Western Blot常见问题及处理总结
免疫细胞研究westernblot
WesternBlot常见问题及处理总结
阿木
1、westernblot的优点
答：灵敏，可达ng级，用Ecl显色法理论上可达pg级。方便，特异性高。
2、为什么我的细胞提取液中没有目标蛋白？
答：原因有很多:a)你的细胞中不表达这种蛋白质，换一种细胞；b)你的细胞中的蛋白质被降解掉了，你必需加入PMSF，抑制蛋白酶活性；c)你的抗体不能识别目标蛋白，多看看说明，看是否有问题。
3、我的细胞提取液有的有沉淀，有的很清亮，为什么呢？
答：a)有沉淀可能因为你的蛋白没有变性完全，可以适当提高SDS浓度，同时将样品煮沸时间延长，b)也不排除你的抗原浓度过高，这时再加入适量上样缓冲液即可。
4、我做的蛋白质分子量很小（10KD），请问怎么做WB？
答：可以选择0.2μml的膜，同时缩短转移时间。也可以将两张膜叠在一起，再转移。其他按步骤即可。
5、我的目的带很弱，怎么加强？
答：可以加大抗原上样量。这是最主要的。同时也可以将一抗稀释比例降低。
6、胶片背景很脏，有什么解决方法？
答：减少抗原上样量，降低一抗浓度，改变一抗孵育时间，提高牛奶浓度。
7、目标带是空白，周围有背景，是为什么？答：你的一抗浓度较高，二抗上HRP催化活力太强，同时你的显色底物处于一个临界点，反应时间不长，将周围底物催化完，形成了空白即“反亮现象”。将一抗和二抗浓度降低，或更换新底物。
8、我的胶片是一片空白，是怎么回事？
答：如果能够排除下面的几个问题那么问题多半出现在一抗和抗原制备上。
a)二抗的HRP活性太强，将底物消耗光；b)ECM 底物中H2O2，不稳定，失活；c)ECL底物没覆盖到相应位置；d)二抗失活。
9、我在显影液中显影1分钟和5分钟后,底片漆黑一片,是什么原因呢?
答：a)可能是红灯造成的,胶片本来就被曝光了，可以在完全黑暗的情况下操作.看是否有改善.；
b)显影时间过长。
10、DAB好还是ECM好？
答：DAB有毒，但是比较灵敏，是HRP最敏感的底物；ECM结果容易控制，但被催化时灵敏度差一点，但如果达到阀值，就特别灵敏，可以检测pg级抗原。要看你实验的情况。
11、抗原检测出的分子量比资料上的大，是怎么回事？
答：a)抗原形成了二聚体。增多巯基乙醇量，煮沸变性时间延长，可以打开二聚体。b)蛋白本身的修饰如：糖基化，磷酸化等
12、蛋白转移不到膜上，但胶上有，同时Marker 转上去了，为什么？
答：可能是：a)样品浓度过低；b)转移时间不够，。
13、磷酸化抗体的检测样本制备时是否一定要加NaF等？
答：NaF是一种广谱磷酸化酶的抑制剂，一般最好加。但是不加也可以，大部分时候是不用加的。
14、要验证某个细胞上有无该蛋白的存在，需要做免疫组化和westernblot试验吗？做这两个试验时的一抗和二抗可以共用吗？
答：①免疫组化可以用来进行定位，但是不能精确定量，而且有时会有假阳性，不易与背景区分；Westernblot可以特异性检测某个蛋白质分子，进行定量，但是不能定位。
②两种实验的一抗有时候不能通用，公司的产品说明一般都会说明可以进行什么实验，在免疫组化时，是否适合石蜡切片或者冰冻切片。
15、做WesternBlot时，提取蛋白后冻存（未加蛋白酶抑制剂），用的博士德的一抗，开始还有点痕迹，现在越来越差，上样量已加到120μg，换了个santacloz的一抗仍不行。是什么原因？蛋白酶抑制剂单加PMSF行吗？
答：怀疑是样品问题，可能是：1，样品不能反复冻融；2，样品未加蛋白酶抑制剂。同时，建议检查WesternBlot过程，提高一抗浓度。对于加蛋白酶抑制剂来说，一般加PMSF就可以了，最好能多加几中种蛋白酶抑制剂。
16、细胞水平要做westernblot，多少细胞提的蛋白够做westernblot？
答：一般5×10^6就足够了
17、同一样品能同时提RNA又提蛋白么？这样对westernblot有无影响？
答：能，没有问题。
18、同一蛋白样品能同时进行两种因子的WesternBlot检测吗？
答：当然可以，有的甚至可以同时测几十种样品。
19、如果目标蛋白是膜蛋白或是胞浆蛋白，操作
需要注意什么？
答：如果是膜蛋白和胞浆蛋白，所用的去垢剂要温和得多，这时最好加上NaF去抑制磷酸化酶的活性。
20、我的样品的蛋白含量很低，每微升不到1微克，但是在转膜时经常会发现只有一部分蛋白转到了膜上，就是在转膜后染胶发现有的孔所有的蛋白条带都在，只是颜色变淡了，有什么办法可以解决？
答：你可以加大上样量，没有问题，还有转移时你可以用减少电流延长时间，加20％甲醇。21、想分离的蛋白是分子量200kd的，SDS-PAGE 电泳的分离胶浓度多大合适？积层胶的浓度又该用多少？这么大分子量的蛋白容易作WesternBlot吗？
答：200kd的蛋白不好做，分离胶用7％，积层胶3.5％。
22、如果上样量超载，要用什么方法来增加上样量？
答：可以浓缩样品，也可以根据你的目标分子量透析掉一部分小分子蛋白。一般地，超载30％是不会有问题的。如果已经超了不少了，而且小分子量的也要，可以考虑加大胶的厚度，可以试试
1.5mm的。
23、蛋白变性后可以存放多久？
答：－80℃，一两年没有问题。最关键两条：不要被蛋白酶水解掉；不要被细菌消化掉(也是被酶水解了)。
24、我所测定的蛋白分子量是105KD，按理说分离胶应当采用7.5%，但资料却要求分离胶和浓缩胶均采用11％的配方，不知为何？
答：上述提到的两种凝胶均可以使用，因为105KD 的蛋白在上述两种胶的线性分辨范围内，但需注意条带位置。
25、二抗是生物素化的抗体，三抗是亲和素生物素体系，不知采用这样的方案后，封闭液是否要作调整，能否再用5％的脱脂奶粉呢？好像有资料说脱脂奶粉会影响亲和素生物素的生成，是吗？
解答：不能使用脱脂奶粉，因为脱脂奶粉中含生物素，用ＢＳＡ代替应该好一点．
26、问一般一次上样的蛋白总量是多少，跟目的蛋白的表达量有关系吗？
答：WesternBlot一般上样30－100微克不等，结果跟目的蛋白的丰度、上样量、一二抗的量和孵育时间都有关系，也与显色时间长短有关。开
始摸条件时，为了拿到阳性结果，各个步骤都可以量多一点时间长一点，当然背景也就出来了。要拿到好的结果，如果抗体好的话比较容易，抗体不好的话就需要反复地试了，当然有的不适合WesternBlot的怎样做也不行。
27、做组织样品的western的时候，怎样处理样品？
答：必须进行研磨、匀浆、超声处理，蛋白质溶解度会更好，离心要充分，膜蛋白需用更剧烈的方法抽提，低丰度膜蛋白可能还要分步抽提(超速离心)。还有一点就是组织中的蛋白酶活性更强，需要注意抑制蛋白酶的活性（加入ＰＭＳＦ）。28、问大分子量蛋白200KD，在做western要注意什么呢？
答：做200kd蛋白的WesternBlot时要注意，分离胶最好选择>7%的；剥胶时要小心；转移时间需要相应延长；要做分子量参照（否则出现杂带不知道如何分析）。
29、有什么方法可以提高上样量？
答：a)可以浓缩样品；增大上样体积来增大上样量；b)用5倍的上样缓冲液来稀释变性
30、蛋白的上样量有没有什么具体的要求？
答：上样量要根据实验的要求来定，如果要求是
定量和半定量的WesternBlot则上样量要均等，如果只是要定性，则没有太大的关系，尽量多上就行了，但是不要超载.
31、一抗，二抗的比例是否重要？
答：比较重要，调整好一抗，二抗的比例，可以去掉部分非特异的本底。
32、要做磷酸化某因子WesternBlot，其二抗有何要求？
答：对二抗无要求，要看你实验条件来选择，一般推荐用HRP标记的二抗。
33、免疫组化和WesternBlot可以用同一种抗体吗？
答：免疫组化时抗体识别的是未经变性处理的抗原决定簇（又称表位），有些表位是线性的，而有的属于构象型；线性表位不受蛋白变性的影响，天然蛋白和煮后的蛋白都含有；构象型表位由于受蛋白空间结构限制，煮后变性会消失。如果你所用的抗体识别的是蛋白上连续的几个氨基酸，也就是线性表位，那么这种抗体可同时用于免疫组化和Western，而如果抗体识别构象形表位，则只能用于免疫组化。
34、WesternBlot中抗体的可以重复应用吗？答：抗体工作溶液一般不主张储存反复使用，但
是如抗体比较珍贵，可反复使用2－3次。稀释后应在2－3天内使用，4度保存，避免反复冻融。
35、在做WesternBlot时，PVDF膜用甲醇浸泡的目的？
答：PVDF膜用甲醇泡的目的是为了活化PVDF膜上面的正电基团，使它更容易跟带负电的蛋白质结合，做小分子的蛋白转移时多加甲醇也是这个目的。
36、检测同一抗体的磷酸化和非磷酸化的抗原可以在同一张膜上吗？
答：可以。
37、转膜后经丽春红染色的条带，为什么大蛋白分子的一端的转膜好象不是很好，为什么？
答：这是正常的，大分子的蛋白转移的慢，你延长转移时间和电流，大分子一端就会好的多，但是小分子的就有可能会变淡。
38、做WesternBlot时，同样的抗体免疫组化能做出，而WesternBlot却不能？
答：这多半是抗体的问题，要看抗体的说明，是否能做WesternBlot和免疫组化。
39、如果是6×8转印膜，要加多少一抗？
答：一抗的稀释度是有说明的，根据你的一抗看看就知道了，但是那么大的膜孵育体积一般最少
为3－5ml。
40、上下槽缓冲液有何要求，怎样才能达到最佳效果。
答：无特殊要求。但我们一般是上槽放新鲜的缓冲液，下槽可以是重复使用过一两次的缓冲液41、跑电泳的时候配的胶总是“缩”是什么原因呢？是有的成分不对吗？
答：没什么问题，就是你胶里的水分被蒸发了。过夜时拿保鲜膜包起来，在里面加点水保持湿度就可以了；也可能母液（30%聚丙酰胺）有问题，你可以重新配制一份观察；能够替换的试剂，尽量换一下，选用好的试剂。
42、蛋白质的分子量跨度很大，如要分离小21KD，中至66KD，大至170KD，可以一次做好吗？
答：这么广的分布不好转移，一般建议：21kd和66kd可以一起转，12％SDS-PAGE，湿转120mA，45-60min就可以了，可以根据你实验室的经验调节；170kd用7%SDS－PAGE，200mA90-120min。
43、不能很好地将大分子量蛋白转移到膜上，转移效率低怎么样解决？
答：可以考虑：转移缓冲液中加入20%甲醇（是指终浓度），因为甲醇可降低蛋白质洗脱效率，但可增加蛋白质和NC膜的结合能力，甲醇可以防止
凝胶变形，甲醇对高分子量蛋白质可延长转移时间；转移缓冲液加入终浓度0.1%SDS，也是为了增加转移效率；用优质的转移膜，或使用小孔径的NC膜（0.2微米）.
44、我用的是可视marker，但是电泳总跑不全8条带，请问什么原因？怎样改善？胶用过8％，10％，12％，都是这样。marker是新买的。答：一般来说，是小分子量Marker跑走了，增加胶浓度或减少电泳时间试试看。当然梯度胶也是不错的选择。
45、是否WesternBlot实验半定量一定要加ACTIN内参？
答：对于发表文章的实验最好加内参，实验严谨。
46、核内抗原WesternBlot内参选择什么合适？答：可以选用组蛋白，组蛋白在细胞核中的表达是很稳定的，有很多都可以当成内参，在网上查查就可以选出你要的内参。
47、做半定量WesternBlot，内参β-actin，GAPDH哪个好？
答：选用beta-actin就可以。
48、想问一下细胞裂解液选择蛋白酶抑制剂时有什么原则吗？受不受组织来源的影响？胞膜和胞浆有区别吗？
答：一般来说提取时加入广谱的蛋白酶抑制剂就可以了，操作时保持低温。除非有文献特别指明用特殊的方法，一般来说都没有区别。
49、转膜后的脱脂奶粉封闭液是5%的TBST脱脂奶粉”，其中TBST最后那个T是Tween吗，浓度多大？
答：是Tween，配方如下:Tris-BufferedSalineTween-20(TBST),N aCl：8g，Trisbase：2.42g加水800ml溶解,加500-1000ul的Tween-20,用HCl调节pH至7.4,加水定容至1L.
50、封闭，一抗，二抗时的温度有没有什么规定呢，比如在室温里做，或者要在4度下?
答：均可在室温进行，如果时间不够，一抗孵育可以先在室温进行一个小时，然后4度过夜。51、请问一下PVDF膜和硝酸膜结合蛋白的原理是什么？
答：一般而言，硝酸纤维素膜是通过疏水作用来和蛋白质相联，这样的话，反复洗几次后，蛋白容易掉下来，结果较差。PVDF膜主要通过它膜上的正电荷和蛋白接合，同时也有疏水作用，但相对较弱。这样的话，PVDF膜和蛋白接合较牢，不易脱落，结果较好。
52、怎样才能把胶跑的非常漂亮，泳道都能很直，上样的量和灌胶是否很重要，电压有什么要求？答：影响跑胶跑的质量，有以下几个因素：1、电压，小的电压会使胶的分子筛效应得到充分发挥。电压越小，条带越漂亮，浓缩胶55v，分离胶75v 就能跑得很好。2、胶的均匀度，胶越均匀，条带越窄，分离越均匀。倒胶之前，一定要充分混匀，玻璃板一定要干净，双蒸水隔离时，一定要比较轻地加上去，避免稀释上层的分离胶.
53、为什么提高大分子量蛋白的转移的时候，小分子量蛋白会丢失一些哪?什么原因?
答：小分子的蛋白在转移过程中，会透过膜去，所以大分子的上去以后，有一部分小分子的就透过去了。
世上没有一件工作不辛苦，没有一处人事不复杂。不要随意发脾气，谁都不欠你的
计算机实训总结
计算机实训总结（一） 计算机实训就这样结束了，我感觉自己还有好多东西要学，还有好多的东西不懂呢!每次实训，上机操作，我都感觉学到了好多东西!因为是一天到晚的不间断训练，所以记的会非常牢固。 在课上，有老师在前面讲解我们都还能跟着做，可轮到我们独立完成的时候，因为实际操作的少，早就忘光了!我很感谢学校有实训这样的安排，把我们这一学期学的东西系统的集中的进 行训练，对我们计算机水平的提高发挥着重要作用!计算机一级考试也就快到了，希望通过实 训可以帮助我们顺利通过考试。 在考试端上不断抽题训练，基本上能掌握WINDOWS XP的基本操作，和 Excel,word,outlook powerpoint。而且我发现我对计算机有了新的认识，以前只知道玩游戏、娱乐和简单的应用。通过这次的实训，我了解到，要真真正正的掌握计算机程序还不是一件简单容易的事儿，但真正掌握后，它带个我们的将是无穷的便捷与科技，我喜欢高端便捷的生活。 文字录入题是操作题里的第一大题，而且有时间限制。通常在练习的时候会先完成这一题， 因为要打标点的关系，文字输入的状态需要改变，会因此浪费掉时间，总的来说打字速度还有待提高。 WINDOWS XP的基本操作题，主要学习了鼠标及窗口操作、任务栏和开始菜单设置、控制面板和显示设置操作、添加和删除程序等计算机基本操作技能，这些里对控制面板的了解还不够深入。同时也熟悉WINDOWS文件管理方式，了解路径、文件夹、文件、文件类型的概念，能 够按需要创建文件和文件夹，掌握在资源管理器中对文件和文件夹进行复制、移动、删除、压缩等常规管理任务，懂得查看和修改文件属性，为文件创建快捷方式。 EXCEL在平时用的少，了解也少，但是基本上掌握了excel工作表的建立、删除、重命名等操作。和工作表中 数据的输入、编辑操作，对于excel计算公式与常用函数的使用还不能完全运用自如，尤其 是要套用公式的。 Powerpoint的制作。联系中掌握了演示文稿的编辑与文本格式化操作，和演示文稿的演示 技术与设置。在平时，常常会有PPT演讲大赛，这正好可以帮助我们制作PPT。 Internet与outlook expres。实训里掌握了IE的基本应用：浏览网页，将指定的页面、图片下载，收藏夹的使用与管理。也掌握了outlook express的帐号和邮件管理，电子 邮件的建立和发送。 Access数据库、表与查询的创建与使用。掌握了数据库、数据表创建的方法，数据表的编辑操作，数据库中数据表间关系的建立与设置，和数据库中查询的创建、修改及操作。 网页图片的处超链接的创建与框架网页。在习题里，掌握了网页中图片的插入与 编辑，网页图片与文字环绕方式的设置，文本超链接的建立，图片超链接建立和热点的建立，框架网页属性的设置等。 但是平时最注重联系操作题，常忽略了理论题。信息处理与计算机基础知识，都掌握的不好，还有很多知识记不准，这是我要不断加强的地方，在考试之前多背，加强记忆。计算机实训让
ImageJ对WesternBlot进行灰度分析
Image J 对Western blot 条带进行灰度分析 Image J软件：Windows 版本 第一步：软件安装 1.下载地址：https://www.360docs.net/doc/687351788.html,/ij/download.html 2.下载windows 32位带Java版本，双击软件安装。 第二步：界面介绍 1.软件界面 第三步：图片分析 1.下图为样板图片 2.导入图片：File> Open> Sample1.jpg 图片导入后，Sample1.jpg在新的窗口中打开
3.图片类型设置：Image> Type> 8 bit 4.去除图片背景：Process> Subtract Background> …
4.1Subtract Background 窗口：Rolling ball radius 设为50 pixels， 勾选light background，可选preview，点击“OK”确定 5.工具栏:选择“矩形选框”
6.最大化“Sample1.jpg”窗口，便于矩形选择，矩形选择第一个泳道 7.标记“矩形选框”为1：矩形选择后，调整矩形至合适大小，按下数字键 “1”，或者Analyze> Gels> Select Fist Lane。 8.选择“泳道2”：拖动“1”的矩形框，会出现两个矩形选框，拖动矩形框 至泳道2，调整位置，并按下数字键“2”，Image J 会自动调整大小使“矩形框2”与“矩形框1”保持同一水平。 9.继续拖动，会出项新的“矩形选框”，调增至泳道3，并按下数字键“2” （注意：是按下数字键“2”），重复9至6个泳道全部选择。 10.所有泳道选择后，按下数字键“3”，出现分析图谱。
大学生实习报告总结与体会
大学生实习报告总结与体会 相信实习对我们以后的工作会有很大帮助，是我们走向社会的最后一堂很有意义的实践课。下面提供大学生实习报告总结与体会，欢迎阅读! 大学生实习报告总结与体会【1】通过这次实习，我觉得我收获很大，首先，我知道了大学生实习报告怎么写，同时，在老师的指导下，我也知道了毕业论文怎么写。这次实习使我明白走向社会工作是一件多么不容易的事。在以后的工作中，我一定会珍惜机会，争取将工作做得更好。以下是我的毕业实习个人总结： 首先我在这次任务中担任检验员，虽然任务算是最轻的，但重要是熟悉各个部门操作流程.主要方面有①各岗位车间的标准程序规章②设备仪器工具的使用③原料辅料检验入库发放记录④关键工序主要瓶颈⑤不同环境下生产产品的检验⑥检验记录。其次这次实习，帮助我树立药品生产反应是中心、工艺是主体、设备是环境、检验是条件的思想，使我认识到药品生产是按工艺和检测两大主线来实施的。通过这种普遍联系的整体—部分—整体的思维方法和认识过程，使我学到一套科学的训练方法。提高动手、观察、分析、综合等四种能力，促使生产能力的提高落到实处：动手能力是收集毕业设计资料与素材的首要能力。观察能力是生产能力
强弱的直接体现。分析能力是前两种能力的发展。综合能力是前三种能力的总括和提高. 通过认识实习——生产实习——毕业实习在时间和空间上形成一个实践链，这个链的高端环节毕业实习—毕业设计(论文)将使学生的四年学习的庞杂而繁多的知识和理论得到一次新的全面的“装配”与升华。 我这次毕业实习的题目是《青霉素的工业生产及相关影响检测》.青霉素由真菌产黄青霉产生的。青霉素的生产目前主要用微生物发酵法进行生物合成。很少数亦可用化学合成法生产。此外还可将生物合成法制得的青霉素用化学或生化方法进行分子结构改造而制成各种衍生物，绝大多数青霉素是针对新药物开发的,因此人们总希望在发酵过程或其后的工艺过程中努力提高其产率.本研究旨在探讨不同发酵条件对青霉素发酵的影响,为调控生产青霉素提供最佳的发酵条件，和缩短生产周期，提高产量提供科学依据 实习的开始通过对青霉素生产工艺的文献检索，对整理资料的认真学习和分析，掌握了青霉素的一般生产工艺流程，并有针对性的了解了青霉素的生产环境，生产状况有了实质性的认识。通过实习期间对不同ph值温度最适时间生产的青霉素进行管碟法检测.而系统的认识到了青霉素质量检验.通过不同环境生产青霉素为调控生产青霉素提供最佳的发
western blot条带分析
近几天回答了蛋白版几个有关压片和显影的帖子，发现在这一块还没有比较系统的论述。特贡献了western显影常见问题及解决方案，是我的经验总结，以供大家参考。其中绝大部分问题是我所遇到过的，其他个别我没遇到过的是参照pierce公司的说明书。限于字数，语言比较简洁，如对其中内容有疑问或建议可跟帖。 Western荧光检测取决于抗原含量—一抗敏感度—二抗敏感度—底物敏感度—显影和定影效率这一系统。我的经历认为确保万无一失的做法是如果看到荧光则压10~30s，看不到则同时压两张，10~30min洗一张，如果无则再补一张,1h后洗。再无，则压过夜。共3张片，根据每次结果调整。 其中两张片子的压法如下描述: 先剪一张比膜长2~3厘米的片子（以供贴胶带），然后剪2片细小透明胶带贴到片子的左右两边（贴时胶带留一半用于粘到封口膜上），然后将片子压到膜上，并使透明胶带留出的一半粘到封口膜上。这样就固定了第一张胶片，就不会因为放、取第二张胶片而使第一张移动了。然后放第二张胶片，与第一张片子贴在一起就行，注意片子要干燥，压片前用纸擦干封口膜，以避免被底物液体污染导致与下面一张粘在一起。取时用手轻轻拂过就可以把上面片子与下面一张错开了，不要用手抠，否则下面一张也移动了。在洗下面一张片子时一定要取掉粘在片子上的胶带，否则在胶带的地方会影响显影。荧光经过下面一张胶片会稍微有些衰减，所以下面一张胶片感光稍微比上面一张强一些。 现象-- - - - - - - - - - - - - - - - - - --原因- - - - - - - - - - - - - - - - --- -- -- --- -- ---解决 反影(白色条带,黑色背景) ---- -- -1 HRP过高(背景较高) - - - - - - - - ---- - - - 至少成倍稀释一抗/二抗(可4~10倍)*注1 显影后膜上条带处变为黄色---- - -2 HRP过高(敏感性太高)- - - - - - - - - ---- -至少成倍稀释一抗/二抗(可4~10倍)*注2 信号弱或无---- - - - - - - - - - ---- 3 HRP过高引起底物迅速耗竭- - - - - -- - - -至少成倍稀释一抗/二抗(可4~10倍)*注3 --- - - - - - - - - - - - - - ---- - - - --4 抗体-抗原系统敏感性过低- --- - - - - - - 提高抗体浓度/蛋白上样量*注4 - - - - - - - - - - - - - - - ---- - - - --5 转膜不充分/过转- -- -- - - -- - - - - ---- -优化转膜条件*注5 -- - - - - - - - - - - - - - ---- - - - - -6 HRP或底物活性降低---- - - -- - - -- - ----测试活性或选用敏感底物*注6 高背景---- - - - - - - - - - - - - - - -7 HRP过高(背景较高) - -- - - - - - - - - - -- 至少成倍稀释一抗/二抗(可4~10倍)*注7 ---- - - - - - - - - - - - - - --- - - ----8 封闭时间不足- - - - - - - - - - - -- - - - -- 延长封闭时间4度过夜最好*注8 --- - - - - - - - - - - - - - --- - -- -- -9 抗体与封闭液有交叉----- - - - - - - - - - -更换封闭液(如3%BSA的TBST)*注9 --- - - - - - - - - - - - - - - -- - -- - -10 TBST洗脱不足- - - - - - - ---- - --- - - -增加洗脱时间、次数、用量*注10 ---- - - - - - - - - - - - - - -- - -- - --11 暴光时间过长- - - - - ---- - - ------ -- --降低暴光时间*注11 - - - - - - - - - - - - - - - - -- - - ----12 抗原-抗体浓度过高- - - - - - -- --- - - - 降低抗体浓度或蛋白上样量*注12
最新的大学生实习报告总结【四篇】
最新的大学生实习报告总结【四篇】 实习能够完善我们头脑中的世界图像。实际上，一旦实习开始，我们就会发现，实习不仅仅是已有知识应用的过程，小编整理了最新的大学生实习报告总结【四篇】，希望能帮助到您。 大学生实习报告总结一 为期二周的钳工实训结束了，在实训期间虽然很累，但我们很快乐，因为我们在学到了很多很有用的东西的同时还锻炼了自己的动手能力。虽然实训期只有短短的两周，在我们三年的大学生活中它只是小小的一部分，却是非常重要的一部分，对我们来说，它是很难忘记的，毕竟是一次真正的体验社会、体验生活。 重要的安全 要进行钳工实训，安全问题肯定是摆在第一位的。通过师傅的讲解，我们了解了实训中同学们易犯的危险的操作动作。比如在车间里打闹嬉戏，不经师傅的许可便私自操作机床，以及操作时方法、姿势不正确，等等。一个无意的动作或是一个小小的疏忽，都可能导致机械事故甚至人身安全事故。通过这次钳工实训，我了解了金属加工的基本知识、基本操作方法。主要学习了以下几方面的知识：金属加工基本工种包括钳工、车工、铸焊工等的操作。 第一项：辛苦的钳工在钳工实训中，我们知道了钳工的主要内容为刮研、钻孔、攻套丝、锯割、锉削、装配、划线;了解了锉刀的构造、分类、选用、锉削姿势、锉削方法和质量的检测。首先要正确的握锉刀，锉削平面时保持锉刀的平直运动是锉削的关键，锉削力有水平推力和垂直压力两种。锉刀推进时，前手压力逐渐减小后手压力大则后小，锉刀推到中间位置时，两手压力相同，继续推进锉刀时，前手压力逐渐减小后压力加大。锉刀返回时不施加压力。这样我们锉削也就比较简单了。同时我也知道了钳工的安全技术为：
1，钳台要放在便于工作和光线适宜的地方;钻床和砂轮一般应放在场地的边缘，以保证安全。2，使用机床、工具(如钻床、砂轮、手电钻等)，要经常检查，发现损坏不得使用，需要修好再用。3，台虎钳夹持工具时，不得用锤子锤击台虎手柄或钢管施加夹紧力。接着便是刮削、研磨、钻孔、扩孔、攻螺纹等。虽然不是很标准，但却是我们汗水的结晶，是我们两天来奋斗的结果。 钳工的实训说实话是很枯燥的，可能干一个上午却都是在反反复复着一个动作，还要有力气，还要做到位，那就是手握锉刀在工件上来来回回的锉，锉到中午时，整个人的手都酸疼酸疼的，腿也站的有一些僵直了，然而每每累时，却能看见老师在一旁指导，并且亲自示范，他也是满头的汗水，气喘呼呼的，看到这每每给我以动力。几天之后，看着自己的加工成果，我们最想说的就是感谢指导我们的老师了。 第二项：轻松的车工 车工不是由数控来完成的，它要求较高的手工操作能力。首先老师叫我们边看书边看车床熟悉车床的各个组成部分，车床主要由变速箱、主轴箱、挂轮箱、进给箱、溜板箱、刀架、尾座、床身、丝杠、光杠和操纵杆组成。车床是通过各个手柄来进行操作的，老师又向我们讲解了各个手柄的作用，然后就让我们加工一个主轴两个小轮和两个大轮。 老师先初步示范了一下操作方法，并加工了一部分，然后就让我们开始加工。车床加工中一个很重要的方面就是要选择正确的刀，一开始我们要车个锉刀把。这对我们这种从来没有使用过车床的人来说，真是个考验。 不停的转动横向和纵向的控制手柄，小心翼翼的加工，搞了整整一个下午，自以为差不多的时候，准备在加以最后一刀，却操之过急，把圆弧的直径车小了!我痛心不已，惨啊!最难受的是站了一整天,小腿都疼起来.但当把车好的零件交给老师时那种成功的喜悦使我忘记了站得发疼得小腿.这种成功的喜悦只有通过亲
Western Blot常见问题及处理总结
免疫细胞研究western blot Western Blot常见问题及处理总结 阿木 1、western blot 的优点 答：灵敏，可达ng级，用Ecl显色法理论上可达pg 级。方便，特异性高。 2、为什么我的细胞提取液中没有目标蛋 白？ 答：原因有很多: a) 你的细胞中不表达这种蛋白质，换一种细胞；b) 你的细胞中的蛋白质被降解掉了，你必需加入PMSF，抑制蛋白酶活性；c) 你的抗体不能识别目标蛋白，多看看说明，看是否有问题。 3、我的细胞提取液有的有沉淀，有的很 清亮，为什么呢？
答：a) 有沉淀可能因为你的蛋白没有变性完全，可以适当提高SDS 浓度，同时将样品煮沸时间延长，b) 也不排除你的抗原浓度过高，这时再加入适量上样缓冲 液即可。 4、我做的蛋白质分子量很小（10KD）， 请问怎么做WB？ 答：可以选择0.2μml的膜，同时缩短转移时间。也可以将两张膜叠在一起，再转移。 其他按步骤即可。 5、我的目的带很弱，怎么加强？ 答：可以加大抗原上样量。这是最主要的。 同时也可以将一抗稀释比例降低。 6、胶片背景很脏，有什么解决方法？答：减少抗原上样量，降低一抗浓度，改
变一抗孵育时间，提高牛奶浓度。 7、目标带是空白，周围有背景，是为什 么？ 答：你的一抗浓度较高，二抗上HRP 催化活力太强，同时你的显色底物处于一个临界点，反应时间不长，将周围底物催化完，形成了空白即“反亮现象”。将一抗和二抗浓度降低，或更换新底物。 8、我的胶片是一片空白，是怎么回事？ 答：如果能够排除下面的几个问题那么问题多半出现在一抗和抗原制备上。 a) 二抗的HRP 活性太强，将底物消耗光；b) ECM底物中H2O2，不稳定，失活；c) ECL底物没覆盖到相应位置；d) 二 抗失活。
建筑施工操作工种实训总结-总结报告模板
建筑施工操作工种实训总结 作为大一新生,实训对于我们来说是那么的新鲜,那么的充满诱惑力.在专业老师的带领下,我们第一次踏上实训的路程.在这为期4天的实训中,我随时都保持高度警惕,注意到把书本上的知识运用到实践中去,把理论与实际相结合,并从中获得了很多,下面就这次实训我简单地谈谈自己的体会. 我们实训的第一站是建筑工地，进工地只前，该工地的施工员下班给我们介绍了建筑工程方面的相关知识.他说做我们这一行首先就是要能吃苦耐劳，叫我们要做好思想准备.因为在大多数的时间里，都是顶着烈日工作，整天都是跟钢筋混泥土打交道，先不说皮肤被晒得嘿嘿的，就是每天干下来那种臭汗浸泡全身的滋味也是一般人吃不消的。我想，我既然选择了这个专业就不会怕吃苦，对于这一点我相信自己已经合格了。在听完施工员讲了安全事项后我们就迈进的工地现场。 进入工地后我茫然了。若大的工地，我不知从何下手。只看见工人们忙个不停，只听见鼎鼎当当的敲打声，抬头一望，哇塞，30多层高的大楼直立着，让人看得头晕。说实话，第一次出去实训真的染我还有点不知所措，不知道该做些什么，不知道如何去学习。就在工地上消耗掉了时间，心理也不大平衡，别的同学貌似都学到了不少东西，而我却 .....唉，郁闷 在第二次上工地之前我有了较明确的方向，我要把书本上所学的知识运用到实践中去，要把理论与实际起来，不懂就要多向老师或工人师傅多问问，就用这种方法，我在以后上工地的时候整了个大丰收，主要懂得了以下知识： 一，对框架---剪力结构的认识 我们第二次上工地所参观的建筑采用的是框架---剪力结构。它是框架结构和剪力墙结构两种体系的结合，吸取了各自的长处，既能为建筑平面布置
WesternBlot结果条带分析
W e s t e r n B l o t结果条带 分析 Revised final draft November 26, 2020
W e s t e r n B l o t结果条带全面分析 1.空白 原因：比较多，如果单纯一张没有任何显色，最可能是一抗加成其他抗体，或者二抗种属加错了，比如兔的加成鼠的。 解决办法：仔细检查抗体是否加错，确认转膜没有问题。上面的图片展示的是一点信号都没有，如果是这样大部分情况是抗体加错了。如果中间出现了细微的条带，可能原因是蛋白上样量太少，一抗浓度过低，显色液失效。另外如果转膜出现了问题，比如膜放反了，自然是一个白片。 2.高背景 原因：封闭不够好，一抗浓度高，洗膜时间和次数不够。 解决办法：降低一抗浓度，增加洗膜时间和次数。 3.非特异性条带 原因：一抗非特异性与蛋白结合 解决办法：更换一抗 4.条带中出现边缘规则的白圈 原因：电转中膜和胶之间存在气泡。 解决办法：转膜前去掉膜和胶之间的气泡 5.出现黑点和黑斑 原因：膜上其他部位与一抗或者二抗非特异性结合 解决办法：封闭结束之后要洗。 6.条带拖尾 原因：蛋白量太大，一抗浓度和时间太长 解决办法：根据情况调整蛋白量，同时一抗浓度和时间也可以缩短。 7.出现非均一性背景 原因：膜可能曾经干过 解决办法：在每一步的操作过程中，都需要注意不要让膜干。 8.某个条带变形 原因：SDSPAGE胶中存在气泡或者某不溶性颗粒 解决办法：配胶过程中要小心，使用无杂质的液体。另外配胶用的水，SDS，Tris缓冲液要注意不要有杂质。 9.条带呈哑铃状 原因：配置胶有问题，胶凝固后不均一 解决办法：把胶配好，不合格的胶坚决不用 10.最边缘条带弯曲 原因：电泳电流不均一 解决办法：换用新的电泳槽；不使用两边的两孔 其他问题 （1）蛋白分子量偏高或者偏低。可能是胶的浓度与目的蛋白的浓度不对应。 （2）蛋白质降解。蛋白质降解后很可能会在比原来位置低的地方出现主带，然后会出现一些其他带，最主要特点是所有的条带比正常的都低，并且条带模糊不清晰。 （3）所有条带连成一片没有间隔。原因最可能是上样量过多，其次是样品弥散（比如电泳长时间停止样品弥散）。 （4）整个条带呈“︶”状：凝胶冷却不均一，电泳槽老化。 （5）整个条带呈“︵”：凝胶左右两头没有凝固好 （6）溴酚蓝拖尾：样品溶解不好。 （7）纵向的纹理：上样样品中存在不溶性颗粒 （8）溴酚蓝很粗：浓缩胶浓缩效果不好，可能是浓缩胶太短，或者是浓缩胶配错。
工作总结 2020大学生实习报告总结
2020大学生实习报告总结 实习是一项综合性的、社会性的活动，是一个由学校向社会接轨的环节，是学校学习向社会工作转型的一大模块。下面是有xx大学生实习报告总结，欢迎参阅。 xx大学生实习报告总结范文1 珍贵的两年半的大专生活已接近尾声，感觉非常有必要总结一下大专两年半的得失，从中继承做得好的方面改进不足的地方，使自己回顾走过的路，也更是为了看清将来要走的路。 学习成绩不是非常好，但我却在学习的过程中收获了很多。随着学习的进步，我不止是学到了公共基础学科知识和很多专业知识，我的心智也有了一个质的飞跃，能较快速的掌握一种新的技术知识，我认为这对于将来很重要。在学习知识这段时间里，我更与老师建立了浓厚的师生情谊。老师们的谆谆教导，使我体会了学习的乐趣。我与身边许多同学，也建立了良好的学习关系，互帮互助，克服难关。现在我已经接近毕业，正在做毕业设计，更锻炼了自我的动手和分析问题能力，受益匪浅。 通过两年半的大专生活，学到了很多知识，更重要的是有了较快掌握一种新事物的能力。思想变成熟了许多，性格更坚毅了。认识了许多同学和老师，建立起友谊，并在与他们的交往中提升了自身素质，认清了自身的一些短处并尽力改正。回顾两年半，本人在思想觉悟上始终对自己有较高的要求，能用科学发展观来认识世界认识社会，能
清醒的意识到自己所担负的社会责任，对个人的人生理想和发展目标，有了相对成熟的认识和定位。在专业课程的学习上，根据自身专业方向的要求，有针对性的认真研读了有关核心课程，为自己的学习工作打下扎实基础;并涉猎了一部分其他课程，开阔视野，对本专业方向的应用背景以及整个学科的结构有了宏观的认识。在学习工作上，根据导师的指导，研读了大量论著，逐步明确了发展方向，通过自身不断的努力，以及与师长同学间的探讨交流，取得了一些比较满意的成果。在这期间，综合分析等基本素质不断提高，书面表达的能力也得到了锤炼，尤其是独立思考判断和研究的能力，有了很大进步，这些对于未来的工作也都是大有裨益的。平时生活中，为人处世和善热情，和同学关系融洽。根据自身爱好和能力，业余参与了一些活动，为个人综合素质的全面发展打下基础。毕业在即，在工作实践中，除了提升适应工作要求的具体业务能力，还提高了和同学沟通交流的能力，团队协作的素质也得以培养，为走出校园融入社会做好了准备。本人在大专阶段所获颇丰，从学业、生活工作，到个人素质，都得到了充分的培养和锻炼，是充实且有意义的两年半。相信这些经历和积累都将成为我人生道路上的宝贵财富社会实践能力也有很大提高，为将来走向社会奠定基础。 两年半的大专生活是我人生这条线上的一小段，是闪闪发光的一段，它包含了汗水和收获，为我划平人生的线起着至关重要的作用。 以上便是这几年来的感悟、总结，希望对自己起到提醒、激励的作用，未来的路还很长!
western blot实验经验总结
western blot实验经验总结 1.抗体的选择 对于国内的大多数实验室来讲，做western blot实验选择抗体是个头疼的问题。原因很简单，买进口抗体捉襟见肘，买国产抗体得需要大无畏的勇气，对于我所在的兰州地区的实验者而言，感触尤深。在这五年的western blot实验历程里，我先后用过进口抗体，进口抗体国内分装包装，国产抗体，质量良莠不齐。 进口抗体一般不会出现闪失：abcam品种全，质量过硬，但价高（3400元/100微升），而且说是100微升，但至多能吸出来90微升；Sigma的价最贵；比较有性价比的是CST的抗体，现在好像是2200元/100微升，我前后用过二十几种， 1:1000的稀释比下，还没有失过手，100微升通常能完成所有的免疫组化和western blot 实验，还有一个优点是通常量比100微升多出来10微升，唯一的不足是CST的品种实在不多。Santa的多克隆抗体质量可以，但是选用Santa的单抗还是有风险，估计这也是业界共识了吧。 进口抗体国内分装包装我也用过不少，呵呵，毕竟是穷人（420元/100微升），大概好抗体的比例约为50%，如果能做出来，也存在一个问题，就是抗体大多只能用一次。我曾经把Santa的原装抗体和分装抗体做过比对（抗体品种，货号等完全一致），在都能做出来的前提下，原装抗体能重复使用的次数要多出许多。具体原因我已经揣测了好几年，不敢说出来，我一直在想是不是冬天西瓜切成牙和整个卖，也会有所不同。揣测归揣测，假如只为了发论文毕业走人，可以考虑选用进口分装的多克隆抗体。 国产抗体比较知名的就几家，但质量确实不敢恭维。western blot能做出来的确实不多，而且杂带多，背景不干净。我们周边的实验室大多买国产抗体做免疫组化，怎么说呢，应付硕士论文够了。 我也帮别人自制过抗体，再用抗原亲和纯化。效价非常不错，夸张的时候1：10000都能做出条带，唯一的麻烦是兔子太骚（骚臭），不知道这是不是“兔女郎”名号的来由。如果读书非常悠闲，老板又特别想拥有手工作坊的情况下，可以自己伺候折腾兔子来玩玩，刚开始的时候还是蛮有成就感的。只是单凭抗原表达和制备多抗，是不是可以写成论文毕业，估计因校而异了。 2.Western Blot设备 目前最好的垂直槽和转移槽还是Biorad（伯乐），尤其是MINI3好用,MINI4可以一次跑四块胶，但通常用不上，由此造成垂直缓冲液的浪费，而且MINI4用绿色塑料夹住玻璃板来组成内槽，容易漏液，塑料夹应该是有疲劳寿命的，估计日子一长，弹性就会改变，所以如果你们实验室刚买了MINI4，赶紧用，遭殃的肯定是某一级的师弟师妹们。 Biorad的一套系统得两万多，西部能玩得起伯乐的还真不多。好在咱中国人聪明，上海天能的外观和构造和伯乐的MINI3几乎一模一样，而且可以通用，不带电泳仪是5千多一套，挺好用的。唯一的不足是塑料寿命不如伯乐，胶架容易断裂。不过仔细算算，三套天能也就是一套伯乐的价格，值了。北京六一的垂直槽
免疫组化操作方法原理步骤以及常见问题处理大总结
免疫组化操作方法、原理、步骤以及常见问题处理大总结 1、方法操作不难，最大的难处是出现异常结果时如何解决？这就需要掌握免疫组化实验原理，每一步知道为什么这样做，这样你才敢大胆地改革先前的不对的方法步骤。如抗体孵育条件主要是抗体浓度、温度、时间，这三者一般是相互成反比的（相对），其中浓度是最重要的先决条件，温度决定反应的速度、时间决定反应的量。就拿温度来说，可以有4度、室温、37度，我推荐4度最佳，反应最温和，背景较浅；而37度反应速度较快，时间较短；室温我不太提倡，除非你每次都把环境温度控制在一定的范围，否则，尽量选择前两者。 2、免疫组化最大的优势是定位和定性。相比于其他蛋白检测方法，免疫组化具有定性灵敏度高、定位较直接准确，是定位检测分析首选方法。尤其对于有些因子的转位研究十分有用。 3、免疫组化结果定量分析的前提是高质量的染色切片。免疫组化结果也能定量分析，但必须是背景染色浅而特异性染色较深的情况下，分析最为准确，这种原则可能也是我们日常审稿时判定研究结果的必备条件。 4、免疫组化实验一定要设置阳性对照和阴性对照。阳性对照一般是用肯定表达这种抗原的切片来做；阴性对照一般是用PBS或非一抗替代一抗来进行反应，其余步骤均一致。前者是排除方法和实验系统有无问题；后者是排除有无一抗外的非特异性染色。 5、免疫组化的应用广泛，是当前实验研究的最重要方法之一。如今发SCI论文时，明显感觉仅靠量化的数据来发文章很难，加一些形态学数据或图片，老外十分欢迎，可能是怕你学术造假吧。当然也不能做假阳性或假阴性结果。 6、免疫组化技术掌握与否的鉴定标准是同一切片或不同切片中不同抗原均从摸索浓度或条件而做出优良的染色切片。我在平时带教中就发现许多研究生把我已经摸索很成熟的反应条件、浓度、方法步骤，重复运用于同一性质的切片和同一种抗体，做出来后就觉得自己已经掌握了免疫组化方法，更换一种抗体后，居然连二抗的种属来源都拿错了。失败往往促进你去思考试验原理和过程，成功有时也加快你自傲。 7、实验方法需要动手+动脑。如今我还不敢说我在免疫组化什么都知道。我只所以今天敢在这里说这说那，这是因为我经过了反复的动手+动脑，把理论原理运用于实践，在把实践中发现的问题带到理论知识中去解决，最终把理论与实践融会贯通。 一、概念和常用方法介绍 1、定义用标记的特异性抗体对组织切片或细胞标本中某些化学成分的分布和含量进行组织和细胞原位定性、定位或定量研究，这种技术称为免疫组织化学（immunohistochemistry）技术或免疫细胞化学（immunocytochemistry）技术。 2、原理根据抗原抗体反应和化学显色原理，组织切片或细胞标本中的抗原先和一抗结合，再利用一抗与标记生物素、荧光素等的二抗进行反应，前者再用标记辣根过氧化物酶（HRP）或碱性磷酸酶（AKP）等的抗生物素（如链霉亲和素等）结合，最后通过呈色反应或荧光来显示细胞或组织中化学成分，在光学显微镜或荧光显微镜下可清晰看见细胞内发生的抗原抗体反应产物，从而能够在细胞爬片或组织切片上原位确定某些化学成分的分布和含量。 3、分类 1）按标记物质的种类，如荧光染料、放射性同位素、酶（主要有辣根过氧化物酶和碱性磷酸酶）、铁蛋白、胶体金等，可分为免疫荧光法、放射免疫法、免疫酶标法和免疫金银法等。2）按染色步骤可分为直接法（又称一步法）和间接法（二步、三步或多步法）。与直接法相比，间接法的灵敏度提高了许多。3）按结合方式可分为抗原-抗体结合，如过氧化物酶-抗过氧化物酶（PAP）法；亲和连接，如卵白素-生物素-过氧化物酶复合物（ABC）法、链霉菌抗生物素蛋白-过氧化物酶连结（SP）法等，其中SP法是比较
大学生电工实训总结报告
大学生电工实训总结报告 篇一：大学生电工电子实习报告 实习内容及目的：收音机的安装、焊接及调试,让学生了解电子产品的装配过程;掌握电子元器件的识别及质量检验;学习整机的装配工艺;培养动手能力及严谨的工作作风。 辨认测量：①学会了怎样利用色环来读电阻，然后用万用表来验证读数和实际情况是否一致，再将电阻别在纸上，标上数据，以提高下一步的焊接速度;②学会了怎样测量二极管及怎样辨认二极管的“+”，“—”极，③学会了怎样利用万用表测量三极管的放大倍数，怎样辨认三极管的“b”,“e”,“c”的三个管脚;④学会了电容的辨认及读数，“╫”表示元片电容，不分“+”、“—”极;“┥┣+”表示电解电容(注意：电解电容的长脚为“+”，短脚为“—”)。 焊接体会：在电焊的收音机的时候，学会电焊应该是我的收获，下面简单介绍以下焊接的体会，焊接最需要注意的是焊接的温度和时间，焊接时要使电烙铁的温度高于焊锡，但是不能太高，以烙铁接头的松香刚刚冒烟为好，焊接的时间不能太短，因为那样焊点的温度太低，焊点融化不充分，焊点粗糙容易造成虚焊，而焊接时间长，焊锡容易流淌，使元件过热，容易损坏，还容易将印刷电路板烫坏，或者造成焊接短路现象。
焊接顺序：①焊接中周，[大学生电工电子实习报告]为了使印刷电路板保持平衡，我们需要先焊两个对角的中周，在焊接之前一定要辨认好中周的颜色，以免焊错，千万不要一下子将四个中周全部焊在上面，这样以后的小元件就不好安装→②焊接电阻，前面我们已经将电阻别在纸上，我们要按R1——R13的顺序焊接，以免漏掉电阻，焊接完电阻之后我们需要用万用表检验一下各电阻是否还和以前的值是一样(检验是否有虚焊)→③焊接电容，先焊接元片电容，要注意上面的读数(要知道223型元片电阻&103型元片电阻的区别,元片电容的读数方法——前两数字表示电容的值，后面的数字表示零的个数)，紧接着就是焊电解电容了，特别要注意长脚是“+”极，短脚是“—”极→④焊接二极管，红端为“+”，黑端为“—”→⑤焊接三极管，一定要认清“e”,“b”,“c”三管脚(注意： [V1，V2，V3，V4]和[V5，V6，V7]按放大倍数从大到小的顺序焊接)→⑥剩下的中周和变压器及开关都可以焊了→⑦最需要细心的就是焊接天线线圈了，用四根线一定要按照电路图准确无误的焊接好→⑧焊接印刷电路板上“”状的间断部分，我们需要用焊锡把它们连接起来→⑨焊接喇叭和电池座。 调试与检测：调试是一个非常艰难而又需要耐心的任务，但是它的目的和意义是十分重大的。我们要通过对收音机的检测与调试，了解一般电子产品的生产调试过程，初步
毕业实习报告总结实训报告总结范文
毕业实习报告总结实训报告总结范文 1
《网络运营与网络营销》实训计划 一、实训内容 网店的运营和管理、网络营销和推广（网络信息收集、网络市场调查、C2C(B2B、B2C）电子商务网站建设实训、知识问答营销推广、E-mail 营销推广实训、搜索引擎营销推广实训、博客与微博营销推广实训、网络营销策划实训） 二、实训目的和要求 （一）专业能力目标 1.掌握C2C(B2B、B2C）网站的运营过程。 2.掌握基于C2C(B2B、B2C）中介网站开店实现销售的方法。 3.掌握常见的电子商务网站及网络产品的推广和经营手段，并具 备一定网络产品或网站推广的能力。掌握一定的电子商务经营经营的方式和方法，能把计算机技术应用到实际的商务活动之中。 4.基于自己的产品，或者根据指定网站制作网络广告的推广计 划；设计基于自己的产品或者指定网站电子邮件营销的邮件内容，掌握确定获取收件人方法；基于自己的产品或者指定网站实现BBS营销；基于自己的产品或者指定网站实现网络搜索引擎营销；基于自己的产品或者指定网站实现博客营销；基于指定产品或者网站实现一份
详细的网络营销策划书，进行病毒式营销或事件营销 （二）通用能力目标 1.自我管理和自我发展 安排自己的任务并承担责任。 安排好自己的时间完成课题。 2.与她人合作共事 ——个人和群体良好的合作交往。 3.沟通、交往与联系 经过各种直观的方式表示信息。 用书面形式交流，传达信息。 4.安排任务和解决问题 获取、整理、利用、使用信息资源。 发现并解决常规或非常规问题。 （三）实训要求 为确保实训能顺利进行，圆满成功，培养同学们良好的习惯，增强修养，提高个人素质，特制定如下实训要求： 1.实训开始，按学号顺序分组，一人或多人一组，选一名同学为
大学生实训总结(最新版)
大学生实训总结(最新版) Through the summary, we can fully and systematically understand the past work situation, and can correctly understand the advantages and disadvantages of the past work. ( 工作总结 ) 部门：______________________ 姓名：______________________ 日期：______________________ 编号：MZ-SN-0767
大学生实训总结(最新版) 大学生实训总结 时光匆匆，转眼间一个月的实习生活也画上了句号。我又从社会实践中回到了校园学习生活之中。回首过去一个月在北京翰道禅风古典家具城有限公司点点滴滴的实习生活，我有许多感悟。我对销售有着极大的兴趣，我从上大学起就立志做一名优秀的销售代表。这次在翰道禅风的实习生活让我进一步了解了销售这个职业，更坚定了我今后做一名优秀销售代表的信心。 首先，这次在北京翰道禅风古典家具城有限公司的实习生活使我找到了在社会工作中的感觉。这对于一个长期在校园中学习生活并即将步入社会工作中的大学生来说，是一个不小的收获。刚到翰道禅风的时候，我真的不知道自己要在公司中做些什么。那些职业
的销售代表都十分的繁忙，他们大部分时间都在外出拜访顾客、商业谈判之类的。而我一个销售部实习销售助理似乎帮不上什么忙。但是，我决心在这次社会实习中锻炼自我，学到一些实际的东西。我尝试着和公司负责实习生的主任王老师沟通，希望他能给我多一些工作去完成。于是我成了销售部办公室中繁忙工作的一员。我帮助职业销售代表发送传真，给客户打电话，收集、翻译、整理资料。什么地方需要我帮忙，我就去什么地方。打字，翻译，打印资料，虽然我的工作很杂，也很基本。但是在这个过程中，我找到了社会工作的感觉，也在这个过程中学习到了许多东西。在工作之余，我主动地和那些职业销售代表交流，从和他们的交谈中，我了解到了作为一名销售人员是多么的不容易。实际上，做销售是一项极富挑战性的工作，销售人员每天面临着巨大的压力。但是当他们成功地拜访了客户或达成了销售目标后，那种发自内心的喜悦是不言而喻的。实习后期，我主动提出去公司产品展区向顾客介绍公司产品。起初，我对公司的产品不是特别的了解，因为公司的产品都是一些电机产品，这对于一个学文科的学生来说是很陌生的，但是一个好
汽车电气设备与维修》实训总结
《汽车电气设备与维修》实训总结 概论 随着社会科技的迅猛发展，经济的迅猛增长，工业结构发生改革，我们应该清楚地认识到科技创新无疑会成为21世纪的主力军，势必会带动汽车行业的飞快腾飞。因此汽车行业也同样会成为社会经济结构的主力军，而且中国也成为了汽车销售的第一大国。面对这个形势，作为汽车专业的学生，既是机遇又是挑战，因此既要赶上当今社会的汽车热潮流，又要有扎实的专业技能，方能立足于竞争激烈社会之林中。 通过本学期的实训，不仅使学生掌握了汽车电气设备的基本组成和相关知识，而且也意识到在以后的工作学习中团结协作，以及充分发挥自己的主动性，创造性来解决问题的能力的重要性。并且要学会对已学过的知识和工程文件记录要及时的反省和总结，从而实现知识的根深蒂固！ 一、实习内容及心得 本学期我任教1122、1116、1117班的汽车电气设备与维修课程，通过本学期对充电系、启动系、点火系、照明、信号、仪表及报警装置等的实训，使同学们了解了汽车电气设备拆装操作的基本要领和基本知识，熟悉安全操作规程和防护要求，能够使用汽车电气设备构造与维修常用的拆装工具和量具，并具备拆装的基本操作技能，掌握各典型总成部件的构造、工作原理和调整方法，让同学们对汽车电气设备有一个感性和理性的了解并得到岗位的基本训练，为缩短未来工作岗位的适应期打下基础，实现了理论与实践的有机结合。从而达到了手脑并用，双手万能的目的。在实训课程中，同学们严格按照老师的安排与计划，按照5S管理要求，同时实训时一步一步地对汽车电气各部件进行拆装，并对照资料熟悉各个机构的作用、工作原理与拆装的注意点。
1.学习了汽车维修中可导致人身伤害的因素： 1）服装按要求穿着，如：不穿拖鞋工作。 2）按章程要求操作。 3）在车间内不允许抽烟，容易引发火灾或爆炸事件。 4）蓄电池正负极的拆装顺序要按照正确操作来做。 5）高空作业要注意人身安全。 6）防止触电。 2、学习了汽车维修的基本要求 使学生掌握理论教学的重点内容，了解高级层次的理论；使学生掌握几种典型现代汽车电气设备的正确使用和常见故障的诊断；使学生真正将汽车理论与实践相结合，为做蓝领人才打下坚实基础．随着汽车技术的日益发展，现代汽车电气、电子设备的特点，主要体现在功能集约化、控制电子化和连接标准化上。在分析电子线路的故障时， 3.学习了5S标准 5S标准对于培养学生良好的工作习惯，树立学生正确的职业道德观有很好的作用。通过5S标准的训练可以使学生更好更快的适应企业的管理，融入企业的文化。为了坚持文明生产，由日本丰田公司提出的“5S”理念。如下是5S标准： SEIRI(整理):确定某种物品是否需要，不需要的物品应立即丢弃以便有效利用空间。 SEITON(整顿)：这是一个整顿工具好人零件的过程，目的是为了方便使用。
western-blot条带分析及解决方法
*注1其具体问题有二：一是背景较高，二是没有条带?形成机制为条带处HRP很快将底物耗竭，则不发光不使胶片感光而为白色，周围因背景H R P较低而持续发光一段时间使胶片感光为黑色。这种常见于高浓度抗体并且封闭/洗脱不好的情况下。如果没有背景则就是原因3的现象。在暗室可以看到
条带周围荧光而条带处为暗。如是则要么通过降低抗体解决，要么动作迅速早期未耗竭底物时压片，否则一旦耗竭通过减少压片时间不能解决问题。也可以过一段时间鼿RP稍减后重加底物迅速压片。还有另外一种反影现象就是压出条带粗大模糊，但条带中心是空的白色，原因和上面的一样，主要是条带中心耗竭底物引起的，也可以在暗室看到中空的荧光带，但与上面的区别主要在于特异性要好一些，若继续发展则就是原因3的现象。其分析和解决同上。 *注2其原因主要是HRP太高超速催化底物生成的产物使膜发黄，压出的片子可以是正常的或和原因1或原因3的现象同时存在，只是一种现象，在压过的膜可以看出来（只在加底物后一段时间出现，几小时后可能还会消退，有时甚至刚加底物1~2min就可以看出来，所以要把握时机）。如果没有 达到原因1和原因3的程度，那么这种情况一定能够看到很强的荧光，是一种良好的状态，是我们所期盼的。如果压出正常片子而不出现原因1和原因3的现象，可以不予处理。但因为荧光太强极易导致条带增粗变大，所以也可以不稀释抗体而通过调整压片时间来解决，一般压10s~30s，甚至可以3~5s，即时根据结果在暗室调整，荧光持续时间长的话都可连续压十数张片子而效果良好。但也有这种情况，就是由于HRP过强无论怎么减少压片时间条带都依然粗大（如果时间过短如<3s则可因感光不足导致条带太淡，这样就不可取了，但依然是粗大的、非条带的本来面目），那么如果想获得漂亮条带则必须通过降低抗体浓度（减少上样量很不稳定且能力有限，故很少使用）来解决。原因1和3若如是则解决也是一样的。 *注3这是与1类似但抗体特异性较好时的一种表现，经常与下面的原因4、5、6混淆，特别需要注意。主要出现在HRP极高的情况下，来不及压片就已耗竭底物，往往伴有原因2的现象。可通过加入底物后迅速进入暗室观察荧光确定，也可以根据原因2的现象确定，以区分于原因4、5、6。 除非动作迅速早期未耗竭底物时压片，否则一旦耗竭通过减少压片时间不能解决问题。也可以过一段时间待HRP稍减后TBST简单洗膜重新加底物压片。这种情况下一/二抗稀释可高达10倍而依然荧光明显。 *注4提高抗体上样量以及下述的使用敏感底物/延长压片时间比较简单，在此不赘述，只提醒一下随抗体浓度增高背景和非特异性可能会增加。关于上样量的极限在此发表我的看法：对于裂解的混合蛋白以上样孔底面积（平方毫米）乘30ug作为极限上样量，而落实到每一个具体条带（同一分子量的 所有蛋白或仅做单一蛋白电泳），则以0.3ug/平方毫米底面积作为极限上样量。（见《抗体技术实验指南》的免疫印迹一章），超过此量可能会导致条带变形。条带信号弱可以通过加大上样量/提高抗体浓度/使用敏感底物/延长压片时间解决。但实际上样量的极限并不以我说的极限上样量为准，因为这个极限上样量是确保所有分子量的条带都跑的很漂亮的极限，而上样超量的表现是随量的加大变形的条带由低分子量逐渐往高分子量延伸。 所以western极限上样量的真正操作标准是以目的条带不变形作为极限。比如对于150kd，完全可以超出我所说的极限上样量的2倍而不变形（此时中低分子量条带早已融合或挤为棒槌形了）