微生物分析检测报告

微生物分析检测报告

广东省微生物分析检测报告

CUANNGONG DETECTION CENITE OF MICROBIOLOGY

分析检测报告

REPORT FOR ANALYSIS

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广东省微生物分析检测报告

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样品名称接样方式及数量

Name of Sample Way and Quantity of Reception 样品规格及批号样品状态和特性

Specification and Group Number of Sample State and Charactcristic

委托单位接样日期

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检测项目检测日期

Item of Analysis Date for Analysis

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Sample Receipt NO. Date for Repoeting

检验依据和分析方法

Standard and Methods

分析检测结果

食品微生物检测方法的研究进展

食品微生物快速检测方法的研究进展 【摘要】本文从食品安全与卫生的角度出发,介绍了分子生物学方法中的核酸探针检测法、基因芯片检测法、PCR技术检测法的检测原理及优缺点、在食品微生物检测中的应用。 【关键词】食品微生物、快速、检测、分子生物学 随着世界食品开发、生产、销售的迅速发展与人们生活水平的不断提高,研究和建立食品微生物快速检测方法以加强对食品卫生安全的监测越来越受到各国科学家的重视,其关键是及时、准确地检测出食品中的微生物。传统的检测方法准确性、灵敏性均较高,但有涉及的实验较多、操作繁琐、效率低等缺点。近年来,微生物的快速检测和自动化研究进展声速,主要包括微生物学、分子化学、生物化学、生物物理学、免疫学和血清学等方面及其它们的结合应用。本文主要介绍分子生物学方法中的核酸探针检测法、基因芯片检测法和PCR技术检测法 分子生物学方法 随着微生物学、生物化学和分子生物化学的飞速发展,对微生物的鉴定已不再局限于对它的外部形态结构及生理特性等一般检验上,而是从分子生物学水平上研究生物大分子,特别是核酸结构及其组成部分。在此基础上建立的众多检测技术中,核酸探针和聚合酶链反应,以其敏感、特异、简便、快速的特点成为世人瞩目的生物技术革命的新产物,已逐步应用于信源性病原菌的检测。 1 核酸探针法 细胞核酸DNA 和RNA 是唯一一类可以传递遗传信息的大分子,而每一种病原体都有独特的核酸片段,核酸探针是带有将已知核苷酸DNA或RNA片段用同位素或其它方法标记的基因特异片段,它主要利用碱基配对原理,使互补的2条核酸单链形成双链。 根据核酸探针中核苷酸成分的不同,可将其分为DNA探针或RNA探针;根据选用基因的不同又可分为两种,一种探针能同微生物中全部DNA分子中的一部分发生反应,它对某些菌属、菌种、菌株有特异性,另一种探针只能限制性同微生物中某一基因组DNA发生杂交反应,它对某种微生物中的一种菌株或仅对微生物中某一菌属有特异性。 美国GENE-TRAK公司研制出了脱氧核糖核酸杂交筛选比色法,主要利用特异的基因探针对沙门菌、李斯特菌和大肠杆菌的rRNA进行检测。检测步骤如下:先设计出与细菌rRNA互补的基因探针,待检样经过增菌培养后,溶解细菌并加入带有标记的探针进行液相杂交:如果待检样中存在靶细菌rRNA、荧光素标记的检测探针和多聚脱氧腺嘌呤核苷酸末端捕获将与目标rRNA序列杂交;此后,把包被多聚脱氧胸腺嘧啶核苷酸的固相载体测杆插入杂交溶液中,利用多聚脱氧腺嘌呤核苷酸与多聚脱氧胸腺嘧啶核苷酸间的碱基配对将杂交核酸捕获于固体载体中,并将固相载体真培养于过氧化酶-抗荧光素接合剂中,使探针上的荧光素与结合剂结合;最后,将固相载体置于酶底物-色原溶液中,使过氧化酶与底物反应,在450nm处测量吸光度值,以确定样品中是否存在靶细菌。 总的来说,核酸探针技术是一种理想的快速检测技术,它最大优势是特异性和敏感性,而且兼备组织化学染色的可见性和定位性,主要用于食品致病性病原微生物的检测。但是也存在一定问题,如每检测一种菌就需要制备一种探针,而且目前尚未建立所有菌种的探针;要达到检测量还要对样品进行一定时间的培养;对毒素污染的食品有时因样品中不含产毒菌而无法检测出,所以该技术还有待进一步发展。 2基因芯片技术 基因芯片的基本原理是将各种寡核苷酸点样于芯片表面,微生物样品DNA经PCR扩增制备荧光标记探针,然后再与芯片上寡核苷酸点杂交,最后通过扫描仪定量和分析荧光分布模式来确定检测样品是否存在某些特定微生物。

微生物大小与数量的测定实验报告

山东大学实验报告2017年11月27日 ________________________________________ _________________________ 科目:微生物学实验题目:微生物大小与数量的测定姓名:丁志康 一、目的要求 1.学习并掌握用测微尺测定微生物大小的方法。 2.增强微生物细胞大小的感性认识。 3. 明确血细胞计数板计数的原理。 4. 掌握使用血细胞计数板进行微生物计数的方法。 二、基本原理 一)微生物大小的测定 1.微生物细胞的大小是微生物基本的形态特征,也是分类鉴定的依据之一。微生物 大小的测定,需要在显微镜下,借助于特殊的测量工具——测微尺,包括目镜测 微尺和镜台测微尺。 2.镜台测微尺是中央部分可有精确等分线的载玻片,一般是将1mm等分为100格每 格长0.01mm(即10μm)。镜台测微尺并不直接用来测量细胞的大小,而是用于 矫正目镜测微尺每格的相对长度。 3.目镜测微尺是一块可放入接目镜内的圆形小玻片,其中央有精确的等分刻度,有 等分为50小格和100小格两种。测量时,需将其放在接目镜中的隔板上,用以 测量经显微镜放大后的细胞物象。由于不同显微镜或不同的目镜和物镜组合放大 倍数不同,目镜测微尺每小格所代表的实际长度也不一样。因此,用目镜测微尺 测量微生物大小时,必须先用镜台测微尺进行校正,以求出该显微镜在一定大放 大倍数的目镜和物镜下,目镜测微尺每小格所代表的相对长度。然后根据微生物 细胞相当于目镜测微尺的格数,即可计算出细胞的实际大小。 4.球菌用直径来表示其大小;杆菌则用宽和长的范围来表示。如金黄色葡萄球菌直 径约为0.8μm,枯草芽孢杆菌大小为0.7~0.8×2~3μm。 二)微生物数量的测定 1.微生物数量的测定有多种方法,本次试验中使用显微镜直接计数法。显微镜直接 计数法是将少量待测样品的悬浮液置于一种特别的具有确定面积和容积的载玻 片上(又称计菌器),于显微镜下直接计数的一种简便、快速、直观的方法。目前 国内外常用的计菌器有:血细胞计数板、Peteroff-Hauser计菌器以及Hawksley 计菌器等,它们都可用于酵母、细菌、霉菌孢子等悬液的计数,基本原理相同。 后两种计菌器由于盖上盖玻片后,总容积为0.02mm3,而且盖玻片和载波片之间 的距离只有0.02mm,因此可用油浸物镜对细菌等较小的细胞进行观察和计数。(除 了用这些计菌器外,还有在显微镜下直接观察涂片面积与视野面积之比的估算法, 此法一般用于牛乳的细菌学检查。)显微镜直接计数法的优点是直观、快速、操

土壤微生物测定指标的分析方法和适用范围

土壤微生物监测常规测定指标的分析方法和适用范围

其他方法: 一、土壤DNA提取和纯化: 方案1,参考(1, 2) 1.称取样品土样5g, 加入灭菌的石英砂,液氮研磨;

不要液氮研磨,这样子对DNA伤害很大,几乎全部片段化了。可以加上PBS洗涤下土壤,一是能够去除些杂质,二是能够使得土壤处于悬浮状态,然后可以在涡旋仪上剧烈涡旋2-3min,使得土壤颗粒破碎。然后12000rpm离心5min,弃上清。 2.加入1 3.5mL的DNA提取Buffer,100微升20mg/mL蛋白酶K,37℃225rpm摇30min-2h 3.加入700微升20%SDS,65℃水浴2h,间隔15min颠倒摇匀数次; 4.6000rpm室温离心15min,收集中间液相层;向沉淀中加入3mLDNA提取液,300微升20%SDS,65℃水浴30min,同上离心,收集中间液相层,合并;重复一次;可考虑再 增加抽提一次。或者用5mL而不是3mL。最后实在装不下了可以分在两个50mL离心管里面离心。 5.向收集的液相层中加入等体积氯仿:异戊醇(24:1)抽提一次,8000rpm离心10min,收集上部液相层; 6.第5步收集液相层中加入0.1倍体积的乙酸钠,0.6倍体积的异丙醇,4℃过夜沉淀; 这个千万不要4度过夜啊,四度过夜你会发现很多的絮状悬浮物,我之前犯过类似错误,这个是SDS和高浓度的盐在低温条件下析出来了。室温放置1-2h就好。 7.过夜沉淀物12000rpm离心15min,弃上清;向沉淀中加入10mL冷乙醇洗涤,12000rpm离心5min,弃上清;12000rpm离心30sec,移液枪析出残留液体; 8.室温自然干燥沉淀,干燥后向沉淀中加入400微升TE溶解。 方案2: 购买DNA提取试剂盒,如SoilMaster DNA Extraction Kit (Epicenter) 或UltraClean Soil DNA Isolation Kit (MO BIO) 二、DNA定量和质量检测: 提取后的DNA使用紫外分光光度法进行浓度和纯度检测。DNA纯度以OD260/ OD280比值来反映。当OD60 /OD80比值<1.8时,说明样品存在蛋白质或酚等杂质,可采用平衡酚/氯仿/异戊醇再抽提除去蛋白质或用乙醚抽提去除残留酚,再用无水乙醇沉淀,TE悬浮后再测定。当OD60/OD280比值>2.0,说明样品存在RNA污染,可以用RNA酶处理样品去处RNA 。和定量,应用1%琼脂糖凝胶电泳检测DNA大小及完整度。 三、土壤宏基因组测序 将质检合格的土壤DNA随机打断,加接头序列构建测序文库,利用Roche 454或Illumina Hiseq系统进行测序反应。 四、生物信息分析: 1.原始数据整理、过滤及质量评估: 应用中科院青能所自主开发的质量控制软件QC-Chain进行原始测序数据的质量控制,去除低质量碱基和read,并进行污染序列的监控(3)。

食品中有害微生物快速检测方法概述

(一)、概述 食用被微生物污染的食品而导致的疾病,称作食源性疾病。导致这类疾病的微生物叫食源性致病菌。随着人们居住和卫生条件的不断改善,以及抗生素的滥用,人类对病菌的抵抗能力却在不断下降,食源性疾病一直呈上升的趋势。因此,对食品中致病菌的监测和检验也就越显示其重要性,常规的检验大多依靠培养目标微生物的方法来确定食品是否受到此微生物的污染,这些方法需要一定的培养时间,少则2~3天,多至数周,才能确定。而现行有效的一些快速检测方法不仅可以大大缩短检测时间提高微生物检出率并可用于微生物计数、早期诊断、鉴定等方面,以做到快速、简便、准确。快速方法包括了微生物学、分子化学、生物化学、生物物理学、免疫学和血清学等领域。 (二)、常见、常用的快速、简便的检测微生物数量的方法如下: 1、活细胞计数的改进方法 (1)、旋转平皿计数方法 (2)、疏水性栅格滤膜法(HGMF)或等格法(isogrid method) (3)、血膜系统(Pertrifilm) (4)、酶底物技术(ColiComplete) (5)、直接外荧光滤过技术(DEFT) (6)、“即用胶”系统(SimPlate) 2、用于估计微生物数量的新方法 (1)、阻抗法 (2)、A TP生物发光技术 3、其他方法 (1)、微量量热法 (2)、接触酶测定仪 (3)、放射测定法 (三)、食品中沙门氏菌的快速筛检方法 1、沙门氏菌显色培养基法 2、免疫学方法 3、分子生物学方法 4、自动传导法 (四)、大肠杆菌O157:H7快速检测方法 大肠杆菌O157:H7肠出血性大肠杆菌的主要血清型,自1982年在美国被分离并命名以来,陆续发现本菌与轻度腹泻、溶血性尿毒综合症、出血性肠炎、婴儿猝死综合症等多种人类病症密切相关,是食源性疾病的一种重要致病菌。E.coli O157:H7属于肠杆菌科埃希氏菌属,为革兰氏阴性杆菌,有鞭毛。近年来作为食品卫生及流行病学的研究热点,E.coli O157:H7的分离和鉴定方法已取得了较大进展。利用其生化特征、免疫原性建立的方法以及现代分子生物学技术的应用,可以从多方面对E.coli O157:H7进行检测。 1、E.coli O157:H7鉴别培养基及显色培养基 2、免疫学检测方法 3、分子生物学方法 (五)、金黄色葡萄球菌的快速检测方法 金黄色葡萄球菌为革兰氏阳性球菌,呈普通串状排列无芽孢,无鞭毛,不能运动。该菌在自然界中分布广泛,如空气、水、土壤、饲料和一些物品上,是最常见的化脓性球菌之一,食品受其污染的机会很多。金黄色葡萄球菌食物中毒是其肠毒引起的,目前已确认的肠毒素至少有A,B,C1,C2,C3,D,E和F8个型。由金黄色葡萄球菌肠毒素引发的中毒爆发事件,近年来

微生物检验报告结果及事项

微生物检验报告结果及事项--青岛科标生物实验室 一、涉及定性项目的检验结果报告 沙门氏菌、志贺氏菌、金黄色葡萄球菌、单核细胞增生李斯特氏菌、大肠杆菌O157:H7、空肠弯曲杆菌、副溶血性弧菌(定性)等,如果检样是称重取样,则最后检测结果一定报告为检出/25g或未检出/25g。如果检样是体积取样,则最后检测结果一定报告为检出/25mL或未检出/25mL。检测标准要求g必须要小写,mL中m必须小写,L则必须大写。记录中所有有用的信息必须填上,无法填充的用“/”划掉。 二、菌落总数检验结果报告 1.菌落总数小于100CFU时,按“四舍五入”原则修约以整数报告,如80.5CFU 可修约报告为81CFU;80.4CFU则修约报告为80CFU。 2.菌落总数大于等于100CFU时,左边数第3位数字采用四舍五入原则修约后,取前2位数字,后面位数用0代替,也可用10的指数形式表示:如10-2两平板平均菌落数为238CFU/g,可修约为240CFU/g,最后报告为24000CFU/g 或2.4×104CFU/g。 3.霉菌、酵母菌、乳酸菌、蜡样芽孢杆菌、产气荚膜梭菌报告形式和菌落总数一样。 4.称重取样以CFU/g为单位报告,体积取样以CFU/mL为单位报告。 三、大肠菌群检验结果报告。 LST初发酵,产酸产气,接种BGLB复发酵后仍产酸产气,则证明样品受到了大肠菌群污染,可检索MPN表,得出相应结果。检测时如果采用(10-1,10-2,10-3)三个稀释度,最后BGLB产气管为(2,0,0),查MPN表可得出大肠菌群检

测值为9.2MPN/g;检测时如果采用(100,10-1,10-2)三个稀释度,最后BGLB 产气管仍为(2,0,0),查MPN表可得大肠菌群检测值为0.92MPN/g;如果采用(10-2,10-3,10-4)三个稀释度,最后BGLB产气管仍然为(2,0,0),查MPN表可得大肠菌群检测值为92MPN/g。称重取样以MPN/g为单位报告,体积取样以MPN/mL为单位报告。大肠杆菌、粪大肠群群、副溶血性弧菌(定量)、总大肠菌群当检出阳性结果时,都会涉及查MPN表,其规律和大肠菌群一样。 四、饮用天然矿泉水中铜绿假单胞菌检验结果报告 根据CN平板上生长的蓝色或绿色菌落的计数和生化确证试验的结果,计算出每250mL水样中的铜绿假单胞菌数量,结果以CFU/250mL报告。 五、饮用天然矿泉水中产气荚膜梭检验结果报告 根据SPS平板上黑色菌落的计数和生化确证试验的结果,计算出每50mL水样中产气荚膜梭菌的数量,结果以CFU/50mL报告。 六、涉及到用29921进行结果判定的项目,每个项目要出5份报告。送检样品用企业标准进行结果判定的,出报告时要参考企标进行出具。 七、阪崎肠杆菌检验结果报告 根据阪崎肠杆菌显色培养基绿色菌落的生长情况和生化确证试验的结果,报告每100g(mL)样品中检出或未检出阪崎肠杆菌。 八、化妆品中粪大肠菌群检验结果报告 根据发酵乳糖产酸产气,EMB平板上有典型菌落,并经证实为革兰氏阴性短杆菌,靛基质试验阳性,则可报告每10g被检样品中检出粪大肠菌群。 九、化妆品中铜绿假单胞菌检验结果报告

食品微生物检测实验室要求

自来水水池至少有两个,工作台,药品试剂柜,超净工作台(无菌室),灭菌锅,培养箱,冰箱,干燥箱,电子天平,显微镜,平皿,试管,三角瓶等玻璃器皿。这些都是必备基本设备,只要能摆放的下就可以。 一、微生物实验室设计 微生物实验室由准备室、洗涤室、灭菌室、无菌室、恒温培养室和普通实验室六部分组成。这些房间的共同特点是地板和墙壁的质地光滑坚硬,仪器和设备的陈设简洁,便于打扫卫生。 二、微生物实验室基本要求(一)准备室 准备室用于配制培养基和样品处理等。室内设有试剂柜、存放器具或材料的专柜、实验台、电炉、冰箱和上下水道、电源等。(二)洗涤室 洗涤室用于洗刷器皿等。由于使用过的器皿已被微生物污染,有时还会存在病原微生物。因此,在条件允许的情况下,最好设置洗涤室。室内应备有加热器、蒸锅,洗刷器皿用的盆、桶等,还应有各种瓶刷、去污粉、肥皂、洗衣粉等。 (三)灭菌室 灭菌室主要用于培养基的灭菌和各种器具的灭菌,室内应备有高压蒸汽灭菌器、烘箱等灭菌设备及设施。(四)无菌室 无菌室也称接种室,是系统接种、纯化菌种等无菌操作的专用实验室。在微生物工作中,菌种的接种移植是一项主要操作,这项操作的特点就是要保证菌种纯种,防止杂菌的污染。在一般环境的空气中,

由于存在许多尘埃和杂菌,很易造成污染,对接种工作干扰很大。1. 无菌室的设置 无菌室应根据既经济又科学的原则来设置。其基本要求有以下几点: (1)无菌室应有内、外两间,内间是无菌室,外间是缓冲室。房间容积不宜过大,以便于空气灭菌。最小内间面积2×2.5=5m2,外间面积1×2=2m2,高以2.5m以下为宜,都应有天花板。 (2)内间应当设拉门,以减少空气的波动,门应设在离工作台最远的位置上;外间的门最好也用拉门,要设在距内间最远的位置上。(3)在分隔内间与外间的墙壁或“隔扇”上,应开一个小窗,作接种过程中必要的内外传递物品的通道,以减少人员进出内间的次数,降低污染程度。小窗宽60cm、高40cm、厚30cm,内外都挂对拉的窗扇。(4)无菌室容积小而严密,使用一段时间后,室内温度很高,故应设置通气窗。通气窗应设在内室进门处的顶棚上(即离工作台最远的位置),最好为双层结构,外层为百叶窗,内层可用抽板式窗扇。通气窗可在内室使用后、灭菌前开启,以流通空气。有条件可安装恒温恒湿机。 2. 无菌室内设备和用具 (1)无菌室内的工作台,不论是什么材质、用途的,都要求表面光滑和台面水平。 (2)在内室和外室各安装一个紫外灯(多为30W)。内室的紫外线灯应安装在经常工作的座位正上方,离地面2m,外室的紫外线灯可

实验3-环境微生物的检测

实验三环境微生物的检测 一、实验目的 1.了解周围环境中微生物的分布情况。 2.懂得无菌操作在微生物实验中的重要性。 3.了解四大类微生物的菌落特征。 二、实验原理 在我们周围的环境中存在着种类繁多的、数量庞大的微生物。土壤、江河湖海、尘埃、空气、各种物体的表面以及人和动物体的口腔、呼吸道、消化道等都存在着各种微生物。由于它们体积微小,人们用肉眼无法观察到它们个体的存在。但是只要稍加留意,我们就可以在发霉的面包、朽木上看到某些微生物群体。这些现象表明,自然界只要有微生物可以利用的物质和环境条件,微生物就可以在其上生长繁殖。据此,我们在实验室里就可以用培养基来培养微生物。 培养基是用人工配制的、适合微生物生长繁殖和产生代谢产物用的混合养料。其中含有微生物所需要的六大营养要素:碳源、氮源、无机盐、生长因子、气体和水分。此外,根据不同的微生物的要求,在配制培养基时还需用酸液或碱液调节至适宜的pH。配制好的培养基必须进行灭菌。所谓灭菌是指采用各类的物理或化学因素,使物体内外的所有微生物丧失其生长繁殖能力的措施。经过灭菌后的物体是无菌的。消毒是与灭菌完全不同的概念,它是指用较温和的物理因素杀死物体表面和内部病原微生物的一种常用的卫生措施。 灭菌的方法较多,广泛使用的是高温灭菌,其中最常用的是高压蒸汽灭菌法。此法是把待灭菌的物品放在一个可密闭的加压蒸汽灭菌锅中进行的。在1.05kg/cm2的蒸汽压力下,温度可达121℃。一般只要维持15~20min,就可杀死一切微生物的营养体和它们的各种孢子。 微生物的接种技术是生物科学研究中的一项最基本操作技术。为了确保纯种不被杂菌污染,在整个接种过程中,必须进行严格的无菌操作。在实验过程中必须牢固树立无菌概念,经常保持实验台及周围环境的清洁,严格无菌操作,避免杂菌的污染,这是保证实验成功的必要条件。

空气中微生物检测

空气中微生物检测 空气中微生物的检测 1。实验目的 本实验中使用的灭菌培养皿在空气中取样并培养一段时间以测定空气中的微生物。其实验意义在于: (1)了解空气中微生物的分布 (2)比较了普通实验室和无菌室空气中存在的微生物的数量和类型 (3)验证微生物实验中无菌操作的重要性二。实验原理 空气是人类维持正常活动的物质条件,与人类健康有着非常密切的关系。随着社会进入信息时代,空气微生物的采样和检测也得到了迅速发展。已经开发了各种快速、灵敏、特异和高度自动化的仪器。为了保持高质量的空气环境,应该使用正确和先进的空气监测方法。在我们周围环境中有大量的微生物空气也不例外。尽管空气不是微生物的良好栖息地然而,由于气流、灰尘和水滴的流动、人类和动物活动等原因,仍然存在相当数量的微生物。 中空气微生物的采集方法很多,主要采用空气微生物采样器采样监测,自然沉降采样法采样。本文介绍了各种采样方法的性能,以便正确选择各种采样方法。空气微生物采样主要涉及四个方面:采样器、采样介质、采样方法和检测程度。空气微生物采样器主要包括:冲击采样器、过滤空气采样器、离心空气采样器、旋风采样器、静电沉降采样器等 当空气中的单个微生物落在适合其生长和繁殖的固体培养基表面

时,在适当温度下培养一段时间后,每个分散的菌体或孢子将形成一个肉眼可见的细胞群体或菌落。通过观察不同大小和形状的菌落,可以大致识别空气中存在的微生物类型。本实验通过检测普通实验室和无菌间空气中存在的微生物,来判断无菌间的消毒效果,了解空气中常见的微生物群。三。实验装置和仪器 1。实验仪器 (1)无菌板,组数(2)酒精灯,恒温箱数×1 (3),数量×2 (4)高压釜(5)干热灭菌器(6)冰箱 (7)板(直径9厘米)(8)量筒(9)烧瓶(10)酸度计2。实验所需试剂 (1)蛋白胨,量10g (2)牛肉膏,量3g (3)氯化钠5g (4)琼脂15-20g (5)蒸馏水1000毫升 4,实验步骤 1。琼脂培养基制备方法:将蛋白胨、牛肉膏、氯化钠、琼脂和蒸馏水混合,加热溶解 ,调至7.4,过滤分装,高压灭菌121℃和20min,用自然沉降法测定时,将约15mL倒入灭菌板中,制成营养琼脂板2.倒置板:培养基按常规方法制备,分成三角瓶,高压灭菌备用使用 前,将培养基融化,冷却至50℃左右,倒入几个盘子备用。 3。检测:首先打开无菌室内的紫外线灯,照射15分钟后关闭。打开上面浓缩了 的无菌平板的皿盖,将皿盖暴露在无菌室空间和普通实验室空间中,分别不移动5min和30min后盖上皿盖每个培养基的平板要求在每个

化妆品微生物检测结果分析

化妆品微生物检测结果分析 [中图分类号]R168[文献标识码]A[文章编号]1005-2720(2009)14-0666-01 [关键词]化妆品;微生物;检测中国保健> 2009年第14期 化妆品是指以涂抹、喷洒或者其他类似方法,散布于人体表面任何部位(皮肤、毛发、指甲、口唇、口腔黏膜等),以达到清洁、消除不良气味、护肤、美容和修饰目的的产品。化妆品成分中含丰富的蛋白质、脂肪、维生素和水分等,极利于微生物的生长和繁殖,容易导致化妆品腐败变质,直接造成人体皮肤感染或者微生物通过使用者的手直接或间接进入消化道,引起肠道传染病。为了解市场销售的化妆品的微生物污染状况,对各化妆品销售商抽检和送检的392份化妆品进行微生物检测,结果如下: 1材料和方法 1.1一般资料:对市场化妆品生产企业和销售商随机抽检和部分送检样品共392份。其中清洁类:清洁霜、面膜、洗发水、护发素、沐浴露、洗面奶、洗手液,共147份(37.5 0%);护肤类:各种润肤膏、霜、蜜、香脂及添加氨基酸、维生素、微量元素、生物括性体等各种营养霜,共150份(38.27%);美容修饰类:胭脂、香粉、唇膏、眼部用化妆品、指甲油、香水、化妆水、煽油、摩丝、喷发胶,共62份(15.82%);特殊用途类:育发、染发、烫发、脱毛、除臭、祛斑、防晒,共33份(8.42%)。 1.2检测项目:菌落总数,粪大肠菌群、金黄色葡萄球菌、铜绿假单胞菌、霉菌和酵母菌总数。 1.3检测方法及评价标准:按《化妆品卫生规范》卫法监发(2007)进行。6项指标中的任何1项超出卫生标准即为不合格产品。 2结果 本次共检测392份化妆品,合格产品379份,总合格率为96.68%。各类化妆品合格率分别为:清洁类95.92%,护肤类96.67%,美容修饰类98.39%,特殊用途类96.97%。在被检测的392份样品中,检出菌落总数超标8份,超标率为2.04%,超标样品主要分布在清洁类和特殊用途类。霉菌和酵母菌超标10份,超标率为2.55%,超标样品分布基本与菌落总数超标样品一致。铜绿假单胞菌、金黄色葡萄球菌未检出。 3讨论 不同种类化妆品检测结果显示:清洁类和特殊用途类育发类合格率最低,菌落超标与原材料消毒不彻底有关。原因是此类化妆品水分含量高,易于细菌生长繁殖;该类化妆品配料中添加了各种营养成分,如蛋白质、氨基酸、微量元素、中草药和各种维生素等,为细菌的生长繁殖创造了条件;另外这类化妆品大多数为中性、弱碱性或弱酸性,为微生物生长提供了良好的环境。而其他类化妆品不适于微生物生长,有的甚至有抑菌作用,故不易检出。

临床微生物检验报告单的解读

首先,准确鉴定病原菌、报告药敏试验结果,给临床选择用药提供科学的参考依据,是我们微生物实验室不可推卸的责任,但在药物的选择和实际应用过程中多了解一些微生物及药理方面的知识,可能会对临床治疗起到事半功倍的效果。特别是在痰及咽拭子的培养鉴定中,由于多种条件致病菌的存在,是否引起感染、是否需要抗菌治疗,都需要临床医生综合分析后判断,以下几点是临床工作中可能会遇到的问题: 1、有些临床常用药物药敏试验中没有 例:头孢哌酮/舒巴坦为广谱抗菌药物,主要用于治疗革兰氏阴性杆菌,如大肠埃希菌等。CLSI 规定其对肠杆菌科细菌的判定折点为≤15 耐药,≥21 敏感,所以我们将其加入到肠杆菌科细菌药敏谱中,但由于头孢哌酮/舒巴坦对葡萄球菌等革兰氏阳性球菌CLSI 没有判定折点,所以无法判定其对于葡萄球菌敏感或是耐药,也不应该加入葡萄球菌药敏试验中。 2、有些新药没有列入药敏谱 首先,新药由于刚刚推广,还没有列入CLSI 的监测范畴,没有依据加以判断。其次,药敏谱中各类各代抗生素都具有一定代表性,不能面面俱到,如喹诺酮类二代抗菌药物环丙沙星在药敏试验中敏感,那么对于三代超光谱抗生素左氧氟沙星、司帕沙星等临床医生可根据需要加以选择。 3、细菌的天然耐药有些菌属或菌种对某些抗菌药物天然耐药或固有耐药,该耐药性具有种属特异性。 ⑴肠球菌:对除青霉素、氨苄西林以外的所有青霉素类、头孢菌素类抗生素天然耐药。 ⑵嗜麦芽窄食单胞菌:对亚胺培南(泰能)、美罗培南天然耐药。 ⑶肺炎链球菌:对氨基糖苷类抗生素天然耐药。 ⑷产气肠杆菌和阴沟肠杆菌:对头孢西丁天然耐药。 ⑸克柔念珠菌:对氟康唑天然耐药。 ⑹肺炎克雷伯菌:对氨苄西林天然耐药。 ⑺铜绿假单胞菌:对氨苄西林、阿莫西林、阿莫西林/棒酸、复方新诺明、头孢 1 代、头孢2 代天然耐药。 更为特殊的是,铜绿假单胞菌对三代的头孢噻肟和头孢曲松即使药敏试验敏感,在实际临床治疗中也需要超大剂量才会取得疗效,但人体对超大剂量的三代头孢不具有长时间的耐药性。铜绿假单胞菌有对很多药物的诱导耐药性,在初期可能没有表现出来,一旦接触某种抗生素,沉睡的基因被激活,耐药性表现出来,这种特性在β-内酰胺类抗生素中尤为明显,可能在体外试验敏感,在实际治疗中却无效,所以采用头孢噻肟和头孢曲松进行治疗时就要冒险,这在临床上是首先要规避的。 充分了解抗菌药物体内疗效与体外药敏试验的差异和药敏试验的局限性,意在找到一定的原因和规律性,在使用广谱抗菌药物之前,应先采集标本送检,再根据药敏试验结果和临床疗效调整给药方案,使临床应用抗菌药物趋向合理,减少用药的盲目性和随意性,提高疑难危重病人的救治成功率。 合理使用抗菌药物需要综合考虑多方面因素,绝不是一份药敏试验报告所能完全概括的,其中的临床思维和临床操作都十分复杂,要想使我们的抗生素应用更加科学、合理、有效,这需要微生物实验室和临床科室的共同努力,我们也将不断学习、更新微生物检测、试验及药理方面的知识,力争为临床科室提供更有价值的参考依据。

临床检验仪器第十章临床微生物检测仪器习题

第十章临床微生物检测仪器 一、名词解释 1.自动血培养检测和分析系统:主要由培养系统和检测系统组成。培养系统包括培养基、恒温装置和震荡培养装置。检测系统由计算机控制,对血培养实施连续、无损伤瓶外监测。通过自动监测培养基中的混浊度、pH 值、代谢终产物CO2 的浓度、荧光标记底物或代谢产物等的变化,定性地检测微生物的存在。 2.检测导电性和电压的血培养系统:血培养基中因含有不同电解质而具有一定导电性。微生物在生长代谢的过程中可产生质子、电子和各种带电荷的原子团 (例如在液体培养基内CO2 转变成CO3- ) ,通过电极检测培养基的导电性或电压 可判断有无微生物生长。 3.应用测压原理的血培养系统:许多细菌生长过程中,常伴有吸收或产生气体现象,如很多需氧菌在胰酶消化大豆肉汤中生长时,由于消耗培养瓶中的氧气而首先表现为吸收气体。而厌氧菌生长时最初均无吸收气体现象,仅表现为产生气体(主要为 CO2),因此可利用培养瓶内压力的改变检测微生物的生长情况。 4.采用光电检测原理的血培养系统:微生物在代谢过程中必然会产生终代谢产 物C O2,引起培养基p H 值及氧化还原电位改变。利用光电比色检测血培养瓶中某 些代谢产物量的改变,可判断有无微生物生长。 5.BacT/Alert自动血培养系统:系统在每个培养瓶底部装置一带含水指示剂的CO2 感受器,当培养瓶内有微生物生长时,其释放出的CO2 可渗透至感受器, 并与感受器指示剂上饱和水发生化学反应,产生游离氢离子使pH 值降低,感 受器上的指示剂由绿变黄。感受器上方的光发射二极管每 10min 发一次光投 射到感受器上,再由一光电探测器测量其产生的反射光。反射光强度传送至 微机后,会自动连续记忆并绘成生长曲线图,由微机分析判断阴性或阳性, 以此确定是否有微生物生长。 6.Bactec9000自动血培养系统:系统利用荧光法作为检测手段,其C O2 感受器上含有荧光物质。当培养瓶中有微生物存在时,产生的C O 可与感受器中的水发生反应 产生H + ,使pH 值降低,酸性环境促使感受器释放出荧光物质。从光发射二极管发射 的光激发荧光感受器而产生荧光。光电比色检测仪每10min 直接对荧光强度进行检测,此荧光强度随C O2 的产生量增多而增强。数据传输到计算机后,生长监测系 统根据荧光的线性增加或荧光产量的增加等特有标准,分析细菌的生长情况,最终判断阳性或阴性。 7.Vital血培养系统:系统采用同源荧光技术来监测微生物的生长。与培养基结合

空气中微生物检测1

一、空气中微生物的检测 一、实验目的 1了解空气中微生物的分布状况,学习空气采样方法 2掌握空气中微生物的检测方法 二实验原理 空气是人类赖以生存的必须环境,也是微生物借以扩散的媒介。空气中存在着细菌、真菌、病毒、放线菌等多种微生物粒子,这些微生物粒子是空气污染物的重要组成部分。空气微生物主要来自于地面及实施、人和动物的蹑手呼吸道、皮肤和毛发等,它附着在空气气溶胶细小颗粒物表面,可较长时间停留在空气中。某些微生物还可以随着空气中细小颗粒穿过人体肺癌存留在肺的深处,给身体健康带来严重危害,也可以随着空气中细小颗粒物被输送到较远地区,给人体带来许多传染性的疾病和上呼吸道疾病。因此,空气微生物含量多少可以反映所在区域的空气质量,是空气环境污染的一个重要参数评价空气的清洁程度,需要测定空气中的微生物数量和空气污染微生物。测定的细菌指标有细菌总数和绿色链球菌,在必要时则测病原微生物。 空气并非微生物的繁殖场所,空气中缺乏水分和营养,紫外线的照射对微生物也有致死作用。微生物产生的孢子本身也可以飘浮到空气中,形成“气溶胶”,借风力传播。 空气中的微生物中,真菌的孢子数量最多,细菌较少。而且藻类、酵母菌、病毒都会存在于空气中。 目前,还无统一的关于空气的卫生学指标,一般以室内1m3 空气中细菌总数为50~1,000个以上作为空气污染的指标。 病原菌在空气中一般很易死亡,但结核菌、白喉杆菌、葡萄球菌、链球菌、肺炎双球菌、炭疽杆菌、流感病毒和脊髓灰质炎病毒等,也可以在空气中存活一段时间。 尘埃多的地方,如畜舍、公共场所、医院、城市街道的空气中,微生物数量较多。高山、海洋、森林、积雪的山脉和高纬度地带的空气中,微生物较少。 在本次实验中测量空气中微生物含量,主要是利用空气的自然沉降法,也有其它方法,如撞击法,过滤法等。 三实验器材 电炉,培养基,培养箱,无菌台 四实验步骤

微生物实验室统计分析方法

一、误差的表示方法 (一)准确度与误差 1.准确度:指测量结果与真值的接近程度 2.误差 (1)绝对误差:测量值与真实值之差 (2)相对误差:绝对误差占真实值的百分比 注:μ未知,δ已知,可用χ代替μ (二)精密度与偏差 1.精密度:平行测量的各测量值间的相互接近程度 2.偏差: (1)绝对偏差 :单次测量值与平均值之差 (2)相对偏差:绝对偏差占平均值的百分比 (3)平均偏差:各测量值绝对偏差的算术平均值 (4)相对平均偏差:平均偏差占平均值的百分比 (5)标准偏差: (6)相对标准偏差(变异系数) (三)准确度与精密度的关系 1. 准确度高,要求精密度一定高,但精密度好,准确度不一定高 2. 准确度反映了测量结果的正确性 精密度反映了测量结果的重现性 练习 例:用丁二酮肟重量法测定钢铁中Ni 的百分含量,结果为 10.48%,10.37%,10.47%,10.43%,10.40%;计算单次分析结果的平均偏差,相对平均偏差,标准偏差和相对标准偏差。 解: x δμ=-%100%100%x RE δμμ μ -=?=?%100% R E x δ = ?i d x x =-100%100% i x x d x x -?= ?n x x d i ∑-=1)(1 2 --= ∑=n x x S n i i x 100%100% xi x d x n x -?= ??∑ 100% x S RSD x = ?0.18%0.036%5i d d n ===∑10.43%x =0.036% 100%100%0.35% 10.43%d x ?=?=

相对标准偏差= 二、可疑数据的取舍 在一组测定值中有时会出现过高或过低的数据,称可疑数据。如测得4个数据:21.30、19.25、19.30和19.32,显然21.30可疑。使人怀疑可能是实验中出现了什么差错,但在计算平均值和标准偏差时不能随意把它舍弃。因舍弃一个测定值要有根据,不能合意者取之,不合意者舍之。 对于舍弃可疑值的问题,曾提出过许多标准,目前用得最多的统计学方法是G-检验法。 G-检验法也称格鲁布斯法(Grubbs ),此法的优点是在判断可疑值的过程中,引入了正态分布的两个最重要的样本参数平均数和标准差(S ),该方法的准确性较好。 G-检验法的检验步骤如下: 计算包括可疑值在内的平均值;计算可疑值与平均值之差;计算包括可疑值在内的标准偏差;用标准偏差除可疑值与平均值之差,得G 值;||X X G S -=;查G 检验临界值表,若计算的G 值大于表中查到的临界值,则把可疑值舍弃。 例 标定一个标准溶液得到4个数据:0.1014、0.1012、0.1019和0.1016mol/L 。用Grubbs 法判断数据0.1019是否应该舍弃。 解 算G 值:|| |0.10190.1015| 1.330.0003 X X G S --= = =可疑 查G 检验临界值表(表1),得到n=4时,0.05G =1.48,因为1.33<1.48,所以0.1019应保留 。 表1 Grubbs 检验部分临界值G (95%的置信度,α=0.05) 三、有限量实验数据的统计检验 在定量分析中,常需要对两组有限的实验数据分析分别得出的结果,或两种分析方法的分析结果的平均值与精密度是否存在着显著性差别作出判断,这些问题都属于统计检验的内容,称显著性检验或差别检验或假设检验。统计检验的方法很多,在定量分析中最常用的是t 检验与F 检验,分别主要用于检验两组或多组分析结果是否存在显著的系统误差与偶然误差等。 4 4.610 0.046% s -== =?=0.046%100%100%0.44% 10.43 s x ?= ?=

药品微生物限度检查结果影响因素分析及控制方法

药品微生物限度检查结果影响因素分析及控制方法 blueski推荐 [2010-3-4] 出处:来自网上 作者:房宇辉董艳丽 摘要:微生物限度检查法系指非规定灭菌制剂及其原、辅料受到微生物污染程度的一种检查方法,包括染菌量及控制菌的检查,是对生产单位所用的药品原料、器具设备、工艺流程、生产环境和操作者的卫生状况进行卫生评价的综合依据。由于微生物限度检查程序繁琐,操作严格,检查周期长,干扰因素多等原因都会造成检验结果误差,这样难...... 微生物限度检查法系指非规定灭菌制剂及其原、辅料受到微生物污染程度的检查方法,包括染菌量及控制菌的检查,是对生产单位所用的药品原料、器具设备、工艺流程、生产环境和操作者的卫生状况进行卫生评价的综合依据。由于微生物限度检查程序繁琐,操作严格,检查周期长,干扰因素多等原因都会造成检验结果误差,样难以对生产做出系统、科学的管理。现就微生物检查时,容易引起误差的几方面原因以及控制方法分析如下。 1 实验者主观因素及操作技能中的误差 1.1 无菌观念淡薄一些操作者认为,微生物限度范围定得宽,多几个、少几个菌对结果影响不大,因此操作马虎、随意,这样容易造成供试品的再次污染以及已污染菌的繁殖及死亡,从而不能真实的反映供试品的染菌情况。因此每一个检验者应明确的了解,在检验过程中的每一个环节,每个空间,每个操作,每个工具及材料,没灭菌者都是带菌者,都会对检验结果产生不确定影响,因而应牢固的建立无菌观念。 1.2 操作技能中误差一些操作者在操作不熟练,及实验条件控制不严格,细节不够注意,每次操作前的消毒处理必须彻底,不得留有死角,对实验所用器具根据材料的性质进行相应的灭菌;开启供试品包装的工具,如剪刀、砂轮等也应消毒,实验用的器具

微生物实验室间比对试验结果分析

微生物实验室间比对试验结果分析 [摘要] 目的通过微生物室间比对,评价其检测结果的准确性,从而带动微生物实验室的质量控制工作及检测能力的提高。方法对2009-2011年发放的考核样品通过场景分析,依据《食品卫生微生物学检验》、《食品安全国家标准食品微生物学检验》等方法进行检测。结果2009年比对样品中检出山夫登堡沙门菌和单核细胞增生李斯特菌;2010年比对样品中检出大肠埃希菌O157:H7和小肠结肠炎耶尔森菌;2011年比对样品中检出奇异变形杆菌和阪崎肠杆菌。结论比对试验有助于实验室检测质量及检测能力的提高。 室间比对是实验室以外的组织和机构对其质量水准进行的评价,可以考察各实验室的检测能力和检验结果的准确性[1]。2009-2011年,仪征市疾控中心连续3年参加了扬通徐镇泰五市联合开展的疾控机构实验室间比对,均获得了满意的结果,现将这3次微生物比对结果分析如下: 1 材料与方法 1.1 样本与要求3次比对试验分别由镇江、泰州及扬州市疾控中心牵头并组织实施,模拟场景描述:均为××年×月×日,某医院的肠道门诊在12或24h内陆续接收到腹泻患者若干名,临床表现:部分患者有发热、感冒、恶心呕吐症状,体温在38.0℃~39.0℃之间波动;患者主诉均在一天前参加宴席或聚餐。当地疾控中心赴现场开展流行病学调查,初步认定是一起由食源性致病菌引起的食物中毒事件,同时采集就诊患者肛拭子送实验室进行检验。比对试验提供的是1份半固体培养基保存的模拟肛拭子样品,样品需要室温保存,于一个星期内检测,要求结合所提供的公共卫生突发事件场景相关信息进行食源性致病菌分离鉴定。1.2 试剂所用干粉培养基、血平板、细菌生化鉴定管为杭州天和微生物试剂有限公司及北京陆桥技术有限责任公司生产;科玛嘉显色培养基购于郑州博赛生物技术股份有限公司;诊断血清为兰州生物制品研究所生产;API20E微生物鉴定试纸条及配套试剂购于法国梅里埃中国有限公司。所有检测试剂均在有效期内。 1.3 检测标准依据《食品卫生微生物学检验》[2]、《食品安全国家标准食品微生物学检验》[3]、变形杆菌食物中毒诊断标准及处理原则(WS/T 9-1996)[4]、感染性腹泻的诊断标准及处理原则(GB17012-1997)[5]、扬通徐镇泰实验室间比对试验作业指导书(微生物部分)。 1.4 方法 1.4.1 2009年比对样品将检样直接接种于血平板、SS、TCBS、EMB、山梨醇麦康凯上,36.5℃培养22h,除血平板上生长两种菌落外,其余选择性培养基均为一种菌落生长,将此菌株定为1号菌,血平板上生长较慢细小菌落定为2号菌,继续培养至48h, 挑取单个菌落转种血平板分离培养20h,转种科玛嘉李斯特菌显色培养基,36.5℃培养48h,挑取1号菌接种TSI斜面培养基,TCBS上的单个菌落接种3.5%NacL TSI斜面培养基,36.5℃培养20h。 1.4.2 2010年比对样品将检样直接接种于血平板、SS、EMB、山梨醇麦康凯、科玛嘉李斯特菌显色培养基、科玛嘉弧菌显色培养基上,36.5℃培养24h,除科玛嘉显色培养基上无菌生长外,其余选择性培养基上均有两种菌落生长,分别编以1、2号菌。挑取单个菌落接种于TSI斜面培养基上,36.5℃培养21h。 1.4.3 2011年比对样品将检样直接接种于血平板、SS、山梨醇麦康凯、TSA、EMB、普通营养琼脂、科玛嘉李斯特菌显色培养基、科玛嘉弧菌显色培养基、科玛嘉O157显色培养基、沙门菌属显色培养基上,36.5℃培养24h,四种显色培养基上均无菌落生长,其余培养基上均有两种菌落生长,分别编以1、2号菌。挑取单个菌落接种于TSI斜面培养基上,36.5℃培养24h。 2 结果

微生物检验报告的解读

微生物检验报告的解读 首先,准确鉴定病原菌、报告药敏试验结果,给临床选择用药提供科学的参考依据,是我们微生物实验室不可推卸的责任,但在药物的选择和实际应用过程中多了解一些微生物及药理方面的知识,可能会对临床治疗起到事半功倍的效果。特别是在痰及咽拭子的培养鉴定中,由于多种条件致病菌的存在,是否引起感染、是否需要抗菌治疗,都需要临床医生综合分析后判断,以下几点是临床工作中可能会遇到的问题: 1、有些临床常用药物药敏试验中没有 例:头孢哌酮/舒巴坦为广谱抗菌药物,主要用于治疗革兰氏 阴性杆菌,如大肠埃希菌等。CLSI规定其对肠杆菌科细菌的判定折点为≤15耐药,≥21敏感,所以我们将其加入到肠杆菌科细菌药敏谱中,但由于头孢哌酮/舒巴坦对葡萄球菌等革兰氏阳性球菌CLSI没有判定折点,所以无法判定其对于葡萄球菌敏感或是耐药,也不应该加入葡萄球菌药敏试验中。 2、有些新药没有列入药敏谱 首先,新药由于刚刚推广,还没有列入CLSI的监测范畴,没有依据加以判断。其次,药敏谱中各类各代抗生素都具有一定代表性,不能面面俱到,如喹诺酮类二代抗菌药物环丙沙星在药敏试验中敏感,那么对于三代超光谱抗生素左氧氟沙星、司帕沙星等临床医生可根据需要加以选择。 3、细菌的天然耐药 有些菌属或菌种对某些抗菌药物天然耐药或固有耐药,该耐药性具有种属特异性。 ⑴肠球菌:对除青霉素、氨苄西林以外的所有青霉素类、头孢 菌素类抗生素天然耐药。 ⑵嗜麦芽窄食单胞菌:对亚胺培南(泰能)、美罗培南天然耐药。 ⑶肺炎链球菌:对氨基糖苷类抗生素天然耐药。 ⑷产气肠杆菌和阴沟肠杆菌:对头孢西丁天然耐药。 ⑸克柔念珠菌:对氟康唑天然耐药。 ⑹肺炎克雷伯菌:对氨苄西林天然耐药。 ⑺铜绿假单胞菌:对氨苄西林、阿莫西林、阿莫西林/棒酸、复 方新诺明、头孢1代、头孢2代天然耐药。 更为特殊的是,铜绿假单胞菌对三代的头孢噻肟和头孢曲松即使药敏试验敏感,在实际临床治疗中也需要超大剂量才会取得疗效,但人体对超大剂量的三代头孢不具有长时间的耐药性。铜绿假单胞菌有对很多药物的诱导耐药性,在初期可能没有表现出来,一旦接触某种抗生素,沉睡的基因被激活,耐药性表现出来,这种特性在β-内酰胺类抗生素中尤为明显,可能在体外试验敏感,在实际治疗中却无效,所以采用头孢噻肟和头孢曲松进行治疗时就要冒险,这在临床上是首先要规避的。 充分了解抗菌药物体内疗效与体外药敏试验的差异和药敏试验的局限性,意在找到一定的原因和规律性,在使用广谱抗菌药物之前,应先采集标本送检,再根据药敏试验结果和临床疗效调整给药方案,使临床应用抗菌药物趋向合理,减少用药的盲目性和随意性,提高疑难危重病人的救治成功率。 合理使用抗菌药物需要综合考虑多方面因素,绝不是一份药敏试验报告所能完全概括的,其中的临床思维和临床操作都十分复杂,要想使我们的抗生素应用更加科学、合理、有效,这需要微生物实验室和临床科室的共同努力,我们也将不断学习、更新微生物检测、试验及药理方面的知识,力争为临床科室提供更有价值的参考依据。

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