内容控件，适当缩小图片，使其与学校名称高度匹配。将页眉下方的分隔线设为标准红色、磅、上宽下细的双线型。[解析]插入-页眉和页脚-页眉-内置-空白（三栏）-最左边输入“北京明华中学”-右击中间- 删除控制内容-光标定位到右边-插入-找到图片插入-调整图片大小-开始-样式对话框打开-右击页眉-修改-格式-边框-边框-上宽下细-红色磅-确定。 4.将文中所有的空白段落删除，然后按下列要求为指定段落应用相应格式： 段落样样式或格式 文章标题“致学生儿童家长的一封信”标题 “一、二、三、四、五、”所示标题段落标题1 “附件1、附件2、附件3、附件4”所示标题段落标题2 除上述标题行及蓝色的信件抬头段外，其他正文格式仿宋、小四号，首行缩进2字符，段前间距行，行间距倍,信件的落款（三行）居右显示。 [解析]光标定位到最前面-开始-编辑-替换-查找内容-^p^p-替换为-^p-全部替换-选定文章标题-开始-样式-标题-相同方法设置“一、二、三、四、五、”和“附件1、附件2、附件3、附件4”为标题1和标题2-选定一段正文内容-开始-编辑-选择-选择所有格式类似的文本-右击样式框中的正文样式-修改-仿宋、小四号-格式-段落-间距-段前行-行距-多倍行距缩进-特殊格式-框中选中首行缩进-2字符-确定-确定。 5.利用“附件1：学校、托幼机构“一小”缴费经办流程图”下面用灰色底纹标出的文字、参考样例图绘制相关的流程图，要求：除右侧的两个图形之外其他各个图形之间使用连接线，连接线将会随图形的移动而自动伸缩，中间的图形应沿垂直方向左右居中。 [解析]把附件1下面的文字内容复制到一个文本文件中-设置字号为小五号-打开PowerPoint-新建一张幻灯片-设计-页面设置-幻灯片大小-A4纸张-纵向-显示比例为100%-插入-形状-流程图-准备-按住鼠标左键拖动-形状-流程图-右击过程-锁定为绘图模式-按样例分别画好后面的所有形状-选定所有形状-格式-形状样式-彩色轮廓-蓝色，强调颜色1-右击-大小和位置-文本框-自动调整-溢出时缩排文字-内部边距-左、右上、下-0-确定-选定除并排的两个及右边两个形状的其它形状-格式-排列-对齐-左右居中-并排的两个形状设置为上下居中-选定第一个形 状-格式-插入形状-右击箭头连接符-锁定绘图模式-从上一个形状下边的红色点开始按住鼠标左键拖到下一个形状上边的红色点-相同的方法完成其它形状之间的连接箭头-选定并排的 两个中的左边一个-格式-插入形状-右击肘形箭头连接符-锁定绘图模式-完成连接符的绘制-
Western操作步骤
Western-Blot 操作流程及注意事项 Western操作步骤 （一）蛋白样品制备 （1）单层贴壁细胞总蛋白的提取： 1. 倒掉培养液，并将瓶倒扣在吸水纸上使吸水纸吸干培养液（或将瓶直立放置一会儿使残余培养液流到瓶底然后再用移液器将其吸走）。 2. 每瓶细胞加3ml 4℃预冷的PBS（0.01M pH7.2~7.3）。平放轻轻摇动1min 洗涤细胞，然后弃去洗液。重复以上操作两次，共洗细胞三次以洗去培养液。将PBS 弃净后把培养瓶置于冰上。 3. 按1ml 裂解液加10 μl PMSF（100mM），摇匀置于冰上。（PMSF要摇匀至无结晶时才可与裂解液混合） 4. 每瓶细胞加400 μl含PMSF的裂解液，冰上裂解30min，为使细胞充分裂解培养瓶要经常来回摇动。 5. 裂解完后，用干净的刮棒将细胞刮于培养瓶的一侧（动作要快），然后用枪将细胞碎片和裂解液移至1.5ml 离心管中。（整个操作尽量在冰上进行） 6. 于4℃下12000rpm 离心5min。（提前开离心机预冷） 7. 将离心后的上清分装转移倒0.5min 的离心管中放于-20℃保存。 （个人感觉上述方法可操作性有待加强，细胞中蛋白本来就很少，一瓶50ml的细胞有时按照实验要求只能加100~200μl 的裂解液，按照上述操作，直接用200μl 裂解液进行裂解，根本就不够瓶壁上沾的。本人是先用预冷的PBS（一般数毫升）加入后，用细胞刮刮下细胞，转移至试管中，如果数瓶细胞是收集同一蛋白的，可以放在同一试管，离心后再将蛋白转移到EP管中，这样可操作性就比较强） （2）组织中总蛋白的提取： 1. 将少量组织块置于1~2ml 匀浆器中球状部位，用干净的剪刀将组织块尽量剪碎。 2. 加400 μl 单去污剂裂解液裂（含PMSF）于匀浆器中进行匀浆。然后置于冰上。 3. 几分钟后再碾一会儿再置于冰上，要重复碾几次使组织尽量碾碎。 4. 裂解30 min 后，即可用移液器将裂解液移至1.5ml 离心管中，然后在4℃下12000rpm 离心5min，取上清分装于0.5ml 离心管中并置于-20℃保存。 （3）加药物处理的贴壁细胞总蛋白的提取： 由于受药物的影响，一些细胞脱落下来，所以除按（一）操作外还应收集培养液中的细胞。以下是培养液中细胞总蛋白的提取： 1. 将培养液倒至15ml 离心管中，于2500rpm 离心5min。 2. 弃上清，加入4ml PBS并用枪轻吹打洗涤，然后2500rpm离心5min。弃上清后PBS 重复洗涤一次。 3. 用枪吸干上清后，加100 μl 裂解液（含PMSF）冰上裂解30min，裂解过程中要经常弹一弹以使细胞充分裂解。 4. 将裂解液与培养瓶中裂解液混在一起4℃、12000rpm 离心5min，取上清分装于0.5ml 离心管中并置于-20℃保存。 （二）蛋白含量的测定 （1）制作标准曲线 1. 从-20℃取出1mg/ml BSA，室温融化后，备用。 2. 取18 个1.5ml 离心管，3 个一组，分别标记为0μg，2.5μg，5.0μg ，10.0μg ，20.0μg ，40.0μg。
Word的基本操作教程
Word的基本操作 新建文档 我们讲了Word第一课后，有位朋友和我说用起来太麻烦了，问他怎么个麻烦法，他说，有时要打印几份文件，每打印一份就要退出一次Word重来，所以特别麻烦。其实根本用不着退出Word。你可以在Word里面关掉已经打印出来的文件，然后新建一个文档或者打开另外的文档，同时打开几个文件也可以。 怎么做呢？很简单的，先看新建文档。我们打开Word。Word启动之后自动建立了一个新文档，注意现在标题栏上的文档名称是“文档1.doc”，单击工具栏上的"新建空白文档"按钮，现在我们就又新建了一个空白的文档，它的名字叫做“文档2.doc”。再单击这个按钮，就出现了“文档3”。这是我们新建一个文档最常用的方法。 打开文档 怎么在Word里打开以前存盘的文档呢？我的朋友说他一直都是先退出Word，然后去双击要打开的文件，Word就会自动启动并打开那个文件。 其实打开和新建一样，不用退出Word也可以打开文件，单击工具栏上的“打开”按钮，就可以打开一个“打开文件”对话框。 我们来看看怎么打开D盘“笑话”文件夹中的“笑话.doc”。 单击这个下拉列表框，从弹出的列表中选择“D：”，也就是D盘，现在下面的文件列表中出现的就是D盘的内容了，双击打开这个“笑话”文件夹，列表中就出现了“笑话.doc”文件，选中这个文件，单击“打开”按钮，就打开这个文件了。
保存文档 现在我们来看看保存文档。这次我们讲一点新东西： 打开“另存为”对话框；这里有一个“新建文件夹”按钮，它可是很有用的： 我们平时的文件都是分类存放的，而有时要保存编辑的稿件，觉得放到哪里都不合适，这时我们就可以新建一个文件夹把文件放到里面。单击这个“新建文件夹”按钮，在打开的对话框中输入文件夹的名字“稿件”， 单击“确定”按钮，回到“另存为”对话框；输入文档的名字，单击“保存”按钮，我们就可以把文档保存在新建的文件夹中了。 多文档切换 不过现在就有另一个问题了，现在我们打开了几 个文档，而不是像以前那样只打开一个文档，如果我 们想从现在这个文档切换到另外的一个文档中，该怎 么办呢？一般的办法是使用窗口菜单来切换当前编辑 的文档。 打开窗口菜单，菜单的最下面列出了我们打开的 所有文档，带有对号的是当前编辑的文档，单击“文 档2.doc”，就切换到了“文档2.doc”。当然你也 可以按下ALT+TAB键来切换，这是Word 2000新增的 切换功能。
word综合操作步骤
正文内容已输入,按要求对该文档进行以下设置:章样式及自动编号、节样式及自动编号、新建样式并应用、对图表添加题注并设置交叉引用、自动生成目录及图表索引、分别添加奇偶页页眉页脚等。 按下列要求对文档“DWord、ｄocx”进行设置。(注意:以题目要求为准,注意及时保存。) 首先“cｔｒl+Ａ”选中全文,将全文样式修改为“正文”样式。 １、对正文(指得就是除了目录索引等外得内容)进行排版,其中: 1)使用多级符号对章名、小节名进行自动编号,代替原始得编号。要求: ?章号得自动编号格式为:第X章(例:第1章),其中:X为自动排序。阿拉伯数字序号。对应级别１。居中显示。 ?小节名自动编号格式为:X、Y,X为章数字序号,Ｙ为节数字序号(例：１、1）。 X,Y均为阿拉伯数字序号,对应级别2,左对齐显示。 【操作步骤】： a)先定义新得多级列表:单击段落组中得“多级列表”→“定义新得多级列表”。 图１定义新得多级列表 b)如图1所示,在“定义新多级列表”对话框中进行以下操作: ★设置章名得样式:?①先删除“编号格式”中原有内容 ②“级别”选择“１”,“编号样式”选择“1，2, 3,…”,“起始编号”选择“1” ?③在“编号格式”得“１”前输入“第”,后输入“章” (此时“编号格式”内容为“第1章”，注意此处得“1”就是域结果,灰色底纹显示) ④“对齐位置”值设为“０”?⑤“将级别链接到样式”选择“标题1”?(若没有显 示“将级别链接到样式”，请先单击对话框右上角得“高级”按钮)?如图2所示。 ????
?? 图2 章节多级符号设置 c)★不要关闭图2“章节多级符合设置”对话框,继续设置小节名得样式: ⑥先删除“编号格式”中原有内容 ⑦“级别”选择“2”?⑧“前一级别编号”选择“级别１”;在“编号格式”得“1” 后输入“、”;“编号样式”选择“１, 2，3，…”,“起始编号”选择“1” (此时“编号格式”显示“1、1”，注意此处2个“1”都就是域结果,灰色底纹显示)? ⑨“对齐位置”值设为“0”;“将级别链接到样式”选择“标题2”;勾选“在其 后重新开始编号”,并选择“级别1” ⑩按“确定”按钮后,“样式与格式”对话框样式显示如图4所示。 图３小节名多级符号设置图４“样式与格式”对话框 d)按下列步骤将样式应用到章名：?①将光标置于第1章章名“第１章ＰowerPｏｉn ｔ简介”所在行?②单击“样式与格式”对话框中得样式“标题1”?③使用“格式刷”工具,将其余各章章名设置成相同样式。并删除章名中手动输入得编号。 e)按下列步骤将样式应用到各章得小节名:
Western_blot_试剂配制及操作流程
Western-Blot操作流程 试剂配制 1.RIPA裂解液： 10mM Tris（MW121.14，PH7.5） 1%NP40 0.5%TritonX-100 0.2%脱氧胆酸钠 2 mM EDTA 1 mM PMSF 20%甘油 调pH值至7.5。 混匀后4℃保存，长期保存于-20℃。使用时，加入蛋白酶抑制剂cooktail。 制胶用（1-6）： 1. 1.0mol/L Tris·HCl （pH6.8） Tris (MW121.14) 12.114g 蒸馏水 100ml 溶解后，（用浓盐酸调pH至6.8），室温下保存。 2. 1.5mol/L Tris·HCl（pH8.8） Tris (MW121.14) 18.671g 蒸馏水 100ml 溶解后，（用浓盐酸调pH至8.8），室温下保存。 3.10％SDS SDS 10g 蒸馏水至 100ml 如溶解困难，可在50℃水浴下溶解，室温保存。 如在长期保存中出现沉淀，水浴溶化后，仍可使用。 4.10％过硫酸胺（AP） 过硫酸胺 0.1g
（现用现配，可先将过硫酸胺干粉称好分量后放在1.5mlEP管中，一次性多装几管，使用时加入蒸馏水水即可，溶解后，4℃保存，保存时间为1周） 5．四甲基乙二胺原液（TEMED）： 4?C保存。 6．30%丙稀酰胺： 4?C保存。 10%下层胶，即分离胶（两块胶，15ml）：胶的浓度根据自己所做蛋白的大小确定依次加入去离子水 5.9ml 30%丙烯酰胺 5ml 1.5M Tris-HCl（pH8.8） 3.8ml 10%SDS 150μl 10%AP 150μl TEMED 6μl 每加一种成分随即摇匀，为了加快凝胶，可以将过硫酸胺和TEMED量加大，根据实验当时的温度适当调整，加入TEMED混匀后应即刻灌胶。灌胶后加异丙醇（1ml）消泡 5%上层胶（两块胶，6ml）： 依次加入去离子水 4.1ml 30%丙烯酰胺 1ml 1M Tris-HCl（pH6.8） 0.75ml 10%SDS 60μl 10%AP 60μl TEMED 6μl 每加一种成分随即摇匀，为了加快凝胶，可以将过硫酸胺和TEMED量加大，根据实验当时的温度适当调整，加入TEMED混匀后应即刻灌胶。 7．5X电泳液缓冲液 Tris（MW121.14） 15.1g 甘氨酸（MW75.07） 94g SDS 5.00g 蒸馏水至 1000ml 溶解后室温保存,用时稀释5倍，通常取160ml配制成800ml即可。 8．10X转膜缓冲液 甘氨酸（MW75.07） 151.1g Tris（MW121.14） 30.3g
Word的基本操作详解
第五章中文Word2000 第一节使用入门 一、启动Word2000中文版 方法1 [开始][程序][Microsoft Word] 方法2 用鼠标单击“开始”按钮，在打开“开始”菜单后，选择“新建Office文档”或“打开Office文档”（如果我们的计算机上已存有Word文档的话）并单击之。 方法3 如果“Office快捷工具栏”显示在屏幕上，用鼠标单击“Microsoft Word”图标按钮即可启动中文Word2000。 方法4 在桌面上制作一个中文Word2000的快捷键，以后只要用鼠标的左键双击此快捷键，就可以启动中文Word2000。 方法5 在“我的电脑”或“资源管理器”中，双击扩展名为.DOC 的文档。 二、Word2000工作环境 1、W ord2000应用程序窗口的组成 标题栏、菜单栏、工具栏和状态栏。 工具栏的显示与隐藏：[视图][工具栏]，再在级联菜单中，选中要显示的工具栏或取消要隐藏的工具栏即可。 2、W ord2000文档窗口 标题栏、菜单栏、工具栏、标尺、水平、垂直滚动条，状态栏、工作区。 注意：
●在Word2000中的滚动条与常用窗口滚动条的区别。在垂直滚动条中多三个按钮，“选择浏览对象”按钮。在水平滚动条左边有“视图”按钮。 ●文字插入点标志、文件结束标志、段落结束标志： 3、使用菜单和对话框。：快捷菜单 4、帮助功能 1)Office 助手 2)[帮助][目录和索引] 3)屏幕提示:[帮助][这是什么？] 三、创建文档的操作步骤 1.新建文档 2.文字录入：包括文字、符号、图片、公式和艺术字等。要注意的 是：当用户输入文件达到行末时，WORD能自动移到下一行，称为自动换行，而不必按回车键，除非用户想开始新的一段或增加一空行。 3.编辑：用户可在WORD的帮助下进行插入、删除、修改、复制、移 动等操作。（剪贴板） 4.文件格式设置及排版：通过格式设置可以控制文件的外观显示。 例如设置黑体、斜体、下划线、使正文居中、左排等等。在文件中，还可以添加所需的图画与表格，从而将文件修饰得更加美观。 （工具按钮）
word综合操作步骤
正文内容已输入，按要求对该文档进行以下设置：章样式及自动编号、节样式及自动编号、新建样式并应用、对图表添加题注并设置交叉引用、自动生成目录及图表索引、分别添加奇偶页页眉页脚等。 按下列要求对文档“DWord.docx”进行设置。（注意：以题目要求为准，注意及时保存。） 首先“ctrl+A”选中全文，将全文样式修改为“正文”样式。 1、对正文（指的是除了目录索引等外的内容）进行排版，其中： 1)使用多级符号对章名、小节名进行自动编号，代替原始的编号。要求： ?章号的自动编号格式为：第X章（例：第1章），其中：X为自动排序。 阿拉伯数字序号。对应级别1。居中显示。 ?小节名自动编号格式为：X.Y，X为章数字序号，Y为节数字序号（例： 1.1）。X，Y均为阿拉伯数字序号，对应级别2，左对齐显示。
底纹显示） h)④“对齐位置”值设为“0” i)⑤“将级别链接到样式”选择“标题1” j)（若没有显示“将级别链接到样式”，请先单击对话框右上角的“高级”按钮）如图2所示。 图2 章节多级符号设置 k)★不要关闭图2“章节多级符合设置”对话框，继续设置小节名的样式：l)⑥先删除“编号格式”中原有内容 m)⑦“级别”选择“2” n)⑧“前一级别编号”选择“级别1”；在“编号格式”的“1”后输入“.”； “编号样式”选择“1, 2, 3, …”，“起始编号”选择“1” o)（此时“编号格式”显示“1.1”，注意此处2个“1”都是域结果，灰色底纹显示） p)⑨“对齐位置”值设为“0”；“将级别链接到样式”选择“标题2”；勾选“在其后重新开始编号”，并选择“级别1”
q)⑩按“确定”按钮后，“样式和格式”对话框样式显示如图4所示。 图3 小节名多级符号设置图4“样式和格式”对话框 r)按下列步骤将样式应用到章名： s)①将光标置于第1章章名“第1章PowerPoint简介”所在行 t)②单击“样式和格式”对话框中的样式“标题1” u)③使用“格式刷”工具，将其余各章章名设置成相同样式。并删除章名中手动输入的编号。 v)按下列步骤将样式应用到各章的小节名： w)①将光标置于第1章小节名“1.1 概述”所在行 x)②单击“样式和格式”对话框中的样式“标题2” y)③使用“格式刷”工具，将每章的小节名都设置成相同样式。并删除小节名中手动输入的编号。 z)修改标题1和标题2的样式：居中显示和左对齐显示，单击“标题1”右侧下拉列表中的“修改” aa) bb)图5 居中显示图6 左对齐显示 2)新建样式，样式名为：“样式”+准考证号后5位，其中： ?字体：中文字体为“楷体_GB2312”，西文字体“Times New Roman”，字号为“小四”。
Western Blot 原理和操作方法(详细)资料
Western Blot 原理和操作方法（详细） 工作原理 蛋白质的电泳分离是重要的生物化学分离纯化技术之一,电泳是指带电粒子在电场作用下,向着与其电荷相反的电极移动的现象.根据所采用的支持物不同,有琼脂糖凝胶电泳,淀粉凝胶电泳,聚丙烯酰胺凝胶电泳等.其中,聚丙烯酰胺凝胶电泳(PAGE)由于无电渗作用,样品用量少(1-100μg),分辨率高,可检出10-9-10-12mol的样品,凝胶机械强度大,重复性好以及可以通过调节单体浓度或单体与交联剂的比例而得到孔径不同的凝胶等优点而受到广泛的应用. SDS-PAGE是最常用的定性分析蛋白质的电泳方式,特别是用于蛋白质纯度检测和测定蛋白质分子量. PAGE能有效的分离蛋白质,主要依据其分子量和电荷的差异,而SDS-PAGE(SDS变性不连续聚丙烯酰胺凝胶电泳)的分离原理则仅根据蛋白质的分子量的差异,因为SDS-PAGE的样品处理液是在要跑电泳的样品中假如含有SDS和巯基乙醇(2-ME)或二巯基赤藓醇(DTT),其可以断开半胱氨酸残基之间的二硫键,破坏蛋白质的四级结构,SDS是一种阴离子表面活性剂即去污剂,它可以断开分子内和分子间的氢键,破坏蛋白质分子的二级及三级结构,并与蛋白质的疏水部分相结合,破坏其折叠结构,电泳样品假如样品缓冲液后,要在沸水中煮3-5分钟使SDS与蛋白质充分结合形成SDS-蛋白质复合物,SDS-蛋白质复合物在强还原剂巯基乙醇存在时,蛋白质分子内的二硫键被打开而不被氧化,蛋白质也完全变性和解聚,并形成榛状结构,稳定的存在于均一的溶液中,SDS与蛋白质结合后使SDS-蛋白质复合物上带有大量的负电荷,平均每两个氨基酸残基结合一个SDS分子,这时各种蛋白质分子本身的电荷完全被SDS掩盖,远远超过其原来所带的电荷,从而使蛋白质原来所带的电荷可以忽略不计,消除了不同分子之间原有的电荷差别,其电泳迁移率主要取决于亚基分子质量的大小,这样分离出的谱带也为蛋白质的亚基. 样品处理液中通常加入溴酚蓝染料, 溴酚蓝指示剂是一个较小的分子,可以自由通过凝胶孔径,所以它显示着电泳的前沿位置,当指示剂到达凝胶底部时,即可停止电泳. 另外样品处理液中也可加入适量的甘油或蔗糖以增大溶液密度,使加样时样品溶液可以沉入样品加样槽底部. 重要参数
world操作方法
1. 问：WORD 里边怎样设置每页不同的页眉？如何使不同的章节显示的页眉不同？ 答：分节，每节可以设置不同的页眉。文件――页面设置――版式――页眉和页脚――首页不同。 2. 问：请问word 中怎样让每一章用不同的页眉？怎么我现在只能用一个页眉，一改就全部改了？ 答：在插入分隔符里，选插入分节符，可以选连续的那个，然后下一页改页眉前，按一下“同前”钮，再做的改动就不影响前面的了。简言之，分节符使得它们独立了。这个工具栏上的“同前”按钮就显示在工具栏上，不过是图标的形式，把光标移到上面就显示出”同前“两个字来。 3. 问：如何合并两个WORD 文档，不同的页眉需要先写两个文件，然后合并，如何做？ 答：页眉设置中，选择奇偶页不同/与前不同等选项。 4. 问：WORD 编辑页眉设置，如何实现奇偶页不同? 比如：单页浙江大学学位论文，这一个容易设；双页：（每章标题），这一个有什么技巧啊？
答：插入节分隔符，与前节设置相同去掉，再设置奇偶页不同。 5. 问：怎样使WORD 文档只有第一页没有页眉，页脚？ 答：页面设置－页眉和页脚，选首页不同，然后选中首页页眉中的小箭头，格式－边框和底纹，选择无，这个只要在“视图”――“页眉页脚”，其中的页面设置里，不要整个文档，就可以看到一个“同前”的标志，不选，前后的设置情况就不同了。 6. 问：如何从第三页起设置页眉？ 答：在第二页末插入分节符，在第三页的页眉格式中去掉同前节，如果第一、二页还有页眉，把它设置成正文就可以了 ●在新建文档中，菜单―视图―页脚―插入页码―页码格式―起始页码为0，确定；●菜单―文件―页面设置―版式―首页不同，确定；●将光标放到第一页末，菜单―文件―页面设置―版式―首页不同―应用于插入点之后，确定。第2 步与第三步差别在于第2 步应用于整篇文档，第3 步应用于插入点之后。这样，做两次首页不同以后，页码从第三页开始从1 编号，完成。 7. 问：WORD 页眉自动出现一根直线，请问怎么处理？
western 操作步骤
Western 操作步骤 （三）SDS——PAGE电泳 （1）清洗玻璃板：一只手扣紧玻璃板，另一只手蘸点洗衣粉轻轻擦洗。两面都擦洗过后用自来水冲，再用蒸馏水冲洗干净后放在烤箱里烤干。 （2）灌胶与上样 1、玻璃板对齐后放入夹中卡紧。然后垂直卡在架子上准备灌胶。（可以用1%琼脂糖在垂直电泳槽的左右和下部封边） 2、配10%下层胶（10ml两块胶，每块胶5毫升左右），加入TEMED后立即摇匀即可灌胶。灌胶后胶上加一层甲醇（约1ml）液封，液封后胶凝的更快。 3、当甲醇和胶之间有一条折线时，说明胶已凝了。弃甲醇，并用吸水纸将甲醇吸干。 4、等待胶凝期间，准备好蛋白、细胞裂解液、上样缓冲液，上样总体积一般不超过30ul,上样前要将样品于沸水中煮5min使蛋白质变性，上样前在冰上放置3~5分钟。 5、配5%的上层胶（4ml两块胶，每块胶2ml），加入TEMED后立刻摇匀即可灌胶。将剩余空间灌满浓缩胶，然后将梳子插入浓缩胶中（从梳子的一头开始插）。灌胶时也要使胶沿玻璃板流下以免胶中有气泡产生。插梳子时要使梳子保持水平。由于胶凝固时体积会收缩减小，所以在上层胶凝固的过程中要在两边补胶（不补胶问题也不大）。等待上层胶凝固期间配制1×电泳缓冲液。 6、加入1×电泳缓冲液，两手分别捏住梳子的两竖直向上轻轻拔出。电泳缓冲液一定要加至超过玻璃板的伤员（量要足够多），否则电泳期间会出现电流过低的现象，进而影响电泳的效果。 7、上样（注意：最外的两个泳道易跑歪，尽量不用）Marker 3ul （Marker加在最外边上的加样孔中）样本20~30ul （3）电泳：恒流25mA每块胶，两块胶50mA。电泳至溴酚兰刚跑出来即可终止电泳，进行转膜 （四）转膜 （1）转一张膜需准备四张滤纸和一张硝酸纤维素膜。切滤纸和膜时一定要戴手套（以防手上的蛋白污染膜）。将切好的硝酸纤维素膜和滤纸置于1×转膜缓冲液浸湿。 （2）夹子黑的一面：海绵—2张滤纸—NC膜—胶—两张滤纸—海绵（刘老师的顺序），将夹子打开使黑的一面保持水平。在上面垫一张海绵垫，用玻璃棒来回赶几遍以赶走里面的气泡。在垫子上垫两层滤纸（光滑面临膜），放膜于滤纸上，将玻璃板撬开，随后将浓缩胶轻轻刮去，小心剥下下层胶盖于膜上，用手调整对齐，再放两张滤纸（光滑面临膜）用玻璃棒赶去其中的气泡。最后盖下另一块海绵垫，擀几下就可以合起来了。整个操作在转移液中进行，要不断的擀去气泡。膜两边的滤纸不能相互接触，否则会发生短路。如果同时做两块胶，转膜时要记住样本的位置。 （3）将夹子放入转移槽槽中，要使夹的黑面对槽的红面，夹的白面对槽的黑面。电转移时会产热，在槽的一边放一块冰来降温。一般用35V过夜（刘老师）。 转膜时点击方向注意是膜正胶负转膜结束前配制封闭液（3%脱脂牛奶）及1×TBST缓冲液。 （五）免疫反应 （1）封闭：将膜移至含有封闭液的平皿中，室温下脱色摇床上摇动封闭30分钟。 （2）一抗 A.从封闭液中取出膜，1×TBST 5min ×4次 B.将膜蛋白面朝上放于槽中，加入抗体，室温下孵育1小时后，4度过夜，次日用1×TBST
Word基本操作教程
Word基本操作教程 1、WORD的启动与关闭 启动：开始→程序→MicrosoftWord 关闭：文件→退出、关闭按钮 2、WORD窗口的组成：标题栏、菜单栏、工具栏、文档窗口、状态栏 3、打开或关闭工具栏：“视图”菜单→工具栏→选择工具选项(右击工具栏→选择工具选项) 4、文本的基本制作 1)选择汉字输入法： 方法二：Ctrl+Shift组合键选择 2)中英文切换的方法：Ctrl+空格键或在中文输入时，第一个字母输入v，随后输入的便是英文。 3)汉字输入方法：(智能ABC输入法) 输入完整汉语拼音;例如新世纪：xinshiji 输入词组前一字完整的拼音和后一字的声母;例如信息：xinx。 用数字键选择汉字;第一字词用空格键选择;用“+-”键翻页。 拼音中ǔ用v代替;如女同学：nvtongxue 输入大写的一、二……一○等：io+数字 重复输入：先输入要重复的文字→将插入点移到适当的位置→按F4或CTRL+Y。 4)标点符号的输入：
中西文标点选择：，.和，。 常用标点符号的输入：顿号、—书名号《》—<> 5)关闭软键盘的方法：单击软键盘图标。 6)保存文件：文件→保存(另存为); “常用工具栏”上“保存”按钮。 7)打开文件：文件→打开→查找范围、文件名→打开。 5、上机操作：输入下列文字。 迎着新世纪的曙光，“世界华人学生作文大赛”向我们走来。 第二节文本的基本编辑 教学目的：学习文本编辑的方法，掌握文字段落的设置与修饰。 教学重点：文本编辑的方法;文字的设置与修饰;段落的设置。 教学时间：2课时 教学步骤： 1、文本编辑的方法 插入文字：①用键盘移光标到插入文字处;②在插入文字处单击鼠标光标。 输入特殊符号：①插入→符号;②右键→快捷菜单中“符号” 删除不需要的文字：按Delete键删除光标后面的字符;按Backspace键删除光标前面的字符。 选定一段文字：单击段首选中当前行;双击段首选中当前段;三击段落任意处选中当前段。 移动或复制一段文字 移动：选定文字→剪切→选定目标位置→粘贴(或用鼠标选定直接拖动到目标位置)
word题操作过程2
在 C:\AOATest\Word 文件夹中，已有Word.doc文件。按下列要求操作，并将结果存盘。 注意：操作结果可参考 C:\AOATest\Word 文件夹中Word.pdf文件，请自行打开参考！ 1. 对正文进行排版，其中： （1）章名使用样式“标题1”，并居中； 编号格式为：第X章，其中X为自动排序。（本小题1分） （2）小节名使用样式“标题2”，左对齐； 编号格式为：多级符号，X.Y。 X为章数字序号，Y为节数字序号（例：1.1）。（本小题1分） （3）新建样式，样式名为：“样式0000”；其中： a. 字体： - 中文字体为“楷体_GB2312”， - 西文字体为“Times New Roman”， - 字号为“小四”； b. 段落： - 首行缩进2字符， - 段前0.5行，段后0.5行，行距1.5倍； c. 其余格式，默认设置。（本小题1分） （4）对出现“1.”、“2.”...处，进行自动编号，编号格式不变； 对出现“1)”、“2)”...处，进行自动编号，编号格式不变。（本小题1分）（5）将（3）中的样式应用到正文中无编号的文字。 注意：不包括章名、小节名、表文字、表和图的题注。（本小题1分）（6）对正文中的图添加题注“图”，位于图下方，居中。 a. 编号为“章序号”-“图在章中的序号”， （例如第1章中第2幅图，题注编号为1-2） b. 图的说明使用图下一行的文字，格式同标号， c. 图居中。（本小题1分） （7）对正文中出现“如下图所示”的“下图”，使用交叉引用，改为“如图X-Y所示”，其中“X-Y”为图题注的编号。（本小题1分） （8）对正文中的表添加题注“表”，位于表上方，居中。 a. 编号为“章序号”-“表在章中的序号”， （例如第1章中第1张表，题注编号为1-1） b. 表的说明使用表上一行的文字，格式同标号。 c. 表居中。（本小题1分） （9）对正文中出现“如下表所示”的“下表”，使用交叉引用，改为“如表X-Y所示”，其中“X-Y” 为表题注的编号。（本小题1分） （10）为正文文字（不包括标题）中首次出现“Access”的地方插入脚注，添加文字Access 是由微软发布的关联式数据库管理系统”。（本小题1分） 2. 在正文前按序插入节，使用“引用”中的目录功能，生成如下内容： （1）第1节：目录。其中： a.“目录”使用样式“标题1”，并居中 b.“目录”下为目录项。（本小题1分） （2）第2节：图索引。其中： a.“图索引”使用样式“标题1”，并居中； b.“图索引”下为图索引项。（本小题1分）
western的操作步骤Word版
Western Blot操作全过程 一，收蛋白 a（如果要收集死细胞） 1.取冰，将4°C离心机提前降温。 2.将死细胞收集到离心管：孔板内的细胞用PBS洗1-2遍，用适量 的胰酶消化，用离心管内的原培养液将孔板内细胞吹打下来，收集到离心管，室温离心1000rpm，5min。 3.弃上清，将离心管倒扣在滤纸上，尽量吸尽残留上清。 4.视细胞量的多少加入细胞裂解液。（1×Cell Lysis Buffer： PMSF=100：1，1×Cell Lysis Buffer，PMSF-20°C保存。PMSF 常温易降解，拿出时间不得超过30min，必须放置冰上。） 5.冰上裂解15min，将裂解液转移至EP管离心，4°C，12000rpm， 15min。 6.小心将上清转移至另一EP管，记下吸取的量。如：100μL。 7.将收集好的蛋白保存与—20°C。（可长期保存） b （如果不收集死细胞） 1．弃上清，孔板PBS洗1-2遍，吸尽PBS。在孔板中视细胞量的多少加入相应细胞裂解液。（同上） 2．冰上裂解15min，用细胞刮在孔板里将细胞刮刮。（不同的孔不能用同一个刮子，刮前用水冲洗，擦干。） 3．将裂解液转移至EP管离心，4°C，12000rpm，15min。
4．小心将上清转移至另一EP管，记下吸取的量。 5．将收集好的蛋白保存与—20°C。（可长期保存） 二，测蛋白浓度 BCA法（或者按照自己的试剂盒说明操作） 1.需96孔板，测蛋白浓度的A液，B液，标准蛋白，要测的样品蛋 白。 2.按要测的样品蛋白的数量来配AB液，每孔需AB混合液80μl（A： B=50：1）。例：有5个样品，加上5个标准蛋白和空白对照。共有11个孔。则A液取11×80=880μl，B液取880÷50=17.6两液混匀，加入96孔板，每孔80μl。然后加入标准蛋白及样品蛋白4μl。（标准蛋白先配好浓度125，250，500，1000，2000） 3.将孔板放入37°C温箱孵育30min。 4.用酶标仪测蛋白浓度。 5.记下蛋白浓度，根据要上样的μg量算出μl量。例：蛋白浓度为 1000，需上样15μg。则需上样15÷1000=？上样量不超过20μl。 三，配胶 1.将薄板和厚板用洁净的布擦干净，对齐，夹好。（板必须擦干净， 下端对齐，否则容易漏胶。）
word综合操作步骤
正文容已输入，按要求对该文档进行以下设置：章样式及自动编号、节样式及自动编号、新建样式并应用、对图表添加题注并设置交叉引用、自动生成目录及图表索引、分别添加奇偶页页眉页脚等。 按下列要求对文档“DWord.docx”进行设置。（注意：以题目要求为准，注意及时保存。） 首先“ctrl+A”选中全文，将全文样式修改为“正文”样式。 1、对正文（指的是除了目录索引等外的容）进行排版，其中： 1)使用多级符号对章名、小节名进行自动编号，代替原始的编号。要求： ?章号的自动编号格式为：第X章（例：第1章），其中：X为自动排序。阿拉伯数字序号。对应级别1。居中显示。 ?小节名自动编号格式为：X.Y，X为章数字序号，Y为节数字序号（例：1.1）。 X，Y均为阿拉伯数字序号，对应级别2，左对齐显示。
④“对齐位置”值设为“0” ⑤“将级别到样式”选择“标题1” （若没有显示“将级别到样式”，请先单击对话框右上角的“高级”按钮）如图2所示。 图2 章节多级符号设置 c)★不要关闭图2“章节多级符合设置”对话框，继续设置小节名的样式： ⑥先删除“编号格式”中原有容 ⑦“级别”选择“2” ⑧“前一级别编号”选择“级别1”；在“编号格式”的“1”后输入“.”；“编号 样式”选择“1, 2, 3, …”，“起始编号”选择“1” （此时“编号格式”显示“1.1”，注意此处2个“1”都是域结果，灰色底纹显示） ⑨“对齐位置”值设为“0”；“将级别到样式”选择“标题2”；勾选“在其后重新 开始编号”，并选择“级别1” ⑩按“确定”按钮后，“样式和格式”对话框样式显示如图4所示。
f)修改标题1和标题2的样式：居中显示和左对齐显示，单击“标题1”右侧下拉列 表中的“修改” 图5 居中显示图6 左对齐显示 2)新建样式，样式名为：“样式”+号后5位，其中：
Western blot基本操作步骤
Western blot基本操作步骤 一、细胞蛋白的提取 弃去培养基，加入预冷的PBS洗一遍，加入的RIPA裂解液（含1mM PMSF(100×)，每10ml加蛋白酶抑制剂和磷酸酶抑制剂各一片，六孔板每孔150-250μl，60mm×15mm培养皿300-400μl，），于冰上裂解约5分钟，裂解总液12000rpm离心10 min。取上清，用BCA法测定蛋白浓度。用于western blot的蛋白样品取一定量加4×loading buffer，10×reducing，再用裂解液补齐到所需上样体积。离心，使蛋白沉底。将EP管于沸水中煮5min，变性，之后再离心后准备上样。 二、BCA法测蛋白浓度操作步骤 将蛋白标准配制溶液溶解蛋白标准（BSA），配制成5mg/ml的蛋白标准溶液，10μl 分装，-20℃冷冻保存。 完全溶解蛋白标准品，取10μl用PBS稀释至100μl，使终浓度为0.5mg/ml。 据样品数量，按50体积BCA试剂A加1体积BCA试剂B(50:1)配制适量BCA工作液，充分混匀。BCA工作液室温24小时内稳定。 将标准品按0, 1, 2, 4, 8, 12, 16, 20μl加到96孔板的标准品孔中，加稀释标准品的溶液补足到20μl。 加适当体积样品到96孔板的样品孔中（可以通过预实验摸索稀释倍数），加PBS到20μl。 各孔加入100μl BCA工作液，37℃放置30分钟。 测定580nm条件下吸光度。根据标准曲线计算出蛋白浓度。 三、Western blot基本操作步骤 1、溶液配制： ①Runnig Buffer(1×)：SDS Runnig Buffer（20×）50mL，加MiliQ水至1L； ②Transfer Buffer(1×): Transfer Buffer(10×)100mL,甲醇200mL（20%，v/v），加MiliQ水至1L； ③TBST缓冲液 1M Tris·HCl（pH7.6）：60.5g Tris-base，加入约30ml浓盐酸，调PH至7.6，加MiliQ水至500ml。 TBS缓冲液（10×）：1M Tris·HCl 100ml+80g NaCl加MiliQ水1L TBST缓冲液（1×）：TBS缓冲液（10×）100ml+0.5ml Tween-20（0.05%，v/v），加MiliQ 水至1L。 ④封闭液：5% BSA（5g/100ml，称取1g BSA至20ml TBST，充分混匀溶解） 2、样品准备与加样 ①用4×SDS loading buffer, 10×reducing与蛋白质样品混合，并将此EP 管放在水浴锅中沸水煮5min，使蛋白质变性。 ②将预制胶固定到电泳装置中，并在装置中加满Runnig Buffer(1×)，内槽加入0.5mL抗氧化剂，小心拔下梳子； ③向上样孔中加入一定体积的蛋白样品（总蛋白量20μg以上）。向marker孔中加入2.5μl marker（按照实验要求设定marker量），向空白孔中加入一定体积的加样缓冲液(loading buffer)。注意采用相同（或相近）的上样体积，以保证蛋白的各带宽度相同。防止体积较大的上样孔中的蛋白质将向相邻的泳道扩散。 3、电泳 将电泳装置与电源连接。调节电压为100-200V，电泳50min，直至溴酚兰接近分离胶的底部，然后关闭电源并撤去连接的导线。