05葡萄球菌属鉴定
标题：葡萄球菌属鉴定版本号：A修订号：O
文件编号：XXXX-XJ-SOP—005发布日期：2006年07月01日
生效日期：2006年07月01日发布部门：质量管理小组
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葡萄球菌属鉴定
1、目的
对某一细菌的鉴定水平，可提供以下几方面的价值：（1）决定治病方法；（2）作流行病学研究；（3）了解细菌与感染的关系；
（4）进行学术交流。
2、原理
根据葡萄球菌的形态染色、培养特性、生化反应、抗原构造等将葡萄球菌由属鉴定到具体种类。
3、标本
不同病种及不同检查目的而定，可为脓汁、渗透液、咽拭子、
血、脑脊液、食物、呕吐物、粪便等，置于无菌瓶内送检。
4、试剂及器材
革兰氏染液、培养皿、培养瓶、生化鉴定管、血浆、玻片、接种针（环）、酒精灯等。
5、鉴定程序
标题：葡萄球菌属鉴定版本号：A修订号：O
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标本
涂片、染色
接种（视标本不同而定）
痰、脓汁、血、脑脊液粪便、呕吐物
渗出液、咽拭子增菌培养麦康凯或SS平皿
血平皿、麦康凯血平板
可凝菌落
纯培养
涂片、染色、触酶实验
葡萄状（G+）、触酶（+）
血浆凝固酶、葡萄糖甘露醇分解、高盐耐受实验甘露醇分解（需O2、甘露醇分解（—）
厌O2均+）
血浆凝固酶（+）、新生霉素（+）血浆凝固酶（—）
金黄色葡萄球菌
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新生霉素
S R
表皮葡萄球菌腐生葡萄球菌
6、质量控制
每周进行一次葡萄球菌标准菌株的革兰氏染色、触酶、血浆凝固酶及新生霉素实验。
7、实验室解释及临床意义
1、葡萄球菌广泛存在于自然界，医院内葡萄球菌的存在成为
院内交叉感染的重要因素。
2、葡萄球菌是化脓性感染的重要病原菌。
3、葡萄球菌引起尿路感染的比例很大。
8、安全防护措施
在操作过程中，要穿好工作衣，戴好口罩、手套，必要时戴眼
罩，严格按操作规程，结束后，用次氯酸溶液（0.2%）擦拭实验台、显微镜手柄、载物台，浸泡手，然后紫外线消毒30分钟。
9、标本处理
标题：葡萄球菌属鉴定版本号：A修订号：O
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批准人（签章）：页码：第4页，共4页废弃标本，培养基等统一由专门人员高压消毒处理。
10、参考文献
诊断细菌学，李仲兴等主编、第一版、香港、黄河文化出版社，1992。
葡萄球菌属检验
1．概述 葡萄球菌属是一类触酶试验阳性的革兰阳性球菌，包括金黄色葡萄球菌、表皮葡萄球菌、腐生葡萄球菌、中间型葡萄球菌等35个种，17个亚种。金黄色葡萄球菌是最重要的致病葡萄球菌。 2. 标本类型 血液、尿液、脑脊液、穿刺液、脓液等标本。 3. 鉴定 3.1 形态与染色革兰阳性球菌，成单、双、短链或不规则葡萄状排列。 3.2 培养特性金黄色葡萄球菌在血琼脂平板上的典型菌落为金黄色，周围有明显的?溶血环，部分菌落也可呈灰白色或柠檬色。在高盐甘露醇平板上呈淡橙黄色菌落。表皮葡萄球菌在血琼脂平板上菌落为白色或柠檬色，多数不溶血。 3.3 生化反应金黄色葡萄球菌触酶试验阳性，分解葡萄糖、麦芽糖、蔗糖和甘露醇，不分解棉子糖和水杨苷，明胶、血浆凝固酶和DNA酶试验阳性，七叶苷试验阴性。 3.4 鉴别要点 3.4.1 本菌属特征革兰阳性球菌，呈葡萄状排列，触酶试验阳性。金黄色葡萄球菌在血琼脂平板上菌落呈金黄色或白色，DNA酶和血浆凝固酶试验均阳性，发酵苷露醇。 3.4.2 与微球菌属的鉴别葡萄球菌属葡萄糖O/F试验为发酵型，镜下以葡萄状排列为主，菌体较小，而微球菌属为氧化型或无反应，镜下以四联排列为主，且菌体较大。 3.4.3 与链球菌属的鉴别葡萄球菌属O/F试验为发酵型，触酶试验阳性，链球菌属葡
萄糖O/F试验为氧化型，触酶试验阴性。 3.4.4 凝固酶试验阳性葡萄球菌的鉴别见下表1。 表1 凝固酶阳性葡萄球菌鉴别的关键性试验 菌名 凝固 酶触酶溶血 硝酸 盐 海藻 糖 半乳糖 苷酶 金黄色葡萄球菌金黄色亚 种 +++++- 金黄色葡萄球菌厌氧亚种+-+--- 施氏葡萄球菌聚集亚种++++-ND 中间葡萄球菌++d+++ 海豚葡萄球菌++++-ND S.lutrae++++++ 猪葡萄球菌d+-++- 注：“+”为90%以上菌株为阳性，“-”为90%以上菌株为阴性，“d”为11%-89%阳性，“ND”为无资料。 3.5 操作步骤 3.5.1 涂片、染色观察菌落特征，在血平板上挑取可疑菌落，涂片染色镜检。
链球菌和葡萄球菌分离鉴定
青岛农业大学 兽医微生物学课程论文 题目：链球菌和葡萄球菌分离鉴定 姓名： 学院：动物科技学院 班级：马业科学1201 学号： 2012 任课教师：温建新 二0一四年四月十二日
链球菌和葡萄球菌分离鉴定 班 2012 指导教师温建新 摘要：为了鉴别致病性葡萄球菌和链球菌，我们将用过氧化氢试验，甘露醇试验，凝固酶试验等方法进行鉴别，并根据他们的不同性质出现不同的结果，得出菌的种类。 关键词：葡萄球菌；链球菌 引言：葡萄球菌是一群革兰氏染色阳性球菌【1】，因常常堆聚成葡萄串状而得名。多数葡萄球菌为非致病菌，少数可致病。代表种有金黄色葡萄球菌。白色葡萄球菌、柠檬色葡萄球菌等。典型的葡萄球菌为圆形或卵圆形，常葡萄状排列，革兰氏染色阳性，无鞭毛，无荚膜，不产生芽胞，呈球形或稍呈椭圆形，直径1.0um左右，排列成葡萄状。葡萄球菌无鞭毛，不能运动。无芽胞，除少数菌株外一般不形成荚膜。易被常用的碱性染料着色，其衰老、死亡或被白细胞吞噬后，以及耐药的某些菌株可被染成革兰氏阴性。营养要求不高，在普通培养基上生长良好，在含有血液和葡萄糖的培养基中生长更佳，需氧或兼性厌氧，少数专性厌氧【2】., 多数葡萄球菌能分解葡萄糖、麦芽糖和蔗糖，产酸不产生气。致病性菌株能分解甘露醇. 链球菌是一类球形的革兰氏阳性细菌【2】，属于厚壁菌门的一个属。这些细菌细胞分裂时总是沿一个轴，所以通常成对或者链状的。因为这些特征，他们被称作“链球菌” . 球形或卵圆形，直径0.6～1.0um，多数呈链状排列，短者4～8个细菌组成，长者有20～30个细菌组成。链的长短与菌种及生长环境有关，在液体培养基中形成链状排列比在固体培养基中形成的链长。幼龄菌大多可见到透明质酸形成的荚膜，如延长培养时间，荚膜可被细菌自身产生的透明质酸酶分解而消失。无芽胞，无鞭毛，有菌毛样结构，含M蛋白，革兰氏染色阳性。能发酵简单的糖类，产酸不产气, 需氧或兼性厌氧，有些为厌氧菌。营养要求较高。【1】普通培养基中需加有血液、血清、葡萄糖等才能生长。血琼脂平板上形成灰白色、有乳光、表面光滑、边缘整齐、直径0.5—0.75mm的细小菌落，不同菌株有不同溶血现象。肺炎链球菌与甲型溶血性链球菌均产生α溶血环【3】。
实验 金黄色葡萄球菌的分离和鉴定
实验题目金黄色葡萄球菌的分离和鉴定 一、实验目的 金黄色葡萄球菌在自然界中无处不在，空气、水、灰尘及人和动物的排泄物中都可找到。因而，食品受其污染的机会很多。近年来，美国疾病控制中心报告，由金黄色葡萄球菌引起的感染占第二位，仅次于大肠杆菌。金黄色葡萄球菌肠毒素是个世界性卫生难题，在美国由金黄色葡萄球菌肠毒素引起的食物中毒，占整个细菌性食物中毒的33%，加拿大则更多，占到45%，我国每年发生的此类中毒事件也非常多。为控制金黄色葡萄球菌的对人的危害，我们要分离出它们并研究。 二、实验原理 典型的金黄色葡萄球菌为球型，直径0.8um左右，显微镜下排列成葡萄串状。金黄色葡萄球菌无芽胞、鞭毛，大多数无荚膜，革兰氏染色阳性。金黄色葡萄球菌营养要求不高，在普通培养基上生长良好，需氧或兼性厌氧，最适生长温度37°C，最适生长pH7.4,干燥环境下可存活数周。平板上菌落厚、有光泽、圆形凸起，直径1—2mm。血平板菌落周围形成透明的溶血环。金黄色葡萄球菌有高度的耐盐性，可在10—15%NaCl肉汤中生长。可分解葡萄糖、麦芽糖、乳糖、蔗糖，产酸不产气。甲基红反应阳性，V—P反应弱阳性。许多菌株可分解精氨酸，水解尿素，还原硝酸盐，液化明胶。金黄色葡萄球菌具有较强的抵抗力，对磺胺类药物敏感性低，但对青霉素、红霉素等高度敏感。对碱性染料敏感，十万分之一的龙胆紫液即可抑制其生长。 三、实验材料和设备 1.培养基 牛肉膏蛋白胨培养基（13%NaCl）：牛肉膏5g，蛋白胨10g，氯化钠130g，琼脂15g，蒸 馏水1000ml，121℃灭菌20min后倒平板。 肉汤培养基：酵母膏5g，蛋白胨10g，氯化钠10g，蒸馏水1000ml，121℃灭菌20min。 甲苯胺兰-DNA平板 2.试剂 磺胺类药物、革兰氏染液 3.仪器和设备 显微镜、超净工作台、水浴锅、培养皿、锥形瓶、移液器、灭菌锅、培养箱、试管、载玻片、接菌环。 四、实验方法 金黄色葡萄球菌的分离： 1.称取5g土样，在无菌条件下放入灭菌的锥形瓶中，加入50ml蒸馏水，再加入200ul 磺胺类药物，振荡10min，使土样充分混匀。利用金黄色葡萄球菌对磺胺类药物敏感性低的特性，杀死其他细菌。 2.从上述锥形瓶中取5ml上清液放入一只干净的试管中，30℃，200rpm，24h。 3.取培养好的菌液，按梯度稀释法稀释土壤悬液，依次制备成100、1000、10000、100000倍悬液后，分别取200ul涂布于牛肉膏蛋白胨培养基平板上，置于37℃培养箱中培养24h。利用高盐培养基抑制其他细菌的生长，从而分离金黄色葡萄球菌。 金黄色葡萄球菌的鉴定： 1.菌落形态：菌落较小，较湿，较透明，边缘整齐，隆起。
葡萄球菌属检验
精心整理1．概述 葡萄球菌属是一类触酶试验阳性的革兰阳性球菌，包括金黄色葡萄球菌、表皮葡萄球菌、腐生葡萄球菌、中间型葡萄球菌等35个种，17个亚种。金黄色葡萄球菌是最重要的致病葡萄球菌。 2.标本类型 血液、尿液、脑脊液、穿刺液、脓液等标本。 3.鉴定 3.1形态与染色革兰阳性球菌，成单、双、短链或不规则葡萄状排列。 3.2培养特性金黄色葡萄球菌在血琼脂平板上的典型菌落为金黄色，周围有明显的 溶血环，部分菌落也可呈灰白色或柠檬色。在高盐甘露醇平板上呈淡橙黄色菌落。表皮葡萄球菌在血琼脂平板上菌 O/F试 ”为3.5.1涂片、染色观察菌落特征，在血平板上挑取可疑菌落，涂片染色镜检。 3.5.2触酶试验参见《触酶试验标准操作规程》。 3.5.3凝固酶试验参见《凝固酶试验标准操作规程》。 3.5.4鉴定从血琼脂平板上挑取纯菌落，用微生物鉴定仪或传统生化反应进行细菌鉴定。 4.药敏 参见《药物敏感性试验标准操作规程》及CLSIM100-S20最新版本文件。 5.质量控制 参见《质量管理程序》。 6.检验结果解释与分析 6.1由于葡萄球菌分布广泛，从临床标本中分离到金黄色葡萄球菌时，将其定为致病菌时应慎重。
精心整理 应根据凝固酶试验进一步确认。对可疑菌株的鉴定，最好利用商品化的鉴定系统根据生化图谱进行确定。表皮葡萄球菌分离自导管相关血流感染时，通常视为致病菌。溶血性葡萄球菌从泌尿感染病人分离得到时，尤其是细菌量较大或作为优势菌时，通常被视为致病菌。 6.2甲氧西林耐药的金黄色葡萄球菌（MRSA）对多种广谱强效抗菌药物呈多重耐药性。如果检测出耐甲氧西林的葡萄球菌菌株则报告耐所有青霉素、头孢菌素、碳青霉烯类和?-内酰胺药/?-内酰胺酶抑制剂类抗生素，对氨基糖苷类和大环内酯类抗生素常协同耐药。若葡萄球菌属对四环素敏感，则对多西环素和米诺环素敏感。某些菌对四环素中介或耐药，而对多西环素和米诺环素敏感。临床感染葡萄球菌的病人用喹诺酮类治疗3-4日后，原来敏感的葡萄球菌易产生耐药。所以对这类葡萄球菌需多次反复进行药敏试验。大环内酯类耐药葡萄球菌包括固有耐药和诱导耐药。所以临床试验室须进行“D”试验以检测克林霉素诱导性耐药，根据“D”试验结果来报告克林霉素的耐药性。 7.临床意义 金黄等， 等。 MRSA 物。 8. [1] [2] [3]
葡萄球菌属检验
文件页码：1/3 1．概述 葡萄球菌属是一类触酶试验阳性的革兰阳性球菌，包括金黄色葡萄球菌、表皮葡萄球菌、腐生葡萄球菌、中间型葡萄球菌等35个种，17个亚种。金黄色葡萄球菌是最重要的致病葡萄球菌。 2. 标本类型 血液、尿液、脑脊液、穿刺液、脓液等标本。 3. 鉴定 3.1 形态与染色革兰阳性球菌，成单、双、短链或不规则葡萄状排列。 3.2 培养特性金黄色葡萄球菌在血琼脂平板上的典型菌落为金黄色，周围有明显的 溶血环，部分菌落也可呈灰白色或柠檬色。在高盐甘露醇平板上呈淡橙黄色菌落。表皮葡萄球菌在血琼脂平板上菌落为白色或柠檬色，多数不溶血。 3.3 生化反应金黄色葡萄球菌触酶试验阳性，分解葡萄糖、麦芽糖、蔗糖和甘露醇，不分解棉子糖和水杨苷，明胶、血浆凝固酶和DNA酶试验阳性，七叶苷试验阴性。 3.4 鉴别要点 3.4.1 本菌属特征革兰阳性球菌，呈葡萄状排列，触酶试验阳性。金黄色葡萄球菌在血琼脂平板上菌落呈金黄色或白色，DNA酶和血浆凝固酶试验均阳性，发酵苷露醇。 3.4.2 与微球菌属的鉴别葡萄球菌属葡萄糖O/F试验为发酵型，镜下以葡萄状排列为主，菌体较小，而微球菌属为氧化型或无反应，镜下以四联排列为主，且菌体较大。 3.4.3 与链球菌属的鉴别葡萄球菌属O/F试验为发酵型，触酶试验阳性，链球菌属葡萄糖O/F试验为氧化型，触酶试验阴性。 3.4.4 凝固酶试验阳性葡萄球菌的鉴别见下表1。 表1 凝固酶阳性葡萄球菌鉴别的关键性试验 菌名凝固酶触酶溶血硝酸盐海藻糖半乳糖苷酶 金黄色葡萄球菌金黄色亚种+ + + + + - 金黄色葡萄球菌厌氧亚种+ - + - - - 施氏葡萄球菌聚集亚种+ + + + - ND 中间葡萄球菌+ + d + + + 海豚葡萄球菌+ + + + - ND S.lutrae + + + + + + 猪葡萄球菌 d + - + + - 注：“+”为90%以上菌株为阳性，“-”为90%以上菌株为阴性，“d”为11%-89%阳性，“ND”为无资料。 3.5 操作步骤 3.5.1 涂片、染色观察菌落特征，在血平板上挑取可疑菌落，涂片染色镜检。 3.5.2 触酶试验参见《触酶试验标准操作规程》。 3.5.3 凝固酶试验参见《凝固酶试验标准操作规程》。 3.5.4 鉴定从血琼脂平板上挑取纯菌落，用微生物鉴定仪或传统生化反应进行细菌鉴定。 4. 药敏 参见《药物敏感性试验标准操作规程》及CLSI M100-S20最新版本文件。 5. 质量控制
葡萄球菌属检验
蒈1．概述 蒅葡萄球菌属是一类触酶试验阳性的革兰阳性球菌，包括金黄色葡萄球菌、表皮葡萄球菌、腐生葡萄球菌、中间型葡萄球菌等35个种，17个亚种。金黄色葡萄球菌是最重要的致病葡萄球菌。 芀2.标本类型 袈血液、尿液、脑脊液、穿刺液、脓液等标本。 薈3.鉴定 袆3.1形态与染色革兰阳性球菌，成单、双、短链或不规则葡萄状排列。 羂3.2培养特性金黄色葡萄球菌在血琼脂平板上的典型菌落为金黄色，周围有明显的 溶血环，部分菌落也可呈灰白色或柠檬色。在高盐甘露醇平板上呈淡橙黄色菌落。表皮葡萄球菌在血琼脂平板上菌落为白色或柠檬色，多数不溶血。 袁3.3生化反应金黄色葡萄球菌触酶试验阳性，分解葡萄糖、麦芽糖、蔗糖和甘露醇，不分解棉子糖和水杨苷，明胶、血浆凝固酶和DNA酶试验阳性，七叶苷试验阴性。 蚈3.4鉴别要点 羃3.4.1本菌属特征革兰阳性球菌，呈葡萄状排列，触酶试验阳性。金黄色葡萄球菌在血琼脂平板上菌落呈金黄色或白色，DNA酶和血浆凝固酶试验均阳性，发酵苷露醇。 蚄3.4.2与微球菌属的鉴别葡萄球菌属葡萄糖O/F试验为发酵型，镜下以葡萄状排列为主，菌体较小，而微球菌属为氧化型或无反应，镜下以四联排列为主，且菌体较大。 蚀3.4.3与链球菌属的鉴别葡萄球菌属O/F试验为发酵型，触酶试验阳性，链球菌属葡萄糖O/F试验为氧化型，触酶试验阴性。 螈3.4.4凝固酶试验阳性葡萄球菌的鉴别见下表1。 莄表1凝固酶阳性葡萄球菌鉴别的关键性试验 膂菌名葿凝固 酶 袇触 酶 螅溶 血 袄硝酸 盐 膈海藻 糖 羇半乳糖 苷酶 膆金黄色葡萄球菌金黄色亚种莂+ 芁+ 肇+ 莃+ 肄+ 羀- 肇金黄色葡萄球菌厌氧亚种螄+ 蒁- 蝿+ 膇- 膄- 芃- 螁施氏葡萄球菌聚集亚种芇+ 薅+ 蚁+ 薀+ 莇- 羆ND 莃中间葡萄球菌荿+ 蒇+ 肃d 袁+ 膈+ 薆+ + - ND
基本常规医疗流程答案
太原九龙泌尿外科医院基本医疗流程 基本医疗流程 本流程根据医疗常规接诊程序设计，适用于医院日常规范化医疗服务培训、运作、指导。 一、医疗行为准则 ·以病人为中心，医患合作，“一对一”平等交流； ·以主诊为中心，首诊负责，各科配合，流程运作，规范医疗； ·仁爱行医，诚信待人，真诚服务，体贴关爱。 ·交流“五不”：与患者交谈中，不讲不文明的生硬话、不讲与病无关的题外话、不讲不留余地的过头话、不讲不顾后果的刺激话、不讲不负责任的议论话。 ·三个“留意”：留意患者及亲属的情绪变化、留意他们对疾病认识和治疗的期望、留意自我情绪控制和态度。 ·“六心”服务：听主诉及解释耐心；观察、检查细心；语言上贴心；主动帮热心；询问上爱心；行为表达责任心。 二、医疗服务模式 ·链式服务：建立环环相扣的“健康产业”医疗服务链，全程导医，全程陪护，链式服务。 ·行为模式：如图示（附1） 三、医疗责任与义务 1、责任：所有医护人员在医疗服务过程中，均负有医疗质量安全责任；负有医院文化 传播、医疗服务宣传、品牌形象维护与推广责任；负有维护医院及社会大局利益和患者合法权益之责任。 2、义务：所有医护人员在医疗服务过程中必须对患者履行“观察、注意、告知”等法律义 务，为患者提供满意的人文关怀服务。其中： ·观察：认真观察患者生命体征和病情变化；详细记录病情变化与病历，及时分析处置。 ·注意：医师不能只限于常规项目检查，同时必须注意患者特殊症状、体征的专项检查。 不能仅仅只听主诉，只限于单病种诊断，要提高对疾病鉴别诊断水平。 ·告知：常规检查、治疗、手术预先告知；病情变化、特殊处置、治疗方式预先告知；危重病人抢救治疗要事先告知患者家属确认、签字。 3、岗位责任分工
金黄色葡萄球菌的分离及鉴定(4)
金黄色葡萄球菌的分离及鉴定（食品检验） 1.金黄色葡萄球菌检验程序： 2.金黄色葡萄球菌鉴定程序： （1）：金黄色葡萄球菌在Baird-parker平板上菌落直径为2mm-3mm，颜色呈灰色到黑色，边缘为淡色，周围有一周浑浊带，外围有一层透明圈，用接种针接触菌落有似奶油至树胶样的硬度，偶然会遇到非脂肪溶解的类似菌落；但无混浊带及透明圈。长期保存的冷冻或干燥食品中所分离的菌落比典型菌落所产生的黑色较淡些，外观可能粗糙并干燥。在血平板上，形成菌落较大，圆形、光滑凸起、湿润、金黄色（有时为白色），菌落周围可见完全透明溶血圈。挑取上述菌落进行革兰氏染色镜检及血浆凝固酶试验。 （2）：染色镜检：金黄色葡萄球菌为革兰氏阳性球菌，排列呈葡萄球状，无芽胞，无荚膜，直径约为0.5 μm～1 μm。
（3）：血浆凝固酶试验：挑取、Baird-Parker 平板或血平板上可疑菌落1 个或以上，分别接种到5 mL BHI和营养琼脂小斜面，36 ℃±1 ℃培养18 h～24 h。取 新鲜配置血浆0.5 mL，放入小试管中，再加入BHI 培养物0.2 mL～0.3 mL，振荡摇匀，置36℃±1 ℃温箱或水浴箱内，每半小时观察一次，观察6 h，如呈现凝固（即将试管倾斜或倒置时，呈现凝块）或凝固体积大于原体积的一半，被判定为阳性结果。同时以血浆凝固酶试验阳性和阴性葡萄球菌菌株的肉汤培养物作为对照。也可用商品化的试剂，按说明书操作，进行血浆凝固酶试验。结果如可疑，挑取营养琼脂小斜面的菌落到5 mL BHI，36 ℃±1 ℃培养18 h～48 h，重复试验。 （4）：结果判定：符合（1）、（2）、（3），可判定为金黄色葡萄球菌。 结果报告：在25 g（mL）样品中检出或未检出金黄色葡萄球菌。
金黄色葡萄球菌的分离和初步鉴别
品种名称：金黄色葡萄球菌显色培养基 品种编号：CRM012 英译名称：Chromogenic Staph. aureus Agar 金黄色葡萄球菌显色培养基用途：用于金黄色葡萄球菌的分离和初步鉴别。 金黄色葡萄球菌显色培养基使用原理： 蛋白胨、大豆胨和酵母膏粉提供碳氮源和微量元素;氯化钠维持均衡的渗透压;琼脂是培养基的凝固剂;显色剂与金黄色葡萄球菌具有的酶发生特异性反应，水解底物，释放出显色基团，在无色透明平板上，金黄色葡萄球菌产生粉红-紫红的边缘整齐菌落;抑菌剂可抑制杂菌的生长。 操作步骤： 1、称取67.4g培养基干粉，加入1L蒸馏水或去离子水(可按比例扩大增或缩小)，搅拌加热煮沸至完全溶解(避免过度加热)，无需高压灭菌，冷至50℃左右倾注平板备用; 2、待检样品按照相应的标准(GB、SN、FDA等)进行取样及前增菌，挑取一环增菌液划线接种于制备好的该培养基平板上，于36±1℃培养18～24 h，观察结果，挑取典型可疑菌落进行鉴定试验。 结果判断： 菌属菌落特征 金黄色葡萄球菌粉红-紫红色菌落 其它菌蓝绿色或无色或受抑制 金黄色葡萄球菌显色培养基质量控制： 外观：流动性良好的淡黄色粉末，制备好的平板呈浅黄色透明固体培养基。 生物学：下列菌株接种后于36±1℃培养24h生长情况如下表： 质控菌菌落特征 金黄色葡萄球菌ATCC25923 生长良好，粉红-紫红色 单核增生李斯特菌ATCC19115 蓝绿色 表皮葡萄球菌(CMCC(B)26069 受抑制
粪肠球菌ATCC29212 受抑制 普通变形杆菌CMCC(B)49027 受抑制 规格：67.4克 /瓶，可配置1L的培养基。 贮存： 脱水培养基：2～8℃，在标签上注明的保质期内使用。制备好平板：2～8℃，最多保存一周。
葡萄球菌属鉴定
葡萄球菌属鉴定 一、目的 对某一细菌的鉴定水平，可提供以下几方面的价值：（1）决定 治病方法；（2）作流行病学研究；（3）了解细菌与感染的关系； （4）进行学术交流。 二、原理 根据葡萄球菌的形态染色、培养特性、生化反应、抗原构造等 将葡萄球菌由属鉴定到具体种类。 三、标本 不同病种及不同检查目的而定，可为脓汁、渗透液、咽拭子、 血、脑脊液、食物、呕吐物、粪便等，置于无菌瓶内送检。四、试剂及器材 革兰氏染液、培养皿、培养瓶、生化鉴定管、血浆、玻片、接 种针（环）、酒精灯等。 五、鉴定程序 标本 涂片、染色 痰、脓汁、血、脑脊液粪便、呕吐物
平皿 可凝菌落 纯培养 涂片、染色、触酶实验 葡萄状（G+）、触酶（+） 血浆凝固酶、葡萄糖甘露醇分解、高盐耐受实验 甘露醇分解（需O2、甘露醇分解（—） 厌O2均+） 血浆凝固酶（+）、新生霉素（+）血浆凝固酶（—） 新生霉素 S R 表皮葡萄球菌腐生葡萄球菌 六、质量控制 每周进行一次葡萄球菌标准菌株的革兰氏染色、触酶、血浆凝固酶及新生霉素实验。 七、实验室解释及临床意义
1、葡萄球菌广泛存在于自然界，医院内葡萄球菌的存在成为院 内交叉感染的重要因素。 2、葡萄球菌是化脓性感染的重要病原菌。 3、葡萄球菌引起尿路感染的比例很大。 八、安全防护措施 在操作过程中，要穿好工作衣，戴好口罩、手套，必要时戴眼 罩，严格按操作规程，结束后，用次氯酸溶液（0.2%）擦拭实 验台、显微镜手柄、载物台，浸泡手，然后紫外线消毒30分钟。 九、标本处理 废弃标本，培养基等统一由专门人员高压消毒处理。 十、参考文献 诊断细菌学，李仲兴等主编、第一版、香港、黄河文化出版社，1992。
细菌鉴定流程
细菌鉴定流程： 取一环标本四区划线接种平板（如为粪便标本接种SS,MAC平板） 培养18-24小时后取一区菌落革兰染色，报告为革兰阳性球菌/革兰阴性球菌/革兰阳性杆菌/革兰阴性杆菌，注意区分细菌和真菌 一般情况下不会给你们做革兰阳性杆菌和革兰阴性球菌 革兰阳性球菌鉴定流程： 先做3%触酶试验：阳性的为葡萄球菌或微球菌，阴性为链球菌或肠球菌 葡萄球菌和微球菌的区别：葡萄糖OF试验，葡萄球菌为F型，微球菌为O型 所以如果做到一个触酶阳性的革兰阳性球菌都要做下葡萄糖OF试验，DNA酶试验，新生霉素试验，血浆凝固酶试验 链球菌和肠球菌的区别：链球菌高盐和胆汁七叶苷试剂均为阴性，而肠球菌都为阳性。 链球菌属内区别：本来可以通过溶血来区分一些的，但是由于实验室的平板αβ溶血比较难区分 所以如果做到一个触酶阴性的革兰阳性球菌都要做下高盐，胆汁七叶苷，杆菌肽，奥普托欣，CAMP 如果做到一个奥普托欣敏感的革兰阳性球菌再加做胆汁溶菌试验和菊糖试验（阳性为变红）可判定为肺炎链球菌 革兰阴性杆菌鉴定流程： 先做氧化酶试验： 氧化酶阴性的革兰阴性杆菌都要做下KIA，MIU，葡磷两支(做MR，VP)，苯丙，枸橼酸盐，硝还，蛋白胨水（做吲哚试验），赖氨酸，鸟氨酸，氨对 如果KIA结果为A/A或者K/A的应为肠杆菌科细菌，如上面向个反应还不能区分细菌到种根据教科书307页加做试验。 一般情况下只会给你们做大肠埃希菌，志贺菌属（四种），沙门菌属（甲副，乙副，伤寒），弗劳地枸橼酸杆菌，肺炎克雷伯，产酸克雷伯，产气肠杆菌，阴沟肠杆菌，普通变形杆菌，奇异变形杆菌，沙雷菌属，摩根菌属，普罗威登斯菌属。 如果KIA结果为K/K应怀疑为不动杆菌属或者嗜麦芽窄食单胞菌：这两个菌区分可通过麦芽糖和赖氨酸试验区分， 如为氧化酶阳性，要做葡萄糖的OF试验（用非发酵），硝还产气，精氨酸双水解酶，一般情况下只有两种菌给你们做一个是铜绿假单胞菌，一个是粪产碱杆菌， 真菌给你们做的一般情况只有白色念珠菌和新生隐球菌，通过墨汁负染，芽管试验，厚膜孢
沃氏葡萄球菌的分离与鉴定
牙膏中沃氏葡萄球菌的分离与鉴定 摘要：采用金黄色葡萄球菌检测方法从牙膏中分离出一种葡萄球菌，应用VITEK 2全自动微生物分析系统鉴定为沃氏葡萄球菌，通过对其形态和生化特性进行鉴定，以期为今后沃氏葡萄球菌的深入研究提供参考依据。 关键词：葡萄球菌；分离；鉴定；生化鉴定 葡萄球菌属广泛的分布于自然界，是一种革兰氏阳性的球形细菌，显微镜下排列成葡萄串状，是医院感染的重要病原菌。沃氏葡萄球菌是葡萄球菌属的一种，有报道从人外伤分泌物中分离出沃氏葡萄球菌[1]，并有沃氏葡萄球菌致动脉栓塞的报道[2]。但也有学者在难治性牙周炎的龈下菌丛中发现了沃氏葡萄球菌[ 3-4 ]，并认为沃氏葡萄球菌是牙周致病菌[5]，王艳等[6]应用PCR技术克隆了沃氏葡萄球菌尿素酶基因的保守序列。但有关沃氏葡萄球菌的研究很少，本文在对牙膏进行金黄色葡萄球菌检测时，检出沃氏葡萄球菌，并对其生化特性进行研究，以期为今后沃氏葡萄球菌的研究提供参考。 1 材料与方法 1.1 材料 检验样品为旅游用牙膏（3g/支），来自送检样品，包装完好。 1.2 仪器和设备 所有试验用培养基均购自北京陆桥技术有限责任公司，VITEK 2 全自动微生物分析系统及相关配套试剂购自法国生物梅里埃公司。 1.2 方法 检验方法依据《化妆品卫生规范》（2007版）中金黄色葡萄球菌检测方法进行。操作步骤为： 1.2.1 样品的制备称取10g样品，加到装有玻璃珠及90ml灭菌生理盐水的三角烧瓶中，充分振荡均匀，静置15min。用其上清液作为1：10的检液。 1.2.2 增菌取1：10稀释的样品接种到90ml SCDLP液体培养基中，置36℃±1℃培养箱，培养24h±2h。 1.2.3 分离从增菌液中取1-2接种环，划线接种在Baird Parker氏培养基，置36℃±1℃培养24h-48h。 1.2.4 纯化挑取单个菌落分纯在血琼脂平板上，置36℃±1℃培养箱，培养24h±2h。 1.2.5 染色镜检挑取分纯菌落，涂片，进行革兰氏染色，镜检。 2 结果与分析 2.1 菌落观察 菌落在Baird Parker培养基上呈圆形、光滑、较湿润，颜色为灰黑色，周围有晕圈；在血琼脂平板上菌落为圆形，灰白色，表面光滑，有少量溶血。 2.2 革兰氏染色镜检 将可疑菌落进行革兰氏染色，染色镜检为革兰氏阳性菌，排列成葡萄状，无芽孢和荚膜。 2.3 甘露醇发酵试验 将菌落接种于甘露醇发酵培养基中，36℃±1℃培养24h±2h，结果显示不能发酵甘露醇产酸。 2.4 血浆凝固酶试验 血浆和肉汤培养物混匀培养6h之内不凝固，结果显示血浆凝固酶阴性，而金黄色葡萄球菌阳性对照、阴性对照、肉汤对照结果分别为阳性、阴性和阴性。
金黄色葡萄球菌的分离及鉴定
金黄色葡萄球菌的分离 及鉴定 Modified by JACK on the afternoon of December 26, 2020
金黄色葡萄球菌的分离及鉴定（食品检验） 1.金黄色葡萄球菌检验程序： 2.金黄色葡萄球菌鉴定程序： （1）：金黄色葡萄球菌在Baird-parker平板上菌落直径为2mm-3mm，颜色呈灰色到黑色，边缘为淡色，周围有一周浑浊带，外围有一层透明圈，用接种针接触菌落有似奶油至树胶样的硬度，偶然会遇到非脂肪溶解的类似菌落；但无混浊带及透明圈。长期保存的冷冻或干燥食品中所分离的菌落比典型菌落所产生
的黑色较淡些，外观可能粗糙并干燥。在血平板上，形成菌落较大，圆形、光滑凸起、湿润、金黄色（有时为白色），菌落周围可见完全透明溶血圈。挑取上述菌落进行革兰氏染色镜检及血浆凝固酶试验。 （2）：染色镜检：金黄色葡萄球菌为革兰氏阳性球菌，排列呈葡萄球状，无芽胞，无荚膜，直径约为μm～1 μm。 （3）：血浆凝固酶试验：挑取、Baird-Parker 平板或血平板上可疑菌落1 个或以上，分别接种到5 mL BHI和营养琼脂小斜面，36 ℃±1 ℃培养18 h～24 h。取新鲜配置血浆 mL，放入小试管中，再加入BHI 培养物 mL～ mL，振荡摇匀，置36℃±1 ℃温箱或水浴箱内，每半小时观察一次，观察6 h，如呈现凝固（即将试管倾斜或倒置时，呈现凝块）或凝固体积大于原体积的一半，被判定为阳性结果。同时以血浆凝固酶试验阳性和阴性葡萄球菌菌株的肉汤培养物作为对照。也可用商品化的试剂，按说明书操作，进行血浆凝固酶试验。结果如可疑，挑取营养琼脂小斜面的菌落到5 mL BHI，36 ℃±1 ℃培养18 h～48 h，重复试验。 （4）：结果判定：符合（1）、（2）、（3），可判定为金黄色葡萄球菌。 结果报告：在25 g（mL）样品中检出或未检出金黄色葡萄球菌。
微生物菌种、毒株和样本标准操作程序与流程
病原微生物菌（毒）种和样本的标准操作 规程流程 1．目的：对本实验室菌种、毒种的申购、保存、保管、领用、处理等各个环节实行有效的监督控制，防止意外事故发生，确保疾病预防与控制检验业务及科研教学工作。 2．适用范围及菌种、毒种专职管理人员 适用于本科微生物实验室菌种、毒株的管理； 菌种、毒种专职管理人员：于瑞芳、侯恩言 3．职责 ①微生物实验室负责菌、毒种的出入库保管、保存及处理等日常管理。 ②科室指定2名菌种、毒种库管理人员承担菌、毒种日常管理。 ③科室负责人负责一、二类菌、毒种的出入库和向上级索取及对下级发送的审核。 ④技术管理层批准本实验室一、二类菌、毒种的出入库和向上级索取及对下级发送的审批。 4．工作程序 ⑴报送及入库 ①当微生物实验室检出菌、毒株应及时报送市疾病预防控制中心。 ②新发现的菌、毒种，要做好原始记录，逐级报送进行复核确认，报送时须2人参加。 ③一、二类菌、毒种入库前，科室审核，技术管理层批准后入库
④个人不得擅自保留菌、毒种，必须由科室进行统一编号、登记入库管理 ⑤菌、毒种入库时， 2名菌、毒种保管人员须认真做好菌毒种的编号、登记工作。 ⑵日常管理 ①保管人员由于瑞芳、侯恩言2名检验人员组成。 ②菌、毒种入库时，保管人员应及时验收，统一编号，填写《菌、毒种登记表》 ③严禁随意将菌、毒种置于非菌、毒种专用保存场所，应做到三专（专室、专柜、专锁）。 ④菌、毒种库由2名保管人员双锁管理，铁门与锁必须牢固有效，发现损坏须及时报修。未经各科室负责人同意，不得擅自将钥匙委托他人代管。 ⑤菌、毒种保管人员应定期对库内温度、湿度、通风及冰箱、冰柜等菌、毒种保藏设备运转情况进行检查，并做好记录。 ⑥菌、毒种保管人员根据菌、毒种的保存期限，及时通知分管病种的检验人员进行传代，定期鉴定，并详细记录在《菌、毒种登记表》⑦菌、毒种保管人员发现菌、毒种发生变异和死亡，应及时向科室负责人报告，并填写《菌、毒种登记表》。科室须将变异及死亡的一、二类菌、毒种通报技术管理层。 ⑶索取、领用和发放
检验科实验室安全管理制度和流程图
检验科实验室安全管理制度和流程 一、目的：规范临床实验室的安全管理。 二、适用范围：检验科实验室和工作人员安全的一般要求.防火、用电、化学危险物品、微生物的安全要求.以保证检验科实验室的安全运作.将事故控制在最低限度。 三、安全管理流程： 1 工作人员和实验室安全的一般要求 1.1 实验室工作区内绝对禁止吸烟 点燃的香烟是易燃液体的潜在火种；香烟、雪茄或烟斗都是传染细菌和接触毒物的途径。 1.2 食物应放置在允许进食、喝水的休息区内 实验工作区内不得有食物、饮料,实验室工作区内的冰箱禁止存放食物。 1.3 实验工作区内禁止使用化妆品或进行化妆.但建议经常洗手的实验人员使用护手霜。 1.4 眼睛和面部的防护 处理腐蚀性或毒性物质时.须使用安全镜或其它保护眼睛和面部的防护用品。使用、处理能够通过粘膜和皮肤感染的试剂.或有可能发生试剂溅溢的情况时.必须佩带护目镜、面罩或面具式呼吸器。 1.5 服装和个人防护装备
除要求符合实验室工作需要的着装外.工作服应干净、整洁。所有人员在各自实验区内必须穿着长身的工作服 （白大褂）并佩戴其它防护装备如：手套、护目镜、披肩 或面罩等。个人防护服装应定期更换以保持清洁.遇被危险 物品严重污染.则应立即更换。 1.6 鞋 在各工作区内.应穿舒适、防滑、软底并能保护整个脚 面的鞋。在有可能发生液体溅溢的工作岗位.可加套一次性 防渗漏鞋套。 1.7 洗手 实验室工作人员在脱下手套后、离开实验室前、接触 患者前后、以及在进食或吸烟前都应该洗手。接触血液、 体液或其它污染物时.应立即洗手。 1.8 眼睛冲洗 眼睛若被血液或其它体液溅到.立即用大量的生理盐水 冲洗。 1.9 移液 所有实验室操作禁止用口移液具.应使用助吸器。 1.10 锐利物品 谨慎处理针头和碎玻璃等锐利物品。使用后的针具不 要折断、弯曲、破损、重复使用或用手重装在针管上的。 一次性注射器上的针头用后不要取下.锐利物品应立即放置 在不易刺破的容器内.在完全装满之前就应及时丢弃。 1.11 工作环境
05葡萄球菌属鉴定
标题：葡萄球菌属鉴定版本号：A修订号：O 文件编号：XXXX-XJ-SOP—005发布日期：2006年07月01日 生效日期：2006年07月01日发布部门：质量管理小组 编制人：审核人： 批准人（签章）：页码：第1页，共4页 葡萄球菌属鉴定 1、目的 对某一细菌的鉴定水平，可提供以下几方面的价值：（1）决定治病方法；（2）作流行病学研究；（3）了解细菌与感染的关系； （4）进行学术交流。 2、原理 根据葡萄球菌的形态染色、培养特性、生化反应、抗原构造等将葡萄球菌由属鉴定到具体种类。 3、标本 不同病种及不同检查目的而定，可为脓汁、渗透液、咽拭子、 血、脑脊液、食物、呕吐物、粪便等，置于无菌瓶内送检。 4、试剂及器材 革兰氏染液、培养皿、培养瓶、生化鉴定管、血浆、玻片、接种针（环）、酒精灯等。 5、鉴定程序 标题：葡萄球菌属鉴定版本号：A修订号：O 文件编号：XXXX-XJ-SOP—005发布日期：2006年07月01日 生效日期：2006年07月01日发布部门：质量管理小组 编制人：审核人： 批准人（签章）：页码：第2页，共4页 标本 涂片、染色 接种（视标本不同而定） 痰、脓汁、血、脑脊液粪便、呕吐物
渗出液、咽拭子增菌培养麦康凯或SS平皿 血平皿、麦康凯血平板 可凝菌落 纯培养 涂片、染色、触酶实验 葡萄状（G+）、触酶（+） 血浆凝固酶、葡萄糖甘露醇分解、高盐耐受实验甘露醇分解（需O2、甘露醇分解（—） 厌O2均+） 血浆凝固酶（+）、新生霉素（+）血浆凝固酶（—） 金黄色葡萄球菌 标题：葡萄球菌属鉴定版本号：A修订号：O 文件编号：XXXX-XJ-SOP—005发布日期：2006年07月01日 生效日期：2006年07月01日发布部门：质量管理小组 编制人：审核人： 批准人（签章）：页码：第3页，共4页 新生霉素 S R 表皮葡萄球菌腐生葡萄球菌 6、质量控制 每周进行一次葡萄球菌标准菌株的革兰氏染色、触酶、血浆凝固酶及新生霉素实验。 7、实验室解释及临床意义 1、葡萄球菌广泛存在于自然界，医院内葡萄球菌的存在成为 院内交叉感染的重要因素。 2、葡萄球菌是化脓性感染的重要病原菌。 3、葡萄球菌引起尿路感染的比例很大。 8、安全防护措施 在操作过程中，要穿好工作衣，戴好口罩、手套，必要时戴眼
实验_金黄色葡萄球菌的分离和鉴定
鸡蛋卵清芽孢杆菌的分离和鉴定 专业：11生技姓名：张媛梦学号：201111001086 摘要：芽孢杆菌，细菌的一科，能形成芽孢（内生孢子）的杆菌或球菌。它们对外界有害因子抵抗力强，分布广，存在于土壤、水、空气以及动物肠道等处。绝大多数是一个菌体仅形成一个芽孢芽孢位于菌体内,由核心、皮层、芽孢壳和外壁组成。核心是芽孢的原生质体，内含DNA、RNA、可能与DNA相联系的特异芽孢蛋白质以及合成蛋白质和产生能量的系统。 关键字：芽孢杆菌分离纯化革兰氏染色 1、实验原理 1.1芽孢杆菌的分离： 芽孢杆菌无湿状态可耐低温－60℃、耐高温+280℃，耐强酸、耐强碱、抗菌消毒、耐高氧（嗜氧繁殖）、耐低氧（厌氧繁殖）。所以，在微量的磺胺药物的环境中依然可以繁殖。芽孢是芽孢杆菌特有的结构，其主要特点是抗性强，对高湍、紫外线、干燥、辐射等有毒化学物质有较强的抵抗力。 1.2芽孢杆菌的革兰氏染色： 革兰氏染色法可将细菌分成革兰氏阳性（G+）和革兰氏阴性（G－）两种类型，这是由于这两种细菌细胞壁结构和组合的差异所决定。首先利用草酸铵结晶紫初染，所有细菌都会着上结晶紫的蓝紫色。然后利用卢戈氏碘液作为媒染剂处理，由于碘与结晶紫形成碘-结晶紫复合物，增强了染料在菌体的滞留能力。 之后用95%乙醇作为脱色剂进行处理时，两种细菌的脱色效果不同。革兰氏染色细菌细胞壁含糖量高，壁厚且脂质含量低，肽聚糖本身并不结合染料，但其所有的网孔结构可以滞留碘-结晶紫复合物滞留在细胞壁，菌体保持原有的蓝紫色。而革兰氏阴性细菌细胞壁肽聚糖含量低，壁薄且脂质含量高，乙醇处理时脂质溶解，细胞壁通透性增加原先滞留下来的碘-结晶紫复合物容易被洗脱下来，菌体变为无色，用复染剂染色后又复变为染色剂颜色。 2、实验材料和设备 2.1.培养基 牛肉膏蛋白胨培养基：牛肉膏0.75g，蛋白胨2.5g，氯化钠1.25g，琼脂3.75g，蒸馏水250ml，PH7.0-7.2 121℃灭菌20min后倒平板。 2.2试剂 磺胺类药物、革兰氏染液 2.3仪器和设备
感染处理流程图
附件34-1 手术部位感染监测规范及操作流程 涂片白细胞- 涂片白细胞+ 阴性 阳性 登记线索：交班本、手术记录、 医嘱单、麻醉单 发热T ＞38℃；切口发红，有分泌物；切口敷料有脓液、脓血渗透；提前拆线引流；术后24小时后仍用抗菌药物；医生诊断切口感染（临床诊断） 标本采样（涂片、培养） 住院期间无感染症状 手术结束后，医院感染监控人员到病房 填写手术病人登记表，观察切口情况，查阅病历、询问医师，观察换药情况 术后随访30天（有植入物者 手术随访1年） 目标监测人群-接受以下手术的住院患者： 1.胆囊切除或和胆管手术 2.结肠、直肠切除术 3.阑尾切除术 4.疝手术 5.乳房切除术 6.剖宫产等 7.子宫切除术附件切除术 8.全髋置换术 未找到病原菌 找到病原菌 无切口感染 随访结果 a ．1～2位医院感染监控专职人员每日安排固定时间到目标监测病房收集登记数据，与科室负责监测工作的医护人员进行交流，并密切观察与感染有关的因素：体温、敷料、切口外观、应用抗菌药物、切口引流。 b ．目标监测科室负责护士（每个目标科室培养3位）协助提供手术患者的情况、手术数据的登记、患者入出院宣教。 c.患者入院时登记出院后的联系方式，手术后填写登记表时核对电话号码并 告知出院后注意事项，手术后一月左右电话询问切口愈合情况。 d.随时干预监测中存在的问题，对出院病历资料进行完善。 怀疑感染 实验室诊断 做好记录 通知医院感染 监控专职人员 到医院就诊
附件34-2 呼吸机相关肺炎监测流程 1、住ICU 超过48小时，转出ICU48h 小时内 2、有呼吸道感染症状，如咳嗽、咳脓痰、痰多、肺部听诊有罗音 3、有全身感染的症状，如体温上升，白细胞上升或下降 临床医师填写相关检查和检验申请，如痰培养、胸部X 线检查、血常规 或血培养，并做好病程记录。ICU 护士填写ICU 患者日志 痰培养采集方法：ICU 护士戴无菌手套，按吸痰方法将痰吸入无菌集痰器内，加盖送检，或是按照吸痰法无菌抽吸痰液送检 临床医师根据患者症状、体征、实验室报告及胸部X 线检查结果判断是否为呼吸机相关肺炎（VAP ） 每3个月小结，得出呼吸机使用率及其相关肺炎感染率，找出不足及时 改正，并召开座谈会与科室进行交流，给予合理建议 如果是VAP ，根据微生物学监测结果选择用抗菌药物，并通知医院感染监控专职人员，做好病程记录 1～2位医院感染监控专职人员每周2～3次到ICU 收集登记数据，同时观 察与感染有关的因素 住进ICU 使用了呼吸机的患者
葡萄球菌属
葡萄球菌属 金黄色葡萄球菌 形态染色：呈圆形或椭圆形，无鞭毛，无芽孢，除了少数菌株外不能形成荚膜。为革兰阳性球菌。 培养特性：兼性厌氧。对营养要求不高。最适生长温度：35-37℃，最适pH：7.4-7.6。 在普通培养基上形成2-3mm大小，呈金黄色，白色，柠檬色等不透明圆形凸起的菌落。 在血平板上菌落较大，致病性葡萄球菌可形成透明的β-溶血环。 耐盐，能在含10%-15%NaCl的培养基上生长。 在20%-30%CO2环境中，有利于其毒素的产生。 生化反应：葡萄球菌生化反应活泼： 1.触酶（+） 2.能分解葡萄糖，麦芽糖，乳糖和蔗糖，产酸不产气。 3.能分解氨基酸和蛋白质。 4.分解甘露醇。 5.液化明胶。 6.产生血浆凝固酶。 7.硝酸盐还原（+） 抗原构造：1.葡萄球菌A蛋白 2.多糖抗原 致病性：酶类：1.血浆凝固酶：结合凝固酶结合于菌体表面，能与血浆中的纤维蛋白原交联使菌体快速凝集。游离凝固酶由细菌分泌至体外，可使血浆中的纤维蛋白原变成纤维蛋白而是血浆凝固。 2.耐热核酸酶（TN）:能耐受100℃，15分钟加热，水解DNA和RNA 。 3.透明质酸酶（HAase）:能水解细胞外成分透明质酸，协助细菌在组织内传播扩散。 4.磷酸酶等。 毒素：致病性葡萄球菌能产生溶血毒素，为外毒素。 葡萄球菌产生的杀白细胞素（PVL）能损伤中性粒和巨噬细胞，形成脓液，导致组织坏死等。金黄色葡萄球菌根据其噬菌体可分为三群：噬菌体Ⅰ群可产生毒性休克综合征毒素。 噬菌体Ⅱ群产生表皮脱落样毒素，能引起人类烫伤样皮肤综合征。噬菌体Ⅲ群可产生耐热的肠毒素，能引起食物中毒，表现为急性肠胃炎。 致病类型：1.化脓性疾病：如皮肤化脓性感染，器官化脓性感染如气管炎，肺炎，心内膜炎等，以及全身感染如败血症及脓毒血症等。 2.毒素性疾病： 3.医院感染：主要为凝固酶阴性葡萄球菌产生，如表皮葡萄球菌引起人工瓣膜心内膜炎，静脉导管感染和人工关节感染等。 耐药性：对β-内酰胺类抗生素耐药。
细菌鉴定流程
细菌鉴定流程 细菌鉴定 细菌形态学鉴定16S rDNA 鉴定生理生化鉴定 一、细菌形态学鉴定 1.从-80??冰箱中取出菌株放4??复苏，轻柔混匀后用接种环接一环 菌液在培养基平板上划线活化，根据菌株来源选择适宜的培养基。 2.放入培养箱倒置培养，实验室一般采用28??培养，特殊菌株依据 该菌最适条件（时间、温度）培养24-48h。 3. 纯化：从活化培养基平板上挑取单菌落继续划板培养。 4. 观察记录菌落形态特征：大小（mm）、形状、干湿、透明度、颜色、边缘整齐还是，，，，，，， 形状干湿透明度颜色边缘细菌大小 （mm） 注意事项： ①接种划线应在酒精灯旁边操作 ②培养时应倒置培养，防止污染
二、革兰氏染色 1.涂片固定 将纯化后的菌株进行革兰氏染色，滴一滴生理盐水于载玻片上，无菌条件下用接种环挑取少量菌落均匀涂布水滴中，使其自然干燥，菌面向上，经火焰固定。 注意事项：菌液涂片时不可过于浓厚，干燥、固定。固定时通过火焰1~2次即可，不可过热，以载玻片不烫手为宜。 2.染色 一般包括初染、没染、脱色、复染等四个步骤，具体操作方法是：（1）加上结晶紫后，染色1分钟，水洗。 （2）加上碘液染色1分钟，水洗。 （3）加上95%酒精，摇动玻片，根据涂片厚度，脱色约20~60秒，水洗，吸去水分。 （4）加上蕃红后，染色1分钟，水洗。 （5）吸干或在空气中晾干后，油镜镜检。 3.结果观察：革兰氏阴性菌呈红色，革兰氏阳性菌呈紫色。以均匀 分散开的细菌的革兰氏染色反应为准，过于密集的细菌，都常呈现假阳性。 注意事项： ①标本涂片不能太厚，严格按操作要求进行。若涂片较厚，应延长脱色时间，直至不再出现紫色为止。 ②玻片通过火焰温度不能太高。
病原菌的分离鉴定
竭诚为您提供优质文档/双击可除 病原菌的分离鉴定 篇一：常见病原菌采样分离过程 金黄色葡萄球菌采样分离过程 1、样本采集及初步分离 （1）奶样的采集： 采集有乳房炎和隐形乳房炎症状较明显的奶牛，消毒挤奶人手、奶牛乳头，弃2-3把乳，以乳样收集管无菌收集每个乳区乳样10-30mL，编好编号，4个乳区按：左前LF、左后Lh、右前RF、右后Rh编号，采集后尽快返回实验室，如不能尽快返回，应放在低温环境中带回。 （2）乳房皮肤拭子 用0.5mL肉汤润湿的消毒棉球拭子从乳房皮肤檫拭到乳头顶端，如果乳房土较多的话先檫掉土。拭子放入5mL离心管中，再放入冰盒中，迅速带回实验室处理。 （3）鼻腔拭子 用消毒棉球拭子插入动物鼻腔中，取出后放到盛有 0.5mL肉汤的5mL离心管中，放入冰盒中，迅速带回实验室
处理。 菌种的初步分离 首次分离时，用接种环蘸取样品在科玛嘉金黄色葡萄球菌显色平板上涂布接种，37℃，16-18小时培养后，从显色平板上挑取红色的单菌落，用脑心浸液（bhI）肉汤35℃培养18小时左右。 需要注意的是金葡菌初次分离时，接种显色培养基后培养时间最好不超过18h进行观察，因为超过24h后所有的葡萄球菌属细菌皆会导致显色培养基变色，进而出现假阳性。 2、菌种的保存 2mL灭菌离心管中加入400μL新鲜菌液+200μL60%灭菌甘油，-80℃（长期）或-20℃（临时）冻存。 3、菌种的复苏 如需再次纯化，或进行进一步实验，可将甘油保种的菌液在显色平板或哥伦比亚血琼脂平板上划线培养，或者将保种的菌液直接接入液体培养基培养。 肠球菌采样分离过程 1、样本采集及初步分离 （1）肛门拭子 以灭菌长棉签采集猪肛门拭子或蘸取新鲜粪便，棉拭子应以捻转方式插入肛门4-5厘米深，取出后放入1mL营养肉汤的灭菌离心管中，如不能立即接种，应放于低温环境中迅