醋酸纤维薄膜电泳法分离血清蛋白实验报告

醋酸纤维薄膜电泳法分离血清蛋白实验报告

前言

血清蛋白:

血清蛋白是血液中脂肪酸的载体当身体需要能量或建筑材料时，脂肪细胞将脂肪酸释放到血液中，脂肪酸被血清蛋白捕获并运送到所需的位置

牛血清白蛋白的相对分子质量是10的四次方，这是不确定的，但是是一种聚合物，并且在一些地方测量到70，000，这是一个数据。它将用于聚合酶链反应

牛血清蛋白是血液的主要成分，分子量为68kD。等电点4.8氮含量16%，糖含量0.08%只含有己糖和己糖胺，脂肪含量仅为0.2%白蛋白由581个氨基酸残基组成，其中35个半胱氨酸残基形成17个二硫键，在肽链的第34位有一个游离巯基白蛋白可以与各种阳离子、阴离子和其他小分子物质结合血液中的白蛋白主要起维持渗透压、缓冲液、载体和营养的作用。在动物细胞的无血清培养中，白蛋白的加入可以起到生理和机械的保护作用和载体作用。

醋酸纤维素薄膜电泳:

醋酸纤维素薄膜电泳以醋酸纤维素薄膜为载体它是纤维素的乙酸酯，由纤维素的羟基乙酰化而成。它溶解在有机溶液如丙酮中，并可被涂覆成厚度为0.1毫米-0.15毫米的均匀微孔膜太稠，吸水性差，分离效果差；如果它太薄，如果它缺乏应有的机械强度，膜就会变脆。

醋酸纤维素薄膜电泳操作简单、快速、廉价。它已广泛应用于血清蛋白、血红蛋白、球蛋白、脂蛋白、糖白蛋白、甲胎蛋白、类固醇激素和同工酶等的分离和分析。虽然其分辨率低于聚丙烯酰胺凝胶电泳，但具有简单、快速的优点。功能:

1。(1)醋酸纤维素膜对蛋白质样品的吸附很少，没有“拖尾”现象。染色后，背景可以完全脱色，各种蛋白染色带可以清晰分离，提高了测定的准确性。

(2)快速节省时间醋酸纤维素膜的亲水性比滤纸差，膜中含有的缓冲溶液少，电渗少，电泳时大部分电流由样品传导，分离速度快，电泳时间短。一般来说，电泳时间只有45-60分钟。染色和脱色后，整个电泳过程只需约90分钟。

(3)灵敏度高，样品消耗少。血清蛋白仅需要2μl血清，即使样品体积小至0.1μl，对于仅含5μg蛋白的样品也可获得清晰的分离带。临床医学检查用它来检测病理条件下微量异常蛋白的变化。(4)应用广泛有些蛋白质不容易用纸电泳分离，如胎儿α球蛋白、溶菌酶、胰岛素、组蛋白等。醋酸纤维素膜电泳可以更好地分离。(5)电泳染色后，醋酸纤维素膜可浸泡在冰醋酸、乙醇混合溶液或其他溶液中，形成透明的干板，有利于扫描定量和长期保存。2.与聚丙烯酰胺凝胶电泳相比，醋酸纤维素薄膜电泳操作简单，但分离效果不是很好。例如，在醋酸纤维素薄膜电泳中，只有5-6条带能与白蛋白分离，而在聚丙烯酰胺凝胶电泳中，只有10条带能与白蛋白分离。

1。实验目的

1。掌握电泳分离血清蛋白的原理；

2。掌握血清蛋白醋酸纤维素膜电泳的操作方法二。实验原理

1。电泳是指带电粒子在电场中以相反的电荷移动到电极上的现象在一定的酸碱度条件下，由于等电点不同，不同的蛋白质具有不同的电荷和不同的性质，因此它们在一定电场中的移动方向和移动速度是不同的，即它们的电泳迁移率是不同的。因此，它们可以分开。影响电泳迁移率的因素:

内在因素:蛋白质携带的净电荷量，蛋白质的大小和形状外在因素:电场强度，溶液的ph值，溶液的离子强度和电渗现象。血清中各种蛋白质的等电点在ph 4.0至7.3之间，在pH8.6的缓冲溶液中带负电，在电场中向正极游动血清中各种蛋白质的等电点不同，所以电荷的数量也不同。此外，各种蛋白质的分子大小不同，因此在同一电场中的游动速度也不同。那些带有小分子和多种电荷的粒子运动得更快。相反，它更慢。

4。醋酸纤维素溶于有机溶剂(如丙酮、氯仿、氯乙烯、乙酸乙酯等)。)然后涂布成均匀的膜，成为醋酸纤维素膜该膜具有均匀的泡沫状结构，厚度约为120微米，渗透性强，分子运动阻力小。薄膜电泳具有痕量、快速、简便、分辨率高、无拖尾和样品上

吸附现象等优点。它已广泛应用于血清蛋白、糖蛋白、脂蛋白、血红蛋白、酶、免疫电泳等的分离。

5。醋酸纤维素薄膜电泳可根据电泳速度将血白蛋白分为5个区带。从阳性端开始，依次为白蛋白、α1球蛋白、α2球蛋白、β球蛋白和γ

球蛋白。每种蛋白质的百分比含量可以通过染色来计算。

3、实验材料和试剂1、实验设备

1。电泳仪:为电泳提供DC电源2.电泳槽:提供电泳的地方

3。血清取样器:可使用盖玻片或微量取样器 4.醋酸纤维素膜:2cm×8cm

5。其他:培养皿(直径9-10厘米)、滤纸、镊子等。2.实验材料和试剂材料:牛血清

1。巴比妥-巴比妥钠缓冲液(pH8.6) 2.0.5%氨基黑10B染色液3。漂洗液

4。透明溶液:使用前立即制备

a溶液:取15 ml冰醋酸(ar)和85 ml无水乙醇(ar)。液体乙:取25毫升冰醋酸和75毫升无水乙醇。5.保存液:液体石蜡

6。定量洗脱液(0.4摩尔/升氢氧化钠溶液)4。实验步骤1。电泳槽的制备

电泳槽有两个独立的槽，每个槽装有缓冲溶液，并与不同的电极相连，红色为正极，黑色为负极每个凹槽有一个可移动的横杆，滤纸的一端放置在横杆上，另一端浸入缓冲溶液中形成滤纸桥。在滤纸桥上点好醋酸纤维素薄膜2.醋酸纤维素膜的润湿

将醋酸纤维素膜完全浸泡在缓冲溶液中约30分钟后，用镊子小心夹住膜的一端，将其放入折叠好的滤纸中，用滤纸吸取表面液体3.样品

点样

将膜条铺在玻璃板上(无光泽面朝上)，将样品点样器浸在血清中(最好是薄层)，然后在膜条一端1.5-2厘米处轻轻水平放下，并立即提起，从而在膜条上点样一条薄的血清样品。这一步是实验的关键。

4和电泳

将样品点的薄膜施加到阴极电泳槽支架的滤纸桥上(样品点面朝下),另一端施加到阳极支架上(见下图)要求滤膜应紧紧地贴在滤纸桥上，并伸直，中间不应下垂。

连接电泳仪电泳在室温下进行，打开电源开关，通过调节电流强度至0.3毫安/厘米，电泳时间约为1小时。电泳后，关闭电泳仪并切断电源。5.染色:

电泳完成后，取下薄膜，在含有氨基黑10B染色液的培养皿中浸泡5-10分钟(染色溶液的回收)6。漂洗:

从染色溶液中去除薄膜，在自来水下漂洗以去除多余的染色溶液，然后在含有漂洗溶液的培养皿中漂洗，直到背景蓝色完全去除且条带清晰，从而获得清晰的色带电泳图案。7.透明

将脱色和吹干的薄膜浸入透明的A溶液中2分钟，立即浸入透明的B溶液中1分钟，取出后立即贴在干净的玻璃板上，两者之间无气泡该薄膜在大约2-3分钟内完全透明。如果透明度太慢，可以用滴管取少量透明液体B，在薄膜表面冲洗一次，然后自然晾干，或者用吹风机吹凉晾干，不要有酸味。3将玻璃板放在流动的自来水下，待薄膜完全浸湿后，用单面刀片撬开薄膜的一角，用手轻轻揭下透明薄膜，

滤纸吸干液体石蜡，并压平该膜是透明的，具有清晰的区域着色，可用于光吸收仪的扫描。

4和电泳

将样品点处的薄膜贴在阴极电泳槽支架的滤纸桥上(样品点朝下),另一端贴在阳极端子支架上(见下图)要求滤膜应紧紧地贴在滤纸桥上，并伸直，中间不应下垂。

连接电泳仪电泳在室温下进行，打开电源开关，通过调节电流强度至0.3毫安/厘米，电泳时间约为1小时。电泳后，关闭电泳仪并切断电源。5.染色:

电泳完成后，取下薄膜，在含有氨基黑10B染色液的培养皿中浸泡5-10分钟(染色溶液的回收)6。漂洗:

从染色溶液中去除薄膜，在自来水下漂洗以去除多余的染色溶液，然后在含有漂洗溶液的培养皿中漂洗，直到背景蓝色完全去除且条带清晰，从而获得清晰的色带电泳图案。7.透明

将脱色和吹干的薄膜浸入透明的A溶液中2分钟，立即浸入透明的B溶液中1分钟，取出后立即贴在干净的玻璃板上，两者之间无气泡该薄膜在大约2-3分钟内完全透明。如果透明度太慢，可以用滴管取少量透明液体B，在薄膜表面冲洗一次，然后自然晾干，或者用吹风机吹凉晾干，不要有酸味。3将玻璃板放在流动的自来水下，待薄膜完全浸湿后，用单面刀片撬开薄膜的一角，用手轻轻揭下透明薄膜，

滤纸吸干液体石蜡，并压平该膜是透明的，具有清晰的区域着色，可用于光吸收仪的扫描。