水产品中孔雀石绿快速检测方法
水产品中孔雀石绿快速检测方法
组织检测步骤：
鱼虾等去皮、脂肪，用均质器均质样本，称取2±0.05g均质物于15ml离心管；加入1瓶去脂试剂，振荡2min，室温4000rpm，离心3min。倒掉上清液，把肉样弄松散（若要做添加实验，请在此刻加入添加物）；加入1瓶提取剂A，立即摇匀，然后加入1瓶提取剂B，充分振荡混合5min，室温4000rpm，离心5min；取上层有机层4ml到15ml离心管中，加入20ul衍生化试剂，涡旋1min，加入4ml净化剂，颠倒混匀1min，静置1min；取下层（溶液显紫红色）2ml，55℃下使用便携式空气吹干仪吹干；然后加入0.5ml缓冲液剧烈涡旋2min，待检。
检测:从包装中取出微孔，用移液器吸取待检液体80ul至微孔中充分吸打均匀，然后全部滴加至检测卡加样孔（检测卡平放），静置8-15分钟，根据示意图判读结果（见彩图）水样检测步骤：
①用移液器吸取80μl样本液至样品孔中。
②静置5-8分钟，根据示意图判读结果。
结果判定及示意图：
在试纸卡的中央判读区喷有2条线，上面一条为对照线(C线)，下面一条为测试线(T线)。若样品液中孔雀石绿的浓度小于检测限时，则T线显色比C线强，或显色与C线相近；若样品液中孔雀石绿的浓度大于检测限时，则T线显色比C线浅很多或T线显绿色。
实验设备：
1、孔雀石绿快速检测卡；
2、PRO-12L空气吹干仪;
3、HH-1水浴锅；
4、80-2离心机；
5、均质器；
6、掌上电子天平
高效液相色谱法检测水产品中的孔雀石绿和结晶紫
第29卷 第1期 广东海洋大学学报 V ol.29 No.1 2009年2月 Journal of Guangdong Ocean University Feb. 2009 收稿日期：2008-10-10 基金项目：广东省重大科技兴海项目（B200701A06） 第一作者：吴仕辉（1980－），女，硕士，研究实习员，从事水产品质量安全研究。E-mail ：wshxjw@https://www.360docs.net/doc/5d12004631.html, 高效液相色谱法检测水产品中的孔雀石绿和结晶紫 吴仕辉，朱新平，郑光明，陈昆慈，戴晓欣，潘德博 （中国水产科学研究院珠江水产研究所，广东 广州，510380) 摘 要：样品中的孔雀石绿、结晶紫经试剂盒提取，浓缩后用经固相萃取柱净化、硼氢化钾还原、反向色谱柱分离，使用荧光检测器检测，孔雀石绿、结晶紫的加标回收率在76.1 %～92.5 %之间，相对标准偏差1.9 %～5.8 %，检出限均为0.5 μg/kg 。结果表明：该方法检测孔雀石绿（MG ）、结晶紫（GV ）处理简单，灵敏度高，节省时间，可用于大量样品的快速分析。 关键词：水产品；孔雀石绿；结晶紫；检测；高效液相色谱法（HPLC ） 中图分类号：S948 文献标志码：A 文章编号：1673-9159(2009)01-0054-04 Determination of Malachite Green and Gentian Violet Residues in Fishery Products by High Performance Liquid Chromatography(HPLC) with Fluorescence Detector WU Shi-hui, ZHU Xin-ping, ZHENG Guang-ming, CHEN Kun-ci, DAI Xiao-xin, PAN De-bo (Pearl River Fishery Research Institute , Chinese Academic of Fishery Science , Guangzhou , 510380 Chin a ) Abstract: M alachite green and gentian violet residues in fishery products were determined by high performance liquid chromatography method coupled with fl uorescence detector. Samples were extracted by pre-treatment kit for extraction of MG, LMG, GV, LGV and purified by solid-phase extraction cartridges. After concentrated, samples were deoxidized by potassium borohydride. The MG and GV were detected with FLD detector after C18 column separation. The recoveries for fortified fish tissue were 76.1 %～92.5 %, The relative standard deviation(RSD) values for repeatability were 1.9 %～5.8 %．The detection limit for MG and CV was 0.5 μg/kg, respectively. Key words: fisher product ；malachite green ；gentian violet ; detection ; HPLC 孔雀石绿、结晶紫属于三苯甲烷类染料，这两种化合物对鱼类的水霉病、寄生虫病等有很好的疗效，长期以来许多国家曾将其作为水产养殖业的杀菌剂。它们在鱼体内可分别代谢为无色孔雀石绿和无色结晶紫，由于其母体化合物和代谢物均具有潜在的致癌、致畸、致突变等副作用，20世纪90年代以来许多国家都将其列为水产养殖的禁用药物。但是由于其抗菌效果好、价格便宜，不少业户仍在违规使用，因此孔雀石绿残留监控就显得格外重要。 目前孔雀石绿、结晶紫及其代谢物的检测方法 主要有高效液相色谱法[1-3]和液质联用法[4-5]。我国于2006年发布有关的水产行业标准（SN/T1768- 2006）[6]及国家标准（GB/T20361-2006）[7]。行业标准SN/T1768-2006前处理简单，但是满足不了检测限0.5 μg/kg 的要求。其他方法的前处理均需多次萃取，多次离心，操作烦琐，前处理时间长，有机溶剂用量大，实际检测工作中存在困难。本文综合各个方法标准中快速和灵敏的优点，建立了同时检测孔雀石绿及代谢物无色孔雀石绿总量，结晶紫以及代谢物无色结晶紫总量的液相色谱方法。
DB13T1358-2011养殖用水中孔雀石绿快速测定方法激光拉曼光谱法
ICS65.150 B 50 DB13 河北省地方标准 DB 13/T 1358—2011 养殖用水中孔雀石绿快速测定方法 激光拉曼光谱法The qualitative determination of malachite green in aquiculture water by surface-enhanced laser raman spectrometry 2011-01-28发布2011-02-28实施
前言 本标准由GB/T 1.1—2009给出的规则起草。 本标准由河北省质量技术监督局提出并归口。 本标准起草单位：河北省食品质量监督检验研究院、欧普图斯光学纳米科技有限公司、国家果类及农副加工产品质量监督检验中心 本标准主要起草人：李挥、张敬轩、张会军、张岩、刘春伟、贾茜、范斌、李强、庞坤
养殖用水中孔雀石绿快速测定方法 激光拉曼光谱法 1 范围 本标准规定了利用激光拉曼光谱法快速检测水产品养殖、销售用水或其他水体中微痕量孔雀石绿的定性定量检测方法。 本标准适用于水产品养殖、销售用水或其他水体中孔雀石绿的激光拉曼光谱法的现场快速筛查检测。 本方法在水中孔雀石绿的定量限为5.0μg/L。 2 规范性引用文件 下列文件对于本文件的应用是必不可少的。凡是注日期的引用文件，仅所注日期的版本适用于本文件。凡是不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用于本文件。 GB/T 6682分析实验室用水规格和实验方法（GB/T 6682—2008，ISO 3696:1987，MOD）。 3 原理 试样经高速离心后直接测定。样品中的孔雀石绿分子与表面增强试剂混合后，分子吸附在表面增强纳米颗粒上，其拉曼散射信号可增强106倍以上，使用便携式激光拉曼检测仪通过自动判别其特征峰即可定性检测出孔雀石绿。通过对测定的拉曼谱图进行基线调整和归一化处理，应用外标法可进行定量分析。 4 试剂与材料 除另有规定，所有试剂均为分析纯，水为GB/T 6682规定的三级水。 4.1 孔雀石绿标准品：CAS 2437-29-8，纯度大于99％。 4.2 表面增强试剂：OTR201，银纳米溶胶，或相当者。 4.3 无机盐凝聚剂：1％ 氯化钠水溶液。 4.4 无机盐离子促进剂：2％ 溴化钾水溶液。 4.5 孔雀石绿标准溶液（1 000 μg/mL）：准确称取0.1 000 g孔雀石绿标准品，用乙腈溶解后，定容到100 mL，4℃避光保存。 5 仪器与设备 5.1 激光拉曼光谱仪。 5.2 高速离心机：转速不低于14 000 r/min（转/分钟）。 6 分析步骤
石墨烯材料拉曼光谱测试详解
2004年英国曼彻斯特大学的A.K.Geim领导的小组首次通过机械玻璃的方法成功制备了新型的二维碳材料-石墨烯（graphene）。自发现以来，石墨烯在科学界激起了巨大的波澜，它在各学科方面的优异性能，使其成为近年来化学、材料科学、凝聚态物理以及电子等领域的一颗新星。 就石墨烯的研究来说，确定其层数以及量化无序性是至关重要的。激光显微拉曼光谱恰好就是表征上述两种性能的标准理想分析工具。通过测量石墨烯的拉曼光谱我们可以判断石墨烯的层数、堆垛方式、缺陷多少、边缘结构、张力和掺杂状态等结构和性质特征。此外，在理解石墨烯的电子声子行为中，拉曼光谱也发挥了巨大作用。 石墨烯的典型拉曼光谱图 石墨烯的拉曼光谱由若干峰组成，主要为G峰，D峰以及G’峰。G峰是石墨烯的主要特征峰，是由sp2碳原子的面内振动引起的，．ｇｌｔ９１０．ｃｏｍ它出现在1580cm-1附近，该峰能有效反映石墨烯的层数，但极易受应力影响。D 峰通常被认为是石墨烯的无序振动峰，该峰出现的具体位置与激光波长有关，它是由于晶格振动离开布里渊区中心引起的，用于表征石墨烯样品中的结构缺陷或边缘。G’峰，也被称为2D峰，是双声子共振二阶拉曼峰，用于表征石墨烯样品中碳原子的层间堆垛方式，它的出峰频率也受激光波长影响。举例来说，图1[1]为514.5nm激光激发下单层石墨烯的典型拉曼光谱图。其对应的特征峰分别位于1582cm-1附近的G峰和位于2700cm-1左右的G’峰，如果石墨烯的边缘较多或者含有缺陷，还会出现位于1350cm-1左右的D峰，以及位于1620cm-1附近的D’峰。
图1 514nm激光激发下单层石墨烯的典型拉曼光谱图[1] 当然对于sp2碳材料，除了典型的拉曼G峰，D峰以及G’峰，还有一些其它的二阶拉曼散射峰，大量的研究表明石墨烯含有一些二阶的和频与倍频拉曼峰，这些拉曼信号由于其强度较弱而常常被忽略。如果对这些弱信号的拉曼光谱进行分析，也可以很好地对石墨烯中的电子-电子、电子-声子相互作用及其拉曼散射过程进行系统的研究。 石墨烯拉曼光谱与层数的关系 多层和单层石墨烯的电子色散不同，导致了拉曼光谱的明显差异。图2 [1,2]为532nm激光激发下，SiO2（300nm）/Si基底上1~4层石墨烯的典型拉曼光谱图，由图可以看出，单层石墨烯的G’峰尖锐而对称，并具有完美的单洛伦兹（Lorentzien）峰型。此外，单层石墨烯的G’峰强度大于G峰，且随着层数的增加，G’峰的半峰宽（FWHM：full width at half maximum）逐渐增大且向高波数位移（蓝移）。双层石墨烯的G’峰可以劈裂成四个洛伦兹峰，其中半峰宽约为24cm-1。这是由于双层石墨烯的电子能带结构发生分裂，导带和价带均由两支抛物线组成，因此存在着四种可能的双共振散射过程（即G’峰可以拟合成四个洛伦兹峰）。同样地，三层石墨烯的G’峰可以用六个洛伦兹峰来拟合。此外，不同层数的石墨烯的拉曼光谱除了G’峰的不同，G峰的强度也会随着层数的增加而近似线性增加（10层以内，如图3[3]所示），这是由于在多层石墨烯中会有更多的碳原子被检测到。综上所述，1~4层石墨烯的G峰强度有所不同，且G’峰也有其各自的特征峰型以及不同的分峰方法，因此，G峰强度和G’峰的峰
孔雀石绿检测卡说明书——组织
孔雀石绿免疫胶体金快速检测卡使用说明本产品用于快速检测水产品组织样品中的孔雀石绿残留，整个检测过程只需要40分钟左右，适用于各类企业及检测机构,本产品检测限如下表所示 1、检测原理： 孔雀石绿快速检测卡应用了竞争抑制免疫层析的原理，样品中的孔雀石绿在流动的过程中与胶体金标记的 特异性单克隆抗体结合，抑制了抗体和NC膜检测线（T）上孔雀石绿－蛋白偶联物的结合。如果样品中孔雀石 绿含量大于1ppb，检测线（T）不显颜色或者检测线（T）比质控线（C）浅两个色差以上（含两个），结果为阳 性；反之，检测线（T）显红色，结果为阴性。 需自备设备： 均质器；电子天平；称量勺；离心机；氮（空）气吹干仪；微量移液器。 3、样品处理： 组织样（虾要去掉头和壳后彻底清洗干净，鱼要去鳞后洗净）应当避光冷藏保存。 1.取切碎的一定量的组织样本，用均质器均质； 2.称取2ｇ均质于1５ｍｌ离心管中； 3.用微量移液器加入1.5ｍｌＭＧ提取剂１，然后加入4ml ＭＧ提取剂２和１管ＭＧ提取剂３于1５ｍｌ离心管中。 4.剧烈振荡3min后，加入一管MG提取剂4，剧烈振荡1分钟后，室温下4000r/min离心5min; 5.用微量移液器移取3ml上清于15ml离心管中，用微量移液器加入1ml正己烷，上下颠倒6次，室温4000r/min离心1min, 用微量移液器移取离心管刻度1ml到3ml之间的液体（大约2ml）到新的5ml离心管中，再加入MG氧化剂瓶内的下层黄色液体0.1ml,混合均匀1分钟后，65℃加热条件下，用空气吹干； 6.用微量移液器向吹干的离心管中加入300ulMG复溶液，用微量移液器冲洗溶解试管内壁上残留物；静置2分钟； 7.吸取待检样品溶液100微升于金标微孔中，用小滴管吹打完全溶解孔内红色物质，等待反应5分钟。 4、使用步骤： 1. 在进行测试前先完整阅读使用说明书，使用前将试剂板和待检样本溶液恢复至室温（20℃~25℃）； 2. 从原包装袋中取出试剂板，水平放置于观察者正面，如下图右侧所示（打开后请立即使用）； 3. 吸取待检样品溶液60～80微升于加样孔中（滴管滴3滴），加样后开始计时； 4. 结果应在8～10分钟读取，其他时间判读无效。
拉曼光谱实验报告
拉曼光谱实验报告 拉曼光谱（Raman spectra）以印度科学家C.V.拉曼（Raman）命名，是一种分子结构检测手段。拉曼光谱是散射光谱，通过与入射光频率不同的散射光谱进行分析以得到分子振动、转动方面信息。以横坐标表示拉曼频移，纵坐标表示拉曼光强，与红外光谱互补，可用来分析分子间键能的相关信息。 图1：印度科学家拉曼 一、拉曼光谱原理 拉曼效应：起源于分子振动(和点阵振动)与转动，因此从拉曼光谱中可以得到分子振动能级(点阵振动能级)与转动能级结构的知识。 拉曼效应是光子与光学支声子相互作用的结果。光照射到物质上发生弹性散射和非弹性散射。 弹性碰撞：光子和分子之间没有能量交换，仅改变了光子的运动方向，其散射频率等于入射频率，这种类型的散射在光谱上称为瑞利散射。
非弹性碰撞：光子和分子之间在碰撞时发生了能量交换，即改变了光子的运动方向，也改变了能量。使散射频率和入射频率有所不同。此类散射在光谱上被称为拉曼散射。 图2：拉曼散射示意图 物质与光的相对作用分为三种：反射，散射和透射。根据这三种情况，衍生出相对应的光谱检测方法：发射光谱（原子发射光谱（AES）、原子荧光光谱（AFS）、X射线荧光光谱法（XFS）、分子荧光光谱法（MFS）等），吸收光谱（紫外－可见光法（UV-Vis）、原子吸收光谱（AAS）、红外观光谱（IR）、核磁共振（NMR）等），联合散射光谱（拉曼散射光谱（Raman））。拉曼光谱应运而生。
表1：光谱种类区分表 拉曼频移（Raman shift）：拉曼光谱的横坐标称作拉曼频移。拉曼散射分为斯托克斯散射和反斯托克斯散射，通常的拉曼实验检测到的是斯托克斯散射，拉曼散射光和瑞利光的频率之差值称拉曼频移（Raman shift）：Δν=| ν0 –νs |, 即散射光频率与激发光频之差。Δv取决于分子振动能级的改变，所以他是特征的，并且拉曼光谱与入射光波长无关，适应于分子结构的分析。 二、拉曼发展历史 1922年，斯梅卡尔预言新的谱线频率与方向都发生改变。 1928年，拉曼在气体与液体中观测到一种特殊光谱的散射，也因此获1930年诺贝尔物理奖。 同年，曼迭利斯塔姆、兰兹贝尔格在石英中观测到拉曼散射。 1928~1940年，受到广泛的重视，曾是研究分子结构的主要手段。 1940~1960年，拉曼光谱的地位一落千丈。主要是因为拉曼效应太弱，当时测试对样品测试的各项要求较为苛刻，拉曼光谱的应用一度衰落。 1960年以后，激光技术发展，激光成为拉曼光谱的理想光源，随着不断改进，拉曼光谱广泛应用，越来越受研究者的重视。 三、拉曼测试
水产品中孔雀石绿检测方法研究进展
福建水产,2007年3月第1期NO.1 JOURNAL OF FUJI AN F IS HER IES M ar .26.2007 水产品中孔雀石绿检测方法研究进展 刘海新,张 农,钱卓真 (福建省水产研究所,福建厦门361012) 摘要:水产品的安全问题日益成为社会关注的焦点,近年来,我国出口的鳗鲡以及国内市场上的水产品都发现了孔雀石绿残留。国内各有关检测机构相继开展了水产品中孔雀石绿残留量的检测。本文对现有的各种检测方法的优点和局限性作一概述,以便研究者能在此基础上进一步改进和发展。 关键词:水产品;孔雀石绿;检测 1 孔雀石绿的特性与危害 孔雀石绿(M alachite green ,MG )属三苯甲烷类染料,化学名称为:四甲基代二氨基三苯甲 烷,结构见图1。在水产养殖中 ,孔雀石绿主要 用来抗真菌感染和杀灭寄生虫,鱼类一般用于防治水霉病、烂鳃病以及寄生虫等。其价格低廉, 疗效显著,当前还找不到一种特效药完全取代孔雀石绿,因此曾经在水产养殖业中广泛应用 [1] 。 孔雀石绿进入水生动物体内后,会快速代谢成脂溶性的无色孔雀石绿(Leuco m a lach ite green ,L MG ),结构见图1。据Berg w erff [2] 等的研究,对欧鳗(Anguilla anguilla )采用孔雀石绿0 1mg L -1 药浴处理24h 。药浴开始6h 后,鳗鱼体内孔雀石绿残留到达峰值,药浴处理后72h ,体内90%孔雀石绿被代谢,720h 后有些鱼体中已检测不出孔雀石绿残留,1920h 后所有鱼体中都检测不出孔雀石绿残留。而无色孔雀石绿在药浴处理后72h 达到峰值,然后缓慢代谢,720h 后只代谢了50%,2400h 后仍然可检测出鱼体肌肉中有15 12 g kg -1 的无色孔雀石绿残留。 孔雀石绿具有潜在的致癌、致畸、致突变的作用,其在养殖业中的使用未得到美国食品与药物管理局(FDA )的认可[3] ;根据欧盟法案 2002/675/EC 规定 [4] ,动物源性食品中孔雀石绿 和无色孔雀石绿残留总量限制为2 g kg -1 ;日本的肯定列表也明确规定在进口水产品中不得检出孔雀石绿残留;我国在农业行业标准《NY5071-2002无公害食品鱼药使用准则》中也将孔雀石绿列为禁用药物。 2005年,福建、江西、安徽等省出口欧盟、日本、韩国的鳗鱼产品先后被检出孔雀石绿残留,我国水产品出口因此受严重影响;2006年,上海市场上的多宝鱼和香港市场上的桂花鱼,也
拉曼光谱常见问题汇总
拉曼光谱问题汇总 问题目录 一、测试了一些样品，得到的是Ramanshift，但是文献是wavenumber，不知道它们之间的转换公式是怎么样的？激光波长632.8nm。 二、如何用拉曼光谱仪测透明的有机物液体，测试时放到了玻璃片上测出来的结果是玻璃的光谱。 三、我们这里有做生物样品的拉曼光谱的，在获得的图里面有很强的荧光，有的说，如果拉曼得不到就用其荧光谱。可我想问一下，在拉曼谱里面得到的荧光背景，是真正的荧光特征谱吗？这和荧光光谱仪里面的荧光图有什么区别？ 四、什么是共焦显微拉曼光谱仪? 五、请问，测固体粉末的拉曼图谱时，对于荧光很强的物质，应该如何处理？特别是当荧光将拉曼峰湮灭时，应该怎么办？增加照射时间的方法，我试过，连续照射了4小时，结果还是有很强的荧光。我只有一台532nm的激光器，所以更换激光波长的方法目前我不能用。想问问各位，还有别的方法吗？ 六、请问用激光拉曼仪能测量薄膜的厚度、折射率及应力吗？它能对薄膜进行那些方面的测量呢？ 七、拉曼做金属氧化物含量的下限是多少? 我有一几种氧化物的混合物，其中MoO3含量只有5%，XRD检测不到，拉曼可以吗？ 八、小弟是刚涉足拉曼这个领域，主打生物医学方面。实验中，发现温度不同时，拉曼好像也不一样。不知到哪位能帮忙解释一下这个现象 九、文献上说，拉曼的峰强与物质的浓度是成正比关系，那么比如我配置1mol/L的某溶液，和0.5mol/L的溶液，其峰强度是正好一半的关系吗？应用拉曼，是否能采用峰积分，或者用近红外那样的多元统计的办法来定量吗？准确度怎么样？ 十、拉曼峰1640对应的是什么东西啊？无机的 十一、1 红外分析气体需要多高的分辨率？ 2 拉曼光谱仪是否可分析纯金属？ 3 红外与拉曼联用，BRUKER和NICOLET哪个好些？ 十二、我想请问一下这里的高手测定过渡金属络合物水溶液中金属与有机物中的某个原子是否成键可以用拉曼光谱分析吗？ 十三、金红石和锐钛矿对紫外Raman的响应差别大不大？同样条件下的金红石和锐钛矿的Raman峰会不会差很多？ 十四、什么是3CCD？ 十五、请教我所作的实验是用柠檬酸金属盐溶胶拉制成纤维，想做一下拉曼光谱来证明是否有线性分子的存在，可以吗 十六、在测量拉曼光谱仪的灵敏度参数时，有人提出，单晶硅的三阶拉曼峰的强度跟硅分子的取向（什么111，100之类）的有关，使用不同取向的硅使用与其相匹配的激光照射时，其强度严重不一样，是这样吗？不知道大家测量激光拉曼光谱仪的灵敏度时都是怎么测量的 十七、请问如何进行拉曼光谱数据处理？ 十八、拉曼系统自检具体是检测哪些硬件？是个什么过程？ 十九、请教作激光拉曼测试，样品如何预处理？ 二十、请问激光拉曼光谱是什么意思？ 二十一、请教喇曼谱实验时，如何选择激发波长，1064nm?还是785nm或633nm? 二十二、拉曼信号对入射角和出射角的响应又是什么样？我的样品是有衬底支持的薄膜样品（膜厚几百纳米--几微米），怎样扣除衬底的影响？ 二十三、微区拉曼和普通拉曼有区别吗，尤其在图谱上？多晶，单晶和非晶拉曼有何区别？ 二十四、我是做复合材料的研究的，主要是想研究纤维增强复合材料的界面性能？ 二十五、学校有一套天津港东的拉曼光谱仪，计划给学生开一个测量固体（或粉末）拉曼光谱的实验。试了几种材料都不明显，各位高人能推荐几种容易找到的象四氯化碳拉曼光谱那么明显的固体，晶体，或者粉末吗？ 二十六、我们研究小组新近涉及碳纳米管的领域。由于纳米管的Raman信号很弱，就是要重复不断的测试才能在1600cm－1的附近得到峰。请问具体操作条件应该怎么选。如laser的功率，解析度，扫描数scannumber等等，我们用的Raman仪器是(Brucker, RFS-100/S)。 二十七、激光拉曼光谱仪应该可以实现快速的定量分析，但经过前段时间一些咨询，使我对其是否可进行快速分析颇存疑问，尤其是气体分析。请问，一般来说分析一次样品（气体或固体）的时间是多长
拉曼光谱检测
浅谈拉曼光谱检测
浅谈拉曼光谱检测一、拉曼光谱简介 拉曼技术在一个世纪里发展成为一门较成熟的科学，取决于它产生的机制和光谱表征的特性。 拉曼光谱（Raman spectra），是一种散射光谱。拉曼光谱分析法是基于印度 光谱中发现了当光与分子相互作科学家C.V.拉曼（Raman）于1928年首先在CCL 4 用后，一部分光的波长会发生改变（颜色发生变化），通过对于这些颜色发生变化的散射光的研究，可以得到分子结构的信息，因此这种效应命名为Raman效应。 拉曼光谱是由物质分子对光源的散射产生的，与分子的振动与转动能级的变化有关，来源于分子极化度的变化，是由有对称电荷分布的键的对称振动引起的。如-C=C-、-N=N-及-S-S-等，这些键振动时偶极矩不发生变化。因此，拉曼光谱常用于研究非极性基团与骨架的对称振动。 拉曼光谱是由物质分子对光源的散射产生的，与分子的振动与转动能级的变化有关，来源于分子极化度的变化，是由有对称电荷分布的键的对称振动引起的。如-C=C-、-N=N-及-S-S-等，这些键振动时偶极矩不发生变化。因此，拉曼光谱 常用于研究非极性基团与骨架的对称振动。
当用波长比试样粒径小得多的单色光照射气体、液体或透明试样时，大部分的光会按原来的方向透射，而一小部分则按不同的角度散射开来，产生散射光。在垂直方向观察时，除了与原入射光有相同频率的瑞利散射外，还有一系列对称分布着若干条很弱的与入射光频率发生位移的拉曼谱线，这种现象称为拉曼效应。由于拉曼谱线的数目，位移的大小，谱线的长度直接与试样分子振动或转动能级有关。因此，对拉曼光谱的研究，也可以得到有关分子振动或转动的信息。目前拉曼光谱分析技术已广泛应用于物质的鉴定，分子结构的研究谱线特征。 二、拉曼光谱的原理及其特点 （1）拉曼光谱的原理 拉曼效应的振动能级图 拉曼散射是光照射到物质上发生的非弹性散射所产生的。当一束光照射到物质上时，光子和物质发生弹性散射和非弹性散射，弹性散射的散射光波长与激光波长相同。在非弹性碰撞过程中，光子与分子之间发生能量交换，光子不仅仅改变运动方向，同时光子的一部分能量传递给分子，或者分子的振动和转动能量传递给光子，从而改变了光子的频率，这种散射过程称为拉曼散射。非弹性散射的散射光称为拉曼效应。拉曼散射分为斯托克斯散射和反斯托克斯散射。 拉曼效应起源于分子振动（点阵振动）与转动，因此从拉曼光谱中可以得到分子振动能级（点阵振动能及）与转动能级结构的信息。用虚的上能级概念可以说明拉曼效应，如上图。假设散射物分子原来处于基电子态，当受到入射光照射时，激发光与此分子的作用引起的极化可以看作为虚的吸收，表述为调子跃迁到
拉曼光谱仪的原理和结构-科邦实验室
拉曼光谱仪的原理及结构 拉曼光谱分析法是基于印度科学家C.V.拉曼(Raman)所发现的拉曼散射效应，对与入射光频率不同的散射光谱进行分析以得到分子振动、转动方面信息，并应用于分子结构研究的一种分析方法。作为分子光谱领域最为活跃的仪器类别之一，拉曼光谱仪器的应用也越来越光。下面小编，给您介绍一下拉曼光谱分析仪的原理及结构。 1.激光拉曼光谱原理 当一束频率为v0的单色光照射到样品上后，分子可以使入射光发生散射。大部分光只是改变光的传播方向，从而发生散射，而穿过分子的透射光的频率，仍与入射光的频率相同，这时，称这种散射称为瑞利(Rayleigh)散射；还有一种散射光，它约占总散射光强度的10^-6~10^-10，该散射光不仅传播方向发生了改变，而且该散射光的频率也发生了改变，从而不同于激发光（入射光）的频率，因此称该散射光为拉曼(Raman)散射。在拉曼散射中，散射光频率相对入射光频率减少的，称之为斯托克斯散射，因此相反的情况，频率增加的散射，称为反斯托克斯散射，斯托克斯散射通常要比反斯托克斯散射强得多，拉曼光谱仪通常大多测定的是斯托克斯散射，也统称为拉曼散射。 斯托克斯线(Stokes)：基态分子跃迁到虚能级后不会到原处基态，而落到另一较高能级发射光子，发射的新光子能量hv'显然小于入射光子能量hv，△V就是拉曼散射光谱的频率位移。反斯托克斯线(anti-Stokes)：发射光子频率高于原入射
光子频率。 拉曼位移(Raman shift)：△V即散射光频率与激发光频之差。拉曼位移与入射光频率无关，它只与散射分子本身的结构有关。拉曼散射是由于分子极化率的改变而产生的（电子云发生变化）。拉曼位移取决于分子振动能级的变化，不同化学键或基团有特征的分子振动，ΔE反映了指定能级的变化，因此与之对应的拉曼位移也是特征的。这是拉曼光谱可以作为分子结构定性分析的依据。 2、拉曼光谱仪分类及结构 拉曼光谱仪一般由光源、外光路、色散系统、及信息处理与显示系统五部分组成。 ①激发光源：常用的有Ar离子激光器，Kr离子激光器，He-Ne激光器，Nd-YAG 激光器，二极管激光器等。 ②样品装置：样品放置方式，包括直接的光学界面，显微镜，光纤维探针和样品。 ③滤光器：激光波长的散射光（瑞利光）要比拉曼信号强几个数量级，必须在进入检测器前滤除，另外，为防止样品不被外辐射源照射，需要设置适宜的滤波器或者物理屏障。 ④单色器和迈克尔逊干涉仪：有单光栅、双光栅或三光栅，一般使用平面全息光栅干涉器一般与FTIR上使用的相同，为多层镀硅的CaF2或镀Fe2O3的CaF2分束器。也有用石英分束器及扩展范围的KBr分束器。 ⑤检测器：传统的采用光电倍增管，目前多采用CCD探测器，FTRaman常用的检测器为Ge或InGaAs检测器。 拉曼光谱仪又细分为激光拉曼光谱仪(laser Raman spectroscopy)和傅立叶变换-拉曼光谱仪(FT-Ramanspectroscopy)。其结构组成及特点如下： （1）激光拉曼光谱仪(laser Raman spectroscopy)
孔雀石绿、亮绿检测方法-液质联用
超高效液相色谱-串联质谱法同时检测水产品中孔雀石绿 （隐）、结晶紫（隐）和亮绿 陈军（龙大食品检测中心） 摘要： 采用乙腈提取水产品组织中的目标物，液液分配到二氯甲烷层，10%氯化钠水溶液去除水溶性 杂质，无水硫酸钠脱水及过滤固体杂质。浓缩定容后，过中性氧化铝柱净化，采用UPLC/MS/MS 进行检测，方法简便、快捷、稳定、灵敏度高，定量下限为0.0005mg/kg，可满足水产品亮绿药物的检测的要求。 检测项目：亮绿（brilliant green ，BG ）属于碱性三苯甲烷类染料，具有类似的结构，在水产养殖过程中， 常作为杀菌剂和抗寄生虫药，用于防治各种鱼病。由于三苯甲烷具有致突变、致畸和致癌作用， 欧美、中国和日本等宣布严禁在水产养殖中使用孔雀石绿和结晶紫，并规定孔雀石绿（含隐色 孔雀石绿）和结晶紫（含隐色结晶紫）不得检出。 【药代动力学】 。 适用范围：本方法适用于虾、鱼、蟹等水产样品以上五种药物残留量的检测。 实验部分： 一、试剂与材料 1.1试剂 1.1.1 乙腈（色谱纯） 1.1.2 超纯水 1.1.3 无水硫酸钠（分析纯） 1.1.4 氯化钠（分析纯） 1.1.5 异丙醇（分析纯） 1.1.6 甲酸（色谱纯） 1.1.7 冰乙酸（色谱纯） 1.1.8 乙酸铵（色谱纯） 1.1.9 甲醇（色谱纯） 1.2仪器材料 1.2.1 飞利浦食品加工机 U n R e g i s t e r e d
1.2.2 50ml 带盖离心管 1.2.2 离心机 1.2.3 250mL 分液漏斗 1.2.4 中性氧化铝小柱(LC-Alumina-N)：100mg,3mL 1.2.5 旋涡混合仪 1.2.6 150mL 茄形瓶 1.2.7 氮吹仪 1.2.8 移液管 1.2.9 滤纸 1.2.10 UPLC/MS/MS 1.3 溶液 1.3.1 0.1甲酸乙腈：取0.5mL 甲酸加入到500mL 的乙腈中，摇匀。 1.3.2 5mmol/L 乙酸铵0.1%甲酸水溶液：称取0.19g 乙酸铵溶于500mL 水，然后向其中加入0.5mL 甲酸，摇匀。 1.3.3 定溶液：乙腈：5mmol/L 乙酸铵（PH4.5）=8：2，用冰乙酸调节pH=4.5. 二、实验方法 2.1 取500g以上的可食用部分组织充分绞碎混匀后，称取5.00g至50ml离心管中。 2.2 向离心管中加入15mL乙腈，充分振荡提取，旋涡混合3min，以5000r/min离心分离，重复提取 一次，合并两次上清液，并转入250ml分液漏斗中 2.3 向分液漏斗中加入20mL 10%氯化钠水溶液，20mL二氯甲烷，振荡3min（注意放气），静置分层后，去除下层水相；上层乙腈和二氯甲烷层过预先用乙腈淋洗的无水硫酸钠脱水净化，并收集到茄形瓶中，然后用20mL乙腈分数次洗涤硫酸钠，滤液一并转入茄形瓶中 2.4 向茄形瓶中加入10mL异丙醇, 40℃以下浓缩至干，用2ml定溶液溶解残渣， 2.5 残渣溶解液过中性氧化铝，前面3-5滴滤液弃去，随后的滤液全部收集过0.2um滤膜， UPLC-MS-MS分析 三、仪器条件 3.1 液相条件 使用含0.1%甲酸的5mmol/L 乙酸铵水溶液和含0.1%甲酸的乙腈做流动相， A : 5mmol/L 乙酸铵0.1%甲酸水溶液 B：0.1%甲酸乙腈 U n R e g i s t e r e d
KJ201701 水产品 孔雀石绿胶体金
附件1 水产品中孔雀石绿的快速检测 胶体金免疫层析法（KJ201701） 1范围 本方法规定了水产品及其养殖用水中孔雀石绿和隐色孔雀石绿总量的胶体金免疫层析快速检测方法。 本方法适用于鱼肉及养殖用水中孔雀石绿和隐色孔雀石绿总量的快速测定。 2原理 样品中孔雀石绿、隐色孔雀石绿经有机试剂提取，吸附剂净化，正己烷除脂后，加入氧化剂将隐色孔雀石绿氧化成为孔雀石绿，经浓缩复溶后，孔雀石绿与胶体金标记的特异性抗体结合，抑制抗体和检测卡中检测线（T线）上抗原的结合，从而导致检测线颜色深浅的变化。通过检测线与控制线（C线）颜色深浅比较，对样品中孔雀石绿和隐色孔雀石绿总量进行定性判定。 3试剂和材料 除另有规定外，本方法所用试剂均为分析纯，水为GB/T 6682规定的二级水。 3.1 试剂 3.1.1正己烷。 3.1.2乙腈。 3.1.3冰乙酸。 3.1.4盐酸。 3.1.5吐温-20。 3.1.6氯化钠。 3.1.7对-甲苯磺酸。 3.1.8无水乙酸钠。 3.1.9盐酸羟胺。 3.1.10无水硫酸钠。 3.1.11中性氧化铝：层析用，100目~200目。 3.1.12二氯二氰基苯醌。 3.1.13氯化钾。 3.1.14磷酸二氢钾。 3.1.15十二水合磷酸氢二钠。 3.1.16饱和氯化钠溶液：称取氯化钠（3.1.6）200g，加水500mL，超声使其充分溶解。 3.1.17盐酸羟胺溶液（0.25g/mL）：称取2.5g盐酸羟胺（3.1.9），用水溶解并稀释至10mL，混匀。
3.1.18乙酸盐缓冲液：称取 4.95g无水乙酸钠（3.1.8）及0.95g对-甲苯磺酸（3.1.7）溶解于950mL 水中，用冰乙酸（3.1.3）调节溶液pH为4.5，用水稀释至1L，混匀。 3.1.19二氯二氰基苯醌溶液（0.001mol/L）：称取0.0227g二氯二氰基苯醌（3.1.12）置于100mL 棕色容量瓶中，用乙腈（3.1.2）溶解并稀释至刻度，混匀。4℃避光保存。 3.1.20复溶液：称取8.00g氯化钠（3.1.6），0.20g氯化钾（3.1.13），0.27g磷酸二氢钾（3.1.14）及2.87g十二水合磷酸氢二钠（3.1.15）溶解于900mL水中，加入0.5mL吐温-20（3.1.5），混匀，用盐酸（3.1.4）调节pH为7.4，用水稀释至1L，混匀。 3.2 参考物质 孔雀石绿、隐色孔雀石绿参考物质的中文名称、英文名称、CAS登录号、分子式、相对分子质量见表1，纯度均≥90%。 表1 孔雀石绿、隐色孔雀石绿参考物质中文名称、英文名称、CAS登录号、分子式、相对分子质量 注：或等同可溯源物质。 3.3 标准溶液配制 3.3.1孔雀石绿、隐色孔雀石绿标准储备液（1mg/mL）：精密称取适量孔雀石绿、隐色孔雀石绿参考物质（3.2.1），分别置于10mL容量瓶中，用乙腈（3.1.2）溶解并稀释至刻度，摇匀，分别制成浓度为1mg/mL的孔雀石绿和隐色孔雀石绿标准储备液。-20℃避光保存，有效期1个月。 3.3.2孔雀石绿标准中间液A（1μg/mL）：精密量取孔雀石绿标准储备液（1mg/mL）（3.3.1）0.1mL，置于100mL容量瓶中，用乙腈（3.1.2）稀释至刻度，摇匀，制成浓度为1μg/mL的孔雀石绿标准中间液A。临用新制。 3.3.3孔雀石绿标准中间液B（100ng/mL）：精密量取孔雀石绿标准中间液A（1μg/mL）（3.3.2）1mL，置于10mL容量瓶中，用乙腈（3.1.2）稀释至刻度，摇匀，制成浓度为100ng/mL的孔雀石绿标准中间液B。临用新制。 3.3.4隐色孔雀石绿标准中间液A（1μg/mL）：精密量取隐色孔雀石绿标准储备液（1mg/mL）（3.3.1）0.1mL，置于100mL容量瓶中，用乙腈（3.1.2）稀释至刻度，摇匀，制成浓度为1μg/mL 的隐色孔雀石绿标准中间液A。临用新制。 3.3.5隐色孔雀石绿标准中间液B（100ng/mL）：精密量取隐色孔雀石绿标准中间液A（1μg/mL）（3.3.4）1mL，置于10mL容量瓶中，用乙腈（3.1.2）稀释至刻度，摇匀，制成浓度为100ng/mL 的隐色孔雀石绿标准中间液B。临用新制。 3.4 材料 3.4.1免疫胶体金试剂盒，适用基质为水产品或水。 3.4.1.1金标微孔。 3.4.1.2试纸条或检测卡。 4仪器和设备 4.1 移液器：200μL、1mL和10mL。
孔雀石绿免疫胶体金快速检测试剂卡
武汉欣泰扬生物科技有限公司 名称 灵敏度（ppb ） 孔雀石绿（显性） 2 孔雀石绿免疫胶体金快速检测试剂 内含：试剂板，滴管 提取剂 1 提取剂 2 氧化剂 复溶液 说明书 金标微孔 孔雀石绿免疫胶体金快速检测试剂 卡 使用说明书（Ⅱ） 【产品简介】 本产品用于快速检测水产品组织样品中 的孔雀石绿残留，整个检测过程只需要 40 分钟 左右，适用于各类企业及检测机构。 表一 产品灵敏度 表二 产品的组成 【样品处理】 组织样品（虾要去掉头和壳后彻底清洗干 净，鱼要去鳞后洗干净）应当避光冷藏保存。 样品的处理方法如下： 1. 取切碎的一定量的去脂肪组织样本，用均质机均质； 2. 称取 3 g 均质物于 50 ml 离心管中； 3. 向上述50ml 管中加入提取剂1 溶液 3 ml ，提取剂2溶液3ml,再加入 8 ml 乙腈，盖上盖子剧烈振荡2 min 后，室温下 4000 rpm 离心 5 min ； 4. 移取4 ml 上清液于5 ml 离心管中，加入100μl 氧化剂，颠 倒 混 匀 1 0 秒 ，于 6 0 ℃ 环 境 下 ，利 用 氮气 或 空 气 吹 干。（若管底剩余 少于10 0 微升吹不干液体为正常现象，可直接复溶使用，不影响检测结果） 5.向吹干的离心管中加入 0.3 ml MG 复溶液，和正己 6.烷 500μl ,于室温下 4000 rpm 离心 1 min ，用移液器移取下层 150 μl 溶液 ，待检。(移液器枪头一定要抵着管底，取底层溶液，以免取到油脂，导致结果异常) 【使用步骤】 测试前先完整阅读使用说明书，使用前 将试剂板和待检样本溶液恢复至室温（20℃~30℃）。 从原包装袋中取出试剂板，水平放置于观察者正面，如下图所示（打开后请立即使用）； 吸取待检样品 150 微升加入到金标微孔中，等待反应2分钟后，用滴管吹打至完全溶解孔内红色物质； 吸取孔内所有溶液滴加到加样孔中，加样后开始计时； 结果应在:8～10 分钟读取，其他时间判读无效。 T 线 明显显为绿色的，可判为阳性结果 【结果判断】 阴性（-）： T 线显色（测试线，靠近加样孔一端）比 C 线（对照线）深或一样深，表示样品中待检 药物浓度低于2 ppb 或不含待检药物。 阳性（+）： T 线显色明显比C 线浅，或T 线呈绿色， 表示样品中待检药物浓度高于2 ppb ，T 线相比C 线越浅，表示样品中待检药物浓度越高。 无效：未出现C 线，表明不正确的操作过程或试剂板 已失效。应再次仔细阅读说明书，并用新的试 剂板重新测试。 【注意事项】 尽量不要触摸试剂板中央的白色膜面； 请勿使用过期的试剂板； 若需直接检测标准品，请用我方提供的 PBST 缓冲液 进行配制。 切勿重复使用配备的滴管，以免交叉污染； 切勿食用配备的试剂； 试验中务必戴上配备一次性手套； 试验场地要求常温 20℃-30℃的通风条件 【特异性】 本产品与其他种类药物无交 叉反应。 【精密度】 同时使用本产品和孔雀石绿液相质谱串联 质谱法对 150 份样品包括 94 份阴性样本和 56 份阳性样本进行检测，检测结果表明本产品与质谱法的结果符合率为98.0％。 【贮存条件】 4℃～30℃避光保存，切勿冷冻。 【有效期】 12 个月。 【生产日期及批号】 详见包装袋。
拉曼光谱实验报告
拉曼光谱实验报告 1.1样品的准备 检测拉曼光谱时一般不需要制备样品，特别是带有显微镜的激光拉曼光谱仪。在检测时，样品是固体，只需要将样品直接放在测样品台上进行测试。如果是液体样品并且是易挥发的，可先将其倒入一个无色透明的玻璃瓶，盖好瓶盖，然后放在测样品台上进行检测。如果液体样品是不易挥发的，可将其倒入一个小的培养皿中，再放在测样品台上进行检测。 1.2分子骨架、基团的定性分析技术 拉曼光谱研究对称分子的非极性基团或分子骨架振动产生谱带的情况。主要用来鉴别化学物质的种类、特殊的结构特征或特征基团，它与红外吸收光谱互为补充。拉曼位移的大小、强度及拉曼峰形状是鉴定化学键、官能团的重要依据。利用偏振特性，拉曼光谱还可以作为分子异构体判断的依据。 对于像S-S、C=C、N=N、C=S、C-C、CoC等这类基团，如果分子中这类基团的环境接近对称，他的振动在红外吸收光谱中极为微弱，但可用拉曼光谱检测。另外，拉曼光谱是检测环状化合物的有力工具。利用拉曼光谱的标准谱图或利用拉曼光谱标准谱库的检索功能，对未知物拉曼光谱图进行比对，也是拉曼光谱定性分析的一个重要手段。 1.3表面分子结构分析技术 当分子被吸附在粗糙金属表面时，其拉曼光谱强度会增加104 ~ 106倍，即表面增强拉曼散射效应(SERS)。利用这种技术，我们可以检测
吸附在金属表面的单层和亚单层分子，并给出表面分子的结构信息。高灵敏度拉曼光谱检测技术也可以用来研究分子的吸附动力学，利用SERS强度与时间的关系可以得到吸附速率常数。 当具有共振拉曼效应的分子被吸附在粗糙金属表面时，拉曼信号也能增强100 ~ 1000倍，即表面增强共振拉曼散射(SERRS)。SERRS常用于荧光干扰化合物的拉曼检测。当化合物分子吸附在粗糙金属表面时，其荧光猝灭，容易获得高质量的SERRS光谱。 1.4深度扫描技术 利用拉曼光谱仪的数字显微共焦技术可以检测一些复合材料的深度分布和材料性能。 1.5拉曼光谱仪的映射检测技术 利用拉曼光谱仪的自动操作平台，可以检测样品表面的物质分布。首先对样品表面进行逐点扫描，选择特征拉曼线。最后对图像进行处理。该技术可应用于高分子材料的应力检测和催化剂表面的吸附。制药工业检测药物和辅料在片剂上的分布，确定药物质量，并确定功效。
拉曼光谱分析测试技术及其在陶瓷结构测试中的应用
拉曼光谱分析测试技术及其在陶瓷结构测试中的应用 应用部分，首先说明可做哪些结构测试，然后详细说明从制样到出结果的各测试步骤，最后就各条结构测试各举2-3具体例子予以说明，包括图、表、分析方法、结果、外文参考文献等）19周特冶楼230 摘要：拉曼光谱分析技术由于具有无损、信息丰富、灵敏度高、所需测试样品量小等优点，可进行现场快速筛查、检测及鉴别，在食品、材料、环境监测等众多领域得到了越来越广泛的应用。随着全国经济的不断发展，陶瓷材料在工业中应用逐渐增多，而陶瓷材料的结构对性能影响非常大。本文阐述了拉曼光谱产生的原理，介绍相关的拉曼光谱测试技术及其在纳米BaTiO3陶瓷结构测试中的应用，并对实验结果进行了讨论。 1 拉曼光谱 1.1简介 1923年，Smekal从理论上描述了拉曼散射效应。1928年，印度物理学家Raman 发现了光的非弹性碰撞现象，记录了散射光谱，并以他的名字将这一现象命名为拉曼效应／拉曼光谱。 拉曼光谱（Raman spectrosopy）技术是基于拉曼散射效应而发展起来的光谱分析技术，研究的是分子振动、转动信息。与常规化学分析技术相比，具有检测时间短、操作简单、样品所需量少等特点，故随着激光光源的不断发展，拉曼光谱在食品、生物监测、医药、刑事司法、地质考古、宝石鉴定等领域都已得到广泛的应用[1]。因此拉曼光谱技术成为了人们研究分子结构的新手段之一。 拉曼光谱最初是用聚焦的日光作为光源，之后改用汞弧灯，但是光源强度仍然不够，限制了拉曼光谱的发展。直到20世纪60年代，高功率，单色性和相干性好，准直性好，偏振特性好的激光出现，为拉曼散射提供了空前优异的光源，拉曼光谱学也因此被冠以激光二字称为激光拉曼光谱学[2]。拉曼光谱采用激光作为单色光源，使激光拉曼光谱在分析化学等领域中得到了广泛的应用。拉曼光谱技术的基本原理：单色光束照射会产生两种类型的光散射，弹性散射和非弹性散射。在弹性散射过程中，光子的频率不发生改变，其波长和能量上没有任何改变，这种散射也称为瑞利散射。相反的，非弹性散射伴随着光子频率的改变，光子会获得或失去一些能量，导致分子振动的灭活和激发作用，这种散射也称为拉曼散射。如果光子从这个分子获得了能量，散射光的频率将比入射光频率高，这个过程是反斯托克斯拉曼散射。如果光子从分子上失去了能量，散射光频率将比入射光频率低，这个过程是斯托克斯拉曼散射（图１）。我们讨论的拉曼散射指斯托克斯散射，它在光谱中常会出现一些尖锐峰，正是试样中某些特定分子的特征峰。 图1光散射的原理图