形态学实验技术
1.脱水:所谓脱水就是利用脱水剂将组织内的水分置换出来，以利于透明剂和石蜡或者火胶棉的渗入，这一过程称为脱水。
2 透明：为了使石蜡浸入到组织块内，必须经过一种既能与脱水剂混合，又能与石蜡相溶的媒介物质，这个过程称透明。在制片过程中有两次透明，第一次是脱水后组织块的透明（目的是便于透蜡包埋），第二次是指染色后切片的透明（目的是有利于光线通过，便于显微镜观察）。
3.特殊染色：为了显示与确定组织或细胞中正常结构或病理过程中出现的异常物质、病变及病原体等，需要分别选用相应的显示这些成份的染色方法进行染色，包括胶原纤维染色（Masson等）、网状纤维染色、弹力纤维染色、肌肉组织染色（磷钨酸）、苏木素、脂肪染色（苏丹III）、糖原染色、粘液染色等。
4、AB-PAS：阿利辛蓝过碘酸Schiff染色法，特殊染色的一种，其结果是中性粘液物质呈红色，酸性粘液物质呈蓝色，中性和酸性粘液的混合物呈紫红色.
5、HE染色：在组织制片技术中，常规制片最广泛应用的是苏木素—伊红染色，又称HE染色。染色方法: a.切片脱蜡至水，入苏木素液5分钟b.水洗，分化，蓝化。c.入伊红液数秒，水洗，脱水透明封固 d.结果：细胞核蓝色，其他红色。
6、分化：在退行性染色中，需要某些特定的溶液将附着组织细胞上多余的染色剂脱去，从而使目的物与周围组织形成鲜明对比，同时使目的物本身的色泽也深浅适宜。这种选择的去除多于染色剂的过程，称为分化。
7、原位杂交：是核酸分子杂交的一部分，是将组织化学与分子生物学技术相结合来检测和定位核酸的技术。它是用标记了的已知序列的核苷酸片段作为探针（probe），通过杂交直接在组织切片、细胞涂片或培养细胞爬
片上检测和定位某一特定的靶DNA或RNA的存在。
8、基因芯片：基因芯片又称DNA芯片(DNAcMp)，是指固着在固相载体上的高密度的DNA 微点阵。具体地说就是将大量靶基因或寡核苷酸片段有序地，高密度地排列在如硅片、玻璃片、聚丙烯或尼龙膜等载体上，这就是基因芯片。
9、流式细胞术：流式细胞术是利用流式细胞仪进行的一种单细胞定量分析和分选技术，是单克隆抗体及免疫细胞化学技术、激光和电子计算机科学等高度发展及综合利用的高技术产物。它可以高速分析上万个细胞，并能同时从一个细胞中测得多个参数;与传统的荧光镜检查相比，具有速度快、精度高、准确性好等优点，成为当代最先进的细胞定量分析技术。10、图像的定量分析：指用量化的方法一数字的表达形式对图像中各种结构信息的定量描述及在此基础上对图像含义所做的定量分析、推理、判断和概括。通常所说的图像分析特别是计算机图像分析一般指的都是图像定量分析.
11、几何校正：几何校正是将一标准尺度输入计算机图像分析系统，计算机根据该尺度就可确定出该标准尺度输入的条件下有关图像的尺度单位，及图像中每一像素所代表的实际尺寸，这一过程通常称为标定。
简答
1、组织固定的目的和意义目的：1）能防止细菌的腐蚀和组织的自溶。（2）保存细胞固有的物质，能凝固或沉淀细胞内的组织液，糖原等，使细胞或组织基本上保持与生活时的物质一样。（3）使组织硬化，便于切块。（4）对某些具有传染性的标本，能防止疾病的扩散。（5）保存好大体标本。（6）
可增强染色的作用。
意义：所谓固定就是使要观察的组织结构尽量接近于它生前的正常状态。因为机体死后血液循环停止，细胞逐渐死亡，如不立即处理，则细胞内的酶会使蛋白质分解为氨基酸渗细胞，使细胞溶解破坏，组织变型，在无冷藏的条件下，可因为病原微生物的繁殖而腐败，组织结构破坏，不利于形态学的观察。
2、色素的分类
人为性色素及沉着物：甲醛色素、汞沉着、铬沉着以及苏木素沉着物。
病理性色素及沉着物：
1、外源性：硅、石棉、铅、碳末、银、铜等
内源性：（1）血源性色素：血红蛋白、含铁血黄素、胆色素、疟色素。
非血源性色素：黑色素、脂褐素、肾上腺色素、嗜铬细胞色素。
3、HE染色的染色方法染色方法: 一、脱蜡至水二、染色1、苏木素染5min2、水洗1min3、75%盐酸乙醇分化3os自来水冲洗4伊红染色1min
三、脱水透明和封片
4、简述原位杂交实验的实验步骤由于核酸探针的种类和标记物的不同，在具体应用的技术方法上也各有差异，但其基本操作流程和应用原则大致相同。大致可分为：①杂交前准备，包括固定、取材、玻片和组织的处理，如何增强核酸探针的穿透性、减低背景染色等；②杂交；③杂交后处理：洗涤④显示（visual－ization）：包括放射性自显影和非放射性标记的显色。
5、试述流式细胞术样本制备的基本原则。1.用于FCM的样本是单细胞悬液 ;2.使各种体液和悬浮细胞样本新鲜 ;3.针对不同的细胞样本进行适当的洗涤，酶消化或EDTA处理；4.新鲜实体瘤组织可选用或联用酶消化
法、机械打散法和化学分散法来获得足够数量的单细胞悬液。5、单细胞悬液的细胞数应不少于100万。
6、简述原位杂交技术的原理及应用。原理：用已知碱基顺序并带有标记物的核酸探针与组织、细胞中待测的核酸按碱基配对的原则进行特异性结合，形成杂交体，然后再用与标记物对应的检测系统，通过组织化学或免疫组织化学方法在核酸原有位置进行细胞内定位。应用：(1) 病原体的检测：病毒：HPV(16，18)──宫颈癌；EBV──鼻咽癌,结外NK/T 细胞淋巴瘤, HL；HBV──肝癌、肝炎；HIV──AIDS病等
（2）肿瘤基因检测：癌基因的染色体定位，癌基因mRNA检测──癌基因活化
7、免疫组化染色过程中为什么要进行抗原修复？常用的抗原修复方法哪些？因为部分抗原在甲醛固定过程中发生蛋白之间的交联及醛基的封闭作用而遮蔽抗原决定簇，使免疫组化标记敏感性明显降低。通过抗原修复，使得细胞内抗原决定簇重新暴露。抗原修复方法有：化学方法：酶消化方法，常用有胰蛋白酶及胃蛋白酶；物理方法：热引导抗原决定簇修复，常用有单纯加热、微波处理和高压加热。
8、简述DNA倍体分析原理。DNA倍体分析是在对DNA行特异性染色的基础上借助流式细胞仪或图像分析仪、显微光度计测试胞核单色光光吸收程度进行的。其基本原理是基于比色分析中的朗伯比尔定律，即吸光度A与溶液中物质的浓度C和溶液层厚度B的乘积成正比。DNA倍体分析是以正常二倍体细胞DNA含量光标准衡量受检细胞中DNA含量的倍体改变，通常用DNA指数来反应DNA含量的相对改变，并用于对DNA倍体分析的判断。
9基因芯片的特点是什么？优点：体积小，信息量大，能高效，快速和低
消耗地进行各种原位组织学的研究和观察，并有较好的内对照及实验条件的可比性。高通量；大样本：；省时迅速：简便经济：结果可靠，用途广泛。
10高尔基复合体超微结构有哪些成份构成？其有何意义？由三种成分组成即扁平囊泡、小囊泡和大囊泡。扁平囊泡是高尔基复合体的主体，有人称之为高尔基囊泡，它是由3～8个扁平囊泡平行排列组成，其间有电子致密度高的物质。扁平囊泡呈弓形，凸面称为形成面或未成熟面，凹面称为分泌面或成熟面。形成面的囊泡较薄，近似内质网膜。小囊泡数量较多，散布于扁平囊泡周围，与扁平囊泡融合而起到蛋白质运输作用。大囊泡多见于扁平囊泡扩大的末端，或见于分泌面，所以也称之为分泌泡或浓缩泡，常见于形成高尔基复合体的功能：形成和包装分泌物、蛋白质和脂类的糖基化；蛋白质的加工改造，膜的转化。
11简述免疫组化在病理诊断和研究中的作用。1.确定细胞类型； 2.辨认细胞产物； 3.了解分化程度 4.鉴定病变性质；5.发现微小病灶； 6.探讨肿瘤起源或分化表型；7.确定肿瘤分期；8.指导治疗和预后； 9.辅助疾病诊断和分类； 10.寻找感染病因
12简述几种图像分割方法的优缺点图像分割的方法有色彩分割、灰度分割、和手工分割。（1）色彩分割：就是通过指定特定的颜色，并将该颜色的图像结构提取出来。这种分割方法对于具有特殊颜色结构的图像具有良好的分割效果。在巴氏染色中，胞浆一般呈绿色，角化上皮细胞浆呈桔黄色，核呈紫蓝色，因此，用色彩分割法提取胞核或角化上皮胞浆等结构既准确又方便。
（2）灰度分割：是根据所设定的灰度阈值进行图像分割。由于不同的图像结构往往具有相同的灰度，这就给分割带来了很大困难，常常将一些不
必要的图像结构一同分割出来。因此单纯的灰度分割往往不能满足要求，常常要结合手工分割来进行图像分割。
（3）手工分割：就是通过手工方法借助鼠标器通过勾描感兴趣的特定结构来实现图像的分割，它在图像分割中起重要作用。在灰度分割中，只要相邻结构的灰度相同或相近，就难以分割，就有必要借助手工分割。手工分割同样可以和色彩分割相结合，弥补色彩分割时的不足。
实验三 数学形态学及其应用
实验三 数学形态学及其应用 一．实验目的 1.了解二值形态学的基本运算 2.掌握基本形态学运算的实现 3.了解形态操作的应用 二．实验基本原理 腐蚀和膨胀是数学形态学最基本的变换，数学形态学的应用几乎覆盖了图像处理的所有领域，给出利用数学形态学对二值图像处理的一些运算。 膨胀就是把连接成分的边界扩大一层的处理。而收缩则是把连接成分的边界点去掉从而缩小一层的处理。 二值形态学 I(x,y), T(i,j)为 0/1图像Θ 腐蚀：[]),(&),(),)((),(0,j i T j y i x I AND y x T I y x E m j i ++=Θ== 膨胀：[]),(&),(),)((),(0 ,j i T j y i x I OR y x T I y x D m j i ++=⊕== 灰度形态学 T(i,j)可取10以外的值 腐蚀： []),(),(min ),)((),(1 ,0j i T j y i x I y x T I y x E m j i -++=Θ=-≤≤ 膨胀： []),(),(max ),)((),(1 ,0j i T j y i x I y x T I y x D m j i +++=⊕=-≤≤ 1.腐蚀Erosion: {}x B x B X x ?=Θ: 1B 删两边 2B 删右上 图5-1 剥去一层（皮）
2.膨胀Dilation: {}X B x B X x ↑⊕:＝ 1B 补两边 2B 补左下 图5-2 添上一层（漆） 3.开运算open ：B B X ⊕Θ=)(X B 4.闭close ：∨ Θ⊕=B B X X B )( 5.HMT(Hit-Miss Transform:击中——击不中变换) 条件严格的模板匹配 ),(21T T T =模板由两部分组成。1T ：物体，2T ：背景。 {} C x x i X T X T X T X ??=?21, 图5-3 击不中变换示意图 性质： （1）φ=2T 时，1T X T X Θ=? （2）)()()(21T X T X T X C Θ?Θ=? C T X T X )()(21Θ?Θ= )/()(21T X T X ΘΘ= 6.细化/粗化 (1)细化（Thin ） C T X X T X XoT )(/??=?= X 2 1 1 1 2 3 T
1生物学实验常用技术
生物学实验常用技术一、分子方面 1、基因工程 1)PCR (Polymerase Chain Reaction) (二楼PCR仪器全部会用) 2)RT-PCR;Q-PCR 3)琼脂糖凝胶电泳;胶回收 4)酶切/链接 5)转化 6)固体/液体LB培养基配制 (高压蒸汽灭菌锅使用方法) 7)质粒大/小抽原理及步骤 (手提、溶液I、II、III作用) 8)基因组DNA抽提 9)RNA提取; 2、蛋白质工程 1)蛋白收集 (蛋白裂解液+PMSF; 1×Loading 裂解(推荐)) 2)SDS-PAGE(电泳胶的配制) 2)考马斯亮蓝染色,银染 3)Western blot 4)蛋白定量常用的方法及原理, 以及熟练操作Bradford法蛋 白定量 (TRIZOL法原理、注意事项及步骤) 二、细胞方面 1)细胞培养、传代 2)细胞冻存与复苏 冻存液配制: (1)DMSO:血清=1:9(推荐)
(2)DMSO:培养基:血清=1:3:6 均可 DMSO为细胞专用型;现用现配,效果最好;冻存时细胞在-80℃中不要超过一周,最好在24-48h内放入液氮罐中保存。 3)细胞培养基配制(过滤除菌)、胰酶配制(过滤除菌),PBS配制(灭菌);(不同培养基的区别;谷氨酰胺(提供氮源),2周补充一次) 4)转染 5)MTT原理及操作(检测细胞存活率或死亡率) 6)碱性磷酸酶实验(ALP,检测细胞分化) (5、6 需学会SPSS软件及graphpad prism5软件使用) 7)Hoechst染色 8)结晶紫染色(不推荐) 9)苏木精/伊红染色 (9可以替代8,以后实验推荐使用9,图片漂亮) 10)荧光显微镜的使用 11)激光共聚焦显微镜样品制备(细胞固定,染色,洗脱) (7、8、9、10、11需学会Photoshop常用工具处理数据) 12)流式细胞仪样品制备(包括:转染效率与细胞凋亡染色标记)以及仪器操作(需学会FlowJo软件分析流式结果) 三、动物实验 1)小鼠的定制: 常见的小鼠: ICR小鼠(正常),9元/只
果蝇形态观察实验报告
果蝇的形状观察和饲养管理 一、实验目的 了解果蝇的生活习惯，掌握果蝇饲养管理的方法，学习鉴定果蝇的雌雄性别，观察果蝇某些遗传性状。 二、实验原理 果蝇广泛存在于全球温带及热带气候区，在果园、菜市场等地皆可见其踪迹，目前已发现1000多种。果蝇以酵母菌为食，能发酵的水果或植物基质，都可用作果蝇的饲料。 黑腹果蝇，双翅目果蝇属。生活史短，每12天左右即可完成一个世代；饲养容易，以玉米粉等做饲料就可以生长繁殖；繁殖能力强，每只受精的雌蝇可以产卵500个左右；突变型多，突变性状多，多数是形态变异，容易观察；染色体少、个体小，是一种很好的遗传学实验材料，是一种模式生物。 1、果蝇的生活史 果蝇是完全变态昆虫，生活周期可分为4个时期：卵、幼虫、蛹和成虫。最适培养温度为25~30℃。果蝇在25℃时，从卵至蝇需10天左右。由蛹羽化成的成虫，雄性在12小时内为处女蝇，24小时后开始产卵，每天每个成虫可产50-75个卵，10天内最高产卵总股数为400-500个。 卵：白色，椭圆形，长约 0.5mm，前端背面伸出一触丝，附着在食物上。 幼虫：一龄——二龄——三龄，三龄体长4-5 mm，幼虫头尖尾钝，头上有一黑色钩状口器。 蛹：化蛹前三龄幼虫停止摄食，爬到相对干燥的瓶壁上，形成菱形的蛹，形状由淡黄、柔软逐渐硬化为深褐色。 成虫：刚羽化的果蝇虫体较肥大，体表呈半透明，颜色逐渐加深，硬化。 2、果蝇的雌雄鉴别
4、果蝇饲料的配制 果蝇是以酵母菌作为主要食料的，因此实验室内凡是能发酵的物质，都可用作果蝇的饲料，常用的饲料油玉米饲料、米粉饲料、香蕉饲料等。 三、动物与器材 黑腹果蝇品系：突变型（三隐性、黑体） 药品：乙醚、酒精、丙酸、酵母粉、琼脂、玉米粉、白糖。 培养箱、高压灭菌锅、电磁炉、解剖镜、搪瓷杯、玻棒、镊子、培养瓶、海绵塞、滤纸、酒精棉球、毛笔、麻醉瓶、白纸板。 四、实验内容 1、果蝇培养基配制 （1）清洁指管，盖上适当大小的瓶塞，置高压灭菌锅内，以121℃，1.5大气压消毒15分钟，冷却备用。 （2）按配方称取培养基各组分。先取一半水加入琼脂于电磁炉上加热溶解，再加入蔗糖煮沸。 （3）取剩余的水将玉米粉调成糊状边搅拌边加入到琼脂糖溶液中，煮沸。（4）待稍冷后加入酵母粉和丙酸，充分调匀、分装（20 ml/管）。 2、果蝇性别鉴定及形状观察 取白纸板平置于桌面，将麻醉的果蝇倒于白纸板上。于解剖镜下进行性状观察，并记录。 五、思考题及注意事项 1、通过对果蝇雌雄个体的鉴别，你认为哪几个特征在鉴别中是主要的？ 答：黑色条纹和性梳。在实体镜下即可清楚地观察到雄蝇的三条条纹（第三条较宽）和雌蝇的五条黑色条纹。肉眼可以观察到性梳为第一对附肢第二小节上的一个小黑点，若用显微镜观察则可以观察到清晰的梳状结构。 相比之下，其他几个特征就不太好观察。首先是体型，在实体镜下很难判断哪个个体体型大或小（放大倍数不同），除非将雌雄蝇一同对比看，而用肉眼基本看不出体型的区别。腹部形状也容易判断错。腹片由于没有特殊眼色，也较难观察数量差别。 2、叙述配制培养基以及果蝇观察时的注意事项。 答：(1)玉米粉一定要先用凉水拌匀后再加热，不能直接倒入加热的培养基中，否则容易聚集成团，不易溶解。配制的培养基容易出现块状，不易于果蝇的利用。 (2)酵母为活性物质，高温易失活。因此应当在培养基冷却到50℃左右时加入到培养基中，切勿将酵母粉加入到培养基中直接煮沸。 (3)将培养基倒入指瓶中时应悬空，不要把培养基沾到指瓶壁上。如不慎沾到，应用酒精棉球擦拭，擦拭过程中注意酒精不要滴到培养基上。 (4)本次观察所用果蝇为已麻醉过的果蝇，应注意如果在观察过程中果蝇醒来，要及时再麻醉，不要让其飞走。
用opencv实验形态学开运算和闭运算
用opencv实验形态学开运算和闭运算，程序代码为 #include "cv.h" #include "highgui.h" int main(int argc, char* argv[]) { //调入照片 IplImage* img = cvLoadImage("2.jpg"); if(!img) //判断图片调入是否成功 return -1; //调入图片失败则退出 //将图片缩小两倍 IplImage* img_small=cvCreateImage(cvSize(img->width/3,img->height/3),img->depth,img->n Channels); cvResize(img,img_small); //初始化结果要存到的图像指针 IplImage* result1=cvCloneImage(img_small); IplImage* result2=cvCloneImage(img_small); //分别对图像进行形态学开运算和闭运算 cvMorphologyEx(img_small,result1,NULL,NULL,CV_MOP_OPEN,1);//最后一个参数为膨胀和腐蚀次数 cvMorphologyEx(img_small,result2,NULL,NULL,CV_MOP_CLOSE,1); //创建窗口,并确定其为大小不可变类型窗口 cvNamedWindow("liuxi_open", CV_WINDOW_AUTOSIZE); cvNamedWindow("liuxi_close", CV_WINDOW_AUTOSIZE); //显示图片 cvShowImage("liuxi_open", result1); cvShowImage("liuxi_close", result2); //cvShowImage("liuxi_open", img_small); cvWaitKey(0); //等待按键 //release images cvReleaseImage(&img); cvReleaseImage(&img_small); cvReleaseImage(&result1); cvReleaseImage(&result2); //destroy windows cvDestroyWindow("liuxi_open"); cvDestroyWindow("liuxi_close"); return 0; }
分子生物学实验技术考试题库
一、名词解释 1.分配常数：又称分配系数，是指一种分析物在两种不相混合溶剂中的平衡常数。 2.多肽链的末端分析：确定多肽链的两末端可作为整条多肽链一级结构测定的标志，分为氨基端分析和羧基端分析。 3.连接酶：指能将双链DNA中一条单链上相邻两核苷酸连接成一条完整的分子的酶。 4.预杂交：在分子杂交实验之前对杂交膜上非样品区域进行封闭，用以降低探针在膜上的非特异性结合。 5.反转录PCR：是将反转录RNA与PCR结合起来建立的一种PCR技术。首先进行反转录产生cDNA,然后进行常规的PCR反应。 6.稳定表达：外源基因转染真核细胞并整合入基因组后的表达。 7.基因敲除：是指对一个结构已知但功能未知或未完全知道的基因，从分子水平上设计实验，将该基因从动物的原基因组中去除，或用其它无功能的DNA片断取代，然后从整体观察实验动物表型，推测相应基因的功能。 8.物理图谱：人类基因组的物理图是指以已知核苷酸序列的DNA片段为“路标”，以碱基对(bp，kb，Mb)作为基本测量单位(图距)的基因组图。 9.质谱图：不同质荷比的离子经质量分析器分开后，到检测器被检测并记录下来，经计算机处理后所表示出的图形。 10.侧向散射光：激光束照射细胞时，光以90度角散射的讯号，用于检测细胞内部结构属性。
11.离子交换层析：是以离子交换剂为固定相，液体为流动相的系统中进行的层析。 12.Edman降解：从多肽链游离的N末端测定氨基酸残基的序列的过程。 13.又称为限制性核酸内切酶(restriction endonuclease)：是能够特异识别双链DNA序列并进行切割的一类酶。 14.电转移：用电泳技术将凝胶中的蛋白质，DNA或RNA条带按原位转移到固体支持物，形成印迹。 15.多重PCR：是在一次反应中加入多对引物，同时扩增一份模板样品中不同序列的PCR 过程。 16.融合表达: 在表达载体的多克隆位点上连有一段融合表达标签（Tag），表达产物为融合蛋白（有分N端或者C端融合表达），方便后继的纯化步骤或者检测。 17.同源重组：发生在DNA同源序列之间，有相同或近似碱基序列的DNA分子之间的遗传交换。 18.遗传图谱又称连锁图谱(linkage map)，它是以具有遗传多态性的遗传标记为“路标”，以遗传学距离为图距的基因组图。 19.碎片离子：广义的碎片离子为由分子离子裂解产生的所有离子。 20.前向散射光：激光束照射细胞时，光以相对轴较小角度向前方散射的讯号用于检测细胞等离子的表面属性，信号强弱与细胞体积大小成正比。 21.亲和层析:利用共价连接有特异配体的层析介质分离蛋白质混合物中能特异结合配体的目的蛋白或其他分子的一种层析法。(利用分子与其配体间特殊的、可逆性的亲和结合
微生物实验报告：微生物形态观察
实验一微生物形态观察 一、实验目的 1．巩固显微镜的使用方法，重点练习油镜的使用； 2．认识细菌、放线菌和霉菌的基本形态特征和特殊结构； 3．练习手绘微生物图片。 二、实验原理 1．细菌基本形态 细菌是单细胞生物，一个细胞就是一个个体。细菌的基本形态有 3 种：球状，杆 状和螺旋状，分别称为球菌、杆菌、螺旋菌。球菌根据细胞分裂后排列方式的不同分为 单球菌、双球菌、四联球菌、八叠球菌、链球菌、葡萄球菌等。杆菌分为单杆菌、双杆 菌、链杆菌等，是细菌中种类最多的。螺旋菌分为弧菌和螺菌。 除此之外，还有一些特殊形态的细菌。 2．细菌特殊结构 细菌的特殊结构包括荚膜、鞭毛、菌毛、芽孢等。荚膜是某些细菌向细胞壁表面分泌的一层厚度不定的胶状物质，具有抗干燥、抗吞噬和附着作用。鞭毛是某些细菌表面着生的 1 至数根由细胞内伸出的细长、波曲的丝状体，具有运动功能，在菌体上的着生 位置、数目因菌种而异。菌毛（又称纤毛）是在细菌体表的比鞭毛更细、更短、直硬， 且数量较多的丝状体，与细菌吸附或性结合有关。芽孢又称内生孢子，是某些细菌生长到一定阶段，在菌体内部产生的圆形、椭圆形或圆柱形休眠体，具有极强的抗热、抗辐射、抗化学药物和抗静水压等特性。 3．真菌的结构特征 菌丝是构成真菌营养体的基本单位，是一种管状细丝。可伸长并产生许多分枝，许多分枝的菌丝相互交织在一起，就叫菌丝体。根据菌丝中是否存在隔膜可分为无隔膜菌 丝和有隔膜菌丝。为适应不同的环境条件和更有效地摄取营养满足生长发育地需要，许 多真菌的菌丝可以分化成一些特殊的形态，这些特化的形态称为菌丝变态。比如吸器、 假根、子实体。 4．放线菌的结构特征 放线菌的形态比细菌复杂些，但仍属于单细胞生物。链霉菌是典型的放线菌，其细胞呈丝状分枝，菌丝直径很小，在营养生长阶段，菌丝内无隔，故一般呈多核的细胞状 态。当其孢子落在固体基质表面并发芽后，就不断伸长、分支并以放射状向基质表面和 内层扩展，形成大量色浅、较细的具有吸收营养和排泄代谢废物功能的基内菌丝，同时在其上又不断向空间方向分化出颜色较深、直径较粗的分枝菌丝，这就是气生菌丝。不久，大部分气生菌丝成熟，分化成孢子丝，并通过横隔分裂方式，产生成串的分生孢子。 5．微生物菌落 菌落是在固体培养基上（内）以母细胞为中心的一堆肉眼可见的、有一定形态和构造等特征的子细胞集团。细菌的菌落有其自己的特征，一般呈现湿润、较光滑、较透明、较粘稠、易调取、质地均匀以及菌落正反面或边缘与中央部位的颜色一致等。不同形态、生理类型的细菌，在其菌落形态、构造等特征上也有许多明显的反映。 三、实验器材 普通光学显微镜（Nikon YS-100 ），镜油，镜头纸，擦镜液；
细菌形态结构观察实验报告精品
细菌形态结构观察实验报告精品篇 生物学实验报告 报告题目培养基的制备与灭菌 姓名刘伟 学号055656565 指导教师:xxxxxx 学习中心培养基的制备与灭菌 一、目的要求 1. 掌握微生物实验室常用玻璃器皿的清洗及包扎方法。 2. 掌握培养基的配置原则和方法。 3. 掌握高压蒸汽灭菌的操作方法和注意事项。 二、基本原理 牛肉膏蛋白胨培养基： 是一种应用最广泛和最普通的细菌基础培养基，有时又称为普通培养基。由于这种培养基中含有一般细胞生长繁殖所需要的最基本的营养物质，所以可供细菌生长繁殖之用。 高压蒸汽灭菌： 主要是通过升温使蛋白质变性从而达到杀死微生物的效果。将灭菌的物品放在一个密闭和加压的灭菌锅内，通过加热，使灭菌锅内水沸腾而产生蒸汽。待蒸汽将锅内冷空气从排气阀中趋尽，关闭排气阀继续加热。此时蒸汽不溢出，压力增大，沸点升高，获得高于100℃的温度导致菌体蛋白凝固变性，而达到灭菌的目的。 三、实验材料 1. 药品：牛肉膏、蛋白胨、nacl、琼脂、1mol/l的naoh和hcl溶液。 2. 仪器及玻璃器皿：天平、高压蒸汽灭菌锅、移液管、试管、烧杯、量筒、三 角瓶、培养皿、玻璃漏斗等。 3. 其他物品：药匙、称量纸、ph试纸、记号笔、棉花等。 四、操作步骤 （一）玻璃器皿的洗涤和包装 1．玻璃器皿的洗涤 玻璃器皿在使用前必须洗刷干净。将三角瓶、试管、培养皿、量筒等浸入含有洗涤剂的水中．用毛刷刷洗，然后用自来水及蒸馏水冲净。移液管先用含有洗涤剂的水浸泡，再用自来水及蒸馏水冲洗。洗刷干净的玻璃器皿置于烘箱中烘干后备用。 2．灭菌前玻璃器皿的包装 （1）培养皿的包扎：培养皿由一盖一底组成一套，可用报纸将几套培养皿包 成一包，或者将几套培养皿直接置于特制的铁皮圆筒内，加盖灭菌。包装后的培养皿须经灭菌之后才能使用。 （2）移液管的包扎：在移液管的上端塞入一小段棉花(勿用脱脂棉)，它的作 用是避免外界及口中杂菌进入管内，并防止菌液等吸入口中。塞入此小段棉花应距管口约0.5cm左右，棉花自身长度约1~1.5cm。塞棉花时．可用一外围拉直的曲别针、将少许棉花塞入管口内。棉花要塞得松紧适宜，吹时以能通气而又不使棉花滑下为准。 先将报纸裁成宽约5cm左右的长纸条，然后将已塞好棉花的移液管尖端放在长条报纸的一端，约成45℃角，折叠纸条包住尖端，用左手握住移液管身，有手将移液管压紧．在桌面
数字图像处理实验报告实验三
中南大学 数字图像处理实验报告实验三数学形态学及其应用
实验三 数学形态学及其应用 一．实验目的 1.了解二值形态学的基本运算 2.掌握基本形态学运算的实现 3.了解形态操作的应用 二．实验基本原理 腐蚀和膨胀是数学形态学最基本的变换，数学形态学的应用几乎覆盖了图像处理的所有领域，给出利用数学形态学对二值图像处理的一些运算。 膨胀就是把连接成分的边界扩大一层的处理。而收缩则是把连接成分的边界点去掉从而缩小一层的处理。 二值形态学 I(x,y), T(i,j)为 0/1图像Θ 腐蚀：[]),(&),(),)((),(0,j i T j y i x I AND y x T I y x E m j i ++=Θ== 膨胀：[]),(&),(),)((),(0 ,j i T j y i x I OR y x T I y x D m j i ++=⊕== 灰度形态学T(i,j)可取10以外的值 腐蚀： []),(),(min ),)((),(1 ,0j i T j y i x I y x T I y x E m j i -++=Θ=-≤≤ 膨胀： []),(),(max ),)((),(1 ,0j i T j y i x I y x T I y x D m j i +++=⊕=-≤≤ 1.腐蚀Erosion: {}x B x B X x ?=Θ: 1B 删两边 2B 删右上 图5-1 剥去一层（皮） 2.膨胀Dilation: {}X B x B X x ↑⊕:＝ 1B 补两边 2B 补左下 图5-2 添上一层（漆） 3.开运算open ：
B B X ⊕Θ=)(X B 4.闭close ：∨ Θ⊕=B B X X B )( 5.HMT(Hit-Miss Transform:击中——击不中变换) 条件严格的模板匹配 ),(21T T T =模板由两部分组成。1T ：物体，2T ：背景。 {} C x x i X T X T X T X ??=?21, 图5-3 击不中变换示意图 性质： （1）φ=2T 时，1T X T X Θ=? （2）)()()(21T X T X T X C Θ?Θ=? C T X T X )()(21Θ?Θ= )/()(21T X T X ΘΘ= 6.细化/粗化 (1)细化（Thin ） C T X X T X XoT )(/??=?= 去掉满足匹配条件的点。 图5-4 细化示意图 系统细化{}n B oB XoB T Xo ))(((21=， i B 是1-i B 旋转的结果（90?，180?，270?）共8种情况 适于细化的结构元素 1111000d d I = d d d L 10110 0= (2)粗化（Thick ） )(T X X T X ??=? 用(){}0,01=T (){}0,12=T 时，X X X T X =?=? X 21 1 1 2 3 T ? XoT X ? X X ?T X ΘT T ⊕
放线菌形态的观察实验报告
山东大学实验报告2017年11月13日 ________________________________________ _________________________ 科目：微生物学实验题目：放线菌的形态观察姓名：丁志康 一、目的要求 ? 1.学习并初步掌握观察放线菌形态的基本方法。 ? 2.初步了解放线菌的形态特征。 二、基本原理 放线菌是指能形成分枝丝状体或菌丝体的一类革兰氏阳性菌。常见放线菌大多能形成菌丝体，紧贴培养基表面或深入培养基内生长的基内菌丝（简称“基丝”），基丝生长到一定阶段还能像空气中生长出气生菌丝（简称“气丝”），并进一步分化产生孢子丝及孢子。 有的放线菌只产生基丝而无气丝。在显微镜下直接观察时，气丝在上层、基丝在下层，气丝色暗，基丝较透明。孢子丝依种类的不同，有直、波曲、各种螺旋形或轮生。 在油镜下观察，放线菌的孢子有球形、椭圆、杆状或柱状。能否产生菌丝体及由菌丝体分化产生的各种形态特征是放线菌分类鉴定的重要依据。 为了观察放线菌的形态特征，人们设计了各种培养和观察方法，这些方法的主要目的是为了尽可能保持住放线菌自然生长状态下的形态特征。本试验介绍其中几种常用方法。 1.插片法：将放线菌接种在琼脂平板上，插上灭菌盖玻片后培养，使放线菌菌丝沿着培养基表面与盖玻片的交接处生长而附着在盖玻片上。观察时，轻轻取出盖玻片，置于载玻片上直接镜检。这种方法可观察到放线菌自然生长状态下的特征，而且便于观察不同生长期的形态。 2.玻璃纸法：玻璃纸是一种透明的半透膜，将灭菌的玻璃纸覆盖在琼脂平板表面，然后将放线菌接种于玻璃纸上，经培养，放线菌在玻璃纸上生长形成菌苔。观察时，揭下玻璃纸，固定在载玻片上直接镜检。这种方法既能保持放线菌的自然生长状态，也便于观察不同生长期的形态特征。 3.印片法：将要观察的放线菌的菌落或菌苔，先印在载玻片上，经染色后观察。这种方法主要用于观察孢子丝的形态、孢子的排列及其形状等。方法简便、但形态特征可能有所改变。 （*本次试验采用插片法） 三、器材 1、菌种：青色链霉菌，弗氏链霉菌。 2、培养基：高氏I号培养基。 3、仪器及其他用具：经灭菌的平皿、玻璃纸、盖玻片、玻璃涂棒，以及载玻片，接种环，接种铲， 石碳酸复红染液，显微镜等。
形态学实验报告
小鼠腹水型肝癌淋巴道转移实验 摘要：【目的】1通过可移植性小鼠腹水肝癌淋巴道转移实验，从感性上认识肿瘤侵袭与淋巴道转移的生物学特性，了解肿瘤动物实验模型建立的过程及意义。2进一步了解动物尸体解剖、组织取材、染色的过程。3强化科研思维的培养及实验技能的训练。【方法】获取小鼠腹水型肝癌淋巴道高转移细胞株(Hca—F)后经615小鼠右腋皮下皮下接种10只，固定，切片，染色，镜下观察转移组织及淋巴结转移的分布与转移率。【结果】小鼠存活率70%，小鼠肝癌腹水型细胞株Hca-F淋巴结转移率100％分布于颈部淋巴结，腹股沟淋巴结，锁骨上淋巴结。 关键词：淋巴道转移肝癌Hca-F 小鼠 肝癌高复发转移率已成为制约其提高预后的瓶颈，因此研究肝癌转移机制具有重要意义鉴别肿瘤细胞不同转移能力的特征，是肿瘤诊断、治疗和预后判定的首要问题．淋巴道转移是上皮来源的恶性肿瘤的主要转移途径，临床上已将区域性淋巴结转移视为影响恶性肿瘤患者预后的最重要因素。1990年大连医学院病理学教研室从小鼠腹水型肝癌淋巴道转移细胞系Hca—F25／L中分离出具有淋巴道不同转移能力的两株瘤细胞，其中高转移克隆株Hca—F(16A．3一F_3)淋巴结转移率为78．6％一89．4％被广泛应用于肿瘤淋巴道转移机制研究及药物筛选。对深入研究肝癌转移和复发机制，寻求有效的抗转移和复发的治疗措施具有重要现实意义． 1材料与方法： 1.1实验材料： 1.1.1细胞系：高转移力小鼠腹水型肝癌细胞，由大连医科大学病理教研室建株并保存。1.1.2实验动物：近交系615小鼠，雌雄兼用，6—8周龄，体重18—22g，由大连医科大学实验动物中心提供。 1.1.3主要仪器及器皿：搪瓷盆、温度计、离心管、1ml注射器、手术刀、眼科手术剪、眼科手术镊、乳胶手套、生理盐水、1%来苏儿溶液、75%酒精棉、10%甲醛固定液等。 1.2 研究方法细胞系获取。从液氮罐中取出高转移力小鼠腹水型肝癌细胞塑料冻存管，立即放入40度的温水中，一分钟内使冻存液全部融化，拉力机送入无菌室中。取出细胞悬液放入离心管中，有生理盐水洗涤2次，离心，弃上清，在加1ml生理盐水吹打均匀。向小鼠腹腔内接种0.2mlHCa-F细胞悬液，于第6天无菌条件取腹水。 1.3 615小鼠脚垫接种肿瘤细胞。取615小鼠癌性腹水0.1ml，接种于615小鼠脚垫上。定期观察肿瘤生长及淋巴结肿大情况。四周后处死全部小鼠，取瘤体及相关淋巴结，同时观察肺、肝、肾等器官。将上述组织固定于10%甲醛固定液中，石蜡包埋制片，HE染色，显微镜检查。4.组织取材。将皮下瘤体、淋巴结、肺、肝、肾选取病变部位，切成厚2—3mm 的小于2cm×1cm大小的组织块，10%中性甲醛固定。小块组织一般固定数小时，较大标本需固定24—48小时。经冲洗（用递升浓度的酒精等）、透明（用二甲苯等）、浸蜡（用石蜡），然后用石蜡将组织包埋成蜡块，再经切片机切片和染色制成切片。一般常规作苏木精-伊红染色。 1.4 组织取材。将皮下瘤体、淋巴结、肺、肝、肾选取病变部位，切成厚2—3mm的小于2cm×1cm大小的组织块，10%中性甲醛固定。小块组织一般固定数小时，较大标本需固定24—48小时。经冲洗（用递升浓度的酒精等）、透明（用二甲苯等）、浸蜡（用石蜡），然后用石蜡将组织包埋成蜡块，再经切片机切片和染色制成切片。一般常规作苏木精-伊红染色。 1.5 切片脱色。石蜡切片法、HE染色法。脱水程序及时间：组织固定，冲洗，然后：1.5.1脱水。以下列顺序进行：60%酒精30分钟→80%酒精1—2小时→95%酒精2—4小时或
微生物形态观察实验报告
实验报告课程名称：生命科学趣味实验 实验名称：微生物形态观察 指导教师： 一、实验目的： 1．掌握普通光学显微镜的原理、结构、各部分的功能和使用方法。 2．了解酵母菌、霉菌的个体形态特征。 二、实验原理： 显微镜成像原理：目镜、物镜各自相当于一个凸透镜，被检标本置于聚光器与物镜之间，即物镜下方1～2倍焦距之间，物镜可使标本在物镜的上方形成一个倒立放大实像（倒像），该实像正好位于目镜的下焦点（焦平面）之内，目镜进一步将它放大成一个虚像，通过调焦可使虚像落在眼睛的明视距离处。 三、实验仪器、材料 酵母菌涂片、霉菌涂片。 奥林巴斯显微镜、擦镜纸等。 四、实验方法： 1 显微镜安置 取显微镜时一手握住镜臂，一手托住底座，使显微镜保持直立、平稳，置显微镜于平整实验台上，镜座距实验台边缘约3～4 cm，接通电源。 注意：显微镜移动时切忌用单手拎提。 2 选择物镜 将低倍物镜放入光路。 3 调整光强 打开显微镜主电源，调整照明度。通过亮度调整旋钮来改变电压大小从而调整显微镜亮度强弱。 4 调整聚光器位置和孔径光阑 在孔径光阑环上刻有物镜倍率（10倍，40倍），观察时将其与使用物镜相对应倍率放到正面。 5 放置标本 调粗调旋钮使载物台下降，向外拉开机械式载物台样本夹自前向后将标本切片放入平台，标本放稳后，再将标本夹轻轻放回原位；通过垂直旋转移动杆和水平旋转移动杆来上下和左右移动标本。
6 聚焦 ① 对焦要领为：从侧面看，转动粗调旋钮，使物镜尽可能接近标本；一边看目镜，一边调粗调旋钮，使载物台下降；看到标本后，再用细调旋钮正确对焦。 ② 调整瞳距：一边看目镜，一边移动双目镜筒，让左右视野一致。标识●的位置表示瞳距。 ③ 调整屈光度数：以右眼看右侧目镜，旋转粗、细调旋钮对好焦距；以左眼看左侧目镜，旋转屈光度调整环，对好焦距。 ④ 目镜眼罩使用方法：戴眼镜时候，将眼罩折叠，可防止眼镜和目镜接触所造成擦痕；不戴眼镜时候，将折叠眼罩向外拉长，可防止目镜和眼睛之间射入不必要光线，利于观察。 7 观察 在低倍镜找到合适目的菌将其移到视野中央。 8 高倍镜下观察 ① 转换高倍镜：眼睛从侧面注视物镜，用手转动转换器，换高倍镜。 ② 调焦：眼睛向目镜内观察，同时微微上下转动细调旋钮，直至视野内看到清晰物像为止。一般情况下，当物像在一种物镜中清晰聚焦，转动物镜转换器将其它物镜转到工作位置进行观察时，物像将保持基本的准焦状态，称为物镜同焦，利用物镜同焦，可以保证在使用高倍镜时仅用细调旋钮即可对物像清晰聚焦，从而避免使用粗调旋钮时可能误操作损坏镜头或载玻片。 9 绘图 10 显微镜用毕后处理 （1）下降载物台，取下标本。 (2) 用擦镜纸清洁物镜及目镜； (3) 将各部分还原：载物台下降到最低位置；聚光器下降到最低位置；物镜镜头呈∧型，使物镜处于非光路位置；关好电源，将显微镜主电源开关拨到电压值为最小状态，然后断开电源。 五、实验结果： 10× 霉菌涂片 六、实验讨论： 可写实验体会。
实验五 图像形态学处理
实验五 图像形态学处理 一、实验目的： 1、进一步了解MATLAB 关于图像处理的相关指令。 2、了解图像腐蚀、膨胀、开启、闭合及细化的目的及意义，加深对其的感性认识，巩固所学理论知识。 3、能够编程实现图像的各种形态学处理。 4、观察并比较图像处理结果。 二、实验内容： 图像腐蚀、图像膨胀、开启、闭合、细化 三、实验仪器 PC 一台，MATLAB 软件。 四、实验报告要求： 1、写出程序 2、附上处理前后的图像 3、写出对处理前后图像的分析（即：说明图像的变化） 有关结构元素说明： se1 = strel('square',11) % 结构元素为边长11的正方形 se2 = strel('line',10,45) % 倾角为45度长为10的线性结构 se3 = strel('disk',15) % 半径为15的圆盘 se4 = strel('ball',15,5) %半径为15高为5的球形结构 一、图像的膨胀运算（在右图中任选一幅图像处理） 函数说明： se=strel('ball',8,8); %设定直径为8的球形结构元素 I2=imdilate(I,se); %膨胀函数，I ：原图像，se ：结构元素，I2：输出图像 %膨胀程序 I=imread('yuan.bmp '); subplot(121);imshow(I); title('原图像'); se=strel('ball',8,8); I2=imdilate(I,se); subplot(122);imshow(I2); title('膨胀后图像'); 二、任选题（1）中一幅图像根据膨胀程序编写腐蚀程序，实现腐蚀处 理，保存处理前后图像（图像要标明'title'），并分析处理结果。 kong.bmp yuan.bmp
【免费下载】 形态学实验技术
1.脱水:所谓脱水就是利用脱水剂将组织内的水分置换出来，以利于透明剂和石蜡或者火胶棉的渗入，这一过程称为脱水。2 透明：为了使石蜡浸入到组织块内，必须经过一种既能与脱水剂混合，又能与石蜡相溶的媒介物质，这个过程称透明。在制片过程中有两次透明，第一次是脱水后组织块的透明（目的是便于透蜡包埋），第二次是指染色后切片的透明（目的是有利于光线通过，便于显微镜观察）。 3.特殊染色：为了显示与确定组织或细胞中正常结构或病理过程中出现的异常物质、病变及病原体等，需要分别选用相应的显示这些成份的染色方法进行染色，包括胶原纤维染色（Masson 等）、网状纤维染色、弹力纤维染色、肌肉组织染色（磷钨酸）、苏木素、脂肪染色（苏丹III ）、糖原染色、粘液染色等。4、AB-PAS ：阿利辛蓝过碘酸Schiff 染色法，特殊染色的一种，其结果是中性粘液物质呈红色，酸性粘液物质呈蓝色，中性和酸性粘液的混合物呈紫红色.5、HE 染色：在组织制片技术中，常规制片最广泛应用的是苏木素—伊红染色，又称HE 染色。染色方法: a.切片脱蜡至水，入苏木素液5分钟b.水洗，分化，蓝化。c.入伊红液数秒，水洗，脱水透明封固 d.结果：细胞核蓝色，其他红色。 6、分化：在退行性染色中，需要某些特定的溶液将附着组织细胞上多余的染色剂脱去，从而使目的物与周围组织形成鲜明对比，同时使目的物本身的色泽也深浅适宜。这种选择的去除多于染色剂的过程，称为分化。 7、原位杂交：是核酸分子杂交的一部分，是将组织化学与分子生物学技术相结合来检测和定位核酸的技术。它是用标记了的已知序列的核苷酸、管路敷设技术通过管线敷设技术，不仅可以解决吊顶层配置不规范问题，而且可保障各类管路习题到位。在管路敷设过程中，要加强看护关于管路高中资料试卷连接管口处理高中资料试卷弯扁度固定盒位置保护层防腐跨接地线弯曲半径标高等，要求技术交底。管线敷设技术中包含线槽、管架等多项方式，为解决高中语文电气课件中管壁薄、接口不严等问题，合理利用管线敷设技术。线缆敷设原则：在分线盒处，当不同电压回路交叉时，应采用金属隔板进行隔开处理；同一线槽内，强电回路须同时切断习题电源，线缆敷设完毕，要进行检查和检测处理。、电气课件中调试对全部高中资料试卷电气设备，在安装过程中以及安装结束后进行高中资料试卷调整试验；通电检查所有设备高中资料试卷相互作用与相互关系，根据生产工艺高中资料试卷要求，对电气设备进行空载与带负荷下高中资料试卷调控试验；对设备进行调整使其在正常工况下与过度工作下都可以正常工作；对于继电保护进行整核对定值，审核与校对图纸，编写复杂设备与装置高中资料试卷调试方案，编写重要设备高中资料试卷试验方案以及系统启动方案；对整套启动过程中高中资料试卷电气设备进行调试工作并且进行过关运行高中资料试卷技术指导。对于调试过程中高中资料试卷技术问题，作为调试人员，需要在事前掌握图纸资料、设备制造厂家出具高中资料试卷试验报告与相关技术资料，并且了解现场设备高中资料试卷布置情况与有关高中资料试卷电气系统接线等情况，然后根据规范与规程规定，制定设备调试高中资料试卷方案。、电气设备调试高中资料试卷技术电力保护装置调试技术，电力保护高中资料试卷配置技术是指机组在进行继电保护高中资料试卷总体配置时，需要在最大限度内来确保机组高中资料试卷安全，并且尽可能地缩小故障高中资料试卷破坏范围，或者对某些异常高中资料试卷工况进行自动处理，尤其要避免错误高中资料试卷保护装置动作，并且拒绝动作，来避免不必要高中资料试卷突然停机。因此，电力高中资料试卷保护装置调试技术，要求电力保护装置做到准确灵活。对于差动保护装置高中资料试卷调试技术是指发电机一变压器组在发生内部故障时，需要进行外部电源高中资料试卷切除从而采用高中资料试卷主要保护装置。
实验六 形态学运算实验报告
实验六形态学运算 实验结果： 方形膨胀结构 I=imread('Plane2.jpg'); level = graythresh(I); %得到合适的阈值 bw = im2bw(I,level); %二值化 SE = strel('square',3); %设置膨胀结构元素 BW1 = imdilate(bw,SE); %膨胀 SE1 = strel('arbitrary',eye(5)); %设置腐蚀结构元素 BW2 = imerode(bw,SE1); %腐蚀 BW3 = bwmorph(bw, 'open'); %开运算 BW4 = bwmorph(bw, 'close'); %闭运算 subplot(3,2,1),imshow(I);title('original'); subplot(3,2,2),imshow(bw);title('2bw'); subplot(3,2,3),imshow(BW1);title('dilate'); subplot(3,2,4),imshow(BW2);title('erode'); subplot(3,2,5),imshow(BW3);title('open'); subplot(3,2,6),imshow(BW4);title('close'); original2bw dilate erode open close 将膨胀结构元素改为SE = strel('disk',7);
圆形膨胀结构 original2bw dilate erode open close 将膨胀结构元素改为SE = strel('diamond',3); 十字形膨胀结构 original2bw dilate erode open close
分子生物学实验技术实验内容
2006 年《分子生物学实验技术》实验内容 RT-PCR （一）总 RNA的提取 实验安排：每两人抽提一管。为了使操作同步以节省时间，各组样品请一起离心。 操作步骤： TM（苯冰预冷的900μlLS -Biotragents液体样品加入 1.5ml Ep管中，再加入1、将100μ l 酚和异硫氰酸胍的混合物）。 2、将样品剧烈混合后，在室温放置5min。 3、加入200μl 氯仿，颠倒Ep 管混和两次，并剧烈振荡混和10s。 4、在4℃条件下，以10000×g 离心15min。 5、将上层水相转移到一个新的Ep 管中，加入等体积的异丙醇（Isopropanol）并混匀，然后在4℃放置至少10min。 6、在4℃条件下，以10000×g离心15min 后，小心并尽可能地去除全部上清夜。 7、用1ml 75%乙醇洗涤RNA 沉淀和管壁。 8、将RNA 沉淀进行干燥（不能完全干燥）处理后，用10μl 无RNase污染的水（RNase- Free Water）将RNA 溶解并于-20℃保存。 注意事项： 1、所有的玻璃器皿均应在使用前于180℃的高温下干烤6hr 或更长时间。 2、所用的塑料材料，如吸头、离心管等需用0.1% DEPC 水浸泡过夜。 3、配制的溶液应尽可能用0.1% DEPC，在37℃处理12hr 以上。然后用高压灭 菌除去残留的DEPC。不能高压灭菌的试剂，应当用DEPC 处理过的无菌双蒸水 配制，然后经0.22μm 滤膜过滤除菌。 4、操作人员需在超净工作台上操作，并戴一次性口罩、手套，实验过程中手套要勤换。 二）反转录 实验安排： 每人做一管反应体系（20μ l）：按下列顺序加样 μl4 5× Buffer
形态学综合实验体会
形态学综合实验的学习体会 年级 11级学号 19 姓名宋智敏得分 本学期我们学习了形态学综合实验这门课程，我个人得到了不少的收获，一方面提高了实验操作能力及与小组同学间的合作能力。另一方面也加深了我对之前学习的理论课程上各门课知识点的理解。 在建立血吸虫病动物模型的实验中，我再次熟悉了血吸虫的基本知识，如血吸虫的形态和生活史等，并掌握建立家兔和小鼠血吸虫病模型的方法。让我印象最深的是小鼠眼球取血。眼球取血时，捉拿小鼠的方法，要先用一只手拉住小鼠的尾巴，再用另一只手抓，动作要快，不能犹豫，最好让小鼠的眼球凸出来。取血时更要快准狠。我们组在做实验固定小鼠时小鼠死亡，推测应该是小鼠太小或捆绑过紧所致，后来做了第二只小鼠才顺利完成了实验。 在微生物学实验中，我们做了血液中化脓性球菌的分离培养鉴定，了解了血液标本中常见病原菌的检测与检验程序。用接种环在血平板上接种待测菌的操作我不太熟练，分区划线在第三区时接种环与第二区接触次数太少导致最后没有培养处单个菌落。其他实验过程较为顺利。 在动物组织切片的过程中，第一次接触了石蜡切片和HE染色标本制作方法，为了将组织变硬，需要将切下来的组织用石蜡浸泡，这样有利于切片。但是在处死家兔的过程中，我们组进行的不是很顺利，没有正确的将注射器内的空气打入家兔的耳缘静脉耽误了一些时间，在切片时，手摇切片机是一个技术活，我尝试了三次，结构切出来的
切片都是卷的，用毛笔将其挑出来放在温水中铺平就更技术了，一直没能掌握正确的方法，下次有机会要多加练习。 在血涂片的制作过程中，是用一次性采血针自己扎自己的手指取血，我是让别人帮忙扎的，之后手指青了好几天。要扎手指的侧面，那里毛细血管比较丰富，用玻璃板推血液时只能推一次，力度要均匀，角度要找好，争取把血细胞推分散开，最后观察切片事发现自己推的还是蛮好的。也第一次看到了自己的血细胞，感觉很有成就感。 在肿瘤的免疫组化实验中，我们用显微镜观察到了肿瘤抗原膜定位、核定位和质定位的模型，我们组的切片为细胞膜定位，镜下可见细胞膜铺路石子样。整个定位操作过程中每一步都要严格按照时间要求并按照规定用适当冲洗液洗涤，不然最后的定位会很模糊，甚至分不清楚。 给细胞换液的实验我们也是第一次做，熟悉了给细胞换液的方法，虽然操作很生疏，但是毕竟也算新学到了许多以前没接触过的知识，PCR聚合酶反应由于我之前跟着导师做过所以觉得很简单。 通过这次形态学综合实验的学习，我们以小组的形式参与到实验中，掌握一般技术操作，与同组的同学协调合作，既培养了我们团队合作精神，又培养了我们动手共同完成基本实验的能力，效果很好，希望以后还会有这样的机会第；我们在实验中学会观察问题和提出问题，学会做实验记录和分析实验结果，与老师和同学互动讨论，通过这种问题讨论的形式，加深了我们对实验的理解和各个知识点的内在联系。做完实验之后，我们能通过讨论独立完成实验报告通过动手实
果蝇形态观察实验报告
一、实验目的 了解果蝇的生活习惯，掌握果蝇饲养管理的方法，学习鉴定果蝇的雌雄性别，观察果蝇某些遗传性状。 二、实验原理 果蝇广泛存在于全球温带及热带气候区，在果园、菜市场等地皆可见其踪迹，目前已发现1000多种。果蝇以酵母菌为食，能发酵的水果或植物基质，都可用作果蝇的饲料。 黑腹果蝇，双翅目果蝇属。生活史短，每12天左右即可完成一个世代；饲养容易，以玉米粉等做饲料就可以生长繁殖；繁殖能力强，每只受精的雌蝇可以产卵500个左右；突变型多，突变性状多，多数是形态变异，容易观察；染色体少、个体小，是一种很好的遗传学实验材料，是一种模式生物。 1、果蝇的生活史 果蝇是完全变态昆虫，生活周期可分为4个时期：卵、幼虫、蛹和成虫。最适培养温度为25~30℃。果蝇在25℃时，从卵至蝇需10天左右。由蛹羽化成的成虫，雄性在12小时内为处女蝇，24小时后开始产卵，每天每个成虫可产50-75个卵，10天内最高产卵总股数为400-500个。 卵：白色，椭圆形，长约，前端背面伸出一触丝，附着在食物上。 幼虫：一龄——二龄——三龄，三龄体长4-5 mm，幼虫头尖尾钝，头上有一黑色钩状口器。 蛹：化蛹前三龄幼虫停止摄食，爬到相对干燥的瓶壁上，形成菱形的蛹，形状由淡黄、柔软逐渐硬化为深褐色。 成虫：刚羽化的果蝇虫体较肥大，体表呈半透明，颜色逐渐加深，硬化。 2、果蝇的雌雄鉴别 果蝇是以酵母菌作为主要食料的，因此实验室内凡是能发酵的物质，都可用作果蝇的饲料，常用的饲料油玉米饲料、米粉饲料、香蕉饲料等。
三、动物与器材 黑腹果蝇品系：突变型（三隐性、黑体） 药品：乙醚、酒精、丙酸、酵母粉、琼脂、玉米粉、白糖。 培养箱、高压灭菌锅、电磁炉、解剖镜、搪瓷杯、玻棒、镊子、培养瓶、海绵塞、滤纸、酒精棉球、毛笔、麻醉瓶、白纸板。 四、实验内容 1、果蝇培养基配制 （1）清洁指管，盖上适当大小的瓶塞，置高压灭菌锅内，以121℃，大气压消毒15分钟，冷却备用。 （2）按配方称取培养基各组分。先取一半水加入琼脂于电磁炉上加热溶解，再加入蔗糖煮沸。 （3）取剩余的水将玉米粉调成糊状边搅拌边加入到琼脂糖溶液中，煮沸。（4）待稍冷后加入酵母粉和丙酸，充分调匀、分装（20 ml/管）。 2、果蝇性别鉴定及形状观察 取白纸板平置于桌面，将麻醉的果蝇倒于白纸板上。于解剖镜下进行性状观察，并记录。 五、思考题及注意事项 1、通过对果蝇雌雄个体的鉴别，你认为哪几个特征在鉴别中是主要的？ 答：黑色条纹和性梳。在实体镜下即可清楚地观察到雄蝇的三条条纹（第三条较宽）和雌蝇的五条黑色条纹。肉眼可以观察到性梳为第一对附肢第二小节上的一个小黑点，若用显微镜观察则可以观察到清晰的梳状结构。 相比之下，其他几个特征就不太好观察。首先是体型，在实体镜下很难判断哪个个体体型大或小（放大倍数不同），除非将雌雄蝇一同对比看，而用肉眼基本看不出体型的区别。腹部形状也容易判断错。腹片由于没有特殊眼色，也较难观察数量差别。 2、叙述配制培养基以及果蝇观察时的注意事项。 答：(1)玉米粉一定要先用凉水拌匀后再加热，不能直接倒入加热的培养基中，否则容易聚集成团，不易溶解。配制的培养基容易出现块状，不易于果蝇的利用。 (2)酵母为活性物质，高温易失活。因此应当在培养基冷却到50℃左右时加入到培养基中，切勿将酵母粉加入到培养基中直接煮沸。 (3)将培养基倒入指瓶中时应悬空，不要把培养基沾到指瓶壁上。如不慎沾到，应用酒精棉球擦拭，擦拭过程中注意酒精不要滴到培养基上。 (4)本次观察所用果蝇为已麻醉过的果蝇，应注意如果在观察过程中果蝇醒来，要及时再麻醉，不要让其飞走。 六、实验结果 1、三隐形个体的观察