提取酵母细胞壁中_D_葡聚糖的新方法

酵母蔗糖酶的提取工艺

酵母蔗糖酶的提取工艺 摘要 蔗糖酶是一种水解酶, 广泛存在于动物、植物、微生物等各种生物体内。它可以不可逆的催化蔗糖水解为D-葡萄糖和D-果糖，为微生物的生长提供碳源和能源。 采用甲苯自溶法、冻融法、SDS抽提法3种方法从酵母中提取蔗糖酶[1]，冻融法和SDS 抽提法的提取效率远高于传统的甲苯自溶法。其中冻融法的效率最高（纯化倍数比活力与总活力），加之其操作简便，更适合于酵母蔗糖酶大规模的制备提取。 比较了乙醇分级沉淀、硫酸铵分级沉淀对于冻融法得到的粗提物的沉淀效果，结果表明：50%(w/w)乙醇分级沉淀效果较好（比活力与总活力），乙醇分级沉淀所得蔗糖酶经DEAE-Sepharose 离子交换层析纯化后，制得高纯度的酵母蔗糖酶（比活力与总活力）。纯化倍数为16.14倍，比活性为947.805U/mg，回收率为51.6%。 蔗糖酶的酶促动力学性质表明，蔗糖酶的最适PH值为4.5，最适温度为50℃，酶的特征米氏常数Km值为13.8mmol/L，最大反应速度Vmax为5.98ug/min。 关键词：酵母；蔗糖酶；提取；纯化 Study on Purification of Invertase from Yeast Abstract Sucrase is widespread in prokaryotes and eukaryotes .Sucrase catalyzes the irreversible hydrolysis of sucrose into glucose and fructose.the mainfroms of carbon and energy supplies in microorganism growth and development. This paper used three methods to extract invertase from yeast,which included in this manuscript, three different extraction method breaking cells by adding methylbenzene,frost grinding,and adding SDS for extracting invertase from yeast were investigated.Then the purified invertase was obtained by precipitatation with 50% ethyl alcohol、sequential ammonium sulpate precipitation and DEAE-Sepharose lon-exchange chromatography.The purified sucrase was characterized by SDS-PAGE.The results showed all three methods had both advantages and disadvantages.The invertase extracted by adding SDS and frost grinding had much more total activity than that of extracted by adding methylbenzene.A highest total invertase activity was found in the forst grinding,and it was a convent and economical method for commercial production of invertase from yeast. The results of our study were followed: 1、Purification of invertase from yeast The specific activity was 947.805U/mg,purification fold was 32.28.The activity recovery of sucrase was 51.6%. 2、Properties of sucrase The kinetic characters of the enzyme have been studied.The optimum PH and optimum temperature for the enzyme are PH4.5 and 50℃.Km is 21mmol/Land Vmax is 6.57ug/min. Key words : yeast;invertase;extraction;purification 第一部分文献综述

Protein extraction from yeast(酵母蛋白质提取)

Protein extraction from yeast 1. Glass beads lysis Conzelmann A, Riezman H, Desponds C, Bron C. 1988. A major 125 kd membraneglycoprotein of Saccharomyces cerevisiae is attached to the lipid bilayer through aninositol-containg phospholipid. EMBO J 7: 2233± 2240. 2. rapid protein extraction in optimized SDS sample buffer HorwathA,RiezmanH. 1994.RapidproteinextractionfromSaccharomycescerevisiae. Yeast 10: 1305± 1310. Sample Buffer: 0.06M Tris-HCl, pH 6.8 10% (v/v) glycerol 2% (w/v) SDS 5% (v/v) 2-mercaptoethanol 0.0025% (w/v) bromophenol blue10 ml 0.6 ml 1M Tris 6.8

2 ml 50% glycerol 2 ml 10% SDS 0.5 ml 2-mercaptoethanol 0.1 ml Sat. Bromphenol blue 4.9 ml H2O Make sample Buffer fresh before use. Can store buffer frozen at—20 degrees for ~6 months. 1. Grow cells overnight (~1x107cells/ml; A600 = 0.7) and collect 1.5 ml cells (adjustvolumes according to cell density of cultures) in 1.5 ml microfuge tube (1 minute, 14000xg).It is important not to grow the cells to a high density. 10 microliters of a saturated overnight culture in YPD innoculated to 5 ml SD + essentialamino acids for ~16 hrs gives A600 of 0.5 to 1.0 for wild-type cells grown at 30 degrees150 microliters of YPD saturated culture diluted to 5 ml YPD and grown for ~5 hrs at 30degrees gives an A600 of ~ 0.8 for wild-type cells. 2. Wash cells 1X with water and collect again by centrifugation. 3. Resuspend cells in 100 microliters sample buffer. 4. Heat at 95 deg C for 5 minutes. 5. Centrifuge 14000xg for 5 minutes. Load 15 microliters per lane on an SDS PAG

β葡聚糖提取工艺

β-葡聚糖保健食品批文申报研发报告30 产品研发报告;一.产品的研发思路;β-葡聚糖就是禾谷类植物籽粒胚乳与糊粉层细胞壁的主;燕麦作为世界8大粮食作物之一,也就是我国北方各省的;目前,燕麦β-葡聚糖的结构已被确认,它就是由β(1;β-葡聚糖在增强免疫力方面的作用已经被大量学者实;此外,从燕麦中提取的β-葡聚糖目前已被证实在 以下;1.抑制肿瘤,防止癌变;2.降血脂;3.降血糖;目前,增强免疫力类功能食品就是 产品研发报告 一. 产品的研发思路 β-葡聚糖就是禾谷类植物籽粒胚乳与糊粉层细胞壁的主要成分。近20年来,围绕着从禾谷类植物中提取的β-葡聚糖,国内外学者进行了大量的的人体与动物试验,发现其在增强免疫力、加快人体免疫反应、降血脂及血清胆固醇、控制由胰岛素引起的糖尿病等方面均具有良好的效果。 燕麦作为世界8大粮食作物之一,也就是我国北方各省的重要的小杂粮作物。医学研究证明,长期服用燕麦,有增强免疫力、降血脂、降血糖与减少心血管疾病的作用。而燕麦的保健功能,都归功于其中的主要功效成分,可溶性膳食纤维——β-葡聚糖。 目前,燕麦β-葡聚糖的结构已被确认,它就是由β(1-3), β(1-4)糖苷键连接组成的线性β-葡聚糖,相对分子质量为2、62×106 。

β-葡聚糖在增强免疫力方面的作用已经被大量学者实验并验证。早在1982年,图伦大学医学院研究表明,以β-葡聚糖免疫的小白鼠在经过高浓度的大肠杆菌注射后数小时内,不论死亡率还就是血液中细菌浓度都较未处理者低得多,证明β-葡聚糖的确具有免疫保护功能。上海第三军医大学郭波等进行的动物实验,结果证明,β-葡聚糖可明显提高小鼠的特异性IgG、IgG2a、IgG1抗体应答,具有促进抗体产生的作用[1]。加拿大的YUN CH等用感染了艾美球虫的大鼠实验同样证明,燕麦中提取的β-葡聚糖(oat-glucan)可明显提高大鼠血清中总IgG, IgG1, IgG2a, IgM 与 IgA抗体水平【2】。在后续研究中,发现从燕麦中提取的β-葡聚糖可明显提高对细菌及寄生感染等的抵抗力【3】。Estrada A等研究发现燕麦β-葡聚糖可促进腹膜巨噬细胞IL-1、TNF-alpha等细胞免疫因子的分泌,对脾细胞也具有促进IL-2,、IFN-gamma 、IL-4等细胞免疫因子分泌的作用【4】。对于燕麦β-葡聚糖增强免疫力方面的机理,目前主要认为, 燕麦β－葡聚糖与体内的巨噬细胞、嗜中性细胞表面的受体(CR3)结合,从而刺激免疫细胞,提高其活力,达到增强机体免疫力的效果,J、 M、 Davis等人的研究也确认了燕麦β－葡聚糖增强巨噬细胞等活力的作用【5】。 此外,从燕麦中提取的β-葡聚糖目前已被证实在以下方面具有良好的作用: 1.抑制肿瘤,防止癌变。燕麦中的β-葡聚糖可以刺激体内巨噬细胞、嗜中性细胞,提高活力,增强对癌细胞毒素的抵抗能力。美国的一项大鼠实验证明,在大鼠灌喂了燕麦β-葡聚糖10天后,静脉注射2 x 105的同源的B16黑素瘤细胞,之后继续灌喂14天。检测结果发现,大鼠的肺肿瘤病灶明显减少,同时巨噬细胞的细胞毒作用(macrophage cytotoxicity)则也有所增强。另外,作为一种水溶性膳食纤维,燕麦β-葡聚糖在肠内促进肠管蠕动,缩短了废弃物通过肠道的时间, 减少了肠内致癌物对肠管的污染, 达到防癌作用【6－8】。

实验3 酵母蔗糖酶的制备

实验3 酵母蔗糖酶的制备 一、实验目的 1、学习、掌握提取啤酒酵母中的蔗糖酶 2、学习用紫外分光光度法测定蛋白质含量 二、实验原理 酵母中得到，特异地催化非还原糖中的α—呋喃果糖苷键水解，具有相对专一性。不仅能催化蔗糖水解生成葡萄糖和果糖，也能催化棉子糖水解，生成密二糖和果糖。 啤酒酵母中含有大量的蔗糖酶，通过研磨破细胞壁，使酶游离出来，用水萃取酶，然后用有机溶剂沉淀酶蛋白得到粗制品，还可用柱层折进一步纯化得到精制品。 三、实验器材 1、试剂：二氧化硅、去离子水(使用前冷至4℃左右)、冰块、食盐、1mol/L乙酸、95％乙醇。 2、材料：啤酒酵母、 3、仪器：研体、恒温水浴锅、高速冷冻离心机。 四、实验步骤 1 研磨水提取 (1)准备一个冰浴，将研钵稳妥地放入冰浴中。 (2)称取1g啤酒醉母和适量(约5mg)二氧化硅一起放入研钵中，二氧化硅要预先研细。 (3)缓慢加入预冷的30m1去离子水．每次加2m1左右，边加边研磨．至少用30分钟，至酵母细胞大部分研碎，将蔗糖酶充分转入水相。 (4) 将混合物转入离心管中，平衡后．用高速冷冻离心机离心，4℃，10000r／min，离心15min。 (5) 用滴管小心地取出水相，转入另一个清洁的离心管中，4℃，10000r／min，离心15min。 (6) 将上清液转入量筒，量出体积。用广泛pH试纸检查上清液PH，用lmol/L乙酸将pH调至5.0，称为“级分I”。（级分I总共量了28ml）留出5m1测定酶活力及蛋白含量，剩余部分转入清洁离心管中。 2 热处理和乙醇沉淀 (1)预先将恒温水浴调到50℃，将盛有级分I的离心管稳妥地放入水浴中，50℃下保温30min,在保温过程中不断轻摇离心管。 (2)取出离心管，于冰浴中迅速冷却，4℃．10000r／min，离心10min 。

啤酒酵母的蔗糖酶的提取提纯及测定

浙江工业大学药学院生物化学实验论文 2013 年12 月13日

啤酒酵母蔗糖酶的提取、提纯及测定研究论文 摘要：为了了解蔗糖酶的性质，我们用啤酒酵母做了一系列的实验，它们主要是以下内容：（1），蔗糖酶的提取与初提纯：a、先将酵母自溶，再两次离心得初提液A；b、接着调PH并加热、离心得热提取液B；c、用乙醇沉淀离心得提取液C。（2），蔗糖酶的纯化—Q Sepharose 柱沉析法：先装柱，再安装盐度梯度发生器与柱的平衡，接着加样并洗脱，最后处理结果与交换剂的再生并得到提取液D。（3），蔗糖酶活力的测定：第一人做葡萄糖标曲，第二人测定各提取液反应后的值，得各提取液的酶活力与回收率。（4），蔗糖酶蛋白质含量的测定及活力OD 540 计算：遇上一个实验相反，第二人做标曲，第一个人测与各提取液相对应的OD 660值，再对比得到各提取液的总蛋白、比活力、蛋白回收率、酶活回收率与纯化倍数。(5),微量凯氏定氮法（以B为样品）：先将样品B消化得消化液，洗涤定氮仪，再将消化液蒸馏，用HCl滴定馏出液，计算蛋白质含量。（6），SDS-PAGE测定蛋白质的相对分子质量：首先制备分离胶并使之凝固，再制备浓缩胶使之在分离胶之上凝固，加处理后的样品和标准液，接着电泳，最后染色和脱色，确定样品相对分子质量。 关键词：蔗糖酶；蛋白质；提取；纯化；酶活力测定；Folin-酚试剂；微量凯式定氮；SDS-聚丙烯胺凝胶;标曲；电泳； 正文： 文献综述 蔗糖酶(Sucrase,EC 3.2.1.26)又称转化酶(Invertase)，可作用于β21,2糖苷键,将蔗糖水解为D2葡萄糖和D2果糖，广泛存在于动植物和微生物中，主要从酵母中得到。蔗糖酶的最适温度为45℃-50℃，最适ph为4.0-4.5. 实验原理、试剂与器材、操作方法、结果与分析、注意事项、认识与体会 1 蔗糖酶的提取及初步提纯 1.1实验原理 酵母中含有蔗糖酶，而蔗糖酶属于胞内酶，所以常将细胞壁破碎后进行提取。酶的生产方法有生物提取法、微生物发酵法及化学合成法，细胞破碎又有化学裂解法、低渗溶液法等，本法属于生物提取法、菌体自溶的方法。经破碎提取的蔗糖酶液再经热提取、乙醇沉淀提取，使蔗糖酶得到初步的提纯。 1.2 试剂与器材 1.2.1试剂

酵母蔗糖酶提取方法的研究

酵母蔗糖酶提取方法的研究 生命科学学院 10级生物科学类李倩 10197022 指导老师：陶芳 摘要：采用自溶法从酵母中提取蔗糖酶，通过抽提、30﹪乙醇分级、50﹪乙醇分级和透析，同时测定各步的蛋白质浓度和酶活，并据此计算比活、回收率和纯化倍数。 关键词：蔗糖酶提取自溶法 Research on the Extraction Method of Yeast Sucrose School of Life Sciences，Biological Sciences of grade 2, li Qian, 10197022 Abstract:The autolysis extract from yeast invertase,through extraction,30 ethanol fractionation and dialysis,simultaneous determination of each step of concertration of protein and enzyme avtivity,and then calculate the radio of live,recovery and purification. Key words:yeast；extraction；autolysis method 前言：蔗糖酶（Sucrase,EC 3.2.1.26)又称转化酶（Invertase),1928年Dumas等首先指出酵母菌发酵蔗糖时必须有这种酶的存在，蔗糖在蔗糖酶的作用下，水解为葡萄糖和果糖，还原力增加，又由于生成果糖，甜度增加。 按水解蔗糖的方式，蔗糖酶可分为从果糖末端切开蔗糖的β-D-呋喃果糖苷酶（β-D-frutofuranosidases,EC 3.2.1.26)和从葡萄糖末端切开蔗糖的α-D-葡萄糖苷酶（α-D-glucosidases,EC 3.2.1.20)。前者存在于酵母中，后者存在于霉菌中。工业上多从酵

酵母蛋白质提取对照品

酵母蛋白质提取对照品 酵母蛋白概述 酵母蛋白是存在于天然酵母中的一种优质完全蛋白。酵母是人类利用最早、最多、最广泛的一种单细胞微生物，在真菌分类系统中属于子囊菌纲、担子菌与半知菌类。酵母自古以来就被人们应用于日常生活中，如发面、酿酒、助消化等。 酵母的营养价值 酵母也是天然的营养来源和营养载体，其营养成分具有“三低四优”的特点，即低脂、低糖、不含胆固醇，富含优质完全蛋白质、完整的B族维生素、以生命结合态形式存在的多种矿物质和功能膳食纤维。 优点 酵母是补充优质蛋白质的最好来源。 1、酵母中含有丰富的蛋白质，高达40%～60%。 2、酵母中的蛋白质的消化率可达96%，净利用率达59%。 3、酵母含有完整的氨基酸群，包括人体必需的8种氨基酸，特别是在谷物蛋白中含量较少的赖氨酸，在酵母中含量较高。此外，酵母中的氨基酸比例接近联合国粮农组织(FAO)推荐的理想氨基酸组成值，故其营养价值较高。 4、酵母中还含有一些功能蛋白，例如金属硫蛋白（简称MT），它具有广泛的生物功能，在体内主要参与微量元素的贮存、运输和代谢、拮抗电离辐射、清除羟基自由基及重金属解毒等多种作用。酵母还含有丰富的助消化酶（酵素），能帮助日常饮食中的、酵母本身的、以及外源补充的营养更好地消化、吸收和利用。 5、酵母蛋白是酵母本身所含有的，而非多种蛋白来源的简单混合。 如何选择含有蛋白质的食物 选择蛋白质食物首先应考虑蛋白质含量的多少。如果食物中蛋白质含量太少，即使营养价值很高，也不能满足人体需要。在常见的每100克食物中，肉类含蛋白质10-20克，鱼类含15-20克，全蛋含13-15克，豆类含20-30克，谷类含8-12克，蔬菜、水果含1-2克。判断蛋白质的优劣主要有三点：一是人体消化吸收的程度，吸收得越彻底，其营养价值就越高；二是人体吸收后的利用程度，生物利用度（即蛋白质的生理价值）越高，其营养价值也越高；三是所含的必需氨基酸是否丰富、种类是否齐全、比例是否适当，种类齐全、数量充足、比例适当的完全蛋白质质量最高。

从活化酵母中提取葡聚糖的工艺研究

从活化酵母中提取β-葡聚糖的工艺研究 ［摘要］笔者采用酸法、碱法和酸碱融合法提取酵母细胞壁中的β- 葡聚糖，对得率和纯度进行对比分析后，发现用碱法浸提工艺从破壁酵母中提取碱不溶性β- 葡聚糖效率最高。通过正交试验得出最佳提取条件为：在75°C 条件下、0.75mol/L 的碱液处理15min。不同脱水和干燥条件的对比实验表明：脱水和干燥条件影响产品的色泽；溶剂和水分蒸发得越快，产品最终含水率越低，产品颜色越白。 ［关键词］酵母细胞壁β- 葡聚糖碱法酸法酸碱法 0.引言 β- 葡聚糖作为活性多糖不仅具有免疫促进作用，而且具有抗癌、 抗肿瘤、提高抗病能力和降低胆固醇等生理活性，是一类研究较多的活 性多糖。由于其具有高粘性、高持水性和热稳定性，以及制备工艺简单 等方面的优点，在食品、医学、化妆品、造纸和建筑材料等行业得以广泛 应用。 在国内外相关研究报道中，对于β-葡聚糖的制备，有酸法，碱法， 以及酸碱、有机溶剂和酶相结合的方法。其中，碱法由于其浸提工艺简 单，产品纯度高，是从废弃酵母中有效提取高纯度β-葡聚糖的理想途 径。 本文在对比酸法、碱法和酸碱法的基础上，主要研究用碱法工艺提 取β- 葡聚糖的最佳条件，并分析不同提取条件对产物得率和纯度的 影响，以及干燥和脱水条件的选择对结果的影响，为啤酒生产中的废酵 母泥利用提供技术参考。 1.材料与方法 1.1 材料和试剂 酵母粉，乙酸，NaOH, 无水乙醇，无水乙醚，硫酸等，均为分析纯。 1.2 方法 1.2.1 酵母破壁 盐法破壁：在酵母菌体浓度 10％，氯化钠浓度 2.5％，破壁时间 2.5h，破壁温度70℃的实验条件下进行破壁。 1.2.2 酸法 配制 1.0mol/L 醋酸溶液 60mL，加入酵母粉 3g，在70℃下水浴 1- 2 小时。3000r/min 离心 15min,沉淀物水洗 2 次，然后用无水乙醇洗涤，无 水乙醚脱水，在37℃条件下干燥至恒重。 1.2.3 碱法 配制 1.0mol/L NaOH 溶液 60mL，加入酵母粉 3g，在70℃下水浴 1- 2 小时。3000r/min 离心 15min,沉淀物水洗 2 次，然后用无水乙醇洗 涤，无水乙醚脱水，在37℃条件下干燥至恒重。 1.2.4 酸碱法 4g 酵母粉加适量水制成酵母泥，加入 200mL 1mol/L NaOH 在90℃ 下，作用 2h 后 3000r/min 离心 15min，水洗 2 遍，加入 4%的乙酸溶液 50mL 室温处理 2h，3000r/min 离心 10min 后，用无水乙醇和无水乙醚分 别脱水两次，在37℃下干燥 12h 至恒重。 1.2.5 碱法分离提取的最佳实验条件

酵母蛋白快速提取试剂盒使用说明

酵?母蛋?白质快速微量提取试剂盒 Yeast Protein Miniprep Kit 常温运输、4℃保存（溶液B成分二需-20℃保存），有效一年。 自备酵母培养基 产品及特点 本产品用于快速提取微量酵母蛋白用于SDS-PAGE凝胶电泳和Western印迹分析。本产品结合玻璃珠破壁和化学法破壁两种方法，适合于各种形态的 各种酵母材料。本产品的其主要特点是： 1.破壁效率高，能达到80-90%。 2.可以处理各种酵母样品。 3.操作简单，得到的裂解液可以直接用于SDS-PAGE和Western印迹分 析。 规格及成分成份 50次包装 溶液A 100 mL 溶液B成分一 50 mL 溶液B成分二 1.5 g 玻璃珠，400μL 5 g 使用方法准备工作：将溶液B成分二（干粉）全部加到50mL溶液B成分一中，充分摇晃使之全部溶解，成为溶液B，然后分装成小分（体积根据每次实验的样 品数决定）并放-20℃长期保存。

1、 将酵母细胞接种到5mL YPD 培养基中，30℃摇晃（250rpm/分钟）过 夜培养使其OD600达到0.5～2.0。 2、 把酵母细胞培养物转到装有2mL 预冷溶液A 的10-15 mL 离心管中， 混匀。 3、 4℃ 5000g 离心5分钟沉淀酵母细胞，吸出上清液。 4、 用30μL 溶液B 悬浮酵母细胞，并快速转移到1.5mL 塑料离心管中。 5、 100℃下保温3分钟，使蛋白酶失活，样品存放于-20℃。 6、 加入0.1g 的玻璃珠。 7、 在旋涡振荡器上剧烈振荡混合2-10分钟。 8、 加入70 μl 溶液B，稍加振荡，置100℃保温1分钟。 9、 取5-20μl 抽提液上样直接进行SDS-PAGE 凝胶电泳。 关联推荐 4X 蛋白上样缓冲液 BCA 蛋白检测试剂盒 蛋白marker ECL 发光检测液

β 葡聚糖 提取工艺

β-葡聚糖保健食品批文申报研发报告 30 产品研发报告；一．产品的研发思路；β-葡聚糖是禾谷类植物籽粒胚乳和糊粉层细胞壁的主；燕麦作为世界8大粮食作物之一，也是我国北方各省的；目前,燕麦β-葡聚糖的结构已被确认,它是由β（1；β-葡聚糖在增强免疫力方面的作用已经被大量学者实；此外，从燕麦中提取的β-葡聚糖目前已被证实在以下；1．抑制肿瘤,防止癌变；2．降血脂；3．降血糖；目前，增强免疫力类功能食品是产品研发报告 一．产品的研发思路 β-葡聚糖是禾谷类植物籽粒胚乳和糊粉层细胞壁的主要成分。近20年来，围绕着从禾谷类植物中提取的β-葡聚糖，国内外学者进行了大量的的人体和动物试验，发现其在增强免疫力、加快人体免疫反应、降血脂及血清胆固醇、控制由胰岛素引起的糖尿病等方面均具有良好的效果。 燕麦作为世界8大粮食作物之一，也是我国北方各省的重要的小杂粮作物。医学研究证明，长期服用燕麦，有增强免疫力、降血脂、降血糖和减少心血管疾病的作用。而燕麦的保健功能，都归功于其中的主要功效成分，可溶性膳食纤维——β-葡聚糖。 目前,燕麦β-葡聚糖的结构已被确认,它是由β（1-3）, β（1-4）糖苷键连接组成的线性β-葡聚糖，相对分子质量为2.62×106 。

β-葡聚糖在增强免疫力方面的作用已经被大量学者实验并验证。早在1982年,图伦大学医学院研究表明，以β-葡聚糖免疫的小白鼠在经过高浓度的大肠杆菌注射后数小时内，不论死亡率还是血液中细菌浓度都较未处理者低得多，证明β-葡聚糖的确具有免疫保护功能。上海第三军医大学郭波等进行的动物实验，结果证明，β-葡聚糖可明显提高小鼠的特异性IgG、IgG2a、IgG1抗体应答，具有促进抗体产生的作用[1]。加拿大的YUN CH等用感染了艾美球虫的大鼠实验同样证明，燕麦中提取的β-葡聚糖（oat-glucan）可明显提高大鼠血清中总IgG, IgG1, IgG2a, Ig M 和 IgA抗体水平【2】。在后续研究中，发现从燕麦中提取的β-葡聚糖可明显提高对细菌及寄生感染等的抵抗力【3】。Estrada A等研究发现燕麦β-葡聚糖可促进腹膜巨噬细胞IL-1、TNF-alpha等细胞免疫因子的分泌，对脾细胞也具有促进IL -2,、IFN-gamma 、IL-4等细胞免疫因子分泌的作用【4】。对于燕麦β-葡聚糖增强免疫力方面的机理,目前主要认为, 燕麦β－葡聚糖与体内的巨噬细胞、嗜中性细胞表面的受体（CR3）结合,从而刺激免疫细胞,提高其活力,达到增强机体免疫力的效果，J. M. Davis等人的研究也确认了燕麦β－葡聚糖增强巨噬细胞等活力的作用【5】。 此外，从燕麦中提取的β-葡聚糖目前已被证实在以下方面具有良好的作用：1．抑制肿瘤,防止癌变。燕麦中的β-葡聚糖可以刺激体内巨噬细胞、嗜中性细胞，提高活力，增强对癌细胞毒素的抵抗能力。美国的一项大鼠实验证明，在大鼠灌喂了燕麦β-葡聚糖10天后，静脉注射2 x 105的同源的B16黑素瘤细胞，之后继续灌喂14天。检测结果发现，大鼠的肺肿瘤病灶明显减少，同时巨噬细胞的细胞毒作用（macrophage cytotoxicity）则也有所增强。另外，作为一种水溶性膳食

蛋白的酵母双杂交操作手册大全

蛋白的酵母双杂交实验 ——以钓饵蛋白筛选cDNA 文库研究蛋白相互作用 第一部分 系统简介 1. 实验原理 蛋白的酵母双杂交实验是以酵母的遗传分析为基础，研究反式作用因子之间的相互作用 对真核基因转录调控影响的实验。很早就已知道，转录活化蛋白可以和DNA 上特异的序列结合而启动相应基因的转录反应。这种DNA 结合与转录激活的功能是由转录活化蛋白上两个相互独立的结构域即DNA 结合结构域(Binding Domain, BD)和转录活化结构域(Activation Domain, AD)分别来完成的，并且这两个结构域对于基因的转录活化都是必须的。目前酵母双杂交实验采用的系统有LexA 系统和Gal4系统两种。在LexA 系统中，DNA 结合结构域由一个完整的原核蛋白LexA 构成，转录活化结构域则由一个88个氨基酸的酸性的大肠杆菌多肽B42构成，它在酵母中可以活化基因的转录; 在 Gal4系统中，BD 和AD 分别由Gal4蛋白上不同的两个结构域(1-147aa 与768-881aa)构成。在利用GAL4系统筛选cDNA 文库或研究蛋白间的相互作用时，DNA 结合结构域与靶蛋白即“诱饵”相结合，转录活化结构域与文库蛋白或要验证的蛋白相结合。一般情况下，单独的BD 可以与GAL4上游活化序列（GAL UAS ）结合但不能引起转录，单独的AD 则不能与GAL UAS 结合，只有当BD 与AD 分别表达的融合蛋白由于相互作用而导致两者在空间上相互靠近时，BD 与AD 才能与GAL UAS 结合并且引起报道基因的转录。在BD 与AD 要导入的酵母菌AH109中，通过基因工程的方法在GAL4 UASs 和启动子的下游构建了3个报道基因——ADE2，HIS3，MEL1（或LacZ ），因此可以通过营养缺陷筛选和酵母菌表型的改变来筛选或验证两个蛋白之间是否存在相互作用。GAL4系统的原理如图所示： 图一：酵母双杂交系统工作原理 Kan r Amp r pGBKT7-bait pACT2-cDNA

酵母蔗糖酶的提取及性质测定

酵母蔗糖酶的提取及性质测定 引论及原理 酶的分离制备在酶学以及生物大分子的结构功能研究中有重要意义。本实验属综合性实验，接近研究性实验，包括八个连续的实验内容，通过对蔗糖酶的提纯和性质测定，了解酶的基本研究过程；同时掌握各种生化技术的实验原理、基本操作方法。本实验技术多样化，并且多个知识点互相联系，实验内容逐步加深，构成了一个综合性整体，为学生提供一个较全面的实践机会，学习如何提取纯化、分析鉴定一种酶，并对这种酶的性质，尤其是动力学性质作初步的研究。 蔗糖酶（invertase ）（β—D —呋喃果糖苷果糖水解酶）（fructofuranoside fructohydrolase ）（EC.3.2.1.26）特异地催化非还原糖中的α—呋喃果糖苷键水解，具有相对专一性。不仅能催化蔗糖水解生成葡萄糖和果糖，也能催化棉子糖水解，生成密二糖和果糖。每水解1mol 蔗糖，就生成2mol 还原糖。还原糖的测定有多种方法，本实验采用Nelson 比色法测定还原糖量，由此可得知蔗糖水解的速度。 在研究酶的性质、作用、反应动力学等问题时都需要使用高度纯化的酶制剂以避免干扰。酶的提纯工作往往要求多种分离方法交替应用，才能得到较为满足的效果。常用的提纯方法有盐析、有机溶剂沉淀、选择性变性、离子交换层析、凝胶过滤、亲和层析等。酶蛋白在分离提纯过程中易变性失活，为能获得尽可能高的产率和纯度，在提纯操作中要始终注意保持酶的活性如在低温下操作等，这样才能收到较好的分离效果。啤酒酵母中，蔗糖酶含量丰富。本实验用新鲜啤酒酵母为原料，通过破碎细胞，热处理，乙醇沉淀，柱层析等步骤提取蔗糖酶，并对其性质进行测定。 一、蔗糖酶的提取与部分纯化 （一）实验目的 学习酶的提取和纯化方法，掌握各步骤的实验原理，并为后续实验提供一定量的蔗糖酶。 （二）实验原理（略） （三）实验仪器、材料及试剂 仪器 1. 高速冷冻离心机、恒温水浴箱、－20℃冰箱 2. 电子天平、研钵（＞200ml ）、制冰机、50ml 烧杯 3. 离心管（2ml ，10ml ，30ml 或50ml ）、移液器（1000ul ）或滴管、量筒 材料及试剂 1. 市售鲜啤酒酵母（低温保存） ＋ H 2O 蔗糖酶 O H H O

参考教案-蔗糖酶的提取纯化与鉴定分析

参考教案：酵母蔗糖酶的提取纯化与鉴定 蔗糖酶（E.C.3.2.1.26）（ —D—呋喃果糖苷果糖水解酶），能催化非还原性双糖（蔗糖）的1，2-糖苷键裂解，释放出等量的果糖和葡萄糖。不仅能催化蔗糖水解生成葡萄糖和果糖，也能催化棉子糖水解，生成密二糖和果糖。 由于果糖甜度高 ,约为蔗糖1.36～1.60倍 ,在工业上具有较高的经济价值。可用以转化蔗糖,增加甜味,制造人造蜂蜜,防止高浓度糖浆中的蔗糖析出,制造含果糖和巧克力的 软心糖,还可为果葡糖浆的工业化生产提供新的方法。 蔗糖酶以两种形式存在于酵母细胞膜的外侧和内侧，在细胞膜外细胞壁中的称之为外蔗糖酶,其活力占蔗糖酶活力的大部分，是含有50% 糖成分的糖蛋白。在细胞膜内侧细胞质中的称之为内蔗糖酶，含有少量的糖。两种酶的蛋白质部分均为双亚基，二聚体，两种形式的酶的氨基酸组成不同，外酶每个亚基比内酶多两个氨基酸，Ser和Met，它们的分子量也不同，外酶约为27万(或22万，与酵母的来源有关)，内酶约为13.5万。尽管这两种酶在组成上有较大的差别，但其底物专一性和动力学性质仍十分相似，因此，本实验未区分内酶与外酶，而且由于内酶含量很少，极难提取，本实验提取纯化的主要是外酶。 每摩尔蔗糖水解产生两摩尔还原糖，蔗糖的裂解速率可以通过NeLson法测定还原糖的产生数量来测定。一个酶活力单位规定为在标准分析条件下每分钟催化底物转化的数量。比活力单位为每毫克蛋白含有酶活力单位。 （本实验以酵母为原料） 一、教学目的 通过酵母菌扩大培养及蔗糖酶的提取纯化与鉴定使学生学会生物大分子（酶）制备方案设计和开展实践研究的方法，体验从复杂细胞混合物体系中提取纯化酶的基本原理、 过程和方法。 本实验为学生提供一个较全面的科学研究实践机会，整个实验过程学生独立完成，虽然操作难度较大，所需要的实间较长（64学时），但每一步单元操作的原理清晰，技术成熟，实验结果明显，能给学生较多的设计空间和动手机会，有利于培养学生的学习兴趣和从事科学研究的能力。 二、教学内容

葡聚糖

花耳绣球菌 花耳绣球菌（胶囊） 从日本引进的一种抗癌保健食品。 内容量： 250mg/粒（其中含有花耳绣球菌干燥粉末150mg），150粒/瓶 建议食用量： 3-5粒/日，也可根据自身状况适量增减食用量 产品特征： 日本原装进口，100%使用日本和歌山栽培的高品质绣球菌 选用经过严格筛选和改良的KSC -03号菌种（日本农林水产省种苗登记号：FERM-19748）， 使用独创NK瓶细胞栽培技术（具有PAT2628286，PAT2739394，PAT3205751三项专利， 并获得了日本第43届林业技术奖），全程不使用任何农药，可放心食用。研磨成5μm以下 超微粉末，从而使绣球菌粉末在人体内的接触表面积扩大了10倍，更易于人体吸收。 人工栽培的绣球菌中β-葡聚糖含量的高低是由种菌的特性、生产工艺及培土的养分决定的。 经日本食品分析中心鉴定，花耳绣球菌中β-葡聚糖的含量在日本同类产品中高居榜首。 葡聚糖 葡聚糖 [编辑本段]葡聚糖 由数个葡萄糖分子聚合而成的同多糖就是葡聚糖。葡聚糖制成的凝胶常用来进行生化分离，如柱层析。 葡聚糖dextran ，glucan 葡聚糖不是单糖而是低聚糖,葡聚糖按照组成它的单糖－葡萄糖的单元数目，分为葡聚糖10万，葡聚糖14万，葡聚糖2万等等系列聚合物。 [1]为细菌性多糖之一。是由在蔗糖溶液中培养的细菌[肠膜明串珠菌（Leuconostoc mesentero-des），葡聚糖明串珠菌（L．dextranicum）]的葡聚糖蔗糖酶催化下列反应而生成的：n蔗糖→葡聚糖+n果糖。在氧化葡糖杆菌工业亚种（Gluconobacter ox-ydans subsp．industrius）[以前将含有这种物质的菌称为粘稠醋杆菌（Acetobacter viscosum）和荚膜醋杆菌（A．capsulatum）]中，由糊精合成葡聚糖。葡聚糖的种类很多，仅由D-葡萄糖组成，主链是α（1，6）键，也有α（1，4）或α（1，3）键的支链。葡萄糖为白色粉末，在水中加一点点即可产生很强的右旋性。医药上用作代用血浆。 [2]是以葡萄糖为组成糖的多糖的总称。由于D-葡萄糖残基彼此间结合样式的不同而分为多种，广泛分布于微生物、植物、动物界。其中代表性的有细菌的多缩葡萄糖（由α-1，6键的主链上支出以α-1，4和α-1，6键的侧链），褐藻类的海带多糖（lami-narin）（主要以β-1，3键），地衣类的木聚糖（β-1，4和β-1，3键），高等植物的纤维素、（β-1，4结合），直链淀粉（α-1，4键），支链淀粉（由α-1，4键的主链上支出α-1，6键的侧链），动物的糖原等。 [编辑本段]其他解释 葡聚糖以β-葡聚糖最具生理活性。在二十世纪四十年代，Pillemer博士首次发现并报道酵母细胞壁中有一种物质具有提高免疫力的作用。之后，经过图伦大学Diluzio博士的进一步研究发现，酵母细胞壁中提高免疫力的物质是一种多糖——β-葡聚糖，并从面包酵母中分离出这种物质。 β-葡聚糖的活性结构是由葡萄糖单位组成的多聚糖，它们大多数通过β-1,3结合，这是葡萄糖链连接的方式。它能够活化巨噬细胞、嗜中性白血球等，因此能提高白细胞素、细胞分裂素和特殊抗体的含量，全面刺激机体的免疫系

酵母蔗糖酶的固定化

酵母蔗糖酶的固定化 实验三酵母蔗糖酶的固定化 一、实验原理 1.固定化酶 通过物理或化学的方法，将水溶性的酶与水不溶性载体结合，使酶固定在载体上，并在一定的空间范围内进行催化反应的酶称为固定化酶。与游离酶相比，固定化酶有以下优点:?提高酶的稳定性;?易与产物分离;?可反复利用。酶的固定化方法有:吸附法、共价偶联法、交联法、包埋法。本实验用壳聚糖固定化酵母蔗糖酶属共价偶联法。由于载体带电性质的不同，会引起酶与底物亲和力的变化，从而引起米氏常数Km值的改变。酶固定化后，对变性剂、抑制剂的抵抗能力增强，贮存稳定性和操作稳定性也得以提高。 2.酶活测定 蔗糖酶催化非还原糖中的α-呋喃果糖苷键水解，具有相对专一性，能催化蔗糖水解生成葡萄糖和果糖。本实验用测定生成还原糖(葡萄糖和果糖)的量来测定蔗糖水解的速度，在碱性条件下，还原糖与3,5-二硝基水杨酸(DNS)共热，DNS被还原为3-氨基-5-硝基水杨酸(棕红色物质)，还原糖则被氧化成糖醛酸及其它产物。在一定范围内，还原糖的量与棕红色物质深浅成比例关系。酶活定义: 在540 nm 光吸收处，光密度每增加0.001个光吸收值定义为1个酶活力单位。二、实验材料、仪器和试剂 1.材料壳聚糖、实验一纯化得到的酵母蔗糖酶酶液 2.仪器移液管、注射器、分光光度计、水浴锅、铁架台等 3.试剂

(1)1% 3，5-二硝基水杨酸(DNS)试剂:酒石酸钾钠100 g溶于400 mL蒸馏水，加热中依次加入NaOH 5 g，3，5-二硝基水杨酸5 g，苯酚1 g，亚硫酸钠0.25 g，搅拌至溶。冷却后定容至500 mL，储于棕色瓶室温保存。 (2)10%蔗糖溶液 (3)0.1 mol/L pH 7.8 Tris-HCl缓冲液 (4) 1%戊二醛溶液:将4 mL 25%戊二醛溶液用上述Tris-HCl缓冲液稀释至 100mL (5)0.2 mol/L pH 4.5醋酸缓冲液 三、实验步骤 1.壳聚糖载体的制备及戊二醛的偶联 (1)称取3 g壳聚糖溶于98 mL蒸馏水中，搅拌均匀，再滴加2 mL冰醋酸，搅拌至均匀的粘稠状。 (2)称取8 g NaOH置大烧杯中，加入180 mL蒸馏水及20 mL甲醇。 1 (3)将拔出推塞的注射器架在铁架台上，倒入粘稠状的壳聚糖溶液，使壳聚糖溶液从20 cm高的注射器出口滴入大烧杯中，以制备壳聚糖微球载体。 注意:为保证适宜的流速，注射器中的壳聚糖溶液不宜超过10 mL，随着壳聚糖溶液逐滴滴入大烧杯，应随时补充壳聚糖溶液至刻度，并不断轻轻晃动大烧杯。若液体表面壳聚糖微球过于密集，应静置片刻，待微球沉入烧杯底部后继续滴加。 (4)壳聚糖溶液滴加完毕后，静止片刻，待微球完全沉入烧杯底部时，反复水洗多次至pH值中性，沥干水分。加入1%戊二醛溶液100 mL，静置2 h，使戊二醛偶联于壳聚糖载体上。 2.固定化酶的制备 (1)将静置2 h后的壳聚糖微球载体中的戊二醛溶液倒掉，再用蒸馏水洗涤5次，以除去多余的戊二醛。

真菌胞内蛋白质提取方法的建立

［文章编号］　１６７１－５８７Ⅹ（２０１２）０３－０５９０－ ０５［收稿日期］　２０１１－０８－ １５［基金项目］　国家自然科学基金资助课题（３０９１０１０３９０３，３０７７０１２０ ）［作者简介］　王　爽（１９７６－） ，女，吉林省长春市人，主治医师，医学博士，主要从事真菌分子学鉴定及耐药机制的研究。 ［通信作者］　王　丽（Ｔｅｌ：０４３１－８５６１９４８６，Ｅ－ｍａｉｌ：ｗｌｉ９９＠ｊｌｕ．ｅｄｕ．ｃｎ）真菌胞内蛋白质提取方法的建立 王　爽１， ２，姜兰香１，张　宇２，３，贺　丹２，田　庄２，高　嵩２，横山耕治４，王　丽２（１．吉林大学第二医院皮肤科，吉林长春１３００４１；２． 吉林大学白求恩医学院病原生物学系，吉林长春１３００２１；３．吉林大学第二医院检验科，吉林长春１３００４１；４．日本千叶大学真菌研究中心，日本千叶２６０－ ８６７３）［摘　要］　目的：研究不同的提取方法对白假丝酵母和茄病镰刀菌胞内蛋白质浓度、种类及数量的影响，为建立一种稳定可靠的真菌胞内蛋白质提取方法提供依据。方法：分别以白假丝酵母菌和茄病镰刀菌为研究对象， 培养时间为３６、４８和７２ｈ，超声波工作时间为２０ｓ、３ｍｉｎ、５ｍｉｎ，１０ｍｉｎ，超声波功率为３３２．５和４７５．０Ｗ， 通过蛋白质浓度检测和ＳＤＳ－Ｐ ＡＧＥ蛋白质电泳分析，比较不同条件下提取的蛋白质浓度、种类及数量，观察不同因素对蛋白质提取效果的影响。结果：２株真菌均在培养３６ｈ时提取胞内蛋白质的浓度最大，白假丝酵母在功率３３２．５Ｗ、超声３ｍｉｎ时得到胞内蛋白质的数量和种类最多，茄病镰刀菌在功率３３２．５Ｗ、超声１０ｍｉｎ时得到蛋白质的数量和种类最多。结论：使用超声波法与玻璃珠研磨法结合提取胞内蛋白质，从菌株的培养时间、超声波工作时间和功率３方面建立了真菌胞内蛋白质的最佳提取方法。 ［关键词］　白假丝酵母；茄病镰刀菌；超声波；培养时间 ［中图分类号］　Ｒ３７９．２ ［文献标志码］　Ａ Ｅｓｔａｂｌｉｓｈｍｅｎｔ　ｏｆ　ｉｎｔｒａｃｅｌｌｕｌａｒ　ｐ ｒｏｔｅｉｎ　ｅｘｔｒａｃｔｉｏｎｍｅｔｈｏｄｓ　ｆｒｏｍ　ｆｕｎｇ ｕｓＷＡＮＧ　Ｓｈｕａｎｇ１，２，ＪＩＮＧ　Ｌａｎ－ｘｉａｎｇ１，ＺＨＡＮＧ　Ｙｕ２， ３，ＨＥ　Ｄａｎ２，ＴＩＡＮ　Ｚｈｕａｎｇ２， ＧＡＯ　Ｓｏｎｇ２，ＫＯＪＩ　Ｙｏｋｏｙａｍａ４，ＷＡＮＧ　Ｌｉ　２（１．Ｄｅｐａｒｔｍｅｎｔ　ｏｆ　Ｄｅｒｍａｔｏｌｏｇｙ，Ｓｅｃｏｎｄ　Ｈｏｓｐｉｔａｌ，Ｊｉｌｉｎ　Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ，Ｃｈａｎｇ ｃｈｕｎ　１３００４１，Ｃｈｉｎａ；２．Ｄｅｐａｒｔｍｅｎｔ　ｏｆ　Ｐａｔｈｏｇｅｎ　Ｂｉｏｌｏｇｙ，Ｎｏｒｍａｎ　Ｂｅｔｈｕｎｅ　Ｃｏｌｌｅｇｅ　ｏｆ　Ｍｅｄｉｃｉｎｅ，Ｊｉｌｉｎ　Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ，Ｃｈａｎｇ ｃｈｕｎ１３００２１，Ｃｈｉｎａ；３．Ｄｅｐａｒｔｍｅｎｔ　ｏｆ　Ｌａｂｏｒａｔｏｒｙ，Ｓｅｃｏｎｄ　Ｈｏｓｐｉｔａｌ，Ｊｉｌｉｎ　Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ，Ｃｈａｎｇ ｃｈｕｎ１３００４１，Ｃｈｉｎａ；４．Ｍｅｄｉｃａｌ　Ｍｙｃｏｌｏｇｙ　 Ｒｅｓｅａｒｃｈ　Ｃｅｎｔｅｒ，Ｃｈｉｂｅｒ　Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ，Ｃｈｉｂａ　２６０－８６７３，Ｊａｐａｎ）Ａｂｓｔｒａｃｔ：Ｏｂｊｅｃｔｉｖｅ　Ｔｏ　ｓｔｕｄｙ　 ｔｈｅ　ｅｆｆｅｃｔ　ｏｆ　ｄｉｆｆｅｒｅｎｔ　ｃｕｌｔｉｖａｔｅ　ｔｉｍｅ，ｕｌｔｒａｓｏｎｉｃ　ｔｉｍｅ　ａｎｄ　ｕｌｔｒａｓｏｎｉｃ　ｐｏｗｅｒ　ｏｎ　ｔｈｅｃｏｎｃｅｎｔｒａｔｉｏｎ，ｔｙｐｅ　ａｎｄ　ｑｕａｎｔｉｔｙ　 ｏｆ　ｔｈｅ　ｉｎｔｒａｃｅｌｌｕｌａｒ　ｐｒｏｔｅｉｎ　ｆｒｏｍ　Ｃａｎｄｉｄａ　ａｌｂｉｃａｎｓ　ａｎｄ　Ｆｕｓａｒｉｕｍ　ｓｏｌｉｎａ　ａｎｄ　ｔｏｐｒｏｖｉｄｅ　ｔｈｅ　ｔｈｅｏｒｅｔｉｃａｌ　ｂａｓｉｓ　ｆｏｒ　ｅｓｔａｂｌｉｓｈｉｎｇ　 ａ　ｒｅｌｉａｂｌｅ　ａｎｄ　ｓｔａｂｌｅ　ｅｘｔｒａｃｔｉｏｎ　ｍｅｔｈｏｄ　ｆｏｒ　ｉｎｔｒａｃｅｌｌｕｌａｒ　ｐｒｏｔｅｉｎ　ｆｒｏｍｆｕｎｇ ｕｓ．Ｍｅｔｈｏｄｓ　Ｃａｎｄｉｄａ　ａｌｂｉｃａｎｓ　ａｎｄ　Ｆｕｓａｒｉｕｍ　ｓｏｌｉｎａ　ｗｅｒｅ　ｃｕｌｔｕｒｅｄ．Ｔｈｅ　ｄｉｆｆｅｒｅｎｔ　ｐａｒａｍｅｔｅｒｓ　ｉｎｃｌｕｄｅｄ　ｔｈｅｃｕｌｔｕｒｅ　ｔｉｍｅ（３６，４８，ａｎｄ　７２ｈ），ｕｌｔｒａｓｏｎｉｃ　ｔｉｍｅ（２０ｓ，３ｍｉｎ，５ｍｉｎ，ａｎｄ　１０ｍｉｎ）ａｎｄ　ｕｌｔｒａｓｏｎｉｃ　ｐ ｏｗｅｒ（３３２．５Ｗａｎｄ　４７５．０Ｗ）．Ｔｈｅ　ｃｏｎｃｅｎｔｒａｔｉｏｎｓ，ｓｐｅｃｉｅｓ　ａｎｄ　ｑｕａｎｔｉｔｉｅｓ　ｏｆ　ｐｒｏｔｅｉｎ　ｕｎｄｅｒ　ｄｉｆｆｅｒｅｎｔ　ｆａｃｔｏｒｓ　ｗｅｒｅ　ｄｅｔｅｃｔｅｄ　ｂｙ　 ｔｈｅｐｒｏｔｅｉｎ　ｃｏｎｃｅｎｔｒａｔｉｏｎ　ｄｅｔｅｃｔｉｏｎ　ａｎｄ　ＳＤＳ－ＰＡＧＥ　ｅｌｅｃｔｒｏｐｈｏｒｅｓｉｓ　ａｎａｌｙ ｓｉｓ．Ｒｅｓｕｌｔｓ　Ｂｏｔｈ　ｓｔｒａｉｎｓ　ｇｏｔ　ｔｈｅ　ｍｏｓｔ　ｑｕａｎｔｉｔｙｏｆ　ｐｒｏｔｅｉｎ　ｗｈｅｎ　ｃｕｌｔｉｖａｔｅｄ　ｆｏｒ　３６ｈ．Ｔｈｅ　ｍｏｓｔ　ｑｕａｎｔｉｔｙ　 ａｎｄ　ｓｐｅｃｉｅｓ　ｏｆ　Ｃａｎｄｉｄａ　ａｌｂｉｃａｎｓ　ｗｅｒｅ　ｏｂｔａｉｎｅｄ　ｗｈｅｎ　ｔｈｅｕｌｔｒａｓｏｎｉｃ　ｐｏｗｅｒ　ｗａｓ　３３２．５Ｗａｎｄ　ｕｌｔｒａｓｏｎｉｃ　ｔｉｍｅ　ｗａｓ　３ｍｉｎ，ｂｕｔ　ａｓ　ｔｏ　Ｆｕｓａｒｉｕｍ　ｓｏｌｉｎａ，ｔｈｅ　ｃｏｒｒｅｓｐｏｎｄｉｎｇ ｐａｒａｍｅｔｅｒｓ　ｗｅｒｅ　３３２．５Ｗａｎｄ　１０ｍｉｎ，ｒｅｓｐｅｃｔｉｖｅｌｙ．Ｃｏｎｃｌｕｓｉｏｎ　Ｔｈｅ　ｉｎｔｒａｃｅｌｌｕｌａｒ　ｐｒｏｔｅｉｎ　ｉｓ　ｅｘｔｒａｃｔｅｄ　ｂｙ ｃｏｍｐｏｓｉｔｅｌｙ　ｕｓｉｎｇ　 ｕｌｔｒａｓｏｎｉｃ　ｍｅｔｈｏｄ　ａｎｄ　ｇｌａｓｓ　ｂｅａｄ　ｔｒａｎｓｆｏｒｍａｔｉｏｎ　ｍｅｔｈｏｄ．Ｔｈｅ　ｏｐｔｉｍａｌ　ｅｘｔｒａｃｔｉｏｎ　ｍｅｔｈｏｄ　ｏｆ０９５第３８卷　第３期２０１２年５月吉　林　大　学　学　报　（医　学　版）Ｊｏｕｒｎａｌ　ｏｆ　Ｊｉｌｉｎ　Ｕｎｉｖｅｒｓｉｔｙ（Ｍｅｄｉｃｉｎｅ　Ｅｄｉｔｉｏｎ）Ｖｏｌ．３８Ｎｏ．３　Ｍａｙ 　２０１２