考点一与免疫有关的细胞比较

1．淋巴细胞的起源与分化

即时应用

1．下图表示人体内各类血细胞生成的途径，a～f表示不同种类的细胞，请你判断下列说法中错误的是(双选)()

A．造血干细胞形成多种细胞，要经过细胞增殖和细胞分化过程

B．各类细胞来源相同但功能不同，根本原因是不同细胞表达的基因不同

C．c和d在相同的场所发育而成

D．当再次受抗原刺激后，机体具有更强烈的免疫反应，主要与c和d有关

考点二特异性免疫——人体的第三道防线

1．体液免疫的图解

2．细胞免疫的图解

3．两者的关系

两个免疫过程既各自有其独特的作用,又可以相互配合共同发挥免疫效应。如：(1)细菌外毒素(抗原)进入人体，人体的免疫系统产生特异性抗毒素(抗体),将其消灭，这属于体液免疫。

(2)对于胞内病原体，体液免疫先起作用，阻止病原体的传播。当病原体进入细胞内则需细胞免疫使其释放出抗原，再由体液免疫进行最后的清除。

即时应用

2．下图表示人体的特异性免疫过程，依据此图，请指出正确的选项是()

A．能特异性识别抗原的细胞有a、b、c、d、f

B. 图中与④物质产生有关的细胞有a、b、c、g、f

C．HIV侵入人体，只对⑤免疫有抑制作用

D．对切除胸腺的小鼠进行大剂量的X射线照射，导致小鼠丧失全部特异性免疫功能,通过输入细胞f可使⑥完全恢复

即时应用

3．(2012·苏北第一次调研)下列关于人体免疫的叙述正确的是()

A．某病原体初次感染人体，人体会产生相应的过敏反应

B．艾滋病和类风湿性关节炎都属于免疫系统疾病

C．体液免疫中每个浆细胞能产生多种特定抗体

D．效应T细胞能直接吞噬侵入细胞的病原

课后练习题

1下列简图表示人体特异性免疫的过程，图中数字分别代表相应的生理活动，据图回答：

(1)图中Ⅰ表示________。

(2)②过程表示吞噬细胞对抗原进行________并经T细胞呈递给B细胞的过程，

③过程表示________________

______________________________________________________________。(3)在图中众多类型的免疫细胞中，能非特异性识别抗原的细胞是_______

______________________________________________________________。(4)已免疫的机体，再次遭遇同种病毒入侵时，其免疫过程主要是________(填图中数字)。

2(2011·高考大纲全国卷)研究发现两种现象：①动物体内的B细胞受到抗原刺激后，在物质甲的作用下，可增殖、分化为效应B细胞；②给动物注射从某种细菌获得的物质乙后。此动物对这种细菌具有了免疫能力。则这两种物质中()

A．甲是抗体，乙是抗原

B．甲是抗体，乙是淋巴因子

C．甲是淋巴因子，乙是抗原

D．甲是淋巴因子，乙是抗体

3先后将抗原A和抗原A、B注射到小鼠体内，得到的抗体含量曲线如下图所示。该曲线图表明()

A．小鼠对抗原A更敏感

B．抗原A的破坏性更大

C．二次反应比初次反应更强

D．小鼠对抗原B反应较慢

人的外周血淋巴细胞培养及染色体制片方法、染色体组型分析

人的外周血淋巴细胞培养及染色体制片方法、染色体组型分析一、实验背景 1、Carnoy固定液：固定液的重要特性是能迅速穿透细胞，将其固定并维持染色体结构的完整性，还要能够增强染色体的嗜碱性，达到优良染色效果。单纯的固定液一般难以达到这些要求，因此在实验中使用两种混合的固定液。由于Carnoy首先使用的甲醇和冰乙酸混合液而称其为卡诺氏固定液。Carnoy固定液（甲醇∶冰乙酸=3∶1）每次使用前需临时配制，长时间放置影响固定效果，固定时间15min至24h，冰箱、室温均可。必要时可改变甲醇和冰乙酸的比例，冰乙酸比例增加，利于细胞膨胀、染色体铺展，但易导致细胞破裂、染色体散失。 2、低渗液（hypotonic solution）低渗液是指渗透压和离子强度均低于正常细胞生理条件的溶液，渗透压低于组织液，与外周血混在一起时，水分迅速进入细胞，使其膨胀，甚至破裂，获得分散良好的染色体分裂象。常见的低渗液：水、低渗的柠檬酸钠或氯化钠、甘油磷酸钾（0.65mol/L）、氯化钾（0.075mol/L）等。低渗效果取决于低渗液的化学组成、低渗的温度和处理时间。低渗处理是凭借反渗透作用使细胞膨胀染色体铺展，同时可使黏附于染色体的核仁物质散开，以便能在一个平面上观察所有染色体形态。实验室中一般选用0.075mol/L KCl为低渗液，其优点有：①染色体轮廓清楚，可染色性强，染色时间短。②用于显带染色时能充分显示带型特点。低渗处理为37℃，25～30min，以预实验条件为准。 2、肝素 N-硫酸和艾杜糖醛酸含量较多的一种糖胺聚糖，由D-β-葡糖醛酸(或L-α-艾杜糖醛酸)和N-乙酰氨基葡糖形成重复二糖单位组成的多糖。肝素是一种抗凝剂，是由二种多糖交替连接而成的多聚体，在体内外都有抗凝血作用。 2、PHA 植物血凝素(Phytohaemagglutinin)是一种有丝分裂原，主要用于激活免疫细胞—淋巴细胞。是一种干扰素诱导剂，不仅可以刺激机体产生白介素-2和干扰素；还可以刺激机体产生非特异性抗体。由于其较难提纯，且成本极高，所以一直以来仅在实验室中作为刺激淋巴细胞增殖的试剂。 3、青霉素和链霉素青霉素：青霉素是抗菌素的一种，是指从青霉菌培养液中提制的分子中含有青霉烷、能破坏细菌的细胞壁并在细菌细胞的繁殖期起杀菌作用的一类抗生素，是第一种能够治疗人类疾病的抗生素。链霉素对许多革兰阴性杆菌有抗菌作用。链霉素对葡萄球菌属及其他革兰阳性球菌的作用差。链霉素的作用在PH值为7.8时最强，PH值降至6或6以下时则大大减弱。四环素作用机制为药物能特异性地与细菌核糖体30S亚基的A位置结合，抑制肽链的增长和影响细菌蛋白质的合成。 4、秋水仙素秋水仙能素破坏纺锤体,阻断细胞有丝分裂,使分裂的细胞全部阻止在中期。实验中要严格控制培养物中秋水仙素的浓度,不仅保证有效的终止细胞第一次分裂,而且使秋水仙素的细胞毒

牛血清在细胞培养中的作用与质量要求

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牛血清在细胞培养中的作用与质量要求生物技术已经被世界各国视为一种高技术,在整个科学技术中占据了特殊的显著地位,特别是生命科学的发展更离不生物技术,生命科学的发展备受各国的重视。我国在很多大学中都设立了生命科学院。现代生物技术一般认为包括基因工程技术、细胞工程技术、酶工程技术和发酵工程技术,而这些技术的发展几乎都与细胞培养有密切关系，特别是在医药领域的发展,细胞培养更具有特殊的作用和价值。比如基因工程药物或疫苗在研究生产过程中很多是通过细胞培养来实现的。基因工程乙肝疫苗很多是以CHＯ细胞作为载体;细胞工程中更是离不细胞培养，杂交瘤单克隆抗体，完全是通过细胞培养来实现的，既使是现在飞速发展的基因工程抗体也离不开细胞培养。正在倍受重视的基因治疗、体细胞治疗也要经过细胞培养过程才能实现，发酵工程和酶工程有的也与细胞培养密切相关。总之，细胞培养在整个生物技术产业的发展中起到了很关键的核心作用。细胞培养的发展，培养基的质量又是关键,而培养基的主要成份中动物血清对细胞的生长繁殖发挥着重要甚至是难以替代的作用。在动物血清的应用中牛血清又是最为广泛的，所以牛血清是医药生物技术产品中重要的原材料之一。保证牛血清质量也是促进生物制品质量提高的重要环节。? 一、牛血清在细胞培养基中的主要功能牛血清是细胞培养中用量最大的天然培养基，含有丰富的细胞生长必须的营养成份,具有极为重要的功能。?１.提供对维持细胞指数生长的激素,基础培养基中没有或量很少的营养物,以及主要的低分子营 2. 提供结合蛋白,能识别维生素、脂类、金属和其他激素等，能结合或调变它们所结合的物养物。? 质活力。 3．有些情况下结合蛋白质能与有毒金属和热原质结合,起到解毒作用。? 4．是细胞贴壁、铺展在塑 5.起酸碱度缓冲液作用。? 6．提供蛋白酶抑制剂，使在细胞传代时料培养基质上所需因子来源。? 使剩余胰蛋白酶失活,保护细胞不受伤害。二、牛血清的主要成份血清是一种很复杂的混合物，其组成成份虽大部分已为人所知,但还有一部分尚不清楚,而且血清组成及含量常随供血动物的性别、年龄、生理条件和营养条件不同而异。?1.蛋白质是牛血清中主要成份。除包括可携带金属离子、脂肪酸和自身是激素类蛋白外主要还有白蛋白,球蛋白。纤维粘连素细胞促进细胞附着; α2巨球蛋白抑制胰蛋白酶的作用；胎牛血清中含胎球蛋白促细胞附着;转铁蛋白能结合铁离子,减少其毒性和被细胞利用。?2.多肽:血小板促生长因子能促细胞分裂,是多肽家庭的主要成员之一,是主要的促细胞增殖因子；成纤维细胞生长因子、表皮细胞生长因子、神经细胞生长因

劳动法规定用工年龄(知识材料)

劳动法规定用工年龄：就业年龄段为男性18-60周岁、女性18-55周岁，16-18岁为未成年工，可以就业但实行特殊劳动保护。退休后的劳动就不是劳动法的劳动了，与单位所形成的关系是劳务关系，即雇佣关系。如在工作过程中受伤，不适用工伤，由所在的单位按人身伤害赔偿处理。 1不能胜任工作的在劳动关系中，劳动者与用人单位之间存在一般义务外，还存在附随义务，如用人单位应当为劳动者办理社会保险，劳动风险由用人单位承担，劳动者应当遵守用人单位的内部规章制度等。劳务关系中却不存在这些附随义务。二者区别具体表现在以下几个方面： 1）报酬、社会保障待遇上，劳动关系中的劳动者除获得工资报酬外，还有保险、福利等待遇，这是法律对用人单位承担义务的确定性规范。因此，如果劳动者在劳动过程中受到了意外伤害或者患职业病，劳动者属于工伤事故，劳动风险完全由用人单位承担；而劳务关系中的自然人一般只获得劳动报酬，工作风险一般由提供劳务者自行承担，但由雇工方提供工作环境和工作条件的和法律另有规定的除外。(注：劳务关系不需要给劳动者提供保险、福利等待遇) 2）报酬支付的原则上，劳动关系由于受国家干预较多，双

方处于不平等的地位，用人单位向劳动者支付的工资需遵循按劳分配、同工同酬的原则，且必须遵守当地有关最低工资标准的规定；而在劳务关系中，双方地位平等，一方当事人向另一方支付的报酬完全由双方协商确定，但不得违背民法中平等、公平、等价有偿、诚实信用等原则。3）报酬支付形式上，《劳动合同法》第三十条规定：用人单位应当按照劳动合同约定和国家规定，向劳动者及时足额支付劳动报酬。一般来说，用人单位支付的劳动报酬多以工资的方式定期支付给劳动者，有一定的规律性；而劳务关系的报酬支付由双方约定，往往一次性即时清结或按阶段支付。 4）用人单位对劳动者违章违纪处理权上，劳动关系中，若职工严重违反用人单位劳动纪律和规章制度，或存在严重失职、营私舞弊等行为，用人单位有权依据其依法制定的规章制度解除劳动合同，或者对当事人给予警告、记过、降职等处分；而在劳务关系中，单位也有对劳动者不再使用的权利，或者要求当事人承担一定的经济责任，不包括对其给予其他纪律处分等形式。 5）承担的法律责任不同表现在以下几个方面：第一，对外责任的区别，劳动关系中，劳动者作为用人单位一员，以用人单位的名义进行工作，因劳动者的过错导

细胞培养集锦(一个培养300多种细胞人的经验总结)

细胞培养集锦(一个培养300多种细胞人的经验总结) 一、消化与吹打版上很多朋友讨论细胞培养问题，见到很多很好的经验总结，这里说一些我个人的经验，因为一些比较特殊的原因，我自己培养接触过近300种细胞，常用于做实验的，累积有百余种，可以说遇到过许多各式各样古怪的细胞。这里挑细胞消化开始做我的第一篇专题，并不是因为细胞消化最重要，而是近期看到大家频繁讨论这个话题，我就抛砖引玉，下面几点拙见，可能与其它朋友总结的一些经验有点出入，仅供大家参考。许多同学对细胞消化做了许多研究，得出了很多有价值的经验，也见到很多人的困惑。其实细胞培养，尤其是细胞系的培养，就消化而言，不是太难，做得多了，善于总结经验，就能把细胞越养越好。一般的程序步骤，细节操作，我这里就不讲了，只讲一些基本操作背后的知识，如果不对之处，欢迎指正，一起讨论： 1，其实绝大部分细胞消化的时候是只要用胰酶润洗一遍即可，吸去胰酶后，残留的那些无法计算体积的附着在细胞表面的微量胰酶在37度一般不到2min足够消化细胞（绝大部分1min不到）。对于这些细胞原则上不要用胰酶孵育细胞，连续这样传代，对细胞伤害很大。简单的程序是PBS润洗吸去，胰酶润洗吸去，然后37度消化。 2，什么算是消化好了呢？不是细胞全部成间隔分布很离散的单个圆形才算消化好了，一般你肉眼观察贴壁细胞层，只要能移动了，多半呈沙壮移动，其实已经可以了，很多人喜欢把细胞消化或者吹打成完全分离细胞，这是没有必要的。一般能移动了，说明细胞与培养基质材料的附着已经消失了，细胞之间的附着也已经消失了，细胞已经独立分布了（虽然没有呈现很广的离散分布）。这个时候应该停止消化，不要等到看到镜下所有细胞都分离得非常好，间隙很大，才停止。细胞就是完全成单个细胞悬液，之后在贴壁的过程中仍然会聚集，这个是贴壁培养

细胞培养基质量标准及检验方法

细胞培养基质量标准及检验方法中国医药生物技术协会二0一一年四月

编写说明一、根据中国医药生物技术协会2010年9月20日组织召开的《动物细胞培养基生产管理及质量控制学术研讨会》纪要，结合我国的实际情况制定本标准。二、本标准以《中国药典》2010版和《哺乳类动物细胞培养基》（HG/T 3935-2007）行业标准为依据，结合生物制品对细胞培养基原材料的特殊要求制定，增加了牛血清白蛋白残留量、抗生素残留量等检测项目。三、本标准分为细胞培养基检验项目和每个项目的检验方法两部分，为评判细胞培养基产品质量提供了依据和方法，从而规范我国细胞培养基行业健康发展。四、结果评定依据本标准和方法对细胞培养基样品进行全项检验，所有项目均符合标准要求，判定该样品为合格；若有一项不符合标准要求，则判定样品为不合格。

细胞培养基质量标准及检验方法一、细胞培养基质量标准细胞培养基质量应符合表1所示的技术要求。表1 技术要求

二、检验方法除非另有说明，检验中仅使用确认为分析纯的试剂和中华人民共和国药典2010年版中规定的纯化水。澄清度的测定称取每升标示量的实验室样品，置于1 000ml烧杯中，加水950ml，搅拌至溶解，补加水至1000ml, 搅拌均匀。按中华人民共和国药典2010年版二部附录Ⅸ B进行。 pH值的测定称取每升标示量的实验室样品，置于1 000ml烧杯中，加水950ml，搅拌至溶解，补加水至1000ml, 搅拌均匀。按中华人民共和国药典2010年版三部附录ⅤA进行。干燥减量的测定按中华人民共和国药典2010年版三部附录Ⅶ L 干燥失重测定法进行。渗透压的测定称取每升标示量的实验室样品，置于1 000ml烧杯中，加水950ml，搅拌至溶解，补加水至1000ml, 搅拌均匀。按中华人民共和国药典2010年版三部附录ⅤH渗透压摩尔浓度测定法进行。取两次平行测定结果的算术平均值为测定结果，两次平行测定结果的绝对差值不大于这两个测定值的算术平均值的5%。细菌内毒素的测定按中华人民共和国药典2010年版三部附录Ⅻ E 细菌内毒素检查法中的凝胶法进行。微生物限度的测定按中华人民共和国药典2010年三部附录Ⅻ G微生物限度检查法进行，检查项目为细菌数、霉菌数。检查法采用平皿法。细胞生长试验贴壁型细胞生长试验方法提要

人生各阶段年龄的心理

人生各阶段年龄的心理？第一阶段获得基本信任感而克服基本不信任感从出生到十八个月左右是婴儿期。这是获得基本信任感而克服基本不信任感阶段。所谓基本信任，就是婴儿的需要与外界对他需要的满足保持一致。这阶段婴儿对母亲或其他代理人表示信任，婴儿感到所处的环境是个安全的地方，周围人们是可以信任的，由此就会扩展为对一般人的信任。婴儿如果得不到周围人们的关心与照顾，他就会对外界特别是对周围的人产生害怕与怀疑的心理，以致会影响到下一阶段的顺利发展。第二阶段获得自主感而避免怀疑感与羞耻感从十八个月到三、四岁是童年期。这是获得自主感而避免怀疑感与羞耻感阶段。个体在第—，阶段处于依赖性较强的状态下，什么都由成人照顾。到了第二阶段，儿童开始有了独立自主的要求，如想要自己穿衣、吃饭、走路、拿玩具等，他们开始去探索周围的世界。这时候，如果父母及其他照顾他们的成人，允许他们独立地去干一些力所能及的事情，并且表扬他们完成的工作，就能培养他们的意志力，使他们获得了一种自主感，能够自己控制自己。相反，如果成人过分爱护他们，处处包办代替，什么也不需要他们动手；或过分严厉，这也不准那也不许，稍有差错就粗暴地斥责，甚至采用体罚。例如，孩子由于不小心打碎了杯子，尿湿了裤子，成人就对其打骂，使孩子一直遭到许多失败的体验，就会产生自我怀疑与羞耻之感。第三阶段获得主动感而克服内疚感四到五岁是学前期。这是获得主动感而克服内疚感阶段。个体在这阶段的肌肉运动与言语能力发展很快，能参加跑、跳、骑小车等运动，能说一些连贯的话，还能把自己的活动扩展到超出家庭的范围。除了模仿行为外，个体对周围的环境(也包括他自己的机体)充满了好奇心，知道自己的性别，也知道动物是公是母，常常问问这，动动那。这时候，如果成人对于

细胞培养箱的清洁和消毒

细胞培养箱的清洁和消毒以“培养箱”为关键字搜索 1. 培养箱消毒：先用纯水擦洗，再用95的酒精擦洗，再照紫外就可以拉！注意周围环境的清洁就不会那么容易污染的拉！ 2. 我的经验是在补充水时最好把水加热一下，达到培养箱的温度。 3. 这么早就养细胞了，我们这里一般是用70％的乙醇擦洗，然后再用0.1％的新洁尔灭擦洗，不放心的话再用高锰酸钾加甲醛1：1比例熏一遍。注意要是熏的话千万注意混合之后马上离开，然后密闭细胞培养室，味道很刺激的。最好在养细胞前消毒，否则，确实没地方放细胞。 4. 我们的方法比较简单，先用75%酒精擦拭内壁，通风10分钟，紫外线照射30分钟即可。 5. 我们的通常处理是先用75%的酒精擦拭内壁，然后用甲醛+高锰酸钾熏蒸一个晚上，然后通风一整天（同时打开紫外线照射）。 6. 我们是把培养箱里的板层拿出来高压一下，箱壁用75％酒精擦一遍，换用诗乐氏擦一遍，再紫外照一夜，效果很好，其他的请高手指教。 7. 熏蒸后吹一天是绝对不够的，最起码要一个星期才可以让甲醛散尽，要不细胞长不好的 8. 有的培养箱能加热内壁到90度，也有的带有紫外线功能。常规应该每周用酒精擦洗内部一次。具体的操作请参考培养箱的手册，或着咨询培养箱技术支持。使用消毒剂应小心，培养箱内有检测温度、湿度和二氧化碳浓度的传感器，腐蚀性消毒剂或有机溶剂有可能损坏某些器件，请慎用。另外，挥发性的甲醛有毒，易燃、易爆。如果在培养箱内残留甲醛的话，细胞会死光光哦（我实验室的真实故事）。总之，先看培养箱手册，再联系技术支持，方可万无一失啊。 9. 常规最好什么也不放！硫酸铜的作用是抑制细菌生长（但多数用在处理污染的孔板）。因为现在的孵箱都有抑菌功能。 10. 我们实验室的做法:把平皿高压灭菌后,在无菌操作台内加入适量的灭菌双蒸水或者生理盐水.再加少量新洁尔灭, 浓度没关系.细胞养的都可以. 11. 我建议 1 最好先把培养箱彻底消毒.具体方法也是用75%的酒精好好清洗培养箱.

细胞培养基种类

细胞培养基的选择及常用数据库日期：2012-04-13来源：未知作者：网友点击：次细胞实验技术经典的培养基有很多种，Invitrogen(GIBCO)、Thermo Fisher(HyClone)、Sigma等公司都可以提供。其中DMEM、RPMI 1640、MEM、DMEM/F12都是应用最广泛的培养基。其他如M199、IMDM、L15培养基等也用于某些细胞的培养。 ◆MEM是由Eagle’s基础培养基(BME)发展而来的，其中增加了组分的范围及浓度。 ◆ Dulbecco改良的BEM(DMEM)培养基是为小鼠成纤维细胞设计的，现在常用于贴壁细胞的培养。DMEM的氨基酸浓度是MEM的两倍，维生素浓度是MEM的4倍，采用双倍的HCO3-和CO2浓度起到更好的缓冲作用。最初的配方中葡萄糖含量为1000 mg/L，后来为了某些细胞的生长需要，将葡萄糖含量又调整为4500 mg/L，这就是大家常说的低糖和高糖了。 ◆ aMEM含有附加的氨基酸、维生素以及核苷和脂肪酸，它可广泛应用于各种细胞类型，包括对营养成分要求苛刻的细胞。 ◆ Ham’s F12是为在低血清浓度下克隆CHO细胞而设计的，现在也广泛应用于克隆形成率的分析及原代培养。F12还可以与DMEM等体积混合使用，得到一种高浓度与成分多样化相结合的产物，这种培养基已应用于许多原代培养及更难养的细胞系的培养。 ◆ RPMI 1640培养基是专为淋巴细胞培养而设计的，现在已广泛应用于悬浮细胞的培养。以前经常听到有人问，这种细胞该用哪一种培养基呢?其实这个问题的答案可以很简单，也可以好复杂。此话怎讲?如果这种细胞是购自ATCC或其他的细胞库，那很简单，问供应商就行了。或者找到相关的文献，作为参考。Invitrogen网站上有一个Cell Line Database的工具，也很好用。选择你感兴趣的细胞类型，它就会弹出推荐的培养基、血清和转染试剂等，有时还有优化好的转染步骤，很方便。Sigma网站上也有一个Media Expert，包括了培养基所有成分的功能描述、使用推介和参考文献等，它还

女人年龄与欲望的关系

女人年龄与欲望的关系导语：女性的性欲与年龄有关系。是否青春未艾必定热情奔放，而年过60，性爱高潮生活就索然无味？有关专家搜集了一些资料，由15岁到30岁、30岁到60岁及以上，就此课题作了一次简单研究。女人欲望与年龄有关 15岁前：希奇忸怩少女对性的态度希奇忸怩，言语上也许开放，却隐躲着少女情怀。可能对男友挑逗说话，只是想他温柔些；在等待真正的爱情，尽少滥交。 15至20岁：开始探索开始对性做探索，并对自己的外表有高要求。不少人首次节食热控减肥便是始于此时；虽渐散发出女性魅力，易叫男人神魂颠倒；着重的是激情，更深信没有爱情便没有性的乐趣。宁愿跟男友保持极友好关系，也不想胡乱把贞操献送。 20至30岁：疲于奔命

这是女性寻找伴侣的黄金时期，也是一生中最多异性朋友的阶段。可惜这并不是性爱高潮生活美好的时期，正值事业上的奋斗期，工作后逃回家中，再无力享受闺房之乐了。 30至40岁：黄金时期是女性在性事上的黄金时间，多了经验，也有新的和特别的情趣；对时间流逝格外有感觉，珍惜每次的快乐时光；自信心较强。 40至50岁：各走极端这是一个颇复杂的年龄组别，一些女性这时开始对性失往爱好，而这一般都是结婚成亲多年白头到老的老夫老妻。至于仍然属于自由身的女性，不再对男人强求甚么承诺，一切以快乐为先，加上有丰富经验，更能把握性所带来的快乐。 50至60岁：偶有佳作很多人以为这时的女性，在情欲上的需责备趋平静。实在她们当中有些人是对此有要求。性关系频率会跟从前有所不同，她们会慢慢地享受。如少年人喜欢吃快餐，而年长人士则欣赏一顿饭吃3小时的法国菜。 60岁以上：非凡感性这群社会上的长者还是可以漂亮动人的。很多人均说步进这年纪的女性，可以表现一种非凡的感性。

单位和个人的关系

在单位要尽量远离那些鼓动你不工作的人，鼓动你闹矛盾的人（很实在，很犀利）你不种地，但你有吃有喝；你不织布，但你衣着华丽；你不造车，但你以车代步；你不盖楼，但你家居安泰，你不是神仙，但许多人尊重你；你没有才华，但你仍然能够参与社会；你相貌平平，但你的爱人喜欢你；你能力一般，但你的儿女崇拜你。这是为什么呢？你是依靠什么去和他们进行交换？你是依靠什么获得你需要的生活物品？你是依靠什么赢得社会的尊重？答案就是单位。如果你是小草，单位就是你的地。如果你是小鸟，单位就是你的天。如果你是一条鱼，单位就是你的海。如果你是一只狼，单位就是你跃马驰骋的战场。家庭离不了你，但你离不了单位。没有单位，你，什么也不是。单位是你和社会之间和他人之间，进行交换的桥梁。单位是你显示自己存在的舞台。单位是你美好家庭的后台。单位是你的竞技场、练兵站、美容室、大学校！单位是你提升身价的增值器，单位是你安身立命的客栈，单位是你和你的另一半对峙的有力武器，单位是你在家庭和社会上的发言权。在单位要学会珍惜。一是珍惜工作。工作就是职责，职责就是担当，担当就是价值。感谢那些让你独当一面的人，感谢那些给你压力的人，感谢给你平台的人。因为那是机会，是信任，是平台，是发言权。

二是珍惜关系。单位的各种关系一定要珍惜，宁可自己受委屈也尽量不争高低。一个人只有能够处理好和自己有工作关系的关系才叫能力。没有工作关系的关系，只是吃吃喝喝、玩玩耍耍，那不属于单位关系。三是珍惜已有的。在单位你已经拥有的，一定要珍惜。也许时间久了，你会感到厌烦。要学会及时调整自己，使自己在枯燥无味的工作面前，有一种常新的感觉。你已经拥有的，往往失去了，才会感受到价值；而一旦失去，就不会回来，这往往让人抱憾终生。在单位最忌讳三点。一是把工作推给别人。工作是你的职责，是你立足单位的基础。把属于自己的工作推给别人，不是聪明，而是愚蠢，除非是你不能胜任它。推诿工作是一种逃避，是不负责任，更是无能，这会让别人从内心深处瞧不起你。二是愚弄他人。愚弄别人是一种真正的愚蠢，是对自己的不负责任。尤其是对那些信任你的人，万万不可耍小聪明。长期在一起共事，让人感动的是诚恳，让人厌恶的是愚弄和虚伪。三是沉不下心来。沉不下心来是在单位工作的大忌。单位不是走马观花，而很有可能是一生的根据地，是一个人一辈子存在的证明。要沉下心慢慢干。有机会了也不要得意忘形。没有机会或者错过了一个机会也不要患得患失。最后的赢家往往是那些慢慢走过来的人。单位无论大小，一把手只有一个。那些能够在一把手面前推荐你，说你好话的人是你生命中的贵人。在单位要克勤克敬，兢兢业业，而

OPTIMEM进行贴壁细胞培养的实验方法

O P T I-M E M进行贴壁细胞培养的实验方法日期：2012-05-17来源：互联网作者：青岚点击：194次 ?MEM细胞培养基无血清培养基可以提供细胞贴壁需要的一些基质，本文总结了利用无血清培养基OPTI-MEM进行贴壁细胞的脂质体转染试验材料，步骤、个人经验以及问题分析。贴壁细胞的脂质体转染一、实验材料 1、宿主细胞CHO(贴壁细胞) 2、脂质体LIPOFECTAMINE2000(invitrogen公司) 3、6孔细胞培养版 4、无血清培养基OPTI-MEM(GIBICO) 5、转染级质粒二、实验步骤 invitrogen的LIPOFECTAMINE2000说明书上列举了24孔、12孔、6孔......板的实验体系，因为需要转染的细胞量大，所以一直采用的是6孔版做的转染。以下是以6孔板为例说明一下我的体系和方法吧! 1、转染前一天，以合适的细胞密度接种到6孔培养板上。(我的接种密度是3~4*105/ml.)转染时，细胞要达到90~95%的融合。 2、溶液1：240ul无血清培养基+10ullipofectamine2000perwell(总体积250ul)(温育5min)

3、溶液2：Xul无血清培养基+4ug质粒perwell(总体积250ul) 4、将溶液1与溶液2混合，室温下置20min。 5、与此同时，将6孔板中的细胞用无血清培养基冲洗细胞两遍后，加入2ml 无血清培养基。 6、将溶液1与溶液2的混合液逐滴加入孔中，摇动培养板，轻轻混匀。在37℃，5%的CO2中保温5~6小时。 7、6小时后，更换含有血清的全培养基，在37℃，5%的CO2中48~72h检测转染水平。 8、如果做稳定转染，换全培养基培养后24h，即可以1：10或更高的稀释比例(根据细胞的生长情况)接种到新的培养板，加抗生素进行筛选。三、个人经验：我觉得贴壁细胞的脂质体转染还是很容易的，有了经验之后，现在做转染得心应手，转染前后细胞的形态几乎不发生变化，几乎没有细胞死亡。转染率很高。以下是个人经验，与大家分享。 1.细胞的状态。这点非常重要，不要急于求成，一定要让细胞处于最佳的生长状态再做。有文献说传代不要超过17代。我总是在细胞复苏后的3代左右做，那时细胞状态最好，不要用传了很多代的细胞去做，细胞的形态都会发生变化了。 2.细胞的融合度。细胞的融合度必须要达到90%才能做，细胞太少，容易死的。 3.无血清培养基OPTI-MEM(GIBICO)很好用，有条件的话，就用它代替PBS 洗细胞两遍(我曾比较过OPTI-MEM与PBS或无血清的DMEM，前者的转染效率确实高)。注意洗的时候要轻，靠边缘缓缓加入液体，然后不要吹吸细胞，而是转动培养板让液体滚动在细胞表面。如果洗的太厉害，细胞又损失一部分，加了脂质体后，细胞受影响就更大了，死亡细胞会增多。

细胞培养基种类与基本成分

细胞培养基种类与基本成分是应用最广泛的培养基。其他如M199、IMDM、L15培养基等也用于某些细胞的培养。其具体的特征及应用如下： 1、BME细胞培养基基础Eagle 培养基 (Basal Medium Eagle)，1955 年Eagle 设计，BSS+ 12 种氨基酸+谷氨酰胺+ 8种维生素。简单、便于添加，适于各种传代细胞系和特殊研究用，在此基础上改良的细胞培养基品种有MEM、DMEM、IMDM等。 2、MEM细胞培养基又称低限量Eagle 培养基 (Minimal Essential Medium) ，1959 年在Eagle's基础培养基 (BME )上修改而来，删去赖氨酸、生物素，氨基酸浓度增加，适合多种细胞单层生长，有可高压灭菌品种，是一种最基本、试用范围最广的培养基，但因其营养成分所限，针对生产之特定细胞培养与表达时，并不一定是使用效果最佳或者最经济的培养基。 3、DMEM细胞培养基 DMEM 是由Dulbecco 改良的Eagle 培养基, 起初是为小鼠成纤维细胞设计的。DMEM的氨基酸浓度是MEM的两倍，维生素浓度是MEM的4倍，采用双倍的HCO3-和CO2浓度起到更好的缓冲作用。最初的配方中葡萄糖含量为1000 mg/L,后来为了某些细胞的生长需要，将葡萄糖含量又调整为4500 mg/L, 这就是大家常说的低糖和高糖了。低糖适于依赖性贴壁细胞培养，特别适用于生长速度快、附着性较差的肿瘤细胞培养。高糖更适合高密度悬浮细胞培养，也适用于附着性较差，但又不希望它脱离原来生长点的克隆培养，也可用于杂交瘤中骨髓瘤细胞和DNA转染的转化细胞的培养。例如CHO细胞表达生产乙肝疫苗、CHO细胞表达EPO。 4、IMDM细胞培养基 Guilber 和Iscove 将Dulbecco' Medium 改良为Iscove's Medium,用于培养红细胞和巨噬细胞前体。此种培养液含有硒、额外的氨基酸和维生素、丙酮酸钠和HEPES o并用硝酸钾取代了硝酸铁。IMDM 还能够促进小鼠B淋巴细胞，LPS 刺激的

工作中的年龄歧视

工作中的年龄歧视英语专四阅读模拟试题：工作中的年龄歧视 Recently, Congressional Democrats introduced legislation to make it easier for older workers to win age discrimination lawsuits. Age discrimination remains a significant workplace issue. In recent ten years, 15.79 percent of cases brought to the Equal Employment Opportunity Commission, were described as successful claims. While this number is small given the number of workers covered by the Age Discrimination in Employment Act, many, if not most, instances of age discrimination are never sued, and cases hiring discrimination often go undetected. Most of those who do sue are white, male middle-managers who are likely to have lost a sizeable salary and pension. For the most part, other groups do not sue because the costs of a lawsuit outweigh the potential benefits. Age discrimination remains a significant workplace issue. There is strong experimental evidence for age discrimination in hiring, at least for entry-level jobs. Recently, I performed a labor market experiment in Boston in which I sent out thousands of resumes for fictitious (虚构的) entry-level female candidates and measured response rate based on date of high school graduation. Among this group, younger applicants, whose date of high school graduation indicated that they were less than 50 years old, were 40 percent more likely to be called back for an interview than were older applicants. It is difficult to tell whether employment problems are worse for older workers than for other workers when times are bad. The number of discrimination lawsuits increases during times of high unemployment, but this finding by itself does not indicate an increased level of age discrimination. In times of higher unemployment, the opportunity cost to a lawsuit is lower than it is when times are good. From the employer's perspective, mass layoffs may seem like a good chance to remove a higher proportion of generally more expensive older workers without the worry of being sued. On the other hand, employers may be less likely to remove protected older workers because' they still fear lawsuits. One thing we do know is that once an older worker loses a job, he or she is much less likely to find a new job than a younger worker is. Unfortunately, the effect of legislation prohibiting age discrimination is not easy to see and may actually be part of the reason it is so difficult for older workers to find employment. If it is more difficult to fire an older worker than a younger worker, a firm will be less likely to want to hire older workers. Indeed, my research finds that in states where workers have longer time to bring a lawsuit claim, older men work fewer weeks per year, are less likely to be hired, and less likely to be fired than men in states where they do not have as much. Not many people would suggest that we go back to a world prior to the Age Discrimination in Employment Act, in which advertisements specify the specific ages of people they are willing to hire. However, legislation prohibiting discrimination is no panacea (万灵药). The recent proposed congressional legislation could have both positive and negative effects on potential older workers.

我的细胞培养计划作业

我的细胞培养计划 1、培养目的：肺上皮细胞原代培养是研究肺组织形态结构和功能及其在病毒感染等各种损伤条件下的病理变化的重要方法之一。建立一种操作简便、重复性好的体外培养BALB/c小鼠原代肺上皮细胞（AEC）的方法，探究不同发育阶段小鼠AEC中腺病毒受体（CAR）表达量的变化，及其对小鼠原代AEC贴壁的作用。进而研究腺病毒引起肺上皮病毒感染的机制。 2、实验室条件：超净工作台、培养箱、倒置显微镜、冰箱、冷冻保存装置、细胞计数板和电子细胞计数仪、离心机、PH计、天平、水纯化装置、高压蒸汽消毒装置、电热干燥箱、过滤除菌装置、手术器械、培养器皿、移液器、特殊用具、杂用品 3、培养方法： 1）培养基的选用（含应补充的附加成分）及培养所需的其它用液；胎牛血清（FBS）、改良型RPMI-1640培养基、Ⅰ型鼠尾胶原蛋白、链霉蛋白酶（pronase）、DnaseⅠ、胶原酶Ⅰ、D- Hank's平衡液（含Ca2+、Mg2+，不含酚红）、Hank's平衡液（不含Ca2+、Mg2+、酚红）、山羊血清、CAR（H300）Rabbit Polyclonal IgG2a、IgG- HRP、Goat anti-Rabbit IgG-、DAPI 2）具体操作方法及步骤（按实际操作分步列出）； 1 接种原代细胞的培养板使用前用0.01 2 mg/mL Ⅰ型鼠尾胶原蛋白溶液包被处理。按照2μg/cm2 包被浓度包被培养板，6孔培养板每孔底面积95cm2加0.012 mg/mLⅠ型鼠尾胶原蛋白溶液1580μL，24孔板加300μL，确保溶液铺满器皿表面，开盖在超净工作台上过夜晾干（也可在室温放置1 h，用PBS缓冲液洗3~4次后直接使用），4℃无菌保存。 2 颈椎脱臼法处死小鼠，无菌条件下用75%酒精棉消毒手术区域剖取肺组织；肺组织置于预冷的PBS溶液中漂洗，去除（支）气管、结缔组织等非肺组织，清洗数次去血。 3 用眼科手术剪将肺组织剪成1 mm3大小的肺组织块，用预冷的PBS溶液轻轻混悬，于4℃、1500 r/min离心5 min，轻轻吸弃上清，重复 3~4次至上清澄清。 4 加入1 mL 0.15%链酶蛋白酶溶液（含0.02 g/L DNaseⅠ），用37℃、5% CO2培养箱中消化15~20 min，期间不断搅拌或振荡使消化充分，此时大部分肺组织块被消化为细胞悬液；加入与消化液等量的10% FBS-RPMI1640培养基终止消化，轻柔并充分吹打均匀，100目不锈钢筛网过滤细胞悬液，去除组织块；滤液于4℃、1000 r/min离心 8 min，弃上清，所得沉淀即为总细胞，主要为AEC 和成纤维细胞； 5 沉淀用1 mL 0.1%胶原酶Ⅰ溶液重悬，37℃、 5% CO2培养箱中消化15 min；加入等量的10% FBS-RPMI1640培养基终止消化，充分吹打均匀， 4℃、1000 r/min离心5 min，弃上清，沉淀（主要为AEC，极少量为成纤维细胞）用10% FBS- RPMI1640培养基重悬，37℃、5% CO2培养箱中培养。 6 在37℃、 5% CO2培养箱中培养1h后，贴壁的为纯成纤维细胞，未贴壁的大部分为上皮细胞，轻柔吸出培养基，4℃、1000 r/min离心5min，沉淀重悬接种至新的细胞板孔中；1h后反复上述步骤，37℃、5% CO2培养箱中培养，24h

细胞培养基生产企业达标检查标准及实施细则

附件1：细胞培养基生产企业达标检查标准及实施细则（征求意见稿）二0一0年十一月

编写说明一、根据2010年9月20日《动物细胞培养基生产管理及质量控制学术研讨会纪要》，结合我国的实际情况制定本标准。二、本标准以2010年新版《药品生产质量管理规范》为依据，结合生物制品对细胞培养基原材料的特殊要求制定。三、本标准所涉及的生产企业应包括国内细胞培养基生产企业/分装厂及进口细胞培养基在国内的分装企业。四、本标准共分质量管理、机构与人员、厂房与设施、设备、物料与产品、确认与验证、文件管理、生产管理、质量控制与质量保证、委托生产与委托检验、产品发运与召回、自检等十二个部分，共158项，其中否决项目(△)16项，重要项目（*）74项，一般项目68项。五、检查中发现不符合要求的项目统称为“缺陷项目”。其中，重要项目（*）不符合要求者称为“严重缺陷”，一般项目不符合要求者称为“一般缺陷”，否决项目(△)不符合要求者称为“否决”。六、在检查过程中，企业隐瞒有关情况或提供虚假材料的，按否决处理。检查组应调查取证并详细记录。七、企业在申请达标检查时还应提交以下资料 1、企业营业执照（正本）复印件； 2、企业组织机构代码证复印件； 3、企业通过权威认证机构进行质量认证的审计报告和认证证书（如ISO9001证书）复印件； 4、企业组织机构图； 5、企业最近两年的产品清单（不足两年的企业提供所有生产的产品清单）。八、结果评定 1、未发现“否决”，且“严重缺陷”≤10%，且“一般缺陷”≤20%，各类缺陷项目能够立即改正的，企业必须立即改正；不能立即改正的，企业必须提供缺陷整改报告及整改计划，方可通过达标认证。 2、发现“否决”或“严重缺陷”＞10%或“一般缺陷”＞20%的，不予通过达标认证。

张瑞演讲稿人成熟与不成熟跟年龄没有关系

人成熟与不成熟跟年龄没有关系，人成熟不成熟，就是你能不能站在对方的角度去看待事物。就是能不能把我的世界变成你的世界。这个社会有很多的成年人，还没有脱离幼稚的行为。一点小事情就跟别人争来争去。第一个特征------就是立即要回报只有春天播种，秋天才会收获。很多人在做任何事情的时候，刚刚付出一点点，马上就要得到回报。就像做生意，开始没有什么成绩，就想着要放弃，有的人一个月放弃，有的人三个月放弃，有的人半年放弃，有的人一年放弃……，这是一种典型失败者的习惯。所以要有眼光，要看得更远一些，眼光是用来看未来的！对在生活中有放弃习惯的人，有一句话一定要送给你：“成功者永不放弃，放弃者永不成功”。穷人有两个非常典型的心态：一、永远对机会说：“不”；二、总想“一夜暴富”。今天你把什么机会都放到他的面前，他都会说“不”，你把你开饭店的成功经验，发自内心的告诉你的亲朋好友，让他们也去开饭店，是不是照样有人不干。这是穷人一个非常典型的心态，他会说：“你行，我可不行！”。一夜暴富的表现在于，你跟他说任何的生意，他的第一个问题就是“挣不挣钱”，你说“挣钱”，他马上就问第二个问题“容易不容易”，你说“容易”，这时他跟着就问第三个问题“快不快”，你说“快”！这时他就说“好，我做！”呵呵，就这么的幼稚！大家想一想，在这个世界上有没有一种：“又挣钱，又容易，又快的”，没有的，即使有也轮不到我们啊！我们一定要懂得付出，因为我们是为了追求我们的梦想而付出的，人就是为了希望和梦想活着的，如果一个人没有梦想，没有追求的话，那一辈子也就没有什么意义了！就像一个算命算的非常准的算命先生，把你的一生都告诉你了，包括你什么时候毕业，什么时候工作，什么时候结婚，什么时候有孩子，四十岁如何，五十岁如何，以后你的孩子怎么样，什么时候过世。你再来生活，还有意义吗？是不是一点意义都没有了，人类是为了希望和梦想而活着的。所以，在生活中你想获得什么，你就得先付出什么。你想获得时间，你就得先付出时间，你想获得金钱，你得先付出金钱。你想得到爱好，你得先牺牲爱好。你想和家人有更多的时间在一起，你先得和家人少在一起。但是，有一点是明确的，你在这个项目中的付出，将会得到加倍的回报。就象一粒种子，你把它种下去以后，然后浇水，施肥，锄草，杀虫。最后你收获的是不是几十倍，上百倍的回报。一定要懂得付出，不要那么急功近利，马上想得到回报，天下没有白吃的午餐，轻轻松松是不可能成功的。一定要懂得先付出！

细胞培养全过程

我是细胞培养的新手，在开始养细胞前看到篇文章（老师给的）很实用，希望对大家有帮助。细胞培养室实验操作规范一、细胞培养室的环境 1. 细胞生长要求严格的无毒无污染环境，因此必须注意培养室的清洁卫生，保持操作空间的无菌条件： 1) 培养室应为独立、封闭的空间。培养室及缓冲间都应保持整洁，不要随意出入； 2) 保持超净工作台的无菌环境，每次使用前打开紫外灯照射消毒15—30分钟；每次使用后将废弃物清理干净，各用具规放整齐，用70%酒精擦净台面，再打开紫外灯照射30分钟以上； 3) 定期擦洗桌面、地板、清洁培养室，并用0.1%的新洁尔灭溶液消毒；定期打开培养室的大紫外灯，将整个房间进行照射消毒； 4) 每次打开培养箱前，或手伸入超净工作台进行操作之前，均应用70%酒精擦手。 5) 定期清理冰箱。将药品试剂分类摆放，过期的试剂应及时清除； 6) 培养箱要定期清洁。隔板及内壁等用0.1%的新洁尔灭溶液清洗，再用70%酒精擦净；并要注意底层水箱的水位，及时补充水份； 7) 注意监测CO2的气压，及时补充。 8) 注意监测液氮罐中液氮的挥发情况，及时补充，液面不能低于最高一层细胞冻存盒的位置。 2. 实验器具的清洗、消毒灭菌： 1) 反复使用的器皿应严格清洗干净，其清洗程序为：清水浸泡——去污剂刷洗

——清水冲洗——超声波洗涤——洗液浸泡（过夜）——充分冲洗（务必冲洗干净，不能残留洗液）——蒸馏水漂洗——烘干；若为新的玻璃器皿，要在刷洗后用5%的稀盐酸浸泡过夜。 *洗液：浓硫酸+重铬酸钾 2) 胶塞的清洗：清水浸泡——2%NaOH煮沸10—20分钟——冲洗——1%稀盐酸浸泡30分钟——充分冲洗——蒸馏水漂洗——烘干 3) 玻璃器皿，如玻璃吸管、离心管、玻璃培养瓶、套管等等以及胶塞，清洗后均可用高压蒸气灭菌，15磅灭菌30分钟。 4) 不能高压灭菌而又需反复使用的器具，如加样枪、多道枪的加样槽、塑料吸头等，应事先用70%的酒精擦洗，置于超净工作台中用紫外线照射2小时以上。二、细胞培养用水、用液： 1. 胞培养必须使用玻璃蒸馏器制备的三次蒸馏水，二次蒸馏水或外购的金属蒸馏器制备的蒸馏水只能用来清洗器皿； 2. 平衡盐溶液（BSS）严格按照配方配制，含Ca++、Mg++离子的要避免其沉淀。可过滤灭菌或高压灭菌。采用高压灭菌时如含有葡萄糖等成份，应避免高压过度，一般8磅10分钟及即可。灭菌后的BSS于4℃冰箱中保存，如出现浑浊或沉淀时，应废弃，重新配制。 3. 培养液的配制，以配制1000ml RPMI1640为例： 1) 将RPMI1640干粉倒入约800ml三蒸水中，搅拌使其溶解； 2) 加入5.94g HEPES，在磁力搅拌器上搅拌约半小时； 3) 加入2g NaHCO3，继续搅拌约2小时； 4) 定容至1000ml；必要时用1N NaOH凋至PH7.0 5) 过滤除菌。滤纸由上到下为：普通定性滤纸、0.4μm滤膜、0.22μm滤膜；