大鼠脑缺血模型
大鼠脑缺血模型
大脑中动脉阻塞 (middle cerebral artery occlusion，MCAO) 是目前最常用的局灶性脑缺血模型,MCAO 模型先阻断颈外动脉（ECA）及其分支，且阻断翼腭动脉（PPA），以切断颅外来源的侧副循环血流。从ECA插入尼龙线，经颈内动脉（ICA）到大脑前动脉（ACA），机械性阻断大脑中动脉（MCA）发出处的血供来建立大脑中动脉缺血模型。此模型可在无麻醉状态下拔出尼龙线，恢复血流，实现再灌注。线栓法具有不开颅、效果肯定、可准确控制缺血及再灌注时间的优点，用于研究神经元对缺血的敏感性、耐受性，药物疗效观察以及再灌注损害和治疗时间窗较为理想，同时也具有对全身影响小、动物存活时间长的特点，适于慢性脑损伤的研究。控制好易变因素，可避免实验结果的不稳定性。
1.实验动物
SPF级Wistar大鼠，健康，雄性，体重为250g-300g。
2.实验分组
实验分六组：正常对照组、模型组、阳性药组、受试药组三个剂量组，每组15只动物。
3.主要试剂
2，3，5-Triphenyltetrazolium chloride（sigma）
4.建模方法
1.15%水合氯醛麻醉大鼠，颈部备皮，消毒，插入肛温探头，保持体温在37±0.5℃。
2.颈部正中切口，暴露右侧颈总动脉，颈内动脉和颈外动脉。使用6-0丝线在距离颈总动脉分叉4mm 处结扎颈外动脉远心端，在颈外动脉穿入另一根6-0丝线，在靠近颈总动脉分叉处打一个活结。
3.使用动脉夹夹闭颈总动脉。在距离颈总动脉分叉处3mm处的颈外动脉上剪一个小口，将一根头端处理过的0.33mm直径的尼龙线从小口中插入，进入颈内动脉，并向内插入大脑中动脉，尼龙线的插入深度距离颈总动脉分叉处约16±1mm。
4.缺血后90min拔掉线栓，用6-0丝线结扎外动脉近心端，用3-0丝线缝合颈部伤口，活力碘消毒伤口，将大鼠放在加热垫上，待清醒后放入恒温抚养箱饲养。
5.术后24h，对小鼠进行神经功能评分，然后腹腔注射15%水合氯醛麻醉大鼠，取大脑进行TTC染色和病理染色
5.模型的评价
1.神经功能缺失体征评分
参考Longa及Bederson的5分制法在动物麻醉清醒后24h进行评分，分值越高,说明动物行为障碍越严重。
0分:无神经损伤症状
1分:不能完全伸展对侧前爪
2分:向对侧转圈
3分:向对侧倾倒
4分:不能自发行走,意识丧失
2.TTC染色
麻醉大鼠后，取大鼠脑组织，放入-20℃冰箱冷冻30min。用PBS配置1% TTC（W/V），37℃水浴至TTC溶解，将冻好的脑组织切片，置于10ml TTC溶液中，37℃恒温孵育10min。不时翻动脑片，使组织均匀染色。正常脑组织染色后呈鲜红色，而梗死区呈苍白色。
3.病理学评价
取脑后用4%多聚甲醛溶液固定，蔗糖溶液脱水后，经OCT包埋做冰冻切片，切片10um，做尼氏染色，可做梗死面积的评价。
尼氏体（Nissl body）：是胞质内的一种嗜碱性物质，广泛见于各种神经元，但其形状大小和数量则各有差异。在生理情况下,尼氏体大而数量多,反映神经细胞合成蛋白质的功能较强,在神经元受损时,尼氏体的数量可减少甚至消失。
图1. TTC染色图（白色表示梗死组织，红色表示正常组织）
武汉云克隆诊断试剂研究所
心肌缺血再灌注损伤介绍和实验设计
心肌缺血再灌注损伤介绍和实验设计 Ⅰ.心肌缺血再灌注损伤： 它是指缺血心肌组织恢复血流灌注时，导致再灌注区心肌细胞及局部血管网显著的病理生理变化，这些变化共同作用可促使进一步的组织损伤。那这里的关键词就是缺血心肌组织。那为什么会产生缺血的心肌组织呢？这就与临床上的疾病有关了。一些心脏疾病，比如急性心肌梗死、冠心病等他们会使心脏发生缺血的症状，其基本的生理过程就是心肌缺血。 Ⅱ.心肌缺血的危害： 心肌缺血：指单位时间内的冠脉血流量减少，供给组织的氧量也减少，缺血必定存在缺氧表明缺血缺氧。心肌缺血比单纯性心肌缺氧无血流障碍要严重，因为前者除了缺氧的影响之外，缺血组织也不能获得足够的营养物质又不能及时清除各种代谢产物带来的有害影响。 一、心肌缺血的原因主要分为两种情况：1是冠脉血流量的绝对不足。这种情况是由自身疾病产生的，主要包括冠状动脉阻塞，冠状动脉痉挛。2是冠脉血流量的相对不足：包括供氧降低或耗氧增加，比如高原高空或通风不良的矿井吸入氧减少；肺通气或换气功能障碍，可致血氧含量降低红细胞数量和血红蛋白含量减少等。 二、缺血对心肌的危害主要包括以下几个方面：1是心肌收缩能力降低。2是导致心肌舒张功能降低。3是心肌组织的血流动力学发生改变，比如说血流的阻力增加等。4是心肌电生理的变化，比如说静息点位降低，传导速度减慢；室颤阈降低等。5是导致心肌形态学的改变。当然还有其他的危害，在这里就不一一列举了。 由于心肌缺血存在这么多的危害，临床上针对这一疾病采取了再灌注治疗方法，但随之而来的又是另外一个临床问题：缺血再灌注损伤。 下面具体介绍一下心肌缺血再灌注损伤。心肌缺血再灌注损伤英文缩写为MIRI，最早由詹宁斯等于1960年提出，发现其临床表现为再灌注心律失常、心肌顿抑、心肌能量代谢障碍等现象。随后又有学者在临床手术中也证实了这一观点，发现在冠脉搭桥术完成后，心肌坏死进一步加重的现象。接着布朗沃尔德教
急性下肢缺血诊断详述
急性下肢缺血诊断详述 *导读：急性下肢缺血症状的临床表现和初步诊断?如何缓解和预防？ 下肢动脉缺血症可分为早、中、晚三期。早期为缺血期 ,主要表现为患肢怕冷、麻木和针刺感 ,检查时可发现足背有瘀斑样改 变 ,足趾尖和趾甲明显增厚、苍白 ,患肢皮肤温度降低 ,足背动脉搏动减弱甚至消失。紧接着就出现行走困难 ,即患者的行走速度减慢 ,行走距离缩短 ,并出现跛行。患者一般行走 100米以内 ,就感到患肢麻木胀痛 ,必须停下休息片刻方可继续行走。因此 ,这种症状又被称作“间歇性跛行” ,此期也可称作“间歇性跛行期”。如果疾病进一步发展 ,就进入中期 ,在上述症状逐渐加重的基础上 ,中期的主要特点是疼痛。患者行走时疼痛 ,休息时也疼痛 ,而且越是夜深人静 ,疼痛越剧烈 ,因此该期又被称 为“静息痛期”。晚期也称作“坏死期” ,主要表现为足趾、外踝、足跟等末梢部位逐渐出现发黑、坏死 ,并在坏死的基础上发生感染 ,形成溃烂。患者彻夜难眠 ,疼痛难忍。 在进行手术治疗前应进行彩色超声波、动脉造影等检查。应用先进的数字显影动脉造影和血管镜检查时我们可以发现 ,下肢动 脉缺血症主要是由于下肢主干动脉闭塞所致。闭塞的原因既可以是动脉硬化的斑块 ,也可以是血管壁增厚和血栓堵塞。闭塞的部位既可发生在腹主动脉下段 ,也可发生在股动脉、腘动脉等处。
动脉闭塞发生的部位越高 ,则缺血的面积越大 ;闭塞发生的部 位越低 ,则缺血症状出现得越早。 在本病诊断时, 还须特别注意以下几个问题，以便和几个疾病鉴别开来: ①间歇性跛行须与非血管性下肢疼痛造成的跛行(如神经源性跛行) 区分开来。 ②对于突发下肢发凉、麻木、静息痛等急性下肢缺血患者,跛行病史是动脉血栓形成和动脉栓塞鉴别的主要依据。 ③年龄和发病部位是本病与大动脉炎和血栓闭塞性脉管炎的鉴 别要点, 大动脉炎好发于年轻女性, 主要侵犯主动脉及其主要 分支; 血栓闭塞性脉管炎多见于吸烟的青壮年男性, 主要累及 肢体的中、小动脉及静脉。常并发血栓性静脉炎,病程进展慢, 无动脉壁钙化,无糖尿病、高血压、高血脂等。 ④雷诺病(征) :好发于青年女性,常因寒冷或情绪变化激发手指皮肤色泽的典型改变,多为双侧对称性。少数患者可发生于下肢或四肢。非发作期,患指(趾) 颜色正常。 首先，任何形式的吸烟必须戒掉。其次，预防性足部护理非常重要。病人应每天观察自己的足部有无皲裂、胼胝、鸡眼和溃疡。胼胝和鸡眼应请足科医生治疗;每日应以微温水、温和的肥皂洗足并轻轻擦干。对干燥和有鳞屑的皮肤需用羊毛脂等润肤剂;潮湿的足需用温和的不含药物的扑粉;趾甲需剪齐，但不宜太接近皮肤。病人每天应更换袜子，并避免穿过紧的吊袜带，避免赤脚
大鼠急性脑缺血及缺血再灌注中ERK5的表达情况
大鼠急性脑缺血及缺血再灌注中ERK5的表达情况 发表时间：2016-05-16T16:45:56.270Z 来源：《医药前沿》2016年4月第10期作者：谭中旭1 宋玉强（通讯作者）2 吕敬雷3 于力群1 [导读] 1青岛大学医学院山东青岛 266021) 2青岛大学医学院附属医院神经内科山东青岛 266003) (3青岛大学医学院附属医院神经功能检查科山东青岛 266003) 治疗急性脑缺血患者的最佳办法是能及时恢复脑组织血液供应, 然而恢复血流灌注给脑组织带来新的损伤, 即缺血再灌注损伤。 谭中旭1 宋玉强（通讯作者）2 吕敬雷3 于力群1 时圣桂1 (1青岛大学医学院山东青岛 266021) (2青岛大学医学院附属医院神经内科山东青岛 266003) (3青岛大学医学院附属医院神经功能检查科山东青岛 266003) 【摘要】目的：观察大鼠脑皮质中细胞外信号调节激酶5(ERK5)在缺血及缺血再灌的不同表达，探讨其在脑缺血再灌注损伤中的意义。方法：采用线栓法建立大脑中动脉闭塞( MCAO) 模型，所有大鼠随机分为假手术组、缺血梗死组和缺血再灌组。对各组大鼠行神经功能评分，TTC染色测定脑梗死体积，免疫组织化学法测定ERK5表达。结果：缺血再灌注组大鼠的神经功能缺损和脑梗死体积均比缺血梗死组大鼠严重。ERK5在缺血梗死组和缺血再灌组都表达，后者明显多于前者。结论：ERK5可能参与脑缺血再灌注损伤过程并起着重要作用。 【关键词】脑缺血；缺血再灌注损伤;细胞外信号调节激酶5(ERK5);表达 【中图分类号】R742 【文献标识码】A 【文章编号】2095-1752（2016）10-0172-02 Expression of ERK5 in rats cortex afer cerebral ischemia and reperfusion TAN Zhongxu1,SONG Yuqiang2,LV Jinglei3,YU Liqun1,SHI Shenggui11Qingdao University Medical College,Qingdao 266021,China.2Department of Neurology,the Affiliated Hospital of Qingdao University Medical College, Qingdao 266003,China .3 The Affiliated Hospital of Qingdao University Medical College,Qingdao 266003,China 【Abstract】Objective To observe the different expression of ERK5 in rats cortex in response to cerebral ischemia and ischemia/reperfusion, and investigate the significance in ischemia/reperfusion injury.Methods Blocking middle cerebral artery with intraluminal thread was used to build cerebral middle artery infarction model ( MCAO).All rats were randomly divided into sham operation group,ischemia groupand ischemia/reperfusion (I/R)group.The Longa score was used to evaluate revived rats and TTC staining was used to determine the infarct volumes.we investigated the activation and expression of ERK5 by immunohistochemistry.Results 24 hours after MCAO, neurological function scores were significant increased in I/R group compared with ISCH group. the infarct volume was in I / R group was larger.The activation of ERK5 was rapidly induced by ischemia, and I/R group were significantly higher than Ischemia group.Conclusion We hypothesize that ERK5 might participate in the pathogenesis of isehemic/reperfusion and play an important effect during ischemia/reperfusion injury. 【Key words】 Cerebral ischemia ;Ischemia/reperfusion injury; Extracellular signal regulated protein kinase(ERK5); Expression 1.前言 治疗急性脑缺血患者的最佳办法是能及时恢复脑组织血液供应, 然而恢复血流灌注给脑组织带来新的损伤, 即缺血再灌注损伤。目前研究证明，丝裂原活化蛋白激酶（mitogen-activated protein kinases，MAPKs）参与脑缺血再灌注损伤的过程[1]。其中，细胞外信号调节激酶5（ERK5）是新发现的成员[2]。本实验通过采用线栓法构建大脑中动脉闭塞(MCAO) 模型，观察大鼠脑皮质ERK5在缺血及缺血再灌24h 的不同表达情况，探究其在缺血再灌损伤中的可能作用。 2.材料与方法 2.1 动物 选择8周龄成年健康雄性Sprague-Dawley（SD）大鼠50只，体重220～260g, 由青岛市药物检验所实验动物中心提供。实验前将动物置于实验室1周适应环境,均自由饮水、进食,实验室室温(25±2)℃,相对湿度65%,自然光照。 2.2 方法 2.2.1动物模型的建立和分组大鼠制备局灶性脑缺血再灌注模型，采用Zea-Longa等的大脑中动脉线栓法[3]。具体步骤如下：采用2.0鱼线为栓线，以10％水合氯醛（300mg/kg）腹腔注射麻醉，仰卧固定，分离并暴露右侧颈总动脉（common carotid artery,CCA）、颈内动脉（internal carotid artery,ICA）和颈外动脉（external carotid artery,ECA），结扎并切断ECA及其分支，沿根部结扎ICA颅外分支翼腭动脉。由ECA残端插入一根鱼线，沿ECA、CCA分叉部和ICA轻轻推进，至ICA颅内分叉处时可阻断流入大脑中动脉（middle cerebral artery，MCA）的血流，进线长度为18～20mm。假手术组大鼠只暴露动脉，不进行插线操作。所有麻醉大鼠苏醒时间要求在术后2小时之内，未苏醒者剔除。待神经功能评分后，将符合实验要求的大鼠（即建模成功）随机分为缺血再灌组（I/R组）和缺血梗死组（ISCHE 组）。缺血再灌组：大脑中动脉阻闭2h后，抽出约10mm鱼线，恢复血流灌注24h；缺血梗死方法：大脑中动脉阻闭2h后不拔鱼线，继续阻塞24h。最后心脏灌注取脑，用4％的多聚甲醛灌注固定，制备石蜡切片。 2.2.2神经功能评分和脑梗死体积的测定参照Zea-Longa[3]、谢惠芳等[4]TTC染色法分别进行神经功能评分和测定脑梗死体积。 2.2.3免疫组织化学法（SABC法）检测ERK5蛋白表达石蜡切片脱蜡至水，0.01M PBS溶液洗2min×3次；3%H202室温lOmin灭活内源性酶；微波修复抗原；滴加5%BSA封闭液,室温孵育20min；滴加羊抗大鼠ERK5单克隆抗体（1: 200）,4℃过夜；滴加生物素化二抗,37℃反应30min；用SABC免疫组化试剂盒染色，DAB显色。所有切片均在同一放大倍数下进行观察，每张切片先在低倍镜下随机选择梗死灶周围区4个象限视野，然后在高倍镜下(400倍)选择缺血灶周围5不连续的视野观察，计数阳性细胞，取其平均值。 2.3 统计学处理 采用SPSS 18.0软件包进行统计处理,数据均采用均值±标准差(x-±s)表示,各组间差异比较用方差分析，P＜0.05为差异有统计学意义。 3.结果 3.1 神经功能评分和梗死体积测定
线栓法大鼠脑缺血再灌注模型(MCAO)制备方法.pdf
线栓法大鼠脑缺血再灌注模型制备 前言 相信不少神经内科的研究生都作过或将要作大鼠线栓模型，都有一个从查文献了解方法到跟师兄、师姐学习再到自己体会摸索直至熟练的过程，在模型制作的过程中可能的经历了从模型不成功的郁闷到熟练后成功的喜悦（我们是有这样的感觉）。为了缩短各位将要作或刚开始作MCAO模型的战友的摸索过程，提高模型制作的成功率，我们愿意将自己的经验与大家分享，相信各位战友看过后将对制作大鼠线栓模型有更深的认识，并以其为乐趣，同时欢迎各位熟练的战友与我们交流经验。 第一部分线栓模型制备理论及经验 ⒈ 插线法局灶性脑缺血模型简介 八十年代 Koizumi 和 Longa 创用了不开颅的大鼠 MCA 可逆性脑梗塞模型，此后，应用插线法制备大鼠局灶性脑缺血再灌注模型的方法不断改进和完善，已渐趋成熟，目前该法已逐渐取代开颅法而成为最流行的方法。该模型先阻断颈外动脉（ECA）及其分支，且阻断翼腭动脉（PPA），以切断颅外来源的侧副循环血流。从 ECA 插入尼龙线，经颈内动脉（ICA）到 大脑前动脉（ACA），机械性阻断大脑中动脉（MCA）发出处的血供来建立大脑中动脉缺血模型。此模型可在无麻醉状态下拔出尼龙线，恢复血流，实现再灌注。 1994 年 Huang 等[55]首次将线栓技术应用于小鼠局部永久性脑缺血模型。1997 年 Hara 等[56]将线栓技术改进后应用于小鼠局部暂时性脑缺血模型。此后不断有学者借助于显微技术和多功能生理监测手段建立小鼠局部线栓脑缺血模型[57,58]。国内蒋晓帆等[59]，王芙蓉等[60] 也对该方法进行了研究。线栓法具有不开颅、效果肯定、可准确控制缺血及再灌注时间的优点，用于研究神经元 对缺血的敏感性、耐受性，药物疗效观察以及再灌注损害和治疗时间窗较为理想，同时也具有对全身影响小、动物存活时间长的特点，适于慢性脑损伤的研究。控制好易变因素，可避免实验结果的不稳定性。但线栓造模也并非完美无缺，存在着下列不足：①线栓造模过程是非直视下的手术，血流是否完全阻断不能即刻得知。②动物品系、体重、批次会影响结果。动物饲养条件好的单位所繁育的动物，可以使影响程度降低。③操作者的科研训练影响结果。严格的训练和足够例数的实践可以复制出稳定的结果。④血管破裂出血。操作不小心极易刺破血管或拔线栓时引起出血。轻柔、精细的操作可以减少血管破裂的发生。
急性下肢缺血诊治的临床分析
急性下肢缺血诊治的临床分析 摘要目的探讨急性下肢缺血的诊疗方法和疗效。方法109例急性下肢缺血患者，其中，2000年1月～2007年12月行动脉切开Fogarty导管取栓治疗56例作为动脉切开组；2008年1月～2016年6月行腔内介入治疗53例作为腔内介入组，比较两组治疗效果。结果动脉切开组救肢成功38例，截肢8例，死亡10例；腔内介入组救肢成功50例，截肢1例，死亡2例，两组比较差异有统计学意义（P＜0.05）。结论个体化腔内介入治疗急性下肢缺血患者能明显降低截肢率及死亡率，提高救肢成功率。 关键词急性下肢缺血；取栓手术；腔内介入 急性下肢缺血（acute lower limb ischemia，ALI）是血管外科的常见病，起病急聚，进展迅速，病因复杂，若没有及时、正确的诊断和治疗，患者将面临截肢并危及生命。目前治疗手段多种多样，各种治疗方法的安全性和有效性尚有争议，没有统一的模式，多数学者认为，根据患者的具体病情拟定个体化治疗方案，对挽救肢体及生命具有重要意义。本文总结本科2000年1月～2016年6月收治的109例ALI患者的临床资料，对其采用的诊疗方法进行分析总结，现报告如下。 1 资料与方法 1. 1 一般资料回顾性分析本科2000年1月～2016年6月诊疗的109例ALI 患者的临床资料，均符合泛大西洋协作组织专家共识——Ⅱ（TransAlantic Inter-Society Ⅱ，TASCⅡ）ALI标准：急性起病2周内，肢体灌注突然下降，可能危及肢体存活者，按缺血临床分期[1]为Ⅰ、Ⅱa、Ⅱb期的患者。本院2000年1月～2007年12月间即刻在局部麻醉或全身麻醉行动脉切开、Fogarty导管取栓治疗的患者，作为动脉切开组（56例）。本院2008年1月～2016年6月间，按TASCⅡ中ALI的治疗路径进行诊治（动脉造影、腔内治疗）的患者，作为腔内治疗组（53例）。两组患者全身情况均较差，多数同时合并糖尿病、冠心病、心房颤动、肝肾功能不全等多种慢性疾病。两组年龄、性别、病因及临床分期等一般资料比较差异无统计学意义（P>0.05），具有可比性。 1. 2 方法 1. 2. 1 动脉切开组患者即刻在局部麻醉或全身麻醉下行动脉切开、Fogarty 导管取栓术，术中血栓取出后，经导管向动脉远端灌注尿激酶25万U，术后予以尿激酶脉50万U/d外周静脉持续泵注、低分子肝素5000 U皮下注射（q12h）、前列地尔10～20 μg静脉推注（q12h）等溶栓、抗凝及扩血管治疗。 1. 2. 2 腔内治疗组患者即刻在局部麻醉下行动脉穿刺血管造影术，若导丝能顺利通过血栓栓塞段或狭窄闭塞段血管，进一步予以球囊扩张，同时植入动脉支架，置管溶栓（经导管先在血栓内灌注尿激酶2 5万U，再经导管持续泵
临床上心肌缺血的诊断
临床上心肌缺血的诊断 主要通过病人临床表现及心电图fECG)检查来确定，而心电 图检查的敏感性非常低．临床上心肌缺血的表现常常是不明 确的，多样性的．致使这些症状难以察觉 反映心肌缺血的理想标志物应具备以下特性：(1)最重要 的是灵敏度和特异性高；(2】心肌缺血后迅速增高；(3)循环中 稳定性好；f4】24h内血中浓度恢复基础水平；(5)容易检测，可 很快获得结果；(6)具有较好的分析特性(cv值低)；(7)经济 ．因为12小时后IMA即可回复基线．故 可以用来检测缺血的反复发作[61Quilesr~和Garrido嘲等以PTCA术中球囊扩张压迫引起的短暂心肌缺血为模型．研究了IMA水平与心肌缺血严重程度 的关系研究结果发现PTCA术后IMA升高的水平与术中球 囊扩张的压力、扩张持续时间和扩张的次数有关。PTCA术后 血清IMA水平在无侧支循环的病例中升高的程度高于有侧 支循环的病例故上述两项研究均认为IMA不仅是缺血存在 的标志．而且其升高水平还与心肌缺血的严重程度具有相关 性 非心肌缺血IMA水平的升高 IMA诊断心肌缺血的特异性不如ECG．一些文献报道 IMA浓度升高町见于癌症、感染、肝病和脑缺血。只是这部分 报道仍偏少，需进一步研究证实。考虑其主要原因可能为：f11 白蛋白随血循环．町出现在全身各组织器官。故除心肌外奠 他脏器的缺血亦有可能引起IMA升高；f2)IMA的假阳性还见 于遗传性白蛋白N端氨基酸缺失症。但人群中该缺失发生的 频率尚不清楚。另外当血清白蛋白浓度<20g／L，或>55~L或 者存在高浓度的乳酸时．ACB试验的结果解释应慎重．因为 高浓度的乳酸会干扰ACB试验。使IMA呈现假低值191 IMA作为?个敏感的缺血指标．正在欧美国家进行的大 规模临床研究已证实：IMA能够辅助临床对ACS的早期诊 断．以便在疾病的町逆阶段进行十预治疗．以抑制疾病的进 一步发展。IMA检测具有很高的阴性预测值．在排除ACS的 诊断中具有重要应用价值ACB试验简便易行．可以在一般 的实验室进行，仅需20—30分钟即可获结果．故非常适合急 诊检验的要求。目前我国此方面的研究刚起步．国产的ACB 试验试剂盒已获SFDA的批准：但是临床使用的情况、试剂 盒的性能等一系列问题均急待研究 检测 的心肌标志物(CK．MB，cTnI和Myoglobin)结果表明 它们是评估ANI和心肌坏死有用标志物，而不适于 判断尚未出现不可逆心肌细胞坏死的心肌缺血，而 INA即Alb—Co2 结合实验进一步被证实是心肌缺血 的早期标志物。
脑缺血再灌注损伤机制及治疗进展
脑缺血再灌注损伤机制及治疗进展 西安交通大学医学院第二附属医院麻醉科710004 薛荣亮 脑缺血一定时间恢复血液供应后，其功能不但未能恢复，却出现了更加严重的脑机能障碍，称之为脑缺血再灌注损伤（cerebral ischemia reperfusion injury,CIR）。 脑缺血再灌注损伤与自由基的生成、细胞内钙超载、兴奋性氨基酸毒性、白细胞高度聚集和高能磷酸化合物的缺乏等有关。急性局灶性脑缺血引起的缺血中心区死亡以细胞坏死为主，目前认识的比较清楚，即脑缺血后5-7分钟内，细胞能量耗竭，K+通道受阻，膜电位降低，神经末梢释放谷氨酸，通过兴奋谷氨酸受体（包括NMDA 、AMPA和KA 受体）致使细胞膜上的Ca2+通道开放，引起Ca2+超载，高Ca2+可激活NOS，使NO和氧自由基的形成增加，引发脂质过氧化，引起膜结构和DNA的损伤；Ca2+还可活化各种酶类，加剧细胞损伤和能量障碍，引发缺血级联反应，结果细胞水肿、细胞膜破裂，细胞内酶和炎性介质释放，引起细胞坏死。 近年来认识到半暗带区域于再灌注数天后出现了迟发性神经元死亡(DND)，DND常出现在缺血再灌注后2-4日，主要发生在海马、纹状体及皮质区域，DND需要数日时间、有新蛋白质合成的、需要消耗能量的、为无水肿的细胞自杀过程，称之为细胞凋亡(PCD)。脑缺血再灌注损伤既包括急性细胞坏死也包括细胞凋亡，对于DND的确切机制目前仍不清楚，尚需进一步深入研究。 现对脑缺血再灌注损伤机制的研究进展及保护措施简述如下：1．基因活化 脑缺血再灌注损伤后可出现大量基因表达，大约有374种基因出现
变化，绝大多数基因与凋亡有关，其中57种基因的蛋白表达是缺血前的 1.7倍，而34种基因的表达量出现下降，均发生在4小时到72小时, 包括蛋白质合成，基因突变，促凋亡基因，抑凋亡基因和损伤反应基因变化等，这些基因的相互作用最终决定了DND的发生。 2．兴奋性氨基酸毒性 兴奋性氨基酸毒性是指EAA受体活化而引起的神经元死亡，是脑缺血性损伤的重要触发物和介导物。EAA可活化胞内信号转导通路，触发缺血后致炎基因表达。CA1区神经细胞分布着大量的EAA受体，而抑制性氨基酸受体分布很小，这就为缺血后的兴奋性毒性提供了基础。另外，CA1区较CA3区对缺血损伤敏感是由于其兴奋性氨基酸受体的类型不同，CA1区以NMDA受体为主，CA3区以KA受体为主，而KA 受体对缺血敏感性较差，可能是造成DND发生的重要原因。 3．自由基及脂质过氧化 脑缺血再灌注期间产生大量自由基。其有害作用可概括为：①作用于多价不饱和脂肪酸，发生脂质过氧化。②诱导DNA、RNA、多糖和氨基酸等大分子物质交联，交联后的大分子则失去原来的活性或功能降低。③促使多糖分子聚合和降解。自由基可广泛攻击富含不饱和脂肪酸的神经膜与血管，引发脂质过氧化瀑布效应(oxygen burst)，蛋白质变性，多核苷酸链断裂，碱基重新修饰，细胞结构的完整性破坏，膜的通透性、离子转运、膜屏障功能均受到严重影响，从而导致细胞死亡。自由基还能导致EAA释放增加，促使脑缺血后DND发生。 4．热休克蛋白表达紊乱 热休克蛋白是在多种应激原的作用下生成的分子量为7-200KD的
线栓法大鼠脑缺血再灌注模型的制备
线栓法制备大鼠脑缺血再灌注模型的方法研究 马贤德1孙宏伟1 柴纪严1 赵金茹1 （1 辽宁中医药大学，辽宁沈阳 110032；） 摘要①目的建立一种比较系统，操作简单，成功率高的大鼠大脑中动脉缺血(MCAO)再灌注动物模型，达到只要读者根据本文所述的方法操作就能制作出MCAO再灌注模型的目的。 ②方法成年健康雄性 SD大鼠40只，参照Longa法并适当改进建立MCAO模型20只，假手术组20只。本文将详细叙述手术过程以及再灌注时间点的合理选择。最后利用行为学测试、四氮唑(TTC)染色对模型成功与否进行判定。③结论线栓法是一种操作简单的制备MCAO 再灌注动物模型的方法，并且此方法的再灌注效果较为明显。 关键词动物模型；脑缺血；再灌注；线栓法 Establishment a model of rat ischemia-reperfusion injury with intraluminal suture Ma Xian-de1 Sun Hong-wei1 Chai Ji-yan1 Zhao Jin-ru1 (1.Liaoning University of Chinese Traditional Medicine, Shenyang, 110032) Abstract: Objective To establish a model of rat ischemia-reperfusion injury, in terms of the model, the operation will be simple, and the achievement ratio will be high. Methods: 40 Male Sprague-Dawley ( SD ) rats were separated into two groups randomly: 20 were model of rat ischemia-reperfusion injury based on Longa method, and the other 20 were sham-operated group. The process of the operation and the selection of different time point following ischemic-reperfusion were discussed in the paper. What’s more , the model was appraised by behavioral test and Triphenyl Tetrazolium Choloride（TTC）Staining. Conclusion: The operation of intraluminal suture method is very simple for the establishment of model of rat ischemia-reperfusion, what’s more, the effect of reperfusion is very obvious. Key words: Animal Model, ischemia, reperfusion, intraluminal suture 脑缺血再灌注动物模型是研究缺血性脑血管病的一条重要途径，因为脑缺血再灌注动物模型具有很好的重复性并能最大程度模拟人类缺血性卒中的发生。早在1986年，日本学者Koizumi发明了线栓法制备局灶性脑缺血大鼠模型。1995年，我国也出现了相关的报道。目前人们比较公认的是Longa等建立的大鼠大脑中动脉缺血(MCAO)再灌注动物模型。国内一些学者对此方法又进行了改进，但仍存在一些问题，例如：手术操作过程复杂，实验动物死亡率较高，而模型成功率较低，并且在所发表的文章中普遍存在一个缺点，就是对该模型的制作过程描述得过于简单，读者往往不能按照此类文献完成模型的制备工作。本文旨在前人研究的基础上，建立一种操作简单，成功率高的 MCAO再灌注模型，并将此方法图文并茂的展现给读者，使读者只要根据本文所述的方法操作就能制作出MCAO再灌注模型。 1 材料与方法 1.1 实验材料、动物及分组健康雄性SD大鼠40只，体重280-320g，由辽宁中医药大学实验动物中心提供。随机分为模型组和假手术组，每组20只。四氮唑红(TTC)染料，由沈阳市博尔美试剂公司提供。 1.2 栓塞线的制备栓塞线采用 2.5号钓鱼线，直径0.25-0.28mm。将其剪成4cm长，一端用细砂纸打磨成半球形（需在显微镜下筛选），再用记号笔分别在距打磨端0.6cm处、1.8cm
心肌缺血再灌注
大鼠心肌缺血/再灌注损伤 【实验目的】 1.复制大鼠在体与离体心肌缺血/再灌注损伤模型； 2.观察缺血/再灌注过程中心功能的变化 【实验动物】成年Wistar 大鼠（体重200－300g） 【仪器药品】 电子天平，肾形盘，动物呼吸机，BL-420F记录装置，眼科开睑器，微血管钳，组织镊，眼科镊，组织剪，眼科剪，眼科止血钳，止血钳，动脉夹，眼科缝合针，1号及00缝合线。Langedroff灌流装置。 20%乌拉坦，1ml注射器，5ml 注射器，纱布块 实验1 在体模型 【实验步骤】 1.实验采用体重200-300ｇ健康雄性Wistar大鼠，20%乌拉坦腹腔注射麻醉 （0.5ml/100g）； 2.颈胸部备皮及手术，分离气管及右侧颈总动脉 3.气管插管连接呼吸机（呼吸肌参数：潮气量9ml，呼吸比=3:2，呼吸频率55~60） 4.经右侧颈总动脉逆行插管至左心室, 再经BL-420F软件输入计算机,（一通道描记心 电，（右上黄、右下黑、左下红）二通道描记心室内压，三通道描记微分）持续监测心脏左心室内压力及心电的变化情况 5. 沿胸骨左侧剪开2，3肋骨，开睑器开胸暴露心脏；寻找冠状动脉左前降支，穿线备 用; 6.采用结扎5min后再放开5min两次,造成缺血预处置；采用结扎30mim再放开30min 复制缺血/再灌注模型； 思考题： 1.如何判定缺血模型复制成功 2.如何判定有再灌注损伤发生
实验2 离体模型 【实验步骤】 (1) 大鼠称重，腹腔注射20%乌拉坦（0.5ml/100g）麻醉，仰卧固定于鼠板，上腹部及前胸部剪毛。 (2) 舌下/阴茎背静脉注入1%肝素（0.05ml/100g）后，切开胸腹部皮肤，用剪刀横行剪开腹腔，向上剪断隔膜，沿两侧肋骨向上平行剪开，翻起前胸壁，把心脏及胸膈周围的结缔组织拨到一侧，充分暴露心脏。 (3) 用镊子提起心脏根部，暴露出主动脉和肺动脉，在距主动脉起始部0.5cm处用手术剪切断血管，迅速取出心脏至于4℃生理盐水平皿中使之停搏。 (4) 经主动脉将心脏悬挂在灌流装置上，用丝线结扎固定，打开灌流液行逆向灌流，待心脏恢复自主跳动，小心减去心脏周围附着组织。 (5)用眼科剪剪去左心耳，通过左心耳经房室瓣插入左心室一乳胶球囊，球囊连接一个内充生理盐水的导管，导管经三通管和换能器与BL-420F连接。 (6) 在BL-420F仪的监测下，通过向球囊内注入一定量的生理盐水是左心室的舒张末压调整在0~10mmHg之间。 (7)连接心电导线，心尖、右心耳和地线，一通道设置记录， (8) 预灌流10~20分钟，观察心率，二通道记录心室内压、三通道取微分记录±dp/dtmax 等心动指标，同时描记ECG，待上述各指标平衡后开始以下实验。 心肌缺血-再灌注损伤 (1) 心脏用正常灌流液预灌流15分钟后完全停灌40分钟，然后恢复灌流20分钟，观察心脏在正常，停灌初期和再灌期的心功能变化。 (2) 分别收集正常灌流时，再灌流后3分钟时的心脏冠脉流出液1ml，测定其中乳酸脱氢酶的活性。 思考题： 1.如何判定缺血模型复制成功 2.如何判定有再灌注损伤发生
下肢缺血治疗方法的研究进展综述
滨州医学院 文献综述 下肢缺血性疾病治疗现状 的研究进展 Study progress on Treatment of lower limb ischemia 申请学位：学士学位 院（系）：药学院 专业：药学 姓名：张印龙 学号：320142120153 指导教师：王跃嗣（教授） 二O 一六年三月二十日
目录 摘要 ..................................................................................... 错误！未定义书签。Abstract (2) 1．前言 (3) 2．分类 (3) 2.1.1急性下肢缺血性疾病 (3) 2.1.2慢性下肢缺血性疾病 (3) 2.2 辅助手段 (4) 2.2.1踝肱指数 (4) 2.2.2 彩色多普勒超声 (4) 2.2.3 CT 血管造影 (4) 3．治疗手段 (5) 3.1药物治疗 (5) 3.2手术治疗 (5) 3.3介入手术 (6) 3.4基因治疗和干细胞治疗 (6) 3.4结论 (7) 4．展望 (8) 参考文献 (8) 致谢 (9)
下肢缺血性疾病治疗现状的研究进展 张印龙 摘要：为了总结治疗下肢缺血性疾病（lower limb ischemia）的研究进展，通过CNKI、万方数据、维普资讯、CBM等数据资料的查找分析，结果：CNKI有相关文献2,323篇、万方数据有相关文献1,002篇、维普资讯有相关文献269篇、CBM 有相关文献248篇，排除标准：①综述、评论、摘要、会议论文、科技成果、短篇报道、报刊文章等常规一次文献。②重复文献。③不符合研究目的的文献。结论：目前治疗下肢缺血性疾病的方法很多，但都有具有许多缺点，未来的发展空间广阔。 关键词：下肢缺血性疾病、介入手术、联合治疗、细胞疗法 Study progress on Treatment of lower limb ischemia Zhang Yinlong Abstract:In order to understand the treatment progress of lower limb ischemia and search through CNKI, WanFang Data, VIP information, CBM data analysis. Results: CNKI have related literature 2323, WanFang Data with related literature 1002, VIP information with relevant literature 269, CBM has related literature 248 papers. Exclusion criteria: repeated or old. Conclusion: many methods of lower limb ischemia in the treatment have many Shortcomings, but there are limitations and broad space for development in the future. Keywords:lower limb ischemia、stem cells、Interventional operation、Combined therapy
Sec22b及Ykt6在大鼠脑缺血再灌注损伤中的作用机制研究
Sec22b及Ykt6在大鼠脑缺血再灌注损伤中的作用机制研究中文摘要 Sec22b及Ykt6在大鼠脑缺血再灌注损伤中的 作用机制研究 中文摘要 第一部分Sec22b及Ykt6与脑缺血再灌注的相关性研究目的：研究大鼠脑缺血再灌注（MCAO/R）后脑组织中Sec22b及Ykt6的蛋白表达水平及其分布的变化。 方法：①随机选取30只SD大鼠分为以下5组：假手术组、MCAO/R后6h、12h、24h、48h，每组6只大鼠。所有大鼠均在脑组织缺血再灌注后相应时间点被处死。取大鼠脑梗侧脑组织，通过Western blot分析及免疫荧光技术来检测Sec22b及Ykt6的蛋白水平及分布情况。②培养大鼠原代神经元细胞，随机分为以下5组：正常对照组、OGD/R后6h、12h、24h、48h。所有神经元细胞均在氧糖剥夺再灌注后相应时间点固定细胞，通过Western blot分析及免疫荧光技术来检测神经元内Sec22b及Ykt6的蛋白水平及分布情况。 结果：1、大鼠脑缺血再灌注后脑组织内的Sec22b水平呈先上升后下降的变化，以MCAO/R后24h组Sec22b蛋白水平上升最为显著（P＜0.01）；而Ykt6水平呈逐渐下降趋势，在所研究的时间点内以MCAO/R后48h组Ykt6蛋白水平下降至最低（P ＜0.05）。2、神经元氧糖剥夺再灌注后神经元内的Sec22b水平同样呈先上升后下降的变化，以OGD/R后24h组Sec22b蛋白水平上升最为显著（P＜0.01）；而Ykt6水平同样呈逐渐下降趋势，在所研究的时间点内以OGD/R后48h组Ykt6蛋白水平下降至最低（P＜0.05）。3、体内免疫荧光结果显示Sec22b在脑缺血再灌注后24h细胞内的定位明显升高；体外免疫荧光结果显示氧糖剥夺再灌注后24h神经元细胞内Sec22b 主要聚集在神经元轴突的末梢。 结论：MCAO/R后Sec22b的表达水平明显升高，并且主要积聚在神经元轴突的末梢；而Ykt6的表达水平呈逐渐下降趋势。 关键词：脑缺血再灌注；氧糖剥夺再灌注；Sec22b；Ykt6。 I
脑缺血模型评估
脑缺血模型分为全脑缺血和局灶性缺血模型两种。全脑缺血对于慢性脑缺血及一些特殊领域研究具有较高的价值，但因其对全身影响较大，梗死不稳定等缺点，并且，临床上的脑缺血患者通常为局灶性缺血，因此临床应用价值相对较低，目前应用相对较少。局灶性缺血与全脑缺血相比，可形成特定部位的脑梗死并进行再灌注，对全身影响较少，与人发病情况更相似，目前应用更为广泛。 全脑缺血模型 1 两血管阻断法：Ekloef 等（Ginsberget al.,1989）首先提出这种模型, 即关闭大鼠双侧颈总动脉(CCA), 同时降低血压。制造低血压有两种方法: 通过尾动脉放血降低血压, 使用降压药三甲噻方或酚妥拉明把血压降到50 mmHg (7.5 mmHg =1kPa)。其优点是操作简单方便;缺点是存在侧支循环, 缺血不完全, 血压的轻微波动会影响实验结果,低血压会严重干扰其他器官和组织的供血（李月玲et al.,1989）。该模型还不能再清醒动物进行, 无法进行神经行为的观察。可用来进行脑缺血后脑血流、神经递质的变化以及低温神经保护等，适合慢性期研究（张拥波et al.,2007）。在该法基础上改进可制作血管性痴呆模型，如高脂饲养加两血管阻断法（Tayebatis et al.,2004），两血管阻断加尾端放血降压法，两血管阻断加硝普钠降压法（Willams et al.,2007）。 2 三血管阻断法:最初由Kameyama 等（Kameyama et al.,1985）建立，方法为电凝切断基底动脉，并通过阻断与开放双侧颈总动脉，实现全脑－缺血再灌流。该法稳定性好，可通过阻断CCA 的时间长短来控制缺血程度，再灌注血流恢复迅速，模型成功率高，适合用于急性全脑缺血性损伤的研究。其缺点是手术难度稍大，且对周围组织牵拉严重，操作不当易造成动物死亡。被认为是迄今为止最理想的全脑缺血－再灌注动物模型。Yanamoto 等（Yanamoto et al.,2003）采用改良的三支动脉阻断法制作正常血压大鼠大脑皮层脑梗死模型，通过比较术后动物的生理参数，梗死灶体积等指标确定缺血性中风程度。 3 四血管阻断法：通过阻断双侧CCA 和双侧椎动脉实现 全脑缺血，最早在1979 年由Pulsinelli 等（Pulsinelli et al.,1979）建立。首先分离双侧CCA，放入套扣并外置备用，电凝或结扎双侧椎动脉，可根据实验需要经外置套扣阻断双侧CCA，并于一定时间后开放而实现再灌注。优点为可在清醒或麻醉状态下完成，制作过程与血管性痴呆的发病机理接近，缺血后生理指标稳
第二十三讲缺血再灌注损伤概论修订版
第二十三讲缺血再灌注 损伤概论 Document number：PBGCG-0857-BTDO-0089-PTT1998
第二十三章缺血－再灌注损伤 一、基本要求 1. 掌握自由基、活性氧、缺血－再灌注损伤、氧反常、钙反常、pH反常、钙超载、无复流现象和呼吸爆发的概念, 重点掌握缺血－再灌注损伤的发生机制。 2. 熟悉缺血－再灌注损伤的原因和条件, 熟悉缺血－再灌注损伤时机体的功能和代谢变化。 3. 了解防治缺血－再灌注损伤的病理生理基础。 二、知识点纲要 （一）缺血－再灌注损伤的概念 各种原因造成组织血液灌流量减少，可使细胞发生缺血性损伤。再灌注具有两重性，多数情况使缺血组织和器官的功能结构得以修复，患者病情得到控制。但是，部分患者或动物缺血后再灌注，不仅没使组织器官功能恢复，反而使缺血所致功能代谢障碍和结构破坏进一步加重，这种现象称为缺血－再灌注损伤。与之密切相关的概念，还有氧反常、钙反常和pH反常。缺血－再灌注损伤在不同种属和各种组织器官均可发生，具有普遍性。 ( 二 ) 缺血－再灌注损伤的原因和条件 再灌注损伤取决于缺血时间、侧支循环、需氧程度以及电解质浓度。 ( 三 ) 缺血－再灌注损伤的发生机制 1. 自由基的作用 (1) 自由基的概念、特性、类型、体内代谢和生物学意义 (熟悉和了解) (2) 缺血－再灌注时氧自由基生成增多的机制 (掌握) 1) 黄嘌呤氧化酶形成增多； 2) 中性粒细胞的呼吸爆发；3) 线粒体损伤，氧分子单电子还原增多；4) 儿茶酚胺增加，自氧化增强。 (2) 自由基的损伤作用(掌握) 1) 生物膜脂质过氧化增强导致①膜结构破坏──膜的液态性和流动性减弱，通透性增强；②抑制膜蛋白功能──离子泵失灵和细胞内信号传递障碍；③线粒体功能受损──ATP 生成减少。 2) 细胞内Ca2+超载源于自由基引起细胞膜通透性增强，膜上Na+-K+-ATP酶失活和线粒体功能障碍。 3) DNA 断裂和染色体畸变外面无组蛋白保护的线粒体DNA对氧化应激敏感。 4) 蛋白质变性和酶活性降低自由基可引起蛋白质分子肽链断裂，使酶的巯基氧化。 5) 诱导炎症介质产生自由基可导致脂质过氧化和胞内游离钙增加，激活磷脂酶，脂加氧酶及环加氧酶。 2. 钙超载 (1) .细胞内钙稳态调节 (熟悉和了解) (2) 再灌注时细胞内钙超载的机制 (掌握) 1) Na+－Ca2+交换异常；2) 细胞膜通透性增高；3) 线粒体功能障碍；4) 儿茶酚胺增多。 (3) 钙超载引起再灌注损伤的机制 (掌握)
线栓法大鼠脑缺血再灌注模型制备方法-图文并茂
线栓法大鼠脑缺血再灌注模型制备方法 Pipilulu 目录： 第一部分线栓模型制备理论及经验 1插线法局灶性脑缺血模型简介 2大鼠颈部及颅内动脉解剖及常用插线位置 3大鼠大脑中动脉阻断实验的总结和心得（zhuqing0506战友） 4 也谈大鼠MCAO模型的实验体会（bladeflyer战友） 5 我的做MCAO模型的一些体会（intelligentwang战友） 6 线栓法大鼠脑缺血再灌注模型（MCAO）制备技巧（ysf2k战友）第二部分线拴模型制作过程（雨后天晴战友） 第三部分灌注取脑（pipilulu战友） 第四部分 TTC染色（pipilulu战友）
前 言 相信不少神经内科的研究生都作过或将要作大鼠线栓模型，都有一个从查文 献了解方法到跟师兄、师姐学习再到自己体会摸索直至熟练的过程，在模型制作 的过程中可能的经历了从模型不成功的郁闷到熟练后成功的喜悦（我们是有这样 的感觉）。为了缩短各位将要作或刚开始作MCAO 模型的战友的摸索过程，提高模型制作的成功率，我们愿意将自己的经验与大家分享，相信各位战友看过后将对制作大鼠线栓模型有更深的认识，并以其为乐趣，同时欢迎各位熟练的战友与我们交流经验。 第一部分线栓模型制备理论及经验 ⒈插线法局灶性脑缺血模型简介 八十年代Koizumi和Longa创用了不开颅的大鼠MCA可逆性脑梗塞模型，此后，应用插线法制备大鼠局灶性脑缺血再灌注模型的方法不断改进和完善，已渐趋成熟，目前该法已逐渐取代开颅法而成为最流行的方法。该模型先阻断颈外动脉（ECA）及其分支，且阻断翼腭动脉（PPA），以切断颅外来源的侧副循环血流。从ECA插入尼龙线，经颈内动脉（ICA）到大脑前动脉（ACA），机械性阻断大脑中动脉（MCA）发出处的血供来建立大脑中动脉缺血模型。此模型可在无麻醉状态下拔出尼龙线，恢复血流，实现再灌注。 1994年Huang等[55]首次将线栓技术应用于小鼠局部永久性脑缺血模型。1997年Hara 等[56]将线栓技术改进后应用于小鼠局部暂时性脑缺血模型。此后不断有学者借助于显微技术和多功能生理监测手段建立小鼠局部线栓脑缺血模型[57,58]。国内蒋晓帆等[59]，王芙蓉等[60]也对该方法进行了研究。 线栓法具有不开颅、效果肯定、可准确控制缺血及再灌注时间的优点，用于研究神经元对缺血的敏感性、耐受性，药物疗效观察以及再灌注损害和治疗时间窗较为理想，同时也具有对全身影响小、动物存活时间长的特点，适于慢性脑损伤的研究。控制好易变因素，可避免实验结果的不稳定性。但线栓造模也并非完美无缺，存在着下列不足：①线栓造模过程是非直视下的手术，血流是否完全阻断不能即刻得知。②动物品系、体重、批次会影响结果。动物饲养条件好的单位所繁育的动物，可以使影响程度降低。③操作者的科研训练影响结果。严格的训练和足够例数的实践可以复制出稳定的结果。④血管破裂出血。操作不小心极易刺破血管或拔线栓时引起出血。轻柔、精细的操作可以减少血管破裂的发生。