瓦伦西亚烯发酵转化率

瓦伦西亚烯发酵转化率

瓦伦西亚烯的发酵转化率可以用以下公式来计算:

转化率(%)= (产物量 / 底物量) × 100

其中,产物量是指在发酵过程中生成的瓦伦西亚烯的量,底物量是指发酵开始时所添加的底物(可能是某种前体化合物)的量。

要准确计算瓦伦西亚烯的发酵转化率,需要进行以下步骤:

1.准备发酵样品:收集发酵产物和底物样品。可以通过采样

和提取方法来收集样品,并将其转化为适合分析的形式,如溶液或固体。

2.分析产物和底物:使用适当的分析方法,如高效液相色谱

法(HPLC)、气相色谱法(GC)或质谱法(MS),对产物和底物进行定量分析。这些方法将产物和底物分离并测量其浓度。

3.计算转化率:使用上述公式,将产物量除以底物量,并乘

以100,即可得到瓦伦西亚烯的发酵转化率。

要注意的是,瓦伦西亚烯的发酵转化率可能还受其他因素的影响,如发酵条件的控制、溶液pH值、发酵时间等。因此,在进行转化率计算时,应确保实验条件的一致性,以确保结果的准确性和可比性。

生物酶法催化瓦伦西亚烯生成圆柚酮

生物酶法催化瓦伦西亚烯生成圆柚酮 孟飞;俞春娜;李海峰;谢恬 【摘要】在体外,利用野生型CYP450BM-3对瓦伦西亚烯进行催化,酶-底物复合物催化NADPH氧化的速率为31±1.0 nmol( nmol P450) -1min-1,但催化产物中没有检测到圆柚酮的生成.突变体R47L/Y51F/F87A与底物复合物催化NADPH氧化的速率高于野生型,为79±6.5 nmol( nmol P450) -1min-1,并在催化产物中检测到圆柚酮的生成,但其产物选择性较差,圆柚酮的含量仅占总产物的6.8%.与此同时,检测了另一个突变体A74G/F87V/L188Q对瓦伦西亚烯的催化效果,发现其与底物复合物对NADPH的氧化速率与突变体R47L/Y51F/F87A相当,但产物中圆柚酮的比率更高,达8.0%. 【期刊名称】《生物技术通报》 【年(卷),期】2012(000)008 【总页数】5页(P194-198) 【关键词】圆柚酮;瓦伦西亚烯;细胞色素P450BM-3;突变体;生物催化 【作者】孟飞;俞春娜;李海峰;谢恬 【作者单位】杭州师范大学生物医药与健康研究中心,杭州311121;杭州师范大学生命与环境科学学院,杭州310036;杭州师范大学生物医药与健康研究中心,杭州311121;杭州师范大学生物医药与健康研究中心,杭州311121;杭州师范大学生物医药与健康研究中心,杭州311121 【正文语种】中文

倍半萜烯类化合物(sesquiterpene)在自然界分布广泛,是植物精油的重要组分,具有良好的生物活性。圆柚酮[(+)-nootkatone],又名诺卡酮,是倍半萜烯类 化合物瓦伦西亚烯[(+)-valencene]的酮类衍生物,20世纪60年代首次被发现于阿拉斯加黄柏油和柚皮油的挥发性组分中,具有柚子、柑橘、橙子的芳香气味,并带有甜的果皮、木香香韵,作为香精香料可广泛应用于食品、化妆品、日用品以及烟草等行业,具有极高的市场价值[1]。 圆柚酮在天然柚皮油中含量很低,一般很难从中直接分离获得。目前,工业上最常用的方法是直接氧化价格相对便宜的瓦伦西亚烯来获得。但是,化学催化过程中往往采用一些非环境友好的氧化剂,如三氧化铬、铬酸叔丁酯、乙酰丙酮酸钴或其他一些重金属盐类,对环境造成严重的危害。近几十年来,采用生物技术催化瓦伦西亚烯生成圆柚酮已成为这一领域研究的新趋势[2,3]。 来源于巨大芽孢杆菌(Bacillus megaterium)的细胞色素P450BM-3(cytochrome P450BM-3,CYP450BM-3)是CYP450蛋白家族中特殊的一员,因其负责电子转移的FAD/FMN还原酶结构域和亚铁血红素氧化酶结构域都包含 在同一条肽链中[4],使得它具备了成为工业用酶的独特优势。CYP450BM-3能高效催化其天然底物中长链饱和脂肪酸亚末端的羟基化反应,但它也可氧化结构不同于天然底物的某些物质。目前,定点突变和定向进化技术已被用于对CYP450BM-3进行蛋白结构改造,以便获得对目标底物具有良好催化活性的突变体[5-10]。已有文献报道,野生型CYP450BM-3对瓦伦西亚烯具有氧化活性,但产物中没有圆柚酮,而其突变体则能有效氧化瓦伦西亚烯生成圆柚酮(图1)[11]。本研究旨在寻找对瓦伦西亚烯具有更高催化效率和产物特异性的CYP450BM-3突变体。 1.1.1 菌种与质粒大肠杆菌BL21(DE3)、pET-28a(+)表达载体均由本实验室保藏。重组质粒pMD19-CYP450BM-3和pMD19-R47L/Y51F/F87A已由本实 验室构建。

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