FISH检测乳腺癌Her2基因状态
FISH检测乳腺癌Her2基因状态
什么是FISH：
FISH技术是以直接标记或间接标记的DNA探针与靶组织或细胞内的DNA同源序列进行杂交，通过在含有特异滤光片的荧光显微镜下观察多彩信号，来检测标本中DNA（或基因）或染色体变化的一种分子细胞遗传学技术。
什么是Her2：
是人类表皮生长因子受体2基因，位于17号染色体17q11.2-21，编码一个分子量为185kD的跨膜糖蛋白。Her2受体的过度表达见于20%的浸润性乳腺癌和60%的原位导管癌（DCIS），也见于其它肿瘤，如膀胱癌、结直肠癌、胃癌和非小细胞肺癌等。Her2受体的过度表达在细胞向肿瘤转化和肿瘤发生中起着关键性作用。
Her2阳性在治疗上的意义：
预测对含蒽环类治疗方案的敏感性；
预测对紫杉类治疗的敏感性；
预测激素治疗的耐药性；
预测对CMF（环磷酰胺、氨甲喋呤、5-氟尿嘧啶）治疗方案的耐药；
赫赛汀（一种抗Her2的单克隆抗体，针对Her2阳性的乳腺癌患者的癌基因靶向治疗药物）的治疗指征。
为了减少Her2假阳性和假阴性的结果，评估Her2状态必须准确，这样可以既避免不必要的资源浪费，也可避免贻误延长患者生命的有效的治疗时机。
FISH检测Her2状态的指征：
免疫组化结果为2+ 由于某些原因导致免疫组化结果不易判断在使用相关靶向药物之前应该确定Her2状态
可以先做免疫组化，然后根据结果再做FISH，也可以直接做FISH。
ISH检测的优点和缺点：
可以做回顾性诊断：由于DNA稳定性比较好，多年存档的蜡块也可以得到很好的分析结果；
2）准确性高：DNA不易受到各种因素的影响，同时实验中设立了内对照（为绿色信号的17号染色体着丝粒探针），另外，结果判断是客观的（免疫组化有主观因素），因而准确性非常高。
3）费用高、操作复杂：需要昂贵的设备、试剂与耗材，操作人员要经过严格的相关技术培训。
下面是GeneTest采用FISH方法准确检测Her2基因状态的图片。
两个红色信号是her2基因（位于17q11.2-12），两个绿色信号是作为内对照的17号染色体着丝粒。
标本要求：
含浸润癌的石蜡块
若为邮寄，请将蜡块放在含有衬垫的密封包装带中
处理标本要求：
组织标本用10%中性福尔马林缓冲液固定固定时间24—48小时
病理科现拟开展如下检查：
应用FISH技术检测Her-2基因扩增情况（用于乳腺癌）；
应用FISH技术检测EGFR受体扩增情况（用于肺癌、肠癌、胰腺癌等）；
应用FISH技术检测c-myc基因（用于前列腺癌）；
应用FISH技术检测3、7、17号染色体的非整倍性及9p21位点的缺失（用于膀胱癌）；
应用FISH技术检测Top 2A基因（用于蒽环类药物治疗的指导性标记物）；
应用PCR技术检测K-ras基因12、13、61外显子突变情况（用于结直肠癌）；
应用FISH技术用于肉瘤检测（融合基因EWSR1；SYT；FUS；CHOP；FKHR等）；
应用FISH技术检测MYC-N/CEP2检测（用于神经胶质瘤）；
应用FISH技术检测黑色素瘤、宫颈癌、淋巴瘤等相关基因；
应用FISH技术检测p16、p53；pTEN等。
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乳腺癌21基因检测,告别乳腺癌从这里出发
乳腺癌21基因检测 乳腺癌21基因检测是对21个与乳腺癌细胞增殖、侵袭、Her-2、激素等相关的基因进行定量并进行复发评分，为乳腺癌治疗的选择、预后判断提供依据。此外，21基因检测技术能够对肿瘤的生物学特性提供更为详尽的信息，从而为个体病例提供更为精确的治疗决策与预后信息，使临床医师能够选择出真正能够从内分泌或化疗中获益的患者。 检测意义 “乳腺癌21基因检测”是检测恶性肿瘤组织中一组特异基因的表达，对预测预后、复发、转移乃至指导治疗提供信息，最终目的是为患者的个体化治疗提供帮助。21基因检测结果以积分的形式表示，积分用于对肿瘤可能发生的生物学行为进行预测，提供个体化的治疗效果预测和1 0年复发风险的预测。 哪些人需要做“乳腺癌21基因检测”? l或l l期、雌激素受体阳性、淋巴结转移阴性及将要采用他莫昔芬治疗的新确诊乳腺癌患者。 绝经后，淋巴结阳性、雌激素受体阳性的浸润性乳腺癌患者，也可通过21基因检测评估是否需要化疗。 应在何时进行“乳腺癌21基因检测”？ “乳腺癌21基因检测”应在患者接受手术（乳房肿瘤切除手术或乳房切除手术）之后，并在做出下一步治疗决定之前进行。 “乳腺癌21基因检测”属于一种非侵入性检测，患者无需再接受任何额外的穿刺程序，利用原来手术（乳房肿瘤切除手术、乳房切除手术或核心穿刺活组织裣查）过程中取出的组织进行检测即可。 乳腺癌21基因OncotypeDx检测的临床应用 乳腺癌21基因OncotypeDx检测能够为早期乳腺癌患者提供预测疾病复发概率的量化指标，它在判断患者对于化疗效果方面较传统方法具有明显优势。对于乳腺癌治疗，化疗是防止或者延缓患者术后肿瘤远期的复发。从临床研究中发现，被基因检测确定为高RS的患者化疗效果明显，而被确定为低RS的患者在化疗中的受益则十分微小。如果低RS乳腺癌患者，则术后采用化疗不但属于过度治疗，且会给患者带来不良反应，还会增加医疗费用。 1、国外研究者对NSABP B-20试验的651例肿瘤标本进行了检测。B-20试验是对雌激素受体阳性、淋巴结阴性的乳腺癌患者给予他莫昔芬联合化疗或他莫昔芬单纯治疗。研究表明，在低评分组，患者并未从化疗中受益；在高评分组，患者对化疗的获益程度极显著；在中等评分组，化疗仅为患者带来轻度的获益。由于B-20试验只纳入了淋巴结阴性的乳腺癌患者，因此研究者又对西南肿瘤研究组（SWOG）-8814试验的肿瘤标本进行了检测，结果证实，乳腺癌21基因OncotypeDx检测法的疗效预测价值同样存在于淋巴结阳性的乳腺癌患者。
乳腺癌的ER PR HER2 是什么意思 阳性阴性有什么意义
乳腺癌的ER PR HER2 是什么意思阳性阴性有什么意义 首先我们来看一个问题：外婆医院报告单上写ER-，PR-，HER2+++，请问这3个符合是什么意思，加号和减号有什么区别？ 很多人看到这样的报告单肯定也是一头雾水，这样的报告单想表达什么意思，和乳腺癌的治疗及预后有什么关系呢，下面我们一探究竟。 定义 ER：雌激素受体，PR：孕激素受体HER2：人类表皮生长因子受体2，看到这样的医学词汇会让人觉得更晕，通俗的理解是乳腺癌肿瘤细胞表面是否存在这样几个分子结构，当有这样的分子结构时，就有特殊的药物和这个分子结合来治疗乳腺癌，有这样的分子结构在化验单上就表现为+号，如果没有这样的分子结构在化验单上表现为-号，今天我们来交接如果是+号情况下的乳腺癌的治疗和预后状况，另外存在一种这3个分子检测结果都是-号的乳腺癌患者，有兴趣了解的话可以去看精准名医撰写的另外一篇文章“什么是三阴乳腺癌别恐慌 并非无药可救”。 权威指南 首先我们来看下权威组织的建议，2017年2月，欧洲肿瘤标志物小组（European Group on Tumor Markers ，EGTM）更新发布了乳腺癌标志物的临床应用指南对几个标志物有如下检测建议： ER：预测早期或进展期乳腺癌是否可接受内分泌治疗。建议所有患者均检测此项。 PR：同ER共同预测早期或进展期乳腺癌是否可接受内分泌治疗。建议所有患者均检测此项。HER2：预测早期或进展期乳腺癌是否可接受HER2治疗。建议所有患者均检测此项。 意义 ER、PR 的主要临床意义是判断患者是否可接受内分泌治疗。 通过对20 个大型临床试验进行Meta 分析发现： ER（）的患者接受5年他莫昔芬治疗，可降低39% 的15 年内疾病复发率，降低30% 的乳腺癌死亡率； 而ER（-）的患者无论是否使用他莫昔芬，15 年内疾病复发率和乳腺癌死亡率都无差别。在此项Meta分析中未提及PR 的预测作用，但有其他报道称高水平的PR 表达可以提高患者对他莫昔芬的疾病响应概率，促进他莫昔芬延长转移性乳腺癌患者的总生存期。 HER2 的主要临床意义是判断是否可使用抗HER2 治疗 目前针对HER2（）的患者，有四种抗HER2 疗法：曲妥珠单抗，拉帕替尼，帕妥珠单抗和 T-DM1 。 HER2（）的进展期乳腺癌患者一线治疗可紫杉烷类药物联合曲妥珠单抗或帕妥珠单抗； 使用一线疗法进展后可选择T-DM1、拉帕替尼。 建议 确诊为乳腺癌的患者应尽快进行这3项检查，以明确乳腺癌的类型，选择准确的治疗方案将获得更好的治疗效果。（精准名医整理）
BRCA基因检测实践
BRCA基因检测实践 复旦大学附属肿瘤医院分子病理实验室研究员山灵发表了《BRCA基因检测实践》的主 题演讲，首次分享中国人群卵巢癌组织和血液中BRCA1/2突变的比较数据。 BRCA1/2基因是一类肿瘤抑制基因，参与细胞同源重组修复（HRR）过程，2014年， 美国FDA批准了奥拉帕利可用于既往三线及以上铂类化疗的BRCA突变卵巢癌患者。 因此卵巢癌患者的BRCA突变检测，能更好的评估患者预后、优化治疗方案。针对不 同人群的BRCA突变情况，已有较多报道，但研究数据的人群都是以高加索人种为主， 更是缺少体细胞与胚系基因突变的比较。因此，针对中国人群的BRCA胚系和体细胞 突变情况的研究显得尤为迫切。 山博士首先介绍了BRCA检测的临床意义，根据国内外的指南共识，BRCA被用于高危人群的筛查、乳腺癌患者的手术方式选择、以及卵巢癌的用药选择。 山博士指出BRCA基因序列较大，整个BRCA基因的编码区突变都有可能造成BRCA基因的功能异常，而且目前的数据发现BRCA突变缺乏明确的突变热点，因此BRCA检测需要通过整个编码区的测序，通过比对目前大样本的数据库分析来确认。在下一代测序（NGS）的临床应用中，Ion Torrent平台相对操作和分析比较简单，且样本用量少报告时间短，比较适合临床样本的需求。
接下来对222例乳腺癌和169例卵巢癌在NGS上的BRCA数据进行了详细的分析，并首次发布了卵巢癌中组织样本（体细胞）和血液样本（胚系）的突变情况比较，以及使用毛细管电泳测序平台上的MLPA检测大片段缺失的结果，山教授深入浅出的对不同卵巢癌亚型中突变率进行了分析。 最后介绍了对BRCA数据的结果解读流程和参考数据库，以及建立中国人群数据的重要性和难点。
HER2基因真核表达载体的构建及其抑瘤效应研究
HER2基因真核表达载体的构建及其抑瘤效应研究 贺丽清张存李维娜张路张英起 (第四军医大学生物技术中心，陕西西安710033) 【摘要】目的构建HER2基因真核表达载体，研究其对肿瘤生长的抑制作用。方法通过RT-PCR方法从HER-2+SKBR3细胞株中获得HER-2基因胞外段编码区cDNA，构建pRC-CMV-信号肽-hHER2-ECD真核载体，于大肠杆菌DH5α中进行扩增；用获得的质粒免疫小鼠，ELISA法和ELISPOT法分别检测体液及细胞免疫情况，然后用EMT-6细胞接种肿瘤，观察肿瘤生长情况。结果构建的pRC-CMV-信号肽-hHER2-ECD真核载体经酶切和DNA测序分析，结果表明该基因的序列与设计的序列完全相同。pRC-CMV-信号肽-HER2真核表达质粒转染细胞后，目的基因在mRNA水平的表达与预期结果一致。获得的质粒能够引起较低的体液免疫，但其可诱导较高的T细胞反应，并且可明显降低小鼠成瘤率。结论构建的HER2基因真核表达载体可在细胞中表达且对小鼠实体瘤的生长具有一定的抑制作用。 【关键词】真核表达载体HER2转染肿瘤 Construction and antitumor effect of HER2 DNA eukaryotic expression vector He li-qing Zhang cun（The department of biotechnology center，The Fourth Military Medical University，Xi’an 710033，China） 【Abstract】AIM: To construct an eukaryotic expressing vector of HER2 and investigate the inhibitory effect on the growth of tumor by the expression of the plasmid in vivo．．Methods：The cDNA of HER2 extracellular domain was prepared through RT-PCR from HER-2+SKBR cell line, then it was cloned into pRC-CMV vector and DH5α,the immunocompetence of the plasmid was study by ELISA and ELISPOT. Incubated mice with EMT-6 and the tumor growth was observed. RESULTS: DNA sequencing and restriction enzyme digestion proved that HER-2 gene was correctly connected.After transfection with plasmid pRC-CMV-signal peptide-HER2,293 cells could produce HER2 mRNA. The plasmid can induce low immune but high T cell response and it can restrain the growth of tumor obviously. CONCLUSION: P1asmid can express in cells,The plasmid Can inhibit the growth of solid tumor． 【Key words】eukaryotic expressing vector ; HER-2; transfection; tumor HER2/neu基因编码分子量为185kDa的受体酪氨酸激酶HER2/neu蛋白，它与细胞恶性转化有关，是癌症病因学中的一种生物学相关蛋白。大量的疫苗研究表明，HER-2全长并不能诱导有效的免疫反应，而胞外区的近膜端免疫原性较强[1]。故本实验首先截取HER-2胞外区的近膜区构建了rhHER-2-ECD真核表达载体，为进行肿瘤疫苗的功能研究奠定基础。 1 主要试剂材料 1。1 细菌菌种、细胞株及实验动物 E．coli DH5 本室保存。质粒pRC-CMV为真核表达载体，第四军医大学生
乳腺癌HER2 FISH检测的问答
乳腺癌HER2状态问题与解答（答医生） 什么是FISH？ FISH（荧光原位杂交）是指以标记荧光分子的DNA为探针而其结果于荧光显微镜下观察的一类杂交。“原位”是指固定于玻片标本的细胞核原有位置。 为了进行FISH分析，加热固定在玻片上的标本，使其染色体DNA伸展并将双链打开，令DNA探针易于与其结合，加上探针后冷却细胞，使DNA探针杂交于与其互补的靶序列，一旦杂交，探针上的荧光分子将于染色体上精确地显示靶DNA，依赖于靶DNA的设计，许多类型的遗传学改变都可以检测出来。 FISH的优势何在？ 1）细胞内相对稳定的DNA靶； 2）逐个细胞定量分析遗传学改变； 3）在完整细胞内同时分析多种遗传学靶； 4）容易判读； 5）容易操作； 6）结果快速； FDA批准的FISH检测HER2实验用于以下目的： 评价预后、基于阿霉素的化疗选择和赫赛汀治疗的选择。 DNA探针系统是怎样的？ FISH标本分析需进行： 1）肿瘤组织切片； 2）探针与切片上的肿瘤组织细胞核内的HER2基因序列杂交； 3）在荧光显微镜下观察结果 FISH信号判读应采用薄层切片。当处理肿瘤组织时，常会有“核截断”。因大多数细胞核约10微米厚，所以4-6μm切片最佳。 操作者以计数荧光信号来客观地分析结果。 FISH探针的标记有几种？ FISH已经是目前诊断实验室的主要技术之一，有两种标记探针的方法：直接标记和间接标记。 直接FISH：是采用了直接标记有荧光基团的探针，通过一步杂交，荧光信号即结合到靶序列上。这种方法步骤很少、简便且快速。非常适合临床诊断实验室。目前所做的HER2基因状态评价的探针就是采用了直接标记的方法。HER2基因评价由HER2基因特异性探针和17号染色体着丝粒探针共同完成。
乳腺癌患者HER2基因检测——
万方数据
万方数据
万方数据
万方数据
乳腺癌患者HER2基因检测——带着问题重读《ASCO/CAP指南》 作者：王炜， 项晶晶， 崔海东， 刘坚， 徐如君 作者单位：王炜,项晶晶,徐如君(310006,杭州市第一人民医院病理科)， 崔海东,刘坚(310006,杭州市第一人民医院乳腺外科) 刊名： 中华外科杂志 英文刊名：Chinese Journal of Surgery 年，卷(期)：2013,51(10) 参考文献(25条) 1.Wolff AC.Hammond ME.Schwartz JN American Society of Clinical Oncology/College of American Pathologists guideline recommendations for human epidermal growth factor receptor 2 testing in breast cancer 2007 2.Perez EA.Dueck AC.McCullough AE Predictability of adjuvant trastuzumab benefit in N9831 patients using the ASCO/CAP HER2-positivity criteria 2012 3.Perez EA.Reinholz MM.Hillman DW HER2 and chromosome 17 effect on patient outcome in the N9831 adjuvant trastuzumab trial 2010 4.Starczynski J.Atkey N.Connelly Y HER2 gene amplification in breast cancer:a rogues' gallery of challenging diagnostic cases:UKNEQAS interpretation guidelines and research recommendations 2012 5.Petroni S.Addati T.Mattioli E Centromere 17 copy number alteration:negative prognostic factor in invasive breast cancer 2012 6.Perez EA.Press MF.Dueck AC Immunohistochemistry and fluorescence in situ hybridization assessment of HER2 in clinical trials of adjuvant therapy for breast cancer (NCCTG N9831,BCIRG 006,and BCIRG 005) 2013 7.Valent A.Penault-Llorca F.Cayre A Change in HER2 (ERBB2) gene status after taxane-based chemotherapy for breast cancer:polyploidization can lead to diagnostic pitfalls with potential impact for clinical management 2013 8.Tse CH.Hwang HC.Goldstein LC Determining true HER2 gene status in breast cancers with polysomy by using alternative chromosome 17 reference genes:implications for antiHER2 targeted therapy 2011 9.Gunn S.Yeh IT.Lytvak I Clinical array-based karyotyping of breast cancer with equivocal HER2 status resolves gene copy number and reveals chromosome 17 complexity 2010 10.Ross JS Human epidermal growth factor receptor 2 testing in 2010:does chromosome 17 centromere copy number make any difference 2010 11.Pritchard KI.Munro A.O'Malley FP Chromosome 17 centromere (CEP17) duplication as a predictor of anthracycline response:evidence from the NCIC Clinical Trials Group (NCIC CTG) MA.5 Trial 2012 12.Vance GH.Barry TS.Bloom KJ Genetic heterogeneity in HER2 testing in breast cancer:panel summary and guidelines 2009 13.Bartlett AI.Starcyznski J.Robson T Heterogeneous HER2 gene amplification:impact on patient outcome and a clinically relevant definition 2011 14.Allison KH.Dintzis SM.Schmidt RA Frequency of HER2 heterogeneity by fluorescence in situ hybridization according to CAP expert panel recommendations:time for a new look at how to report heterogeneity 2011 15.Chang MC.Malowany JI.Mazurkiewicz J" Genetic heterogeneity" in HER2/neu testing by fluorescence in situ hybridization:a study of 2522 cases 2012 16.Brunelli M.Manfrin E.Martignoni G Genotypic intratumoral heterogeneity in breast carcinoma with HER2/neu amplification:evaluation according to ASCO/CAP criteria 2009 17.Press MF.Finn RS.Cameron D HER-2 gene amplification,HER-2 and epidermal growth factor receptor mRNA and protein expression,and lapatinib efficacy in women with metastatic breast cancer 2008 18.Yang YL.Fan https://www.360docs.net/doc/7a1618173.html,ng RG Genetic heterogeneity of HER2 in breast cancer:impact on HER2 testing and its clinicopathologic significance 2012 19.Nakamura R.Yamamoto N.Onai Y Importance of confirming HER2 overexpression of recurrence lesion in breast cancer patients[published online ahead of print February 25,2012] 2012
乳腺癌HER2FISH检测、判读及报告
乳腺癌HER2 FISH检测-检测意义、建议及标本准备 HER2与乳腺癌 乳腺癌是女性恶性肿瘤中发病率最高的一种，正以每年3%～4%的速度急剧上升，已成为女性的第一杀手。临床上大约20-35%的浸润性乳腺癌存在HER2基因的扩增及蛋白的高表达。HER2基因(又名HER2/neu，c-erbB-2)位于17q12，是表皮生长因子受体（HER）家族成员之一，HER家族在细胞生理过程中发挥重要的调节作用。HER2编码相对分子量185KD的跨膜受体样蛋白，具有酪氨酸激酶活性。HER2是重要的乳腺癌预后判断因子，HER2阳性（过表达或扩增）的乳腺癌，其临床特点和生物学行为有特殊表现，治疗模式也与其他类型的乳腺癌有很大的区别。 HER2检测方法有免疫组化（IHC）和荧光原位杂交（FISH）等。《2014年NCCN乳腺癌临床实践指南》和《乳腺癌HER2检测指南2014版》均强调：FISH是检测HER2基因状态的金标准。 一．检测意义 1. 判断预后：HER2阳性的乳腺癌浸润性强，无病生存期短，预后差。 2. 指导治疗：HER2基因扩增的乳腺癌患者对内分泌治疗药物（如他莫昔芬）产生耐药。HER2基因扩增的乳腺癌患者对CMF方案不敏感，宜采用大剂量蒽环类药物和紫杉醇类药物方案；HER2基因扩增的乳腺癌患者明显受益于Herceptin（赫赛汀，2001年FDA批准上市）等靶向药物治疗。 二．检测建议 IHC和FISH检测HER2的状态一致性很高，但也存在着差异，数据统计如下表1和表2示，对于IHC 2+样本必须要用FISH进一步确认结果；0、1+或3+，根据条件，可再做FISH验证。
IHC FISH 阳性率 （%）阴性阳性 0 1+ 2+ 3+892 514 327 74 56 211 415 660 5.9 29.1 55.9 89.9 表1：(2004) HER2 Amplification Ratios by Fluorescence In Situ Hybridization and Correlation with Immunohistochemistry in a Cohort of 6556 Breast Cancer Tissues. Clinical Breast Cancer 表2：2007年卫生部科教司牵头组织全国73家三级以上医院历时2年完成“荧光原位杂交技术（FISH）用于乳腺癌患者Her-2检测的临床研究”课题，检测标本达3368例 因此，《2014年NCCN乳腺癌临床实践指南》和《乳腺癌HER2检测指南（2014版）》均建议先进行HER2蛋白的IHC检测，IHC 2+样本进行ISH（FISH、DISH或CISH）检测。 《2014年NCCN乳腺癌临床实践指南》 三．样本准备： 1．标本类型：(1)手术切除标本；(2)粗针穿刺活检标本；(3)活检标本。 2．标本固定：所有乳腺癌标本离体后都应尽快固定（1h内固定）。固定时应将标本每隔5～10 mm切开，并可在组织间嵌入纱布或滤纸等物。固定液量与所浸泡组织的比例应足够。
FISH检测乳腺癌Her2基因状态
FISH检测乳腺癌Her2基因状态 什么是FISH： FISH技术是以直接标记或间接标记的DNA探针与靶组织或细胞内的DNA同源序列进行杂交，通过在含有特异滤光片的荧光显微镜下观察多彩信号，来检测标本中DNA（或基因）或染色体变化的一种分子细胞遗传学技术。 什么是Her2： 是人类表皮生长因子受体2基因，位于17号染色体17q11.2-21，编码一个分子量为185kD的跨膜糖蛋白。Her2受体的过度表达见于20%的浸润性乳腺癌和60%的原位导管癌（DCIS），也见于其它肿瘤，如膀胱癌、结直肠癌、胃癌和非小细胞肺癌等。Her2受体的过度表达在细胞向肿瘤转化和肿瘤发生中起着关键性作用。 Her2阳性在治疗上的意义： 预测对含蒽环类治疗方案的敏感性； 预测对紫杉类治疗的敏感性； 预测激素治疗的耐药性； 预测对CMF（环磷酰胺、氨甲喋呤、5-氟尿嘧啶）治疗方案的耐药； 赫赛汀（一种抗Her2的单克隆抗体，针对Her2阳性的乳腺癌患者的癌基因靶向治疗药物）的治疗指征。 为了减少Her2假阳性和假阴性的结果，评估Her2状态必须准确，这样可以既避免不必要的资源浪费，也可避免贻误延长患者生命的有效的治疗时机。 FISH检测Her2状态的指征： 免疫组化结果为2+ 由于某些原因导致免疫组化结果不易判断在使用相关靶向药物之前应该确定Her2状态
可以先做免疫组化，然后根据结果再做FISH，也可以直接做FISH。 ISH检测的优点和缺点： 可以做回顾性诊断：由于DNA稳定性比较好，多年存档的蜡块也可以得到很好的分析结果； 2）准确性高：DNA不易受到各种因素的影响，同时实验中设立了内对照（为绿色信号的17号染色体着丝粒探针），另外，结果判断是客观的（免疫组化有主观因素），因而准确性非常高。 3）费用高、操作复杂：需要昂贵的设备、试剂与耗材，操作人员要经过严格的相关技术培训。 下面是GeneTest采用FISH方法准确检测Her2基因状态的图片。 两个红色信号是her2基因（位于17q11.2-12），两个绿色信号是作为内对照的17号染色体着丝粒。
乳腺癌和肺癌基因检测项目计划书
乳腺癌和肺癌基因检测项目计划书 一项目背景 乳腺癌是女性最常见的癌种，占女性恶性肿瘤的1/3，其发病率约为30/10万，即每年10万女性中有30位会患乳腺癌。男性也可患乳腺癌，但比例很低，男女比例约为1:100。 遗传性乳腺癌占全部乳腺癌的10%左右，而在遗传性乳腺癌患者中，有50%左右是由于BRCA1、BRCA2基因突变所引起，30%是由ATM、BARD1、BRIP1、CDH1、CHEK2、MSH6、MRE11A、MUTYH、NBN、NF1、PALB2、PTEN、RAD50、RAD51C、STK11、TP53这16个基因突变所致。BRCA1、BRCA2基因主要功能是参与细胞DNA修复、蛋白降解、调节基因转录、调节细胞周期等，当它们发生突变后，细胞不能进行正常的生理活动而发生恶性增殖，最终导致乳腺癌的发生。BRCA1、BRCA2基因突变的携带者一生患乳腺癌的几率可能高于80%。因此，对有家族史的个体（也包括男性）进行基因检测有助于乳腺癌的早发现，早干预，早治疗。 肺癌是肺部常见的恶性肿瘤，对人类健康和生命威胁最大的恶性肿瘤之一。在男性肿瘤中，肺癌发病率和死亡率均占所有恶性肿瘤的第一位，在女性肿瘤中，肺癌的发病率和死亡率屈居乳腺癌占第二位。 目前研究已发现有数十个基因与肺癌结肠癌的发生密切相关，而其中部分基因的突变又与靶向药物治疗的效果密切相关。如携带
EGFR基因敏感突变的肺癌患者，接受吉非替尼（易瑞沙）治疗疗效显著高于化疗药物，但这类敏感人群在欧美仅约10%，在中国也只有不到40%。又如，KRAS基因是肿瘤生长信号通路中的一个关键基因，如果结肠癌患者是KRAS野生型，接受西妥昔单抗治疗后，将近70%左右的患者会有明显获益，但如果患者携带KRAS耐药突变，则获益情况远不如传统化疗。因此，美国《NCCN指南》明确指出：患者在接受靶向药物治疗前应进行相关基因的检测，据此确定是否适合用药。因此，对潜在风险人群进行基因检测不仅有助于肺癌结肠癌的早发现早干预，对患者的靶向药物治疗也有重要的指导作用。 二市场调查 肿瘤的个性化用药基因检测是国家颁布的精准医疗计划重要的组成的部分，市场前景广阔，在美国这项检查已经纳入医保计划；在中国通过前期一些公司的市场宣传市场接受度高，预计市场规模可以达到百亿的规模。 市面上的主流二代测序公司都开展这项目，比较出名的是华大基因，达安基因，贝瑞和康，诺禾致源，上海伯豪，联川基因等，这些公司基本上采用卖服务的商业模式，自己获取标本，自己测序和分析。 三技术路线 1 总技术路线
认识HER2-战胜乳腺癌
你可能知道“粉红丝带”，但你是否听说过“粉红丝带上的黑蝴蝶”？时值世界乳腺癌防治宣传月，一部以《相信生命的奇迹》为主题的乳腺癌患者纪实系列正式网络公映，一只名为“HER2阳性乳腺癌”的“黑蝴蝶”缓缓飞入了人们的视线。究竟什么是HER2阳性乳腺癌？如何才能发现这只“黑蝴蝶”？如何能够消灭“黑蝴蝶”，找回一线生机？ 在粉红丝带运动进入中国的第11个年头，就让我们从认知HER2阳性乳腺癌开始，刷新乳腺癌防治知识，利用现代医学的先进武器，守卫自己和所爱的人。 提升认知，了解“黑蝴蝶” 对于大多数人而言，乳腺癌其实并不陌生，但鲜为人知的是，乳腺癌并非单一疾病，而是可以根据基因分成不同种类。被称为“粉红丝带上的黑蝴蝶”的HER2阳性乳腺癌，便是各种分型中较为凶险的一个亚型，相比其他乳腺癌，它的恶性程度更高，疾病进展更快，更容易复发和转移，给生命带来极大的威胁。 那究竟什么是 HER2阳性乳腺癌？HER2又代表什么？其实，HER2（音“赫突”）是一种原癌基因，全称为“人类表皮生长因子受体2”。当有过多HER2蛋白出现在癌细胞表面，即称为“HER2阳性”。过度表达的HER2蛋白会刺激癌细胞疯狂地生长和增殖，从而导致疾病进展更加凶险，就好像一只预示着不祥的“黑蝴蝶”一般，肆意播撒着有毒的粉末。 在所有乳腺癌患者中，HER2阳性乳腺癌患者约占20%-30%。然而
与高发病率形成鲜明对比的是，很多患者对其知之甚少，因此往往只是隔靴搔痒，错过最佳的治疗时机。随着我们对乳腺癌了解的逐渐深入，必须尽早认清这只“黑蝴蝶”，知己知彼，打赢生命保卫战。 及早检测，发现“黑蝴蝶” 精准的侦查情报永远是战役的关键，而要取得这场生命保卫战的胜利，尽早揪出这只“黑蝴蝶”至关重要。乳腺癌患者必须尽早进行HER2检测，明确乳腺癌类型，才能对症下药，取得最佳的治疗效果；也只有明确乳腺癌类型，才能准确评估患者的预后，为未来的康复之路“未雨绸缪”。 HER2检测方法主要包括免疫组织化学染色（IHC）及原位杂交（ISH）。如果IHC检查结果是3+或者荧光原位杂交（FISH）是阳性，该患者就被确诊为HER2阳性；如果IHC结果为0或1+，该患者就被确诊为HER2阴性；如果IHC结果为2+，则需进行进一步FISH检测来确诊。 目前HER2检测在全国三甲医院、肿瘤专科医院以及省级医院都可以进行。在北京、上海、广州的大医院，HER2检测已经属于常规检测项目。因此，建议乳腺癌患者在确诊后主动向医生咨询HER2检测相关信息，以便及时了解自身的HER2状态。 此外，在这场生命保卫战中，亡羊补牢，亦不为迟。对于已经就诊却未接受过HER2检测的乳腺癌患者，即使错过了最初的检测机会，也建议尽快进行检测，可能便会为生命带来全新的转机。 靶向治疗，瞄准“黑蝴蝶”
基因检测相关问题及答案
十个问题及答案 问题1：基因检测有什么用途？ 回答： 1. 辅助临床诊断：很多疾病表现出来的症状类似，临床上很难进行鉴别诊断，容易混淆。若是通过基因检测，在基因层面找到致病原因，可以辅助临床医生鉴别诊断甚至纠正临床上的诊断。 举例：某基因检测机构通过对一个临床疑似“先天性白内障-小角膜综合症”的家系进行了基因检测，最后在基因层面发现他们家系患的其实是“玻璃体视网膜脉络膜病”而非“先天性白内障-小角膜综合症”，帮其纠正了临床诊断。 又如：糖尿病中有一型特殊类型的糖尿病为“单基因糖尿病”（由单个基因突变引起，为孟德尔遗传病）由于其基因存在缺陷，使得患者在代谢特征、临床表现和治疗方案等方面，都与1型或者2型糖尿病患者有着明显的区别。但是，由于认识上的不足，单基因糖尿病常常被误认为1型或2型糖尿病。英国一项流行病学的调查显示，有80%的青春晚期糖尿病(MODY)患者未被正确诊断。在欧美国家的单基因糖尿病的研究中，发现有10%的1型糖尿病和2-5%的2型糖尿病其实是单基因糖尿病。所以，通过对正常人群体，特别是有糖尿病家族史的人群，进行单基因糖尿病致病基因的筛查，可以尽早发现基因缺陷，从而把单基因糖尿病患者从1型或者2型糖尿病患者中区分出来。 2.携带者筛查：最常见的是唐氏综合征的筛查。传统的唐氏综合征筛查是利用血清学筛查进行的，检出率为65%-75%，容易漏检。而无创产前基因检测则可以准确地筛查出唐氏综合征患儿，还包括对18三体综合征和13三体综合征的筛查。此外，针对具有某些单基因遗传病（尤其是隐性遗传病）家族史的高危人群进行相关致病基因的筛查，可以及时发现该家族中致病基因的携带情况，进而分析后代患病的风险，为家属成员提供有效的遗传信息，防止缺陷基因向下一代遗传。 3指导治疗：现在医生开药的遵循的是经过广泛测试后提供的剂量信息。但所有的药物在测试过程中都是以群体作为样本的，因此药物剂量在对于大多数人是合适的。但是由于每个人的基因不同，会导致正常剂量下的药物对一些人产生致命的作用。导致原本挽救健康的药可能反而对健康造成伤害。这样的现象就称为药物不良反应（adverse drug reactions, ADR）。如药物warfarin是一种抗凝剂，是防止血液凝固的一种药物，病人服用这种药物可以大大减轻血栓形成的危险。但是抗凝剂服用过多，血液便不容易凝固，会造成出血，甚至有生命危险。在我们身体中有一种酶叫CYP2C9，它可以代谢这种抗凝剂，把它分解成小分子物质，使之失去抗凝血作用。正常情况下warfarin发挥作用后被代谢，完成它的药物治疗作用，也并不对人身体造成危害。但是，如果一个人CYP2C9发生突变，代谢功能降低，是弱代谢型
HER2简介
HER2基因过度表达与乳腺癌的治疗 杨静李惠平汪有蕃(北京大学第三医院肿瘤科北京100083) 一、HER2的一般研究现状 HER2受体（也称c-erbB-2，HER2/neu）是分子量为185kD、具酪氨酸激酶活性的跨膜蛋白，其编码基因定位于人染色体17q21，是表皮生长因子受体家族的成员[1]。HER2基因过度表达可导致细胞过度增殖和表型恶性转化。研究发现有30%的乳腺癌患者HER2基因过度表达，这类患者肿瘤恶性程度高、复发和转移发生早、预后差，对某些化疗药物有抵抗，并且发现HER2基因过度表达与患者的无病生存和总的生存期有关[2]。将肿瘤的生物标志物作为肿瘤治疗反应的重要预测指标是肿瘤生物学研究的主要目的之一。本文简要综述HER2基因过度表达与乳腺癌治疗反应的预测和效果。 二、HER2过表达与对治疗反应的预测和效果 1．HER2过表达与对化疗的反应[3] 对CMF治疗方案的反应：大多数的研究报告结果证明用这一方案治疗的乳腺癌患者中，HER2阴性的肿瘤患者比HER2阳性的患者更有效；而最近的一个研究则显示HER2阳性的病人也能从这个方案中获得很大效益。 对紫杉醇的反应：有文献评价了用不同方案治疗乳腺癌，包括紫杉醇，结果表明HER2阳性的患者反应率65%，HER2阴性的患者35%，作者认为这是因为HER2的信号传导通路上调了p21wafl，反过来抑制了p34cdc2激酶，这样紫杉醇可发挥它的凋亡活性。 2．HER2过表达与内分泌的治疗反应预测 三苯氧胺是乳腺癌治疗最有效的药物之一。在过去的25年里，医学家主要通过ER的水平来指导三苯氧胺的应用，通过评定原位癌组织中雌激素受体（ER）和孕激素受体（PR）来选择可能对其有反应的患者。很多试验证实这个分子标记物对预测三苯氧胺反应的作用是有效的[4]。在最近的几年里，对其他的一些三苯氧胺标记物也进行了研究，包括pS2（另一种雌激素调节蛋白）、热休克蛋白27和70、bcl-2蛋白、c-erbB-2（HER-2/neu）癌蛋白以及突变的p53肿瘤抑制蛋白。有文献证明HER2受体与乳腺癌内分泌治疗有密切关系。HER2阳性的肿瘤对内分泌治疗反应差。最近Carlomagno等的研究结果显示P185HER2阳性的病例对三苯氧胺无反应，在这些病人中生存期也明显短于未治疗的对照组。研究还发现P185HER2过表达是一个较好的对内分泌治疗反应的标志，甚至是比激素受体本身更好的指标。三苯氧胺对HER2阳性的肿瘤的作用机制还不甚了解，一种可能是药物直接刺激了原癌基因，的确，雌激素能与细胞外的P185HER2的位点相连接，三苯氧胺能抑制这种连接，提示三苯氧胺能连接到P185HER2；另外可能还与三苯氧胺能上调HER2的过表达有关。实际上，在治疗中发现雌激素受体和P185HER2都阳性的病例比仅ER阳性的病例对内分泌的治疗反应差[5]。 3．HER2过表达与单克隆抗体的治疗 单克隆抗体通过HER2下调来调节肿瘤生长，单克隆抗体trastuzumab(Herceptin)能直接对抗HER-2/neu 蛋白，从而抑制肿瘤的生长[6]。在一个临床I期研究中，45例HER2过表达的转移性乳腺癌患者，用Herceptin 是安全的，有客观反应的为11.6%，疾病稳定为37%。进一步的研究显示Herceptin在与化疗药如紫杉醇类药物合用时，有协同效果。一组对未治疗的已经转移的乳腺癌患者，单独应用化疗药物与化疗药物加Herceptin对比研究，发现联合应用组的患者生存期延长。表明用docetaxel联合应用trastuzumab是积极并能很好耐受的。HER2过表达肿瘤的另一个抗体介导的治疗手段为双特异的单克隆抗体，即生长因子受体和触发毒性的分子，如白细胞表面受体包括CD3、FcγRⅠ（Fc gammar recepetors for IgG, type Ⅰ）、FcγR Ⅱ、FcγRⅢ或化疗药，然而用这些方法都引起了更大的毒性。这可能是由于裸露了FcγRⅠ、FcγRⅡ和FcγRⅢ受体的CD16阳性细胞的活性增强有关。为了探讨进一步增加疗效的方法，人们正在研究单克隆抗体同毒性药物或放射性核素合用治疗HER2过表达的肿瘤[7,8]。 4．HER2过表达与肿瘤免疫治疗 目前所知的癌基因在肿瘤组织中的高水平表达（同正常组织相比），以及它在细胞表面的分布是由HER-2调节的，这种癌蛋白是肿瘤免疫治疗中理想的靶点。血浆中溶解形式的HER-2通过MHCⅠ或Ⅱ途径，能够被抗原呈递细胞进行抗原加工，因此对T细胞介导治疗如主动免疫治疗有益。能产生有效的主动免疫的免疫原包括从HER-2细胞外和细胞内片段与辅基结合得到的多肽、脂质体的连接体或致敏的抗原呈递细胞、
BRCA和BRCA基因检测的临床意义
BRCA1/2基因检测的意义 ●为什么要做BRCA1/2突变检测？携带BRCA1或BRCA2突变的女性，乳腺癌的发 病机率会增至60-90%。 BRCA1和BRCA2基因是抑癌基因,它们主要参与DNA损伤的修复和转录的调控。这两个基因的结构和功能异常与乳腺癌的发病密切相关。BRCA1、BRCA2突变相关性乳腺癌具有发病早、双侧性等特点。基因突变携带者的乳腺癌危险度远远高于一般人群,其乳腺终生患癌危险度高达80%～85%。所以,BRCA1、BRCA2突变相关性乳腺癌的普查和预防越来越受到人们的重视。 ●BRCA1/2突变方式有哪些？ BRCA1基因可发生多形式多位点的基因突变。目前发现BRCA1突变位点以外显子11(占48.5％)，2(占18.6％)，20(占9.2％)，5(占8.2％)，18及21(各占3.1％)为多见，BRCA2突变主要集中在在外显子10和11上。 ●发现易感基因突变后，是否要选择切除乳腺？ 据研究发现，约有1%的乳腺癌患者有家族史，并可能存在BRCA1/2基因突变，这些有BRCA1/2基因突变的妇女，其一生中患有乳腺癌的危险可高达80%，对这些女性视本人意愿并在医生的指导下视具体情况才可考虑做预防性乳房切除术，以使乳腺癌发生率下降，但预防性乳房切除术与通常的乳腺癌患的乳房切除术应该有所差异，不必全切，将创伤尽可能减低，可考虑把可能患上乳腺癌的乳腺切除，保留其他组织，包括乳头与皮肤，同时进行乳房再造等。而美国影星安吉丽娜·朱莉也正是使用这种手术，保留了乳头与皮肤，并在此后进行植入手术，只在身上留下小小的疤痕，却并不影响乳房的外观。 如果有基因缺陷的人对于手术有抵抗情绪，还可选择密切观察以在早期切除来治愈发生的癌症，使用他莫西芬等药物预防，或调整生活习惯来减少患癌的风险。 ●切除乳腺后，是不是就“一劳永逸”了呢？ 即使切除乳房或乳腺，卵巢及输卵管，也不能保证绝对不会再发生癌，因为乳腺或卵巢的组织总会有一些少量的残留，但因为可发生癌变的组织量大幅度减少，癌变的风险也随之降低，所以安吉丽娜·朱莉的乳腺癌风险是由手术前的87%降到了5%左右。” ●什么人需要进行基因检测？一级或者二级亲属中有患卵巢癌或者50岁以下 的乳腺癌。 乳腺癌高发，目前已知的是和BRCA1和BRCA2两种基因突变有关，如果病人含有这两种基
中国抗癌协会：乳腺癌患者BRCA12基因检测与临床应用(系列十七)
中国抗癌协会：乳腺癌患者BRCA1/2基因检测与临床 应用（系列十七） 17 乳腺癌患者BRCA1/2基因检测与临床应用 基于当前对BRCA1/2在乳腺癌发病、预防、治疗及预后预测中作用认识的深化、检测技术的成熟以及新的靶向药物的应用，参考国外指南，结合我国部分肿瘤中心的数据和临床经验，形成本部分内容。 17.1 BRCA1/2基因突变与乳腺癌发病风险 BRCA基因突变分为两种类型，一种为胚系突变，是指来源于精子或卵母细胞的生殖细胞突变，致机体所有细胞都带有突变，可以遗传给后代；另一种为体细胞突变，是指发生于肿瘤细胞中的BRCA基因突变，为非遗传性突变。携带BRCA1/2基因突变的女性不仅乳腺癌发病风险增加，其他如卵巢癌、输卵管癌、胰腺癌、胃肠道肿瘤及黑色素瘤等发病风险也增加，男性罹患乳腺癌、前列腺癌风险增加。 17.2 BRCA1/2基因突变与乳腺癌患者的治疗决策
BRCA基因编码蛋白通过同源重组参与DNA双链损伤修复，BRCA1/2基因突变乳腺癌由于同源重组修复功能缺陷，可能对铂类药物或PARP抑制剂等致DNA损伤药物更为敏感。对于伴有BRCA1/2基因胚系突变或体细胞突变的晚期或复发转移性乳腺癌患者，制定化疗方案时可以优先考虑铂类药物，也可选择PARP抑制剂如奥拉帕利作为化学治疗的替代药物。 17.3 对乳腺癌患者进行BRCA基因检测的建议 结合NCCN、欧洲肿瘤内科学会（ESMO）等国外指南，以及我国现有的临床数据，提出推荐进行BRCA基因筛查的乳腺癌患者特征，具体内容见表8。 表8 推荐对乳腺癌患者进行BRCA基因检测的专家共识 家族中有已知的BRCA1/2基因有害突变 乳腺癌病史符合以下条件： 确诊年龄≤45岁