尼罗罗非鱼两个ERβ基因敲除系的建立及其功能解析

目录

摘要.................................................................................................................................... I

ABSTRACT .................................................................................................................... I II

1. 文献综述 (1)

1.1脊椎动物性别决定和分化研究进展 (1)

1.1.1脊椎动物遗传性别决定 (1)

1.1.2脊椎动物环境性别决定 (1)

1.1.3脊椎动物性别分化 (3)

1.2 雌激素在性别决定、分化与卵巢维持方面的作用 (4)

1.2.1雌激素的生物合成 (4)

1.2.2雌激素在性别决定和分化中的作用 (4)

1.2.3雌激素在卵巢维持中的作用 (5)

1.3雌激素受体研究进展 (6)

1.3.1 雌激素受体的结构与功能 (6)

1.3.2 雌激素受体的作用机制 (6)

1.3.3 鱼类雌激素受体研究进展 (8)

1.3.4 雌激素受体与配体的亲和力及转录激活作用 (10)

1.4 科学问题的提出和本研究的目的意义 (11)

2. 罗非鱼ER体外转录激活作用检测 (13)

2.1 引言 (13)

2.2 材料、仪器和方法 (14)

2.2.1 菌种 (14)

2.2.2 试剂与仪器 (14)

2.2.3 方法 (14)

2.3结果与分析 (20)

2.3.1 ER氨基酸序列比对 (20)

2.3.2基因结构分析 (21)

2.3.3ER-LBD PCR扩增片段 (22)

2.3.4 重组质粒鉴定 (23)

2.3.5 测序鉴定 (24)

2.3.6 报告基因系统检测雌激素对ER的激活作用 (24)

2.3.7 GAL4系统检测雌激素及激动剂对ER的激活作用 (25)

2.4 讨论 (28)

3.尼罗罗非鱼ERβ基因敲除系的建立及其功能解析 (31)

3.1 引言 (31)

3.2 材料和方法 (32)

3.2.1 实验动物 (32)

3.2.2 主要试剂和载体 (32)

3.2.3 方法 (32)

3.3 结果与分析 (35)

3.3.1 ERβ在不同发育时期性腺中表达模式 (35)

3.3.2 CRISPR/Cas9成功敲除罗非鱼ERβ基因 (37)

3.3.3ERβ基因敲除F1的建立及筛选 (38)

3.3.5 ERβ突变对卵巢发育的影响 (45)

3.3.6 ERβ纯合敲除对罗非鱼性腺发育的影响 (47)

结论 (53)

展望 (55)

参考文献 (57)

致谢 (71)

在读期间发表论文情况 (72)

在读期间参与科研情况 (72)