大鼠急性脑缺血及缺血再灌注中ERK5的表达情况

摘要】目的：观察大鼠脑皮质中细胞外信号调节激酶5(ERK5)在缺血及缺血再灌的不同表达，探讨其在脑缺血再灌注损伤中的意义。方法：采用线栓法建立大脑中动脉闭塞( MCAO) 模型，所有大鼠随机分为假手术组、缺血梗死组和缺血再灌组。对各组大鼠行神经功能评分，TTC染色测定脑梗死体积，免疫组织化学法测

定ERK5表达。结果：缺血再灌注组大鼠的神经功能缺损和脑梗死体积均比缺血

梗死组大鼠严重。ERK5在缺血梗死组和缺血再灌组都表达，后者明显多于前者。结论：ERK5可能参与脑缺血再灌注损伤过程并起着重要作用。

【关键词】脑缺血；缺血再灌注损伤;细胞外信号调节激酶5(ERK5);表达

【中图分类号】R742 【文献标识码】A 【文章编号】2095-1752（2016）10-0172-02

Expression of ERK5 in rats cortex afer cerebral ischemia and reperfusion TAN Zhongxu1,SONG Yuqiang2,LV Jinglei3,YU Liqun1,SHI Shenggui11Qingdao University Medical College,Qingdao 266021,China.2Department of Neurology,the Affiliated Hospital of Qingdao University Medical College, Qingdao 266003,China .3 The Affiliated Hospital of Qingdao University Medical College,Qingdao 266003,China 【Abstract】Objective To observe the different expression of ERK5 in rats cortex in response to cerebral ischemia and ischemia/reperfusion, and investigate the significance in ischemia/reperfusion injury.Methods Blocking middle cerebral artery with intraluminal thread was used to build cerebral middle artery infarction model ( MCAO).All rats were randomly divided into sham operation group,ischemia groupand ischemia/reperfusion (I/R)group.The Longa score was used to evaluate revived rats and TTC staining was used to determine the infarct volumes.we investigated the activation and expression of ERK5 by immunohistochemistry.Results 24 hours after MCAO, neurological function scores were significant increased in I/R group compared with ISCH group. the infarct volume was in I / R group was larger.The activation of ERK5 was rapidly induced by ischemia, and I/R group were significantly higher than Ischemia group.Conclusion We hypothesize that ERK5 might participate in the pathogenesis of isehemic/reperfusion and play an important effect during

ischemia/reperfusion injury.

【Key words】 Cerebral ischemia ;Ischemia/reperfusion injury; Extracellular signal regulated protein kinase(ERK5); Expression

1.前言

治疗急性脑缺血患者的最佳办法是能及时恢复脑组织血液供应, 然而恢复血

流灌注给脑组织带来新的损伤, 即缺血再灌注损伤。目前研究证明，丝裂原活化

蛋白激酶（mitogen-activated protein kinases，MAPKs）参与脑缺血再灌注损伤的

过程[1]。其中，细胞外信号调节激酶5（ERK5）是新发现的成员[2]。本实验通过采用线栓法构建大脑中动脉闭塞(MCAO) 模型，观察大鼠脑皮质ERK5在缺血及缺血再灌24h的不同表达情况，探究其在缺血再灌损伤中的可能作用。

2.材料与方法

2.1 动物

选择8周龄成年健康雄性Sprague-Dawley（SD）大鼠50只，体重220～260g, 由青岛市药物检验所实验动物中心提供。实验前将动物置于实验室1周适应环境,均自由饮水、进食,实验室室温(25±2)℃,相对湿度65%,自然光照。

大鼠Langendroff离体心脏局部缺血再灌注模型建立及功能评价

2013年12月第23卷第12期中国比较医学杂志CHINESE JOUＲNAL OF COMPAＲATIVE MEDICINE December ，2013Vol．23No．12 ［基金项目］国家自然科学基金（81273691）。［作者简介］陈婵娟（1985－），女，在读博士生，主要研究方向：中医气血痰瘀理论在心血管疾病中的应用及中医药对心血管疾病的预防与治疗。E- mail ：ccjqlgcj@126．com 。［通讯作者］鲁卫星（1959－），男，主任医师，博士生导师，主要研究方向：中医气血痰瘀理论在心血管疾病中的应用及中医药防治心血管疾病的研究。E-mail ：weixinglu918@sina．com 檵檵檵檵檵檵檵檵檵檵殝殝殝殝。研究报告大鼠Langendroff 离体心脏局部缺血再灌注模型建立及功能评价陈婵娟1，潘昡1，赵明镜2，鲁卫星 3（1.北京中医药大学，北京100029；2.北京中医药大学东直门医院，北京100007； 3.北京中医药大学第三附属医院心内科，北京100029）【摘要】目的建立大鼠Langendorff 离体心脏局部缺血再灌注模型的方法并进行功能评价。方法将26 只Wistar 大鼠随机分成2组，对照组（control ，n =12）和模型组（model ，n =14）。两组均建立标准的Langendorff 离体心脏灌注模型：K-H 液持续灌注（95%O 2+5%CO 2过饱和，左心室插入球囊压力管）， K-H 液持续灌注平衡20min 后对照组K-H 液持续灌注105min ；模型组同对照组平衡20min 后穿线结扎冠状动脉左前降支第一对角支下缘部位，造成局部停灌（缺血）30min ，而后剪断结扎线复灌（再灌注）75min 。伊文思蓝、TTC 染色观察心肌梗死、缺血面积；记录左心室压力及心率变化过程，比较各组平衡20min 、局部缺血30min 、再灌15min 、再灌30min 、再灌 75min 的血流动力学指标及灌流液中肌酸激酶（creatine kinase ，CK ）和乳酸脱氢酶（lactate dehydrogenase ，LDH ）漏出量。结果对照组血供正常，模型组局部缺血、梗死明显；对照组、模型组平衡末心肌酶学及血流动力学各参数无明显差异（P ＞0.05），模型组局部缺血、再灌注各个观测时刻心肌酶学及血流动力学参数均与对照组有显著差异（P ＜0.05），说明模型组经历局部缺血、再灌注损伤，心肌酶漏出明显升高，心脏收缩功能、舒张功能受损，心肌耗氧量升高。结论大鼠Langendorff 离体心脏局部缺血灌注模型稳定可靠，掌握制作要点及注意事项后，可顺利快速地成功制备，为心肌局部缺血再灌注损伤的研究提供更接近临床疾病状态的实验途径。【关键词】大鼠；Langendorff 离体心脏；局部缺血再灌注；模型制备与评价【中图分类号】Ｒ33【文献标识码】A 【文章编号】1671-7856（2013）12-0021-06 doi ：10.3969．j．issn．1671.7856.2013.012.006 Establishment and assessment of a Langendorff perfused rat heart model of ischemia-reperfusion CHEN Chan-juan 1，PAN Xuan 1，ZHAO Ming-jing 2，LU Wei-xing 3 （1.Beijing University of Chinese Medicine ，Beijig100029，China ； 2.Dongzhimen Hospital Affiliated to Beijing University of Chinese Medicine ，Beijig100007； 3.Department of Cardiology ，the Third Affiliated Hospital of Beijing University of Chinese Medicine ，Beijing 100029）【Abstract 】Objective To explore and summarize a Langendorff perfused rat heart model of ischemia-reperfusion．Methods Twenty-six Wistar adult rats were divided into two groups randomly ：control group （n =12）and model group （n =14）．Each rat underwent open-chest surgery．The hearts were removed and immediately cannulated and effectively

大鼠心肌缺血再灌注损伤动物模型的建立与评估_成玲俐

基金项目:广东省自然科学基金(06021338);广东省科技计划项目 (2007B031508003);佛山科技局(200808109) *通讯作者,Wushuhua168@https://www.360docs.net/doc/5413408816.html, 文章编号:1007-4287(2010)08-1163-03 大鼠心肌缺血再灌注损伤动物模型的建立与评估成玲俐1,吴素华2*,李志梁1,唐 2 ,张瑞1 (1.南海盐步医院,广东佛山528247;2.中山大学附属第一医院;3 南方医科大学珠江医院) 摘要:目的改进和完善大鼠急性心肌缺血再灌注损伤动物模型的制备及评估。方法健康SD 大鼠随机分为3组:假手术组(Sham 组),仅穿线,不结扎LAD;缺血组(Ischemia 组),单纯结扎LAD30min;缺血再灌注组(IR 组),结扎LAD30min,再灌注120min 。每组20只。并从造模成功率、心电图、外周血中LDH 、CK MB 的含量测定、心肌病理组织学检查等方面对改进后的模型进行评估。结果改进后的造模成功率达到90%以上,血液动力学、心电图、外周血中LD H 、C K MB 的含量测定、心肌病理组织学检查等方式均证实改良后的动物模型成功。结论改进后的方法能大大降低手术难度,提高模型成功率和动物成活率,准确地复制心肌缺血再灌注损伤的实验模型,简化实验操作步骤。关键词:大鼠;心肌缺血再灌注;动物实验模型中图分类号:R541 4 文献标识码:A Im proving and Evaluating the Method of Establishing Rat Models of Acute Myocardial Eschem ia Reperfusion C HE NG Ling li ,WU Su hua,LI Zhi lian g ,et a l.(De p a rtment of Ca rdiovascula r ,Yanbu H osp ital o f Nanhai District ,Foshan 528247,China) Abstract:Objective To i mprove and evaluate the method of establishing rat models of acu te myocardial ischemiareperfusion,which had high rate of success and survive.Methods 60Sprague Dawley rats were divided into three groups at random:con trol group,Sham group and improved myocardial ischemia/reperfusi on group.The successful rate and the effectiveness of each group were observed.The hemodynamics,eletrocardiogram,Evans blue and TTC staining,myocardial enzyme spectrum and histology resul ts were used for evaluating the modified model.Results The successful rate of three groups were 90%,100%and 100%,respectively.The hemodynamics,eletrocardiogram,Evans blue and TTC staini ng ,myocardial enzyme spectru m and histology all tes tified that the models of modified method were results were successful.Conclusion The method of establish rat models of acu te myocardial ischemia reper fusion is simpleand convenient,with high successful rate and survival rate. Key words:Rats;Myocardial ischemia reperfusion;E xperimental animal models (Chin J Lab Diagn,2010,14:1163) 在动物体内阻断左冠状动脉前降支(LAD)造成急性心肌缺血,并在预定时间内恢复血供予以再灌注,是模拟人类缺血性心脏病恢复血供治疗必需的实验方法。由于大鼠在进化关系上比较接近人类,且其冠状动脉侧支循环少、心肌坏死出现早、心律失常发生率高、稳定性好,且大鼠制作模型费用低廉,从而成为制作心肌缺血再灌注损伤模型的首选,结扎大鼠LAD 形成心肌梗死是目前国内外公认的模型制备方法。但以往模型制备过程中存在诸多不便,如:手术时反复多次将心脏牵拉到胸腔外,造成动物死亡率增加,加大了实验成本,又加大了动物的创伤;阻断冠状动脉造成缺血后实现再通时,结扎线不易剪断,常导致左心耳破裂,引起心脏撕脱伤,造成大出血;文献报道冠状动脉的定位部位不一,会造成模型缺血损伤部位及损伤程度不一致等。参照不同研究人员采用的模型制备方法[1],结合本实验室条件对该模型制作进行了改进,以提高模型制备成功率。现报告如下。1 材料与方法 1.1 材料 1.1.1 实验动物与分组清洁级SD 大鼠,体重220-260g,雄性,合格证号:SC XK(粤)2008-0020。由广州中医药大学实验动物中心提供。将大鼠随机分为3组:假手术组(Sham 组),仅穿线,不结扎LAD;缺血组(Ischemia 组),单纯结扎LAD30min;缺血再灌注组(IR 组),结扎LAD30min,再灌注120min 。每组20只。 1.1.2 主要仪器和器械动物呼吸机ALC V8(上海奥尔科特生物科技有限公司),澳大利亚产Power lab16导生理记录仪,无创缝合针(上海医菱医疗器械有限公司);黑色医用缝合线、lOml 一次性无菌注射器、各种手术器械,如止血钳、小无齿弯钳、小镊、小眼科剪等。 1163 中国实验诊断学 2010年8月第14卷第8期

大鼠心缺血再灌注实验设计

题目：不同药物对大鼠心缺血再灌注损伤的治疗作用目的：观察抑制氧自由基生成药物（5-甲酰尿嘧啶）对大鼠心缺血再灌注损伤的治疗作用。观察钙离子拮抗剂（硝苯地平）对大鼠心缺血再灌注损伤的治疗作用。观察抗脂质过氧化制剂（维生素C或维生素E）对大鼠心缺血再灌注损伤的治疗作用。原理：多数情况下，缺血后再灌注可使组织器官功能得到恢复，损伤的结构得到修复，患者病情好转康复；但有时缺血后再灌注．不仅不能使组织、器官功能恢复，反而加重组织、器官的功能障碍和结构损伤。这种在缺血基础上恢复血流后组织损伤反而加重，甚至发生不可逆性损伤的现象称为缺血再灌注损伤。心缺血再灌注损伤是指心肌缺血后再灌注期间导致的心机细胞损害，其损害程度较心肌缺血本身严重，常表现为心肌细胞收缩功能减弱和心室顺应性改变，出现心律失常，心功能低下等现象。心肌缺血再灌注损伤与氧自由基产生增多、钙超载、及白细胞的作用有关。抑制氧自由基生成药（黄嘌呤氧化酶抑制剂——5-甲酰尿嘧啶）具有抑制氧自由基生成的作用，减少氧自由基生成。钙离子拮抗剂（硝苯地平）可以阻断钙的慢通道，使细胞外钙的内流减少，从而降低胞浆钙离子，可起到减少MIRI的作用。抗脂质过氧化制剂（维生素C或维生素E）可以阻断脂质过氧化可1）抗白细胞粘附;（2）保护内皮功能;（3）抗血小板粘附、聚集及脱颗粒反应。有研究证实外源性维生素E可增加心肌梗死后大鼠血浆、心脏的维生素E含量，改善心功能，并减少大鼠的再灌注心律失常。实验对象：大鼠4只，120-200g，体格健康雌雄不限。器材和药品：手术刀，动脉夹4个，棉线，剪子，镊子2把，玻璃分针2个，注射器及针头2个，动脉插管器械，BL-420生物机能实验系统药品：20%氨基甲酸乙酯0.5ml/g，5-甲酰尿嘧啶注射液，硝苯地平注射液，维生素C或维生素E注射液，肝素。方法步骤：1、大鼠心再灌注损伤再灌注模型的制备（1）取大鼠，称重，用20%氨基甲酸乙酯0.5ml/g腹腔注射麻醉，仰卧位固定。（2）1%肝素0.2ml/100g从尾静脉注射。（3）前胸，上腹部剪毛，沿肋缘下剪开腹前壁皮肤皮下筋膜，肌肉，纵向剪开胸前壁和横向剪开胸前壁暴露心脏。（4）经主动脉插管（5）找到左冠状动脉用动脉夹夹闭1分钟。打开动脉夹，血液重新供应，用BL-420实验技能系统记录，观察心律心室内压等的改变。