从西洋参中提取分离纯化人参皂苷Rb1和人参皂苷Re 的研究
从西洋参中提取分高纯化人参皂苷Rb1和人参皂苷Re的研究2.1 西洋参粗提液的制备
称取100g西洋参,粉碎成粗粉,用70%乙醇12倍量水浴加热回流提取3次(400mL×3),每次时间2h。提取液减压浓缩至50mL,得西洋参粗提液。HPLC检测发现,提取液中含有大量杂质,其主要成分有两种:人参皂苷Re(保留时间29.1min左右)和人参皂苷Rb1(保留时间50.3min左右)。人参皂苷Re与Rb1的质量分数分别为10%和60%。见图2。
2.2 人参皂苷Re与Rb1的初步纯化
西洋参粗提液用15倍量水(V/W)溶解上已处理好D101大孔吸附树脂柱(50×4cm,树脂为200g)。先用水洗柱,以去除大部分杂质, 再用2%NaOH溶液洗柱以除去色素,后用2% HCl溶液洗柱,再用水洗柱至流出液中性。最后用90%乙醇淋洗,收集流出液。回收溶剂至干,60℃减压干燥,得干燥疏松黄白色粉末6.0g,为西洋参总皂苷。HPLC检测, 人参皂苷Re与Rb1的质量分数分别为12.5%和65% 。
2.3 人参皂苷Re与Rb1的进一步纯化
西洋参总皂苷6.0g,用30mL70%乙醇溶解,加300mL丙酮搅拌, 析出大量沉淀,放置,过滤,沉淀干燥,得棕黄色干燥疏松粉末4.2g,为A部分。母液回收溶剂至干,得棕黄色疏松粉末1.8 g,为B部分。A部分中人参皂苷Rb1的质量分数提高到80%(人参皂苷Re下降为4.5% ),B部分中人参皂苷Re的质量分数提
高到40% (人参皂苷Rb1下降为30% )。见图3、图4。
2.4 人参皂苷Re和Rb1的再进一步纯化
A部分用20mL水溶解,加200mL丙酮搅拌,析出大量沉淀,静置, 过滤, 沉淀再用20mL水溶解,加200mL丙酮同法处理,静置过滤,60℃减压干燥,得黄白色干燥疏松粉末2.6g,为人参皂苷Rb1。HPLC 检测, 人参皂苷Rb1的质量分数为95% (人参皂苷Re为0.2% ), 见图6。A部分丙酮沉淀的母液回收溶剂至干, 得量1. 6 g, 与B 部分合并,用30mL95%乙醇溶解,加300mL丙酮搅拌, 析出沉淀,静置,过滤,母液回收至干,再用20 mL95%乙醇溶解,加200mL丙酮同法处理,过滤,溶液回收至干, 再用丙酮同法处理一次,过滤,回收溶液至干,60℃减压干燥, 得黄白色干燥疏松粉末0.5g, 为人参皂苷Re。HPLC 检测,人参皂苷Re的质量分数为92% (人参皂苷Rb1为3% ),见图7。
2.5 人参皂苷Re和Rb1晶体的制备
取质量分数为95%的人参皂苷Rb1 2.6 g, 用甲醇少量加热溶解, 冰箱放置析晶, 过滤, 甲醇再重结晶一次, 过滤, 60℃减压干燥,得2.0g白色沙状粉末。HPLC检测,质量分数为98.5% (收率2.0%)。取质量分数为92%的人参皂苷Re 0.25 g,用70%乙醇少量加热溶解,冰箱放置析晶,过滤,甲醇再重结晶一次,过滤,60℃减压干燥,得0.25g无色结晶。HPLC 检测, 质量分数为97.5%(收率0.25%)。
四川省中医药科学院, 成都610041 HSCCC 法从人参总皂苷中分高制备人参皂苷Re与Rg1 配制乙酸乙酯- 正丁醇- 水（4∶1∶5）的溶剂系统，充分摇匀，静置分层时间26s（小于30s,可用）。分层后将上、下相分开，以上相为固定相，下相为流动相。先以较大流速将固定相（上相）注满管柱，开启主机，主机转速为
800r·min-1,UV 检测仪显示基线平稳后，以恒定流速1.50 mL·min-1 通入流动相（下相），待体系平衡进样。进样量为120mg，以2mL上相+2mL下相充分溶解，在计时开始后，分离时间为4h，每10min收集一个流分。
1.1TLC鉴定条件
分别以氯仿-甲醇-水（69∶27∶4），乙酸乙酯-正丁醇-水（4∶1∶5）上相，正丁醇-乙酸乙酯-水（4∶1∶1）为展开剂。将分高组分别加以TLC 鉴定，展开距高为7~8 cm，以10% H2504 乙醇液作为显色剂。
1. 2 鉴定结果展开剂乙酸乙酯-正丁醇-水（4∶1∶5）上相。合并流分13和14以及16～18,二者除采用上述溶剂系统外
还采用氯仿-甲醇-水（69∶27∶4）和氯仿-甲醇-醋酸乙酯-水（2∶2∶4∶1,下相）与人参皂苷Re及Rg1标准品共薄层，点样量为50μg以上，二者都呈现单点并且分别和人参皂苷Re及Rg1的Rf值一致。因此鉴定为人参皂苷Rg1(18mg)和Re(25 mg)。（沈阳药科大学中药学院，辽宁沈阳 110016）
高效液相色谱法一重结晶法分高人参皂苷
单体Re
1．1制备用流动相的配制
配制甲醇与水体积比为40:60的流动相4000mL, 再配制甲醇与水体积比为50:50 的流动相5000mL, 纯甲醇2000ml。以上流动相超声脱气处理。
1.2 含人参皂苷Re段组分的制备
准确称取人参皂苷粗原料10.0g, 用40mL纯甲醇超声溶解, 用流动相平衡制备柱; 然后用制备洗脱泵向柱中进原料样品, 最后用流动相洗脱, 接取馏分段, 将各馏分段收集液用薄膜旋转蒸发器在60℃浓缩, 用纯甲醇溶解收集, 在真空干燥箱中60℃烘干备用。其中,甲醇与水体积比为50:50 的流动相冲洗段只含有人参皂苷Re和Rgl的混合物。
1.3 重结晶法制备人参皂苷Re
称量1,0g人参皂苷Re和Rg1的混合物,用20:80的V乙腈:V水
6mL超声至完全溶解后20℃下静置5h,结晶。将白色结晶经微孔滤膜过滤,阴干,称量,收集待测,滤液放入真空干燥箱中
浓缩备用。
1.4人参皂苷Re的结构分析
对2.5中所得晶体运用核磁共振分析、高效液相色谱一质谱分析、紫外分析和红外分析进行结构分析。
2 结果与讨论
2.1 高效液相色谱法纯化人今皂苷Re和Rg1
在所选的分离条件下, 对甲醇与水体积比为50:50的流动相冲洗段色谱图如图1所示,谱图中只出现了人参皂苷Re 和Rg1 2个峰, 说明应用上述分离条件是可行的。以
18:82-22:78 的乙腈:水为流动相进行梯度洗脱, 可以将Re 和Rg1分离,且保留时间较短,适于实际操作。
2.2 重结晶法分离人参皂苷Re
实验中分别尝试了萃取方法HPLC方法和重结晶的的方法进行人参皂昔Re的分离。通过对各种方法的应用,发现乙酸乙醋萃取、正丁醇萃取方法萃取效果不明显且溶剂消耗较大。应用HPLC方法中, 使用侧备柱分离人参皂昔Re 流动相消耗较多, 馏分收集比较困难。使用重结晶方法操作简便, 节省溶剂, 避免了设备的损耗和色谱柱填料的消耗, 还可以得到纯度较高的人参皂昔单体Re。确定了结晶溶剂为V乙腈:V 水=20：8O的混合溶液; 结晶温度为20℃、结晶时间为5h、混合物与重结晶溶荆的固液比为1:6(g/mL)的结晶条件。如图2 所示,谱图中去掉手动更换流动相带来的干扰后, 谱图只出现2个峰, 其中时间稍长的为人参皂昔Re,含量为91%,同时结晶液中人参皂普Rg1的含量提高了。
(1
.1 辽宁科技大学分离技术中心, 辽宁鞍山n4051 ;
2. 辽宁科技大学化学工程学院应化2 仪洲〕, 辽宁鞍山n4051)
人参皂苷的提取教学文稿
人参皂苷的提取
第一章综述 1.1 人参皂苷的简介 人参为五加科植物人参(Panax ginseng C.A.Mey.)的干燥根，是传统名贵中药，始 载于我国第一部本草专著《神农本草经》。其栽培者称为“园参”，野生者称为“山参”。人参具有大补元气、复脉固脱、补脾益肺、生津、安神之功能，用于体虚欲脱、肢 冷脉微、脾虚食少、肺虚喘咳、津伤口渴、内热消渴、久病虚羸、惊悸失眠、阳痿宫冷、 心力衰竭、心源性休克等的治疗。 人参的化学成分很复杂，有皂苷、挥发油、糖类及维生素等。经现代医学和药理研究 证明，人参皂苷为人参的主要有效成分，它具有人参的主要生理活性。 人参皂苷（ginsenoside，GS)是人参的主要有效成分，现已明确结果的GS单体约 有40余种；在人参中的含量在4%左右。其中研究最多且与肿瘤细胞凋亡最为相关的为 Rg3与Rh2。众多研究表明，它具有较高的抗肿瘤活性，对正常细胞无毒副作用，与其 他化疗药物（如顺铂）联合应用有协同作用。人参皂苷通过调控肿瘤细胞增殖周期、诱 导细胞分化和凋亡来发挥抗肿瘤作用。将肿瘤细胞诱导分化成正常细胞有利于控制肿瘤 发展，诱导肿瘤细胞凋亡使细胞解体后形成凋亡小体，不引起周围组织炎症反应。Popovich等研究认为，人参皂苷可以促进人白血病细胞的凋亡，其途径与地塞米松相识，均为受体依赖性。目前我国对人参皂苷的提取分离方法、制剂工艺、抗肿瘤作用机 制以及临床应用等方面做了大量研究，而且已经有人参皂苷的新产品推向市场。 1.2 人参皂苷成分 人参的根、茎、叶、花及果实中均含有多种人参皂苷(ginsenosides)。到目前为止， 文献报道从人参根及其它部位已分离确定化学结构的人参皂苷有人参皂苷-Ro、-Ra1、- Ra2 、-Rb1、-Rb2、-Rb3、-Rc、-Rd、-Re、-Rf、-Rg1、-Rg2、-Rg3、-Rh1、-Rh2及-Rh3 等50 余种人参皂苷。 Rh2：具有抑制癌细胞向其它器官转移，增强机体免疫力，快速恢复体质的作用。 对癌细胞具有明显的抗转移作用，可配合手术服用增强手术后伤口的愈合及体力的恢复. Rg：具有兴奋中枢神经，抗疲劳、改善记忆与学习能力、促进DNA、RNA合成的作用。 Rg1：可快速缓解疲劳、改善学习记忆、延缓衰老，具有兴奋中枢神经作用、抑制 血小板凝集作用。 Rg2：具有抗休克作用，快速改善心肌缺血和缺氧，治疗和预防冠心病。 Rg3：可作用于细胞生殖周期的G2期，抑制癌细胞有丝分裂前期蛋白质和ATP的 合成，使癌细胞的增殖生长速度减慢，并且具有抑制癌细胞浸润、抗肿瘤细胞转移、促 进肿瘤细胞凋亡、抑制肿瘤细胞生长等作用。 Rb1：西洋参(花旗参)的含量最多，具影响动物睾丸的潜力，亦会影响小鼠的胚胎 发育，具有增强胆碱系统的功能，增加乙酰胆碱的合成和释放以及改善记忆力作用.
高效液相法测人参皂苷
以测Re、Rg1为例 1 色谱条件的选择 1.1采用C18（4.6mm×250mm，5um） 1.2流动相乙腈(A) - 水(B)，20:80 1.3流速1.0mL/min 1.4波长的选择（203nm） 以人参皂苷对照溶液在200 ~ 300nm 范围进行光谱扫描测定, 结果人参皂苷在nm 波长处有最大特征吸收, 选择nm作为人参皂苷的测定波长。 1.5温度30 1.6进样量10ul 2 溶液制备 2.1对照品溶液的制备精密称取干燥的人参皂苷Re对照品5.790mg 人参皂苷Rg1对照品6.325mg，置于50mL的容量瓶中，加入甲醇进行溶解并稀释至刻度，摇匀，后静置，即得对照品溶液( 其中含有人参皂苷Rg10.1235mg/mL，人参皂苷Re0.1028mg/mL)。 2.2 供试品溶液的制备取样品2g，至于具塞锥形瓶中，加甲醇5ml,超声10min,离心15min，转速为2500r/min，取上清液过滤，甲醇定容至5ml。加5ml水饱和正丁醇萃取两次，合并正丁醇液，蒸干，残渣用甲醇定容至5ml。 2.3 阴性样品溶液的制备取缺少人参的其他药材，制成缺
少人参的阴性样品，再按照2.2项下的步骤制成阴性样品溶液。 3 系统适应性试验 取对照品溶液供试品溶液阴性对照品溶液按照1项下的色谱条件，分别将3种溶液以 10ul进样，测定分离度,均应≥1.5，色谱峰对称性，理论塔板数，说明空白对照样品的测定无干扰性。 4 线性关系考察分别精密取2.2项下的供试品溶液1、2、4、6、8、10、12 uL，按照1项下的色谱条件进样测定，以峰面积( Y) 对浓度( X) 进行线性回归，回归方程分别为( r=) 结果表明人参皂苷在g范围内线性关系良好。 5 精密度考察取2.1项下方法制备的对照品溶液10.0u L，在1色谱条件下依法重复进样6次，记录其峰面积，结果表明峰面积的RSD为%，表明其精密度良好。 6 稳定性考察取同一批供试品溶液，分别于0、2、4、8、12、24、36、48h，精密吸取溶液10 uL，注入高效液相色谱仪中，按照1项下进行测定，记录色谱峰面积结果峰面积的RSD为%，表明样品溶液在48h内基本稳定。 7 重复性考察取同一批号的样品溶液，按照上述2.2项下方法得供试品溶液5份，按照含量测定法，分别精密吸取10u L，按照1色谱条件，测定峰面积，结果峰面积的RSD为%，表明该含量测定方法重复性良好。
加拿大原产地西洋参多糖提取工艺优化研究
第37卷第6期 西南民族大学学报·自然科学版 Nov. 2011Journal of Southwest University for Nationalities ?Natural Science Edition ___________________________________________________________________ ___________________________ 收稿日期：2011-09-05 联系作者：刘圆(1968-), 女, 重庆忠县人, 教授, 博士, 副院长, 主要从事少数民族药物的研究和教学工作. E-mail: yuanliu163@https://www.360docs.net/doc/6f17103599.html,. 基金项目：国家外专局外国文教专家重点项目(2010); 四川省杰出青年学术技术带头人后续计划(2011JQ0051). 文章编号: 1003-2843(2011)06-0940-06 加拿大原产地西洋参多糖提取工艺优化研究 任烨1, 李厚聪2, 刘永恒1, 黄艳菲1, 李艳丹1, 丁玲1, 彭镰心3, 刘圆1 (1.西南民族大学少数民族药物研究所, 四川 成都 610041; 2. 湖北民族学院医学院, 湖北 恩施 445000; 3.成都大学生物产业学院, 四川 成都 610106） 摘 要: [目的]筛选加拿大原产地西洋参多糖的最佳提取工艺条件。[方法]单因素和正交试验法。[结果]加拿大原产地西洋参多糖的最佳提取分离工艺为：加热回流法, 药材粒径为65目的西洋参粉末加入25倍体积80 %乙醇90 ℃回流1 h, 提取2次, 滤渣减压干燥后按照料液比为1:35加水浸泡3 h, 100 ℃提取1 h, 提取3次。[结论]为加拿大原产地西洋参多糖的提取分离条件提供了参考, 为加拿大原产地多糖西洋参的进一步开发研究提供依据。 关键词：西洋参; 加拿大原产地; 多糖; 提取工艺; 正交设计 中图分类号: R284.2; R93 文献标识码：A doi ：10.3969/j.issn.1003-2483.2011.11.18 西洋参为五加科人参属植物Panax quinquefolium L.的干燥根[1]。西洋参原产北美洲的加拿大南部和美国北部, 分布于北纬30～40度, 西经67～125度范围, 在中国多省栽培成功, 其中东北三省、陕西秦巴山区普遍栽培。西洋参多糖(PPQ)是西洋参中含量最多的一类具有特殊生物活性的物质; 西洋参及其提取物的可溶性果胶中均含有一定的多糖类成分, 目前分离出来的成分有蔗糖、人参三糖、麦芽糖、葡萄糖、果糖、山梨糖、半乳糖醛酸、半乳糖、葡萄糖、阿拉伯糖、木糖、鼠李糖等[2]。西洋参多糖在西洋参根中含量达10% 左右, 现代药理研究表明具有增强免疫、降血糖、抗辐射、抗肿瘤、益智等作用[3-5]。目前, 关于西洋参多糖水提取工艺研究的文献报道较少, 张仁权[6]等报道了西洋参参须废渣中参多糖的提取及含量测定, 但并没有对西洋参多糖提取工艺进行优化筛选。本文拟对自采于加拿大原产地西安大略省大山行农场的西洋参为原料, 对多糖提取进行单因素和正交试验考察, 确定最佳水提取工艺参数, 为原产地西洋参的进一步研究提供一定的科学实验数据。 1 材料与仪器 1.1 药材来源 2009年6月20日自采于加拿大原产地西安大略省大山行农场, 经西南民族大学少数民族药物研究所刘圆教授鉴定为五加科植物西洋参Panax quinquefolium L.的干燥根。切断, 55 ℃烘干, 粉碎, 过2～6号药典筛后分装于自封袋中, 置于干燥器中保存, 备用。 1.2 试剂 D 型葡萄糖对照品购于成都市药品检验所, 无水乙醇、蒸馏水、蒽酮、浓硫酸均为分析纯。 1.3 仪器 Unican UV-500紫外分光光度计, METTLER AE240S 型电子天平（梅特勒-托利（上海）有限公司）, 800型离心沉淀器（上海手术机械厂）, 数显恒温水浴锅（国华电器有限公司）, 艾柯AKRY-UP-1824型超纯水机（成都康宁实验专用纯水设备厂）, SHZ-D(III)型循环水真空泵（天津华鑫仪器厂）。
提取人参皂苷并且检验以及在过程的一些注意事项
1.人参皂苷提取 人参为五加科植物人参(Panax ginseng)的干燥根，是传统名贵中药，始载于我国第一部本草专著《神农本草经》。其栽培者称为“园参”，野生者称为“山参”。人参具有大补元气、复脉固脱、补脾益肺、生津、安神之功能，用于体虚欲脱、肢冷脉微、脾虚食少、肺虚喘咳、津伤口渴、内热消渴、久病虚羸、惊悸失眠、阳痿宫冷、心力衰竭、心源性休克等的治疗。 人参皂甙和稀HCl在醇液中进行温和酸水解，可得到三种皂甙元，齐墩果酸、人参二醇和人参三醇。而不能得到原人参二醇和原人参三醇，这是因为在酸水解过程中侧链的20－位碳原子上的羟基（－OH）与该链上的双键（C＝C）易闭环，而形成带有三甲基四氢吡喃环的人参二醇和人参三醇。水解后，除去醇、氯仿萃取物经硅胶柱层析分离即可得到三种单体皂甙元，经重结晶获得纯品，分别与已知皂甙的红外光谱相一致。 2.人参皂甙提取和甙元分离工艺流程 ①人参皂甙提取工艺： 人参茎叶粗粉20g 热水提取1小时，粗滤，（棉花） 提取液药渣 加0.6g是会乳沉淀，并调至PH9－10，放置10分钟，抽滤 沉淀物滤液 浓硫酸调PH7，放置10分钟。 中性提取液 回收后，上大孔树脂柱，先用水洗至无色，再用 70％氨性醇洗至绿色。 乙醇洗脱液 回收乙醇 人参总皂甙（黄白色） a)人参皂甙元的水解和甙元的分离流程 人参总皂甙 加含5％HCl的50％乙醇液， 加热回流2小时 沉淀水解液 （酸性皂甙元部分）加水稀释，水浴蒸去醇，氯仿萃取 3次（10，5，5ml）
水层氯仿层 干燥， 无水NaSO 4 回收氯仿 总皂甙元 少量苯溶解，硅胶柱 层析，用苯－乙酸乙脂 （8：2）洗脱 组分Ⅰ组分Ⅱ组分Ⅲ95％乙醇重95％乙醇重丙酮结晶 结晶3次结晶3次2次 齐墩果酸人参二醇人参三醇 mp299-301℃mp245-250℃mp244-246℃ 1.操作方法 人参总皂甙的提取：取人参茎叶粗粉20g，放入烧杯用热水（80℃－90℃）提取1小时，然后用棉花粗滤，在所得滤液中加入0.6g水石灰乳除杂并调PH9－10放置10分钟左右，过滤，再将滤液用浓硫酸（少量）调PH7，放置10分钟左右，回收提取液至少量（5－10ml），再上大孔树脂柱（注：此柱应提前洗好，清洗办法略）先用蒸馏水洗至无色，再用70％的乙醇洗至无色，分别用小瓶接收。便得到了乙醇洗脱液，回收乙醇，便得到了人参总皂甙（黄白色）。 人参皂甙的水解 称取人参皂甙（）4－5g（不足时由老师提供），加20倍量含5％HCl的50％乙醇溶液，加热回流2小时，放冷，加倍水，水浴去醇，转入分液漏斗中，用氯仿萃取3此（10，5，5ml），合并氯仿层，加少量无水硫酸钠干燥，回收氯仿即得总皂甙元。 甙元柱层析分离 称取100－200目硅胶（105℃活化30分钟）50g，用苯做洗脱剂湿法装柱，柱顶放一层脱脂棉，压上数个玻璃球，放出多余的苯（至高于吸附剂1cm），计算保留体积。总皂甙元用少量苯溶解上柱，用苯－乙酸乙脂（8：2）洗脱，薄层检识（与甙元标准品对照）相同组分合并，回收溶剂。齐墩果酸、人参二醇用95％乙醇重结晶，人参三醇用丙酮重结晶，纯品80℃干燥，收集于小瓶中。 2.人参皂甙的检验 （一）显色反应
中药提取方法汇总
综述中药提取方法 摘要以中药提取方法的本质和影响提取作业的因素为理据，分析国内中药厂提取方法 关键词中药提取方法 1前沿 近年来有关中药提取方法的论述有很多，然而有效成分的提取率仍然是现今国内中药制药工业现代化的瓶颈。尽管近年来国内在中药提取生产中推出了一些新工艺，如超声场强化提取、微波提取、超临界流体提取等，但当下的主流仍是浸提技术。浸提技术是应用溶剂提取固体原料中某一或某类成分的提取分离操作，又称固液萃取。目前在中药生产过程中，常用的中药浸提方法有煎煮法、浸渍法、渗漉法、回流法、水蒸气蒸馏法等。 面对众多中药提取方法如何抉择是一个复杂的问题，因为它牵涉到生产设备和生产条件等许多因素。加上如今中药提取的规模较大，尤其考虑到连续生产，即使在实验中取得成果，在实际情况下还要经过长时间的实践检验。还有前面提到过的提取新工艺，其提取物往往是化学结构明确的物质，与传统中药生产完全是两回事，所以生产传统中药的厂家下不了决心去尝试新工艺，生产者情愿随大流，以避免风险。 提取方法的不同，提取等量有效成分所需原料和能源
也不尽相同，资源和能源对世界经济和人类生存环境的影响越来越被重视。可持续发展经济和资源节约型社会的概念已经被全世界广泛认同，中国也不例外。在市场竞争激烈异常的今天，生产成本的控制就是企业的生命，而对世界能源价格上涨的现实，生产者应该节约每一滴水，每一度电。中药生产厂家必须努力挑选出最好的中药提取方法，改变目前中药提取效率低、高能耗、高污染所造成的负面影响。 2选择原则 和所有的工程项目一样，选择中药提取方法必要考虑的条件也是：被处理物料的性质、数量，产品的价值操作人员的技术水平，现实的设备安装场地，生产成本的控制，投资的预算。所追求的目标也是最高的投资回报率，最低的能耗，最简单的操作，最理想的提取率。降低生产成本，提高产品质量，从而提升本企业的市场竞争力。舍此不会有 良好的后果。 3中药提取本质 中药提取本质上是一种固液萃取作业，任何化工原理教科书和化工手册对固液萃取的机理都有详尽的阐明。为了便于分析国内中药厂现有提取装置的状况，有必要将其与中药提取有关的结论摘录于此。
04 从西洋参中提取三萜酸
Evaluation of the Efficiency of Three Different Solvent Systems to Extract Triterpene Saponins from Roots of Panax quinquefolius Using High-Performance Liquid Chromatography S TEFAN G AFNER,*,?C HANTAL B ERGERON,?M EGAN M.M C C OLLOM,? L ORENA M.C OOPER,?K ERRY L.M C P HAIL,?W ILLIAM H.G ERWICK,?AND C INDY K.A NGERHOFER? Tom’s of Maine,P.O.Box710,Kennebunk,Maine04043and College of Pharmacy, Oregon State University,Corvallis,Oregon97331 Despite the wide availability of liquid herbal extracts using mixtures of alcohol,glycerin,and water, or glycerin and water as solvents,no data on the chemical composition of such extracts is readily available.In this study,the amount and the stability of the major saponins in Panax quinquefolius root extracts,made either with50%(v/v)aqueous ethanol,a mixture(v/v/v)of20%ethanol,40% glycerin,and40%water,or with65%(v/v)aqueous glycerin,were evaluated by HPLC-UV analysis. The amount of total saponins was highest in the50%aqueous ethanol extract(61.7(0.1mg/g dry root),although similar to the ethanol-glycerin-water extract(59.4(0.5mg/g dry root).Saponins were significantly lower in the65%aqueous glycerin extract(51.5(0.2mg/g dry root).Interestingly, the amounts of individual saponins were quite variable depending on the solvent.This is in part due to enzymatic cleavage of ginsenosides in the glycerin containing extracts during the maceration process.Storage of the extracts at25°C over the period of a year led to a13-15%loss of saponins with all three types of extractions. KEYWORDS:Panax quinquefolius;saponins;extraction efficiency;stability;enzymatic degradation; HPLC-UV/MS/MS INTRODUCTION Liquid herbal extracts are one of the most popular ways to deliver the benefits of an herb.For commercial products,extracts with mixtures of ethanol and water account for the majority of liquid products.In many countries,however,glycerin extracts, as well as mixtures of glycerin and ethanol in water at percentages commonly ranging from25to75%,are becoming increasingly popular as pleasant-tasting alternatives.Because the solvent largely determines the phytochemical profile of a given plant extract,and because the chemistry influences the biological activity,we are interested in characterizing different extracts from identical plant materials. Despite the wide use of glycerin extracts,data on the composition of glycerites is not available.The aim of this study was to fill this gap for North American ginseng,Panax quinquefolius L(Araliaceae).North American ginseng is generally used as a mild tonic;however,its mechanisms of action remain unclear.Recent publications indicated a weak CNS stimulant activity(1,2)and hypoglycemic activity(3)and showed immunomodulating properties(4).In general,saponins and polysaccharides are thought to be responsible for the biological activity.We investigated the extraction efficiency on the major ginsenosides and gypenoside XVII in extracts made with three different solvent systems.North American ginseng roots were extracted either with65%(v/v)aqueous glycerin, an aqueous mixture(v/v/v)of20%ethanol and40%glycerin, or with50%(v/v)aqueous ethanol,and the major saponins were quantified using HPLC-UV. MATERIALS AND METHODS Chemicals.HPLC grade acetonitrile was purchased from Fisher Scientific Co.(Pittsburgh,PA).Ginsenosides Rb1,Rc,Rd,Re,and Rg1 were obtained from Extrasynthe`se,SA(Genay,France).Ginsenoside F2and gypenoside XVII were isolated from a P.quinquefolius glycerin extract as outlined below.The purity of the standards was evaluated by HPLC-UV analysis.Silica gel(170-400mesh)and copper sulfate pentahydrate was from Fisher Scientific Co.,Sephadex LH-20was from Amersham Pharmacia Biotech(Uppsala,Sweden),and the high load C18solid-phase extraction cartridges were from Alltech Corp.(Deer-field,IL). Instruments.The HPLC system consisted of an Agilent quaternary pump,UV-vis detector(DAD),and automatic sample injector,and LC-MS data were obtained with an Agilent1100series LC/MSD Trap *To whom correspondence should be addressed.Tel.:++1207985 2944.Fax++12079852196.E-mail stefang@https://www.360docs.net/doc/6f17103599.html,. ?Tom’s of Maine. ?Oregon State University. 1546J.Agric.Food Chem.2004,52,1546?1550 10.1021/jf0307503CCC:$27.50?2004American Chemical Society Published on Web02/20/2004
人参皂苷的提取与分离材料
人参皂苷的提取与分离 学生姓名 专业 班级
学院 摘要 首先认识人参和人参皂苷，了解人参皂苷的详细作用和功效，接着研究了人参茎叶总皂苷含量提取方法，用详细的工艺提取人参皂苷，并且用对显色反应和薄层层析对提取物进行鉴定，为以后的人参茎叶的开发利用奠定基础。 关键词：皂苷；人参茎叶；鉴定。 Abstract The first ginseng and ginseng saponin, understanding the role and efficacy of ginseng saponin in detail, then study the effect of ginseng stem leaf total saponin extraction method, with the detailed process of extraction of ginseng saponin, and used for color reaction and thin-layer chromatography to extract were identified, for the future of ginseng stem and leaf development lays a foundation. key words: saponin; ginseng stems and leaves; appraisal;
目录 摘要 (1) Abstract ..................................... 错误!未定义书签。 1 绪论 (3) 1.1 ............................................. 人参概述 错误!未定义书签。 1.2 ........................................ 人参的化学成分 1 1.2.1人参皂苷 (1) 1.2.2人参蛋白 (1) 1.2.3人参多糖 (1) 1.2.4无机元素 (2) 1.2.5其他成分 (2) 1.3 ................................ 人参的生理功能及药理活性 2 1.3.1增强免疫功能 (2) 1.3.2抗衰老 (2) 1.3.3抗肿瘤 (3) 1.3.4增强学习和记忆能力 (3) 1.3.5保护心血管系统 (3) 2 实验部分 (5) 2.1 ............................................ 实验材料 5 2.2 人参皂苷的提取分离 (5) 2.2.1 人参皂苷的提取分离原理 (5) 2.2.2 人参皂苷提取和苷元分离工艺流程 (5) 2.3 ........................................ 人参皂苷的检识 7 2.3.1 显色反应 (7)
离心萃取机提取西洋参
CWL-M型离心萃取机采用新型中药萃取技术提取中药西洋参 西洋参又称花旗参，五加科多年生草本植物，具有补气养血、滋阴补肾、键脾养胃、延缓衰老及养颜等功效。现代医学研究证明，西洋参提取物具有抗疲劳、抗衰老、抗休克、提高思维、改善记忆及调节内分泌、增强人体免疫力及改善心血管功能等作用。随着现代医学对西洋参功效的肯定，应用中药萃取技术提取西洋参提取物在制药提取西洋参工业应用中已经有了较高的比重。 西洋参具有多方面的药理活性 1．西洋参对心血管系统：⑴改善心肌功能，抗缺血，⑵抗心律失常，⑶抗休克，⑷抗动脉硬化。 2．西洋参对增强体质：⑴抗缺氧，⑵抗疲劳，⑶耐高温，⑷耐寒，⑸耐饥渴。 3．西洋参可以促进造血、镇静、降血糖、增强免疫力。 西洋参提取物各组分功效 西洋参皂苷： 皂苷是广泛存在于地球植物界的一类非常负责的有机化合物。西洋参皂苷是西洋参中主要有效成分之一，也是最显著的物质。西洋参皂苷提取物主要为三萜类化合物。 西洋参多糖： 多糖是一切有生命的机体必不可少的成分，具有复杂、重要、多方面的生物活性。 西洋参黄酮： 西洋参黄酮具有降血脂、清除氧自由基、抑制血小板聚集。 氨基酸： 氨基酸是广泛存在於自然界含有氨基的有机酸，是构成蛋白质的基本单位。西洋参中氨基酸含量为5%-8%，数量达18种以上。这18种的氨基酸中，有的可以抗菌抗病毒，有的可以降低血糖水准，还有的可以促进伤口愈合。 蛋白质、肽类： 西洋参中含有少量蛋白质，其中可溶性蛋白质的比例稍高。 微量元素： 科学研究已经确切证明，组成人体元素共有18种。西洋参中所含微量元素达12种之多，这些微量元素在机体生长发育、生殖、神经内分泌、免疫、物质代谢、血液、消化、造血等方面发挥著重要作用，而且在生物合成酶、抗氧化、抗衰老方面也有举足轻重的作用。 维生素：
超高压提取西洋参皂苷的工艺研究
第21卷第5期2005年5月农业工程学报 T ran sacti on s of the CSA E V o l .21 N o.5M ay 2005 超高压提取西洋参皂苷的工艺研究 陈瑞战,张守勤※,王长征,窦建鹏,吴 华,张玲玲 (吉林大学生物与农业工程学院,长春130025) 摘 要:研究在常温下超高压提取西洋参根中皂苷的最佳提取工艺。探讨了不同提取溶剂、溶剂浓度、提取压力、溶剂与原料比、提取时间等因素对皂苷得率的影响,确定了超高压提取西洋参根中皂苷的最佳条件,并将超高压提取法与热回流提取、微波提取、超声提取、超临界CO 2萃取等提取法进行了比较。超高压提取西洋参根中皂苷的最佳提取条件:70%乙醇水溶液为提取溶剂,提取压力为200M Pa ,溶剂与原料比为50∶1,提取时间为2m in 。超高压提取西洋参根中皂苷具有提取得率高、时间短、能耗低等优点,可用于中药有效成分的提取。关键词:超高压;提取;西洋参;皂苷 中图分类号:O 62335;TQ 036+.4 文献标识码:A 文章编号:100226819(2005)0520150205 陈瑞战,张守勤,王长征,等.超高压提取西洋参皂苷的工艺研究[J ].农业工程学报,2005,21(5):150-154. Chen R u izhan ,Zhang Shouqin ,W ang Changzheng ,et al .T echno logical p rocess of u ltrah igh 2p ressu re ex tracti on of sapon in s from P anax qu inquef olius [J ].T ran sacti on s of the CSA E ,2005,21(5):150-154.(in Ch inese w ith English ab stract ) 收稿日期:2004211225 修订日期:2004204225基金项目:国家自然科学基金资助项目(30472135) 作者简介:陈瑞战(1967-),男,副教授,博士研究生,研究方向为药物有效成分提取。长春 吉林大学生物与农业工程学院,130025。E 2 m ail :ruizhanchen @https://www.360docs.net/doc/6f17103599.html, 通讯作者:张守勤(1946-),男,教授,主要从事农产品加工研究。长 春 吉林大学生物与农业工程学院,130025。Em ail :zsq @jlu .edu .cn 0 引 言 西洋参(P anax qu inquef olius )系五加科属植物,原产于加拿大和美国,目前中国已经有大面积的栽培。西洋参的主要成分是皂苷,具有较高的生理活性、独特的药理作用。西洋参中人参皂苷的常规提取方法有浸渍法[1],渗漉法[2],煎煮法[2],回流提取法[2],索氏提取法[3],近年来研究和开发的有超声提取法[3],微波提取[3],超临界流体萃取[4]等新技术。目前在西洋参皂苷的规模化生产中采用的基本上是常规提取工艺,这些方法不同程度的存在提取时间长,效率低,且由于长时间的加热会造成皂苷活性的降低、损失等问题。采用具有现代技术特征的超临界流体萃取方法时,由于人参皂苷的极性强、分子量大,提取效率很低。因此迫切需要“安全、高效、稳定”的西洋参有效成分提取新工艺。 超高压生物加工技术在食品灭菌[5]、病毒灭活[6]、疫苗制取[7]、蛋白质改性[8]、生化制药等多方面都有很好的应用。近年来张守勤等提出并将超高压技术应用于中药有效成分的提取[9],并利用该技术提取了黄酮[9]、皂苷、生物碱、多糖[10,11]、挥发油等多种中药有效成分。 超高压提取(U ltrah igh 2p ressu re ex tracti on ,缩写为U H PE ),也称超高冷等静压提取,它是在常温下用100～1000M Pa 的液体静压力作用于药液上,使提取溶剂渗透到药物细胞内,在预定压力下保持一段时间使有效成分达到溶解平衡后迅速卸压,由于细胞内外渗透压力差突然增大,细胞内的有效成分转移到细胞外的提取 液中,于是达到了提取有效成分的目的。 与传统的煎煮、回流提取等方法相比,超高压提取在缩短提取时间、降低能耗、减少杂质成分溶出的同时,提高了有效成分的收率。超高压提取是在常温下进行的,因此避免了因热效应引起的有效成分结构变化、损失以及生理活性降低,同时由于超高压提取是在密闭环境下进行的,没有溶剂挥发,不会对环境造成污染,因此该技术更加符合“绿色”环保的要求。 本文研究了从西洋参根中提取皂苷的超高压提取工艺,并且与热回流、微波、超声、超临界CO 2萃取等提取方法进行了比较,该提取工艺具有许多独特的优势。 1 试验材料与方法 1.1 仪器与材料 1)仪器与设备 DL 700间歇式超高压提取设备(上海大隆机器厂); L C 2V P series 岛津高效液相色谱仪,包括:四元泵,脱气单元,柱温箱,S I L 210A dvp 自动进样器,SPD 2M 10A V P 、U V 2V IS 检测器,CLA SS 2V P 工作站; HA 221250206超临界萃取装置(江苏南通华安超临界萃取有限公司); JY 292型超声波发生器(宁波新芝生物技术研究所); M G 25586D TW ,微波炉,加装了回流冷凝、 搅拌和控温装置; M A 110电子天平(精度0.1m g ,上海天平仪器厂);R E 252旋转蒸发器(上海安亭电子仪器厂);C 18(5Λm ,250mm ×4.6mm )层析柱(迪马公司)。2)材料和试剂 国产西洋参(产地:吉林省靖宇县);皂苷标准品R b 1和R e (由吉林大学基础医学院天然药物实验室提供,纯度>90%);乙腈、甲醇(美国F isher 公司,色谱 51
中药提取分离技术
中药提取分离纯化 中草药提取液或提取物仍然是混合物，需进一步除去杂质，分离并进行精制。具体的方法随各中草药的性质不同而异，以后将通过实例加以叙述，此处只作一般原则性的讨论。 一、溶剂分离法： 一般是将上述总提取物，选用三、四种不同极性的溶剂，由低极性到高极性分步进行提取分离。水浸膏或乙醇浸膏常常为胶伏物，难以均匀分散在低极性溶剂中，故不能提取完全，可拌人适量惰性填充剂，如硅藻土或纤维粉等，然后低温或自然干燥，粉碎后，再以选用溶剂依次提取，使总提取物中各组成成分，依其在不同极性溶剂中溶解度的差异而得到分离。例如粉防己乙醇浸膏，碱化后可利用乙醚溶出脂溶性生物碱，再以冷苯处理溶出粉防己碱，与其结构类似的防己诺林碱比前者少一甲基而有一酚羟基，不溶于冷苯而得以分离。利用中草药化学成分，在不同极性溶剂中的溶解度进行分离纯化，是最常用的方法。 广而言之，自中草药提取溶液中加入另一种溶剂，析出其中某种或某些成分，或析出其杂质，也是一种溶剂分离的方法。中草药的水提液中常含有树胶、粘液质、蛋白质、糊化淀粉等，可以加入一定量的乙醇，使这些不溶于乙醇的成分自溶液中沉淀析出，而达到与其它成分分离的目的。例如自中草药提取液中除去这些杂质，或自白及水提取液中获得白及胶，可采用加乙醇沉淀法；自新鲜括楼根汁中制取天花粉素，可滴人丙酮使分次沉淀析出。目前，提取多糖及多肽类化合物，多采用水溶解、浓缩、加乙醇或丙酮析出的办法。 此外，也可利用其某些成分能在酸或碱中溶解，又在加碱或加酸变更溶液的pH 后，成不溶物而析出以达到分离。例如内酯类化合物不溶于水，但遇碱开环生成羧酸盐溶于水，再加酸酸化，又重新形成内酯环从溶液中析出，从而与其它杂质分离；生物碱一般不溶于水，遇酸生成生物碱盐而溶于水，再加碱碱化，又重新生成游离生物碱。这些化合物可以利用与水不相混溶的有机溶剂进行萃取分离。一般中草药总提取物用酸水、碱水先后处理，可以分为三部分：溶于酸水的为碱性成分（如生物碱），溶于碱水的为酸性成分（如有机酸），酸、碱均不溶的为中性成分（如甾醇）。还可利用不同酸、碱度进一步分离，如酸性化台物可以分为强酸性、弱酸性和酷热酚性三种，它们分别溶于碳酸氢钠、碳酸钠和氢氧化钠，借此可进行分离。有些总生物碱，如长春花生物碱、石蒜生物碱，可利用不同rH值进行分离。但有些特殊情况，如酚性生物碱紫董定碱（corydine）在氢氧化钠溶液中仍能为乙醚抽出，蝙蝠葛碱（dauricins）在乙醚溶液中能为氢氧化钠溶液抽出，而溶于氯仿溶液中则不能被氢氧化钠溶液抽出；有些生物碱的盐类，如四氢掌叶防己碱盐酸盐在水溶液中仍能为氯仿抽出。这些性质均有助于各化合物的分离纯化。 二、两相溶剂萃取法： 1．萃取法：两相溶剂提取又简称萃取法，是利用混合物中各成分在两种互不相溶的溶剂中分配系数的不同而达到分离的方法。萃取时如果各成分在两相溶剂中分配系数相差越大，则分离效率越高、如果在水提取液中的有效成分是亲脂性的物质，一般多用亲脂性有机溶剂，如苯、氯仿或乙醚进行两相萃取，如果有效成分是偏于亲水性的物质，在亲脂性溶剂中难溶解，就需要改用弱亲脂性的溶剂，例如乙酸乙酯、丁醇等。还可以在氯仿、乙醚中加入适量乙醇或甲醇以增大其亲水性。提取黄酮类成分时，多用乙酸乙脂和水的两相萃取。提取亲水性强的皂甙则多选用正丁醇、异戊醇和水作两相萃取。不过，一般有机溶剂亲水性越大，与水作两相萃取的效果就越不好，因为能使较多的亲水性杂质伴随而出，对有效成分进一步精制影响很大。
实验六 人参中人参皂苷的提取分离及鉴定
实验六人参中人参皂苷的提取分离及鉴定 人参为五加科植物人参(Panax ginseng C.A.Mey.)的干燥根，是传统名贵中药，始载于我国第一部本草专著《神农本草经》。其栽培者称为“园参”，野生者称为“山参”。人参具有大补元气、复脉固脱、补脾益肺、生津、安神之功能，用于体虚欲脱、肢冷脉微、脾虚食少、肺虚喘咳、津伤口渴、内热消渴、久病虚羸、惊悸失眠、阳痿宫冷、心力衰竭、心源性休克等的治疗。 人参的化学成分很复杂，有皂苷、挥发油、糖类及维生素等。经现代医学和药理研究证明，人参皂苷为人参的主要有效成分，它具有人参的主要生理活性。人参的根、茎、叶、花及果实中均含有多种人参皂苷(ginsenosides)。到目前为止，文献报道从人参根及其它部位已分离确定化学结构的人参皂苷有人参皂苷-Ro、-Ra1、-Ra2 、-Rb1、-Rb2、-Rb3、-Rc、-Rd、-Re、-Rf、-Rg1、-Rg2、-Rg3、-Rh1、-Rh2及-Rh3 等50余种人参皂苷。 根据皂苷元的结构可分为A、B、C三种类型：①人参二醇型-A 型，②人参三醇型-B型，③齐墩果酸型-C型。A型和B型皂苷均属四环三萜皂苷，其皂苷元为达马烷型四环三萜，A型皂甙元称为20(S)-原人参二醇[20（S）-protopanaxadiol]。B型皂甙元称为20(S)-原人参三醇[20（S）-protopanaxatriol]。C型皂苷则是齐墩果烷型五环三萜的衍生物，其皂苷元是齐墩果酸(oleanolic acid)。
[目的要求] 1.通过实验进一步掌握三萜类化合物的理化性质及提取、分离和检识方法。 2.学习和掌握简单回流提取法、两相溶剂萃取法、旋转蒸发器、大孔树脂柱色谱等基本实验操作技能。 [实验原理] 人参的主要成分为人参皂苷，总皂苷含量约4％，人参皂苷大多数是白色无定形粉末或无色结晶，味微甘苦，具有吸湿性。人参皂苷易溶于水，甲醇、乙醇，可溶于正丁醇、乙酸、乙酸乙酯，不溶于乙醚、苯等亲脂性有机溶剂。水溶液经振摇后可产生大量的泡沫。人参总皂苷无溶血作用，分离后，B型和c型人参皂苷有显著的溶血作用，而A型人参皂苷有抗溶血作用。 人参中除含有皂苷外，还含有脂溶性成分如挥发油，脂肪、甾体
从西洋参中提取分离纯化人参皂苷Rb1和人参皂苷Re 的研究
从西洋参中提取分高纯化人参皂苷Rb1和人参皂苷Re的研究2.1 西洋参粗提液的制备 称取100g西洋参,粉碎成粗粉,用70%乙醇12倍量水浴加热回流提取3次(400mL×3),每次时间2h。提取液减压浓缩至50mL,得西洋参粗提液。HPLC检测发现,提取液中含有大量杂质,其主要成分有两种:人参皂苷Re(保留时间29.1min左右)和人参皂苷Rb1(保留时间50.3min左右)。人参皂苷Re与Rb1的质量分数分别为10%和60%。见图2。 2.2 人参皂苷Re与Rb1的初步纯化 西洋参粗提液用15倍量水(V/W)溶解上已处理好D101大孔吸附树脂柱(50×4cm,树脂为200g)。先用水洗柱,以去除大部分杂质, 再用2%NaOH溶液洗柱以除去色素,后用2% HCl溶液洗柱,再用水洗柱至流出液中性。最后用90%乙醇淋洗,收集流出液。回收溶剂至干,60℃减压干燥,得干燥疏松黄白色粉末6.0g,为西洋参总皂苷。HPLC检测, 人参皂苷Re与Rb1的质量分数分别为12.5%和65% 。 2.3 人参皂苷Re与Rb1的进一步纯化 西洋参总皂苷6.0g,用30mL70%乙醇溶解,加300mL丙酮搅拌, 析出大量沉淀,放置,过滤,沉淀干燥,得棕黄色干燥疏松粉末4.2g,为A部分。母液回收溶剂至干,得棕黄色疏松粉末1.8 g,为B部分。A部分中人参皂苷Rb1的质量分数提高到80%(人参皂苷Re下降为4.5% ),B部分中人参皂苷Re的质量分数提
高到40% (人参皂苷Rb1下降为30% )。见图3、图4。 2.4 人参皂苷Re和Rb1的再进一步纯化 A部分用20mL水溶解,加200mL丙酮搅拌,析出大量沉淀,静置, 过滤, 沉淀再用20mL水溶解,加200mL丙酮同法处理,静置过滤,60℃减压干燥,得黄白色干燥疏松粉末2.6g,为人参皂苷Rb1。HPLC 检测, 人参皂苷Rb1的质量分数为95% (人参皂苷Re为0.2% ), 见图6。A部分丙酮沉淀的母液回收溶剂至干, 得量1. 6 g, 与B 部分合并,用30mL95%乙醇溶解,加300mL丙酮搅拌, 析出沉淀,静置,过滤,母液回收至干,再用20 mL95%乙醇溶解,加200mL丙酮同法处理,过滤,溶液回收至干, 再用丙酮同法处理一次,过滤,回收溶液至干,60℃减压干燥, 得黄白色干燥疏松粉末0.5g, 为人参皂苷Re。HPLC 检测,人参皂苷Re的质量分数为92% (人参皂苷Rb1为3% ),见图7。 2.5 人参皂苷Re和Rb1晶体的制备 取质量分数为95%的人参皂苷Rb1 2.6 g, 用甲醇少量加热溶解, 冰箱放置析晶, 过滤, 甲醇再重结晶一次, 过滤, 60℃减压干燥,得2.0g白色沙状粉末。HPLC检测,质量分数为98.5% (收率2.0%)。取质量分数为92%的人参皂苷Re 0.25 g,用70%乙醇少量加热溶解,冰箱放置析晶,过滤,甲醇再重结晶一次,过滤,60℃减压干燥,得0.25g无色结晶。HPLC 检测, 质量分数为97.5%(收率0.25%)。